CN113329999A

CN113329999A - 具有雄激素受体降解活性的新型取代的喹啉-8-甲腈衍生物及其用途

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Publication number: CN113329999A
Application number: CN202080010552.4A
Authority: CN
Inventors: 范捷; Y.钱; W.何; 刘坷
Original assignee: Accutar Biotechnology Inc
Current assignee: Accutar Biotechnology Inc
Priority date: 2019-09-23
Filing date: 2020-06-01
Publication date: 2021-08-31
Anticipated expiration: 2040-06-01
Also published as: US10836749B1; EP3795570B1; JP2023120446A; US20210087169A1; US20230135173A1; KR20220079883A; EP3795570A1; IL291590A; JP7307796B2; IL291590B1; JP2022534147A; IL291590B2; CN113329999B; US11312702B2; WO2021061204A1; EP4089083A1; CA3155290A1

Abstract

本发明涉及新型化合物、含有此类化合物的药物组合物，以及它们在预防和治疗癌症和相关疾病和病症中的用途。在一些实施方案中，本文所公开的化合物表现出雄激素受体降解活性。

Description

具有雄激素受体降解活性的新型取代的喹啉-8-甲腈衍生物及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求享有2019年9月23日提交的美国临时专利申请No.62/904,007的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及新型化合物、含有此类化合物的药物组合物，以及它们在预防和治疗疾病和病症(例如，癌症)中的用途。本文所公开的化合物表现出雄激素受体降解活性。

发明背景

雄激素通过与雄激素受体(AR)结合，控制着一系列生理过程。例如，雄激素是前列腺正常发育和功能所必需的，因为它们是AR信号传导通路的关键。但不幸的是，AR信号传导通路也与癌症(例如，前列腺癌、乳腺癌等癌症)的发展和存活有关(参见，例如，“AndrogenReceptor in Prostate Cancer”,Endocrine Reviews,2004,25(2),276-308；and“Androgen receptors beyond prostate cancer:ann old marker as a new target”,Oncotarget,2014,6(2),592-603)。

治疗AR相关癌症(例如，前列腺癌)的传统方法包括通过例如雄激素阻断疗法来抑制AR信号传导。这种疗法包括化学阉割和/或手术阉割。或者，可以进行抗雄激素疗法，即使用AR抑制剂(例如，恩杂鲁胺

)对患者进行治疗。尽管这些治疗方法改善了雄激素受体阳性癌症患者的预后，但最终通过例如AR基因扩增和/或AR突变发展，还是发生并观察到了癌症进展。

因此，需要一种即使个体已经接受过一种或多种先前疗法，但依然能够阻止癌症进展的AR阳性癌症治疗方法。实现这一目标的一种方法是利用天然存在的细胞泛素介导降解。不受任何理论的约束，普遍认为当AR和泛素连接酶结合并接近时，会发生AR降解。

Cereblon(“CRBN”)E3泛素连接酶是一种与受损的DNA结合蛋白1和Cullin 4形成E3泛素连接酶复合物的泛素连接酶。它通过使底物接近而进行泛素化，随后被蛋白酶体降解而发挥底物受体的功能。近年来，人们发现，小分子药物(例如，沙利度胺及其类似物、来那度胺和泊马度胺)可以同时与CRBN和一些其他蛋白质相互作用。这样做，CRBN可用于靶蛋白降解，例如IKZF1和IKZF3。这被认为是沙利度胺和相关化合物具有抗骨髓瘤作用的原因。

因此，本文公开了可用于治疗癌症(例如，前列腺癌)的化合物。在一些情况下，该癌症为AR阳性癌症。本文所公开的化合物是双功能分子，其中该分子的一部分能够与CRBN相互作用，而通过连接部分与该分子的与CRBN相互作用的部分连接的另一部分能够与AR相互作用。

发明内容

在一些实施方案中，本发明涉及一种式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X₁为CR₁或N；

X₂为CR₂或N；

X₃为CR₃或N；

X₄为CR₄或N；

R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的氢、卤素、C₁-C₃烷氧基和C₁-C₃卤代烷基；

每个R₅独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的卤素、羟基、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷基、-N(R₉)₂和-CN；

每个R₆独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的氢、卤素、C₁-C₃烷基和C₁-C₃卤代烷基，或者两个R₆基团一起形成氧代；

每个R₇独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的卤素、羟基、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷基、-N(R₉)₂和-CN；

每个R₈独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的氢、羟基、C₁-C₃烷基和C₁-C₃卤代烷基，或者两个R₈基团一起形成氧代；

每个R₉独立地选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的氢、C₁-C₃烷基、-C(＝O)-(C₁-C₃烷基)、-C(＝O)-O-(C₁-C₃烷基)和-C(＝O)-NH-(C₁-C₃烷基)，或者两个R₉基团一起形成3至6元杂环或杂芳基；

每个R_S独立地选自卤素、羟基、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤代烷基、-N(R₉)₂和-CN；

L是长度为1至16个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；并且

o为0、1、2或3，

其中，每个氢原子独立地且任选地由氘原子替代。

在一些实施方案中，式(1)所示的化合物可以是式(1A)所示的化合物

在一些实施方案中，

基团可选自

在一些实施方案中，

基团可选自

在一些实施方案中，

基团可选自

在一些实施方案中，L可选自：

本文还公开了一种治疗有此需要的受试者癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用式(1)(例如式(1A))所示的化合物或其医药上可接受的盐，或施用包含式(1)所示化合物或其医药上可接受的盐的药物组合物。在至少一个实施方案中，本发明的药物组合物可用于治疗有此需要的受试者的癌症，或用于制备治疗有需要的受试者癌症的药物。

在至少一个实施方案中，可以向诊断为患有癌症的受试者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一些实施方案中，该癌症选自前列腺癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、结缔组织癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌和乳腺癌。

附图说明

并入本说明书并构成本说明书一部分的附图示出了所公开的实施方案，并与说明书一起解释了所公开实施方案的原理。在附图中：

图1示出了化合物2-22和2-32在施用后24小时使用蛋白质免疫印迹分析(Westernblot analysis)确定的在LNCAP细胞系中的雄激素受体(AR)降解活性。

具体实施方式

定义

如本文所使用的，“癌症”是指涉及细胞异常生长并有可能侵入或扩散到身体其他部位的疾病、病状和病症。示例性癌症包括但不限于，前列腺癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、结缔组织癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌和乳腺癌。

如本文所使用的，术语“雄激素受体阳性”是指，通过一种或多种分析方法(例如，免疫组织化学)检测到了雄激素受体。例如，对受试者肿瘤活检的分析可能表明存在雄激素受体。AR状态可以通过血液检测中的循环癌细胞或循环肿瘤DNA来进行检测。在一些情况下，可以不进行AR检测。

“受试者”是指已经或将要成为治疗、观察或实验对象的动物，例如哺乳动物。本文所述的方法可用于人类治疗和兽医应用。在一个实施方案中，该受试者是人。

如本文所使用的，“治疗”是指疾病或病状或其至少一种可辨别症状得到改善。在另一个实施方案中，“治疗”是指至少一个可测量物理参数的改善，这个参数患者不一定能够识别。在又一个实施方案中，“治疗”是指在物理上抑制疾病或病状的进展(例如，稳定可辨别症状)，或在生理上抑制疾病或病状的进展(例如，稳定物理参数)，或者两者兼而有之。在又一个实施方案中，“治疗”是指延缓疾病或病状的发作。

不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)用来表示取代基的连接点。例如，-CN是通过碳原子连接的。

“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括事件或情况发生的情况和不发生的情况。本领域技术人员应当理解，对于含有一个或多个取代基的任何基团，这些基团不旨在引入空间上不切实际、合成上不可行和/或固有不稳定的任何取代或取代模式。

在列出一个值范围时，旨在包含这个范围内的每个值和子范围。例如，“C₁-C₆烷基”旨在包含C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C_1-6、C_1-5、C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-5、C_2-4、C_2-3、C_3-6、C_3-5、C_3-4、C_4-6、C_4-5和C_5-6烷基。

本文所使用的术语“烯基”是指具有碳碳双键的不饱和双碳基团，在本文中称为C₂-烯基。

本文所使用的术语“烷氧基”是指与氧原子共价结合的烷基或环烷基。

本文所使用的术语“烷基”是指饱和直链或支链烃基，例如1至8个碳原子的直链或支链基团，在本文中称为(C₁-C₈)烷基。示例性烷基基团包括但不限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。在一些实施方案中，“烷基”是直链烃基。在一些实施方案中，“烷基”是支链烃基。

本文所使用的术语“炔基”是指具有碳-碳三键的不饱和双碳基团，在本文中称为C₂-炔基。

本文中所使用的术语“芳基”是指具有5至14个环原子的单、双或其他多碳环、芳环系统。芳基基团可任选地与选自芳基、环烷基、杂芳基和杂环基的一个或多个环稠合。本发明的芳基基团可由选自烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳烷基、氨基甲酸酯、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤素、卤代烷基、杂芳基、杂环基、羟基、酮、硝基、磷酸酯、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮的基团取代。示例性芳基基团包括但不限于，苯基、甲苯基、蒽基、芴基、茚基、薁基(azulenyl)和萘基，以及诸如5,6,7,8-四氢萘基的苯并稠合碳环部分。示例性芳基基团还包括但不限于单环芳环系统，其中，该环包含6个碳原子，在本文中称为“C₆-芳基”。

本文中所使用的术语“环烷基”是指3至16个碳或3至8个碳的饱和或不饱和环状、双环或桥联双环烃基基团，在本文中称为“(C₃-C₈)环烷基”，衍生自环烷烃。示例性环烷基基团包括但不限于，环己烷、环己烯、环戊烷和环戊烯。环烷基基团可被烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳烷基、氨基甲酸酯、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤素、卤代烷基、杂芳基、杂环基、羟基、酮、硝基、磷酸酯、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮取代。环烷基基团可与其它环烷基(饱和或部分不饱和)、芳基或杂环基基团稠合，形成双环、四环等。术语“环烷基”还包括桥联和螺稠合环状结构，其可包含或不包含杂原子。

本文所使用的术语“卤代”或“卤素”是指F、-Cl、-Br和/或-I。

本文所使用的术语“卤代烷基基团”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基基团。

本文所使用的术语“杂芳基”是指含有一个或多个杂原子(例如，1至4个杂原子，如氮、氧和硫)的单环、双环或多环芳环系统。杂芳基可被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基包括烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳烷基、氨基甲酸酯、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤素、卤代烷基、杂芳基、杂环基、羟基、酮、硝基、磷酸酯、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮。杂芳基也可以与非芳环稠合。杂芳基基团的说明性示例包括但不限于，吡啶基、哒嗪基、嘧啶基(pyrimidyl)、吡嗪基(pyrazyl)、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-三唑基和(1,2,4)-三唑基、吡嗪基、嘧啶基(pyrimidilyl)、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、苯基、异噁唑基和噁唑基。示例性杂芳基基团包括但不限于，单环芳环，其中，该环包含2至5个碳原子和1至3个杂原子，在本文中称为“(C₂-C₅)杂芳基”。在一些实施方案中，杂芳基包含5至10个环原子，其中的1至4个是选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，杂芳基包含5至8个环原子，其中的1至4个是选自N、O和S的杂原子。

