CN113533753A - 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113533753A
CN113533753A CN202110797211.2A CN202110797211A CN113533753A CN 113533753 A CN113533753 A CN 113533753A CN 202110797211 A CN202110797211 A CN 202110797211A CN 113533753 A CN113533753 A CN 113533753A
Authority
CN
China
Prior art keywords
inhibitor
plasminogen activator
reagent
complex
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202110797211.2A
Other languages
English (en)
Inventor
余正
王伟杰
谢露丹
周帅辉
李帅鹏
刘萌
从婕
陈祥
白仲虎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Baiming Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Jiangsu Baiming Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Baiming Biotechnology Co ltd filed Critical Jiangsu Baiming Biotechnology Co ltd
Priority to CN202110797211.2A priority Critical patent/CN113533753A/zh
Publication of CN113533753A publication Critical patent/CN113533753A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G01N21/763—Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/81—Protease inhibitors
    • G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • G01N2333/8121—Serpins
    • G01N2333/8132—Plasminogen activator inhibitors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/972—Plasminogen activators
    • G01N2333/9726—Tissue plasminogen activator
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/226—Thrombotic disorders, i.e. thrombo-embolism irrespective of location/organ involved, e.g. renal vein thrombosis, venous thrombosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂‑抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法。该试剂盒检测速度快、灵敏度高、特异性能好、变异系数小，各试剂组分稳定性良好。一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂‑抑制剂1复合体测定试剂盒，其特征在于：包括试剂条，所述试剂条包括3个以上的试剂孔位，所述试剂条的其中两个试剂孔位封装有试剂一和试剂二、其中一个试剂孔位由链霉亲和素包被；试剂一为浓度2.6μg/mL的生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂‑抑制剂1复合体抗体溶液，试剂二为浓度0.24μg/mL的辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂‑抑制剂1复合体抗体的溶液。

