CN113332224A - 一种保湿抗炎组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种保湿抗炎组合物，主要有效成分包括：芍药花提取物、甜菜根提取物和鞘氨醇单胞菌胶。组合物在保湿方面发挥类维生素D的作用，提高维生素D受体的转录活性，一方面促进表皮间的紧密连接；另一方面防止钙离子流失，促进线粒体呼吸作用给细胞供能，高效的能量供应能增强皮肤屏障和免疫功能；在抗炎方面，抑制炎症因子，减少皮肤的炎症反应；组分之间协同作用，给肌肤提供优异的24小时保湿、修复皮肤屏障、减少红血丝的功效。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种保湿抗炎组合物及其制备方法和应用。
背景技术
目前随着网络媒体对皮肤科学的科普，消费者越来越关注皮肤状态和化妆品作用的功效性。除了抗衰老、美白等需求日益增长，保湿仍然是人们最为关注的一点。皮肤做好保湿是非常重要的，皮肤保湿力不够，角质层含水量下降，影响角质层蛋白酶活性，角质层蛋白变性，从而导致皮肤屏障受损，出现皮肤抵抗刺激能力降低、干燥脱屑、机械柔韧性下降、干纹细纹出现的情况。
维生素D作为一种存在于食物中的脂溶性的维生素，是影响表皮分化至关重要的因素之一，作用于控制表皮细胞最终分化的基因网络中心,影响与肌肤屏障功能密切相关的紧密连接蛋白的基因的表达和钙离子的吸收。线粒体呼吸需要摄取钙离子，线粒体给细胞提供能量，高效的供能可以增强皮肤屏障和免疫功能，钙离子含量还影响角质形成细胞分化。正常的皮肤屏障，钙离子在皮肤表层的分布呈“T”字形，越接近皮肤表层，钙离子浓度越高。人体中大部分维生素D是经由皮肤合成，皮肤合成维生素D，太阳的紫外线的照射是必不可少的。人体产生维生素D的能力随年龄增长而减弱，长期室内工作缺乏户外运动加之防晒产品的推广使用，“维生素D缺乏症”日渐流行，已经成为一个重大的全球健康问题。
发明内容
为解决维生素D缺乏导致皮肤干燥保湿力不足皮肤屏障受损和炎症因子加重皮肤屏障受损的问题，本发明提供一种保湿抗炎组合物，既能协同增效发挥类维生素D的作用，促进闭合蛋白的合成，促进钙离子的吸收增强免疫功能提高保湿修复效果，又能抑制炎症因子，同时在皮肤上形成保护膜，抵御外界刺激因子的入侵。与此同时，组合物中含有的果糖和棉子糖可以作为益生元，给有益菌提供营养，调节菌群平衡、维护皮肤微生态。
本发明通过以下技术方案得以实现：
本发明提供了一种保湿抗炎组合物，所述组合物包含芍药花提取物、甜菜根提取物和鞘氨醇单胞菌胶及溶剂。
0.5-3份芍药花提取物、0.5-5份甜菜根提取物，0.05-0.5份鞘氨醇单胞菌胶及溶剂，上述份以重量计。
作为优选，所述组合物包含0.5-2份芍药花提取物、1-4份甜菜根提取物，0.05-0.5份鞘氨醇单胞菌胶及溶剂，上述份以重量计。
进一步优选，所述组合物包含1-2份芍药花提取物、3-4份甜菜根提取物，0.05-0.1份鞘氨醇单胞菌胶及溶剂，上述份以重量计。
进一步优选，所述的芍药花提取物通过如下方法得到：
将新鲜的芍药花分拣清洗控干水分后打成匀浆，将浆液导入高压均质机中，均质压力200MPa,均质5-7次，400目纱布过滤后离心，将上清液浓缩至原液体的质量的三分之一，干燥得到芍药花提取物。
进一步优选，所述的甜菜根提取物通过如下方法得到：
将甜菜根分拣清洗后冷冻干燥，粉碎过筛得到干粉，将甜菜根干粉加入5-8份的纯水,浸泡2～3h，超声辅助提取，提取时间为0.5～1h，提取次数为1～3次，固液分离，将得到的溶液逐级通过纱布、1微米超滤膜过滤后冷冻干燥得到甜菜根提取物。
进一步优选，所述组合物通过如下方法制备得到：
将甜菜根提取物加入到30-50份的溶剂中搅拌均匀，加入预先用15份溶剂分散好的芍药花提取物超声混合均匀，加入鞘氨醇单胞菌胶搅拌均匀过滤得到组合物。
