CN113324822A - 一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的he染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及HE染色技术领域，具体涉及一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法；包括以下步骤：S1、制作骨组织磨片，S2、将骨组织磨片浸于酸蚀剂中，浸泡时间为5‑10min，取出骨组织磨片，对骨组织磨片充分水洗，S3、将骨组织磨片浸入改性剂中，浸泡时间为5‑10min，取出后充分水洗，S4、将表面处理后的骨组织磨片浸于第一染色液中，浸泡时间为30‑45min，S5、将骨组织磨片置于0.5％盐酸酒精分化液中分化10‑30s，取出骨组织磨片充分水洗，S6、将骨组织磨片置于第二染色液中染色2‑5min，取出骨组织磨片水洗；本发明与现有技术相比，增加了对组织磨片表面的改性处理，使经HE染色后细胞核可以得到很好的着色，解决了经树脂包埋制作的骨磨片HE染色效果不良的问题。
Description
技术领域
本发明涉及HE染色技术领域，具体涉及一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法。
背景技术
HE染色方法是组织病理研究与诊断所使用的常规方法，主要为观察基本组织细胞结构，以及是否有其他病理改变。广泛应用于医学研究领域。通常使用HE染色的病理切片均为石蜡包埋、冰冻切片，以及树脂包埋的薄切片，或直接进行染色，或脱去石蜡及树脂后直接进行染色。对于经树脂包埋后所制作的不脱钙骨或带植体骨组织磨片，因其不能对所使用的包埋树脂进行脱塑，而不能进行HE染色，主要是染色后细胞核不能着色。
树脂包埋后所制作的不脱钙骨或带植体骨组织磨片使用HE染色效果不佳，分析其主要原因是因为树脂在聚合包埋过程中，组织内的所有孔隙均被树脂所充填，形成致密的保护层，使染色液不能浸入组织及细胞内，导致染色后细胞核不着色或着色浅。
在对组织进行包埋中所使用的主要包括两种树脂，一种是光聚合树脂(包埋套装，由德国古沙公司提供)，一种是热聚合树脂(主要成分为甲基丙烯酸甲酯)。其中光聚合树脂是不能进行脱塑的，热聚合树脂包埋后制作的磨片可以脱塑，但脱塑过程中组织的部分内容物也会随之脱去，使组织结构失去其完整性。
另一方面，对于带植入材料的骨组织磨片，因植入材料与骨组织的弹性模量不同，在对最终得到的20微米厚的磨片进行脱塑后，会发生植入材料卷曲、变形或脱落。
因此，对于使用树脂包埋的骨或带植体骨组织磨片进行染色时，是不能通过脱去其包埋材料而进行的。
综上所述，研发一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，仍是HE染色技术领域中急需解决的关键问题。
发明内容
针对现有技术所存在的上述缺点，本发明在于提供一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，本发明与现有技术相比，增加了对组织磨片表面的改性处理，使经HE染色后细胞核可以得到很好的着色，解决了经树脂包埋制作的骨磨片HE染色效果不良的问题。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，包括以下步骤：
S1、制作骨组织磨片。
S2、将骨组织磨片浸于酸蚀剂中，浸泡时间为5-10min，取出骨组织磨片，对骨组织磨片充分水洗。
S3、将骨组织磨片浸入改性剂中，浸泡时间为5-10min，取出后充分水洗。
S4、将表面处理后的骨组织磨片浸于第一染色液中，浸泡时间为30-45min。
S5、将骨组织磨片置于0.5％盐酸酒精分化液中分化10-30s，取出骨组织磨片充分水洗。
S6、将骨组织磨片置于第二染色液中染色2-5min，取出骨组织磨片水洗。
S7、用梯度酒精对骨组织磨片脱水，并用二甲苯对骨组织磨片透明，制成中性树胶封片。
通过采用上述技术方案：本发明将已研磨的骨组织磨片浸于的稀盐酸水溶液中，取出后充分水洗，利用酸性溶液对组织表面进行一定的酸蚀，适当增加其表面粗糙度，使染色液易于着色，将经过稀盐酸水溶液处理的磨片浸入过氧化氢水溶液中，取出后充分水洗，利用过氧化氢溶液的强氧化性使组织表面进一步改性，目的是增加苏木素液对细胞核的着色能力，与现有技术相比，通过特殊试剂对骨组织磨片表面进行改性，加强了其与苏木素染料的着色能力，以达到常规HE染色的效果。
本发明进一步设置为：在所述步骤S1中，所述骨组织磨片的厚度为20-30um。
通过采用上述技术方案：本发明将骨组织磨片厚度为20-30um，以满足骨组织磨片的HE染色需求，避免过厚或过薄，影响骨组织磨片的HE染色和观察。
本发明进一步设置为：在所述步骤S2中，所述酸蚀剂为1％的稀盐酸水溶液。
通过采用上述技术方案：本发明利用酸性溶液对组织表面进行一定的酸蚀，适当增加其表面粗糙度，使染色液易于着色。
本发明进一步设置为：在所述步骤S3中，所述改性剂为3-5％的过氧化氢水溶液。
通过采用上述技术方案：本发明利用过氧化氢溶液的强氧化性，使组织表面进一步改性，目的是增加苏木素液对细胞核的着色能力。
本发明进一步设置为：在所述步骤S4中，所述第一染色液为Mayer氏苏木素染色液。
