CN113520922B - 具协同增效作用的抗氧化牙膏 - Google Patents

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Abstract

一种具协同增效作用的抗氧化牙膏，其含有莼菜多糖和广藿香精油，该莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:（1‑4），莼菜多糖和广藿香精油的重量占牙膏总重的1%。本发明的牙膏以莼菜多糖和广藿香精油作为有效成分，使其具有很好的抗氧化协同增效作用，同时又具有保护牙龈、修复损伤、抗菌消炎、预防或治疗牙齿和口腔疾病的功效，是消费者期待的功效型中草药牙膏，同时也为莼菜的深加工和全面利用提供了新的方式，提高了产品的附加值。

Description

具协同增效作用的抗氧化牙膏
技术领域
本发明涉及一种牙膏，具体涉及一种以莼菜多糖和广藿香精油作为有效成分的具协同增效作用的抗氧化牙膏。
背景技术
现代社会人们的饮食习惯发生改变，但是对于口腔、牙齿的清洁却没有得到相应的重视，加之不正确的刷牙方式，容易滋生各种细菌，在口腔的弱酸环境下，牙齿表面釉质发生流失，同时细菌在口腔内大量繁殖，久而久之就会使牙表变色发黄、牙体过敏、形成龋齿，甚至可能导致牙崩、牙碎，或发展为牙髓炎，根尖牙周炎等牙齿疾病，对人类的口腔和全身的健康都危害极大。
牙膏主要用于口腔和牙齿清洁、促进口气清新、维持口腔内的良好环境等。随着科学技术的发展，工艺的不断改进和完善，各种类型的牙膏相继问世，产品的质量和档次不断提高，现在牙膏的品种已经由单一的清洁型牙膏发展成为品种齐全、功能多样的牙膏，满足了不同层次消费水平的需要。近年来，天然药物用于口腔卫生用品中已成为市场热点。
莼菜(Brasenia schreberi J.F.Gmel.)系原始花被亚纲睡莲科植物，属多年生淡水水生草本植物，性味甘、寒、无毒，具有清热解毒、消肿利水以及抗菌消炎等多种功效。莼菜对生态环境要求很高，由于人类活动的影响，现今的野生莼菜已很少见，被列为世界濒危物种，目前在我国江苏太湖、杭州西湖、重庆石柱、湖北利川、江西龙虎山等地有少量零星分布。莼菜多糖作为莼菜的主要营养成分，主要存在于莼菜芽体表面的透明胶质中，研究表明莼菜多糖是一种较好的免疫促进剂，可以增强机体的免疫功能，有一定的防癌、降血脂血糖的功效。莼菜含有20多种微量元素，具有极强的富锌能力；莼菜含有17种氨基酸，包含全部的必需氨基酸。此外，丰富的物质含量使莼菜具有较突出的抗氧化能力。
广藿香(Pogostemon cablin(Blanco)Benth.)是唇形科刺蕊草属植物，是我国道地南药之一，具有许多治疗特性，广泛用于香料及制药行业。广藿香具有芳香化浊、祛暑化湿、和胃止呕的功效，临床上主要用于湿浊中阻、暑湿倦怠、腹痛腹泻、口臭等疾病的治疗，尤其在抗击新冠疫情临床用药中发挥了相当的价值。广藿香的药用成分主要是挥发油，包含广藿香酮、广藿香醇等20多种化合物，研究表明，广藿香精油具有良好的综合抗氧化能力。
但至今未见将莼菜和广藿香精油同时应用于牙膏的报道。
发明内容
本发明的目的是，针对上述现有技术的不足，提供一种具协同增效作用的抗氧化牙膏，该牙膏以莼菜多糖和广藿香精油作为有效成分，使其具有很好的抗氧化协同增效作用，并具有保护牙龈、修复损伤、抗菌消炎、预防或治疗牙齿和口腔疾病的功效。
为达上述目的，本发明采用的技术方案是：一种具协同增效作用的抗氧化牙膏，该牙膏含有莼菜多糖和广藿香精油，该莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:(1-4)，莼菜多糖和广藿香精油的重量占牙膏总重的1％。
较佳的，所述莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:(2-3)；最佳的，所述莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:3。
较佳的，上述莼菜多糖是以江西龙虎山野生莼菜为原料采用现有方法制备得到。
