CN113456544B - 一种厚朴花提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种厚朴花提取物及其制备方法和应用。该厚朴花提取物总黄酮含量为1.43‑7.33 mg/mL，多酚含量为0.78‑3.87 mg/mL，按照包括以下步骤方法制备：将厚朴花粉碎、过筛后与水混合，在料液比1:10~1:60（m/m）、提取温度105℃~135℃、压力0.03~0.19 MPa条件下提取30~120 min，过滤得厚朴花提取物。本发明厚朴花提取物安全性及稳定性强，可显著抵御机体的炎症损伤，有效拮抗乳酸对皮肤的刺激，具有舒缓受损肌肤的功效。

Description

一种厚朴花提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种厚朴花提取物及其制备方法和应用。
背景技术
厚朴花，作为近现代史常用药材，为木兰科植物厚朴（Magnolia officinalis Rehb.et Wils.）或凹叶厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehb.etWils.）的干燥花蕾，具有芳香化湿、理气宽中的功效，被《中国药典（一部）》收录。现代研究表明，厚朴花富含黄酮类、酚酸类、生物碱、厚朴酚等多种生物活性成分。目前，厚朴花提取工艺主要包括有机溶剂热回流提取法、超声法等。
近年来，由于经济发展、工业化进程加速、生活方式改变、环境污染等，使得敏感肌肤人群数量呈现逐年扩增的趋势。据《中国敏感性皮肤诊治专家共识》披露的数据显示，敏感性皮肤在中国女性中的发病率达到了36.1%。通常情况下，敏感肌患者比普通人更容易受到刺痛、瘙痒、灼热和紧绷等不适感的困扰，也是研究人员研究的热点之一。随着人们认知水平不断提高，绿色健康的植物提取物成为了护肤行业的时尚和趋势，开发利用绿色植物的传统资源优势，寻找有效解决敏感肌肤问题的植物提取物，应用于敏感肌肤人群的化妆品具有较好的应用前景。
中国专利（CN102370593A）公开了厚朴花提取方法其是按下面的步骤进行：1、将木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥花蕾进行机械研磨粉碎，制成厚朴花粉末；2、将厚朴花粉末经过有机溶剂的多次回流萃取提取而成；3、溶剂萃取出的组分经色谱法或分馏法纯化，分离得到厚朴花提取物。
厚朴花提取物功效研究多围绕消炎、镇痛、抗菌等方面展开，但厚朴花在护肤品中的应用较少公开。
此外，现有对厚朴花提取物的制备方法多集中在对多糖或者厚朴酚的提取，存在活性成分提取率低，有机溶剂残留等问题。开发一种满足绿色提取的优势，且有效提高活性成分含量、提高提取物稳定性的制备方法，对扩大厚朴花提取物的应用具有重要意义。
发明内容
基于上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种厚朴花提取物，并提供了其制备方法和护肤应用。本发明厚朴花提取物总黄酮和多酚含量提升，提取过程避免有机溶剂残留，降低细胞毒性，提取物的稳定性提高，扩展厚朴花提取物的应用范围。本发明厚朴花提取物具有良好的抗刺激、快速舒缓及抵抗炎症损伤的效果。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
本发明首先提供了一种厚朴花提取物，所述厚朴花提取物中总黄酮含量为1，43-7.33 mg/mL。
根据本发明，所述厚朴花提取物中多酚含量为0.78-3.87 mg/mL。
根据本发明的一些优选实施方案，所述厚朴花总黄酮含量为2.28-4.5 mg/mL；多酚含量为1.05-3.5 mg/mL。
根据本发明，所述厚朴花提取物通过包括下述步骤的方法制备得到：将厚朴花粉碎与水混合后，在温度为105℃～135℃，压力为0.03～0.19 MPa的条件下提取。
根据本发明，所述厚朴花提取物提取时间为30 min～120 min。
根据本发明的一些优选的实施方式，所述厚朴花提取物制备方法中，将所述厚朴花粉碎过筛与水混合后，加入环糊精后提取。
根据本发明，所述厚朴花制备工艺中，环糊精的用量为所述厚朴花和水总重量的0.1%-10wt%，例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.4%、0.5%、0.8%、0.9%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%或10%，以及上述数值之间的点值。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取温度为110℃～135℃。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取压力为0.07～0.19 MPa。