进一步优选，所述的溶剂为水、丁二醇、甘油、丙二醇、乙醇中的一种或两种。
本发明还提供了一种化妆品，含有如上所述组合物；所述化妆品包括但不限于水剂、乳剂、喷雾、膏霜、面膜、粉底液。
所述鞘氨醇单胞菌胶，对来源不做限定，可以发酵提取，也可以是市售所得。
本发明具有以下有益效果：该组合物在保湿方面发挥类维生素D的作用，提高维生素D受体的转录活性，一方面促进表皮间的紧密连接；另一方面防止钙离子流失，促进线粒体呼吸作用给细胞供能，高效的能量供应能增强皮肤屏障和免疫功能；在抗炎方面，抑制炎症因子，减少皮肤的炎症反应；组分之间协同作用，给肌肤提供优异的24小时保湿、修复皮肤屏障、减少红血丝的功效。
附图说明
图1为效果例1中实施例1-13和对比例1-3的类维生素D作用率(％)；
图2为效果例2中实施例8、9、10和对照组的1L-1α、1L-6相对含量(％)；
图3为效果例3中丝聚蛋白FLG基因表达量；
图4为效果例3中丝聚蛋白降解相关基因CASP14表达量；
图5为效果例4中实施例8、9、10和空白对照组的闭合蛋白的合成率(％)；
图6为效果例6中使用样品1精华液四周前后皮肤纹理图；
图7为效果例6中使用样品1精华液、空白组四周前后的血红素平均浓度(A.U)。
具体实施方式
以下将通过实施例来详细说明本申请的实施方式，借此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本申请中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备，均来自市售产品。本申请中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
本申请还存在其它多种可实施的技术方案，在此不做一一列举，本申请权利要求中要求保护的技术方案都是可以实施的。
本申请的组合物通过如下方法进行制备。
芍药花提取物：
将新鲜的芍药花分拣清洗控干水分后打成匀浆，将浆液导入高压均质机中，均质压力200MPa,均质5-7次，400目纱布过滤后离心，将上清液浓缩至原液体的质量的三分之一，干燥得到芍药花提取物。
甜菜根提取物：
将甜菜根分拣清洗后冷冻干燥，粉碎过筛得到干粉，将甜菜根干粉加入5-8份的纯水,浸泡2～3h，超声辅助提取，提取时间为0.5～1h，提取次数为1～3次，固液分离，将得到的溶液逐级通过纱布、1微米超滤膜过滤后冷冻干燥得到甜菜根提取物。
组合物：
将甜菜根提取物加入到30-50份的溶剂中搅拌均匀，加入预先用15份溶剂分散好的芍药花提取物超声混合均匀，加入鞘氨醇单胞菌胶搅拌均匀过滤得到组合物。
其中溶剂为水、丁二醇、甘油、丙二醇、乙醇中的一种或两种。
实施例
在本发明下述的实施例及对比例中，如下具有保湿抗炎的组合物所采用的具体制备工艺如下：
(1)将新鲜的芍药花分拣清洗控干水分后打成匀浆，将浆液导入高压均质机中，均质压力200MPa,均质7次，400目纱布过滤后离心，将上清液浓缩至原液体质量的三分之一，干燥得到芍药花提取物；
(2)将甜菜根分拣清洗后冷冻干燥，粉碎过筛得到干粉，将甜菜根干粉加入5份的纯水,浸泡2.5h，超声辅助提取，提取时间为0.7h，提取次数为3次，固液分离，将得到的溶液逐级通过纱布、1微米超滤膜过滤后冷冻干燥得到甜菜根提取物
(3)将甜菜根提取物加入到45份的纯水中搅拌均匀，加入预先用15份丁二醇分散好的芍药花提取物超声混合均匀，加入鞘氨醇单胞菌胶搅拌均匀过滤得到组合物。
所述鞘氨醇单胞菌胶，为发酵所得，在发酵罐中32-35℃培养24h鞘氨醇单胞菌,得到发酵液，发酵液加入4倍体积乙醇，析出固体过滤得到固体胶，用乙醇洗涤2-3次，干燥除去溶剂得到鞘氨醇单胞菌胶。
表1所示为实施例1-13及对比例1-3中各组合物的组成(以质量计)。根据表1并采用上述方法制备各实施例及对比例的组合物，并对所得组合物进行功效测试。
表1
