CN113419001A - 一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 - Google Patents
一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113419001A CN113419001A CN202110670906.4A CN202110670906A CN113419001A CN 113419001 A CN113419001 A CN 113419001A CN 202110670906 A CN202110670906 A CN 202110670906A CN 113419001 A CN113419001 A CN 113419001A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- biological sample
- limaprost
- water
- swath
- analysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- OJZYRQPMEIEQFC-UAWLTFRCSA-N limaprost Chemical compound CCCC[C@H](C)C[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCC\C=C\C(O)=O OJZYRQPMEIEQFC-UAWLTFRCSA-N 0.000 title claims abstract description 72
- 229950009365 limaprost Drugs 0.000 title claims abstract description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 title claims abstract description 51
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010846 tandem mass spectrometry analysis Methods 0.000 claims abstract description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 29
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 22
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 claims description 17
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 16
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 14
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 14
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 13
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 9
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 8
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 8
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N (8R,11R,12R,13E,15S)-11,15-Dihydroxy-9-oxo-13-prostenoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N (E,Z)-(1R,2R,3R,5S)-7-(3,5-Dihydroxy-2-((3S)-(3-hydroxy-1-octenyl))cyclopentyl)-5-heptenoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)C=C[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1CC=CCCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000711 alprostadil Drugs 0.000 claims description 7
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 6
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims description 6
- 229940122204 Cyclooxygenase inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 5
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 5
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 claims description 4