本文所使用的术语“杂环”、“杂环基”均指饱和或不饱和的3至18元环，该环包含独立地选自氮、氧、磷和硫的一个、两个、三个或四个杂原子。杂环可以是芳香的(杂芳基)或非芳香的。杂环可被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基包括烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳烷基、氨基甲酸酯、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤素、卤代烷基、杂芳基、杂环基、羟基、酮、硝基、磷酸酯、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮。杂环还包含双环、三环和四环基团，其中上述杂环中的任何一个与独立地选自芳基、环烷基和杂环的一个或两个环稠合。示例性杂环包括吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、生物素基(biotinyl)、噌啉基(cinnolinyl)、二氢呋喃基、二氢吲哚基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二噻唑基、呋喃基、高哌啶基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噁唑烷基、异噁唑基、吗啉基、噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑烷基、吡嗪基、吡唑基、吡唑啉基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基(pyrimidinyl，pyrimidyl)、吡咯烷基、吡咯烷-2-酮基(pyrrolidin-2-onyl)、吡咯啉基、吡咯基、喹啉基、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢吡喃基、四氢喹啉基、四唑基、噻二唑基、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、硫代吗啉基、噻喃基和三唑基。在一些实施方案中，杂环包含5至10个环原子，其中的1至4个是选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，杂环包含5至8个环原子，其中的1至4个是选自N、O和S的杂原子。

本文所使用的术语“羟基”是指-OH。

本文所使用的术语“氧代”是指与氧原子结合的双键(即，＝O)。例如，当碳原子上的两个成对基团“在一起形成氧代”时，就形成了羰基(即C＝O)。

本文所使用的术语“药学上可接受的载体”是指与药物施用相容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和试剂用于药物活性物质的用途在本领域中是众所周知的。该组合物还可包含补充、附加或增强治疗功能的其他活性化合物。

如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐形式，其中，该盐是无毒的。本发明化合物的药学上可接受的盐包括从合适的无机和有机酸和碱中提取的那些盐。例如，化合物的“游离碱”形式不含离子键合盐。

参考本发明的一种或多种化合物或式，短语“及其药学上可接受的盐和氘代衍生物”可与“及其药学上可接受的盐和前述任何项的氘代衍生物”互换使用。这些短语旨在涵盖任何一种参考化合物的药学上可接受的盐、任何一种参考化合物的氘代衍生物以及这些氘代衍生物的药学上可接受的盐。

本领域普通技术人员应当认识到，当公开了“一种化合物或其药学上可接受的盐”的量时，化合物的药学上可接受的盐形式的量是相当于化合物的游离碱浓度的量。注意，本文所述化合物或其医药上可接受的盐的所公开量是基于其游离碱形式的。

合适的药学上可接受的盐是例如下述文献中公开的那些：S.M.Berge,etal.J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19。例如，该文章的表1提供了以下药学上可接受的盐：

表1:

药学上可接受的酸加成盐的非限制性实例包括：由诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸或高氯酸的无机酸形成的盐；由诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸的有机酸形成的盐；以及通过使用本领域使用的其他方法(例如，离子交换)形成的盐。药学上可接受的盐的非限制性实例包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲基磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐和戊酸盐。衍生自适当碱的药学上可接受的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明还设想了本文所公开化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。碱金属盐和碱土金属盐的合适的非限制性实例包括钠、锂、钾、钙和镁。药学上可接受的盐的其他非限制性实例包括使用诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐的反离子形成的铵阳离子、季铵阳离子和胺阳离子。药学上可接受的盐的其他合适的非限制性实例包括苯磺酸盐(besylate)和葡糖胺盐。

如本文所使用的，包括有机化合物在内的化合物的命名可使用通用名称、IUPAC、IUBMB或CAS推荐的命名法。如果给定一个名称，则本领域技术人员可以通过使用命名习惯系统地还原化合物结构，或者通过商业上可获得的软件，例如CHEMDRAW^TM(CambridgesoftCorporation,U.S.A.)，轻松地确定化合物的结构。

本发明的化合物可含有一个或多个手性中心和/或双键，因此以立体异构体形式存在，例如，几何异构体、对映体或非对映体。本文中所使用的术语“立体异构体”包括所有几何异构体、对映体或非对映体。这些化合物可以用符号“R”或“S”来表示，这取决于立体碳原子周围取代基的构型。本发明包含这些化合物的各种立体异构体及其混合物。立体异构体包括对映体和非对映体。在命名时可指定对映体或非对映体的混合物为“(±)”，但本领域技术人员应当认识到，结构可以隐含地表示手性中心。在一些实施方案中，可提供基本不含相应对映体的对映体或立体异构体。

在一些实施方案中，该化合物是(S)-异构体和(R)-异构体的外消旋混合物。在其他实施方案中，本文提供了化合物的混合物，其中，该混合物中的单个化合物主要以(S)-异构体或(R)-异构体构型存在。例如，该化合物混合物具有大于约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％或更多的(S)-对映体过量。在其他实施方案中，该化合物混合物具有大于约55％至约99.5％、大于约60％至约99.5％、大于约65％至约99.5％、大于约70％至约99.5％、大于约75％至约99.5％、大于约80％至约99.5％、大于约85％至约99.5％、大于约90％至约99.5％、大于约95％至约99.5％、大于约96％至约99.5％、大于约97％至约99.5％、大于约98％至约99.5％、大于约99％至约99.5％或更多的(S)-对映体过量。在其他实施方案中，该化合物混合物具有大于约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％或更高的(R)-对映体纯度。在一些其他实施方案中，该化合物混合物具有大于约55％至约99.5％、大于约60％至约99.5％、大于约65％至约99.5％、大于约70％至约99.5％、大于约75％至约99.5％、大于约80％至约99.5％、大于约85％至约99.5％、大于约90％至约99.5％、大于约95％至约99.5％、大于约96％至约99.5％、大于约97％至约99.5％、大于约98％至约99.5％、大于约99％至约99.5％或更高的(R)-对映体过量。

本发明化合物的单个立体异构体可由含有不对称或立体中心的市售起始材料合成制备，或通过制备外消旋混合物，然后采用本领域普通技术人员熟知的拆分方法制备。这些拆分方法举例如下：(1)将对映体的混合物连接到手性助剂上，通过重结晶或色谱法分离所得到的非对映体混合物，并从助剂中释出光学纯产物；(2)使用光学活性拆分剂形成盐；或(3)在手性色谱柱上直接分离光学对映体混合物。立体异构体混合物也可以通过众所周知的方法拆分成其组分立体异构体，例如，手性相气相色谱法、手性相高效液相色谱法、将化合物结晶为手性盐复合物，或在手性溶剂中结晶化合物。立体异构体也可以通过众所周知的不对称合成方法由立体异构纯中间体、试剂和催化剂获得。

本发明的化合物中也可存在几何异构体。本发明包含由取代基围绕碳-碳双键排列或取代基围绕碳环排列而产生的各种几何异构体及其混合物。碳-碳双键周围的取代基被指定为“Z”或“E”构型，其中，术语“Z”和“E”根据IUPAC标准使用。除非另有说明，否则描述双键的结构均包括E异构体和Z异构体。

碳-碳双键周围的取代基也可称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示双键同侧的取代基，“反式”表示双键相对侧的取代基。碳环周围的取代基排列被指定为“顺式”或“反式”。术语“顺式”表示环平面同侧的取代基，术语“反式”表示环平面相对侧的取代基。取代基位于环平面同侧和相对侧的化合物的混合物被指定为“顺式/反式”。

本文所公开的化合物可作为互变异构体存在，并且两种互变异构形式旨在包含在本发明的范围内，即使仅对一种互变异构结构进行了描述。

此外，除非另有说明，否则本文所述的结构还意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子存在时不同的化合物。例如，除了用氘(²H)或氚(³H)替换氢，或用¹³C-或¹⁴C-碳原子替换碳之外，具有本发明结构的化合物均在本发明的范围内。此类化合物可用作例如分析工具、生物测定用探针或治疗剂。

化合物

在一些实施方案中，本文提供了式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，以及前述任何项的氘代衍生物：

其中：

X₁为CR₁或N；

X₂为CR₂或N；

X₃为CR₃或N；

X₄为CR₄或N；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；并且

o为0、1、2或3。

在一些实施方案中，X₁为N。在一些实施方案中，X₂为N。在一些实施方案中，X₁和X₂各自均为N。在一些实施方案中，X₂为CR₂，X₃为CR₃，X₄为CR₄。在一些实施方案中，R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。在一些实施方案中，X₂为CR₂，X₃为CR₃，X₄为CR₄，并且R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。在一些实施方案中，X₁为CR₁，X₂为CR₂，X₃为CR₃，X₄为CR₄。在一些实施方案中，R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。在一些实施方案中，X₁为CR₁，X₂为CR₂，X₃为CR₃，X₄为CR₄，并且R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。

在一些实施方案中，R₁为F。在一些实施方案中，R₂为F。在一些实施方案中，R₃为F。在一些实施方案中，R₄为F。在一些实施方案中，R₁和R₃各自均为F。在一些实施方案中，R₃和R₄各自均为F。在一些实施方案中，R₂、R₃和R₄各自均为H。在一些实施方案中，R₁、R₃和R₄各自均为H。在一些实施方案中，R₁、R₂和R₄各自均为H。在一些实施方案中，R₁、R₂和R₃各自均为H。在一些实施方案中，R₂和R₄各自均为H。在一些实施方案中，R₁和R₂各自均为H。

在一些实施方案中，

基团选自

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，每个R₅独立地选自卤素、C₁-C₃烷氧基和C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，每个R₅独立地选自-Cl、-OCH₃和-CF₃。

在一些实施方案中，m为0或1。在一些实施方案中，m为0。在一些实施方案中，m为1。

在一些实施方案中，o为0或1。在一些实施方案中，o为0。在一些实施方案中，o为1。

在一些实施方案中，m和o各自均为0。

在一些实施方案中，每个R₆独立地选自H和C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，每个R₆独立地选自H和-CH₃。在一些实施方案中，一个R₆为H，另一个R₆为-CH₃。在一些实施方案中，每个R₆均相同。在一些实施方案中，每个R₆均不同。

在一些实施方案中，基团

选自

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

选自

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，基团

为

在一些实施方案中，每个R₇独立地选自卤素、羟基、C₁-C₃烷基和C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，每个R₇独立地选自卤素、羟基、-CH₃和-CF₃。在一些实施方案中，每个R₇独立地选自F、羟基、-CH₃和-CF₃。在一些实施方案中，每个R₇独立地为F。

在一些实施方案中，n为0。在一些实施方案中，n为1。

在一些实施方案中，每个R₈均为氢，或者两个R₈基团一起形成氧代。在一些实施方案中，每个R₈均为氢。在一些实施方案中，两个R₈基团一起形成氧代。

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团选自

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，

基团为

在一些实施方案中，每个R₉独立地选自氢、C₁-C₃烷基和-C(＝O)-C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，每个R₉独立地选自氢和C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，每个R₉独立地选自氢、-CH₃、-CH₂CH₃和-CH(CH₃)₂。

在一些实施方案中，L为长度为1至12个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。在一些实施方案中，L为长度为1至10个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。在一些实施方案中，L为长度为1至8个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。在一些实施方案中，L为长度为1至6个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

在一些实施方案中，连接基L的一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代。在一些实施方案中，连接基L的一个或多个碳原子任选地由O、N(R₉)、环烷基或杂环替代，其中，R₉、环烷基和杂环各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。在一些实施方案中，连接基L的至少一个碳原子由杂环替代，其中，杂环被0、1、2或3个R_S取代。在一些实施方案中，连接基L的至少两个碳原子由杂环替代，其中，杂环各自被0、1、2或3个R_S取代。

