CN113546105A

CN113546105A - 苦参活性成分提取物的制备方法和应用

Info

Publication number: CN113546105A
Application number: CN202110730510.4A
Authority: CN
Inventors: 吴佳纹; 孙宏; 赵玢; 叶树宏; 王清峰; 陈福欣
Original assignee: Second Affiliated Hospital School of Medicine of Xian Jiaotong University
Current assignee: Second Affiliated Hospital School of Medicine of Xian Jiaotong University
Priority date: 2021-06-29
Filing date: 2021-06-29
Publication date: 2021-10-26

Abstract

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种苦参活性成分提取物的制备方法和应用，苦参活性成分提取物在作为制备银屑病药物中的应用，制备方法：1)苦参烘干、粉碎成苦参粉末；2)将苦参粉末加入至酸性溶液中，过滤得到滤液；3)将滤液通入含有离子交换树脂的层析柱，离子交换树脂吸附饱和后，采用氨水碱化处理；4)用有机溶剂对离子交换树脂进行洗脱处理，收集洗脱液，经减压、蒸馏、浓缩得到苦参活性成分提取物。本发明苦参活性成分含量高，且活性好；能有效抑制K17在细胞的增殖中的表达，可用于制备银屑病的药物中，用量少，使用安全方便。

Description

苦参活性成分提取物的制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种苦参活性成分提取物的制备方法和应用。

背景技术

银屑病俗称牛皮癣，是一种慢性炎症性皮肤病，病程较长，有易复发倾向，有的病例几乎终生不愈。该病发病以青壮年为主，对患者的身体健康和精神状况影响较大。临床表现以红斑，鳞屑为主，全身均可发病，以头皮，四肢伸侧较为常见，多在冬季加重。根据临床表现不同，银屑病分为寻常型银屑病、脓疱型银屑病、红皮病型银屑病和关节病型银屑病；对于银屑病的治疗药物，有外用药、内用药、物理疗法和中医中药治疗。

而中药在治疗银屑病方面也有着悠久的历史，虽起效慢，但毒性及不良反应少。目前，治疗银屑病的中药为复方制剂，一般由多种中草药制成，如消银颗粒、蜈蚣败毒饮、凉血消风散等。该类方剂中的苦参以原型入药，辅以其他中药，在临床上有一定的应用。但是该类药物对银屑病的治疗存在时间长、疗效差、易反复的问题，极大的限制了在银屑病治疗领域的应用。苦参中含有大量的生物碱，其中含量最高的是苦参碱和氧化苦参碱，其中大部分以氧化苦参碱的形式存在，而苦参碱的含量非常低，需要一种能提取苦参活性成分提取物的方法。

发明内容

针对现有银屑病治疗存在的问题，本发明提供一种苦参活性成分提取物的制备方法和应用，苦参活性成分提取物含量高，能有效干预K17在细胞增殖中的表达，可用于制备银屑病的药物中，用量少，使用安全方便。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种苦参活性成分提取物在制备银屑病药物中的应用。