效果例1：检测维生素D受体的转录活性
利用荧光素报告基因检测法检测维生素D受体(VDR)的转录活性，VDR普遍存在于细胞内，维生素D通过血液传送至全身，并与细胞核内的维生素D受体(VDR)结合后，就会与DNA上的维生素D反应元件(VDRE)相结合。培养正常人体表皮细胞，播种于96孔培养板，培养24h。利用分子生物学技术构建含有荧光素酶报告基因的载体转染表皮细胞，培养24h,添加实施例1-13(1％wt)、对比例1-3(1％wt)和骨化三醇100nmol/L、空白对照、添加作为基质的荧光素之后，培养24h。培养结束后溶解细胞，通过测量发光的强度就能推测维生素D的转录活性。处理后的细胞悬液经荧光酶标仪测定后，读取荧光值并处理数据结果见图1。
类维生素D作用率＝(测试荧光强度/对照组荧光强度)*100％
实验结果表明：
(1)对比实施例1-13和对比例1-3，实施例1-13的作用率明显高于对比例1-3，说明组合物组分之间存在协同增效的作用，功效强于单一组分的作用；
(2)对比实施例1-5，作用率先增长后趋于缓慢，组合物中芍药花提取物的优选范围为1-2份；对比实施例1、6、7、8、9，实施例8、9效果相差不大，组合物中甜菜根提取物的优选范围为3-4份；对比实施例8、10、11、12，作用率的变化呈现缓慢的先增长后下降的趋势，综合价格、稳定性、肤感等因素的考虑，组合物中鞘氨醇单胞菌胶的优选份数为0.05-0.1份，本发明的优选例为实施例8、9、10。
效果例2：基于HaCat细胞抗炎测试
IL1-α，IL-6为炎症因子，用ELISA法检测空白组、脂多糖(LPS)诱导的HaCat细胞炎症反应后的模型组，实施例8、9、10浓度1％wt培养后的IL1-α，IL-6含量，检测组合物的抗炎效果。用1μg/ml LPS刺激HaCat细胞后，将待测样品(10X)以每孔100μl加入12孔细胞板，于37℃ 5％CO2恒温培养箱培养72h。每个细胞板均设置阴性对照组(细胞+培养基)，每个浓度组3个复孔。收集细胞培养上清，通过ELISA检测试剂盒进行抗炎功效评价。测试结果见图2,以空白组检测的含量为参考量，即为100％。
结果表明，实施例8、9、10可以很好的抑制LPS刺激后炎症因子的产生，具有显著的抗炎效果，同时意味着组合物提高了钙离子的吸收量有助于提高皮肤的免疫功能。
效果例3：角质细胞基因表达试验
丝聚蛋白Filaggrin(FLG)是角质细胞终末分化的重要条件，对表皮的分化形成有重要作用，Caspase14(CASP14，天冬胺酶蛋白水解酶)催化FLG分解成天然保湿因子，在角质形成细胞终末分化以及皮肤屏障形成中扮演重要角色，二者结合成为皮肤表面屏障构成的重要条件，作为评价皮肤屏障功能状态的指标。
采用实时荧光定量PCR法检测组合物对靶标基因表达量的调节，阴性对照(细胞不加药，NT)，阳性对照(透明质酸0.01％wt，HA)，实施例8(0.5％wt)，实施例9(0.5％wt)、实施例10(0.5％wt)。HaCaT细胞以3*105/孔接种至6孔板上，培养24h，细胞贴壁生长。将待测样品配制成1X，每孔2ml加入细胞板，于37℃5％CO2恒温培养箱继续孵育24h之后，收集细胞，应用PureLink mini RNA抽提试剂盒对细胞总RNA进行提取，核酸浓度定量，每管200-800ngRNA作为模板，Taqman一步法反应(逆转录+Real Time-PCR)进行实时定量荧光PCR检测各个基因的相对表达量(20μl体系)。
计算公式：Fold change＝2-ΔΔCT；
-ΔΔCT＝[(CT靶标基因–CT内参基因)treated sample-(CT靶标基因–CT内参基因)untreated sample]。此试验中，靶标基因2个，分别为FLG﹑CASP14，内参基因1个，为GAPDH。
结果分别如图3-4所示。
其中：
