CN113398104A - 大麻二酚在治疗胆红素脑病中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种大麻二酚在预防和/或治疗胆红素脑病中的用途。发明人通过实验发现大麻二酚可以改善因胆红素脑病引起的发育迟缓、认知障碍、运动障碍和抑郁等症状，因此，有望用于治疗胆红素脑病，具有非常好的应用前景和价值。

Description

大麻二酚在治疗胆红素脑病中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种大麻二酚在治疗胆红素脑病中 的用途。

背景技术

胆红素脑病是指新生儿血中未结合胆红素水平升高，通过尚不成熟的血 脑屏障沉积于脑细胞，抑制脑组织对氧的利用，引发的严重脑损伤。在该病 患儿中，约50-70％死于急性期，约75％-90％的幸存者伴有发育迟缓、听觉障 碍和智力迟钝等神经功能障碍，是新生儿生命健康的严重威胁。

该病的治疗目前以光疗和换血为主，光疗是指采用波长为425-475nm的 蓝光照射，其原理为一方面破坏胆红素中的碳原子双键，降低脂溶性，增加 水溶性，有利于胆红素通过肝脏和胆管排泄进入胆汁，经肠道排泄。另一方 面，通过体表接受光照可使体表组织间隙中的胆红素得到光氧化分解，直接 降低胆红素水平。但是，该法常见发热、腹泻、皮疹、青铜症等不良反应。 换血疗法是治疗新生儿高胆红素血症最迅速有效的方法，但危险性较高，难 以大范围推广。

大麻中富含多种活性物质，如四氢大麻酚、大麻二酚(CBD)等。其中， CBD是大麻中含量最高的活性物质，具有起效快的作用特点，可通过口服、 外敷以及雾化吸入等多种方式进入体内，5分钟内发挥药理学作用，其功效表 现为：①抗焦虑作用，目前该项目已完成II期临床试验，被证明具有显著改 善焦虑症状；②助眠作用，可诱导服用者快速进入睡眠阶段，具有入睡快、 醒后无不适感的特征，显著优于现有催眠药物；目前已有超过100项临床试 验处于完成或正在进行阶段，是神经精神类药物的重要发展方向。但CBD是 否可用于治疗胆红素脑病尚未见报道。

发明内容

本发明提供一种大麻二酚或其药学上可接受的盐或酯在制备预防和/或治 疗胆红素脑病的药物中的用途。

具体地，胆红素脑病的症状选自：肌张力减退、阵发性肌张力增高、运 动障碍、眼球运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、 脑瘫、自闭症、抑郁症等中的一种或多种。

特别是，胆红素脑病的症状为其后遗症期症状，例如，运动障碍、眼球 运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、脑瘫、自闭 症、抑郁症等中的一种或多种，特别是运动障碍、智力障碍、发育迟缓、自 闭症、抑郁症。

具体地，上述药物中，大麻二酚可作为唯一的活性成分，也可与其他针 对相同或不同适应症的活性成分联合应用。

具体地，上述药物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。

具体地，药学上可接受的辅料可选自：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬 剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶 化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、 预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟 丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸 钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗 糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、 羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘 草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲 酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质 包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。

具体地，上述药物可以采用任何合适的给药途径，例如胃肠道给药或非 胃肠道给药(例如，静脉内、肌内、皮下、器官内、鼻内、皮内、滴注、脑 内、直肠内等)途径；上述药物可以为任何合适的剂型，例如经胃肠道给药 剂型，例如，包括，但不限于，片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂、 糖浆剂、液体、乳剂、混悬剂等；非经胃肠道给药剂型，例如，注射给药剂 型：如注射剂(例如，用于皮下注射、静脉注射、肌内注射、腹膜内注射)， 呼吸道给药剂型：如喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等，皮肤给药剂型，如外用溶 液剂、洗剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂等，粘膜给药剂型：如滴眼剂、 眼用软膏剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂等，腔道给药剂型：如栓剂、气雾 剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂等，用于直肠、阴道、尿道、鼻腔、耳道等。特 别是，适合新生儿应用的给药途径和剂型。

具体地，上述药物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。

具体地，上述胆红素脑病的患者为哺乳动物，例如人类，特别是儿童， 例如0-10岁的儿童，0-7岁的儿童，0-5岁的儿童，0-3岁的儿童，0-1岁的儿 童，新生儿。

本发明还提供一种预防和/或治疗胆红素脑病的方法，其包括向有此需要 的受试者施用大麻二酚或其药学上可接受的盐或酯的步骤。

具体地，该受试者可以为哺乳动物，例如人类，特别是儿童，例如0-10 岁的儿童，0-7岁的儿童，0-5岁的儿童，0-3岁的儿童，0-1岁的儿童，新生 儿。

具体地，胆红素脑病的症状选自：肌张力减退、阵发性肌张力增高、运 动障碍、眼球运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、 脑瘫、自闭症、抑郁症等中的一种或多种。

