CN113286793A - 吡咯并吡嗪和吡啶并三嗪类流感病毒复制抑制剂 - Google Patents

吡咯并吡嗪和吡啶并三嗪类流感病毒复制抑制剂 Download PDF

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Abstract

本文提供可抑制流感病毒复制、减少流感病毒量和/或治疗流感的化合物。(I)

Description

吡咯并吡嗪和吡啶并三嗪类流感病毒复制抑制剂
技术领域
本申请大体上涉及流感病毒复制的抑制剂，以及向需要治疗的患者投与所述抑制剂而治疗或预防流感感染的方法。
背景技术
流感以季节性流行方式在全世界传播，导致每年数十万人死亡，在大流行性年份中数百万人死亡。举例而言，20世纪发生了三次流感大流行，且杀死数千万人，其中各次大流行均由人类病毒的新型病毒株的出现而引起。通常，这些新型病毒株是由于现有流感病毒自其他动物物种传播至人类而产生。
流感主要经由感染者咳嗽或打喷嚏时产生的较大携带病毒的液滴在人与人的间传播；这些较大液滴可随后停留于感染者附近(例如约6英尺内)的易感个体的上呼吸道的黏膜表面上。传播也可能经由与呼吸道分泌物直接接触或间接接触(例如触摸经流感病毒污染的表面且随后触摸眼、鼻或口)而发生。在症状出现前1天至症状开始后约5天，成人可能将流感传播给其他人。幼儿及免疫系统较弱者可在症状发作后10天或更多天仍具传染性。
流感病毒为正黏液病毒科的RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五个属：A型流感病毒属、B型流感病毒属、C型流感病毒属、传染性鲑鱼贫血症病毒属(Isavirus)及托高土病毒属(Thogotovirus)。
A型流感病毒属可引起季节性流感及大流行性流感流行。其具有一种物种，A型流感病毒，且野生水鸟为多种A型流感的天然宿主。偶尔，病毒会传播至其他物种且随后可在家禽中引起破坏性爆发或导致人类流感大流行。A型病毒是三种流感类型的中最具毒性的人类病原体，且引起最严重的疾病。A型流感病毒可基于抗体对这些病毒的响应再分为不同血清型。按已知人类大流行性死亡的数目排序的人类中已确认的血清型为：H1N1(其于1918年引起西班牙流感)、H2N2(其于1957年引起亚洲流感)、H3N2(其于1968年引起香港流感)、H5N1(2007至2008年流感季节的大流行性威胁)、H7N7(其为潜在的大流行性威胁)、H1N2(存在于人类及猪中的地方病)、H9N2、H7N2、H7N3及H10N7。
B型流感病毒属可引起季节性流感，且具有一种物种，即B型流感病毒。B型流感几乎完全感染人类且不如A型流感常见。已知易受B型流感感染影响的唯一一种其他动物为海豹。此类型流感以相比A型慢2至3倍的速率突变，且因此基因多样性较低，仅具有一种B型流感血清型。由于此抗原多样性缺乏，通常在早期获得对B型流感的一定程度的免疫性。然而，B型流感充分突变使得持续免疫性变得不可能。抗原变化速率降低以及其受限的宿主范围(抑制交叉物种抗原转移)，确保不会发生B型流感的大流行。
C型流感病毒属具有一种物种，即C型流感病毒，其感染人类及猪且可引起严重疾病及局部流行。然而，C型流感不如其他类型常见，且似乎通常引起儿童的轻度疾病。
各血清型及属的流感病毒在结构上极其类似。流感病毒基因组由填充至尺寸变化的棒状结构的八个单股RNA组成，称为核糖核蛋白复合物(RNP)。各RNP含有独特病毒RNA、支架核蛋白的多个复本及由PA、PB1及PB2子单元组成的异源三聚病毒聚合酶，所述异源三聚病毒聚合酶催化病毒基因组的转录及复制。流感聚合酶复合物的近期生物化学及结构研究，为了解流感聚合酶的夺帽(cap-snatching)及RNA合成机理提供了见解。简而言之，PB2端帽结合域首先通过结合其5'端帽来隔离宿主前mRNA。随后PA，核酸内切酶子单元，在端帽下游切割捕获的mRNA前10-13核苷酸。PB2子单元随后旋转约700，将加帽的引物导引至PB1聚合酶活性位点中。PB1子单元与PB2及PA子单元直接相互作用。这些子单元在不同流感病毒株中含有高度保守域，且已成为有吸引力的抗流感药物靶标。除聚合酶复合物以外，流感基因组编码自己的神经胺糖酸苷酶(NA)、血球凝集素(HA)、核蛋白(NP)、基质蛋白M1与M2及非结构蛋白NS1与NS2。NA是抗病毒药物奥司他韦(oseltamivir)及扎那米韦(Relenza)的靶标。这些药物是唾液酸类似物，抑制NA酶的活性，从而减缓后代病毒从感染细胞中释放。
流感由于失去生产力及相关医疗治疗而产生直接成本，以及由于预防性措施而产生间接成本。在美国，流感每年造成总共超过100亿美元的成本，而据估计未来的大流行可能引起数千亿美元的直接及间接成本。预防性成本也较高。全世界政府已花费数十亿美元来为潜在H5N1禽流感大流行做准备及计划，其中费用与购买药物和疫苗以及进行灾难演习和改善边境管制策略相关联。