在一些实施方案中，L中的杂环选自各自均被0、1、2或3个R_S取代的哌啶和哌嗪。在一些实施方案中，L中的杂环选自

在一些实施方案中，L选自：

在一些实施方案中，本文提供了一种式(1)所示化合物的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种式(1)所示化合物的药学上可接受的盐的氘代衍生物。在一些实施方案中，本文提供了一种式(1)所示化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种式(1A)所示化合物。

在一些实施方案中，本文提供了一种从表2所列化合物中选择的化合物或其互变异构体、立体异构体或医药上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物。

表2.本发明的示例性化合物

药物组合物

本发明的药物组合物包含式(1)(例如，式(1A))所示的至少一种化合物，或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或与药学上可接受的载体一起配制而成的前述任何项的氘代衍生物。这些制剂包括适于口服、直肠、局部、颊部和肠道外(例如，皮下、肌肉内、皮内或静脉内)施用的制剂。在任何给定情况下，最合适的施用形式将取决于所治疗病症的程度和严重性以及所用特定化合物的性质。

适合口服施用的制剂可以呈离散单元，例如胶囊、扁囊剂(cachet)、锭剂或片剂，各自均含有预定量的粉末或颗粒状本发明化合物；或水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或水包油或油包水乳液。如上所述，此类制剂可通过任何合适的药剂制备方法来制备，所述药剂制备方法包括使至少一种本发明的化合物作为活性化合物与载体或赋形剂(其可构成一种或多种配合剂)结合的步骤。该载体必须在与制剂的其他成分相容的意义上是可接受的，并且不得对接受者有害。该载体可以是固体或液体，或二者，并且可以使用在单位剂量制剂(例如，片剂)中作为活性化合物的至少一种本文所述化合物来配制，其可含有约0.05重量％至约95重量％的该至少一种活性化合物。也可以存在其他药理学活性物质，包括其他化合物。本发明的制剂可以通过任何众所周知的药剂制备技术来制备，基本上是将组分进行混合。

对于固体组合物而言，传统的无毒固体载体包括例如，医药级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。例如，液体药理学上可施用的组合物可通过例如将本文所述的本发明的至少一种活性化合物以及任选的药用辅剂溶解或分散在赋形剂(例如，水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等)中，从而形成溶液或悬浮液来制备。通常情况下，合适的制剂可以通过将本发明的至少一种活性化合物与液体或精细分散的固体载体(或二者)混合，之后(如有必要)进行塑形来制备。例如，片剂可以通过将本发明的至少一种活性化合物的粉末或颗粒进行压缩或模制来制备，所述粉末或颗粒可任选地与一种或多种配合剂组合。压缩片剂可以通过将自由流动形式(例如，粉末或颗粒)的本发明的至少一种化合物在合适的机器中进行压缩来制备，所述至少一种化合物可任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂/分散剂混合。模制片剂可以通过将粉末形式的本发明的至少一种化合物用惰性液体稀释剂湿润后在合适的机器中进行模制来制备。

适用于颊部(舌下)施用的制剂包括在调味基料(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含本发明的至少一种化合物的锭剂，以及在惰性基料(例如，明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中包含本发明的至少一种化合物的含片。

适用于肠道外施用的本发明制剂包含式(1)(例如，式(1A)所示的至少一种化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物的无菌水性制剂，其与预期接受者的血液大致等渗。这些制剂静脉内使用，但施用也可能受到皮下、肌肉内或皮内注射的影响。此类制剂可方便地通过将本文所述的至少一种化合物与水混合，并使所得溶液无菌且与血液等渗来制备。根据本发明的可注射组合物可含有约0.1重量％至约5重量％的活性化合物。

适用于直肠施用的制剂呈现为单位剂量栓剂呈现。这些栓剂可以通过将本文所述的至少一种化合物与一种或多种传统固体载体(例如，可可脂)混合，然后对所得混合物进行塑形来制备。

适用于皮肤局部施用的制剂可以是软膏、乳膏、乳液、膏剂、凝胶、喷雾、气溶胶或油的形式。可使用的载体和赋形剂包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇及前述各项中二者或二者以上的组合。该活性化合物(即，式(1)(例如，式(1A))所示的至少一种化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物)通常以约0.1重量％至约15重量％的浓度存在，例如，约0.5％至约2％。

所施用的活性化合物的量可取决于被治疗的受试者、受试者的体重、施用方式以及处方医师的判断。例如，给药方案可包括每天或每半天施用感知剂量为约1μg至约1000mg的胶囊化合物。在另一个实施方案中，可采用间歇施用(例如每月或每年)一剂胶囊化合物的方式。胶囊形式有助于进入作用部位，并使得可以同时施用各活性成分，理论上产生协同效应。根据标准的给药方案，医师可以很容易地确定最佳剂量，并且能够很容易地进行调整以实现这样的剂量。

本文所公开的化合物或组合物的治疗有效量可以通过该化合物的治疗效果来测量。然而，剂量可根据患者的需要、所治疗病症的严重程度以及所使用的化合物而有所变化。在一个实施方案中，所公开化合物的治疗有效量应足以达到最大血药浓度。例如，根据动物试验确定的初步剂量，以及根据本领域接受的做法进行人类施用剂量的缩放。

可以在细胞培养物和实验动物中通过标准制药流程确定毒性和治疗效果，例如，用于确定LD₅₀(对50％人群的致死剂量)和ED₅₀(对50％人群的治疗有效剂量)。毒性效果与治疗效果的剂量比是治疗指数，可用比值LD₅₀/ED₅₀表示。优选的治疗指数大的组合物。

从细胞培养试验或动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的一系列剂量。在一种动物模型中获得的治疗有效剂量可使用本领域已知的换算因子转换为在另一种动物(包括人类)中使用(参见，例如，Freireich et al.,Cancer Chemother.Reports 50(4):219-244(1966)and the following table(Table 3)for Equivalent Surface AreaDosage Factors)。

表3.等效表面积剂量因子

此类化合物的剂量优选在循环浓度范围内，该循环浓度范围包括毒性很小或没有毒性的ED₅₀。根据所使用的剂型和所采用的施用途径，剂量可在此范围内变化。通常情况下，治疗有效量可随受试者的年龄、病症和性别以及受试者医学状况的严重程度而变化。剂量可由医师确定并根据需要进行调整，以适应所观察到的治疗效果。

治疗方法

在一些实施方案中，施用式(1)(例如，式(1A))所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物，以治疗有此需要的受试者癌症。在一些实施方案中，该癌症选自前列腺癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、结缔组织癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌和乳腺癌。在一些实施方案中，该癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，该癌症为头颈癌。在一些实施方案中，该癌症为皮肤癌。在一些实施方案中，该癌症为肉瘤。在一些实施方案中，该癌症为肾细胞癌。在一些实施方案中，该癌症为肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，该癌症为膀胱癌。在一些实施方案中，该癌症为肺癌。在一些实施方案中，该癌症为胃癌。在一些实施方案中，该癌症为食管癌。在一些实施方案中，该癌症为胰腺癌。

在一些实施方案中，该癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，该癌症为结缔组织癌。在一些实施方案中，该癌症为多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，该癌症为子宫颈癌。在一些实施方案中，该癌症为子宫癌。在一些实施方案中，该癌症为卵巢癌。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌。

在一些实施方案中，该癌症为雄激素受体阳性癌症。

在一些实施方案中，施用式(1)(例如，式(1A))所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物，作为药物组合物。

在一些实施方案中，该受试者先前已接受了抗癌剂治疗。在一些实施方案中，该抗癌剂是恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺、达洛鲁胺、氟他胺、阿比特龙或前述任何项的组合。在一些实施方案中，该抗癌剂是恩杂鲁胺。

在一些实施方案中，本文提供了式(1)(例如，式(1A))所示化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物用于治疗癌症的用途。在一些实施方案中，该癌症选自前列腺癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、结缔组织癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌和乳腺癌。在一些实施方案中，该癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，该癌症为头颈癌。在一些实施方案中，该癌症为皮肤癌。在一些实施方案中，该癌症为肉瘤。在一些实施方案中，该癌症为肾细胞癌。在一些实施方案中，该癌症为肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，该癌症为膀胱癌。在一些实施方案中，该癌症为肺癌。在一些实施方案中，该癌症为胃癌。在一些实施方案中，该癌症为食管癌。在一些实施方案中，该癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，该癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，该癌症为结缔组织癌。在一些实施方案中，该癌症为多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，该癌症为子宫颈癌。在一些实施方案中，该癌症为子宫癌。在一些实施方案中，该癌症为卵巢癌。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，该癌症为雄激素受体阳性癌症。

在一些实施方案中，本文提供了式(1)(例如，式(1A))所示化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物在药物制备中的用途。在一些实施方案中，该药物是用于治疗癌症的。在一些实施方案中，该癌症选自前列腺癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌、结缔组织癌、多形性胶质母细胞瘤、子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌和乳腺癌。在一些实施方案中，该癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，该癌症为头颈癌。在一些实施方案中，该癌症为皮肤癌。在一些实施方案中，该癌症为肉瘤。在一些实施方案中，该癌症为肾细胞癌。在一些实施方案中，该癌症为肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，该癌症为膀胱癌。在一些实施方案中，该癌症为肺癌。在一些实施方案中，该癌症为胃癌。在一些实施方案中，该癌症为食管癌。在一些实施方案中，该癌症为胰腺癌。在一些实施方案中，该癌症为结直肠癌。在一些实施方案中，该癌症为结缔组织癌。在一些实施方案中，该癌症为多形性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，该癌症为子宫颈癌。在一些实施方案中，该癌症为子宫癌。在一些实施方案中，该癌症为卵巢癌。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，该癌症为雄激素受体阳性癌症。

在一些实施方案中，本文提供了一种抑制细胞生长的方法，该方法包括使细胞与式(1)(例如，式(1A))所示化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物接触。在一些实施方案中，该细胞为癌细胞。在一些实施方案中，该癌细胞为前列腺癌细胞。在一些实施方案中，该细胞为雄激素受体阳性细胞。

在一个实施方案中，式(1)(例如，式(1A))所示的化合物或其互变异构体、立体异构体、药学上可接受的盐或水合物可与另一种治疗剂组合施用。相对于单独施用本发明的化合物，该另一种治疗剂可提供累加或协同价值。该治疗剂可选自例如，激素和激素类似物；信号转导通路抑制剂；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶Ⅱ抑制剂；抗代谢肿瘤剂(antimetabolite neoplastic agent)；抗生素肿瘤剂(antibiotic neoplastic agent)；烷化剂；抗微管剂；铂配位络合物；芳香酶抑制剂；以及抗有丝分裂剂。

在一些实施方案中，该治疗剂可以是激素或激素类似物。在一些实施方案中，该治疗剂可以是信号转导通路抑制剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是拓扑异构酶I抑制剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是拓扑异构酶II抑制剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是抗代谢肿瘤剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是抗生素肿瘤剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是烷化剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是抗微管剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是铂配位络合物。在一些实施方案中，该治疗剂可以是芳香酶抑制剂。在一些实施方案中，该治疗剂可以是抗有丝分裂剂。

在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可选自阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑、法曲唑、依西美坦和福美司坦。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂是阿那曲唑。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可以是来曲唑。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可以是伏氯唑。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可以是法曲唑。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可以是依西美坦。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂可以是福美司坦。

在一些实施方案中，抗有丝分裂剂可选自紫杉醇、多西他赛和白蛋白结合型紫杉醇(Abraxane)。在一些实施方案中，抗有丝分裂剂可以是紫杉醇。在一些实施方案中，抗有丝分裂剂可以是多西他赛。在一些实施方案中，抗有丝分裂剂可以是白蛋白结合型紫杉醇。

