CN113384548A - 一种具有抗hpv病毒感染的阴道泡腾片及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片及其制备方法，由落新妇苷、鞣花酸、桂皮醛、聚乙二醇1000、柠檬酸、碳酸氢钠、羟丙基‑β‑环糊精和硬脂酸镁组成。本发明提供的阴道泡腾片，创新性的发现落新妇苷、鞣花酸、桂皮醛协同增效的抗HPV效应，在保障药效的前提下，不仅降低药物用量，而且减少不良反应发生率。制备工艺合理，主药成分形成纳米乳，进入亚纳米尺寸空腔，形成缓释系统，有利于提高药物的生物利用度，又提升了稳定性。剂型利于临床治疗，泡腾片遇湿崩解迅速，产生大量泡沫，片中的有效成份借助药物发泡腾作用而迅速分散到女性阴道，尤其是皱褶深部，并均匀分布到阴道及宫颈粘膜各部位，充分与作用部位接触，从而发挥药物的治疗效果。

Description

一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片及其制备方法。
背景技术
人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一类无包膜的具有嗜上皮特性的双链DNA病毒，由核酸及衣壳蛋白构成。HPV病毒具有嗜上皮特性，其感染宿主后可在表皮、生殖器、口腔黏膜等部位的上皮基底细胞中大量复制，当机体免疫力降低后可随机整合到宿主基因组中，随后沉默E2基因，从而减少其对E6、E7基因的抑制，使E6、E7蛋白过表达，辅以E5蛋白的表达，从而诱导感染细胞无限增殖甚至癌变。研究发现，90％的宫颈癌与高危型HPV持续感染密切相关，宫颈癌在全球女性恶性肿瘤发病率中排名第4，在15～44岁女性恶性肿瘤发病率中高达第二。目前临床治疗HPV病毒感染的相关手段包括，(1)激光、微波、手术切除(妇科的LEEP刀等)、光动力疗法等物理治疗，目的是去除肉眼可见的瘤体和亚临床感染。物理疗法主要针对病毒所导致肿瘤，并非从源头消灭病毒的存在。(2)药物治疗，目前尚无针对该病毒的特效抗病毒药物，临床上一般使用细胞毒药物用于辅助治疗，包括0.5％足叶草脂毒素酊，50％三氯醋酸、氟尿嘧啶软膏等。其中，足叶草脂等具有一定的腐蚀性，需要保护好周围正常组织，否则易形成周围正常组织的种植，而且上述药物毒性大，无法根治HPV，反复反作的几率非常大。(3)免疫疗法在于减少复发和加快清除病灶，包括干扰素、白介素、胸腺肽、转移因子、卡介苗、异维A酸、自体疫苗等，缺陷是价格昂贵、稳定性差、治疗程序复杂。(4)现代医学对于宫颈HPV感染的预防是注射疫苗，但目前范围局限四种，且价格昂贵，预防期短，需反复注射，治疗手段是注射干扰素，其毒副作用大，疗程长，治愈率低，难以推广，这些不足之处阻碍了现有疫苗的有效推广。
落新妇苷属于黄酮苷类化合物，通过选择性诱导活化的T细胞凋亡而不影响正常的T细胞，可作为一种新的免疫抑制剂用于接触性皮炎、免疫性肝损伤等疾病的治疗。鞣花酸作为多酚类化合物，具有显著的抗氧化作用，同时对于妇科癌变具有预防和治疗作用。桂皮醛属于挥发油通过转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移，目前尚未三种成分或组合应用于妇科HPV 病毒感染治疗中。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片及其制备方法。
本发明的技术方案为：提供一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片，由以下重量配比的主药和辅料制成：落新妇苷20～30份，鞣花酸10～20份，桂皮醛 10～20份，聚乙二醇1000 3～5份，柠檬酸10～20份，碳酸氢钠20～35份，羟丙基-β-环糊精10～20份，硬脂酸镁1～3份。
优选地，由以下重量配比的主药和辅料制成：落新妇苷30份，鞣花酸15 份，桂皮醛15份，聚乙二醇1000 5份，柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，羟丙基 -β-环糊精15份，硬脂酸镁3份。
优选地，所述落新妇苷纯度大于90％，鞣花酸纯度大于90％，桂皮醛纯度大于90％。
本发明的另一个技术方案为：提供一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：按重量份数称取桂皮醛10～20份，将重量份20～30份落新妇苷和 10～20份鞣花酸加入桂皮醛中，超声分散5～10min，得第一中间体；