特别是，胆红素脑病的症状为其后遗症期症状，例如，运动障碍、眼球 运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、脑瘫、自闭 症、抑郁症等中的一种或多种，特别是运动障碍、智力障碍、发育迟缓、自 闭症、抑郁症。

具体地，上述方法还可以包括施用光疗的步骤，光疗步骤可以与施用大 麻二酚或其药学上可接受的盐或酯的步骤同时、单独或顺序施用(simultaneous, separate orsequential administration)。

发明人通过实验发现大麻二酚可以改善因胆红素脑病引起的发育迟缓、 认知障碍、运动障碍和抑郁等症状，因此，有望用于治疗胆红素脑病，具有 非常好的应用前景和价值。

具体实施方式

除非另有定义，本发明中所使用的所有科学和技术术语具有与本发明涉 及技术领域的技术人员通常理解的相同的含义。

在本发明中，大麻二酚有时简称为CBD，其结构式为

在本发明中，“胆红素脑病”是指非结合胆红素通过血脑屏障后入侵神经 系统，对神经细胞产生毒性作用，引发的严重脑损伤。本病临床分4期，第 1-3期出现在新生儿早期，第4期在新生儿期以后出现：警告期表现为嗜睡、 吸吮反射减弱和肌张力减退；痉挛期轻者仅两眼凝视，阵发性肌张力增高； 重者两手握拳、前臂内旋，角弓反张、有时尖声哭叫；恢复期大都于第1周 末，首先吸吮力和对外界的反应逐渐恢复，继而痉挛逐渐减轻、消失；后遗症期常出现于生后2个月或更晚，表现为：运动障碍；眼球运动障碍(表现 为眼球转动困难，特别是向上凝视受限)；智力障碍；发育迟缓；听力异常； 牙釉质发育异常；病情严重时可导致脑瘫。另外，还有研究表明，出生后患 胆红素脑病的新生儿比其他婴儿更容易发生自闭症，可能是胆红素破坏了脑 组织，干扰脑部发育，从而导致自闭症。这些症状均由胆红素引起，特别是 毒性水平的胆红素引起。

在本发明中，“新生儿”是指胎儿娩出母体并自脐带结扎起，至出生后未 满28天这一段时间内的婴儿。“婴儿”是指小于1周岁的儿童。“儿童”是指18 岁以下的任何人。在本发明中0岁儿童是指胎儿娩出母体并自脐带结扎起的 婴儿。

本文所引用的各种出版物、专利和公开的专利说明书，其公开内容通过 引用整体并入本文。

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基 于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所 获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例中CBD为市售品，纯度为98.27％。

实施例1：CBD治疗胆红素脑病的药效学研究

1、实验材料与方法

1.1、实验动物

SPF级SD成年健康大鼠，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供， 质量合格证号SCXK(京)2014-0023。动物饲养于明暗交替(12h:12h)的清 洁级动物房中，环境温度20～22℃，相对湿度50％，自由进食饮水。大鼠按 照雌雄1:1合笼，确定怀孕后即单笼喂养，待其自然分娩后，新生鼠由母鼠喂 养至7天备用。

1.2、胆红素溶液的制备

避光称取胆红素5mg溶于50μL，0.5mol/L NaOH溶液中，加入双蒸水 450μL，用0.5mol/L HCl调节pH至8.5。

1.3、胆红素脑病乳鼠模型制备

将7日龄乳鼠随机分为假手术组、模型组、CBD治疗组(2.5mg/kg， 5.0mg/kg和10.0mg/kg)。模型制备方法为：将乳鼠麻醉后，经小脑延髓池抽 取15μL脑脊液，用微量注射器向小脑延髓池注射胆红素溶液(20μg/g体重)。 注射完毕后给药治疗组立即口服给予相应剂量的CBD混悬液(5.0mg/kg, 10.0mg/kg,20mg/kg)。假手术组仅分离组织，不进行药物注射。手术操作完 成后，假手术组与模型组均口服给予相应体积的CMC-Na溶液(0.5％)。

