CN113433246A - 一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，属于分析检测技术领域。本发明公开了一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，采用气相色谱对甘油缩甲醛进行定性分析和采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，能够准确、灵敏、简便、快速地测试甘油缩甲醛的含量，填补了现行甘油缩甲醛质量标准中“含量测定”项的空缺，便于应用甘油缩甲醛制备出更加安全、有效的相关药物制剂。

Description

一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，涉及一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法。

背景技术

甘油缩甲醛(Glycerolformal)是甘油与甲醛缩合反应的产物(由一定量的甘油及甲醛在脱水剂、催化剂作用下进行缩合反应后再精制而成)，是一种无色透明的液体。甘油缩甲醛是一种常用的医药及兽药辅料，是甘油、丙二醇及吡咯烷酮类的替代物。甘油缩甲醛作为溶剂可以任意比例和丙二醇、水、甘油、乙醚、丙酮、精炼油、乙醇等溶剂相溶，是美国公司伊维菌素注射液的专用溶媒。由于甘油缩甲醛几乎没有毒性，不会产生副作用，没有强烈的疼痛感，所以以甘油缩甲醛作为溶剂来配制药物溶液在我国的医药尤其是兽药行业非常受欢迎。例如，甘油缩甲醛可用于阿昔洛韦、尼美舒利、地塞米松、扑热息痛、阿夫哇嗓、麦角碱类、磺胺类、毗哇酮类、沙星类、地克珠利、硫代氟苯毗哇、氯氰碘柳胺、阿维菌素、长效土霉素、氟苯尼考、异烟肼解毒剂等注射液或溶液剂的配制，也被广泛应用在装饰涂料、化妆品、杀虫剂和打印油墨等领域。

甘油缩甲醛作为医药或兽药的助溶剂及稳定剂，可以提高药物的稳定性。以前，许多药物注射液(如土霉素注射液)的稳定性非常差，室温下效价或含量会下降很快，色泽也会发生比较大的变化，整体品质与质量难以得到保证。采用甘油缩甲醛作为助溶剂的处方，其稳定性得到了极大的改善，效价及颜色均可维持较长时间；另外，由于甘油缩甲醛作为溶剂本身的粘度极低，在粘度方面几乎近似于水。因此，以甘油缩甲醛作为溶剂而配制的各种药物溶液的粘度会大大降低，解决了工业生产过程中药物溶液粘度大、过滤困难等多种难题；并且该类药物溶液因粘度低，肌内注射推针时比用其它有机溶剂配制的注射液更为轻松；同时，由于甘油缩甲醛在注射剂方面的广泛应用，使药物溶液在肌注部位扩散快、吸收好，减少了药物在局部残留以及引起局部疼痛、红肿、溃烂等。

但是，对于这样一个优良的、广泛使用的辅料——甘油缩甲醛，现行版的美国药典、英国药典、日本药典、中国药典、中国兽药典和国家药品监督管理局药品评审中心常用辅料数据库等，均未收载甘油缩甲醛质量标准。目前，国外仅欧洲药典收载了甘油缩甲醛质量标准，但无甘油缩甲醛含量测定项。查阅文献，有学者采用高效液相色谱法测定甘油缩甲醛的两种成分(甘油和甲醛)，也有学者采用分光光度法测定甘油缩甲醛中游离甲醛含量，但均未见以外标法采用气相色谱仪测定甘油缩甲醛含量的方法。

因此，有必要研究一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量，以填补欧洲药典所载甘油缩甲醛质量标准中“含量测定”项空缺，并以更高标准控制甘油缩甲醛质量，以便制备出更加安全、有效的相关药物制剂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，所述方法包括采用气相色谱法对甘油缩甲醛供试品进行定性分析和采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析。

优选的，所述采用气相色谱法对甘油缩甲醛进行定性分析具体方法为：

精密量取甘油缩甲醛供试品溶液和对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪中，进行气相色谱检测，分别得到甘油缩甲醛供试品色谱图和甘油缩甲醛对照品色谱图，在色谱图中供试品溶液主峰的保留时间如与对照品溶液主峰的保留时间一致，即可定性供试品溶液中含有甘油缩甲醛。