在一些实施方案中，式(1)(例如，式(1A))所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与激素或激素类似物组合施用。在一些实施方案中，式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与信号转导通路抑制剂组合施用。在一些实施方案中，式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与抗代谢肿瘤剂组合施用。在一些实施方案中，式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与拓扑异构酶I抑制剂组合施用。在一些实施方案中，式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与拓扑异构酶II抑制剂组合施用。在一些实施方案中，式(1)所示的化合物或其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐，或前述任何项的氘代衍生物可与芳香酶抑制剂组合施用。

实施例

下文提供的实施例和制剂进一步示出并举例说明了本文所公开的化合物以及制备此类化合物的方法。应当理解，本发明的范围不以任何方式受到以下实施例和制剂的限制。

本文所述的化学实体可根据一个或多个本文所述的说明性方案和/或本领域熟知的技术来合成。除非另有相反说明，否则本文所述的反应是在大气压力下，通常在约-10℃至约200℃的温度范围下发生的。此外，除非另有说明，否则反应时间和反应条件预期为近似的，例如，在大约大气压力下，约-10℃至约200℃的温度范围下发生，时间可为例如约1小时至约24小时；在一些实施方案中，需过夜的反应平均持续时间可为约16小时。

如果需要，本文所述的化学实体和中间体的分离和纯化可受到任何合适的分离或纯化流程的影响，例如过滤、萃取、结晶、柱色谱法、薄层色谱法或厚层色谱法或这些流程的组合。参见，例如，Carey et al.Advanced Organic Chemistry,3^rd Ed.,1990New York:Plenum Press；Mundy et al.,Name Reaction and Reagents in Organic Synthesis,2^ndEd.,2005Hoboken,NJ:J.Wiley&Sons。下文通过参考实施例给出了关于合适分离流程的具体说明。但是，也可以使用其他等效的分离流程。

在所有的方法中，应当理解，必要时，可以根据一般化学原理使用用于敏感或反应基团的保护基团。保护基团的操作根据标准的有机合成方法进行(T.W.Greene andP.G.M.Wuts(1999)Protective Groups in Organic Synthesis,3^rd Ed.,John Wiley&Sons)。这些基团可以在化合物合成的合适阶段使用本领域技术人员显而易见的方法去除。

需要时，非限制性示例性化合物的(R)-异构体和(S)-异构体(如果存在)可以通过本领域技术人员已知的方法来拆分，例如，通过形成可例如通过结晶分离的非对映异构盐或复合物；通过形成可例如通过结晶、气液色谱法或液相色谱法分离的非对映异构衍生物；使一种对映体与对映体特异性试剂选择性反应(例如，酶促氧化或还原)，然后分离经修饰和未经修饰的对映体；或通过在手性环境中进行气液色谱法或液相色谱法，例如在手性载体(例如，具有结合型手性配体的二氧化硅)上或在手性溶剂的存在下。或者，可以通过使用光学活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成，或通过不对称转化将一种对映体转化为另一种对映体来合成特定的对映体。

本文所述的化合物可以任选地与药学上可接受的酸接触，形成相应的酸加成盐。此外，本文所述的化合物可以任选地与药学上可接受的碱接触，形成相应的碱加成盐。

在一些实施方案中，所公开的化合物通常可以通过通常熟知的合成方法的适当组合来合成。基于本发明，用于合成这些化学实体的技术对于相关领域的技术人员来说是显而易见的，也是可获得的。许多任选取代的起始化合物和其他反应物可例如从MilliporeSigma商购获得，或可由本领域技术人员利用常用的合成方法轻松地制备。

下面的讨论是为了说明可用于制备所公开化合物的某些不同方法，而并不是为了限制可用于制备本文所提供化合物的反应或反应顺序的范围。本领域技术人员应当理解，除非另有说明，否则标准原子价适用于本文所公开的所有化合物属或命名化合物。

在Shimadzu LC-2010A上通过HPLC检查本文所述实施例的所有最终化合物的纯度，并在214nM和254nM的波长处对化合物进行检测。根据HPLC峰(214nM和254nM波长)，所有最终化合物的纯度均超过95％。液相色谱条件：柱：XBRIDGE C18，3.6微米，2.1x50mm；流动相：水(0.05％TFA)和乙腈(0.05％TFA)，线性梯度从10％乙腈到100％乙腈超过7分钟；烘箱温度45℃；流速：0.8mL/mL。在Bruker 400MHz NMR光谱仪上，得到H-NMR。

缩写列表

CAN：乙腈

AcOH：乙酸

BSA：苯磺酸

DCM：二氯甲烷

DEAD：N,N-偶氮二甲酸二乙酯

DIEA：二异丙基乙胺

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DMAP：4-二甲氨基吡啶

DMSO：二甲基亚砜

EA：乙酸乙酯

HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐

HPLC：高效液相色谱法

HRMS：高分辨率质谱法

IBX：2-碘酰苯甲酸

LC/MS：液相色谱-质谱联用法

MW：微波

NMI：N-甲基咪唑

NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮

NMR：核磁共振

PTSA：对甲苯磺酸

TCFH：N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐

TEA：三乙胺

THF：四氢呋喃

TLC：薄层色谱法

Prep-TLC：制备型薄层色谱法

TFA：三氟乙酸

一般合成方案

式(1)(例如，式(1A)；参见表2中的化合物)所示的化合物可根据以下方案进行制备。以下方案表示制备这些化合物的一般方法。然而，这些化合物的合成并不限于这些代表性方法，因为它们也可以由合成化学领域的技术人员以例如逐步或模块化方式通过各种其他方法来制备。

方案1：合成2-1.

化合物2-2可根据方案1中所述的方法合成。

方案2：合成2-6.

化合物2-3、2-4、2-5可根据与方案2所述相似的方法制备。

方案3：合成2-7.

方案4：合成2-13.

化合物2-14、2-15、2-16和17可根据与方案4类似的方法合成。

方案5：合成2-18.

化合物2-19、2-20和2-46可通过相同的方法合成。

方案6：合成2-22.

该相同的方法可用于合成2-21。

方案7：合成2-43.

化合物2-23、2-24、2-25、2-26、2-27和2-28可利用类似的合成路径制备。

方案8：合成2-32.

以下化合物可根据与方案6类似的合成方法合成：2-29、2-30、2-31、2-33、2-34和2-49。

方案9：合成2-11.

以下化合物可根据与方案9类似的合成方法合成：2-8、2-9、2-10、2-12和2-44。

方案10：合成2-36.

化合物2-35、2-47、2-48和2-50可利用相同的方法合成。

方案11：合成2-37.

化合物2-38、2-39和2-40可利用方案11所述的相同路径制备。

方案12：合成2-41和2-42.

方案13：合成2-45.

中间体的制备

合成反式-5-[3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)]喹啉-8-甲腈盐酸盐(中间体1-1)

步骤1：制备5-氟喹啉-8-甲腈

将含有8-溴-5-氟喹啉(2.00g，8.85mmol，1.00当量)、Pd(PPh₃)₄(1.02g，884.7umol，0.10当量)和Zn(CN)₂(2.01g，17.1mmol，1.08mL，1.93当量)的混合物放入微波管的DMF(20.0mL)中。将密封的管在微波条件下在150℃下加热0.5小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1，R_f(起始材料)＝0.50，R_f(产物)＝0.32)显示，起始材料完全消耗。平行重复四次反应，并将所得的反应物合并用于后处理(workup)。将混合物倒入水(300.0mL)中，用EtOAc(80.0mL x 2)萃取。用盐水(150.0mL)洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥，之后过滤，并在减压下进行浓缩，得到残余物。将粗产物在用石油醚/乙酸乙酯(50/1至1/1)洗脱的硅胶上通过柱色谱法进行纯化，得到白色固体形式的标题化合物(3.20g，产率52.1％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.18(dd,J＝4.44,1.65Hz,1H),8.52(dd,J＝8.40,1.65Hz,1H),8.14(dd,J＝8.40,5.51Hz,1H),7.64(dd,J＝8.44,4.30Hz,1H),7.32(t,J＝8.40Hz,1H)。

步骤2：制备反式-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯

在15℃下，向ACN(30.0mL)中含5-氟喹啉-8-甲腈(1.60g，9.29mmol，1.00当量)和反式-3-羟基-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(2.26g，9.29mmol，1.00当量)的溶液中，添加Cs₂CO₃(6.06g，18.5mmol，2.00当量)，然后将混合物在100℃下搅拌4小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1，R_f(起始材料)＝0.51，R_f(产物)＝0.39)显示，起始材料完全消耗。过滤混合物，用EtOAc(30.0mL)洗涤滤饼，在真空中浓缩合并的有机层。将粗产物在用石油醚/乙酸乙酯(50/1至1/1)洗脱的硅胶上通过柱色谱法进行纯化，得到白色固体形式的标题化合物(1.70g，产率46.3％)。

步骤3：制备反式-5-[3-氨基-2,2,4,4-四甲基环丁氧基)]喹啉-8-甲腈盐酸盐(中间体1-1)

在0℃下，向DCM(10.0mL)中含反式-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.70g，4.30mmol，1.00当量)的溶液中，添加HCl(g)/EtOAc(4.00M，30.0mL，27.9当量)，并将混合物搅拌0.5小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1，R_f(起始材料)＝0.53，R_f(产物)＝0)显示，起始材料完全消耗。过滤混合物，用DCM(10.0mL)洗涤固体，并在真空下干燥，得到黄色固体盐酸盐形式的标题化合物(1.33g，产率92.4％，纯度99.1％)。LC/MS 296.3(M+H)+；¹H NMR:(400MHz,MeOD)δ9.19-9.30(m,2H),8.42(d,J＝8.40Hz,1H),8.04(dd,J＝8.84,5.2Hz,1H),7.21(d,J＝8.44Hz,1H),4.70(s,1H),3.40(s,1H),1.48(s,6H),1.34(s,6H)。

合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(中间体1-2)

中间体1-2根据上述方案使用文献中描述的类似方法制备为盐酸盐。LC/MS 343.1[M+H]⁺；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δppm 7.76(d,J＝8.36Hz,1H),7.47(s,1H),7.35(dd,J＝8.36,1.54Hz,1H),5.09(br dd,J＝12.8,5.40Hz,1H),3.67-3.74(m,4H),3.37-3.42(m,4H),2.63-2.94(m,3H),2.07-2.17(m,1H)。

合成(S)-3-(6-氟-1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体1-3)

步骤1：制备2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯

在10℃下，将氯化亚砜(130g，1.09mol)缓慢地添加到2-溴-4,5-二氟苯甲酸(200g，0.84mol)在MeOH(600mL)中的混合物中，将混合物在80℃下搅拌3小时。TLC显示，反应完成。将混合物冷却至室温，进行浓缩，然后在乙酸乙酯和水之间分配。用饱和Na₂CO₃和盐水洗涤有机层两次，经Na₂SO₄干燥，并进行浓缩，得到粗产物2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯(210g，产率100％)，无需进行进一步纯化，将其用于下一步骤。

步骤2：制备4-(5-溴-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

将N,N-二甲基乙酰胺(600mL)中含2-溴-4,5-二氟苯甲酸甲酯(210g，0.84mol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(234g，1.25mol)和K₂CO₃(173g，1.25mol)的混合物在80℃下搅拌16小时。TLC显示，反应完成。将混合物添加到水(2L)中，并搅拌10分钟，之后加入乙酸乙酯。将混合物在乙酸乙酯和水之间分配。用水、盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，并进行浓缩，得到4-(5-溴-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(315.8g，产率：90％)。

