CN113521305A - 一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种蜂胶醇提物‑环糊精‑壳聚糖‑黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用，属于缓释药物技术领域。本发明将羧甲基纤维素钠‑贻贝黏蛋白聚合物与环糊精‑壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物交联复合，其中贻贝黏蛋白复合物与贻贝壳聚糖在碱性或氧化条件下，贻贝黏蛋白的邻苯二酚结构可氧化成邻醌结构，在通过类似席夫碱的反应与贻贝壳聚糖表面的活性胺基结合形成稳定的缓释结构，一方面保证凝胶在快速胶凝的同时附着在溃疡面形成长期保护和给药的体系，另一方面贻贝壳聚糖独特的多孔性弹性结构实现了蜂胶醇提物的逐步缓慢释放，持续作用于溃疡，其临床效果较佳。

Description

一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备 方法和应用
技术领域
本发明涉及缓释药物技术领域，特别涉及一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用。
背景技术
蜂胶是工蜂采集胶源植物的树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶粘性物质，具有广谱的抑菌作用，能抑制金黄色葡萄球菌、链球菌等多种细菌，其中对口腔致病菌具有特殊的抑制效果。由于蜂胶具有广泛的生物活性，其抗菌、抗炎、止痛、促进愈合与增强机体免疫力等功效被临床用于治疗口腔溃疡。
然而蜂胶可溶于乙醇，在水中溶解性较差，影响了其在水凝胶剂型中的应用。因此临床使用时采用环糊精对蜂胶乙醇提取物进行包埋是一种常用的方法，但是该方法的包裹率较难控制，且受到环糊精的比例影响较大。
缓释制剂是指用药后能在较长时间内持续释放药物以达到长效作用的制剂。如能赋予蜂胶缓释的效果，将会进一步提高蜂胶的治疗效果。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用。本发明所得蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶具有良好的蜂胶包覆率和缓释效果。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)对贻贝壳依次进行酸处理、碱处理和壳聚糖酶酶解，得到贻贝壳聚糖酶解产物；
将所述贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠、水混合，进行第一反应，得到壳聚糖-柠檬酸复合物；
(2)将所述壳聚糖-柠檬酸复合物、β-环糊精和缓冲溶液混合，进行第二反应，得到环糊精-壳聚糖复合物；
(3)将所述环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物、水超声混合，固液分离后得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物；
(4)将羧甲基纤维素钠、黄原胶和水混合，进行溶胀，得到溶胀液；
使用缓冲溶液对溶胀液进行稀释，向所得稀释液中加入胺盐酸盐和贻贝黏蛋白进行第三反应，得到羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液；
(5)将所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物混合，进行第四反应，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶。
优选的，所述步骤(1)中贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠的质量比为1:1～3.5:1。
优选的，所述步骤(1)中第一反应的温度为65～90℃，时间为2～6h。
优选的，所述步骤(2)中壳聚糖-柠檬酸复合物与β-环糊精的质量比为1:2～6。
优选的，所述步骤(2)中第二反应的温度为45～70℃，时间为2～6h。
优选的，所述步骤(3)中环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物的质量比为3～4:3。
优选的，所述步骤(4)中，羧甲基纤维素钠、黄原胶、胺盐酸盐和贻贝黏蛋白的质量比为(1～2):1:1:(3～5)。
优选的，其特征在于，所述贻贝黏蛋白与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物的质量比为3～5:4。
本发明提供了上述制备方法制备得到的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶，所述蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶包括环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物以及与所述环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物交联的羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物。
本发明提供了上述蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶在制备口腔溃疡药物中的应用。