步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精10～20份纯化水超声溶解，加入重量份3～5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；
步骤3：将步骤2中的第一中间体缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得第二中间体；
步骤4：取步骤3中的第二中间体，采用孔径300～800Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50～80℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸10～20份，碳酸氢钠20～35 份，硬脂酸镁1～3份，过筛混合均匀，压片。
优选地，步骤4中纳滤膜材质为复合聚酰胺、聚醚砜、纤维素中的一种。
本发明的有益效果在于：鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛三种成分按照一定比例组合，相同剂量下相较于单一成分或者两两组合物，抗HPV16效果显著提升，创新性的发现协同增效的抗HPV效应，在保障药效的前提下，不仅降低药物用量，而且减少不良反应发生率。同时，结合药物成分物化性质，鞣花酸属于多酚类化合物，易氧化分解；落新妇苷水溶性差，桂皮醛易氧化、挥发，三种成分如果采用常规的片剂、凝胶剂、栓剂工艺制备方法，难以保障制剂稳定性，直接影响药效。为了提升制剂稳定性、均一性和缓释性。首先将鞣花酸和落新妇苷提取物分散于油状桂皮醛中，进而加入含有辅料的水溶液中，油状桂皮醛因界面效应，通过与鞣花酸和落新妇苷微粒缔合包裹，形成O/W型纳米乳，进而降低表面能进入聚乙二醇1000和羟丙基-β-环糊精空间耦合形成的亚纳米尺寸空腔，形成缓释系统，有利于提高药物的生物利用度，又提升了稳定性。
本发明提供的一种含有鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛的阴道泡腾片，制备工艺合理，阴道泡腾片遇湿崩解迅速，并产生大量泡沫，使片中的有效成份借助药物发泡腾作用而迅速分散到女性阴道，尤其是皱褶深部，并均匀分布到阴道及宫颈粘膜各部位，充分与作用部位接触，从而发挥药物的治疗效果。
本发明原料中的落新妇苷能够保护肝脏，镇痛，抗水肿，桂皮醛有镇痛作用。
附图说明
图1为鞣花酸与落新妇苷配伍量效曲线图。
图2为落新妇苷与桂皮醛配伍量效曲线图。
图3为鞣花酸与桂皮醛配伍量效曲线图。
图4为单一成分及三种药物成分组合量效曲线图。
具体实施方式
以下结合附图对本申请做进一步详细说明，但并不作为对本申请的限定。在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1协同增效评价
(1)细胞培育
复苏HaCaT细胞，置于细胞培养瓶中，用含10％FBS、1％双抗(清链霉素混合液)的DMEM培养，放入37℃，5％CO2的细胞培养箱中。显微镜下观察细胞贴壁程度，当细胞贴壁80％左右可用于试验，所有试验均用对数生长期的细胞。
(2)CCK-8法测定HaCaT细胞活力
洗涤消化细胞，显微镜下计数并调整至5×107/L的细胞悬液接种于96孔板，每孔100μL，在含10％FBS的高糖DMEM培养液中隔夜培育。设置试验分组，给药组根据预实验用不同浓度的鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛对细胞进行培养，对照组仅加入100μL培养液，每组设6个复孔，培养24、48h后，用CCK-8避光培育1h。用酶标仪测定450nm波长下的吸光度，记录数值。实验均重复3次，计算细胞增殖抑制率。
细胞增殖抑制率(Fa)＝(OD对照组-OD给药组)/OD对照组
(3)组分系统增效评价