通过采用上述技术方案：本发明采用Mayer氏苏木素染色液为第一染色液，操作步骤简便，操作时间短，能够使经HE染色后细胞核可以得到很好的着色。
本发明进一步设置为：在所述步骤5中，在对骨组织磨片充分水洗后，再用流水冲洗15-30min。
通过采用上述技术方案：本发明流水冲洗，可以有效的清除骨组织磨片表面残留的物质。
本发明进一步设置为：在所述步骤6中，所述第二染色液为0.5-1％伊红水溶液。
通过采用上述技术方案：本发明伊红水溶液为酸性染料，将细胞质和细胞间质染为粉红色，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
本发明进一步设置为：在所述步骤S7中，用梯度酒精对骨组织磨片脱水的方法为：
将骨组织磨片置于70％、80％、90％和100％的酒精中依次浸泡；将骨组织磨片晾干。
通过采用上述技术方案：本发明通过梯度酒精对骨组织磨片脱水，提升了中性树胶封片的质量。
有益效果
采用本发明提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：
本发明将已研磨至20-30un厚的骨组织磨片浸于1％的稀盐酸水溶液中5-10min，取出后充分水洗，利用酸性溶液对组织表面进行一定的酸蚀，适当增加其表面粗糙度，使染色液易于着色，将经过1％的稀盐酸水溶液处理的磨片浸入3-5％的过氧化氢水溶液中5-10min，取出后充分水洗，利用过氧化氢溶液的强氧化性使组织表面进一步改性，目的是增加苏木素液对细胞核的着色能力，与现有技术相比，增加了对组织磨片表面的改性处理，使经HE染色后细胞核可以得到很好的着色，解决了经树脂包埋制作的骨磨片HE染色效果不良的问题。
附图说明
图1为一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
请参照图1所示，图1为一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法的流程图，一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，包括以下步骤：
步骤一、制作骨组织磨片。
步骤二、将骨组织磨片浸于酸蚀剂中，浸泡时间为5min，取出骨组织磨片，对骨组织磨片充分水洗。
步骤三、将骨组织磨片浸入改性剂中，浸泡时间为5min，取出后充分水洗。
步骤四、将表面处理后的骨组织磨片浸于第一染色液中，浸泡时间为30min。
步骤五、将骨组织磨片置于0.5％盐酸酒精分化液中分化10s，取出骨组织磨片充分水洗。
步骤六、将骨组织磨片置于第二染色液中染色2min，取出骨组织磨片水洗。
步骤七、用梯度酒精对骨组织磨片脱水，并用二甲苯对骨组织磨片透明，制成中性树胶封片。
骨组织磨片的厚度为20um。
酸蚀剂为1％的稀盐酸水溶液。
改性剂为3％的过氧化氢水溶液。
第一染色液为Mayer氏苏木素染色液。
在对骨组织磨片充分水洗后，再用流水冲洗15min。
第二染色液为0.5％伊红水溶液。
用梯度酒精对骨组织磨片脱水的方法为：
将骨组织磨片置于70％、80％、90％和100％的酒精中依次浸泡；将骨组织磨片晾干。
实施例2
本实施例所提供的树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：在步骤一中，骨组织磨片的厚度为25um；
在步骤二中，浸泡时间为8min；
在步骤三中，改性剂为4％的过氧化氢水溶液，浸泡时间为8min；
在步骤四中，浸泡时间为38min；
在步骤五中，分化时间为20s；
在步骤六中，第二染色液为0.8％的伊红水溶液，染色时间为4min，在对骨组织磨片充分水洗后，再用流水冲洗23min。
实施例3
本实施例所提供的树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：在步骤一中，骨组织磨片的厚度为30um；
在步骤二中，浸泡时间为10min；
在步骤三中，改性剂为5％的过氧化氢水溶液，浸泡时间为10min；
在步骤四中，浸泡时间为45min；
在步骤五中，分化时间为30s；
在步骤六中，第二染色液为1％的伊红水溶液，染色时间为5min，在对骨组织磨片充分水洗后，再用流水冲洗30min。
对比例1
本实施例所提供的树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法大致和实施例1相同，其主要区别在：未对骨组织磨片表面改性处理。
对比例2
本实施例所提供的树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法为脱去石蜡及树脂后直接进行染色。
性能测试
取实施例1～3和对比例1～2所提供的骨组织磨片，并对所提供的骨组织磨片的相关性能进行检测，其检测方法如下：
分别对上述各骨组织磨片的着色能力进行检测，将所得测试结果记录于表1；
表1骨组织磨片的着色能力效果检测表
通过分析上述表中的相关数据可知，通过本发明所提供的树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法具有极佳的对骨组织磨片进行着色的效果。