根据本发明的进一步的优选实施方案，所述提取温度为121℃～135℃。
根据本发明的进一步的优选实施方案，所述提取压力为0.13～0.19 MPa。
根据本发明更优选的实施方案，所述提取温度为121℃。
根据本发明进一步优选实施方案，所述提取压力条件为0.13 MPa。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述提取时间为90 min。
根据本发明，所述厚朴花与水的质量比（料液比）为1:10～1:60（m/m），例如可以是1:10、1:11、1:12、1:15、1:16、1:17、1:18、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39、1:40、1:41、1:42、1:45、1:46、1:48、1:49、1:50、1:52、1:55、1:56、1:57、1:58、1:60，以及上述数值之间的点值。
根据本发明的一些优选实施方案，所述厚朴花与水料液比为1：20（m/m）。
根据本发明，所用提取次数为1～2次。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取次数为2次。
根据本发明，所述厚朴花粉碎后过24-40目筛，取24目筛下40目筛上部分与水混合，并提取。
根据本发明，所用的水优选为去离子水。
根据本发明，所述厚朴花提取物制备方法还包括过滤步骤。
本发明另一方面提供了一种厚朴花提取物的制备方法。
根据本发明，所述厚朴花提取物制备方法包括以下步骤：将厚朴花粉碎与水混合后，在温度为105℃～135℃，压力为0.03～0.19 MPa的条件下提取。
根据本发明，所述厚朴花提取物提取时间为30 min～120 min。
根据本发明的一些优选的实施方式，将所述厚朴花粉碎过筛与水混合后，加入环糊精后提取。
根据本发明，所述厚朴花制备工艺中，环糊精的用量为所述厚朴花和水总重量的0.1%-10wt%，例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.4%、0.5%、0.8%、0.9%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%或10%，以及上述数值之间的点值。
根据本发明，所述厚朴花提取过程中加入环糊精提升了厚朴花提取物溶液的澄清度及稳定性。
活性原料稳定性是保障其在护肤品中应用的基础，稳定性试验证实，本发明所述制备工艺制备得到的厚朴花提取物稳定性强，保障了厚朴花提取物在护肤品中得以广泛应用。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取温度为110℃～135℃。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取压力为0.07～0.19 MPa。
根据本发明的进一步的优选实施方案，所述提取温度为121℃～135℃。
根据本发明的进一步的优选实施方案，所述提取压力为0.13～0.19 MPa。
根据本发明更优选的实施方案，所述提取温度为121℃。
根据本发明进一步优选实施方案，所述提取压力条件为0.13 MPa。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述提取时间为90 min。
根据本发明，所述厚朴花与水的质量比（料液比）为1:10～1:60（m/m），例如可以是1:10、1:11、1:12、1:15、1:16、1:17、1:18、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39、1:40、1:41、1:42、1:45、1:46、1:48、1:49、1:50、1:52、1:55、1:56、1:57、1:58、1:60，以及上述数值之间的点值。
根据本发明的一些优选实施方案，所述厚朴花与水料液比为1:20（m/m）。
根据本发明，所用提取次数为1～2次。
根据本发明的一些优选实施方案，所述提取次数为2次。
根据本发明，所述厚朴花粉碎后过24-40目筛，取24目筛下40目筛上部分与水混合，并提取。
根据本发明，所用的水优选为去离子水。
根据本发明，所述厚朴花提取物制备方法还包括过滤步骤。
