CN113501799B

CN113501799B - 一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN113501799B
Application number: CN202111066056.3A
Authority: CN
Inventors: 文松松; 徐玉文; 王维剑; 牛冲; 郭常川; 李启艳; 胡德福; 张雷; 刘琦; 郑静; 向宇; 张连义
Original assignee: Shandong Institute for Food and Drug Control
Current assignee: Shandong Institute for Food and Drug Control
Priority date: 2021-09-13
Filing date: 2021-09-13
Publication date: 2021-11-26
Anticipated expiration: 2041-09-13
Also published as: CN113501799A

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从传统中药菊科苍术属植物白术(Atractylodes macrocephala)的干燥根茎中分离得到的一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物的制备方法及应用。该化合物分离自菊科苍术属植物白术(Atractylodes macrocephala)的干燥根茎，命名为Atractin A。该化合物的制备方法采用了天然产物化学领域较为成熟分离纯化手段，在实际操作中容易实现。经体外生物活性研究表明Atractin A对人类非小细胞肺癌细胞A549细胞具有一定的抑制作用。

Description

一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从传统中药菊科苍术属植物白术(Atractylodes macrocephala)的干燥根茎中分离得到的一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物的制备方法及应用。

背景技术

白术(Atractylodes macrocephala)为菊科苍术属植物，其干燥根茎为2020年版《中国药典》收录的中药品种，有悠久的使用历史。本品苦、温，归脾、胃经，具有补气健脾，燥湿利水的功效，用于治疗腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安等病症。

肺癌的细胞类型主要包括非小细胞和小细胞肺癌两种，而非小细胞肺癌最为常见。非小细胞肺癌的癌细胞在显微镜下显得个头很大，并且形状很不规则。非小细胞肺癌占到肺癌总数的85％。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，及其制备方法与在制备抗肿瘤药物方面的应用。该化合物分离自菊科苍术属植物白术(Atractylodes macrocephala)的干燥根茎，命名为Atractin A。该化合物的制备方法采用了天然产物化学领域较为成熟分离纯化手段，在实际操作中容易实现。经体外生物活性研究表明Atractin A对人类非小细胞肺癌细胞A549细胞具有一定的抑制作用。

一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，命名为Atractin A，其化学结构式如下所示：

。

本发明还提供了桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）将白术干燥根茎粉碎，获得粗粉，将白术根茎粗粉用乙醇加热回流提取，滤过，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，得到总浸膏；

（2）将步骤（1）的总浸膏分散于水中，然后用石油醚萃取，得到石油醚相提取物；

（3）将步骤（2）的提取物先经过硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检视后，得到A–G七个组分，组分E经过反相C-18柱层析甲醇-水梯度洗脱后，再分别经过反相C-8乙腈-水等度洗脱和反相C-18甲醇-水等度洗脱，得到倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，即Atractin A。

优选地，所述步骤（3）的石油醚-丙酮梯度洗脱过程中，石油醚和丙酮的体积比为100:0至0:100；所述步骤（3）的甲醇-水梯度洗脱中，甲醇和水的体积比为30:70至100:0；所述步骤（3）的乙腈-水等度洗脱的乙腈和水的体积比为60:40；甲醇-水等度洗脱的甲醇和水的体积比为65:35。

本发明还提供了桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物在制备抗肿瘤药物上的应用。

优选地，在制备治疗非小细胞肺癌的药物上的应用。

本发明的有益效果：

1. 新化合物

本发明从菊科苍术属植物白术的干燥根茎中分离得到了结构新颖的桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，该类化合物在天然界中极为罕见，本发明丰富了该类化合物的化学多样性，为化合物领域增加了1种新的化合物，也为白术的化学分类学研究提供了新的证据。