进一步优选的，所述甘油缩甲醛供试品溶液按照如下方法制备：

(1)制备甘油缩甲醛供试品储备液：精密称取甘油缩甲醛供试品，置于容量瓶中，加入甲醇，混合均匀后定容得到甘油缩甲醛供试品储备液，所述甘油缩甲醛供试品与甲醇的质量体积比为10:1，g:L；

(2)制备甘油缩甲醛供试品溶液：将步骤(1)中制备的甘油缩甲醛供试品储备液取出后加入等体积的甲醇进行稀释即可。

进一步优选的，所述对照品溶液按照如下方法制备：

(1)制备对照品储备液：精密称取甘油缩甲醛对照品，置于容量瓶中，加入甲醇，混合均匀后定容得到甘油缩甲醛对照品储备液，所述甘油缩甲醛与甲醇的质量体积比为10:1，g:L；

(2)制备对照品溶液：将步骤(1)中制备的对照品储备液取出后加入等体积的甲醇进行稀释即可。

进一步优选的，所述气相色谱检测过程中的参数设置如下：色谱柱为RTX-1毛细管柱的规格为0.25μm×0.20mm×30m、检测器为FID，温度为265～275℃。

优选的，所述气相色谱检测过程中进样口的工作温度为270～280℃。

进一步优选的，所述进样口处的升温流程为：将气相色谱仪的起始温度设置并升温为65～70℃，保留1min；然后以20℃/min的速度升温至240℃，保留3min；再以10℃/min的速度升温至270～280℃。

进一步优选的，所述气相色谱仪中理论塔板数不低于5000，保证得到的色谱图中甘油缩甲醛峰与相邻杂质峰的分离度大于等于1.5。

进一步优选的，所述采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，具体为：通过所述气相色谱法测试得到供试品溶液和对照品溶液色谱图，得到各自色谱图主峰的面积，根据公式Cx/Cr＝Ax/Ar和甘油缩甲醛含量＝Cx÷Cr×100％，计算供试品中甘油缩甲醛的含量；

其中Cx为供试品溶液浓度，Cr为对照品溶液浓度，Ax为供试品溶液色谱图的主峰面积，Ar为对照品溶液色谱图的主峰面积。

本发明的有益效果在于：

本发明公开了一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，采用气相色谱对甘油缩甲醛进行定性分析和采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，能够准确、灵敏、简便、快速地测试甘油缩甲醛的含量，填补了现行甘油缩甲醛质量标准中“含量测定”项的空缺，便于应用甘油缩甲醛制备出更加安全、有效的相关药物制剂。

本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作优选的详细描述，其中：

图1为实施例1中批号为2019082203的甘油缩甲醛供试品溶液的色谱图；

图2为实施例1中甘油缩甲醛对照品溶液的色谱图；

图3为实施例2中甲醛定位溶液的色谱图；

图4为实施例2中甘油定位溶液的色谱图；

图5为实施例2中混合试液的色谱图；

图6为实施例1中线性试验液的标准曲线，甘油缩甲醛对照品溶液色谱图的主峰面积为纵坐标、甘油缩甲醛对照品的浓度为横坐标。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需要说明的是，以下实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。

实施例1

气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量，具体方法如下：

(1)准备样品与仪器：

甘油缩甲醛供试品由成都市科隆化学品有限公司提供，AR级，批号分别为2019082203和2020042303；

甘油缩甲醛对照品由上海阿拉丁生化科技股份有限公司提供，批号G141045，含量为98.1％。

梅特勒ESJ60-4电子天平、岛津GC-2030高效气相色谱仪。

(2)配制甘油缩甲醛供试品溶液：

a、精密称取甘油缩甲醛供试品500mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇振摇使混匀，定容至刻度，作为甘油缩甲醛供试品储备液；

