CN113551960A - 金龟子染色体核型的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金龟子染色体核型的制备方法，属于遗传学技术领域。本发明的方法是将金龟子成虫的精巢置于0.05％的秋水仙素溶液中处理25‑45分钟；之后再放入0.075mol/L KCl溶液中低渗处理20‑30分钟；处理完成后在载玻片上采用卡宝品红染液染色20‑30分钟，用的冰醋酸分色后压片。本发明方法取材容易，制备时间短，制备步骤少，操作简单，在制备金龟子染色体核型最快所需时间只要1.5‑2小时，提高了金龟子染色体核型制备效率。
Description
技术领域
本发明属于遗传学技术领域，具体涉及一种金龟子染色体核型的制备方法。
背景技术
染色体是遗传物质的载体。它的研究不仅对了解生物的遗传变异、性别决定、个体发育和生理过程的调控等方面有重要的意义；而且能为确定生物类群的地位，阐明物种的历史及其演化提供重要的依据；对解决近缘种之间的分类问题亦有作用。而且随着基因组学的发展，生物染色体核型分析也越来越被需要。
分散细胞的方法一般有三种方法：压片后液氮冷冻揭片法，撕片法和离心制取细胞悬液法。当所取材料较小且数量有限时，不宜采用离心法制取细胞悬液。当该虫的性腺较小时，用解剖针撕片不易操作，撕片不充分，镜检时观察到大部分组织并未分开，而且使用解剖针时会因用力不当而在载玻片上刻出划痕，影响观察。压片后揭片一些细胞会沾到盖玻片上，造成细胞损失，有待改进。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种金龟子染色体核型的制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种金龟子染色体核型的制备方法，具体是将金龟子成虫的精巢置于0.05％的秋水仙素溶液中处理25-45分钟；之后再放入0.075mol/L KCl溶液中低渗处理20-30分钟；处理完成后在载玻片上采用卡宝品红染液染色20-30分钟，用40％-50％(体积比)的冰醋酸分色后压片，即得金龟子染色体核型。
在上述方案的基础上，所述的秋水仙素溶液采用生理盐水配置而成，其中，生理盐水的组成为NaCl 6.8g/L、CaCl2 0.2g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.2g/L、NaHCO3 0.15g/L、葡萄糖7.7g/L、蒸馏水l000mL。
在上述方案的基础上，用冰醋酸分色时尽量使背景染料颜色褪去，并用滤纸吸去多余染料和冰醋酸。
在压片时盖玻片轻轻放下，避免与载玻片之间有过多气泡。盖上盖玻片后，双层滤纸盖在载玻片上，用食指按压，注意不要垂直按压，食指由左到右逐渐施力，也不要使盖玻片移动。
本发明方法适用于所有的雄虫金龟子，包括但不限于黑绒鳃金龟、大黑鳃金龟。
本发明技术方案的优点：
本发明提供了一种简易的金龟子染色体核型制备方法。具备以下有益效果：具有取材容易，制备时间短，制备步骤少，操作简单，在制备金龟子染色体核型最快所需时间只要1.5-2小时，提高了金龟子染色体核型制备效率；并且本发明所描述方法未使用离心机分离细胞，降低了实验对仪器的依懒性，避免了离心操作对细胞的影响，提高了制备核型玻片标本的成功率。
固定是借助理化方法迅速将组织细胞杀死，并尽量保持其形态结构及内含物真实生活状态。而且固定液最好现配现用，长时间放置影响固定效果，且固定时间过长，一般为15-1440分钟。本发明中动物细胞由于没有细胞壁因而更容易处理，本发明使用的卡宝品红染色液的成分中含有酒精，酒精也可以起到固定作用，因此本发明低渗处理后直接进行染色，无需固定，简化了实验程序，使步骤更简单，方便，且节省时间。
附图说明
图1本发明的方法步骤原理图；
图2使用本发明方法在100倍物镜下观察到的黑绒鳃金龟成虫精巢染色体图；
图3使用本发明方法在100倍物镜下观察到的大黑鳃金龟成虫精巢染色体图。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
如图1所示，一种简易的金龟子染色体核型制备方法，包括以下步骤：
(1)取材：选取金龟子的雄性成虫；
(2)预处理：在体视显微镜下解剖取出精巢，0.05％的秋水仙素处理25-45分钟；
(3)低渗：0.075mol/L KCl低渗处理20-30分钟；
(4)染色：卡宝品红染液染色20-30分钟；
(5)压片：用40％-50％的冰醋酸分色后压片，用冰醋酸分色时尽量使背景染料颜色褪去，并用滤纸吸去多余染料和冰醋酸。在压片时盖玻片轻轻放下，避免与载玻片之间有过多气泡。盖上盖玻片后，双层滤纸盖在载玻片上，用食指按压，注意不要垂直按压，食指由左到右逐渐施力，也不要使盖玻片移动。