- 210000000692 cap cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 30
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004907 flux Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 abstract 1
- 238000001871 ion mobility spectroscopy Methods 0.000 abstract 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 36
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 9
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 4
- 239000013062 quality control Sample Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 206010025005 lumbar spinal stenosis Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- AURWGUVCKQSRJX-UYCJUBBXSA-N prorenal Chemical compound CCCC[C@H](C)C[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCC\C=C/C(O)=O.OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO AURWGUVCKQSRJX-UYCJUBBXSA-N 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 208000005198 spinal stenosis Diseases 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001323 two-dimensional chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005109 two-dimensional liquid chromatography tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 208000033386 Buerger disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 206010043540 Thromboangiitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003165 prostaglandin E1 derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940127293 prostanoid Drugs 0.000 description 1
- 150000003814 prostanoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012284 sample analysis method Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000008539 xiaoyao Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
- G01N30/8631—Peaks
- G01N30/8634—Peak quality criteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/045—Standards internal
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Quality & Reliability (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，采用超高效液相色谱‑差分离子淌度‑四级杆飞行时间高分辨串联质谱分析技术，以m/z 379.2484→299.2380Da作为特征定量离子对，检测限可降低到0.05pg/mL，满足精准分析生物样品中利马前列素要求。通过色谱、差分离子淌度和高分辨质谱三维度分离分析相结合的策略，可降低对液相色谱分离度的要求，缩短了分析时间，提高分析通量。优选连续可变窗口采集技术，设定2Da的窗口跨度，同时采集目标物的一级和二级质谱数据，并结合高分辨率质谱的选择性可进一步提高检测的准确性和选择性，有效避免基质中内源物干扰，减少必需萃取次数，缩短样品处理时间。
Description
技术领域
本发明属于药物分析研究技术领域，涉及测定诸如血浆、组织液、尿液等生物样品中利马前列素的定量分析方法。
背景技术
利马前列素(Limaprost)是人工合成的一种前列腺素E1类似物，由日本小野药品工业公司与大日本制药公司合作研发，1988年分别以商品名OPALMON及PRORENAL上市，其名称为(E)-7-[(1R,2R,3R)-3-羟基-2-[(3S,5S)-(E)-3-羟基-5-甲基-1-壬烯基-5-氧代环戊基]-2-庚酸，分子式C22H36O5，分子量380.5Da。