步骤3：制备4-(5-氰基-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

将DMF(1.2L)中含4-(5-溴-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(306g，0.73mol)和CuCN(98g，1.09mol)的混合物在100℃下搅拌16小时。TLC显示，反应完成。将混合物冷却至室温。加入乙酸乙酯(2L)和氢氧化铵(2L)，之后将混合物搅拌30分钟。过滤该混合物。用水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，并进行浓缩，得到粗产物(254g)。在回流下，将该粗产物放入石油醚(1L)中。将混合物过滤，并在50℃烘箱中进行干燥，得到4-(5-氰基-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(215g，产率：81％)。

步骤4：制备4-(2-氟-5-甲酰基-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

在室温下，向吡啶(391g，4.95mol)、水(200mL)、乙酸(264g，4.4mol)的溶液中，添加4-(5-氰基-2-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200g，0.55mol)和雷尼镍(85％在水中，100g)。将所得的混合物加热至60℃。向混合物中逐滴加入次磷酸钠(500mL水中292g)。将混合物在60℃下搅拌16小时。TLC显示，反应未完成。将混合物再搅拌10小时。之后将混合物冷却至室温。加入乙酸乙酯和水。过滤混合物。用水、1N HCl和盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，并在减压下进行浓缩，得到粗产物(208g，粗产物)，通过硅胶垫将该粗产物进一步纯化，得到4-(2-氟-5-甲酰基-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸酯(86.5g，产率：43％)。

步骤5：制备(S)-4-(2-(1-氨基-5-(叔-丁氧基)-1,5-二氧代戊-2-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

在室温下，向甲醇(500mL)中含4-(2-氟-5-甲酰基-4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(81.5g，0.22mol)的溶液中，添加(S)-4,5-二氨基-5-氧代戊酸叔丁酯(54g，0.27mol)。在0℃下加入乙酸(19.8g，0.33mol)，然后缓慢加入氰基硼氢化钠(27.6g，0.44mol)。将混合物在室温下搅拌16小时。TLC显示，反应完成。将混合物浓缩，并在乙酸乙酯和水之间分配。用饱和柠檬酸、盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥，并在减压下进行浓缩，得到粗产物，通过硅胶垫将该粗产物进一步纯化，得到(S)-4-(2-(1-氨基-5-(叔-丁氧基)-1,5-二氧代戊-2-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(80g，产率：69％)。

步骤6：制备(S)-3-(6-氟-1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮苯磺酸(中间体1-3)

向乙腈(670mL)中含(S)-4-(2-(1-氨基-5-(叔-丁氧基)-1,5-二氧代戊-2-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酸酯(67g，0.13mol)的溶液中，添加苯磺酸(43g，0.26mol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LCMS显示，反应完成。将混合物冷却至室温。过滤该混合物并干燥，得到灰白色固体形式的(S)-3-(6-氟-1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮苯磺酸(56g，86％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.94-1.99(m,1H),2.35-2.43(m,1H),2.58-2.62(m,1H),2.88-2.91(m,1H),3.30(br s,8H),4.38(d,J＝17.2Hz,1H),4.26(d,J＝17.2Hz,1H),5.08(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),7.29-7.35(m,4H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),7.60(m,2H),8.72(br s,2H),10.99(s,1H).LCMS m/z 347.3[M+1]⁺。

合成(S)-3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体1-4)

向乙腈(90mL)中含(S)-4-(2-(1-氨基-5-叔-丁氧基-1,5-二氧代戊-2-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.8g，12mol，使用与中间体1-3相同的方法制备)的溶液中，添加苯磺酸(3.64g，23mol)。将混合物在85℃下搅拌12小时。LC/MS显示，反应完成。将混合物在真空中进行浓缩。将残余物用乙酸乙酯研磨，得到灰白色固体形式的(S)-3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮苯磺酸盐(5.2g，93％)。LC/MS 329.1[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.95-1.99(m,1H),2.36-2.41(m,1H),2.58-2.62(d,1H),2.88-2.91(m,1H),3.26(s,4H),3.49-3.52(m,4H),4.21-4.38(dd,2H),5.05-5.10(dd,1H),7.12-7.16(m,2H),7.30-7.358(m,3H),7.58-7.62(m,3H),8.72(s,2H),11.0(s,1H)。

合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(中间体1-5)

中间体1-5根据上述方案制备为盐酸盐。LC/MS 361.1[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.1(s,1H),9.49(br s,2H),7.79(d,J＝11.2Hz,1H),7.57(br d,J＝7.32Hz,1H),5.12(br dd,J＝12.4,5.32Hz,1H),3.50(br s,4H),3.24(br s,4H),2.80-2.95(m,1H),2.52-2.69(m,2H),1.97-2.10(m,1H)。

实施例化合物的制备

通过HPLC检查本节和表2中所述实施例的所有最终化合物的纯度，并在214nM和254nM波长处对化合物进行检测。根据HPLC峰分析(214nM和254nM波长)，所有最终化合物的纯度均大于95％。在Bruker NMR光谱仪(400MHz)上获得H-NMR。在安捷伦6125上，在以下条件下进行LC/MS：色谱柱：Waters CORTECS C18，2.7um，4.6x30 mm；流动相：ACN(0.05％TFA)和水(0.05％TFA)；梯度：1.0分钟内5％ACN至95％ACN，保持1.0分钟，总计2.5分钟；流速：1.8mL/min；色谱柱温度：45℃。在岛津LC-2010A上在以下条件下进行分析型HPLC：色谱柱：XBRIDGE 3.5um，2.1x 50mm；流动相：水(0.05％TFA)和ACN(0.05％TFA)；梯度：7分钟内ACN从10％至100％，保持1分钟；色谱柱烘箱温度：45℃；流速：0.8mL/min。

实施例1：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((((1r,3r)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-9)

步骤1：制备2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮

向在室温下在氮气下搅拌的乙酸(350mL)中含3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(8.7g，52.5mmol)的溶液中，添加5-羟基异苯并呋喃-1,3-二酮(8.7g，52.5mmol)和Et₃N(11.7g，115.5mmol)。然后将反应混合物在120℃下搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温并过滤，得到粗产物。将粗产物在水(50mL)中搅拌1小时，过滤，用水(20mL)洗涤，并干燥，得到黄色固体形式的期望产物(11.4g，5.4mmol，79％产率)。LC/MS:274.8[M+1]⁺。

步骤2：制备((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯

向在60℃下在氢气下搅拌的THF(50mL)中含2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(5.7g，20.8mmol)、(1,3-顺式)-N-(3-羟基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(3.9g，20.8mmol)和PPh₃(6.5g，24.9mmol)的溶液中，添加DEAD(4.3g，24.9mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物过滤，并在真空中蒸发。通过硅胶柱色谱法(DCM:MeOH＝10:1)对残余物进行纯化，得到黄色固体形式的粗产物(11g，17.4mmol，纯度70％，产率83％)。

步骤3：制备5-((1,3-反式)-3-氨基环丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮

向DCM(30mL)中含((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(11g，17.4mmol，纯度70％)的溶液中，添加TFA(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，并在真空中蒸发，得到粗产物。将粗产物进行后处理，并通过硅胶柱色谱法(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，得到红色固体形式的期望产物(1.4g，4mmol，产率23％)。LC/MS:343.9[M+1]⁺。

步骤4：制备6-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

将DMSO(10mL)中含6-氯烟酸叔丁酯(500mg，2.35mmol)、哌啶-4-基甲醇(297mg，2.58mmol)和DIEA(606mg，4.70mmol)的混合物在100℃下搅拌过夜。TLC显示，反应完成。将混合物在EA和H₂O之间分配。用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，并蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶色谱法(10-50％EtOAc/己烷溶液作为洗脱液)进行纯化，得到期望化合物(400mg，58.3％)。LC/MS:293.2[M+H]⁺。

步骤5：制备6-(4-甲酰基哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

将DMSO(10mL)中含6-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(574mg，1.97mmol)和IBX(658mg，2.35mmol)的混合物在50℃下搅拌过夜。TLC显示，反应完成。将混合物在EA和H2O之间分配。用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，并蒸发至干燥。用10-50％EtOAc/己烷溶液作为洗脱液，将粗产物通过硅胶色谱法进行纯化，得到期望化合物(400mg，70％)。LC/MS:291.0[M+H]+。

步骤6：制备6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

向在室温下在氮气下搅拌的DCM(10mL)中含6-(4-甲酰基哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(50mg，0.17mmol)、5-((1,3-反式)-3-氨基环丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(58.36mg，0.17mmol)和三乙胺(86.01mg，0.85mmol)的溶液中，添加MgSO₄(204mg，1.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。然后在0℃下分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(90.07mg，0.43mmol)，并将反应混合物在室温下再搅拌2小时。过滤反应混合物，并在真空中蒸发滤液，得到粗产物。将粗产物通过用CH₂Cl₂和MeOH(10/1)洗脱的Prep-TLC进行纯化，得到黄色固体形式的期望产物(40mg，0.06mmol，产率35.3％)。LC/MS:617.6[M+1]⁺。

步骤7：制备6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

将HCOOH(4mL)中含6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(40mg，0.06mmol)和(HCHO)_n(2mL)的溶液在室温下搅拌3小时。然后在0℃下分批添加NaBH₄(226.99mg，6mmol)。将反应物在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在真空中蒸发，得到粗产物。将残余物溶解在DCM(150mL)中，用水(20mL)洗涤，并在真空中蒸发，得到粗产物。将粗产物通过用CH₂Cl₂和MeOH(10:1)洗脱的Prep-TLC进行纯化，得到黄色固体形式的期望产物(30mg，0.047mmol，产率79.2％)。LC/MS:631.6[M+1]⁺。

步骤8：制备6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸

将DCM/TFA(5mL，DCM/TFA ＝2:1)中含6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(30mg，0.05mmol)的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在真空中蒸发，得到黄色固体形式的期望产物(25mg，0.04mmol，产率91.4％)。LC/MS:575.6[M+1]+。

步骤9：制备N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((((1r,3r)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-9)

向在室温下在氮气下搅拌的DMF(5mL)中含6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸(20mg，0.03mmol)和HATU(19.8mg，0.05mmol)的溶液中，添加N,N-二异丙基乙胺(49.62mg，0.35mmol)和中间体1-1(11.54mg，0.035mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在真空中蒸发，得到粗产物，将粗产物通过Prep-TLC(CH₂Cl₂/MeOH＝10:1)进行纯化，得到白色固体形式的期望产物(11mg，0.01mmol，产率28.7％)。LCMS m/z852.6[M+1]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.11(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.66(s,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.98(d,J＝8.7Hz,1H),7.89–7.82(m,1H),7.79–7.73(m,1H),7.68(d,J＝9.2Hz,1H),7.30(br s,2H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),6.90(brs,1H),5.13(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.97(m,1H),4.49(s,1H),4.46(d,J＝12.4Hz,2H),4.16(d,J＝8.8Hz,1H),4.05(br m,1H),3.25-2.80(m,5H),2.78-2.54(m,4H),2.30-1.97(m,6H),1.75(m,2H),1.35-1.12(m,15H).HRMS计算值C48H52N8O7 m/z 852.3959,实测值853.4297。

实施例2：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((((1r,3r)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-11)

步骤1：制备2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((1,3-反式)-3-(异丙氨基)环丁氧基)异吲哚啉-1,3-二酮

