CN113444656A - 一种具有抗衰老功能的菌株及其应用 - Google Patents
一种具有抗衰老功能的菌株及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抗衰老功能的菌株,所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X‑1菌株,所述菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏号为GDMCC NO.61197,保藏日期为2020年10月14日。本发明还公开了该菌株在动物机体抗衰老中的应用。本发明该菌株具有增强动物机体的肌肉力量、认知学习能力、生殖能力以及抗氧化能力的功能,能够用于动物机体抗衰老中。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,特别是涉及一种具有抗衰老功能的菌株及其应用。
背景技术
衰老被认为是机体各个组织功能的弱化和对环境的适应能力下降的现象,这是一个相当复杂的生物过程,其调控机制尚不清楚。研究认为衰老是单个基因或免疫系统的衰落,多个过程在许多层面上结合并相互作用,这些过程不仅发生在细胞和分子水平,而且还发生在组织和器官系统上。
衰老最显著的表型之一是骨骼肌力量的下降,这种现象发生在所有的衰老个体中,并导致下肢功能障碍和行动能力丧失。肌力下降的幅度大于肌肉质量下降的幅度,说明随着年龄的增长,每单位肌肉质量的收缩能力逐渐降低,可能是由于衰老引发人体骨骼肌中剪接体、免疫调控、蛋白质稳态和线粒体改变,从而导致肌肉收缩能力下降。郭豫等研究表明,衰老可分为生理性衰老和病理性衰老,生理性衰老是指成熟期后出现的生理性退化过程,而病理性衰老是由于各种外来因素(包括各种疾病)所导致的老年性变化。在生理性衰老过程中人们会产生睡眠,认知,社会活动等方面的障碍,而学习记忆能力减退是大脑老化认知功能障碍的表现之一,这与大脑海马区功能基因密切相关。此外,生殖能力的减弱也是衰老的明显特征之一,蔡奇琴等研究发现,随着机体的衰老,生殖相关激素(睾酮、性腺激素、孕酮等) 分泌都有降低的表型,这表明机体正在感应着衰老的应激。
目前延缓衰老的方式有多种,主要有运动训练、营养物质(保健品)调控、药物治疗等。有研究发现,长期有氧运动可有效增加心肌细胞供氧能力和骨骼肌细胞的代谢,同时,耐力训练明显增加大鼠心肌细胞SOD活性,降低心肌细胞凋亡。目前用于抗衰老的药物(诸如二甲双胍等)副作用尚未确认,而运动训练难以在老龄人阶段实现。
近年来,肠道微生物菌群代谢研究突飞猛进,肠道微生物群是一个庞大的生态系统,其为宿主发育、免疫系统和新陈代谢提供了许多功能。肠道微生物群与许多疾病有关,包括人类代谢疾病,如肥胖、2型糖尿病(T2D)、肠道易激综合征和心血管疾病(CVD)。然而,很少有研究指出衰老与微生物群之间的关系,我们研究发现,从小鼠肠道分离出来的微生物菌乳杆菌(34-10B)在抗衰老方面作用显著,这为微生物调控衰老提供了研究基础。
发明内容
本发明的目的之一在于克服上述现有技术中延缓衰老的方式存在副作用或者老龄人难以实现的缺陷,提供一种具有抗衰老的乳杆菌。
一种具有抗衰老功能的菌株,所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1 菌株,所述菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏号为GDMCCNO.61197,保藏日期为2020年10月14日,保藏地址为:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
进一步的,所述菌株在普通培养基上培养3天后观察,其单菌落为乳白色、不透明,表面粗糙有褶皱,为革兰氏阳性短小杆菌。
进一步的,所述普通培养基为:酪蛋白酶消化物10.0g、牛肉膏粉10.0g、酵母膏粉4.0g、柠檬酸三铵2.0g、乙酸钠5.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、磷酸二氢钾2.0g、葡萄糖20.0g、吐温-801.0g、琼脂15g,定容到1000mL,调pH为5.7。
进一步的,所述菌株在pH为5.7的MRS发酵培养液中,37℃培养条件下厌氧培养1天,发酵液混浊均一。
本发明的另一目的在于提供所述的具有抗衰老功能的菌株在动物机体抗衰老中的应用。
进一步的,所述具有抗衰老功能的菌株应用于增加动物机体的肌肉力量中。
进一步的,所述具有抗衰老功能的菌株应用于增强动物机体的认知学习能力。
进一步的,所述具有抗衰老功能的菌株应用于增强动物机体的生殖能力。
进一步的,所述具有抗衰老功能的菌株应用于增强动物机体的抗氧化能力。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明从小鼠肠道分离培养后经常规稀释平板法分离得到具有抗衰老功能的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株,该菌株具有增强动物机体的肌肉力量、认知学习能力、生殖能力以及抗氧化能力的功能,能够用于动物机体抗衰老中。
附图说明
利用附图对发明作进一步说明,但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制,对于本领域的普通技术人员,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据以下附图获得其它的附图。
图1是本发明的具有抗衰老功能的菌株在普通培养基上培养3天后观察的菌样图;
图2为本发明的具有抗衰老功能的菌株在普通培养基上培养3天后观察的革兰氏镜检图;
图3为本发明的具有抗衰老功能的菌株对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌图;
图4为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水中对小鼠生存率的影响;
图5为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠生长性能的影响;
图6为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠肌肉力量的影响;