本发明的牙膏的制作为常规技术，其组成成分除莼菜多糖和广藿香精油外，还含有制作牙膏所需的常规辅剂，去离子水补足至100％(重量)。其中，按重量百分比，该辅剂包括15-25％的润湿剂、40-50％的磨擦剂、1-2％的增稠剂、2-3％的发泡剂、0.1-0.3％的甜味剂及0.1-0.5％的防腐剂。润湿剂采用甘油、山梨醇或丙二醇的至少一种；磨擦剂采用碳酸钙或二氧化硅的至少一种；增稠剂采用羧甲基纤维素钠或卡拉胶中的至少一种；发泡剂采用十二烷基硫酸钠；甜味剂采用糖精钠；防腐剂为苯甲酸钠。制作时，按配比将甜味剂、防腐剂、润湿剂等原料溶于去离子水中，在真空条件下,边搅拌边加入称好的磨擦剂、增稠剂和发泡剂等粉料；研磨和搅拌均匀后,再依次加入莼菜多糖和广藿香精油，然后再搅拌研磨均匀即可。
本发明的牙膏以莼菜多糖和广藿香精油作为有效成分，使其具有很好的抗氧化协同增效作用，同时又具有保护牙龈、修复损伤、抗菌消炎、预防或治疗牙齿和口腔疾病的功效，是消费者期待的功效型中草药牙膏，同时也为莼菜的深加工和全面利用提供了新的方式，提高了产品的附加值。
附图说明
图1是TBHQ对照组的TRAP总自由基清除率。
图2是不同质量分数的莼菜多糖的TRAP总自由基清除率。
图3是不同质量分数的广藿香精油的TRAP总自由基清除率。
图4是不同质量分数的1:1混合的莼菜多糖与广藿香精油样品溶液的TRAP总自由基清除率。
图5是1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油混合溶液的TRAP总自由基清除率比较。
图6是1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油混合溶液的DPPH自由基清除率比较。
图7是1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油混合溶液对羟自由基的清除活性比较。
图8是1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油混合溶液的还原能力比较。
上述图5-图8中的糖油重量比指莼菜多糖与广藿香精油的重量比。
具体实施方式
实施例1莼菜多糖与广藿香精油的抗氧化协同增效作用
1.莼菜多糖的制备
采用莼菜多糖使用超声辅助碱提醇沉法，具体为：将江西龙虎山野生莼菜(包含嫩芽、茎和幼叶)洗净除杂、沥干后，取100克，进行超声波处理，超声波处理的条件为：频率为20KHz，功率为800W，时间为30min，每10s循环一次；超声波处理的能量密度为18000J/g，整个过程需在冰水浴中完成；将超声波处理后的混合物以7000r/min离心15min，得上清液；将上清液置于-20℃下放置4h预冷后真空冷冻干燥24h，得到莼菜体外多糖胶。放入NaOH(0.03mol/L)中浸提，料液比1:10(w/v)，30℃碱液浸提3h后调pH至8.5，50℃酶解4h后离心(8000r/min，15min)，取上清液，调节pH至7，并使用旋转蒸发仪浓缩上清液至体积五分之一左右；加入为浓缩后的上清液四倍体积的乙醇，静置过夜后冷冻离心(10000rpm，4℃，15min)，弃去上清液，沉淀冷冻干燥24h，即得莼菜多糖。
2.广藿香精油的制备
参照2020版药典四部通则2204蒸馏法提取。
3.样品溶液的制备：
莼菜多糖溶液：取50mg莼菜多糖溶于0.5mL蒸馏水中配成100mg/mL母液，分别取母液0，20uL，40uL，60uL，80uL,100uL，120uL，DMSO补足1mL，配制得莼菜多糖质量分数依次为0，0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％，1.2％的样品溶液。
广藿香精油溶液：将前述方法提取的广藿香精油使用无水硫酸钠干燥过夜，收集精油，即为实验所用样品，依次取样品0，2mg，4mg，6mg，8mg,10mg，12mg，DMSO补足1mL，制得广藿香精油质量分数依次为0，0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％，1.2％的样品溶液。
不同质量分数的1:1混合的莼菜多糖与广藿香精油样品溶液：取广藿香精油100mg，DMSO定容至1mL，得到广藿香精油溶液；取莼菜多糖母液溶液(100mg/mL)100uL与等体积广藿香精油溶液混合，剧烈摇晃均匀，制得莼菜多糖与广藿香精油1:1的混合母液。依次取混合母液0，20uL，40uL，60uL，80uL,100uL，120uL，DMSO补足1mL，制得莼菜多糖与广藿香精油1:1(体积比)的样品溶液，其重量比亦为1:1，溶液中莼菜多糖与广藿香精油质量分数依次为0，0.2％，0.4％，0.6％，0.8％，1.0％，1.2％。