将DCM(20mL)中含5-((1,3-反式)-3-氨基环丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(600mg，1.75mmol)、丙酮(1016mg，17.5mmol)、TEA(354mg，3.5mmol)和MgSO₄(4.2g，35mmol)的溶液在室温下在氮气下搅拌30分钟。然后在0℃下分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(927mg，4.375mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物过滤，用水洗涤有机层，用DCM(50mL)进行萃取，并进行浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，得到白色固体形式的期望产物(200mg，0.51mmol，产率29.3％)。LC/MS:385.7[M+1]⁺。

步骤2：制备6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

向在室温下搅拌的无水THF(5ml)中含2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((1,3-反式)-3-(异丙氨基)环丁氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(70mg，0.18mmol)的溶液中，添加6-(4-甲酰基哌啶-1-基)吡啶-3-甲酸叔丁酯(78mg，0.27mmol)、钛酸四异丙酯(50mg)和AcOH(50mg)，将反应混合物在室温下搅拌24小时，然后缓慢加入Na(OAc)₃BH(95mg，0.4499mmol)(每0.5小时0.5当量)。将反应混合物在室温下搅拌2天。将反应物用10mL的MeOH稀释，进行过滤，并在真空下浓缩，得到粗产物，将粗产物通过快速柱色谱法(DCM/MeOH＝10:1)进行纯化，得到黄色固体形式的6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(60mg，50.5％)。LC/MS:659.6[M+H]⁺。

步骤3：制备6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸

将TFA/DCM(1:3，8mL)中含6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(60mg，0.09mmol)的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物在真空下浓缩，得到粗产物(65mg)，将该粗产物直接用于下一步骤。LC/MS:603.6[M+H]⁺。

步骤4：制备N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((((1r,3r)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-11)

向在室温下搅拌的DMF(5mL)中含6-(4-((((1,3-反式)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)哌啶-1-基)烟酸(30mg，0.05mmol)的溶液中，添加NMI(17mg，0.2mmol)和TCFH(17mg，0.06mmol)，然后加入中间体1-1(17mg，0.05mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。通过加入15mL的水使混合物淬灭，用EtOAc(20mL x 3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，进行干燥，并在真空下浓缩，得到粗产物，将粗产物通过Prep-TLC(DCM/MeOH＝10:1)进行纯化，得到期望产物(15mg，34.1％)，LC/MS:880.6[M+H]⁺.1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝11.14(s,1H),9.12(s,1H),8.75(d,J＝8.0Hz,1H),8.67(s,1H),8.32(d,J＝8.0Hz,1H),8.0(d,J＝6.8Hz,1H),7.87(d,J＝6.8Hz,1H),7.77(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(s,2H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),5.18-5.05(m,2H),4.58–4.45(m,3H),4.27-4.14(m,2H),3.63-3.47(m,3H),3.18(br,1H),3.05(br,1H),2.99-2.81(m,2H),2.75(br,1H),2.70-2.58(m,2H),2.29-2.13(m,2H),2.15-1.75(m,4H),1.47(br,1H),1.31(s,6H),1.24(s,9H),0.99-0.75(m,4H).HRMS计算值C50H56N8O7 m/z 880.4272,实测值881.4378。

实施例3：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-13)

步骤1：制备6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯

向二氯甲烷(10mL)中含6-(4-甲酰基哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(200mg，0.69mmol)、中间体1-2(260mg，0.68mmol)、MgSO₄(820mg，6.8mmol)的溶液中，添加Et₃N(140mg，1.36mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后缓慢地将三乙酰氧基硼氢化钠(430mg，2.04mmol)添加到混合物中。将混合物在室温下搅拌过夜。将残余物在真空中浓缩。使用5-10％MeOH/DCM作为洗脱液，通过硅胶色谱法对粗产物进行纯化，得到期望化合物(250mg，59％)。LC/MS:617.3[M+H]⁺。

步骤2：制备6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酸

向二氯甲烷(10mL)中含6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酸叔丁酯(230mg，0.37mmol)的溶液中，添加TFA(2mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。将残余物在真空中浓缩。无需对粗产物进行进一步纯化，将其用于下一步骤。LC/MS:561.1[M+H]⁺。

步骤3：N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-13)

将DMF(7mL)中含6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酸(130mg，粗产物)、中间体1-1(92mg，0.28mmol)、HATU(105mg，0.27mmol)和DIEA(259mg，2.06mmol)的溶液在室温下搅拌过夜。TLC显示，反应完成。将混合物在EA和H₂O之间分配。用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，并蒸发至干燥。将粗产物通过制备型TLC(MeOH:DCM＝1:20)进行纯化，得到期望化合物(60mg，31％)。LC/MS:838.3[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),8.65(d,J＝2.3Hz,1H),8.31(d,J＝8.2Hz,1H),7.96(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.77(dd,J＝8.5,4.3Hz,1H),7.68(dd,J＝12.2,8.9Hz,2H),7.36(s,1H),7.27(d,J＝8.7Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),6.87(d,J＝9.1Hz,1H),5.08(dd,J＝12.9,5.3Hz,1H),4.49–4.41(m,3H),4.17(d,J＝9.2Hz,1H),3.46(br s,4H),2.96–2.85(m,3H),2.69–2.56(m,2H),2.21(d,J＝7.0Hz,2H),2.05-2.01(m,1H),1.90–1.80(m,3H),1.31(s,6H),1.24(s,6H),1.20–1.10(m,2H),4H与DMSO-d6重叠，且未分配。HRMS计算值C47H51N9O6 m/z837.3962,实测值838.4035(M+H]⁺。

实施例4：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-2-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺(2-18)

步骤1：制备2-氯嘧啶-5-甲酸叔丁酯

将t-BuOH(10mL)中含2-氯嘧啶-5-甲酸(2g，12.6mmol)、DMAP(154mg，1.26mmol)和Boc₂O(5.5g，25.2mmol)的混合物在50℃下搅拌过夜。TLC显示，反应完成。将有机相蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶色谱法(10-70％EtOAc/己烷溶液作为洗脱液)进行纯化，得到期望化合物(800mg，29％)。LC/MS:215.2[M+H]⁺。

步骤2至步骤6按照制备2-13中所述的相同流程进行。在进行制备型TLC(MeOH:DCM＝1:20)之后，得到期望化合物2-18。LC/MS:839.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.12(s,1H),10.14(br,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.81(s,2H),8.75(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.83-7.75(m,2H),7.52(s,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.11(dd,J＝12.9,5.2Hz,1H),4.77(d,J＝13.0Hz,2H),4.48(s,1H),4.23(d,J＝12.0Hz,2H),4.16(d,J＝8.7Hz,1H),3.63(d,J＝11.1Hz,2H),3.47(t,J＝12.8Hz,2H),3.22-3.00(m,4H),2.94-2.86(m,1H),2.69-2.54(m,2H),2.35-2.18(m,2H),2.07-1.80(m,4H),1.30(s,6H),1.24(s,6H),1.23-1.10(m,2H)；NRMS计算值C46H50N10O6m/z 838.3915,实测值839.4017[M+H]+。

实施例5：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)哒嗪-3-甲酰胺(2-19)

除使用6-氯哒嗪-3-甲酸叔丁酯外，该化合物的制备方法与2-13所述的方法相同。LC/MS:838.7[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.77(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),8.31(dd,J＝8.7,3.2Hz,2H),7.84(d,J＝9.6Hz,1H),7.77(dd,J＝8.5,4.3Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.41-7.34(m,2H),7.28(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),5.08(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.62(s,1H),4.52(d,J＝13.0Hz,2H),4.13(d,J＝9.1Hz,1H),3.46(br s,4H),3.06(t,J＝12.1Hz,2H),2.88(dd,J＝21.5,9.8Hz,1H),2.69-2.54(m,2H),2.23(d,J＝6.9Hz,2H),2.07-1.82(m,4H),1.31(s,6H),1.25(s,6H),1.25-1.10(m,2H).4H与DMSO-d6重叠，且未分配。HRMS计算值C46H50N10O6 m/z838.3915,实测值839.4018[M+H]⁺。

实施例6：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酰胺(2-21)

除使用4-氟苯甲酸叔丁酯外，该化合物的制备方法与制备2-13所述的方法相同。LC/MS:837.4[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.11(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.74(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.80-7.73(m,3H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),7.35(s,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.00-6.95(m,3H),5.08(dd,J＝5.2,12.4Hz,1H),4.50(s,1H),4.16(d,J＝8.7Hz,1H),3.87(br d,J＝12.4Hz,2H),3.47-3.42(m,4H),2.95-2.73(m,3H),2.62-2.53(m,2H),2.50(m,4H),2.21(br d,J＝6.4Hz,2H),2.07-1.98(m,1H),1.85-1.71(m,3H),1.30(s,6H),1.24(s,6H),1.24-1.11(m,2H)；HRMS计算值C48H52N8O6 m/z 836.4010,实测值837.4094[M+H]⁺。

实施例7：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-22)

该化合物使用与合成2-13中所述类似的方法制备。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化，得到标题化合物(33mg，23％)。LC/MS:854.5[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.12(d,J＝3.1Hz,1H),8.75(d,J＝8.1Hz,1H),8.32(d,J＝8.2Hz,1H),7.83-7.75(m,3H),7.75–7.61(m,2H),7.53-7.27(m,2H),7.12(t,J＝8.5Hz,1H),6.98(d,J＝8.3Hz,1H),5.10(dd,J＝12.6,5.0Hz,1H),4.51(s,1H),4.18(d,J＝8.1Hz,1H),3.62-3.40(m,6H),3.12(br,2H),2.96–2.87(m,1H),2.79(t,J＝11.2Hz,2H),2.66–2.55(m,2H),2.14–1.71(m,4H),1.31(s,6H),1.25(s,6H),1.25-1.10(m,2H).4H与DMSO-d6重叠，且未分配。

实施例8：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-32)

步骤1：制备(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸叔丁酯

向在室温下在氮气下搅拌的DCM(2mL)中含3-氟-4-(4-甲酰基哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯(31mg，0.1mmol)和中间体1-4(48.6mg，0.1mmol)的溶液中，添加硫酸镁(240mg，2mmol)和三乙胺(20mg，0.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。之后分批加入NaBH(OAc)₃(53mg，0.25mmol)。将反应物搅拌1小时。在真空中去除溶剂，得到粗产物，将粗产物通过硅胶柱色谱法(用0-15％MeOH/DCM溶液洗脱)进行纯化，得到标题化合物(60mg，96％)。LC/MS:619.8[M+H]⁺。

步骤2：制备(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸

向DCM(2mL)中含(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸酯(60mg，0.09mmol)的溶液中，添加TFA(0.4mL)。将反应物搅拌过夜。在真空中去除溶剂，得到粗产物(55mg，100％)。LC/MS:563.7[M+H]⁺。

步骤3：制备N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-32)

向在室温下在氮气下搅拌的DMF(2mL)中含(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸(55mg，0.09mmol)和中间体1-1(34mg，0.1mmol)的溶液中，添加HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。在真空中去除溶剂，得到粗产物，将粗产物通过快速柱色谱法进行纯化，得到固体形式的N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(39mg，51％)。LC/MS:841.5[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),7.83–7.73(m,2H),7.72–7.62(m,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,1H),7.15-7.03(m,3H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.50(s,1H),4.34(d,J＝16.8Hz,1H),4.22(d,J＝16.8Hz,1H),4.17(d,J＝8.8Hz,1H),3.50(br d,J＝11.7Hz,2H),3.30(m,4H),2.98–2.87(m,1H),2.76(t,J＝11.2Hz,2H),2.65–2.53(m,5H),2.45–2.30(m,1H),2.26(br d,J＝6.8Hz,2H),2.02–1.93(m,1H),1.90-1.80(m,2H),1.80-1.70(brs,1H),1.31(s和m,7H),1.24(s和m,7H)；HRMS计算值C48H53FN8O5m/z 840.4123,实测值841.4221[M+H]⁺。