根据本发明，所述制备方法制备得到的厚朴花提取物中总黄酮含量为1.43-7.33mg/mL。
根据本发明，所述制备方法制备得到的厚朴花提取物中多酚含量为0.78-3.87mg/mL。
本发明另一方面提供了上述厚朴花提取物及其含有所述厚朴花提取物的制剂组合物。
根据本发明，所述制剂为所述厚朴花提取物液体制剂，其包括厚朴花提取物、液体分散剂和护色剂。
根据本发明的一些优选实施方案，所述厚朴花提取物采用大孔树脂D101纯化分离后、浓缩3~5倍。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述厚朴花提取物采用大孔树脂D101纯化分离、浓缩4倍。
根据本发明的一些优选实施方案，所述的液体分散剂为甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、丙二醇、己二醇、戊二醇中的一种或几种。
根据本发明的一些优选实施方案，所述液体分散剂用量为制剂总量的5wt%～50wt%。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述液体分散剂为甘油和己二醇。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述甘油添加量为45wt %，所述己二醇用量为1.5wt %。
根据本发明的一些优选实施方案，所述护色剂为EDTA-2Na、柠檬酸、环糊精、酒石酸、Vc乙基醚中的一种或几种。
根据本发明，所述制剂为厚朴花提取物固体制剂。
根据本发明的一些实施方式，所述厚朴花提取物固体制剂包括厚朴花提取物和固体分散剂。
根据本发明的一些优选实施方案，所述厚朴花提取物采用大孔树脂的D101纯化分离、浓缩3～5倍。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述厚朴花提取物纯化分离、浓缩4倍。
根据本发明的一些优选实施方案，所述固体分散剂为甘露醇、环糊精、聚乙二醇、麦芽糊精中的一种或几种。
根据本发明的一些优选实施方案，所述固体分散剂用量为制剂量的10wt%～50wt%。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述固体分散剂为环糊精。
根据本发明的又一些优选实施方案，所述环糊精添加量为20wt%。
本发明再一方面提供了所述厚朴花提取物在护肤品中的应用。
本发明又一方面提供了所述厚朴花液体制剂或固体制剂在护肤品中的应用。
根据本发明，所述厚朴花提取物或液体制剂或固体制剂可作为活性成分应用于制备具有舒缓、修护功效护肤品中。
根据本发明，所述厚朴花提取物或液体制剂或固体制剂可应用于制备具有抗炎或抗刺激功效护肤品中。
本发明有益效果：
本发明提供了一种厚朴花提取物及其制备方法，所述厚朴花提取物细胞毒性降低、稳定性提升，活性成分总黄酮和多酚含量高，扩展了厚朴花提取物的应用范围，从而使得厚朴花资源得以充分利用。解决了现有技术中厚朴花总黄酮含量和多酚含量低，存在有机溶剂残留等问题。
本发明将厚朴花提取物应用于护肤品领域，该护肤品可显著抵御机体的炎症损伤，有效拮抗乳酸对皮肤的刺激，同时具有有效舒缓受损肌肤的功效。可应用于舒缓、修护功效护肤品中。
附图说明
图1是厚朴花提取物稳定性观察图片；
图2 是厚朴花提取物细胞毒性测试结果；
图3是厚朴花提取物对炎症因子IL-1β的影响结果图；
图4是实验组及对照组2乳酸刺激评分结果图；
图5是对照组1和对照组2乳酸刺激评分结果；
图6是即时舒缓评分图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步阐述，但本发明并不局限于此。
本领域的普通技术人员应当认识到，本发明并不限于上述实施例，任何对本发明的变换、变型都落入本发明的保护范围。
下面实施例所述的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述的实验材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
下列实施例中，所用原料：厚朴花（市售）；产地：亳州；供应商：北京仟草中药饮片有限公司。
本发明中使用的仪器如表1所示。
表1试验仪器
Figure 111859DEST_PATH_IMAGE001
1. 总黄酮测试方法
采用NaNO2-Al(NO3)3比色法测试厚朴花提取物中的黄酮含量，参考《GB/T 20574-2006蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法》。