由于消化酶的破坏，传统的前列腺素类药物易被分解代谢，一般口服无效，而利马前列素口服后可以发挥药理作用，提高了其临床的适应性，是最早用于循环系统的口服前列腺素类药物。临床应用的利马前列素剂型为利马前列素阿尔法环糊精片，用于血栓闭塞性脉管炎引发的各种缺血性症状，例如溃疡、疼痛以及后天性腰椎管狭窄症伴有的下肢疼痛和麻木等主观症状的治疗。
利马前列素临床使用剂量极低，用于后天性腰椎管狭窄症的给药剂量为5μg，达峰浓度(Cmax)仅为2.56pg/mL，这要求利马前列素的定量下限至少达到0.1～0.2pg/mL。同时，体内存在数十倍于利马前列素达峰浓度的内源性化学背景干扰，这是该药物体内分析面临的“瓶颈”问题。
已报道的生物样品中前列腺素类分析方法包括放射标记法、酶联免疫法、色谱-质谱法。其中，放射标记法不能用于人体的药代动力学研究，酶联免疫法选择性较差，难以区分利马前列素与血浆中大量的内源性干扰，气相色谱-质谱法(GC-MS)则需要复杂的衍生化过程。基于多反应监测(MRM)的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)是体内药物分析的首选，但该方法测定血浆中利马前列素的最低定量浓度(LLOQ)仅为0.5pg/mL。目前，能满足利马前列素药代动力学LLOQ的分析方法是二维液相色谱-串联质谱法(2D-LC-MS/MS)。该方法的问题在于：(1)为了降低生物样品的极强的背景干扰，样品处理过程采用了极为复杂的三步固相萃取。为了提高分析方法在生物样品中的选择性，质谱检测器的MRM则是监测了特异性相对较强而信号较弱的反应离子对(m/z 379→233Da)，即便如此，血浆中内源性的干扰仍极强。为此，该方法的色谱分离不得不采用二维色谱进行分离，致使每个样品的分析时间长达50分钟，无法满足本品生物等效性(BE)试验数以千计样本量的分析需求；(2)采用常规的进样量(10-20μL)，该方法的灵敏度无法达到LLOQ。为了提高分析方法灵敏度，该方法不得不采用100μL的超大进样量。如果进行大样本量的生物分析，色谱柱的耐受性将会受到极大的挑战；因此，亟需发明高选择性、高信噪比、高灵敏度、高通量的样品处理和分析新方法，突破利马前列素体内定量分析的技术瓶颈。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，建立一种选择性好、灵敏度和分析通量高的生物样品中利马前列素的定量方法，对生物样品中的利马前列素进行快速、精准定量分析。本发明的目的是通过以下技术方案实现的。
一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱的三维度分离分析相结合的方法，测定生物样品中的利马前列素；其中，差分离子淌度池加装在质谱的离子源和第一四级杆之间；选定气相裂解反应m/z 379.2484→299.2380Da的高分辨精确质量碎片作为定量离子对，检测限(LOD)可达0.05pg/mL，所述四级杆飞行时间高分辨串联质谱的分辨率不低于40000。
进一步的优选方案为，采用SWATH扫描方式，SWATH Q1扫描范围：378.0→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da。
进一步的，在采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱分析之前先用固相萃取初步去除血浆中内源性物质的干扰。
进一步的，包括A、待测生物样品处理；B、利马前列素标准曲线制备；C、生物样品中利马前列素含量上机测定；
其中A、待测生物样品处理，包括以下步骤：
1)使用环氧合酶抑制剂处理待测定的生物样品；
2)处理过后的生物样品加入抗吸附溶液、内标溶液、水/乙酸混合溶液，涡流混合，离心；
3)离心所得上清液加到已活化的Bond Elut C18固相萃取柱中，依次加纯水、水/甲醇混合溶液淋洗；
4)将Bond Elut C18固相萃取柱吸附物用乙酸乙酯洗脱到已活化的Bond ElutDEA固相萃取柱上，加水/乙酸混合溶液淋洗；
5)将Bond Elut DEA固相萃取柱吸附物用水/甲醇/乙酸混合溶液洗脱,收集洗脱液，40℃氮气流下吹干，残留物加入乙酸铵/乙酸/乙腈混合溶液复溶，涡流混合后，取复溶液进行超高效液相色谱-差分离子淌度-串联质谱检分析。
进一步的，A、待测生物样品处理步骤1)中环氧合酶抑制剂中含有0.1mg/mL的阿司匹林和0.1mg/mL吲哚美辛。
进一步的，A待测生物样品处理步骤2)中处理过后的生物样品置于玻璃抗吸附试管或EP管中，再加入抗吸附溶液、内标溶液、水/乙酸混合溶液；所述抗吸附溶液为PGF2α与PGE1的混合溶液，其中PGF2α含量为100～200ng/mL，PGE1的含量为100～200ng/mL。
进一步的，步骤C测定的色谱条件为：Waters Acquity超高效液相色谱系统；色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，100mm×2.0mm I.D.，5μm粒径；流动相：水相：5％乙腈+95％水(含1mMol醋酸铵+0.02％乙酸)pH值为5±2、有机相：乙腈；梯度洗脱；柱温40±10℃；流速0.3±0.1mL/min；进样量20μL。
进一步的，所述的色谱条件中梯度洗脱程序起始有机相比例为5％，最高有机相比例为95％，且有机相比例从5％升高至95％的速率为22.5％/min。