b、精密量取甘油缩甲醛供试品储备液2.5mL，移至5mL的容量瓶中，加甲醇振摇使混匀，定容至刻度，作为甘油缩甲醛供试品溶液。

(3)配制甘油缩甲醛对照品溶液：

a、精密称取甘油缩甲醛对照品500mg，置于50mL量瓶中，加甲醇振摇使混匀，定容至刻度，作为甘油缩甲醛对照品储备液；

b、精密量取甘油缩甲醛对照品储备液2.5mL，移至5mL的容量瓶中，加甲醇振摇使混匀，定容至刻度，作为甘油缩甲醛对照品溶液。

(4)采用气相色谱对甘油缩甲醛进行定性分析，具体方法为：

精密量取甘油缩甲醛供试品溶液和对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪中，进行气相色谱检测，得到色谱图；

其中气相色谱检测过程中的参数设置如下：色谱柱为RTX-1毛细管柱的规格为0.25μm×0.20mm×30m、检测器为FID，温度为265～275℃；

气相色谱检测过程中进样口的工作温度为270～280℃，进样口处的升温流程为：将气相色谱仪的起始温度设置并升温为70℃，保留1min，然后以20℃/min的速度升温至240℃，保留3min，再以10℃/min的速度升温至270～280℃；

气相色谱仪中理论塔板数不低于5000，保证得到的色谱图中甘油缩甲醛峰与相邻杂质峰的分离度大于等于1.5。

(5)采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，具体方法为：

采用气相色谱法对甘油缩甲醛供试品溶液和对照品溶液进行分析。待分析结束后，启动LabSolutions工作站，按顺序点击工作站的【处理工具】、【再解析】、【数据】，找到【结果视图—峰表】，记录甘油缩甲醛供试品溶液和对照品溶液色谱图的主峰面积，实际测得批号为2019082203和2020042303的两批甘油缩甲醛供试品溶液的主峰面积分别为945807、893227，甘油缩甲醛对照品溶液的主峰面积为951229，配制甘油缩甲醛对照品溶液的浓度为5mg/mL，代入Cx/Cr＝Ax/Ar和供试品含量＝Cx÷Cr×100％的公式计算批号为2019082203甘油缩甲醛含量：

Cx＝5×945807÷951229＝4.9715mg/mL；

甘油缩甲醛含量＝＝4.9715÷5×100％＝99.43％

同样的方法计算批号为2020042303的甘油缩甲醛供试品中甘油缩甲醛含量为99.09％。

实施例2

气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法学验证：

1、系统适用性

按照实施例1中步骤(2)的方法，将甘油缩甲醛供试品分别替换成甘油、甲醛得到甘油储备液和甲醛储备液；

按照实施例1中步骤(3)的方法，将甘油缩甲醛供试品分别替换成甘油、甲醛得到甘油定位溶液和甲醛定位溶液；

混合试液：精密量取实施例1中制备的甘油缩甲醛储备液2.5mL、甘油储备液0.5mL和甲醛储备液0.5mL，移液至5mL容量瓶中，加甲醇振摇使混匀，定容至刻度，作为混合试液；

精密量取实施例1步骤(2)中甘油缩甲醛供试品溶液、步骤(3)中甘油缩甲醛对照品溶液、甘油定位溶液、甲醛定位溶液和混合试液各1μL注入气相色谱仪，进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图；

另精密量取实施例1中步骤(2)中配制的甘油缩甲醛供试品溶液1μL注入气相色谱仪，连续进样6次，进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，计算主峰面积的相对标准偏差(RSD)。

图1为实施例1中批号为2019082203的甘油缩甲醛供试品溶液的色谱图，图2为实施例1中甘油缩甲醛对照品溶液的色谱图，图3为实施例2中甲醛定位溶液的色谱图，图4为实施例2中甘油定位溶液的色谱图，图5为实施例2中混合试液的色谱图。