当前流感的治疗选项包含接种疫苗和使用抗病毒药品的化学疗法或化学防治。使用流感疫苗进行针对流感的疫苗接种通常推荐用于高风险群体，例如儿童及老年人，或患有哮喘、糖尿病或心脏病的人。然而，有可能接种疫苗后仍患上流感。所述疫苗各季节针对几种特定流感病毒株进行重新调配，但可能无法包含在所述季节在世界范围内有效感染人群的所有病毒株。制造商花费约六个月调配及生产应对季节性流行所需的数百万剂量；偶尔，在那段时间里，新型或被忽视的病毒株变得突出，且感染已经接种疫苗的人群(如2003至2004流感季中的福建H3N2流感)。因为疫苗需要约两周才变得有效，因此有可能恰巧在接种疫苗之前就感染了所述疫苗应预防的特定病毒株。
另外，这些流感疫苗的有效性是可变的。归因于病毒的高突变率，特定流感疫苗通常提供不超过几年的保护。针对某一年调配的疫苗在下一年可能无效，因为流感病毒随时间推移而快速变化，且不同的病毒株占据优势。
由于不存在RNA校对酶，流感vRNA的RNA依赖性RNA聚合酶大约每一万个核苷酸(其为流感vRNA的大致长度)产生一次核苷酸插入错误。因此，几乎每一种新制造的流感病毒均为突变型抗原漂移。当超过一个病毒株已感染单个细胞时，将基因组分离成vRNA的八个独立片段可实现vRNA的混合或再配。随之而来的病毒遗传学的迅速变化产生了抗原转移，使病毒感染新的宿主物种及快速战胜保护性免疫。
抗病毒药物也可能用以治疗流感，其中NA抑制剂尤其有效，但病毒可对批准的NA抗病毒药物产生耐药性。另外，已经有多种耐药性大流行性甲型流感病毒出现的证明。耐药性大流行性A型流感变成重大公共卫生威胁。除了耐药性A型流感病毒之外，NA抑制剂还被批准用于治疗早期流感感染(流感症状发作48小时内)。
因此，仍需要用于治疗流感感染的药物，例如具有扩大的治疗窗口和/或降低的对病毒滴度的敏感性。
发明内容
本申请大体上是关于治疗流感的方法，抑制流感病毒复制的方法，减少流感病毒量的方法，可用于这些方法的化合物及组合物。
一方面，本申请提供式I化合物及其药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220000041
其中环A为
Figure GDA0003169993220000042
Figure GDA0003169993220000043
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选1到3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10环烷基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R3、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的两个RN可与它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的任一个独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。在一些情况下，化合物为式(IIA)或(IIB)化合物：
Figure GDA0003169993220000071
进一步提供向生物样品或患者投与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物的方法。
还提供由使病毒与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物接触来抑制所述A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。在一些情况下，抑制A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性包含向患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
进一步提供由施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物来降低宿主中A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。
还提供由使病毒与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物接触来抑制所述A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。在一些情况下，抑制A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性包含向患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