进一步的，步骤C测定的质谱条件为：Triple TOFTM 6600+型串联质谱仪，配有ESI离子化源、SelexION差分离子淌度系统；负离子方式检测；离子喷射电压-4500±500V；温度400±100℃；源内气体1：氮气压力40±15psi；气体2：氮气压力40±15psi；气帘气体：氮气压力35±10psi；解簇电压：-100±10V；DMS温度：Medium；改性剂：异丙醇；改性剂流速：low；分离电压：3800±400V；补偿电压：-8±2V；DMS分辨率增强：open；扫描方式：SWATH；SWATHQ1扫描范围：378.0Da→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da；高灵敏度模式；碰撞能量为-30±10eV；用于定量的反应离子对：m/z379.2484→299.2380Da。
进一步的，所述的生物样品为血浆、组织液、尿液。
进一步的，所述方法中提取离子m/z 299.2380±0.0002Da。
差分离子淌度(DMS)技术与传统的液相色谱分离技术不同，它是一种根据待测物离子在电场和气流的共同作用下的迁移率不同，而对样品的不同组分实现分离的先进技术。该技术可以部分解决传统LC-MS/MS方法所无法解决的技术难题：如超强噪音干扰、共流出组分分析、同分异构体分离、复杂基质中痕量目标化合物的定量分析。
连续可变窗口采集技术(SWATH)是一种数据非依赖性的质谱采集技术，通过特定一级窗口的选择可以进一步提高分析的选择性和分析方法的灵敏度。本发明首次将DMS技术与高分辨串联质谱数据非依赖性连续可变窗口采集技术进行有效结合，采用三维分离分析策略，用于测定人血浆中利马前列素。
本发明的有益效果：
1)通过色谱与差分离子淌度相结合的分离模式，去除血浆中结构类似物的干扰，该分离模式极大地降低了单独使用液相色谱进行分离的难度，变以往的二维色谱为一维色谱，极大地缩短样品分析时间，每个样品的分析时间仅为10分钟，提高了样品分析的通量，提高了检测的灵敏度，检测限(LOD)可降低到0.05pg/mL
2)再通过连续可变窗口采集技术采用2Da的窗口宽度，同时采集目标物的一级质谱和二级质谱数据可以进一步优化方案，提高灵敏度，降低检测下限。2Da窗口宽度的过滤和高分辨率二级质谱数据(10ppm)的选择进一步提高检测的准确性和选择性，从而有效地避免了生物基质中内源性类似物的超强干扰，并将以往的三步萃取变为两步萃取，大大缩短了样品的处理时间。2Da窗口的选择其检测结果的灵敏度优于1Da，更加优于3、4Da，该参数为本发明的优选。
3)在采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱分析之前，首先通过基于反相机理和离子交换机理的固相萃取初步去除血浆中内源性物质的干扰，有利于缩短检测时间提高检测效果。
下面结合附图和实施例对发明作详细描述。
附图说明
图1是利马前列素典型色谱图；
图2健康受试者口服利马前列素后血浆药物浓度-时间曲线；
图3定量血浆中利马前列素典型标准曲线。
具体实施方式
本实施方式首先通过超高效液相色谱将利马前列素与人血浆中的干扰进行初步分离，然后利用安装在质谱的离子源和第一个四级杆之间安装差分离子淌度池进行进一步的分离，通过优化差分离子淌度池中的分离电压(SV)，温度，改性剂种类及流速，补偿电压(CoV)，分辨率(DR)等参数以达到最强的分离能力，最后利用高分辨串联质谱选择专属性强、响应更高的利马前列素特征碎片离子进行检测，具体流程如图1所示。本实施方式中将DMS和HR-MRM、DMS技术与SWATH结合起来，充分利用了DMS、SWATH、HR-MRM技术降噪的优势，并监测了灵敏度更高的特异性离子反应，从而首次建立了定量人血浆中利马前列素超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱(UPLC-DMS-SWATH-HR MRM)多模式的分离分析方法。该分析方法选择性好、灵敏度高，样品处理简单，分析时间短，完全适用于大批量利马前列素生物样品的分析。
通过在超高效液相色谱和质谱之间加装差分离子淌度池，利用正交于超高效液相色谱分离的差分离子淌度分离技术，增强了去除生物样品中内源干扰物质的能力；利用四级杆飞行时间高分辨串联质谱数据非依赖性连续可变窗口采集技术，2Da窗口宽度的过滤和高分辨率二级质谱数据(10ppm)的选择进一步提高检测的准确性和选择性，最终通过选择性地检测利马前列素的专属性强、高响应灵敏度、精确质量数的特征离子，实现了对利马前列素的精准分析。本发明在质谱的离子源和第一个四级杆之间安装差分离子淌度池，通过差分离子淌度的分离模式和高分辨质谱检测进一步去除血浆中干扰，从而降低了液相色谱的分离难度，变以往二维色谱为一维色谱，极大地缩短样品分析时间，提高了样品分析的通量；通过连续可变窗口采集技术采用2Da的窗口宽度同时采集目标物的一级质谱和二级质谱数据，2Da窗口宽度的过滤和高分辨率二级质谱数据(10ppm)的选择进一步提高了检测的准确性和选择性，从而有效地避免生物基质中内源性类似物的超强干扰，并将以往生物样品的三步萃取变为两步萃取，大大缩短了样品的处理时间。
包括以下测定步骤：
A、待测生物样品处理：
1)取用0.1mg/mL的阿司匹林和吲哚美辛处理过的生物样品3mL；
2)将生物样品置于10mL抗吸附玻璃管中，加入抗吸附溶液(含100ng/mL PGF2α与PGE1)100μL，内标溶液150μL、水/乙酸混合溶液(99:1，v/v)6mL，涡流混合1min，离心5min(3500rpm)；
3)上清液加到已活化的Bond Elut C18固相萃取柱中，加纯水4mL、水/甲醇混合溶液(3:2，v/v)4mL溶液淋洗；