一种苦参活性成分提取物的制备方法包括以下步骤：

1)苦参经烘干、粉碎得到苦参粉末，备用；

2)将苦参粉末加入至酸性溶液中，温度0℃～60℃下，浸泡1～48h，过滤得到滤液；

3)将滤液通入含有离子交换树脂的层析柱，离子交换树脂吸附饱和后，采用氨水对离子交换树脂洗碱化处理15～60min；

4)进一步用有机溶剂对离子交换树脂进行洗脱处理，收集洗脱液，经减压、蒸馏、浓缩得到苦参活性成分提取物。

进一步的，所述步骤1)中，烘干温度为40～75℃；苦参粉末的粒径20～80目。

进一步的，所述步骤1)中，苦参粉末与酸性溶液的质量体积比为1g：10～200mL。

进一步的，所述步骤2)中，酸性溶液为盐酸、磷酸或草酸；酸性溶液的浓度为0.01％～0.5％。

进一步的，所述步骤3)中，所述离子交换树脂为氢型阳离子交换树脂；所述离子交换树脂与苦参粉末的质量比为40～50：1；所述氨水浓度为5％～25％。

进一步的，所述步骤4)中，所述有机溶剂为乙醚、二甲醚、丁醚、苯甲醚、苯乙醚或二苯醚；洗脱速度为10BV/h。

本发明的有益效果是：本发明通过离子交换吸附的方法从含苦参的混合溶液中分离提取苦参活性成分提取物，活性成分提取物中的总生物碱含量为0.38％～0.72％，含量高，活性好；该活性成分能有效干预K17在细胞增殖中的表达，且在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型中有明显的治疗作用；根据PASI评分标准，该活性成分优于维A酸软膏和消银膏，苦参活性成分提取物能作为治疗银屑病的药物，有效治疗银屑病，效果良好，用量少，使用安全方便。

附图说明

图1为不同组中K17的表达示意图；

图2为K17的mRNA的相对含量示意图。

具体实施方式

现结合附图以及实施例对本发明做详细的说明。

本发明是从苦参中提取苦参活性成分，并将苦参活性成分用于治疗银屑病的药物中。

苦参，苦参，中药名。为豆科植物苦参的干燥根，春、秋二季采挖，除去根头和小支根，洗净，干燥，或趁鲜切片，干燥。其苦，寒。有清热燥湿，杀虫，利尿之功。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风，外治滴虫性阴道炎。《本草纲目》：“苦参、黄柏之苦寒，皆能补肾，盖取其苦燥湿，寒除热也。热生风，湿生虫，故又能治风杀虫。惟肾水弱而相火胜者用之相宜，若火衰精冷，真元不足，及年高之人不可用也。张从正亦云，凡药皆毒也，虽甘草、苦参，不可不谓之毒，久服则五味各归其脏，必有偏胜气增之患，诸药皆然，学者当触类而长之可也，至于饮食亦然。又按《史记》云，太仓公淳于意医齐大夫病龋齿，灸左手阳明脉，以苦参汤日漱三升，出入慎风，五、六日愈，此亦取其去风气湿热杀虫之义。

具体的，苦参活性成分提取物的制备方法如实施例1～实施例5所述。

实施例1～实施例5

实施例1～实施例5苦参活性成分提取物制备方法均相同，不同的是各步骤的溶剂种类、物料配比以及反应条件值，具体如下：

1)苦参经烘干、粉碎得到苦参粉末，备用；

2)将苦参粉末加入至酸性溶液中，浸泡后，过滤得到滤液，苦参粉末与酸性溶液的质量体积比参见表1；

3)将滤液通入含有离子交换树脂的层析柱，离子交换树脂吸附饱和后，采用氨水对离子交换树脂洗碱化处理；

4)进一步用有机溶剂对离子交换树脂进行洗脱处理，收集洗脱液，经减压、蒸馏、浓缩得到苦参活性成分提取物，即为总苦参碱。

本实施例中，离子交换树脂为阳离子交换树脂，层析柱为玻璃层析柱，径高比为1：3，洗脱速度为10BV/h。其他具体参数参见表1。

表1实施例1～实施例5苦参活性成分提取物制备过程参数

进一步，为了确定苦参提取物的生物活性，进行下列试验验证。

试验1总生物碱含量测定

选择实施例1～实施例5制备方法得到的苦参活性成分提取物，测定其中的总生物碱含量，说明苦参活性成分提取物的活性。

测定方法：分别精密称取实施例1～实施例5制备的苦参活性成分提取物0.1g，加入0.0116M的硫酸滴定液(事先已标定)10mL，充分摇匀、放冷，加甲基橙指示液2滴，用0.0132M的氢氧化钠滴定液(事先已标定)回滴过剩的硫酸，至橙红色变为橙黄色为终点。读取消耗的氢氧化钠的量，计算总生物碱的含量。

经过试验测定得出，苦参活性成分提取物中总生物碱的含量，结果如表2所示。

表2各实施例制备的苦参活性成分提取物中总生物碱含量结果

试验组	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						含量	0.44％	0.72％	0.38％	0.48％	0.51％