本发明提供了一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用。本发明使用壳聚糖-柠檬酸复合物、β-环糊精作为包覆原料，壳聚糖-柠檬酸复合物中的羧基与β-环糊精中的-OH反应生成具有-COO-环糊精结构的环糊精-壳聚糖复合物，其中壳聚糖具有空隙结构，能够提高对蜂胶醇提物的包覆率，从而提高蜂胶醇提物在水凝胶剂型中的溶解性和给药量；同时，贻贝壳聚糖经过酸、碱、酶处理后暴露出的大量壳聚糖基团可以帮助细胞粘附增值生长，促进溃疡愈合。本发明将羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物交联复合，其中贻贝黏蛋白复合物与贻贝壳聚糖在碱性或氧化条件下，贻贝黏蛋白的邻苯二酚结构可氧化成邻醌结构，在通过类似席夫碱的反应与贻贝壳聚糖表面的活性胺基结合形成稳定的缓释结构，一方面保证凝胶在快速胶凝的同时附着在溃疡面形成长期保护和给药的体系，另一方面贻贝壳聚糖独特的多孔性弹性结构实现了蜂胶醇提物的逐步缓慢释放，持续作用于溃疡，其临床效果较佳。
附图说明
图1为实施例3～7所得缓释凝胶的胶凝时间；
图2为实施例3～7所得缓释凝胶的粘度；
图3为实施例3～7所得缓释凝胶的体外平均的释放曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)对贻贝壳依次进行酸处理、碱处理和壳聚糖酶酶解，得到贻贝壳聚糖酶解产物；
将所述贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠、水混合，进行第一反应，得到壳聚糖-柠檬酸复合物；
(2)将所述壳聚糖-柠檬酸复合物、β-环糊精和缓冲溶液混合，进行第二反应，得到环糊精-壳聚糖复合物；
(3)将所述环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物、水超声混合，固液分离后得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物；
(4)将羧甲基纤维素钠、黄原胶和水混合，进行溶胀，得到溶胀液；
使用缓冲溶液对溶胀液进行稀释，向所得稀释液中加入胺盐酸盐和贻贝黏蛋白进行第三反应，得到羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液；
(5)将所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物混合，进行第四反应，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶。
本发明对贻贝壳依次进行酸处理、碱处理和壳聚糖酶酶解，得到贻贝壳聚糖酶解产物。本发明对所述贻贝壳的种类、来源没有特殊的要求，使用本领域常规市售的贻贝壳即可。
在进行酸处理前，本发明优选对所述贻贝壳进行机械粉碎，粉碎后所得贻贝壳粉的粒径优选为100目。在本发明中，所述酸处理使用的酸试剂优选为硝酸溶液，所述硝酸溶液的质量浓度优选为0.8～2.8％，更优选为2％。在本发明中，所述贻贝壳与硝酸溶液的体积比优选为1:5～12，更优选为1:10；在本发明中，所述酸处理的温度优选为室温，时间优选为24h。本发明通过所述酸处理，能够去除贝壳中的无机质。
所述酸处理后，本发明优选对酸处理后的产物进行洗涤，所述洗涤用洗涤剂优选为纯水。
在本发明中，所述碱处理使用的碱试剂优选为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度优选为0.5～1.4mol/L，更优选为1mol/L。在本发明中，所述酸处理产物与氢氧化钠溶液的体积比优选为1:7～14，更优选为1：10。在本发明中，所述碱处理的温度优选为室温，时间优选为3h。在本发明中，碱处理后贻贝壳表面的蝴蛛网样结构因强碱的强水解作用而消失，经过碱处理后的贝壳变得更柔软，且具有弹性，孔径增大，孔壁粗糙，出现纤维状条纹。
所述碱处理后，本发明优选将碱处理后所得壳聚糖分散于冰醋酸溶液中，得到贻贝壳聚糖溶液。在本发明中，所述冰醋酸的质量浓度优选为0.5～1.5％，更优选为1％，所述贻贝壳聚糖溶液的质量浓度优选为3～6.5％，更优选为5％。
本发明优选将壳聚糖酶加入到所述贻贝壳聚糖溶液中进行所述酶解。本发明对所述壳聚糖酶的种类、来源没有特殊的要求，使用本领域常规市售的壳聚糖酶即可。
在本发明中，所述壳聚糖酶解时壳聚糖酶的加入量优选为6.5～13U·g-1，更优选为10U·g-1；在本发明中，所述酶解的温度优选为35～45℃，更优选为40℃，时间优选为2～6h，更优选为5h。所述酶解后，本发明优选进行沸水浴灭活，所述沸水浴的时间优选为20～45min，更优选为30min。
所述酶解后，本发明优选将贻贝壳聚糖酶解产物制备成贻贝壳聚糖酶解产物冻干粉末。在本发明中，所述贻贝壳聚糖酶解产物冻干粉末的制备方法优选包括以下步骤：
对所得酶解液进行离心，所得固体进行冻干，得到贻贝壳聚糖酶解产物冻干粉末。
本发明对所述离心、冻干的具体操作方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的上述操作方式即可。
得到所述贻贝壳聚糖酶解产物后，本发明将所述贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠、水混合，进行第一反应，得到壳聚糖-柠檬酸复合物。在本发明中，所述贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠的质量比优选为1:2:1。本发明对所述混合的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的混合方式即可，具体的如搅拌混合。
在本发明中，所述第一反应的温度优选为85℃，时间优选为4h。在磷酸二氢钠构成的缓冲体系中，壳聚糖的氨基与柠檬酸的羧基发生反应，得到壳聚糖-柠檬酸复合物。
所述第一反应完成后，本发明优选使用乙醇沉淀反应物，并对沉淀进行冷冻干燥，得到壳聚糖-柠檬酸复合物固体。