4)再用乙酸乙酯4mL洗脱到已活化的Bond Elut DEA固相萃取柱上，加水/乙酸混合溶液(99:1，v/v)2mL溶液淋洗；
5)再用水/甲醇(3:2，v/v)-1％乙酸4mL洗脱；收集洗脱液，40℃氮气流下吹干，残留物加入5mmol/L乙酸铵-0.1％乙酸/乙腈混合溶液(65:35，v/v)115μL复溶，涡流混合，取20μL进行UPLC-DMS-SWATH-HR MRM分析。
B、利马前列素标准曲线制备：
1)利用空白生物样品将利马前列素储备液分别稀释至0.1、0.25、0.6、1.5、3.0、6.0、15pg/mL；
2)取经过步骤A处理的标准曲线样品20μL进行UPLC-DMS-SWATH-HR MRM分析，记录色谱图，以利马前列素浓度为横坐标，利马前列素峰面积为纵坐标，用加权W＝1/x2最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程，即为标准曲线；
C、处理后生物样品上机测定：
取经由A步骤处理后的待测样品液体，取20μL进行UPLC-DMS-SWATH-HR MRM分析，记录色谱图，将利马前列素面积代入标准曲线，求得利马前列素浓度。
B步骤标准曲线制备及C步骤生物样品中利马前列素含量测定：
色谱条件为：Acquity超高效液相色谱系统；色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，100mm×2.0mm I.D.，5μm粒径；流动相：水相：5％乙腈+95％水(含1mM醋酸铵+0.02％乙酸)pH值为5，有机相：乙腈；梯度洗脱；柱温40℃；流速0.3mL/min；进样量20μL；
质谱条件为：Triple TOFTM6600+型串联质谱仪，配有ESI离子化源、SelexION差分离子淌度系统；负离子方式检测；离子喷射电压-4500±500V；温度400±100℃；源内气体1：氮气压力40±15psi；气体2：氮气压力40±15psi；气帘气体：氮气压力35±10psi；解簇电压：-100±10V；DMS温度：Medium；改性剂：异丙醇；改性剂流速：low；分离电压：3800±400V；补偿电压：-8±2V；DMS分辨率增强：open；扫描方式：SWATH；SWATH Q1扫描范围：378.0Da→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da；高灵敏度模式；碰撞能量为-30±10eV；用于定量的反应离子对：m/z 379.2484→m/z 299.2380。
本发明的利马前列素生物样品定量方法，可以在样品测定期间利用质量控制样品对方法进行验证；所述的质量控制样品，按照如下步骤制备：
1)利用空白生物样品将利马前列素储备液稀释至所需浓度；
2)利马前列素质控样品每浓度取三个样本，根据标准曲线，得出利马前列素浓度，计算质量控制样品准确度。
其中所述的生物样品优选地为血浆、组织液和/或尿液。
采用该方法定量测定血浆中利马前列素时LOD可达到或低于0.05pg/mL，完全可以满足利马前列素药代动力学研究对定量下限0.1pg/mL的要求。
样品前处理过程中优选使用玻璃抗吸附试管，并采用浓度为100～200ng/mL的PGF2α与PGE1混合溶液作为固相萃取过程中的抗吸附试剂。
所述的色谱条件中梯度洗脱程序起始有机相比例为5％，最高有机相比例为95％，且有机相比例从5％升高至95％的速率为22.5％/min时才能在最短的时间内实现对利马前列素与血浆中的干扰物质的分离。
优选地同时达到分离电压(SV)：3800±400V；DMS温度：Medium(中)；改性剂流速：low(低)；DMS分辨率增强(DR)：open(开)的条件使DMS在去除干扰的同时保证高灵敏度，以实现高通量定量测定生物样品中生物样品中利马前列素，LOD可达到或低于0.05pg/mL。
利马前列腺素在血浆中存在系列内源性干扰，严重干扰利马前列素的测定，通过在血液样品采集过程中加入0.1mg/mL的环氧合酶抑制剂阿司匹林和吲哚美辛抑制环氧合酶的活性，可防止系列内源性前列腺素的继续产生，起到降低血浆中前列腺素类干扰的水平的效果。
实施例1
本实施例具体测定了血浆中的利马前列素。
健康受试者空腹口服受试制剂利马前列素片5μg，在给药前0h(给药前30分钟内)和给药后10min、15min、20min、25min、30min、40min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h共13个时间点采集静脉血，每次取血14mL(共2管)，缓慢置于经肝素钠处理的抗吸附试管中，采用4℃离心机，1800g，离心5min。离心后，将血浆转移到抗吸附冻存管中。测定血浆中利马前列素的含量，血浆药物浓度-时间曲线见图2。
主要步骤如下：
A、待测生物样品处理：
取血浆样品3mL，置于10mL抗吸附玻璃管中，加入抗吸附溶液(含100ng/mL PGF2α与PGE1)100μL，内标溶液150μL、水/乙酸混合溶液(99:1，v/v)6mL，涡流混合1min，离心5min(3500rpm)，上清加到已活化的Bond Elut C18固相萃取柱中，加纯水4mL、水/甲醇混合溶液(3:2，v/v)4mL溶液淋洗，用乙酸乙酯4mL洗脱到已活化的Bond Elut DEA固相萃取柱上，加水/乙酸混合溶液(99:1，v/v)2mL溶液淋洗，用水/甲醇(3:2，v/v)-1％乙酸4mL洗脱,收集洗脱液，40℃氮气流下吹干，残留物加入5mmol/L乙酸铵(pH 4.5)-0.1％乙酸/乙腈混合溶液(65:35，v/v)115μL复溶，涡流混合，取20μL进行UPLC-DMS-SWATH-HR MRM分析。