Description

一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测 定试剂盒及检测方法
技术领域
本发明属于医疗器械类体外诊断领域，具体涉及一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法。
背景技术
组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体（tPAI·C），是在人体内广泛存在的调节机体纤溶过程和凝血过程的重要因子。它是由组织型纤溶酶原激活剂（tissue-plasminogen activator，tPA）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activatorinhibitor-1，PAI-1）结合而形成的复合物。
组织型纤溶酶原激活剂是一种单链糖蛋白，主要由血管内皮细胞合成并分泌，其对于纤维蛋白具有较高的亲和力，可将酪氨酸纤溶酶原转化成纤溶酶，从而达到降解部分凝血因子以及纤维蛋白的作用，还可解聚团块血小板，从而保证正常血管畅通和阻塞血管再通，是纤溶系统重要的关键调节物质。血浆纤溶酶原激活抑制剂（PAI）分为PAI-1和PAI-2，其中在调节血浆纤溶活性方面起重要作用的是PAI-1，PAI-1是一种单链糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族，其是组织型纤溶酶原激活物（tPA）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的主要抑制剂，并且在功能上用于抑制组织和血浆纤维蛋白的溶解。
当机体凝血活化时，纤维蛋白形成后可以激活合成于血管内皮细胞的组织型纤溶酶原激活剂（tPA），活化的tPA进一步激活纤溶酶原转化为纤溶酶，纤溶酶降解纤维蛋白产生降解产物，随后PAI-1与tPA以1:1的比例结合形成复合物tPAI-C，tPA激活纤溶酶原的活性被抑制，进而抑制纤维蛋白降解。血浆中PAI-1浓度为tPA浓度的5倍，因此可认为释放到血液中的tPA几乎都与PAI-1形成了复合物。tPAI-C的水平与tPA浓度及血管内皮损伤程度呈正相关，是评估两者的直接标志物。
tPAI-C对于DIC、动静脉血栓均有提示作用，是静脉血栓栓塞症（VTE）以及心梗的风险指标，其血浆水平的升高提示DIC的可能、血管内皮细胞损伤、血栓的形成，其对于DIC的诊断具有重要价值。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒；第二，本发明还提供了适用该试剂的检测方法；第三，本发明引入了一种新的设计，将试剂装在特殊的试剂条中，实现单人份检测的要求，试剂条的设计。该试剂盒用于定量测定血浆中的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的浓度。
试剂组成及成分：
一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒，其特征在于：包括试剂条，所述试剂条包括3个以上的试剂孔位，所述试剂条的其中两个试剂孔位封装有试剂一和试剂二、其中一个试剂孔位由链霉亲和素包被；
试剂一为浓度2.6μg/mL的生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC25E9；
试剂二为浓度0.24μg/mL的辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体的溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC17F10；
所述测定试剂盒还包括洗液、校准品、底物溶液；
所述洗液为pH 7.5，含1%吐温-20、0.1%Proclin300、0.05M的Tris-HCl溶液；
所述校准品包括浓度为0 ng/mL、3 ng/mL、12 ng/mL、48 ng/mL、100ng/mL的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗原溶液；
所述底物溶液包括底物A和底物B，底物A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，底物B为含有0.06%Na2B4O7 ，pH5.0的水溶液。
检测方法及步骤：
使用上述测定试剂盒检测组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的方法，包括以下步骤：
第一步，将30μL待测样本、100μL生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体加到包被板中，混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；
第二步，将100μL辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体加入链霉亲和素包被板中混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；
第三步，向上述洗涤后的反应孔中依次加入底物A为50ul，底物B为50ul混匀，在化学发光分析仪中测定发光强度；
第四步，利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤三得到的发光强度对照所述标准曲线，计算得出待测血浆样本中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的含量。
本发明的检测组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的试剂盒检测速度快、灵敏度高、特异性能好、变异系数小，各试剂组分稳定性良好，2-8℃可稳定一年以上。且该发明检测成本低，血浆样本检测结果与希森美康医用电子（上海）有限公司的试剂盒相关性良好。
附图说明
图1是本发明所用到的试剂条的示意图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体免疫检测试剂盒，其试剂组成为，
试剂一：浓度为2.6μg/mL的生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液；
试剂二：浓度为0.24μg/mL的辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体的溶液；
洗液：含1%吐温-20，0.1%Proclin300，0.05M的Tris-HCl溶液（pH 7.5），独立包装提供；
链霉亲和素包被的化学发光96孔板的单孔，链霉亲和素包被浓度为20μg/mL；
校准品，包括浓度为0 ng/mL、3 ng/mL、12 ng/mL、48 ng/mL、100ng/mL的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗原溶液，校准品均由组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗原与0.05M Tris、0.9%NaCl，pH值为7.4的缓冲液配制得到，额外提供；
底物溶液：底物溶液包括底物A和底物B，底物溶液包括底物A和底物B，底物A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，底物B为含有0.06%Na2B4O7 ，pH5.0的水溶液，独立包装提供。
生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体的配制方法为：取1.0mg的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体单克隆抗体，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC25E（已在专利申请日前对外销售），使用超滤浓缩离心管按照使用说明书进行换液处理，最后收集到1mL的抗体溶液，溶液为0.1mol/L的PB（pH7.0）。向溶液中加入0.3mg的Sulfo-NHS-LC-Biotin，混合均匀后，室温反应1小时，将反应液转至分子截留量为14000Da的透析袋中，夹紧口，置于1L的透析液（0.05MTris，0.9%NaCl，pH7.4）中，于2-8℃冰箱中200rpm搅拌，中间更换缓冲溶液四次，每次5小时，收集透析后的样品。将制备的样品稀释至2.6μg/mL。
辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体的配制方法为：称取4mg HRP溶于1mL的去离子水中，缓慢加入200μL的0.1mol/L NaIO4溶液，溶解并混合混匀后，2-8℃避光反应0.5小时，HRP因被氧化，溶液颜色由棕色变为绿色。向溶液中加入40μL的10%乙二醇，室温避光反应0.5小时，溶液颜色由绿色变为棕色，酶活化完毕。将活化的酶加入至4mg的已脱盐的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体检测抗体溶液中，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC17F10（已在专利申请日前对外销售），混合均匀，反应液转至分子截留量为14000Da的透析袋中，夹紧口，置于1L的透析液（0.05M CB，pH9.6）中，于2-8℃冰箱中200rpm搅拌透析2次，每次5小时。转移出反应液，再加入64μL 5mg/mL的NaBH4，混匀后室温避光反应2小时。反应结束后搅拌中缓慢加入等体积的饱和硫酸铵，2-8℃盐析2小时，6000r/min离心10分钟，弃上清，用0.1MPB溶液（pH6.0）溶解沉淀。将制备得到的酶标记抗体稀释至0.24μg/mL。
链霉亲和素包被板单孔的制备过程为：用包被液将BSA-biotin和链霉亲和素分别稀释至6μg/mL和20μg/mL，向包被孔中注入200μL BSA-biotin，2-8℃包被过夜；弃去孔内溶液，洗涤3次后加入200μL的链霉亲和素溶液，室温放置4h；弃去孔内溶液，洗涤3次后加入250μL的封闭液，封闭过夜；弃去孔内溶液，拍干残留溶液，37℃烘干0.5h。
主要溶液配制方法：
包被稀释液：称取25.95g磷酸氢二钠和18.21g二水磷酸二氢钠溶于3000g纯化水中，pH为7.0。
封闭液：称取36.3g Tris至3000g纯化水中，用浓盐酸调节pH至8.5，再加入18g氯化钠、40g牛血清白蛋白。
洗液：称取6.17g Tris、91.8g氯化钠、5g吐温20、2.5g Proclin 300溶于10000g纯化水中，用浓盐酸调节pH至8.5。
辣根过氧化物酶标记组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体稀释液：称取1.84g无水磷酸二氢钾、12.31g三水磷酸氢二钾、6.75g Proclin300加入至1350g纯化水中，溶解后再加入6.75g 牛血清白蛋白、1.35mg 1%铁氰化钾溶液，pH应为6.0。
实施例2
使用上述实施例1的试剂盒检测组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的方法，包括以下步骤：
（1）在链霉亲和素包被孔中依次加入30μL待测样本、100μL的试剂一：生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，混匀后在37℃条件下反应10分钟；
（2）用300μL洗液洗涤5次去除杂质及未结合的抗原抗体；
（3）再加入100μL试剂二：辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，混匀后在37℃条件下反应10分钟；
（4）用300μL洗液洗涤5次去除杂质及未结合的抗原抗体；
（5）向上述洗涤后的反应孔中加入50μL发光底物A以及50μL发光底物B，混匀并反应1分钟，测发光强度；
（6）利用已知浓度的校准品和对应的发光值用四参数拟合方程绘制标准曲线，将步骤（5）检测的未知样本的发光强度带入对照标准曲线，计算得出待测血浆样本中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的含量。
实施例3
试剂一：生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，封装在试剂条的孔3位置；
试剂二：辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，封装在试剂条的孔2位置；
链霉亲和素包被的化学发光96孔板的单孔，安装在试剂条的孔1位置；
洗液，标准品，底物提供单独的包装，该试剂条的图例，参考图1；
试剂条，需要配套本公司生产的化学发光测定仪BMbio-POCT10使用。
实施例4
样本的值来自无锡市人民医院检验科随机选取48例临床血清，对照采用希森美康医用电子（上海）有限公司的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体检测试剂盒（化学发光法）测定。本公司的测试值是采用，本公司的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体免疫检测试剂盒对上述样本进行测定的值，两者同时测定该48例临床血浆样本，测试结果如下表所示。
Figure DEST_PATH_IMAGE002
以本申请检测试剂及方法的检测结果为X值，以A公司的检测结果为Y值，应用SPSS软件进行线性回归分析，计算相关系数R2。
结果评价：直线方程为Y=1.0182*X-0.2815，相关系数R2为0.9971。表明本检测系统与A公司产品测值相关性良好。
以上仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (2)