得到所述壳聚糖-柠檬酸复合物后，本发明将所述壳聚糖-柠檬酸复合物、β-环糊精和缓冲溶液混合，进行第二反应，得到环糊精-壳聚糖复合物。在本发明中，所述缓冲溶液优选为磷酸氢钠缓冲溶液，所述磷酸氢钠缓冲溶液的浓度优选为0.8～1.2mol/L，更优选为1mol/L。
在本发明中，壳聚糖-柠檬酸复合物与β-环糊精的质量比优选为1:5；所述第二反应的温度优选为60℃，时间优选为4h。在第二反应过程中，壳聚糖-柠檬酸复合物中的羧基与β-环糊精中的-OH反应生成具有-COO-环糊精结构的环糊精-壳聚糖复合物。
所述第二反应完成后，本发明优选对所得第二反应液进行透析，透析后产物进行冷冻干燥，得到环糊精-壳聚糖复合物固体。
得到所述环糊精-壳聚糖复合物后，本发明将所述环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物、水超声混合，固液分离后得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物。在本发明中，所述环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物的质量比优选为3～4:3，更优选为1:1。
在本发明中，所述超声混合的温度优选为25～35℃，更优选为30℃；功率优选为100～400W，更优选为200W，时间优选为6～24h，更优选为12h。
在本发明中，所述超声混合后，本发明优选对超声混合液进行固液分离，取上清液进行冻干，得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物冻干粉。
得到所述环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物后，本发明将羧甲基纤维素钠、黄原胶和水混合，进行溶胀，得到溶胀液。在本发明中，所述羧甲基纤维素钠、黄原胶的质量比优选为(1～2):1。在本发明中，所述羧甲基纤维素钠的质量与水的体积比优选为(1～2)g:100mL。在本发明中，所述混合的方式优选搅拌混合。在本发明中，所述溶胀的时间优选为8～16h，更优选为10～14h。
得到所述溶胀液后，本发明使用缓冲溶液对溶胀液进行稀释，向所得稀释液中加入胺盐酸盐和贻贝黏蛋白进行第三反应，得到羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液。在本发明中，所述缓冲溶液优选为磷酸二氢钠溶液，所述磷酸二氢钠溶液的浓度优选为0.1mol/L。在本发明中，所述稀释倍数优选为5倍。本发明通过所述稀释，控制溶胀液的pH值为5，为后续反应提供条件。
在本发明中，所述羧甲基纤维素钠、胺盐酸盐和贻贝黏蛋白的质量比优选为(1～2):1:(3～5)。在本发明中，所述第三反应的温度优选为25～40℃，更优选为37℃，时间优选为0.5～1.5h，更优选为1h。在本发明中，所述胺盐酸盐能够作为第三反应的催化剂，催化活化羧甲基纤维素钠的羧基，使得贻贝黏蛋白上的多巴胺氨基与羧基发生酰胺化反应，促进生成羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物，所得聚合物具有交联的水凝胶结构。
得到所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液后，本发明将所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物混合，进行第四反应，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶。在本发明中，所述混合的方式优选为搅拌混合；所述混合后，本发明优选调节所得混合液的pH值为7.5。在本发明中，所述贻贝黏蛋白与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物的质量比优选为3～5:4，更优选为1：1。
在本发明中，所述第四反应的温度优选为37℃，时间优选为2h。在第四反应过程中，环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物与所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物聚合物在静电作用下发生交联，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶。
本发明提供了上述制备方法制备得到的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶，所述蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶包括环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物以及与所述环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物交联的羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物。
本发明提供了上述蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶在制备口腔溃疡药物中对的应用。
下面结合实施例对本发明提供的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)将贻贝壳机械粉碎后过100目筛，之后粉末使用2wt％硝酸溶液按照重量比体积1:10比例稀释、消化24h，去除贝壳中的无机质，纯水洗涤后以2M氢氧化钠溶液按照重量比体积1:10比例处理3h，洗涤后以1wt％冰醋酸稀释，制成5％(w/v)的贻贝壳聚糖溶液，按10U·g-1的比例加入壳聚糖酶溶液，40℃酶解5h，沸水浴30min灭活，离心后，取上清液冻干得贻贝壳聚糖酶解产物的冻干粉末，粉末与柠檬酸、磷酸二氢钠按1:2:1的重量比分别加入250mL纯化水中，搅拌溶解。在85℃反应4h，无水乙醇沉淀，冷冻干燥后得到壳聚糖-柠檬酸复合物；