实施例9：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-29)

化合物2-9使用与制备2-32类似的方法制备。LC/MS:823.7[M+H]⁺；¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.12(dd,J＝4.0,2.0Hz,1H),8.75(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),8.66(s,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(m,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.14-7.03(m,2H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.8Hz,1H),5.07(dd,J＝13.0,5.0Hz,1H),4.49(s,1H),4.43(br d,J＝11.7Hz,2H),4.34(d,J＝16.8Hz,1H),4.22(d,J＝16.8Hz,1H),4.17(d,J＝8.7Hz,1H),3.30(br s,4H),2.98-2.80(m,3H),2.70-2.50(m,4H),2.45–2.30(m,2H),2.20(br d,2H),2.01–1.78(m,4H),1.31(s,6H),1.24(s,6H),1.24-1.03(m,2H)；HRMS计算值C47H53N9O5 m/z 823.4170,实测值824.4475[M+H]⁺。

实施例10：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-2-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺(2-30)

化合物2-30使用与制备2-32相同的方法制备。LC/MS:824.5[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.12(s,1H),8.83(s,1H),8.75(dd,J＝8.4Hz,1H),8.31(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(m,1H),7.76(m,1H),7.68-7.45(m,2H),7.23-7.05(m,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.07(m,1H),4.76(br d,J＝12.0Hz,2H),4.52(s,1H),4.36(d,J＝16.8Hz,1H),4.23(d,J＝16.8Hz,1H),4.16(d,J＝8.6Hz,1H),3.30-3.26(m,4H),3.15-2.80(m,3H),2.70-2.54(m,2H),2.47-2.30(m,4H),2.22(m,2H),2.05-1.75(m,4H),1.35-1.05(m,14H).HRMS计算值C46H52N10O5 m/z 824.4122,实测值825.4199[M+1]⁺。

实施例11：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)哒嗪-3-甲酰胺(2-31)

化合物2-31使用与制备2-32类似的方法制备。LC/MS:825.5[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),9.11(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),8.76(d,J＝8.5Hz,1H),8.35–8.27(m,2H),7.85(d,J＝9.5Hz,1H),7.79–7.75(m,1H),7.58–7.50(m,1H),7.42–7.35m,1H),7.17–7.03(m,2H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(dd,J＝13.2,4.8Hz,1H),4.61(s,1H),4.52(d,J＝13.0Hz,2H),4.34(d,J＝17.0Hz,1H),4.22(d,J＝17.1Hz,1H),4.14(d,J＝9.1Hz,1H),3.30–3.26(m,4H),3.20–3.03(m,2H),2.96–2.84(m,1H),2.68–2.53(m,5H),2.43–2.32(m,1H),2.22(m,2H),2.02–1.78(m,4H),1.32–1.08(m,14H)；HRMS计算值C46H52N10O5 m/z 824.4122,实测值825,4214[M+H]⁺。

实施例12：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)哒嗪-3-甲酰胺(2-35)

化合物2-35使用与制备2-32类似的方法制备，且中间体1-5用于还原胺化步骤中。LC/MS:856.4[M+1]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.12(s,1H),9.11(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.76(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),8.31(dd,J＝8.7,3.4Hz,2H),7.84(d,J＝9.6Hz,1H),7.79–7.72(m,2H),7.47(d,J＝6.8Hz,1H),7.38(d,J＝9.5Hz,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),5.12(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.61(s,1H),4.52(d,J＝12.8Hz,2H),4.12(d,J＝9.1Hz,1H),3.27(br s,4H),3.05(t,J＝11.9Hz,2H),2.89–2.55(m,1H),2.70–2.52(m,6H),2.28–2.20(m,2H),2.11–2.01(m,1H),1.99–1.75(m,3H),1.31(s,6H),1.23(s,6H),1.19–1.13(m,2H).HRMS计算值C46H49FN10O6 m/z 856.3821,实测值857.3925。

实施例13：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)烟酰胺(2-36)

化合物2-36使用与制备2-32类似的方法制备，且中间体1-5用于还原胺化步骤中。LC/MS:855.5[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.12(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.66(s,1H),8.32(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(m,1H),7.85–7.69(m,3H),7.47(d,J＝8.7Hz,1H),6.99(d,J＝8.8Hz,1H),6.87(m,1H),5.16–5.09(m,1H),4.51(s,1H),4.44(d,J＝12.0Hz,2H),4.17(d,J＝9.2Hz,1H),3.84–3.58(m,2H),3.27(br s,4H),3.00–2.83(m,3H),2.75–2.50(m,4H),2.22(br d,2H),2.11–1.95(m,2H),1.90–1.77(m,2H),1.31(s,6H),1.24(s,6H),1.24-1.05(m,2H).HRMS计算值C47H50FN9O6 m/z 855.3868,实测值856.3931[M+1]⁺。

实施例14：合成N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酰胺(2-43)

步骤1：制备4-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯

将DMF(5mL)中含4-氟苯甲酸叔丁酯(200mg，1.02mmol)、2-(哌啶-4-基)乙醇(131.6mg，1.02mmol)、碳酸钾(422.6mg，3.06mmol)的溶液在100℃下在氮气下搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(MeOH:二氯甲烷＝1:10)进行纯化，得到白色固体形式的目标化合物(210mg，0.69mmol，产率67％)。LC/MS:306[M+H]⁺。

步骤2：制备4-(4-(2-氧代乙基)哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯

将DMSO(4mL)中含4-[4-(2-羟乙基)哌啶-1-基]苯甲酸叔丁酯(200mg，0.69mmol)和IBX(218.42mg，0.78mmol)的混合物在50℃下在氮气下搅拌18小时。用20mL的水对反应混合物进行处理，并用EtOAc(3x 5mL)进行萃取。用水(5mL)洗涤合并的有机相，经MgSO₄干燥，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(EA:二氯甲烷＝1:5)进行纯化，得到灰色固体形式的目标化合物(150mg，0.49mmol，产率72％)。LC/MS:304.0[M+H]⁺。

步骤3：制备4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯

向二氯甲烷(3mL)中含4-[4-(2-氧代乙基)哌啶-1-基]苯甲酸叔丁酯(150mg，0.49mmol)、DIPEA(63.9mg，0.49mmol)、中间体1-2(187.4mg，0.49mmol)和MgSO₄(300mg)的混合物中，添加NaHB(OAc)₃(314.4mg，1.48mmol)。将混合物在25℃下搅拌18小时。将残余物用水(50mL)洗涤，并用二氯甲烷(50mL x 3)萃取。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，并在真空中浓缩。将残余物通过反相制备型HPLC进行纯化，得到黄色固体形式的期望化合物(240mg，0.38mmol，产率78％)。LC/MS:630.3[M+H]⁺。

步骤4：制备4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酸

将DCM(5mL)和TFA(0.5mL)中含4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯(240mg，0.38mmol)的混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到黄色固体形式的目标化合物(220mg，0.38mmol，产率100％)。LC/MS:574.2[M+H]⁺。

步骤5：制备N-(1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酰胺(2-43)

向DMF(5mL)中含4-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)苯甲酸(100mg，0.17mmol)、中间体1-1(56.44mg，0.17mmol)、DIEA(87.88mg，0.68mmol)的混合物中，分批添加HATU(84.03mg，0.22mmol)。将所得的混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(NH₃:MeOH:二氯甲烷＝1:10:100)进行纯化，得到棕色固体形式的目标化合物(50mg，0.06mmol，产率35％)。LC/MS:852.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),8.32(d,J＝8.2Hz,1H),8.20(br,1H),7.76(m,2H),7.69(m,1H),7.57(d,J＝9.2Hz,1H),7.36(m,1H),7.28(m,1H),6.97(m,3H),5.09(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),4.50(s,1H),4.17(d,J＝9.2Hz,1H),3.87(d,J＝12.6Hz,2H),3.71-3.54(m,2H),3.52-3.38(m,2H),3.15(td,J＝11.6,7.4Hz,2H),2.96-2.83(m,1H),2.78(t,J＝11.5Hz,2H),2.68-2.53(m,4H),2.45-2.29(m,2H),2.10–1.94(m,1H),1.78(brd,J＝12.5Hz,2H),1.59-1.38(m,3H),1.32–1.10(m,14H).HRMS计算值C49H54N8O6 m/z850.4166,实测值851.4273[M+H]⁺。

实施例15：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酰胺(2-47)

化合物2-47使用与制备2-32类似的方法制备，且中间体1-5用于还原胺化步骤中。LC/MS:854.4[M+H]+。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.14(s,1H),9.13(s,1H),8.76(d,J＝8.4Hz,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),7.85-7.72(m,4H),7.68–7.29(m,2H),6.99(m,3H),5.13(d,J＝12.1Hz,1H),4.51(s,1H),4.18(d,J＝8.6Hz,1H),3.89(d,J＝10.7Hz,2H),3.28(br s,4H),2.99-2.75(3H),2.72-2.50(m,6H),2.24(br,2H),2.07(m,1H),1.89-1.75(m,3H),1.31(s,6H),1.25(s,6H),1.25-1.10(m,2H).HRMS计算值C48H51FN8O6 m/z 854.3916,实测值855.4013[M+H]⁺。

实施例16：合成N-((1,3-反式))-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-48)

化合物2-48使用与制备2-32类似的方法制备，且中间体1-5用于还原胺化步骤中。LC/MS:872.5[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.12(s,1H),9.11(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.75(d,J＝8.5Hz,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.76(m,3H),7.69-7.64(m,2H),7.46(d,J＝7.3Hz,1H),7.10(t,J＝8.7Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),5.11(dd,J＝12.8,5.2Hz,1H),4.50(s,1H),4.17(d,J＝9.1Hz,1H),3.50(d,J＝11.5Hz,2H),3.28(br s,4H),2.95-2.82(m,1H),2.75(m,2H),2.68–2.51(m,6H),2.22(br d,2H),2.07–2.00(m,1H),1.92-1.78(m,2H),1.75(s,1H),1.30(s和m,7H),1.24(s和m,7H).HRMS计算值C48H50F2N8O6 m/z 872.3821,实测值873.3906[M+H]⁺。

实施例17：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酰胺(2-49)

化合物2-49使用与制备2-32相同的方法制备。最终化合物通过HPLC纯化为TSA盐。LC/MS:823.5[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.17–9.07(m,1H),8.79–8.70(m,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),7.80–7.75(m,4H),7.66–7.47(m,2H),7.17–6.91(m,4H),5.12–5.00(m,1H),4.50(s,1H),4.32(d,J＝16.8Hz,1H),4.28–4.08(m,2H),3.99–3.81(m,2H),3.69–3.54(m,1H),3.32(br s,4H),3.19-3.10(m,1H),3.01–2.74(m,3H),2.70–2.50(m,3H),2.42–2.34(m,1H),2.32–2.11(m,2H),2.04–1.94(m,1H),1.94–1.66(m,3H),1.32–1.21(m,14H).HRMS计算值C48H54N8O5 m/z 822.4217,实测值823.4302[M+1]⁺。

实施例18：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-2-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺(2-50)