进一步提供由施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物来降低宿主中的A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。
本申请还提供通过向生物样品或患者施用安全且有效量的如申请所公开的例如由式I、IIA或IIB中的任一个表示的化合物而减少所述生物样品或患者中的流感病毒量的方法。
进一步提供治疗或预防患者的A型流感或B型流感感染的方法，其包括向所述患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
还提供医药组合物，其包括如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB中的任一个表示的化合物或其医药学上可接受的盐及医药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂或媒介物。
本申请还提供所述化合物的用途，其用于抑制或减少生物样品或患者流感病毒的复制，用于减少生物样品或患者的流感病毒量，或用于治疗患者的流感。
本申请进一步提供所述化合物的用途，其用于制造用以治疗患者流感的药物，用于减少生物样品或患者的流感病毒的量，或用于抑制生物样品或患者流感病毒的复制。
实施方式
本申请公开了化合物及此类化合物在抑制流感病毒中的用途。本申请一方面大体上市关于所述化合物或医药学上可接受的盐，或包括此类化合物或其医药学上可接受盐的医药学上可接受组合物的用途，其用于抑制生物样品或患者流感病毒的复制，用于减少生物样品或患者的流感病毒的量(降低病毒滴度)及用于治疗患者的流感。
本申请的化合物
本申请提供式(I)化合物或其医药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220000091
其中
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R4、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的两个RN可与它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的任一个独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。
在一些实施例中，M为N。在一些实施例中，M为CH。
在一些实施例中，X为CH2或CH2CH2。在一些实施例中，X为OCH2或CH2O。在一些实施例中，X为CH2。在一些实施例中，X为CH2CH2。在一些实施例中，X为OCH2。在一些实施例中，X为CH2O。
在一些实施例中，X'为CH2或CH2CH2。在一些实施例中，X'为OCH2或CH2O。在一些实施例中，X'为CH2。在一些实施例中，X'为CH2CH2。在一些实施例中，X'为OCH2。在一些实施例中，X'为CH2O。
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000121
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000122
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000123
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000124
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000125
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000131
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220000132
在一些情况下，化合物为以下者，其中
环A为
Figure GDA0003169993220000133
R1、R2、R4、R5及R6中的每一个为H；
M为N；
X及X'中的每一个为CH2；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的1至3者取代的3至7元杂环基-C(O)-，其中杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
取代基A为卤素；及
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H或卤素，条件为Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