甲醇(溶剂)、甲醛、甘油对甘油缩甲醛含量测定均无干扰，甘油缩甲醛理论塔板数大于5000，主峰与相邻杂质峰的分离度远大于1.5；甘油缩甲醛供试品溶液连续进样6次，其峰面积的RSD小于2.0％(如表1所示)。甲醛峰与甲醇(溶剂)峰部分重叠，但不影响甘油缩甲醛含量测定。图1～图5的色谱图对比可知，在在本发明的色谱条件下，气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的系统专属性良好。

表1甘油缩甲醛供试品溶液重复进样6次的RSD

色谱图编号	1	2	3	4	5	6	RSD(％)
								主峰面积	1061868	1079064	1054490	1058661	1046268	1059204	1.02

2、准确度

在甲醇(溶剂)中添加甘油缩甲醛适量，制成不同浓度的甘油缩甲醛溶液，再按“气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量”方法测定其含量并计算回收率。具体方法为：

(1)在甲醇中添加甘油缩甲醛对照品适量，制成4mg/mL、5mg/mL和6mg/mL的甘油缩甲醛溶液，精密量取这3个浓度的甘油缩甲醛溶液各1μL，注入气相色谱仪进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图，按外标法计算甘油缩甲醛含量。每个浓度的溶液连续进样3次，计算平均回收率和RSD，其结果如表2所示。

从表2可以看出，甘油缩甲醛3个浓度的加样回收率均在96％以上，总平均回收率为99.94％，RSD为2.12％，表明本发明采用的气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的准确度良好。

表2甘油缩甲醛准确度试验结果

3、精密度

(1)重复性

按照实施例1中“气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量”的方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液1μL注入气相色谱仪，连续进样6次，进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图，计算主峰面积的RSD，结果如表3所示。

从表3可以看出，气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的重复性试验所得RSD均小于3％，说明本发明采用的气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的重复性良好。

表3甘油缩甲醛重复性试验结果

进样编号	1	2	3	4	5	6	RSD(％)
								主峰面积	1031351	1004792	988259	1016868	970305	986717	2.23

(2)中间精密度

由两名分析人员操作，按照实施例1中“气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量”的方法分别制备供试品溶液各1份，然后各精密量取供试品溶液1μL注入气相色谱仪，连续进样6次，进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图，计算主峰面积的RSD，结果如表4所示。

从表3可以看出，气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的中间精密度试验所得RSD均低于6％，说明本发明采用的气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的中间精密度良好。

表4甘油缩甲醛中间精密度试验结果

4、线性与范围

分别精密称取甘油缩甲醛对照品12.5mg、20mg、25mg、30mg和40mg，置于5mL容量瓶中，加甲醇振动混合均匀，定容至刻度，制得1～5号线性试验液。分别精密量取1～5号线性试验液各1μL，注入气相色谱仪，进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图，以该甘油缩甲醛对照品色谱图的主峰面积为纵坐标、相应浓度为横坐标得到标准曲线(如图6所示)和线性实验结果(如表5所示)，计算线性回归方程为y＝194161x-34805，R²＝0.9973。

从图6和表5的结果可以看出，发明采用的气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量时甘油缩甲醛在2.5～8.0mg/mL浓度范围内线性关系良好。

表5甘油缩甲醛线性试验结果

溶液编号	甘油缩甲醛线性水平	甘油缩甲醛浓度(mg/mL)	主峰面积
				1	50％	2.5	428673
2	80％	4	749743
				3	100％	5	951269
4	120％	6	1151740
				5	160％	8	1495654

5、供试品溶液的稳定性

按照实施例1中“气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量”的方法制备供试品溶液，将供试品溶液在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、16h和24h，于每个时间点精密量取供试品溶液1μL注入气相色谱仪进行气相色谱检测(检测过程的条件与方法与实施例1中相同)，记录色谱图，得到放置不同时间的甘油缩甲醛供试品溶液的色谱图主峰面积(如表6所示)。

从表6可以看出，甘油缩甲醛供试品溶液在室温下放置0～24小时，甘油缩甲醛供试品色谱图的主峰面积的RSD均小于2.0％。表明本发明采用的气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量中甘油缩甲醛供试品溶液在室温下放置24小时也具有良好的稳定性。