图7为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠学习能力的影响;
图8为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠生殖能力的影响;
图9为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对繁育猪生殖能力的影响;
图10为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠血清和小肠中自由基含量的影响;
图11为本发明的具有抗衰老功能的菌株加入饮水对老年鼠抗氧化酶活性的影响;
具体实施方式
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
一种具有抗衰老功能的菌株,所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1 菌株,所述菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏号为GDMCCNO.61197,保藏日期为2020年10月14日,保藏地址为:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株于2018年9月从小鼠肠道分离培养后经常规稀释平板法分离得到。
所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株在普通培养基上培养3天后观察,其单菌落为乳白色、不透明,表面粗糙有褶皱的菌样,如附图1所示;革兰氏镜检为革兰氏阳性短小杆菌,如附图2所示。所述普通培养基的配方为:酪蛋白酶消化物10.0g、牛肉膏粉 10.0g、酵母膏粉4.0g、柠檬酸三铵2.0g、乙酸钠5.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、磷酸二氢钾2.0g、葡萄糖20.0g、吐温-801.0g、琼脂15g,定容到1000mL,调pH为5.7。
所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株在pH为5.7的MRS发酵培养液中,37℃培养条件下厌氧培养1天,发酵液混浊均一。所测得16S rRNA序列,共700个有效碱基,与GenBank基因库中原核生物的16S rRNA序列进行比较,调出与其序列同源性较菌株的16S rRNA序列。比对相似性99%以上的菌株均为Bacillus velezensis,结合形态及分子生物学特征鉴定菌株为Bacillus velezensis。
对所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株进行生理生化特征检测:能分解利用葡萄糖、蔗糖;水解明胶;采用液体发酵法测定该菌株代谢产物的抑菌活性。将培养于MRS培养基的菌株SG.X-1接种于种子培养基中,于37℃条件下厌氧培养5d。收集发酵液,12000rpm/min离心10min,获取上清液,并用细菌滤器过滤备用。将沙门氏菌和金黄色葡萄球菌接种于含LB琼脂平板上,打孔,分别加入上清液。培养1天后观察药敏实验结果。经测定对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为9mm和10mm,如附图3所示;参照《抗菌药物药效试验判定标准》,可判定所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1菌株对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均低度敏感。
实施例1饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对小鼠生存率的影响
试验以6周龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL),每个月测定存活小鼠数量。结果如附图4所示,由附图4可表明:饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1显著增加小鼠生存率。
实施例2饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对老年鼠生长性能的影响
试验以24月龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后测定小鼠生长性能指标,结果表明,饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1后小鼠体重显著增加,如图5A;采食量无影响,如图5B。同时,结果发现,小鼠体重的增加主要是肌肉的增加,如图5C;对脂肪无显著影响,如图5D。这表明饮水添加贝莱斯芽孢杆菌 (Bacillus velezensis)SG.X-1很可能增加了小鼠的肌肉力量。
实施例3饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对老年鼠肌肉力量的影响
试验以24月龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,处理组饮水添加添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后测定小鼠肌肉力量指标,结果表明,饮水添加添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1 显著增加小鼠悬挂时间(如图6A)、爪抓力(如图6B)、快跑时间(如图6C)和慢跑时间 (如图6D),表明贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1增加了肌肉力量。
实施例4饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对老年鼠学习能力的影响