在一些情况下，化合物具有式(IIA)或(IIB)的结构：
Figure GDA0003169993220000134
在一些实施例中，R1及R2中的至少一个为H。在一些实施例中，R1及R2均为H。在一些实施例中，R1为H。在一些实施例中，R2为H。
在一些实施例中，R1及R2中的一个为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基C1-3烷氧基。在一些实施例中，R4为H。在一些实施例中，R4为OH或OMe。在一些实施例中，R4为OH。在一些实施例中，R4为OMe。在一些实施例中，R4为CHF2。
在一些实施例中，R5及R6中的至少一个为H。在一些实施例中，R5及R6均为H。在一些实施例中，R5为H。在一些实施例中，R6为H。
在一些实施例中，R5及R6中的一个为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
在一些实施例中，R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
在一些实施例中，R3为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，R3为C1-6烷基、C3-6碳环基-C1-6亚烷基、C3-6碳环基-O-C1-6亚烷基或3至7元杂环基-C1-6亚烷基。在一些实施例中，R3为乙基、甲基或C1-3亚烷基-环丙基。在一些实施例中，R3为C6碳环基-C1-6亚烷基或C6碳环基-O-C1-6亚烷基且C6碳环基为苯基、卤苯基或二卤苯基。在一些实施例中，R3为3至7元杂环基-C1-6亚烷基且杂环基为四氢吡喃基。
在一些实施例中，取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-。
在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的一个、两个、三个、四个、五个或六个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H。
在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的一个、两个、三个、四个、五个或六个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为卤素。在一些实施例中，卤素为F。
应当理解，各变量值的选择是导致形成稳定或化学上可行的化合物的选择。
所涵盖特定化合物包含下表中的化合物。显示了特定立体异构中心的化合物至少表示相对立体异构，且可指绝对立体异构。不指示特定立体异构中心指示的化合物表示该对称性中心处立体异构中心的混合物。
化合物可是表A中所列的化合物或其医药学上可接受的盐。
表A
Figure GDA0003169993220000161
Figure GDA0003169993220000171
Figure GDA0003169993220000181
Figure GDA0003169993220000191
Figure GDA0003169993220000201
Figure GDA0003169993220000211
Figure GDA0003169993220000221
Figure GDA0003169993220000231
Figure GDA0003169993220000241
Figure GDA0003169993220000251
Figure GDA0003169993220000261
Figure GDA0003169993220000271
Figure GDA0003169993220000281
Figure GDA0003169993220000291
Figure GDA0003169993220000301
使用方法
本文所述化合物或其医药学上可接受的盐可用于降低生物样品(例如经感染细胞培养物)的病毒滴度或人类的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。
如本文所用，术语流感病毒介导的病况、流感感染或流感可互换使用以表示由流感病毒感染引起的疾病。
流感是由流感病毒引起的影响鸟类及哺乳动物的感染性疾病。流感病毒为正黏液病毒科的RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五个属：A型流感病毒属、B型流感病毒属、C型流感病毒属、传染性鲑鱼贫血症病毒属及托高土病毒属。A型流感病毒属具有一个物种，A型流感病毒，其可基于抗体对这类病毒的响应再分为不同血清型：H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3、H7N9及H10N7。B型流感病毒属具有一个物种，B型流感病毒。B型流感几乎完全感染人类且不如A型流感常见。C型流感病毒属具有一个物种，C型流感病毒，其感染人类及猪且可引起重度疾病及局部流行。然而，C型流感病毒不如其他类型常见，且似乎通常引起儿童的轻度疾病。