多酚测试方法：
多酚检测方法参考《GB_T 8313-2008 茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》。
ABTS测试方法：
准确称取0.0192 g ABTS加入5.00 mL去离子水溶解，混匀，制备成浓度为7mmol·L-1的ABTS储备液。称取0.1892 g过硫酸钾，加入5.000 mL去离子水溶解，混匀，制备成140 mmol·L-1的储备液。将一定量7 mmol·L-1的ABTS溶液和140 mmol·L-1的过硫酸钾容溶液混合，在室温避光下静置一段时间后，形成ABTS自由基储备液。取一定量ABTS自由基储备液，用50%乙醇稀释，使最终测试阴性对照吸光值为0.70 ± 0.02。
将待测样品用50%乙醇稀释成一定质量浓度测试液。将测试液、ABTS自由基储备液依次加入，涡旋混匀，置于酶标仪避光孵育，每间隔20 min，用酶标仪在波长734 nm处测定其吸光值。按式（1）计算ABTS自由基清除率。
Figure 888054DEST_PATH_IMAGE002
式（1）中：A为测试液与ABTS溶液混合后OD值，
B为50%乙醇与ABTS溶液混合后OD值，
C为50%乙醇与测试液混合后OD值。
4.提取溶剂筛选
以粉碎过24-40目筛（选用24筛下40目筛上备用）的厚朴花为原料，在料液比1:20（m/m）、一定温度条件下常压热回流提取2次，每次30 min，合并两次滤液，过滤得厚朴花提取物。选用纯水（提取温度100℃）、不同浓度（25%～95%）的乙醇水溶液为提取溶剂，研究目标为黄酮含量和多酚含量，以及0.5%厚朴花提取物对ABTS自由基清除率（%），筛选厚朴花的提取溶剂，结果见表2。
表2 不同提取溶剂对比
溶剂 总黄酮含量（mg/mL） 多酚含量（mg/mL） 0.5%厚朴花提取物对ABTS自由基清除率（%）
纯水 1.08 0.77 61
25%乙醇 1.15 0.75 62
50%乙醇 0.97 0.76 53
75%乙醇 0.95 0.70 51
95%乙醇 0.95 0.70 37
由表2得出，25%乙醇厚朴花提取物ABTS自由基清除效果与纯水效果相当，但乙醇易燃易爆、存在有机溶剂残留、后续完全除去工序较复杂等问题；水无毒，安全且易再生利用，考虑到安全需求，故选择纯水为提取溶剂。
实施例1
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按料液比1:10～1:60（m/m）比例添加去离子水，在一定温度和压力下提取，过滤得厚朴花提取物。样品1-4微压制备工艺具体料液比（m/m）、提取温度（℃）、压力（MPa）、提取时间（min）和提取次数如表3所示。
表3 微压制备工艺料液比参数优化
Figure 933370DEST_PATH_IMAGE003
。
实施例2
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按1:20（m/m）比例添加去离子水，在一定温度和压力下提取30～120 min，过滤得厚朴花提取物。样品5-8微压制备工艺具体料液比（m/m）、提取温度（℃）、压力（MPa）、提取时间（min）和提取次数如表4所示。
表4 微压制备提取时间参数优化
Figure 184704DEST_PATH_IMAGE004
。
实施例3
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按1:20（m/m）比例添加去离子水，在一定温度（105℃～135℃）和压力（0.03 MPa～0.19 MPa）下提取30 min，过滤得厚朴花提取物。样品9-12微压制备工艺具体料液比（m/m）、提取温度（℃）、压力（MPa）、提取时间（min）和提取次数如表5所示。
表5 微压制备提取温度及压力参数优化
Figure 467918DEST_PATH_IMAGE005
。
对比例1（常规热浸法）
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），纯水为提取溶剂，按料液比1:20（m/m），80 ± 2℃保温提取2次，每次30 min，合并两次滤液，过滤得厚朴花提取物。
对比例2（热回流法）
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按料液比1:20（m/m），纯水作为提取溶剂，于100℃、常压热回流提取2次，每次30 min，合并两次滤液，过滤得厚朴花提取物。
对比例3（闪式提取法）