采用CCK-8法测定HaCaT细胞活力，单一成分鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛给药量均为(2.0、6.0、10.0、14.0、18.0、22.0、26.0、30.0μM)，根据摩尔比分别考察鞣花酸、落新妇苷(1∶2、1∶1、2∶1)的给药总量(2.0、6.0、10.0、14.0、 18.0、22.0、26.0、30.0μM)，落新妇苷、桂皮醛(1∶2、1∶1、2∶1)的给药总量 (2.0、6.0、10.0、14.0、18.0、22.0、26.0、30.0μM)，鞣花酸、桂皮醛(1∶2、 1∶1、2∶1)的给药总量(2.0、6.0、10.0、14.0、18.0、22.0、26.0、30.0μM)，鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛(1∶2∶1)的给药总量(2.0、6.0、10.0、14.0、18.0、 22.0、26.0、30.0μM)，鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛(1∶1∶1)的给药总量(2.0、 6.0、10.0、14.0、18.0、22.0、26.0、30.0μM)，根据抑制率和给药量，采用CompuSyn 软件计算药物联合指数(CI)，拟合单一药物和药物联用效用曲线，评价系统增效效果。CI＝1代表叠加增效，CI＜1代表协同增效，CI＞1代表叠加减效。
分析图1和表1中数据，鞣花酸与落新妇苷配伍使用，对于HaCaT细胞活力均有一定抑制作用，采用经典药物协同增效评价软件CompuSyn计算药物联合指数(CI)，鞣花酸∶落新妇苷(1∶2)时的CI＝0.66311，均低于鞣花酸∶落新妇苷(2∶1及1∶1)时的CI值，说明鞣花酸∶落新妇苷(1∶2)协同增效作用较优。
分析图2和表1中数据，落新妇苷与桂皮醛配伍使用，对于HaCaT细胞活力均有一定抑制作用，采用经典药物协同增效评价软件CompuSyn计算药物联合指数(CI)，落新妇苷∶桂皮醛(2∶1)时的CI＝0.76776，均低于落新妇苷∶桂皮醛(2∶1及1∶1)时的CI值，说明落新妇苷∶桂皮醛(2∶1)协同增效作用较优。
分析图3和表1中数据，鞣花酸与桂皮醛配伍使用，对于HaCaT细胞活力均有一定抑制采用经典药物协同增效评价软件CompuSyn计算药物联合指数 (CI)，鞣花酸∶桂皮醛(1∶1)时的CI＝0.90288，均低于，鞣花酸∶桂皮醛(2∶1 及1∶2)时的CI值，说明落新妇苷∶桂皮醛(1∶1)协同增效作用较优。
分析图4和表1中数据，鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛三种药物成分单独使用，对于HaCaT细胞活力均有一定抑制作用，但在考察剂量范围内抑制率均低于50％，通过联合配伍应用，相同给药剂量下6.0μM时抑制率已超过50％，18.0μM时抑制率超过90％，药物具有明显的协同增效作用。采用经典药物协同增效评价软件 CompuSyn计算药物联合指数(CI)，鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛(1∶2∶1)时的 CI＝0.36105，鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛(1∶1∶1)时的CI＝0.40328，三者协同增效作用显著，远远高于单一成分效用，其中鞣花酸∶落新妇苷∶桂皮醛(1∶2∶1) 配伍协同效用最优。
表1药物半数抑制率时(Fa＝0.5)的给药量及药物联合指数
药物 CI 给药量μM
落新妇苷 / 31.35
鞣花酸 / 51.82
桂皮醛 / ＞200
鞣花酸∶落新妇苷 1∶2 0.66311 /
鞣花酸∶落新妇苷 2∶1 0.76120 /
鞣花酸∶落新妇苷 1∶1 0.70101 /
落新妇苷∶桂皮醛 2∶1 0.76776 /
落新妇苷∶桂皮醛 1∶2 0.80125 /
落新妇苷∶桂皮醛 1∶1 0.78106 /
鞣花酸∶桂皮醛 1∶2 0.94302 /
鞣花酸∶桂皮醛 2∶1 0.95170 /
鞣花酸∶桂皮醛 1∶1 0.90288
1∶2∶1 0.36105 /
1∶1∶1 0.40328 /
实施例2
步骤1：按重量份数称取桂皮醛15份，将重量份30份落新妇苷和15份鞣花酸加入桂皮醛中，超声分散10min，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000 转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸 15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例3