B、利马前列素标准曲线制备：
1)利用空白血浆将利马前列素储备液分别稀释至0.1、0.25、0.6、1.5、3.0、6.0、15pg/mL；
2)取20μL进行UPLC-DMS-SWATH-HR MRM分析，记录色谱图，以利马前列素浓度为横坐标，利马前列素峰面积为纵坐标，用加权W＝1/x2最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程，即为标准曲线；如图3所示。
上述步骤中涉及利马前列素生物质谱定量方法测定的条件如下：
色谱条件为：超高效液相色谱系统；色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，100mm×2.0mmI.D.，5μm粒径；流动相：水相：5％乙腈+95％水(含1mM醋酸铵+0.02％乙酸)pH值为5±2、有机相：乙腈；梯度洗脱；柱温40℃；流速0.3mL/min；进样量20μL。
所述的色谱条件中的梯度洗脱，程序见表1，
表1梯度洗脱程序
其中A是5％乙腈+95％水(含1mMol醋酸铵+0.02％乙酸)，B是乙腈。
质谱条件为：Triple TOFTM6600+型串联质谱仪，配有ESI离子化源、SelexION差分离子淌度系统；负离子方式检测；离子喷射电压-4500±500V；温度400±100℃；源内气体1：氮气压力40±15psi；气体2：氮气压力40±15psi；气帘气体：氮气压力35±10psi；解簇电压：-100±10V；DMS温度：Medium；改性剂：异丙醇；改性剂流速：low；分离电压：3800±400V；补偿电压：-8±2V；DMS分辨率增强：open；扫描方式：SWATH；SWATH Q1扫描范围：378.0Da→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da；高灵敏度模式；碰撞能量为-30±10eV；用于定量的反应离子对：m/z 379.2484→m/z 299.2380。
本发明所述的测定血浆中利马前列素的生物质谱定量方法线性关系良好，其准确度与精密度等完全符合FDA和中国药典生物样品分析方法的相关指导原则，可用于血浆中利马前列素的定量分析。
以上实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不构成对本发明的任何限制，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱的分析方法，测定生物样品中的利马前列素；其中，差分离子淌度池加装在质谱的离子源和第一四级杆之间；选定气相裂解反应m/z379.2484→299.2380Da的质量碎片作为定量离子对。
2.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：采用SWATH扫描方式，SWATH Q1扫描范围：378.0→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da。
3.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：在采用超高效液相色谱-差分离子淌度-四级杆飞行时间高分辨串联质谱分析之前先用固相萃取初步去除血浆中内源性物质的干扰。
4.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：方法步骤包括A、待测生物样品处理；B、利马前列素标准曲线制备；C、生物样品中利马前列素含量上机测定；
其中，A、待测生物样品处理，步骤如下：
1)使用环氧合酶抑制剂处理待测定的生物样品；
2)处理过后的生物样品加入抗吸附溶液、内标溶液、水/乙酸混合溶液，涡流混合，离心；
3)离心所得上清液加到已活化的Bond Elut C18固相萃取柱中，依次加纯水、水/甲醇混合溶液淋洗；
4)将Bond Elut C18固相萃取柱吸附物用乙酸乙酯洗脱到已活化的Bond Elut DEA固相萃取柱上，加水/乙酸混合溶液淋洗；
5)将Bond Elut DEA固相萃取柱吸附物用水/甲醇/乙酸混合溶液洗脱，收集洗脱液，40℃氮气流下吹干，残留物加入乙酸铵/乙酸/乙腈混合溶液复溶，涡流混合后，取复溶液进行超高效液相色谱-差分离子淌度-四极杆飞行时间串联质谱分析。
5.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：A、待测生物样品处理步骤1)中所述环氧合酶抑制剂为0.1mg/mL阿司匹林和0.1mg/mL吲哚美辛。
6.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：A待测生物样品处理步骤2)中所述抗吸附溶液为PGF2α与PGE1的混合溶液，其中PGF2α浓度范围100～200ng/mL，PGE1的浓度范围100～200ng/mL。
7.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：步骤C测定的色谱条件：Waters Acquity超高效液相色谱系统；色谱柱：CAPCELL PAK C18柱，100mm×2.0mm I.D.，5μm粒径；流动相：水相为5％乙腈+95％水，且水中含醋酸铵及乙酸，pH3～7、有机相为乙腈；梯度洗脱；柱温30～50℃；流速0.2～0.4mL/min；进样量20μL。
8.根据权利要求7所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：色谱条件中梯度洗脱程序起始有机相比例为5％，最高有机相比例为95％，且有机相比例从5％升高至95％的速率为22.5％/min。