1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油溶液：取0、5mg、2.5mg、2mg莼菜多糖分别溶于100uLDMSO中，依次分别加入0、5mg、7.5mg、8mg广藿香精油，DMSO定容至1mL，得到质量分数为1％的莼菜多糖与广藿香精油的混合液且莼菜多糖与广藿香精油的重量比为0、1:1、1:3、1:4的样品溶液；同法配置1％质量分数的莼菜多糖与广藿香精油混合液且莼菜多糖与广藿香精油的重量比为4:1、3:1的样品溶液。取5mg、10mg莼菜多糖分别溶于100uLDMSO中，依次分别加入10mg、5mg广藿香精油，DMSO定容至1.5mL，即得到1％质量分数的莼菜多糖与广藿香精油混合液且莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:2、2:1的样品溶液。
4.抗氧化能力测定
①TRAP总自由基清除能力
ABTS储备液(7.4mmol/L)：取ABTS 96mg，加蒸馏水25mL。
K2S2O8储备液(2.6mmol/L)：取K2S2O8 378.4mg，加蒸馏水10mL。
将5mL 7.4mmol/L ABTS储备液与88μL 2.6mmoL/L K2S2O8储备液混匀，4℃静置16小时，精密量取0.4mL，80％乙醇溶液稀释约30倍左右，常温下734nm处吸光值为0.701，制得ABTS工作液。
对照品溶液配置：TBHQ为对照品，按上诉方法同法配置同质量分数梯度对照品溶液。
样品测定方法：
取样品溶液20uL加入96孔板，再加入200uL ABTS工作液，震荡混匀后，常温下避光保存6min，在734nm波长处测吸光度，平行操作3次，取平均值为最终值。
ABTS自由基清除能力由下式计算公式：清除率(％)＝[Ai-A0/Ai]×100％，其中，A0为不加样品，加入ABTS的吸光度；Ai为加入样品和ABTS的吸光度。结果参见表1和表2。
表1 TRAP总自由基清除率
Figure BDA0003219169510000061
表2 1:1的混合溶液对TRAP总自由基清除率增效作用
Figure BDA0003219169510000062
根据各样品不同质量分数TRAP总自由基清除率作图，见图1-图4，拟合出各样品TRAP总自由基清除率曲线方程，通过曲线方程计算的到TBHQ对照组IC50为1.2％；莼菜多糖IC50为3.5％；广藿香精油IC50为1.7％；莼菜多糖与广藿香精油1:1组IC50为0.56％，可以看出单一的莼菜多糖和广藿香精油其IC50均大于对照组，即二者对TRAP总自由基清除作用小于对照组TBHQ，而二者1:1体积混合后，IC50小于对照组，说明二者抗氧化作用有协同增效作用。通过表1和表2中不同质量分数各样品对自由基清除率对比可发现：1:1混合的莼菜多糖与广藿香精油样品溶液(表1和表2中以1:1的混合溶液表示)对自由基清除率大于同等质量分数下二者自由基清除率之和，这说明莼菜多糖与广藿香精油抗氧化效果可能存在协同增效作用，后续实验将围绕二者混合比例展开。
结合参见图4，通过1:1混合的莼菜多糖与广藿香精油样品溶液的TRAP总自由基清除率曲线可以发现，当混合溶液质量分数为1.0％和1.2％时，混合溶液TRAP总自由基清除率变化不大，增加趋势不明显。从表2中可以看出，当混合溶液质量分数为1.0％时，TRAP总自由基清除率增效作用最强，为7.38％，后续实验将均以1.0％质量分数的莼菜多糖与广藿香精油混合溶液进行实验。
图5则显示了1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油溶液的TRAP总自由基清除率。
②DPPH抗氧化实验
DPPH工作液的制备：配制0.1mM的DPPH溶液：取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，4℃避光保存。
样品测定方法：
取样品溶液100uL加入96孔板，再加入100uL DPPH工作液，震荡混匀后，常温下避光放置30min，在517nm波长处测吸光度，平行操作3次，取平均值为最终值。结果参见图6。