在一些实施例中，流感或流感病毒与A型或B型流感病毒相关。在一些实施例中，流感或流感病毒与A型流感病毒相关。在一些特定实施例中，A型流感病毒为H1N1、H2N2、H3N2、H7N9或H5N1。
在人类中，流感的常见症状为发冷、发热、咽炎、肌肉疼痛、严重头痛、咳嗽、虚弱及全身不适。在更严重情况下，流感引起肺炎，其可致死，尤其对于幼儿及老年人而言。尽管其常常与感冒混淆，但流感为严重得多的疾病且由不同类型的病毒引起。流感可引起恶心及呕吐，尤其对于儿童，但这些症状更像不相关的胃肠炎的特征，流感有时称为“胃流感”或“24小时流感”。
流感的症状可在感染之后一至两天相当突然地开始。通常，第一症状为发冷或畏寒，但发热在感染早期亦常见，其中体温范围为38℃至39℃(约100℉至103℉)。许多人病情严重以致卧床数天，其全身疼痛不适，所述疼痛不适在其背部及腿部较严重。流感的症状可包含：身体疼痛(尤其关节及咽喉)、极端寒冷及发热、疲乏、头痛、眼部刺激流泪、眼部发红、皮肤(尤其面部)红肿、口腔红肿、咽喉红肿及鼻部发红、腹痛(患B型流感的儿童)。流感的症状并非特异性的，而是与许多病原体迭加(“流感类疾病”)。通常，需要实验室数据以便确认诊断。
术语“疾病”、“病症”及“病况”可在本文中互换使用以指流感病毒介导的医学或病理学病况。
如本文所用，术语“个体”、“宿主”及“患者”可互换使用。术语“个体”、“宿主”及“患者”是指动物(例如，例如鸡、鹌鹑或火鸡的鸟类或哺乳动物)，特定而言，哺乳动物包含非灵长类动物(例如牛、猪、马、羊、兔、天竺鼠、大鼠、猫、狗或小鼠)及灵长类动物(例如猴、黑猩猩或人类)，且更特定而言为人类。在一些实施例中，个体为非人类动物，例如家畜(例如马、牛、猪或羊)或宠物(例如狗、猫、天竺鼠或兔)。在一优选实施例中，个体为“人类”。
如本文所用，术语“生物样品”包含但不限于细胞培养物或其提取物；获自哺乳动物的活检物质或其提取物；血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其他体液或其提取物。
如本文所用，术语“抑制流感病毒的复制”包含降低病毒复制的量(例如降低至少10％)及完全遏制病毒复制(亦即100％降低病毒复制的量)两者。在一些实施例中，流感病毒的复制抑制至少50％、至少65％、至少75％、至少85％、至少90％或至少95％。
流感病毒复制可通过本领域中已知的任何适合的方法量测。举例而言，可量测生物样品(例如经感染细胞培养物)的流感病毒滴度或人类的流感病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。更特定而言，对于基于细胞的分析，在细胞经活体外培养的各情况下，在存在或不存在测试剂的情况下将病毒添加至培养物，且在合适时间长度后评估病毒依赖性端点。对于典型分析，可使用适于流感病毒株A/波多黎各(Puerto Rico)/8/34的马丁-达比(Madin-Darby)犬肾细胞(MDCK)及标准组织培养物。可使用的第一类细胞分析视经感染目标细胞的死亡(亦即称为细胞病变效应(CPE)的过程)而定，其中病毒感染引起细胞来源的耗竭及细胞的最终裂解。在第一类细胞分析中，微量滴定盘的孔中的较小部分细胞经感染(通常1/10至1/1000)，使病毒在48至72小时内经历若干轮复制，随后使用细胞ATP含量相较于未感染对照物的减小来量测细胞死亡的量。可采用的第二类细胞分析视经感染细胞中的病毒特异性RNA分子的增殖而定，其中使用分支链DNA杂交方法(bDNA)直接量测RNA水平。在第二类细胞分析中，较低数目的细胞最初于微量滴定盘的孔中感染，使病毒在经感染细胞中复制且传播至其他轮的细胞，随后所述细胞裂解且测量病毒RNA含量。通常在18至36小时后提早停止此分析，此时所有目标细胞仍有活力。病毒RNA通过杂交至固定于分析盘的孔的特异性寡核苷酸探针、随后通过与连接至报告酶的其他探针杂交而扩增讯号来定量。
如本文所用，“病毒滴度”或“滴度”为病毒浓度的量度。滴度测试可采用连续稀释从本质上仅评估为正或负的分析型程序获得近似数量信息。滴度对应于仍产生正读数的最高稀释因子；举例而言，前8次连续两倍稀释中的正读数转换为1:256的滴度。特定实例为病毒滴度。为确定滴度，将制备若干稀释液，例如10-1、10-2、10-3、…、10-8。仍感染细胞的病毒的最低浓度为病毒滴度。