9.根据权利要求4所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：步骤C测定的质谱条件：Triple TOFTM6600+型串联质谱仪，配有ESI离子化源、SelexION差分离子淌度系统；负离子方式检测；离子喷射电压-4500±500V；温度400±100℃；源内气体1：氮气压力40±15psi；气体2：氮气压力40±15psi；气帘气体：氮气压力35±10psi；解簇电压：-100±10V；DMS温度：Medium；改性剂：异丙醇；改性剂流速：low；分离电压：3800±400V；补偿电压：-8±2；DMS分辨率增强：open；；高灵敏度模式；采用SWATH扫描方式，SWATH Q1扫描范围：378.0→380.0Da；SWATH窗口宽度：2Da碰撞能量为-30±10eV。
10.根据权利要求1所述的一种定量测定生物样品中利马前列素的方法，其特征在于：所述的生物样品为血浆、组织液、尿液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110670906.4A CN113419001A (zh) | 2021-06-17 | 2021-06-17 | 一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110670906.4A CN113419001A (zh) | 2021-06-17 | 2021-06-17 | 一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113419001A true CN113419001A (zh) | 2021-09-21 |
Family
ID=77788866
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110670906.4A Pending CN113419001A (zh) | 2021-06-17 | 2021-06-17 | 一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113419001A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107589184A (zh) * | 2017-08-17 | 2018-01-16 | 吉林大学 | 一种peg及peg化药物的分析检测方法及其应用 |
| CN107607636A (zh) * | 2017-08-17 | 2018-01-19 | 吉林大学 | 一种定量测定生物样品中前列腺素的方法 |
| US20190228957A1 (en) * | 2016-07-25 | 2019-07-25 | Dh Technologies Development Pte. Ltd. | Systems and Methods for Identifying Precursor and Product Ion Pairs in Scanning SWATH Data |
| WO2021110918A1 (en) * | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Basf Plant Science Company Gmbh | Method for analyzing the metabolic content of a biological sample |
-
2021
- 2021-06-17 CN CN202110670906.4A patent/CN113419001A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190228957A1 (en) * | 2016-07-25 | 2019-07-25 | Dh Technologies Development Pte. Ltd. | Systems and Methods for Identifying Precursor and Product Ion Pairs in Scanning SWATH Data |
| CN107589184A (zh) * | 2017-08-17 | 2018-01-16 | 吉林大学 | 一种peg及peg化药物的分析检测方法及其应用 |
| CN107607636A (zh) * | 2017-08-17 | 2018-01-19 | 吉林大学 | 一种定量测定生物样品中前列腺素的方法 |
| WO2021110918A1 (en) * | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Basf Plant Science Company Gmbh | Method for analyzing the metabolic content of a biological sample |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| JEFFREY D WHITMAN 等: "Optimization and Comparison of Information-Dependent Acquisition (IDA) to Sequential Window Acquisition of All Theoretical Fragment Ion Spectra (SWATH) for High-Resolution Mass Spectrometry in Clinical Toxicology", 《CLINICAL CHEMISTRY》 * |