2. 提取方法简单

该化合物的制备方法都采用了天然产物化学领域较为成熟的技术手段，在实际操作容易实现。

3. 治疗非小细胞肺癌

体外生物活性实验表明，该化合物对A549细胞具有一定的抑制活性。

附图说明

图1 化合物Atractin A的高分辨质谱；

图2 化合物Atractin A的氢谱；

图3化合物Atractin A的碳谱和DEPT135谱；

图4 化合物Atractin A的1H-1H COSY 谱；

图5 化合物Atractin A的HSQC谱；

图6 化合物Atractin A的HMBC谱；

图7 化合物Atractin A的NOESY谱；

图8 化合物Atractin A的紫外吸收图谱；

图9 化合物Atractin A的圆二色谱；

图10 化合物Atractin A的红外图谱。

具体实施方式

实施例1 Atractin A的制备

提取：将菊科苍术属植物白术(产于浙江台州，5.0 kg)的干燥根茎粉碎，过10目筛子，以80%乙醇回流提取3次，第一次提取时间为2小时，第二次和第三次的提取时间为1小时，过滤合并提取液，提取液减压浓缩，提取浓缩液加水稀释后用等体积的石油醚萃取4次，减压回收溶剂分别得到石油醚相提取物。

分离：将上一步得到的石油醚相提取物(89.5 g)经硅胶柱层析，以体积比石油醚-丙酮(100:0至0:100)梯度洗脱，进一步经过反相C18硅胶柱层析甲醇-水(30:70至100:0)梯度洗脱，再经过半制备高效液相色谱C8柱分离乙腈-水(60:40)洗脱，最后经过半制备高效液相色谱C18柱分离甲醇-水(65:35)得到Atractin A (3.0 mg)。

Atractin A

[α]22.5 D –44.8 (c 0.3, MeOH);

紫外光谱 (甲醇): λ _max (log ε): 195 (4.90), 225 (4.04), 300 (3.25);

圆二色谱 (甲醇): 230 (Δε +1.58) nm, 300 (Δε +1.27) nm, 275 (Δε –1.27) nm,

红外光谱, ν _max3738, 3427, 2359, 1636, 1551, 1513, 1268 cm^-1;

Atractin A的氢谱和碳谱数据见表1；

高分辨质谱 m/z 529.2948 [M + H]⁺ (计算值为 C₃₄H₄₁O₅, 529.2949)，551.2761[M + Na]⁺ (计算值为 C₃₄H₄₀O₅Na,551.2768)。

表1 Atractin A的氢谱和碳谱数据

实施例2 体外细胞毒活性的测定

采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对化合物Atractin A进行细胞毒活性研究，用含10％胎牛血清的培养液(DMEM)配成5×10⁴/mL的A549细胞悬液，每孔体积100μL接种到96孔培养，培养24 h后加入待测化合物Atractin A，设置3个复孔。另设置阴性对照组（细胞培养液），每组均设置3个复孔。加入Atractin A后将培养板置于5% CO₂、37℃饱和湿度培养箱中培养48 h，每孔加入MTT溶液20μL，继续孵育4 h后终止培养，弃上清液，每孔加入100μLDMSO溶液，使其充分溶解，将培养板放置在酶标仪上，选取波长为490 nm记录吸光度值，计算其相应的抑制率，在初筛中对肿瘤细胞生长抑制率设定4个浓度(5, 10, 20, 40μmol/L)，计算结果用SPSS 18.0软件得出半数抑制浓度（IC₅₀）。结果表明，该化合物对A549细胞具有一定的抑制作用，其IC₅₀ = 35.8μmol/L。

Claims

1.一种桉叶烷型倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，命名为Atractin A，其特征在于，其化学结构式如下所示：

。

2.一种权利要求1所述的杂合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（3）将步骤（2）的提取物先经过硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检视后，得到A–G七个组分，组分E经过反相C-18柱层析甲醇-水梯度洗脱后，再分别经过反相C-8乙腈-水等度洗脱和反相C-18甲醇-水等度洗脱，得到1个倍半萜并香叶基苯并呋喃酮杂合物，即Atractin A；

所述步骤（3）的石油醚-丙酮梯度洗脱过程中，石油醚和丙酮的体积比为100:0至0:100；所述步骤（3）的甲醇-水梯度洗脱中，甲醇和水的体积比为30:70至100:0；所述步骤（3）的乙腈-水等度洗脱的乙腈和水的体积比为60:40；甲醇-水等度洗脱的甲醇和水的体积比为65:35。

3.权利要求1所述的杂合物在制备抗肿瘤药物上的应用，其特征在于，在制备治疗非小细胞肺癌的药物上的应用。