1)FLG基因表达上，实施例8-10显著诱导其表达，且作用比透明质酸强，与NT相比FLG基因的表达显著增加；
2)天冬胺酶蛋白水解酶的表达上，实施例8-10显著提高CASP14基因的表达，且作用比透明质酸强；
效果例4：检测闭合蛋白的合成率
角质形成细胞的闭合蛋白基因是受维生素D受体的转录活性影响而表达的基因，闭合蛋白是细胞紧密连接蛋白中的重要组成部分。表皮细胞添加浓度为1％的组合物8、9、10培养后，Hoechst33342法检测DNA的量，推测平均单位DNA的闭合蛋白合成率。实验结果见图5.
实验数据表明，实施例8、9、10均明显促进了闭合蛋白的合成，说明组合物发挥了类维生素D的作用，提高紧密连接的合成率，改善了皮肤屏障功能。
效果例5：保湿测试
将优选例实施例8、空白对照制成组分如下表4的组成成分的精华液样品1、空白组样品，进行保湿测试选取30名受试者(15名维生素D充足的志愿者，15名维生素D不足的志愿者)前臂曲侧测定区域为2×2cm2，使用样品1、对照样品涂于待测区域，用手指套拍拍吸收；分别在使用前、使用后0h、2h、4h、8h、24h使用Corneometer(CK,Germany)测量角质层水分含量，同一个点测定3次，取3次的平均值记录。
表4
| 组成成分 | 样品1(含量％) | 空白组(含量％) |
| 水 | To 100％ | To 100％ |
| 黄原胶 | 0.02 | 0.02 |
| 甘油 | 3 | 3 |
| 植酸钠 | 0.02 | 0.02 |
| 对羟基苯乙酮 | 0.1 | 0.1 |
| 甘油聚醚-26 | 0.3 | 0.3 |
| 丁二醇 | 2 | 2 |
| 胆甾醇聚醚-24 | 0.3 | 0.3 |
| 苯氧乙醇 | 0.3 | 0.3 |
| 乙基己基甘油 | 0.1 | 0.1 |
| 卡波姆 | 0.05 | 0.05 |
| 氨丁三醇 | 0.03 | 0.03 |
| 保湿抗炎组合物 | 3 | 0 |
实验结果见表5，结果表明：
(1)将空白组样品和样品1对比后，发现本发明的组合物具有非常优异的即时保湿效果，8h、24h的保湿效果强于对照样品；
(2)将维生素D不足人群/样品1与维生素D充足人群/空白组相比，同时刻保湿效果强于空白组，表明本发明的组合物可以具有优异的保湿效果，可以明显改善皮肤干燥。
(注：角质层水分增减率＝(产品使用后角质层水分含量-使用前角质层水分含量)÷产品使用前角质层水分含量×100％)
表5
效果例6：人体面部临床测试
选取15名维生素D不足皮肤屏障受损的志愿者，分别使用含有样品1和空白组的精华液，每天早晚各使用一次，分别在产品使用前、持续使用4周后用经表皮失水率测试探头Tewameter(CK,Germany)测量面部经表皮失水率，用利用Antera 3D进行面部拍照，测试皮肤粗糙度和血红素浓度。经皮水分散失(Trans Epidermal Water Loss,TEWL)反应角质层的屏障功能，可用来评价化妆品对皮肤屏障的修复能力。在测试条件下，得到的TEWL值越高，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失量越多，皮肤屏障功能较差，反之皮肤屏障功能较好，即TEWL值降低越多，产品对皮肤屏障的修复能力越强。Antera软件通过测量平均粗糙度Ra，使用一个粗糙面校正选项来确定皮肤纹理。根据一个实际表面与其理想形式的垂直偏差来定量粗糙度。如果这些偏差较大，表面就是粗糙的；如果偏差较小，表面就是光滑的，平均粗糙度Ra变小，皮肤粗糙度改善越明显。选取受试者不同时间段的同一部位，分析血色素平均浓度的变化以及血色素的变化，血色素平均浓度降低的越多，红血丝的改善效果越好。
Tewl值变化率＝(产品使用4周后Tewl值-使用前Tewl值)÷使用前Tewl值×100％。