从结果可看出：本发明制备的苦参活性成分提取物中的总生物碱含量为0.38％～0.72％之间(以苦参计)，表明活性成分含量高，且活性好。

试验2银屑病大鼠模型的构建

大鼠腹腔注射戊巴比妥钠对所有小鼠进行麻醉，显效后，用剃毛器剃光小鼠背部面积约为2cm×3cm的背部毛，裸露皮肤。随机选择小鼠49只，分为7组；这7组分别是空白组、苦参组、实验1组、实验2组、实验3组、对照组1和对照组2(详见表3)。

银屑病模型构建：空白组小鼠外涂凡士林软膏。其余6组的小鼠均外涂咪喹莫特软膏，涂药后局部按摩30-60次，1次/d，连续用药10d建立咪喹莫特诱导的银屑病模型(按照国际银屑病皮损面积与严重程度指数(PASI)的标准)。

试验时：建模成功后开始药物筛选实验，空白组给药甘油醇(40mg/(kg.d))；

苦参组直接涂抹苦参中药，用量100mg/(kg.d)；

对照组1给药维A酸软膏0.1％(40mg/(kg.d))；

对照组2给药消银膏1％(40mg/(kg.d))；

实验组每日外用涂抹实施例2制备的苦参活性成分，且实验1组、实验2组、实验3组分别相应为低、中、高三个剂量，即实验1组给药10mg/(kg.d)、实验2组给药20mg/(kg.d)、实验3组给药40mg/(kg.d)。

给药时间均为10天。10天后观察各组小鼠的皮肤病变并给出评分，结果见表3。

表3为不同给药情况时小鼠银屑病对比表

空白组

苦参组

实验1组

实验2组

实验3组

对照组1

对照组2

剂量

100mg/kg

10mg/kg

20mg/kg

40mg/kg

0.1％40mg/kg

1％40mg/kg

PASI

6

5

4

3

2

4

结果表明，银屑病建模成功后，苦参对改善银屑病虽然有一定的效果，但并不理想(PASI从6降至5)；实际效果低于对照组1维A酸软膏和对比2组的消银膏(PASI＝4)。

而经过分离提取得到的苦参中得苦参活性成分对改善银屑病的效果较好(PASI均小于4)，并呈现剂量依赖的特征(实验1-3组)；低剂量组的改善效果与对照组基本一致(PASI＝4)，高剂量组的改善效果明显优于对照组(PASI＝2)。

试验3总苦参碱干预的K17在HaCat细胞增殖中的表达

采用角质HaCat细胞研究K17的表达。简述如下，采用四联细胞因子对HaCat细胞进行刺激构建银屑病样细胞模型。

细胞实验分为三大组：空白对照组，模型组，给药组；其中给药组又分为苦参碱粗提物组(20mg/mL)、消银膏组(0.2mg/mL)、总苦参碱I组(0.2mg/mL)和总苦参碱II组(1.0mg/mL)这4组。(其中：粗提物是指未经提纯的，总苦参碱组是指经过提纯的)。

采用WB方法测定各组的K17的表达，结果参见图1；采用RT-PCR测定各组对K17的mRNA，结果参见图2。

从图和图2可以看出：胶质细胞中的K17表达在不同组间存在明显差异，苦参碱高剂量组能明显降低K17在HaCat细胞增殖中的表达；RT-PCR中，mRNA的相对含量也呈现明显趋势，二者相互佐证。

本发明表明苦参活性成分对银屑病有一定的治疗作用，其作用机制是通过K17介导的信号通路，为该类生物碱的临床应用提供了科学依据。

Claims

1.一种苦参活性成分提取物在制备银屑病药物中的应用。

2.一种如权利要求1所述的苦参活性成分提取物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

1)苦参经烘干、粉碎得到苦参粉末，备用；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，烘干温度为40～75℃；苦参粉末的粒径20～80目。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，苦参粉末与酸性溶液的质量体积比为1g：10～200mL。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，酸性溶液为盐酸、磷酸或草酸；酸性溶液的浓度为0.01％～0.5％。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述离子交换树脂为氢型阳离子交换树脂；所述离子交换树脂与苦参粉末的质量比为40～50：1；所述氨水浓度为5％～25％。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述有机溶剂为乙醚、二甲醚、丁醚、苯甲醚、苯乙醚或二苯醚；洗脱速度为10BV/h。