(6)镜检：OLYMPUS BX53正置荧光显微镜观察，OLYMPUS DP74显微成像系统拍照，在40倍物镜下找到处于分裂中期的细胞，选择染色体分散效果好且形态好的细胞在100倍物镜下拍照，用Photoshop图像软件进行核型分析。
所述的秋水仙素溶液采用生理盐水配置而成，其中，生理盐水的组成为NaCl6.8g/L、CaCl2 0.2g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.2g/L、NaHCO3 0.15g/L、葡萄糖7.7g/L、蒸馏水l000mL。
实施例2
一种简易的黑绒鳃金龟染色体核型制备方法，包括以下步骤：
(1)取材：选取黑绒鳃金龟的雄性成虫；
(2)预处理：在体视显微镜下解剖取出精巢，0.05％的秋水仙素处理30分钟；
(3)低渗：0.075mol/L KCl低渗处理20分钟；
(4)染色：卡宝品红染液染色28分钟；
(5)压片：用50％的冰醋酸分色后压片，用冰醋酸分色时尽量使背景染料颜色褪去，并用滤纸吸去多余染料和冰醋酸。在压片时盖玻片轻轻放下，避免与载玻片之间有过多气泡。盖上盖玻片后，双层滤纸盖在载玻片上，用食指按压，注意不要垂直按压，食指由左到右逐渐施力，也不要使盖玻片移动。
(6)镜检：OLYMPUS BX53正置荧光显微镜观察，OLYMPUS DP74显微成像系统拍照，在40倍物镜下找到处于分裂中期的细胞，选择染色体分散效果好且形态好的细胞在100倍物镜下拍照，用Photoshop图像软件进行核型分析。
所述的秋水仙素溶液采用生理盐水配置而成，其中，生理盐水的组成为NaCl6.8g/L、CaCl2 0.2g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.2g/L、NaHCO3 0.15g/L、葡萄糖7.7g/L、蒸馏水l000mL。
所制备的黑绒鳃金龟染色体核型如图2所示，在100倍物镜下看到黑绒鳃金龟成虫精巢染色体数目为n＝10。
实施例3
一种简易的大黑鳃金龟染色体核型制备方法，包括以下步骤：
(1)取材：选取大黑鳃金龟的雄性成虫；
(2)预处理：在体视显微镜下解剖取出精巢，0.05％的秋水仙素处理30分钟；
(3)低渗：0.075mol/L KCl低渗处理20分钟；
(4)染色：卡宝品红染液染色28分钟；
(5)压片：用50％的冰醋酸分色后压片，用冰醋酸分色时尽量使背景染料颜色褪去，并用滤纸吸去多余染料和冰醋酸。在压片时盖玻片轻轻放下，避免与载玻片之间有过多气泡。盖上盖玻片后，双层滤纸盖在载玻片上，用食指按压，注意不要垂直按压，食指由左到右逐渐施力，也不要使盖玻片移动。
(6)镜检：OLYMPUS BX53正置荧光显微镜观察，OLYMPUS DP74显微成像系统拍照，在40倍物镜下找到处于分裂中期的细胞，选择染色体分散效果好且形态好的细胞在100倍物镜下拍照，用Photoshop图像软件进行核型分析。
所述的秋水仙素溶液采用生理盐水配置而成，其中，生理盐水的组成为NaCl6.8g/L、CaCl20.2g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.2g/L、NaHCO3 0.15g/L、葡萄糖7.7g/L、蒸馏水l000mL。
所制备的大黑鳃金龟染色体核型如图3所示，在100倍物镜下看到大黑鳃金龟成虫精巢染色体数目为n＝10。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (4)
1.一种金龟子染色体核型的制备方法，其特征在于，步骤如下：
将金龟子成虫的精巢置于0.05％的秋水仙素溶液中处理25-45分钟；之后再放入0.075mol/L KCl溶液中低渗处理20-30分钟；处理完成后在载玻片上采用卡宝品红染液染色20-30分钟，用40％-50％的冰醋酸分色后压片，即得金龟子染色体核型。
2.根据权利要求1所述金龟子染色体核型的制备方法，其特征在于，
所述的秋水仙素溶液采用生理盐水配置而成，其中，生理盐水的组成为NaCl 6.8g/L、CaCl20.2g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2·6H2O 0.2g/L、NaHCO3 0.15g/L、葡萄糖7.7g/L、蒸馏水l000mL。
3.根据权利要求1所述金龟子染色体核型的制备方法，其特征在于，用冰醋酸分色时尽量使背景染料颜色褪去，并用滤纸吸去多余染料和冰醋酸。
4.根据权利要求1所述金龟子染色体核型的制备方法，其特征在于，在压片时盖玻片轻轻放下，避免与载玻片之间有气泡；盖上盖玻片后，双层滤纸盖在载玻片上，用食指按压，不要垂直按压，食指由左到右逐渐施力，也不要使盖玻片移动。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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