如本文所用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指治疗性与防治性治疗。举例而言，治疗性治疗包含由施用一或多种疗法(例如一或多种治疗剂，例如本文所述的化合物或组合物)引起减轻或改善流感病毒介导的病况的进展、严重程度及/或持续时间，或改善流感病毒介导的病况的一或多种症状(特定而言，一或多种可辨别的症状)。在特定实施例中，治疗性治疗包含改善流感病毒介导的病况的至少一个可量测身体参数。在其他实施例中，治疗性治疗包含通过身体上例如稳定可辨别症状、通过生理学上例如稳定身体参数或两者来抑制流感病毒介导的病况的进展。在其他实施例中，治疗性治疗包含减轻或稳定流感病毒介导的感染。抗病毒药物可用于社区环境中治疗患有流感的人群以减轻症状的严重程度且减少其患病天数。
术语“化学疗法”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于治疗病症或疾病。
如本文所用，术语“防治”、“防治性”、“防治性使用”及“防治性治疗”是指目的在于预防而非治疗或治愈疾病的任何医学或公共卫生程序。如本文所用，术语“预防(prevent/prevention/preventing)”是指降低患上或罹患给定病况的风险，或降低或抑制并非患病但已成为或可能接近成为患病人元的个体的复发或所述病况。术语“化学防治”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于预防病症或疾病。
如本文所用，防治性使用包含在已侦测到爆发的情形下使用，以预防感染在处于严重流感并发症的高风险下的大量人群彼此紧密接触生活的场所(例如医院病房、日托中心、监狱、疗养院等)中传染或传播。还包含在需要保护以免发生流感但在接种疫苗后并未获得保护(例如归因于较弱免疫系统)的人群中的使用，或在疫苗对其不可用时或在其由于副作用无法接受疫苗时的使用。还包含在接种疫苗后两周期间或在接种疫苗之后但在疫苗有效之前的任何时段期间的使用。防治性使用还可包含治疗并未患流感或不认为具有并发症高风险的人以降低感染流感且将其传染给与他/她紧密接触的高风险的人(例如医疗保健工作者、疗养院工作者等)的机会。
如本文所用且根据美国疾病控制中心(United States Center for DiseaseControl；US CDC)，流感“爆发”定义为在彼此接近的人群中(例如在辅助生活设施的同一区域中，在同一家庭中等)于48至72小时时段内发生的急性发热性呼吸道疾病(AFRI)相对于正常背景速率急剧提高或当所分析的群体中的任何个体测试为流感阳性时。通过任何测试方法确认的流感的一种情况即视为爆发。
如本文所用，“指示病例(index case)”、“原发病例(primary case)”或“零号患者(patient zero)”为流行病研究的群体样品中的首个患者。指示病例为指示爆发存在的第一个患者。可能发现更早的病例，且将其标记为原发、继发、三发等。
在一些实施例中，本发明所述的方法为针对易患由流感病毒感染引起的并发症的患者(特定而言人类)的预防性或防治性措施。本文所述的防治性方法可在已确认指示病例或爆发的情形下使用，以防止感染在社区或人群的其余部分中传播。
在一些实施例中，本申请所述的方法作为防治性措施应用于小区或人群的成元，特定而言人类，以防止感染传播。
如本文所用，“有效量”是指足以引起所期望生物反应的量。在本发明中，所需生物反应为抑制流感病毒的复制，减少流感病毒的量或减轻或改善流感病毒感染的严重程度、持续时间、进展或发作，预防流感病毒感染的加快，预防与流感病毒感染相关的症状的复发、显现、发作或进展，或增强或改良针对流感感染使用的另一疗法的防治性或治疗性作用。向个体施用的化合物的精确量将视施用模式、感染的类型、严重程度以及个体的特征(例如一般健康状况、年龄、性别、体重及对药物的耐受性)而定。熟习此项技术者将能够依据这些及其他因素判定适当的剂量。当与其他抗病毒剂联合施用时，例如当与抗流感药物联合施用时，第二药物的有效量将视所用药物的类型而定。安全量为具有最小副作用的量，如本领域中熟习此项技术者可容易确定的量。获批药物的适合剂量为已知的且可由熟习此项技术者根据个体的病况、所治疗病况的类型及正使用的本发明所述化合物的量进行调整。在未明确地标注用量的情况下，应假设安全且有效用量量。举例而言，本文所述化合物可以约0.01至100mg/kg体重/天的间的剂量范围向个体施用以用于治疗性或防治性治疗。
如本文所用，本文所述化合物或组合物的“安全且有效量”为不在患者中引起过度或有害副作用的化合物或组合物的有效量。
一般而言，给药方案可根据各种因素进行选择，所述因素包含：所治疗的病症及病症的严重程度；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别及膳食；所采用的特定化合物的施用时间、施用途径及排泄率；个体的肾及肝功能；及所采用的特定化合物或其盐、治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物；以及医学技术中熟知的类似因素。熟习此项技术者可容易确定及开立用于治疗、预防、抑制(完全或部分)或遏制疾病进展所需的本文所述化合物的安全且有效量。