| TOBIAS BRUDERER 等: "The use of LC predicted retention times to extend metabolites identification with SWATH data acquisition", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| 内德·里法伊 等，上海科学技术出版社: "临床质谱原理与应用——小分子、多肽和病原体检测" * |
| 周从亚 等: "液相色谱-离子淌度差分质谱法测定人血清中睾酮及雄烯二酮的浓度", 《中国临床药理学杂志》 * |
| 欧阳少伦 等: "离子淌度差分质谱技术测定宠物食品中金刚烷胺和利巴韦林药物残留", 《中国卫生检验杂志》 * |
| 王梦颖 等: "超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱用于乳液类化妆品中9种抗过敏违禁药物的筛查和定量分析", 《色谱》 * |
| 蒲倩伦 等: "血浆代谢组同时定性定量分析方法研究", 《质谱学报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Han et al. | Combinatorial approach of LC–MS/MS and LC–TOF-MS for uncovering in vivo kinetics and biotransformation of ochratoxin A in rat | |
| CN111272902A (zh) | 一种艾地骨化醇血药浓度的检测方法 | |
| CN107607636A (zh) | 一种定量测定生物样品中前列腺素的方法 | |
| CN114200038B (zh) | 液相色谱-质谱联用检测藿香正气口服液中化合物含量的方法 | |
| CN109738539A (zh) | 液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒 | |
| Sun et al. | Determination of gentamicin C components in fish tissues through SPE-Hypercarb-HPLC-MS/MS | |
| CN110554104B (zh) | 一种hplc-ms/ms联用检测人血浆中咪达那新的方法 | |
| CN113376264A (zh) | 检测样品中的单糖的方法 | |
| CN111595973A (zh) | 一种液相色谱-串联质谱法测定血浆中头孢拉定浓度的方法 | |
| CN111912920A (zh) | 一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的方法 | |
| CN113419001A (zh) | 一种定量测定生物样品中利马前列素的方法 | |
| CN114636771B (zh) | 一种检测血液中丙卡特罗含量的方法及应用 | |
| CN111413439A (zh) | 一种快速亲水相互作用色谱-串联质谱法测定血浆中二甲双胍的方法 | |
| CN114544796A (zh) | 一种液相质谱联用测定血浆中司替戊醇的方法 | |
| Gu et al. | Simultaneous quantification of psoralen and isopsoralen in rat plasma by ultra-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetic study after oral administration of Haigou Pill | |
| CN109187832B (zh) | Lc-ms/ms测定去氧肾上腺素浓度的方法及样品的前处理方法 | |
| CN112834680A (zh) | 一种测定肿瘤患者血浆中替加氟、吉美嘧啶和5-氟尿嘧啶浓度的方法 | |
| KOTAKI et al. | Determination of chinoform and its metabolites in plasma by gas chromatography-mass spectrometry | |
| CN112540138A (zh) | 一种血浆中丹酚酸b、阿司匹林、水杨酸的联合定量测定方法 | |
| CN112964814A (zh) | 一种生物体液总同型半胱氨酸的检测方法 | |
| CN117129605B (zh) | 一种液相色谱串联质谱法检测11种抗高血压药物和3种代谢物的方法 | |
| CN114740120B (zh) | 同时定量测定阿比特龙及其五种代谢物的方法及应用 | |
| CN113671064B (zh) | 一种定量分析血浆中氨来占诺的血药浓度的检测方法 | |
| CN115436502B (zh) | 一种基于lc-ms/ms技术检测血浆中叶酸及其衍生物浓度的方法 | |
| CN116482242B (zh) | Lc-ms/ms测定生物样品中阿仑膦酸浓度的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210921 |