实验结果:TEWL测试结果见表6，样品1对皮肤屏障有明显修复能力，可以修复因维生素D不足导致的皮肤屏障受损。
表6
部分使用样品1精华液四周前后皮肤纹理图见图6，使用样品1精华液四周后，皮肤平均粗糙度下降了15.04％，样品1具有明显的改善皮肤粗糙的效果。(空白组无明显变化)
使用样品1精华液四周前后的血红素平均浓度变化见图7，使用样品1精华液四周后，血红素浓度降低13.68％，说明样品1具有明显的改善红血丝的效果。
本申请说明书中未作详细描述的内容属于本领域技术人员的公知常识。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内，本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。
还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的商品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种商品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系统中还存在另外的相同要素。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围。
Claims (9)
1.一种保湿抗炎组合物，其特征在于，所述组合物包含以下的组分，芍药花提取物、甜菜根提取物和鞘氨醇单胞菌胶以及溶剂。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.5-3份芍药花提取物、0.5-5份甜菜根提取物，0.05-0.5份鞘氨醇单胞菌胶以及溶剂，上述份以重量计。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.5-2份芍药花提取物、1-4份甜菜根提取物，0.05-0.5份鞘氨醇单胞菌胶以及溶剂，上述份以重量计。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含1-2份芍药花提取物、3-4份甜菜根提取物，0.05-0.1份鞘氨醇单胞菌胶以及溶剂，上述份以重量计。
5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述的芍药花提取物通过如下方法得到：
将新鲜的芍药花分拣清洗控干水分后打成匀浆，将浆液导入高压均质机中，均质压力200MPa,均质5-7次，400目纱布过滤后离心，将上清液浓缩至原液体的质量的三分之一，干燥得到芍药花提取物。
6.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述的甜菜根提取物通过如下方法得到：
将甜菜根分拣清洗后冷冻干燥，粉碎过筛得到干粉，将甜菜根干粉加入5-8份的纯水,浸泡2～3h，超声辅助提取，提取时间为0.5～1h，提取次数为1～3次，固液分离，将得到的溶液逐级通过纱布、1微米超滤膜过滤后冷冻干燥得到甜菜根提取物。
7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，通过如下方法制备得到：
将甜菜根提取物加入到30-50份的溶剂中搅拌均匀，加入预先用15份溶剂分散好的芍药花提取物超声混合均匀，加入鞘氨醇单胞菌胶搅拌均匀过滤得到组合物。
8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的溶剂为水、丁二醇、甘油、丙二醇、乙醇中的一种或两种。
9.一种化妆品，其特征在于，含有如权利要求1所述组合物；所述化妆品包括但不限于水剂、乳剂、喷雾、膏霜、面膜、粉底液。
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