(2)配制7.5gβ-环糊精与步骤(1)所得壳聚糖-柠檬酸复合物1.5g，搅拌溶解于500mL 0.1M的磷酸氢钠缓冲液中，60℃下反应4h，透析过夜后冷冻干燥，得到环糊精-壳聚糖复合物粉末；
(3)将蜂胶10g冷冻后粉碎，加入70％乙醇溶液200mL中超声混匀，浸提3次，每次4h，过滤得提取液，旋转蒸发除去乙醇，将剩余液体冷冻干燥，得到蜂胶乙醇提取物冻干粉；将步骤(2)所得环糊精-壳聚糖复合物3g溶于500mL纯化水中，缓慢加入蜂胶乙醇提取物3g，在200W下超声混合，超声时间为12h，超声温度为37℃，反应完成后分离沉淀，取上清液冷冻干燥，制得环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，记为样品1。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于，步骤(3)中环糊精-壳聚糖复合物的加入量为4g，其余操作均相同，得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，记为样品2。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于，步骤(3)中环糊精-壳聚糖复合物的加入量为2g，其余操作均相同，得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，记为样品3。
对比例2
对比例2与实施例1的区别在于，步骤(1)中未加入壳聚糖酶溶液，其余操作均相同，得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，记为样品4。
对比例3
对比例3与实施例1的区别在于，步骤(1)中未加入柠檬酸、磷酸二氢钠，其余操作均相同，得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，记为样品5。
测试例1
将实施例1得到的蜂胶乙醇提取物冻干粉溶解于70％的乙醇溶液，配制成1mg/mL的蜂胶乙醇提取物标准溶液。
将样品1～5分别加水溶解，制备成1mg/mL的待测溶液。
按照Folin-Ciocalteu法测定蜂胶乙醇提取物标准溶液和待测溶液的总酚含量，按照亚硝酸铝比色法测定蜂胶乙醇提取物标准溶液和待测溶液的总黄酮含量，将所得结果列于表1中。
表1标准溶液和待测溶液的总酚含量和总黄酮含量
Figure BDA0003162054680000081
Figure BDA0003162054680000091
由表1可以看出，使用柠檬酸与磷酸二氢钠对壳聚糖进行处理后，能够有效提高环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物的包覆效果；壳聚糖酶的使用也能够提高环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物的包覆效果。
比较样品1～3可以看出，当环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物的质量比为3～4:3时，对蜂胶醇提取物的包覆效果更好。
实施例3
将羧甲基纤维素钠(CMC)1g、黄原胶1g溶于100mL纯化水中，搅拌溶胀，以0.1M的磷酸二氢钠溶液500ml稀释，搅拌、控制pH＝5，加入胺盐酸盐1g，搅拌30min。加入贻贝黏蛋白4g，避光、37℃加热，反应1h。体系中加入4g实施例1制得的环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物，调节pH至7.5，保持37℃搅拌反应2h，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶，记为凝胶1。
实施例4
实施例4与实施例3的区别在于，未加入胺盐酸盐，其余操作均相同，所得蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶记为凝胶2。
实施例5
实施例5与实施例3的区别在于，贻贝黏蛋白的加入量为3g，其余操作均相同，所得蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶记为凝胶3。
实施例6
实施例6与实施例3的区别在于，贻贝粘蛋白的加入量为5g，其余操作均相同，所得蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶记为凝胶4。
实施例7
实施例7与实施例3的区别在于，羧甲基纤维素钠的加入量为2g，其余操作均相同，所得蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶记为凝胶5。
测试例2
(1)缓释凝胶胶凝时间的测试
实施例3～7所得缓释凝胶各2g分别置于西林瓶中，于37℃恒温水浴中保温并开始计时，每隔30秒倾斜一次西林瓶，直至溶液不流动为止，记录时间。将体系由自由流动的液态变成完全不流动的半固态所需时间记作该溶液的胶凝时间。所得结果如图1所示。
(2)缓释凝胶粘度的测试
将上述缓释凝胶分别转移到测定容器中，于37℃的水浴保温，测定缓释凝胶的粘度。所得结果如图2所示。
综合图1和图2可以看出，对于未加入胺盐酸盐的方案，虽然其形成凝胶的时间短，但是所得凝胶粘度低，并不适合作为口腔溃疡凝胶。
通过凝胶1、3～5可以看出，从理化性质角度看，本发明提供的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶具有良好的粘度和适宜的胶凝时间，适宜作为口腔溃疡凝胶。
(3)缓释凝胶体外释放的测定