试验以24月龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后测定小鼠学习认知能力的指标,结果表明,饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1 显著增加小鼠新物体探索距离(如图7A)、时间(如图7B)、次数(如图7C)和海马区记忆相关基因(GR/MR/NCAM)的表达(如图7D),表明贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis) SG.X-1增加了小鼠学习认知能力。
实施例5饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对老年鼠生殖能力的影响
试验以24月龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后测定小鼠学习认知能力的指标,结果表明,饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1 显著降低了小鼠曲细精管空腔面积(如图8A)、增加了精子总数(如图8B)、降低了精子畸形率(如图8C),表明饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1增加了小鼠生殖能力。
实施例6饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对种公猪生殖能力的影响
试验以种公猪为模型,分成两组,对照组正常饮水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为1x108 CFU/mL)。11周后测定种公猪生殖能力的指标,结果表明,饲喂贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1显著增加了精子总数(如图9A)、精子密度(如图9B)、活力精子数(如图9C),并显著降低了精子畸形率(如图9D),表明添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1增加了种公猪生殖能力。
以上实施例结果表明贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1有效提高了动物机体肌肉力量、学习能力、生存率和生殖能力,进一步表明贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis) SG.X-1增强了机体抗衰老的作用。
实施例7饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对小鼠自由基含量的影响
试验以6周龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后采样,取血清和小肠,测定自由基和丙二醛含量。图10试验结果表明饮水添贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1显著降低小鼠血清和小肠中自由基(图10A、图10B)和丙二醛含量(图 10C),表明该菌株可有效增强抗氧化能力。
实施例8饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1对小鼠抗氧化酶活性的影响
试验以6周龄C57BL6/J小鼠为模型,分成两组,对照组饮水添加生理盐水,实验组饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1(浓度为5x105 CFU/mL)。11周后采样,取小肠,测定抗氧化酶活性。图11试验结果表明饮水添加贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis) SG.X-1显著增加小鼠小肠中超氧化物歧化酶SOD活性(图11A)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)活性(图11B),进一步表明该贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)SG.X-1可有效增强动物机体抗氧化能力,增强肠道健康,延缓衰老。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种具有抗衰老功能的菌株,其特征在于:所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)SG.X-1菌株,所述菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏号为GDMCCNO.61197,保藏日期为2020年10月14日。
2.如权利要求1所述的具有抗衰老功能的菌株,其特征在于,具有以下生物学特征:在普通培养基上培养3天后观察,其单菌落为乳白色、不透明,表面粗糙有褶皱,为革兰氏阳性短小杆菌。
3.如权利要求2所述的具有抗衰老功能的菌株,其特征在于,所述普通培养基为:酪蛋白酶消化物10.0g、牛肉膏粉10.0g、酵母膏粉4.0g、柠檬酸三铵2.0g、乙酸钠5.0g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、磷酸二氢钾2.0g、葡萄糖20.0g、吐温-801.0g、琼脂15g,定容到1000mL,调pH为5.7。
4.如权利要求1所述的具有抗衰老功能的菌株,其特征在于,所述菌株在pH为5.7的MRS发酵培养液中,37℃培养条件下厌氧培养1天,发酵液混浊均一。
5.权利要求1至4任意一项所述的具有抗衰老功能的菌株在动物机体抗衰老中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于:应用于增加动物机体的肌肉力量中。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于:应用于增强动物机体的认知学习能力。
8.如权利要求5所述的应用,其特征在于:应用于增强动物机体的生殖能力。
9.如权利要求5所述的应用,其特征在于:应用于增强动物机体的抗氧化能力。
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