DPPH自由基清除能力计算公式：清除率CL(％)＝[A0-Ai/A0]×100％，其中，A0为不加样品空白对照，加入DPPH的吸光度；Ai为加入样品和DPPH的吸光度。
③对羟自由基的清除活性测定(Smirnoff水杨酸法)
Smirnoff工作液：10mmol/L FeSO4：27.802mg FeSO4，水定容至10mL；10mmol/L水杨酸：13.812mg水杨酸，水定容10mL；9mmol/L H2O2：10.2μL 30％H2O2，水定容至10mL。
测定方法：96孔板加入10mmol/L FeSO4溶液和10mmol/L的水杨酸溶液以及样品溶液各20μL，然后加入20μL 9mmol/L的H2O2溶液，ddH2O补至200μL，37℃反应30min，测定510nm处吸光度，每组平行3次取均值Ai。并分别测定相应的DMSO和水吸光度值Aj和Ac。清除率CL(％)＝[Aj－(Ai－Ac)]/Aj，结果参见图7。
④还原能力的测定(普鲁士蓝法)
普鲁士蓝工作液1％铁氰化钾：1g，水定容至100mL；10％三氯乙酸：1mL，水定容10mL；0.1％三氯化铁：0.1g，水定容至10mL；0.2mol/L磷酸盐(PBS)：A液：Na2HPO4-12H2O7.1628g，水定容至100mL；B液：NaH2PO4-2H2O 3.1202g，水定容至100mL；工作液：A液37.5mL+B液62.5mL，混合均匀。
测定方法：96孔板中依次加入样品溶液、0.20mo1/L PBS缓冲液、l％铁氰化钾溶液各20μL，50℃水浴20min后冰上快速冷却，加入20μL 10％三氯乙酸，64μL H2O，16μL FeCl3(0.1％)，混匀静置10min后，测定波长700nm处的吸光值，吸光值越大还原力越强试验平行重复3次取均值。结果参见图8。
结合参见图5-图8，通过对1％质量分数不同混合比例的莼菜多糖与广藿香精油溶液的TRAP总自由基、DPPH抗氧化实验、羟自由基的清除活性测定(Smirnoff水杨酸法)以及还原能力的测定(普鲁士蓝法)，发现莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:1-1:4时TRAP总自由基清除率较高，而莼菜多糖与广藿香精油重量比为1:3时TRAP总自由基清除率最高，此时对DPPH自由基清除率、羟自由基的清除活性和还原能力均为最高，指示牙膏中莼菜多糖与广藿香精油添加重量比为1:3，二者具有很好的抗氧化作用。
实施例2牙膏制备例
莼菜多糖与广藿香精油按实施例1的方法制备得到。
牙膏按前面提及的方法取原料制备得到，其中，莼菜多糖和广藿香精油的重量占牙膏总重的1％，且莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:1。
实施例3牙膏制备例
同实施例2基本相同，不同的是莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:4。
实施例4
同实施例2基本相同，不同的是莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:3。
实施例5
同实施例2基本相同，不同的是莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:2。

Claims (5)

1.一种具协同增效作用的抗氧化牙膏，其特征在于，该牙膏含有莼菜多糖和广藿香精油，该莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:（1-4），莼菜多糖和广藿香精油的重量占牙膏总重的1%。
2.如权利要求1所述的具协同增效作用的抗氧化牙膏，其特征在于，所述莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:（2-3）。
3.如权利要求1所述的具协同增效作用的抗氧化牙膏，其特征在于，所述莼菜多糖与广藿香精油的重量比为1:3。
4.如权利要求1所述的具协同增效作用的抗氧化牙膏，其特征在于，所述牙膏还含有制作牙膏所需的辅剂。
5.如权利要求4所述的具协同增效作用的抗氧化牙膏，其特征在于，所述辅剂包括润湿剂、磨擦剂、增稠剂、发泡剂、甜味剂及防腐剂。
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