1.一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒，其特征在于：包括试剂条，所述试剂条包括3个以上的试剂孔位，所述试剂条的其中两个试剂孔位封装有试剂一和试剂二、其中一个试剂孔位由链霉亲和素包被；
试剂一为浓度2.6μg/mL的生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC25E9；
试剂二为浓度0.24μg/mL的辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体的溶液，生产抗体的单克隆细胞株来自江苏拜明生物技术有限公司，单克隆细胞株号TPAIC17F10；
所述测定试剂盒还包括洗液、校准品、底物溶液；
所述洗液为pH 7.5，含1%吐温-20、0.1%Proclin300、0.05M的Tris-HCl溶液；
所述校准品包括浓度为0 ng/mL、3 ng/mL、12 ng/mL、48 ng/mL、100ng/mL的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗原溶液；
所述底物溶液包括底物A和底物B，底物A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，底物B为含有0.06%Na2B4O7 ，pH5.0的水溶液。
2.使用权利要求1所述的测定试剂盒检测组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的方法，其特征在于：包括以下步骤，
第一步，将30μL待测样本、100μL生物素标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体加到包被板中，混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；
第二步，将100μL辣根过氧化物酶标记的组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体抗体加入链霉亲和素包被板中混匀并反应，37摄氏度，孵育10分钟，反应后用300μL洗液洗涤5次；
第三步，向上述洗涤后的反应孔中依次加入底物A为50ul，底物B为50ul混匀，在化学发光分析仪中测定发光强度；
第四步，利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤三得到的发光强度对照所述标准曲线，计算得出待测血浆样本中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体的含量。
CN202110797211.2A 2021-07-14 2021-07-14 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法 Withdrawn CN113533753A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110797211.2A CN113533753A (zh) 2021-07-14 2021-07-14 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110797211.2A CN113533753A (zh) 2021-07-14 2021-07-14 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113533753A true CN113533753A (zh) 2021-10-22