分别取2g制备好的缓释凝胶1～5置于西林瓶中，于37℃恒温水浴中保温10min，向各西林瓶中加入纯化水100ml，而后置于37℃的恒温水浴摇床中振荡，分别于加入的10min、30min、60min、90min、120min、180min取上清液检测总黄酮和总酚的总含量，以此测定各时间点的蜂胶醇提物有效物质的释放百分率。将缓释凝胶按照此体外实验步骤重复操作6次，得缓释凝胶体外平均的释放曲线，如图3所示。
由图3可以看出，由于凝胶2为加入胺盐酸盐，未形成足够的壳聚糖-黏蛋白聚合物，因此缓释效果不佳，蜂胶活性成分较快释放出来，因此胺盐酸盐的辅助反应对于缓释胶体的交联结构形成是有必要的。
(4)蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶治疗大鼠口腔溃疡初步药效学验证
取30只雄性大鼠(12月龄)，随机分为2组，每组15只，采用40wt％冰醋酸灼烧法制备老年大鼠口腔溃疡模型，模型组(A组)：不给予药物治疗。缓释凝胶组(B组)：给予实施例3得到的缓释凝胶1，每天1次，每次2g。各组大鼠采用10％水合氯醛麻醉后给药，给药前后用电子游标卡尺测量口腔溃疡直径，记录各组大鼠的愈合时间，所得结果如表2。结果治疗前、治疗后第1天各组口腔溃疡直径比较差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗后第3天，B组口腔溃疡直径与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，治疗后第7天B组口腔溃疡直径与A组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。
表2各组治疗不同时间口腔溃疡直径(mm)比较
Figure BDA0003162054680000111
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
由表2可以看出，本发明提供的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶对口腔溃疡具有良好的质量效果，可以用于口腔溃疡药物的制备。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)对贻贝壳依次进行酸处理、碱处理和壳聚糖酶酶解，得到贻贝壳聚糖酶解产物；
将所述贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠、水混合，进行第一反应，得到壳聚糖-柠檬酸复合物；
(2)将所述壳聚糖-柠檬酸复合物、β-环糊精和缓冲溶液混合，进行第二反应，得到环糊精-壳聚糖复合物；
(3)将所述环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物、水超声混合，固液分离后得到环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物；
(4)将羧甲基纤维素钠、黄原胶和水混合，进行溶胀，得到溶胀液；
使用缓冲溶液对溶胀液进行稀释，向所得稀释液中加入胺盐酸盐和贻贝黏蛋白进行第三反应，得到羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液；
(5)将所述羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物分散液与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物混合，进行第四反应，得到蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中贻贝壳聚糖酶解产物与柠檬酸、磷酸二氢钠的质量比为1:1～3.5:1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中第一反应的温度为65～90℃，时间为2～6h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中壳聚糖-柠檬酸复合物与β-环糊精的质量比为1:2～6。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中第二反应的温度为45～70℃，时间为2～6h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中环糊精-壳聚糖复合物与蜂胶醇提物的质量比为3～4:3。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，羧甲基纤维素钠、黄原胶、胺盐酸盐和贻贝黏蛋白的质量比为(1～2):1:1:(3～5)。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述贻贝黏蛋白与环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物的质量比为3～5:4。
9.权利要求1～8任意一项所述制备方法制备得到的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶，所述蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶包括环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物以及与所述环糊精-壳聚糖包裹的蜂胶醇提取物交联的羧甲基纤维素钠-贻贝黏蛋白聚合物。
10.权利要求9所述的蜂胶醇提物-环糊精-壳聚糖-黏蛋白缓释凝胶在制备口腔溃疡药物中的应用。
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