化合物2-50使用与制备2-32类似的方法制备，且中间体1-5用于还原胺化步骤中。LC/MS:856.6[M+H]⁺；

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.11(d,J＝2.8Hz,1H),8.92–8.68(m,3H),8.31(d,J＝8.2Hz,1H),7.96–7.69(m,3H),7.48(br s,1H),6.98(d,J＝8.3Hz,1H),5.12(dd,J＝12.6,5.0Hz,1H),4.77(d,J＝12.7Hz,2H),4.47(s,1H),4.15(d,J＝9.1Hz,1H),3.28(br s,4H),3.17–2.74(m,4H),2.67-2.53(m,5H),2.22(br s,2H),2.11-1.99(m,1H),1.92-1.79(m,3H),1.31(s,6H),1.24(s,6H),1.16-1.02(m,2H).HRMS计算值C46H49FN10O6m/z 856.3821,实测值857.3902[M+H]⁺。

实施例19：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-6-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-5-氟烟酰胺(2-52)

化合物2-52使用与制备2-32类似的方法制备。LC/MS:873.6[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.5,1.7Hz,1H),8.53(s,1H),8.31(d,J＝8.8Hz,1H),7.91(d,J＝15.0Hz,1H),7.83–7.73(m,3H),7.47(d,J＝7.1Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.12(dd,J＝12.6,5.4Hz,1H),4.49(s,1H),4.27–4.16(m,3H),3.27(br s,4H),3.04–2.84(m,3H),2.69-2.52(m,6H),2.23(br d,2H),2.06–2.02(m,1H),1.90-1.75(m,3H),1.31(s,6H),1.24(s,6H),1.24-1.18(m,2H).HRMS计算值C47H49F2N9O6 m/z 873.3774,实测值874.4107[M+H]⁺。

实施例20：合成N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-53)

步骤1：制备(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸叔丁酯

向在室温下在氩气下搅拌的DCM(20mL)中含3-氟-4-(4-甲酰基哌啶-1-基)苯甲酸叔丁酯(100mg，0.33mmol)的溶液中，添加中间体1-3(166.5mg，0.33mmol)、MgSO₄(396mg，3.3mmol)和TEA(200mg，1.98mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(175mg，0.825mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。过滤溶液，并浓缩滤液。将残余物通过Prep-TLC(DCM/MeOH＝20:1)进行纯化，得到(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(100mg，47.5％)。LC/MS:637.6[M+H]⁺。

步骤2：制备(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸

向在室温下搅拌的DCM(5mL)中含(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(100mg，0.157mmol)的溶液中，添加TFA(3mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将粗产物在真空中浓缩，并直接用于下一步骤。LC/MS:581.7[M+H]⁺。

步骤3：制备N-((1,3-反式)-3-((8-氰基喹啉-5-基)氧基)-2,2,4,4-四甲基环丁基)-4-(4-((4-(2-((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酰胺(2-53)

向在室温下在氩气下搅拌的DMF(5mL)中含(S)-4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-氟苯甲酸(100mg，0.17mmol)的溶液中，添加HATU(97mg，0.255mmol)、中间体1-1(56.4mg，0.17mmol)和DIEA(132mg，1.02mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将粗产物在真空中浓缩。将残余物用DCM(3x 20mL)进行萃取，并通过Prep-TLC(DCM/MeOH＝10:1)进行纯化，得到白色固体形式的标题化合物(59mg，38.9％)。LC/MS:858.6[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),9.11(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.75(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.81–7.64(m,4H),7.47-7.35(m,1H),7.30-7.18(m,1H),7.15-7.05(m,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),5.15-5.05(m,1H),4.50(s,1H),4.38(d,J＝16.4Hz,1H),4.25(d,J＝16.4Hz,1H),4.17(d,J＝9.2Hz,1H),3.70-3.55(m,2H),3.55-3.45(m,2H),3.32–3.24(m,1H),3.14(br s,3H),2.95–2.87(m,1H),2.81-2.71(m,2H),2.65-2.55(m,3H),2.47-2.30(m,1H),2.26(brd,2H),2.10-1.95(m,2H),1.90-1.75(m,2H),1.31(s,7H),1.24(s,7H).HRMS计算值C48H52F2N8O5 m/z 858.4029,实测值859.4251[M+H]⁺。

测试化合物的AR降解活性

在24孔板中将LNCAP、VCAP和22Rv1细胞以1.5×10E5个细胞/孔的密度铺板在含有10％FBS和1％青霉素-链霉素的RPMI生长培养基中，之后在37℃下孵育过夜。第二天，通过使用在DMSO中制备的不同浓度的1000x化合物储备溶液将测试化合物施用至这些细胞中。施用该化合物后，将细胞在37℃下孵育24小时。完成后，用PBS洗涤细胞，并在Laemmli样品缓冲液(1x；VWR International)中收集蛋白质。用SDS-PAGE分离细胞裂解液中的蛋白质，并用

干式印迹转印系统(ThermoFisher)将其转移至Odyssey硝酸纤维素膜(Licor)上。通过在室温、轻轻摇动下用Intercept封闭缓冲液(Licor)将膜孵育1小时，封闭非特异性结合。然后在4℃下，将膜用在含0.1％吐温20的Intercept封闭缓冲液中稀释的一级抗体兔抗AR(1:1000，Cell Signaling，5153)和小鼠抗GAPDH(1:5000，Santa CruzBiotechnology，sc-47724)孵育过夜。用TBS-T洗涤3次，之后将膜用

800CW山羊抗小鼠IgG(1:20000，Licor)或

800CW山羊抗兔IgG(1:20000，Licor)孵育1小时。用TBS-T洗涤后，将膜在TBS中冲洗，并在

CLx成像系统(Licor)上扫描。使用ImageStudio^TM软件(Licor)对条带进行定量。

对Ramos细胞的细胞生长抑制

在96孔板中将RAMOS细胞(ATCC)以16000个细胞/孔的密度接种于含有10％热灭活胎牛血清和1％青霉素/链霉素的90μl RPMI生长培养基中。通过使用在生长培养基中制备的不同浓度的10x化合物储备溶液将测试化合物施用至这些细胞中。施用该化合物后，将细胞在37℃下孵育3天。将板在室温下平衡约10分钟，然后进行CellTiter-Glo测定。在每个孔中加入100ul的

试剂(Promega)。之后将板在室温下孵育10分钟，并用EnSpire平板读数器(PerkinElmer)记录发光。

对VCAP细胞的细胞生长抑制

在96孔板中将VCAP细胞(ATCC)以3000个细胞/孔的密度接种于含有10％活性炭处理胎牛血清(CSS)和1％青霉素/链霉素的80μl DMEM生长培养基中。将细胞在37℃下孵育过夜。第二天，通过使用在生长培养基中制备的不同浓度的10x化合物储备溶液将测试化合物施用至这些细胞中。四小时后，通过使用在生长培养基中制备的10x化合物储备溶液将0.1nM R1881(Sigma)施用至细胞中。施用含有或不含0.1nM R1881的0.1％DMSO作为对照。之后将细胞在37℃下孵育6天。将板在室温下平衡约10分钟，然后进行CellTiter-Glo测定。在每个孔中加入100ul的

表4总结了示例性化合物在(a)施用化合物后24小时，在LNCAP、VCAP和22Rv1细胞系中；(b)施用化合物后3天，在RAMOS细胞系中；以及(c)施用化合物后6天，在VCAP细胞系中的雄激素受体(AR)降解活性和细胞生长抑制。DC50：50％目标蛋白降解所需的化合物浓度。

表4：根据细胞测定得出的化合物的AR降解活性

根据详细说明书，本发明的许多特征和优点是显而易见的，因此所附权利要求书旨在涵盖本发明的所有这些特征和优点，这些特征和优点属于本发明的真正精神和范围。此外，由于本领域技术人员很容易进行各种修改和变化，因此不希望将本发明限制于图示和描述的确切构造和操作，因此，可以采用属于本发明范围内的所有合适修改和等效物。

此外，本领域技术人员应当理解，本发明所基于的概念可以很容易地用作设计用于实现本发明的几个目的的其他结构、方法和系统的基础。因此，权利要求书不应被视为受到上述描述或实施例的限制。

Claims

1.一种式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X₁为CR₁或N；

X₂为CR₂或N；

X₃为CR₃或N；

X₄为CR₄或N；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；并且

o为0、1、2或3，

其中，每个氢原子独立地且任选地由氘原子替代。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X₁为N。

3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X₂为N。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X₁和X₂各自均为N。

5.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X₂为CR₂、X₃为CR₃，且X₄为CR₄。

6.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。

7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X₁为CR₁、X₂为CR₂、X₃为CR₃，且X₄为CR₄。

8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁、R₂、R₃和R₄各自独立地选自H和F。

9.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁为F。

10.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₂为F。

11.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₃为F。

12.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₄为F。

13.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁和R₃各自均为F。

14.根据权利要求7或8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₃和R₄各自均为F。

15.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₂、R₃和R₄各自均为H。

16.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁、R₃和R₄各自均为H。

17.根据权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁、R₂和R₄各自均为H。

18.根据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁、R₂和R₃各自均为H。

19.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₂和R₄各自均为H。

20.根据权利要求14所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁和R₂各自均为H。

21.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

基团选自

22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₅独立地选自卤素、C₁-C₃烷氧基和C₁-C₃卤代烷基。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₅独立地选自-Cl、-OCH₃和-CF₃。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m为0或1。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m为0。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m为1。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，o为0。

28.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，o为1。

29.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m和o各自均为0。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₆独立地选自H和C₁-C₃烷基。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₆独立地选自H和-CH₃。

32.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，连接到相同碳的两个R₆基团是相同的。

33.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₆均是相同的。

34.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₆均是不同的。

35.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

基团选自

36.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

基团选自

37.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₇独立地选自卤素、羟基、C₁-C₃烷基和C₁-C₃卤代烷基。

38.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₇独立地选自卤素、羟基、-CH₃和-CF₃。

39.根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₇独立地选自F、羟基、-CH₃和-CF₃。

40.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₇独立地为F。

41.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，n为0。

42.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，n为1。

43.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₈均为氢，或者两个R₈基团一起形成氧代。

44.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₈均为氢。

45.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，两个R₈基团一起形成氧代。

46.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₉独立地选自氢、C₁-C₃烷基和-C(＝O)-C₁-C₃烷基。

47.根据权利要求1至46中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₉独立地选自氢和C₁-C₃烷基。

48.根据权利要求1至47中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，每个R₉独立地选自氢、-CH₃、-CH₂CH₃和-CH(CH₃)₂。

49.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，

基团选自

50.根据权利要求1至49中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为长度为1至12个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

51.根据权利要求1至50中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为长度为1至10个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

52.根据权利要求1至51中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为长度为1至8个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

53.根据权利要求1至52中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L为长度为1至6个碳原子的连接基，其中，一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、C₂-烯基、C₂-炔基、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

54.根据权利要求1至53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，连接基L的一个或多个碳原子任选地由C(＝O)、O、N(R₉)、S、环烷基、芳基、杂环或杂芳基替代，其中，R₉、C₂-烯基、环烷基、芳基、杂环和杂芳基各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

55.根据权利要求1至54中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，连接基L的一个或多个碳原子任选地由O、N(R₉)、环烷基或杂环替代，其中，R₉、环烷基和杂环各自独立地被0、1、2或3个R_S取代。

56.根据权利要求1至55中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，连接基L的至少一个碳原子由杂环替代，所述杂环被0、1、2或3个R_S取代。

57.根据权利要求1至55中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，连接基L的至少两个碳原子由杂环替代，所述杂环各自均被0、1、2或3个R_S取代。

58.根据权利要求56或57所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述杂环选自哌啶和哌嗪，所述哌啶和哌嗪各自均被0、1、2或3个R_S取代。

59.根据权利要求56或57所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述杂环选自