步骤1：按重量份数称取桂皮醛20份，将重量份25份落新妇苷和15份鞣花酸加入桂皮醛中，超声分散5min，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基 -β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份3聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000 转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径800Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸 10份，碳酸氢钠25份，硬脂酸镁2份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例4
步骤1：按重量份数称取桂皮醛60份，95％乙醇超声溶解，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例5
步骤1：按重量份数称取落新妇苷60份，95％乙醇超声溶解，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例6
步骤1：按重量份数称取鞣花酸60份，95％乙醇超声溶解，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例7
步骤1：按重量份数称取桂皮醛30份，将重量份30份落新妇苷加入桂皮醛中，超声分散5min，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例8
步骤1：按重量份数称取桂皮醛30份，将重量份30份鞣花酸加入桂皮醛中，超声分散5min，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在 200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1 缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30 min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30 份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例9
步骤1：按重量份数称取30份鞣花酸、30份落新妇苷，95％乙醇超声溶解，得中间体1；步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精20份纯化水超声溶解，加入重量份5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；步骤3：将步骤2中的中间体1缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得中间体2；步骤4：取步骤3中的中间体2，采用孔径600Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液， 50℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，硬脂酸镁3份，过筛混合均匀，压片即得。
实施例10抗HPV活性评价
由实施例2-9所得的阴道泡腾片的体外抗病毒评价包括如下步骤：
(1)细胞毒性测试
将常规培养方法培养的处于生长对数期的人宫颈癌Caski细胞(HPV16阳性)，用胰蛋白酶消化，使贴壁细胞脱落，用含10％胎牛血清的液体培养基配成悬液，接种在96孔板培养，1×105个细胞/孔，置CO2培养箱中孵育24h使细胞贴壁。将按标示量取实施例1-8制备的阴道泡腾片溶于细胞培养用DMSO，再用液体培养基稀释配成一系列浓度递增的药物培养液，以三种成分合计(质量比，鞣花酸∶落新妇苷∶桂皮醛1∶2∶1)，浓度依次为10，50，250，500，1000μg/mL。倾去培养液，给药组加入按倍数关系配制的药物培养液100μL，对照组以培养液代替药物溶液，每个浓度4个副孔，CO2培养箱中孵育72h。采用MTT法，以 Reed-Muench法计算半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。