本文所述化合物的剂量可在约0.01至约100mg/kg体重/天、约0.01至约50mg/kg体重/天、约0.1至约50mg/kg体重/天或约1至约25mg/kg体重/天的间的范围内。应当理解，每天的给药总量可以单次剂量施用或可以多次施用，例如一天两次(例如每12小时)、一天三次(例如每8小时)或一天四次(例如每6小时)。
对于治疗性治疗，可在症状(例如鼻塞、咽喉痛、咳嗽、疼痛、乏力、头痛及发冷/盗汗)发作的例如48小时内(或40小时内、或小于2天、或小于1.5天或24小时内)向患者施用本文所述化合物。治疗性治疗可持续任何合适的持续时间，例如，5天、7天、10天、14天等。对于社区爆发期间的防治性治疗，可在例如指示病例的症状发作的2天内向患者给予本文所述化合物，且可持续任何合适的持续时间，例如7天、10天、14天、20天、28天、35天、42天等。
组合疗法
本文所述化合物或其医药学上可接受的盐可单独或与其他适合的治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)组合施用。当采用组合疗法时，可使用第一量的如本文所述的化合物(例如式I、IIA或IIB中任一个的化合物)或其医药学上可接受的盐及第二量的其他适合的治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)达成安全且有效量。在一些情况下，第二抗病毒剂为吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感神经胺糖酸苷酶抑制剂、流感PB1聚合酶域抑制剂或流感CAP结合PB2域抑制剂。
在本申请所述的一些实施例中，本文所述化合物或其医药学上可接受的盐及其他治疗剂各自以安全且有效量(即各自以若单独施用则治疗有效的量)施用。在一些实施例中，化合物及其他治疗剂各自以单独不提供治疗作用的量(低于治疗量剂量)施用。在一些实施例中，化合物可以安全且有效量施用，而其他治疗剂以低于治疗量剂量施用。在一些实施例中，化合物可以低于治疗量剂量施用，而其他治疗剂(例如适合的癌症治疗剂)以安全且有效量施用。
如本文所用，术语“组合疗法”、“组合”及“共施用(co-administration/coadministration)”可互换使用以指使用多于一种疗法(例如一或多种防治剂及/或治疗剂)。所述术语的使用不限制向个体施用的疗法(例如防治剂及/或治疗剂)的次序。
共施用可涵盖以基本上同时的方式，例如以单一医药组合物形式，例如具有固定比率的第一量及第二量的胶囊或锭剂，或以多个各自的单独胶囊或锭剂形式施用组合的第一量及第二量的化合物。此外，这些共施用也可涵盖以任一次序以依序方式使用组合的各化合物。
在一些实施例中，本申请是针对使用所述化合物或医药组合物用于抑制生物样品或患者的流感病毒复制或治疗或预防患者的流感病毒感染的组合疗法的方法。因此，本文所述医药组合物还包括如本文所述的流感病毒复制抑制剂与展现抗流感病毒活性的抗病毒化合物的组合的医药组合物。
使用方法还包含用本文所述化合物或用本文所述的化合物与另一抗病毒药物的组合进行化学疗法及用流感疫苗进行疫苗接种的组合。
当共施用涉及分开施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂时，在足够接近的时间内施用化合物及药物，以具有所期望治疗作用。举例而言，各施用的间的时段可在数分钟至数小时范围内且可通过考虑各化合物的特性(例如效能、溶解度、生物可用性、血浆半衰期及动力学概况)选定以产生所期望的治疗作用。举例而言，如本文所述化合物及第二治疗剂可在彼此的约24小时内、在彼此的约16小时内、在彼此的约8小时内、在彼此的约4小时内、在彼此的约1小时内或在彼此的约30分钟内以任何次序施用。
更特定而言，第一疗法(例如防治剂或治疗剂，例如本发明化合物)可在向个体施用其他治疗剂(例如抗病毒药物或流感疫苗)之前(例如之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用。
应理解，共施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂的方法可产生增强或协同治疗作用，其中组合作用大于由分开施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂所产生的累加作用。
如本文所用，术语“协同”是指本发明化合物及另一疗法(例如防治剂或治疗剂)的组合，其比所述疗法的累加作用更有效。疗法组合(例如防治剂或治疗剂的组合)的协同作用可允许使用较低剂量的疗法中的一个或多个及/或以更低频率向个体施用所述疗法。能够利用较低剂量的疗法(例如防治剂或治疗剂)及/或以更低频率施用所述疗法可降低与向个体施用所述疗法相关的毒性而不降低所述疗法在预防、控制或治疗病症方面的功效。此外，协同作用可使得药物在预防、控制或治疗病症方面的功效提高。最后，疗法组合(例如防治剂或治疗剂的组合)的协同作用可避免或降低与任一单独疗法的使用相关的不利或非所需副作用。