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按料液比1:20（m/m），纯水为提取溶剂，35-40℃、电压75 V闪式提取2次，每次2 min，合并两次滤液，过滤得厚朴花提取物。
对比例4（超声提取法）
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按料液比1:20（m/m），纯水为提取溶剂，70～75℃、超声功效400 W（频率为39 kHZ）超声提取2次，每次30 min，合并两次滤液，过滤得厚朴花提取物。
实验结果：
样品1-13和对比例1-4工艺制备厚朴花提取物中厚朴花总黄酮含量和多酚含量，测试结果如表6下：
表6提取物中总黄酮含量和多酚含量
序号 总黄酮含量（mg/mL） 多酚含量（mg/mL）
样品1 7.33 3.87
样品2 4.09 2.04
样品3 2.92 1.37
样品4 2.28 1.05
样品5 1.43 0.78
样品6 2.44 1.15
样品7 2.51 1.23
样品8 2.64 1.28
样品9 2.58 1.36
样品10 2.99 1.64
样品11 3.58 1.77
样品12 4.39 2.13
样品13 4.02 2.16
对比例1 1.04 0.78
对比例2 1.08 0.77
对比例3 1.22 0.84
对比例4 1.38 0.94
以目标成分（总黄酮、多酚含量）为研究目标，采用微压提取制备，考察不同料液比、提取时间、提取温度及对应压力对厚朴花中目标总黄酮含量和多酚含量的影响，优化较优的制备工艺为：料液比1:10～1:60（m/m），提取时间为30～120 min，提取1~2次，微压提取温度为105～135 ℃，对应压力为0.03～0.19 MPa，此时总黄酮含量为1.43-7.33 mg/mL、多酚含量为0.78-3.87 mg/mL。
微压提取技术制备厚朴花提取物，可提高总黄酮含量和多酚含量，且提取效率较高。
实施例4
样品14制备：
将厚朴花粉碎过24-40目（取24目筛下40目筛上备用），按1:20（m/m）比例添加去离子水，添加厚朴花及水总重量0.5%的环糊精，在121℃、提取压力为0.13 MPa下提取2次，每次90 min，过滤得厚朴花提取物。
实施例5（液体制剂）
样品8得到的厚朴花提取物采用大孔树脂的D101纯化分离、浓缩4倍，复配液体分散剂甘油添加量为45wt%，己二醇用量为1.5wt%和护色剂EDTA 二钠用量为0.25wt%，得到本发明的厚朴花提取物液体制剂。
实施例6（固体制剂）
样品8得到的厚朴花提取物采用大孔树脂D101纯化分离、浓缩4倍，复配固体分散剂环糊精添加量为20wt%，真空冷冻干燥得到本发明的厚朴花提取物固体制剂。
对比例5（液体制剂）
厚朴花粉碎过24-40目筛，选用24目筛下40目筛上部分，90%乙醇回流提取2次，每次提取时间1.5 h，过滤，合并滤液，加入4%活性炭脱色，过滤，滤液浓缩4倍，复配45%甘油，1.5%己二醇灭菌得厚朴花提取物液体制剂。
对比例6（固体制剂）
厚朴花粉碎过24-40目筛，选用24目筛下40目筛上部分，90%乙醇回流提取2次，每次提取时间1.5 h，过滤，合并滤液，加入4%活性炭脱色，过滤，滤液浓缩4倍，复配20%环糊精，真空冷冻干燥得厚朴花提取物固体制剂。
功效评价实验
稳定性试验
观察样品8和样品14厚朴花提取物的稳定性，所得结果见图1。
由图1可知，在厚朴花提取过程中添加环糊精后（图1右）植物提取液外观更加澄清，且置于25 ± 2℃、环境相对湿度为50-60%下放置30天稳定性观察结果显示，其不出现沉淀现象，稳定性更强，保障了其在护肤品中的广泛应用。
细胞毒性测试
本次检测样品设置13个浓度，每个浓度设置3个重复孔，同时，实验设置阴性对照孔、调零孔（去离子水）和阳性对照孔（5% DMSO）。本实验采用MTT活性检测方法，筛选细胞给药的最大安全浓度。具体操作步骤如下：
（1）制备细胞悬液：取对数生长期细胞消化后接种至96孔板，将培养板放置在37℃、5%的CO2培养箱中孵育培养24 h。
（2）按表7中浓度设置，配制不同浓度的受试物。
表7样品细胞毒性浓度设定
样品名称 样品浓度（m/v）
实施例6制得厚朴花提取物（固体制剂） 0.000010%、0.000020%、0.00005%、0.0001%、0.0002%、0.0004%、0.0008%、0.0016%、0.0031%、0.0063%、0.0125%、0.025%、0.05%