1.4、CBD对胆红素脑病模型生长发育的影响

分别选取造模后第1、7、14、21天，对存活动物的体重进行分析。

1.5、CBD对胆红素脑病模型学习记忆的影响

学习记忆功能检测选择新物体识别实验进行观察，具体操作方法为：该 实验分为适应期、熟悉期和测试期三个阶段。第一天为适应期，在实验箱子 中不放任何物体，仅将实验动物面向箱壁慢慢放到箱中去，让其自由活动适 应半个小时。第二天是熟悉期阶段，在实验箱中放入两个形状、颜色、质地、 大小相同的绿色立方体，同样的，将动物沿着箱壁轻缓的放入箱内，让其自 由运动10分钟熟悉环境；第三天为检测期阶段，将实验箱的一个旧物体替 换为新的形状、质地都完全不同的物体-黄色球体；然后将实验动物轻轻放到 箱中，并开始录像观察。采用新物体识别指数作为动物认知功能的检测指标， 新物体识别指数＝探索新物体时间/(探索新物体时间+探索旧物体时 间)×100％。

1.6、CBD对胆红素脑病模型运动功能的影响

运动功能选择爬杆实验与转棒实验进行检测，其方法分述如下：

(1)爬杆实验

爬杆实验爬杆为直径2cm，长度为50cm的粗糙木杆，木杆底部位于动物 饲养笼内，垂直放置。当乳鼠被置于木杆顶端时，它会自主向木杆底部运动， 顺利到达底端。本项实验开始前需进行2天预适应，每天5次训练。至检测 日，以动物到达底部所需时间为评价指标，观察药物对乳鼠运动能力的影响。

(2)转棒实验

乳鼠提前在转棒仪(IITC Life Science,USA)预适应3天，第一天预适应 转速为5转/分钟，共适应2次，每次5分钟。第二天转棒转速提升至10转/ 分钟，共适应2次，每次5分钟。第三天转棒转速为15转/分钟，共适应2 次，每次3分钟。第4天开始进行行为学实验，转棒转速15转/分钟，持续时 间为3分钟，以动物在转棒上停留时间(潜伏期)作为评价其运动协调性的 指标。每只动物重复检测3次，每次间隔时间为30分钟，以排除运动疲劳对 动物运动能力的干扰。

1.7、CBD对胆红素脑病模型抑郁行为的影响

快感缺失是抑郁行为的核心症状，也是抑郁动物模型的重要特征之一，本实 验采用该实验来检测动物的抑郁行为。测试前两天对动物进行糖水预适应，同时 给予1％糖水和正常饮用水，适应后开始禁水16h。测试时，提前称量各水瓶的 重量作为起始重量，并记录。将动物放入小鼠饲养笼中，放入糖水瓶和正常饮用 水瓶各1个放入小鼠饲养笼中，供水1h，供水30min后交换两水瓶位置，避免动 物饮水体位差异对实验结果的影响。实验结束后，称量各水瓶重量，并记录数据。 测试结果以1％糖水饮用量占总的饮水量的百分比表示糖水偏好系数。

蔗糖偏好率(％)＝1％蔗糖量/(1％蔗糖量+正常饮水量)×100％

1.8、统计与分析

所有数据以Means±SD(standard Deviation,SD)表示，采用单因素方差分 析对数据进行统计学分析(Prism 8.0)，以Dunnett’s test作为Posthoc检验， 以p<0.05为统计学差异标准。

2、实验结果

2.1、CBD对胆红素脑病乳鼠生长发育的影响

如表1所示，在治疗第7天时，与假手术组相比，模型组乳鼠体重显著降低 (p<00001)，表明乳鼠生长发育受到显著抑制。与模型组相比，CBD中剂量组 乳鼠体重显著升高(p<0.05)。在治疗第14天时，与假手术组相比，模型组乳鼠 体重显著降低(p<00001)。与模型组相比，CBD中剂量和高剂量组乳鼠体重显 著升高(p<0.0001)，表明CBD治疗可显著改善乳鼠生长发育。在治疗第21天， 与假手术组相比，模型组乳鼠体重显著降低(p<00001)，与模型组相比，CBD 低剂量组，中剂量和高剂量组乳鼠体重均显著升高(p<0.0001)，表明CBD治疗 可显著改善乳鼠生长发育。上述结果表明CBD治疗可显著改善胆红素脑病模型 动物的生长发育。

表1 CBD对胆红素脑病乳鼠体重的影响

####，p<0.0001vs相同时间点假手术组。*，p<0.05，***，p<0.001，****，p<0.0001vs相同时间点模型组，n＝5。

2.2、CBD对胆红素脑病乳鼠模型运功功能的影响

乳鼠的运动功能的训练与检测自治疗第21天开始，包括转棒实验与爬杆 实验。转棒实验结果如表2所示，单因素方差分析显示，各组动物的自转棒 的跌落潜伏期具有显著差异[F(4,20)＝56.90,p<0.0001]。Dunnett’s检验显示， 与假手术组相比，模型组乳鼠的跌落潜伏期显著缩短(p<0.001)，表明模型组 乳鼠存在显著的运动功能障碍。与模型组相比，CBD 10mg/kg和20mg/kg治 疗组乳鼠跌落潜伏期显著延长(p<0.01,10mg/kg；p<0.001,20mg/kg)，表明 CBD治疗具有改善胆红素脑病模型动物的运动功能的功效。