表6甘油缩甲醛供试品溶液在室温下放置24h内的色谱图主峰面积变化

实施例3

采用本发明“气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量”的色谱条件和测定方法，对同一生产厂家2批AR级甘油缩甲醛(批号为2019082203、2020042303，规格为500mL)进行含量测定，结果如表7所示。

从表7可以看出，同一生产厂家的两批AR级甘油缩甲醛的含量分别为99.43％、99.09％，与其标签标示范围相符，间接表明本发明的甘油缩甲醛含量测定方法可行。

表7两批市售甘油缩甲醛含量测定结果

在本发明的测定甘油缩甲醛含量的方法中，气相色谱检测过程中的温度可以在265～275℃之间、进样口的工作温度可以在270～280℃之间，温度在上述范围内变化不影响最终甘油缩甲醛的测试结果。

综上所述，本发明公开了一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，采用气相色谱对甘油缩甲醛进行定性分析和采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，能够准确、灵敏、简便、快速地测试甘油缩甲醛的含量，填补了现行甘油缩甲醛质量标准中“含量测定”项的空缺，便于应用甘油缩甲醛制备出更加安全、有效的相关药物制剂。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (9)

1.一种气相色谱外标法测定甘油缩甲醛含量的方法，其特征在于，所述方法包括采用气相色谱法对甘油缩甲醛供试品进行定性分析和采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用气相色谱法对甘油缩甲醛进行定性分析具体方法为：

精密量取甘油缩甲醛供试品溶液和对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪中，进行气相色谱检测，分别得到甘油缩甲醛供试品色谱图和甘油缩甲醛对照品色谱图，在色谱图中供试品溶液主峰的保留时间如与对照品溶液主峰的保留时间一致，即可定性供试品溶液中含有甘油缩甲醛。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述甘油缩甲醛供试品溶液按照如下方法制备：

(1)制备甘油缩甲醛供试品储备液：精密称取甘油缩甲醛供试品，置于容量瓶中，加入甲醇，混合均匀后定容得到甘油缩甲醛供试品储备液，所述甘油缩甲醛供试品与甲醇的质量体积比为10:1，g:L；

(2)制备甘油缩甲醛供试品溶液：将步骤(1)中制备的甘油缩甲醛供试品储备液取出后加入等体积的甲醇进行稀释即可。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液按照如下方法制备：

(1)制备对照品储备液：精密称取甘油缩甲醛对照品，置于容量瓶中，加入甲醇，混合均匀后定容得到甘油缩甲醛对照品储备液，所述甘油缩甲醛与甲醇的质量体积比为10:1，g:L；

(2)制备对照品溶液：将步骤(1)中制备的对照品储备液取出后加入等体积的甲醇进行稀释即可。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述气相色谱检测过程中的参数设置如下：色谱柱为RTX-1毛细管柱的规格为0.25μm×0.20mm×30m、检测器为FID，温度为265～275℃。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱检测过程中进样口的工作温度为270～280℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述进样口处的升温流程为：将气相色谱仪的起始温度设置并升温为65～70℃，保留1min；然后以20℃/min的速度升温至240℃，保留3min；再以10℃/min的速度升温至270～280℃。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述气相色谱仪中理论塔板数不低于5000，保证得到的色谱图中甘油缩甲醛峰与相邻杂质峰的分离度大于等于1.5。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述采用外标法对甘油缩甲醛进行定量分析，具体为：通过所述气相色谱法测试得到供试品溶液和对照品溶液色谱图，得到各自色谱图的主峰面积，根据公式Cx/Cr＝Ax/Ar和甘油缩甲醛含量＝Cx÷Cr×100％，计算供试品中甘油缩甲醛的含量；

其中Cx为供试品溶液浓度，Cr为对照品溶液浓度，Ax为供试品溶液色谱图的主峰面积，Ar为对照品溶液色谱图的主峰面积。

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