CN113563410A - 一种蛋白提取试剂配方 - Google Patents

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朱也
陈莉
赵志远
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation

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Abstract

本发明涉及蛋白质提取技术领域，并提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：S1、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌；S2、配制10％的Tr itonX‑100溶液并充分搅拌；S3、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；S4、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；S5、再将上述溶液混合在一起后得到蛋白提取试剂。该蛋白质提取剂配方，先量取各种提取剂的原材料然后进行配比，通过搅拌使配比剂原料混合均匀，然后通过在科学的配比制作出四个对比例，然后对对比例中的样本进行实验检测，利用离心机的搅拌对蛋白质进行提取检验，最终可以确定出最佳的蛋白质提取试剂配方。

Description

一种蛋白提取试剂配方
技术领域
本发明涉及蛋白质提取技术领域，具体为一种蛋白提取试剂配方。
背景技术
以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质，蛋白质的制备一般分为以下四个阶段：选择材料和预处理，细胞的破碎及细胞器的分离，提取和纯化，浓细、干燥和保存。
在蛋白质的分离提取过程中一般需要用到蛋白质提取试剂，提取试剂的材料配比有许多种，但是由于技术有限，蛋白质提取试剂的制备难以大范围推广，所以亟需一种蛋白提取试剂配方。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供蛋白提取试剂配方及其制备方法，由以下具体技术手段所达成：
本发明为实现技术目的采用如下技术方案：一种蛋白提取试剂配方，由以下重量份数的原料组成：
试剂一：19～21份；
试剂二：0.9～1.1份；
试剂三：19～21份；
试剂四：961.1～956.1份。
优选的，所述试剂一包含HEPES、KCL、EDTA、ph等于7.5的混合液。
优选的，所述试剂二包含浓度10％的TritonX-100溶液。
优选的，所述试剂三包含DTT溶液。
优选的，所述试剂四包含50×蛋白酶抑制剂PI。
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S2、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S3、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S4、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种蛋白提取试剂配方，具备以下有益效果：
该一种蛋白提取试剂配方，先量取各种提取剂的原材料然后进行配比，通过搅拌使配比剂原料混合均匀，然后通过在科学的配比制作出四个对比例，然后对对比例中的样本进行实验检测，利用离心机的搅拌对蛋白质进行提取检验，最终可以确定出最佳的蛋白质提取试剂配方。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面通过实施例对本发明做进一步的描述：
实施例一：
一种蛋白提取试剂配方，由以下重量份数的原料组成：
试剂一：19～21份；
试剂二：0.9～1.1份；
试剂三：19～21份；
试剂四：961.1～956.1份。
其中，所述试剂一包含HEPES、KCL、EDTA、ph等于7.5的混合液。
其中，所述试剂二包含浓度10％的TritonX-100溶液。
其中，所述试剂三包含DTT溶液。
其中，所述试剂四包含50×蛋白酶抑制剂PI。
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1准备以下质量分数的原料：
试剂一：19份；试剂二、0.9份；试剂三、19份；试剂四、905.1
S2、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S3、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S4、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S6、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
实施例二：
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1准备以下质量分数的原料：
试剂一：20份；试剂二、1份；试剂三、20份；试剂四、959；
S2、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S3、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S4、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S6、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
实施例三：
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1准备以下质量分数的原料：
试剂一：21份；试剂二、1.1份；试剂三、21份；试剂四、956.1；
S2、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S3、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S4、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S6、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
对比例一：
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1准备以下质量分数的原料：
试剂一：18份；试剂二、0.8份；试剂三、18份；试剂四、963.2；
S2、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S3、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S4、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S6、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
对比例二：
根据权利要上述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，包括以下步骤：
S1准备以下质量分数的原料：
试剂一：22份；试剂二、1.2份；试剂三、22份；试剂四、955.8；
S2、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S3、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S4、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S6、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
性能测试：
试验设置在室内常温环境下，分别从取五个样品例中取出相同分量的样品，然后依次对向每个样品中加入蛋白质，最后进行离心搅拌提取，三十分钟后对提取剂中的蛋白质进行浓度检测。实验结果如表所示：
Figure RE-GDA0003266008390000061
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种蛋白提取试剂配方，其特征在于：由以下重量份数的原料组成：
试剂一：19～21份；
试剂二：0.9～1.1份；
试剂三：19～21份；
试剂四：961.1～956.1份。
2.根据权利要求1所述的一种蛋白提取试剂配方，其特征在于：所述试剂一包含HEPES、KCL、EDTA、ph等于7.5的混合液。
3.根据权利要求1所述的一种蛋白提取试剂配方，其特征在于：所述试剂二包含浓度10％的TritonX-100溶液。
4.根据权利要求1所述的一种蛋白提取试剂配方，其特征在于：所述试剂三包含DTT溶液。
5.根据权利要求1所述的一种蛋白提取试剂配方，其特征在于：所述试剂四包含50×蛋白酶抑制剂PI。
6.根据权利要求1所述的一种蛋白提取试剂配方，现提出一种蛋白提取试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、按照比例称取配方量的原料，将HEPES、KCL放置于ph等于7.5的混合液中进行充分的搅拌，并放置于4℃的保温箱中备用；
S2、配制10％的TritonX-100溶液，并充分搅拌后放置于无菌箱中保存；
S3、再量取适量1M的DTT溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S4、量取适量50×蛋白酶抑制剂PI溶液放置于－20℃的保温箱中进行保温；
S5、再将上述HEPES、KCL、EDTA混合液与浓度为10％的TritonX-100溶液、DTT溶液以及50×蛋白酶抑制剂PI混合在一起后再加入试剂一使溶液混合均匀，最后进行搅拌从而制得蛋白质提取液。
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WO2004078925A2 (en) * 2003-02-28 2004-09-16 Irm Llc Methods and compositions for treating and preventing neurodegenerative diseases
CN107002019A (zh) * 2014-08-29 2017-08-01 Sk新技术株式会社 产生3‑羟基丙酸的重组酵母和使用其产生3‑羟基丙酸的方法
CN110885365A (zh) * 2019-12-11 2020-03-17 海南大学 Ataf2蛋白及其相关生物材料在调控植物对橡胶树白粉菌的抗病性中的应用

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Title
娄辉;戎伟;李慧萍;何朝族;: "野油菜黄单胞菌AvrXccE1是一个毒性/无毒性双功能Ⅲ型效应蛋白", 植物病理学报, no. 03, pages 248 - 257 *

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