对比例6制得厚朴花提取物（固体制剂） 0.000010%、0.000020%、0.00005%、0.0001%、0.0002%、0.0004%、0.0008%、0.0016%、0.0031%、0.0063%、0.0125%、0.025%、0.05%
（3）细胞生长24 h后弃掉上清，加入含不同浓度受试物的培养基，将培养板放置在37℃、5%的CO2培养箱中孵育培养24 h。
（4）检测：细胞培养24 h后，弃掉上清，加入配制并过滤的MTT（0.5 mg/mL），轻轻混匀，37℃避光孵育4 h。孵育结束后弃掉上清，每孔加150 μL的DMSO，室温低速震荡20 min，用酶标仪读取OD540 nm值。
（5）计算公式：
Figure 87118DEST_PATH_IMAGE006
以80%细胞存活率筛选最大安全给药浓度得出：实施例6厚朴花提取物固体制剂、对比例6厚朴花提取物固体制剂的细胞测试浓度上限为0.0002%，且与对比例6相比，实施例6厚朴花提取物固体制剂的细胞毒性较对比例6厚朴花提取物固体制剂偏低（见图2）。
抗炎症损伤
当皮肤接触外界刺激物后，激活先天性免疫反应介导的炎症反应。通过模拟机体炎症，采用先天免疫反应的巨噬细胞，用脂多糖（LPS）诱导，巨噬细胞会表达细胞炎症因子，过量便会引起机体免疫紊乱。炎症因子IL-1β在免疫调节和炎症反应过程中起重要作用，被认为是炎症反应过程中引起发热反应的主要内源性介质之一，一旦炎症因子在皮肤细胞中含量增加，皮肤温度高于正常温度，将加剧皮肤炎症反应，引发机体炎症级联反应。
诱导小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症模型测试
基于LPS诱导小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症模型，评价样品对细胞炎症因子表达分泌的影响，LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的抗炎检测（IL-1β）检测方法如下：
（1）接种：将细胞接种至96孔板中，37℃，5% CO2培养箱孵育过夜；
（2）配液：根据表8配制受试物和阳性对照；
（3）给药：根据表8实验分组和浓度设置，待96孔板中细胞铺板生长24 h后，进行分组给药，每个处理组设3个复孔。组1中，空白对照与阴性对照组均为加入含1‰ DMSO的细胞培养基，阳性对照为加入含有0.01%地塞米松的细胞培养基；组2中，空白对照与阴性对照组均加入细胞培养基，样品组加入含有相应浓度样品的细胞培养基，于37℃，5% CO2培养箱继续培养24 h。
表8实验分组和浓度设置
Figure 947627DEST_PATH_IMAGE007
（4）LPS诱导：培养24 h后，将板内培养基吸出，均加入PBS轻洗一次，空白对照组加入细胞培养基，阴性对照组、样品组和阳性对照组加入含有LPS的细胞培养基，37℃，5%CO2培养箱继续培养24 h后收集上清液。
（5）IL-1β含量检测：取各孔细胞上清液，根据ELISA试剂盒操作说明，进行细胞炎症因子IL-1β含量检测，结果见表9。
表9 炎症因子IL-1β表达检测结果
Figure 474423DEST_PATH_IMAGE009
注：方法最低定量限（标曲最低浓度）为12.5 pg/mL，最低检出限为1pg/mL。
与LPS未诱导（LPS-）组相比，LPS诱导（LPS+）引起炎症因子IL-1β表达量极显著升高（p<0.01），表明LPS诱导造模成功；与SC（0.1%DMSO，LPS+）相比，PC（地塞米松）组地塞米松在0.01%给药浓度下，可极显著下调IL-1β的表达量（p<0.01），表明本次检测结果有效。
与NC（LPS+）组相比，本发明实施例6制得厚朴花提取物在0.00005~0.0002% 浓度下均可显著降低了IL-1β因子的表达，且抑制效果与阳性对照（0.001%地塞米松）相当（表8），与同等浓度下对比例6制得厚朴花提取物相比，抗炎效果更为显著(见图3)。
抗乳酸刺激试验
乳酸刺激试验主要是测试人体乳酸刺激评分，判断测试样品的抗刺激效果。
本测试为半脸测试试验，测试样品：实验组为10%实施例5制得厚朴花提取物制剂+10%乳酸；对照组1为10%对比例5制得厚朴花提取物制剂+10%乳酸；对照组2为10%乳酸。
具体样品配方信息详见表10。
表10 测试样品配方信息表
Figure 940039DEST_PATH_IMAGE010
*表示经100℃煮沸5min放冷。
受试者要求：22名20~60岁对乳酸有刺痛敏感肌肤人群，随机均分为2组，每组人数各11人。