表2 CBD对胆红素脑病乳鼠转棒试验跌落潜伏期的影响

###，p<0.001vs假手术组，**，p<0.01，***，p<0.001vs模型组，n＝5。

爬杆实验结果如表3所示，单因素方差分析显示，各组动物从顶端到达 底部的潜伏期具有显著差异[F(4,20)＝5.241,p＝0.0047]。Dunnett’s检验显示， 与假手术组相比，模型组乳鼠的潜伏期显著延长(p<0.01)，表明模型组动物存 在显著的运动功能障碍。与模型组相比，CBD 10mg/kg和20mg/kg治疗组乳 鼠到达底部的潜伏期显著缩短(p<0.01,10mg/kg；p<0.05,20mg/kg)，表明CBD 治疗具有改善胆红素脑病模型动物的运动功能的功效。

表3 CBD对胆红素脑病乳鼠爬杆试验到达底部潜伏期的影响

##，p<0.01vs假手术组，*，p<0.05，**，p<0.01vs模型组，n＝5。

2.3、CBD对胆红素脑病乳鼠模型认知功能的影响

认知功能采用新物体识别实验进行检测，研究结果如表4所示，单因素 方差分析显示，各组动物的新物体识别指数具有显著差异[F(4,20)＝8.761, p＝0.0003]。Dunnett’s检验显示，与假手术组相比，模型组乳鼠的新物体识别 指数显著降低(p<0.01)，表明模型组动物存在显著的认知障碍。与模型组相比， CBD 10mg/kg和20mg/kg治疗组乳鼠新物体是被指数显著升高(p<0.01)， 表明CBD治疗具有改善胆红素脑病模型动物的认知功能的功效。

表4 CBD对胆红素脑病乳鼠认知功能的影响

##，p<0.01vs假手术组，**，p<0.01vs模型组，n＝5。

2.4、CBD对胆红素脑病乳鼠抑郁症状的影响

抑郁症状采用糖水偏好实验进行检测，研究结果如表5所示，单因素方差分 析显示，各组动物的识别指数具有显著差异[F(4,20)＝24.45,p<0.0001]。Dunnett’s 检验显示，与假手术组相比，模型组乳鼠的糖水偏好率显著降低(p<0.001)，表明 模型组乳鼠存在明显的抑郁症状。与模型组相比，CBD 10mg/kg和20mg/kg治疗 组乳鼠糖水偏好率显著升高(p<0.01,10mg/kg；p<0.001,20mg/kg)，表明CBD治 疗具有改善胆红素脑病模型动物的抑郁症状的功效。

表5 CBD对胆红素脑病乳鼠抑郁症状的影响

###，p<0.001vs假手术组，**，p<0.01，***，p<0.001vs模型组，n＝5。

综上，本发明通过将CBD口服给予胆红素脑病模型，发现CBD可显著 改善该模型生长发育、运动功能、认知功能与抑郁症状。这表明，CBD具有 治疗胆红素脑病的作用，可以作为潜在的胆红素脑病治疗药物。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本 发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明 的保护范围之内。

本发明中描述的前述实施例和方法可以基于本领域技术人员的能力、经 验和偏好而有所不同。

本发明中仅按一定顺序列出方法的步骤并不构成对方法步骤顺序的任何 限制。

Claims (10)

1.一种大麻二酚或其药学上可接受的盐或酯在制备预防和/或治疗胆红素脑病的药物中的用途。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胆红素脑病的症状选自：肌张力减退、阵发性肌张力增高、运动障碍、眼球运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、脑瘫、自闭症、抑郁症中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胆红素脑病的症状为其后遗症期症状，选自：运动障碍、眼球运动障碍、智力障碍、发育迟缓、听力异常、牙釉质发育异常、脑瘫、自闭症、抑郁症中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胆红素脑病的症状选自：运动障碍、智力障碍、发育迟缓、自闭症、抑郁症。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物选自以下剂型：经胃肠道给药剂型、注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、腔道给药剂型。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述经胃肠道给药剂型选自：片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂、液体、乳剂、混悬剂。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述注射给药剂型选自：皮下注射剂、静脉注射剂、肌内注射剂、腹膜内注射剂。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述呼吸道给药剂型选自：喷雾剂、气雾剂、粉雾剂。

10.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述腔道给药剂型用于直肠、阴道、尿道、鼻腔或耳道。