(2)以Caski细胞为模型的对阴道泡腾片的药效评价
按照阴道泡腾片中三种药物成分的标示量，用液体培养基配置最大无毒浓度的药物培养液，以该药物培养液处理细胞培养48小时后终止培养，提取细胞内的总RNA，Oligo(dT)15为引物进行逆转录，最后以cDNA为模版，以E6，E7 为目的基因，β-actin为内参基因，采用Real-time PCR法测定对阴道泡腾片作用于Caski细胞后，HPV16 E6和E7 mRNA在基因表达水平上的变化，判断其对 HPV16病毒的抑制活性，结果见表2。
本发明的阴道泡腾片无明显的细胞毒性，其中实施例2和实施例3对HPV16 病毒的抑制活性优于其他实施例组。同时单一成分或者两两组合效果也明显低于实施例2和实施例3，说明鞣花酸、落新妇苷、桂皮醛对HPV16病毒的抑制活性具有协同增效功能。
表2阴道泡腾片细胞毒性测试及对HPV16 E6/E7 mRNA表达的影响
Figure RE-GDA0003214134830000081
Figure RE-GDA0003214134830000091
实施例10临床研究资料
1、对象
参照《妇产科学(第8版)》内诊断标准，中医辨证分型参照《中医诊断学》内湿毒蕴结型，即主证：带下量多，质黏稠，或如豆渣，或似泡沫，气味臭或腥秽，色黄兼绿；次证：阴户瘙痒灼热，小便短赤，大便干结，口干，口苦，腹部掣痛，烦躁易怒；舌脉：舌质红，苔黄腻，脉濡数或滑数。
选取2018年1月至2020年7月南京市江宁医院已确诊为宫颈高危型HPV 感染患者360例，按随机数字法随机分成四组：对照组、实施例2组、实施例3 组、实施例4组、实施例5组、实施例6组、实施例7组、实施例8组、实施例 9组，每组40人，各组之间的患者年龄、性别均无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。
2、治疗方案
对照组患者于经停后3d～5d进行常规治疗：睡前将重组人干扰素α2b阴道泡腾片(北京凯因科技股份有限公司，国药准字S20120019，规格：50万IU/片)。放置于阴道后穹隆接近宫颈口处，1片/次，隔日1次，每月使用9次，3个月为 1个疗程，治疗期间禁性生活及盆浴。
实施例组治疗方案：睡前将实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例 5组、实施例6组、实施例7组、实施例8组、实施例9组阴道泡腾片，放置于阴道后穹隆接近宫颈口处，1片/次，隔日1次，每月使用9次，3个月为1个疗程，治疗期间禁性生活及盆浴。
3、观察指标
3.1免疫功能
比较对照组、实施例组组治疗前、治疗3个月后血清IgA、IgM以及IgG水平变化。
3.2阴道菌群
治疗3个月后，取患者阴道分泌物，检测其pH值，行革兰染色，同时利用显微镜观察阴道微生态情况，根据《阴道微生态评价的临床应用专家共识》评估阴道菌群恢复情况，其中正常或恢复：阴道分泌物pH≤4.5，革兰染色(Nugent) 评分≤3分，菌群多样性及密集度为10～999个细菌数/油镜，过氧化氢酶(Catalase， CAT)及唾液酸酐酶(Neuraminidase，Neu)阴性，乳杆菌为优势菌群；未恢复：阴道分泌物pH＞4.5，Nugent评分＞3分，菌群多样性及密集度为1～9或大于1 000 个细菌数/油镜，CAT及Neu阳性，革兰阴性短杆菌、球菌或杂菌为优势菌群。
3.3炎症因子
比较对照组、实施例组治疗前后血清IL-2、IL-4以及hs-CRP水平。
3.4不良反应发生情况评价
比较对照组与实施例组患者的不良反应发生情况。
4、统计学方法
运用SPSS 19.0软件进行统计分析，所用数据采用“平均值±标准差”表示，采用t检验，P＜0.05具有统计学意义。
5、结果
(1)免疫功能
治疗前，对照组和实施例组血清中IgA、IgM、IgG水平相似，无统计学意义(P＞0.05)；治疗后，对照组和实施例组血清IgA、IgM以及IgG水平均上升，与治疗前对比，实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组、实施例8 组、实施例9组均具有统计学意义(P＜0.05)，且实施例2组和实施例3组治疗后的血清IgA、IgM以及IgG水平相比高于实施例7组、实施例8组、实施例9，更高于实施例4组、实施例5组、实施例6组，呈现出在临床治疗时的协同增效作用。结果见表3。
表3对照组和实施例组治疗前后免疫球蛋白水平比较(