本发明将已研磨至20-30un厚的骨组织磨片浸于1％的稀盐酸水溶液中5-10min，取出后充分水洗，此利用酸性溶液对组织表面进行一定的酸蚀，适当增加其表面粗糙度，使染色液易于着色，将经过1％的稀盐酸水溶液处理的磨片浸入3-5％的过氧化氢水溶液中5-10min，取出后充分水洗，利用过氧化氢溶液的强氧化性使组织表面进一步改性，目的是增加苏木素液对细胞核的着色能力，与现有技术相比，增加了对组织磨片表面的改性处理，使经HE染色后细胞核可以得到很好的着色，解决了经树脂包埋制作的骨磨片HE染色效果不良的问题。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制作骨组织磨片；
S2、将骨组织磨片浸于酸蚀剂中，浸泡时间为5-10min，取出骨组织磨片，对骨组织磨片充分水洗；
S3、将骨组织磨片浸入改性剂中，浸泡时间为5-10min，取出后充分水洗；
S4、将表面处理后的骨组织磨片浸于第一染色液中，浸泡时间为30-45min；
S5、将骨组织磨片置于0.5％盐酸酒精分化液中分化10-30s，取出骨组织磨片充分水洗；
S6、将骨组织磨片置于第二染色液中染色2-5min，取出骨组织磨片水洗；
S7、用梯度酒精对骨组织磨片脱水，并用二甲苯对骨组织磨片透明，制成中性树胶封片。
2.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述骨组织磨片的厚度为20-30um。
3.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述酸蚀剂为1％的稀盐酸水溶液。
4.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述改性剂为3-5％的过氧化氢水溶液。
5.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤S4中，所述第一染色液为Mayer氏苏木素染色液。
6.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤5中，在对骨组织磨片充分水洗后，再用流水冲洗15-30min。
7.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤6中，所述第二染色液为0.5-1％伊红水溶液。
8.根据权利要求1所述的一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的HE染色方法，其特征在于，在所述步骤S7中，用梯度酒精对骨组织磨片脱水的方法为：
将骨组织磨片置于70％、80％、90％和100％的酒精中依次浸泡；将骨组织磨片晾干。
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|---|---|
| CN (1) | CN113324822B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103725040A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-16 | 江苏省原子医学研究所 | 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 |
| CN107389416A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-11-24 | 长沙金域医学检验所有限公司 | 一种he染色及调整方法 |
| CN108458911A (zh) * | 2018-01-08 | 2018-08-28 | 牡丹江医学院 | 卵巢癌的病理切片染色组合物 |
| CN110553889A (zh) * | 2019-09-18 | 2019-12-10 | 宋建华 | 自动染色机He染色工艺 |
| CN110672395A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-01-10 | 李雄 | 一种组织切片的he染色方法 |
| CN112414824A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-02-26 | 重庆医科大学 | 一种不脱钙骨切片的染色方法 |
-
2021
- 2021-06-30 CN CN202110742487.0A patent/CN113324822B/zh active Active
Patent Citations (6)
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CATHY SANDERSON; KENT N. BACHUS: "Staining Technique to Differentiate Mineralized and Demineralized Bone in Ground Sections", 《JOURNAL OF HISTOTECHNOLOGY》 * |
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|---|---|
| CN113324822B (zh) | 2022-06-24 |
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