Family

ID=78099117

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110797211.2A Withdrawn CN113533753A (zh) 2021-07-14 2021-07-14 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113533753A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114236122A (zh) * 2021-11-22 2022-03-25 深圳市雅为泓源生物科技有限公司 试剂盒及其制备方法和应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114236122A (zh) * 2021-11-22 2022-03-25 深圳市雅为泓源生物科技有限公司 试剂盒及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Urano et al. Relationships between euglobulin clot lysis time and the plasma levels of tissue plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor 1
Harpel Alpha2-plasmin inhibitor and alpha2-macroglobulin-plasmin complexes in plasma. Quantitation by an enzyme-linked differential antibody immunosorbent assay.
JPH0476629B2 (zh)
Gaffney et al. Unreliability of current serum fibrin degradation product (FDP) assays
CN113533753A (zh) 一种单人份血浆中组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体测定试剂盒及检测方法
US7741124B2 (en) Detection procedures for fibrinogen and/or fibrinogen derivatives
KR0171609B1 (ko) 용해 피브린형 단량체를 이용한 분석
JP5049448B2 (ja) 可溶性フィブリンのアッセイ法
CA1331158C (en) Method, device and kit for measurement of tissue plasminogen activator activity
JPH0879B2 (ja) 第ｖｉｉｉ因子活性を測定するための試薬
CN113533752A (zh) 一种单人份血浆中血栓调节蛋白测定试剂盒及检测方法
CN111024941A (zh) 一种用于多种血栓标志物检测的蛋白芯片及其制备方法
EP2309265A1 (en) Method of assaying complex and kit to be used therefor
EP0331327A2 (en) Agent for blocking nonspecific adsorption, process for preparing thereof and method of blocking nonspecific adsorption
CN111693717A (zh) 一种血清中铁蛋白快速免疫检测试剂盒及检测方法
JP2501518B2 (ja) フィブリンの定量方法
JPH06508219A (ja) プラスミン−α２−アンチプラスミン錯化合物の分析方法及びこの分析方法を繊維素溶解系の変化の尺度として利用する方法
JP2890250B2 (ja) ヒトプラスミン−α２−プラスミンインヒビター複合体の免疫学的測定法および免疫学的測定用試薬
JP2966968B2 (ja) プラスミノーゲン活性化因子及びそのインヒビターの測定方法、並びにその測定用キット
JP2627644B2 (ja) 組織型プラスミノーゲン活性化因子の測定方法及びその測定試薬キット
JP2714562B2 (ja) 可溶性フイブリンの測定方法
CN113514448A (zh) 空间邻近化学发光法检测d-二聚体的试剂盒的应用
JPH04369478A (ja) ヒト顆粒球エラスターゼの免疫学的測定方法
Shimamoto et al. Protein C in human plasma determined by homogeneous enzyme immunoassay with use of a centrifugal analyzer.
Qureshi et al. Immunochemistry of the thrombin-altered NH2-terminal disulfide knot of human fibrinogen

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20211022