乳酸刺痛试验方法：选择受试者鼻唇沟左、右测进行试验，第一组：左侧采用10%乳酸水溶液50 μL滴在直径为0.8 cm滤纸片上（对照组2），其右侧采用10%乳酸加含有10%本发明实施例5制得厚朴花提取物液体制剂（实验组）50 μL滴在直径为0.8 cm滤纸片上；第二组：左侧采用对照组2样品，右侧采用对照组1样品；分别在0 min、0.5 min、2.5 min、5.0min、15.0 min和30.0 min询问受试者刺痛感，按3分法进行评分（0分为没有刺痛感，1分为轻度刺痛；2分为中度刺痛，可耐受刺痛感；3分为重度刺痛，难以忍受）。
表11 乳酸刺激测试结果
Figure 402245DEST_PATH_IMAGE011
表12乳酸刺激测试结果
Figure 15629DEST_PATH_IMAGE012
注：测试评分结果为11名志愿者算术平均值。
由乳酸刺激测试结果可知（表11、12），实施例5制得的厚朴花提取物制剂能有效降低乳酸对肌肤产生的刺激性，与对比例5相比，效果更为显著。
舒缓受损肌肤
以10%乳酸为刺激物，筛选11名20~60岁符合测试条件的志愿者。试验部位：鼻唇沟。测试样品：实验组含10%实施例5制得厚朴花提取物（液体制剂）啫喱、对照组为啫喱基质。
表13 测试样品配方信息表
Figure 814957DEST_PATH_IMAGE013
制备工艺步骤如下：
（1）A相原料加热到80℃混合均匀，备用；
（2）搅拌降温，60℃加入B相原料，搅拌均匀；
（3）搅拌降温，40℃以下加入C相原料，搅拌均匀；
（4）搅拌降温，38℃出料，加入D相。
测试方法：分别用10%乳酸50 μL作用于敏感肌肤的鼻唇沟左、右两侧，待5 min后受试者反馈刺激反应评分≥2.0分以上的作为受试者。左侧涂抹含10%本发明的厚朴花提取物（液体制剂）啫喱样品，右侧涂抹样品的啫喱基质，通过主观对各时间点（0 min、5 min、30min、60 min）评分，评价其舒缓效果。
评分标准：按3分法进行评分(0分为无刺痛、无瘙痒及无发红症状等症状，1分为有轻微刺痛、轻微瘙痒但无发红症状，2分为有较强的刺痛感、瘙痒感可耐受，伴随轻微发红症状，3分为强烈的刺痛感、强的瘙痒及较明显的发红症状)。
评价结果见图6。由图6可知，本发明厚朴花提取物可快速、显著地缓解乳酸刺激引起的不良反应，加速肌肤自我修复。

Claims (8)

1.一种厚朴花提取物，其特征在于，所述厚朴花提取物总黄酮含量为1.43-7.33 mg/mL，多酚含量为0.78-3.87 mg/mL，所述厚朴花提取物通过包括下述步骤的方法制备得到：将厚朴花粉碎与水混合后，在温度为105℃～135℃，压力为0.03～0.19 MPa的条件下提取，以质量比计，厚朴花与水的料液比为1:10～1:60。
2.根据权利要求1所述的厚朴花提取物，其特征在于，所述的厚朴花提取温度为110℃～135℃，压力为0.07～0.19 MPa，提取时间为30～120 min。
3.根据权利要求1或2所述的厚朴花提取物，其特征在于，所述厚朴花粉碎过筛与水混合后，加入厚朴花与水总重量0.1wt%-10wt%环糊精后提取。
4.一种厚朴花提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法通过包括下述步骤的方法制备得到：将厚朴花粉碎与水混合后，在温度为105℃～135℃，压力为0.03～0.19 MPa的条件下提取，以质量比计，厚朴花与水的料液比为1:10～1:60；所述制备方法得到的厚朴花提取物总黄酮含量为1.43-7.33 mg/mL，多酚含量为0.78-3.87 mg/mL。
5.一种液体制剂，其特征在于，将权利要求1-3任意一项所述的厚朴花提取物采用大孔树脂纯化分离、浓缩3～5倍，复配5wt%～50wt%液体分散剂和护色剂，得到厚朴花提取物液体制剂；
所述的液体分散剂为甘油、1,3丙二醇、丁二醇、丙二醇、己二醇、戊二醇中的一种或几种；
所述的护色剂为EDTA-2Na、柠檬酸、环糊精、酒石酸、Vc乙基醚中的一种或几种。
6.一种固体制剂，其特征在于，将权利要求1-3任意一项所述的厚朴花提取物采用大孔树脂纯化分离、浓缩3～5倍，复配10wt%～50wt%固体分散剂，真空冷冻干燥得到厚朴花提取物固体制剂；
所述固体分散剂为甘露醇、环糊精、聚乙二醇、麦芽糊精中的一种或几种。
7.权利要求1-3所述厚朴花提取物或权利要求5所述液体制剂或权利要求6所述固体制剂在制备护肤品中的应用。
8.权利要求1-3所述厚朴花提取物或权利要求5所述液体制剂或权利要求6所述固体制剂在制备具有抗炎、舒缓、修护和/或抗刺激功效的护肤品中的应用。
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