Figure RE-GDA0003214134830000101
g/L)
Figure RE-GDA0003214134830000102
Figure RE-GDA0003214134830000111
注：*P＜0.05
(2)阴道菌群恢复情况
对照组和实施例组均可以改善阴道菌群，其中实施例2组和实施例3组的正常或恢复数相对较高。结果见表4。
表4对照组和实施例组阴道菌群恢复情况
组别 例数 正常或恢复 未恢复
对照组 40 31 9
实施例2 40 37 3
实施例3 40 33 7
实施例4 40 22 18
实施例5 40 25 15
实施例6 40 30 10
实施例7 40 31 9
实施例8 40 32 8
实施例9 40 31 9
(3)炎症因子
治疗前，对照组和实施例组血清中IL-2、IL-4以及hs-CRP水平相当，无统计学差异(P＞0.05)；治疗后，对照组和实施例2组、实施例3组、实施例7组、实施例8组、实施例9组血清IL-2水平均上升，IL-4和hs-CRP水平均下降，且具有统计学差异(P＜0.05)。其中实施例2组对血清中炎症因子IL-2、IL-4以及hs-CRP水平调控能力最强，其次为实施例3组。结果见表5。
表5对照组和实施例组治疗前后血清细胞因子水平比较
Figure RE-GDA0003214134830000121
Figure RE-GDA0003214134830000122
(4)不良反应发生率
根据给药近期的黏膜刺激性和致敏性，对进组患者进行随访，根据患者反馈情况统计结果见表6。本发明制备的各实施例组患者用药依从性较好。
表6对照组和实施例组阴道菌群恢复情况
Figure RE-GDA0003214134830000123
Figure RE-GDA0003214134830000131
综合上述结果表明本发明的药物组合物制备的阴道泡腾片治疗宫颈高危型 HPV感染效果显著，可增强患者免疫功能，促进阴道菌群恢复，同时减轻机体炎症反应。
上述内容，仅为本发明的较佳实施例，并非用于限制本发明的实施方案，本领域普通技术人员根据本发明的主要构思和精神，可以十分方便地进行相应的变通或修改，故本发明的保护范围应以权利要求书所要求的保护范围为准。

Claims (5)

1.一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片，其特征在于，由以下重量配比的主药和辅料制成：落新妇苷20～30份，鞣花酸10～20份，桂皮醛10～20份，聚乙二醇1000 3～5份，柠檬酸10～20份，碳酸氢钠20～35份，羟丙基-β-环糊精10～20份，硬脂酸镁1～3份。
2.根据权利要求1所述的具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片，其特征在于，由以下重量配比的主药和辅料制成：落新妇苷30份，鞣花酸15份，桂皮醛15份，聚乙二醇1000 5份，柠檬酸15份，碳酸氢钠30份，羟丙基-β-环糊精15份，硬脂酸镁3份。
3.根据权利要求1所述的具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片，其特征在于，所述落新妇苷纯度大于90％，鞣花酸纯度大于90％，桂皮醛纯度大于90％。
4.一种具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：按重量份数称取桂皮醛10～20份，将重量份20～30份落新妇苷和10～20份鞣花酸加入桂皮醛中，超声分散5～10min，得第一中间体；
步骤2：按重量份数称羟丙基-β-环糊精10～20份纯化水超声溶解，加入重量份3～5聚乙二醇1000，超声处理，水溶液中粒径分布在200～500nm范围内时，停止超声，得辅料溶液；
步骤3：将步骤2中的第一中间体缓慢加入辅料溶液中，同时采用高速分散器搅拌，转速15000转/min，时间为30min，得第二中间体；
步骤4：取步骤3中的第二中间体，采用孔径300～800Da纳滤膜脱水处理，得浓缩液，50～80℃干燥，按照等量递增法加入柠檬酸10～20份，碳酸氢钠20～35份，硬脂酸镁1～3份，过筛混合均匀，压片。
5.根据权利要求4所述的具有抗HPV病毒感染的阴道泡腾片的制备方法，其特征在于，步骤4中纳滤膜材质为复合聚酰胺、聚醚砜、纤维素中的一种。
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