当使用本发明化合物的组合疗法与流感疫苗组合时，可施用两种治疗剂以使得各施用的间的时段可更长(例如数天、数周或数月)。
协同作用的存在可使用用于评估药物相互作用的适合的方法来判定。适合的方法包含例如S型-Emax(Sigmoid-Emax)方程式(Holford,N.H.G.及Scheiner,L.B.，《临床药物动力学(Clin.Pharmacokinet.)》6:429-453(1981))，Loewe加成方程式(Loewe,S及Muischnek,H.,《实验病理学及药理学档案(Arch.Exp.Pathol.Pharmacol.)》114:313-326(1926))及中效方程式(Chou,T.C.及Talalay,P.，《酶调节进展(Adv.Enzyme Regul.)》22:27-55(1984))。上文提及的各方程式可结合实验数据应用以产生有助于评估药物组合的作用的对应图表。与上文提及的方程式相关的对应图表分别为浓度-作用曲线、等效线图曲线及组合指数曲线。
抗流感疫苗
本文所述化合物可与抗流感疫苗结合防治性施用。这些疫苗可例如经由皮下或鼻内投与来施用。经由皮下注射的疫苗接种通常在血清中诱导出具有中和活性的IgG抗体，且对于预防病况发展成例如肺炎及类似的更严重病况极其有效。然而，在作为感染位点的上呼吸道黏膜中，IgA是主要防治性组分。由于IgA并不能够通过皮下施用诱导，因此对于通过鼻内途径施用疫苗也是有利的。
抗病毒抑制剂
各种其他化合物可与本文所述化合物组合使用以治疗或预防流感感染。批准的化合物包含神经胺糖酸苷酶(NA)抑制剂、离子通道(M2)抑制剂、聚合酶(PB1)抑制剂及其他流感抗病毒剂。
存在三种用于对抗流感病毒的FDA批准的流感抗病毒药物，包含
Figure GDA0003169993220000381
(扎那米韦)、
Figure GDA0003169993220000382
(奥司他韦磷酸盐)及
Figure GDA0003169993220000383
(帕拉米韦(peramivir))。更早期药物，例如
Figure GDA0003169993220000384
(金刚胺(amantadine))及
Figure GDA0003169993220000385
(金刚乙胺(rimantadine))经批准用于治疗及预防A型流感。
神经胺糖酸苷酶(NA)抑制剂为阻断神经胺糖酸苷酶的一类药物。其通常用作抗病毒药物，因为他们通过防止流感病毒经由自宿主细胞出芽而繁殖来阻断流感病毒的病毒神经胺酸酶的功能。代表性神经胺糖酸苷酶抑制剂包含奥司他韦
Figure GDA0003169993220000391
扎那米韦
Figure GDA0003169993220000392
拉尼娜米韦(laninamivir)
Figure GDA0003169993220000393
及帕拉米韦
Figure GDA0003169993220000394
也可使用M2抑制剂。基质-2(M2)蛋白作为质子选择性离子通道蛋白质，整体处于A型流感病毒的病毒包膜中。
抗流感病毒药物金刚胺为M2 H+通道的特异性阻断剂。金刚烷胺(aminoadamantane)(包含金刚胺及金刚乙胺)因病毒耐药性而广泛地舍弃，但组合疗法可减轻这些药物耐药性的发展，因为对一种活性剂产生耐药性的病毒仍可由组合疗法中的其他药物进行治疗。
流感RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的抑制剂包含例如某些吡嗪甲酰胺衍生物，例如法匹拉韦(favipiravir)(T-705或
Figure GDA0003169993220000395
)及在PCT WO 2013/138236中所描述的化合物。Muratore等人，《美国科学院院报(PNAS)》,109(16),6247-6252(2012年4月)中所公开的其他化合物包含以下：
Figure GDA0003169993220000396
可与本文所述化合物共施用的特定实例包含神经胺糖酸苷酶抑制剂，例如
Figure GDA0003169993220000397
及扎那米韦
Figure GDA0003169993220000398
病毒离子信道(M2蛋白)阻断剂，例如金刚胺
Figure GDA0003169993220000399
及金刚乙胺
Figure GDA00031699932200003910
及WO 2003/015798中所述的抗病毒药物，包含法匹拉韦
Figure GDA00031699932200003911
(参见Ruruta等人,《抗病毒研究(Antiviral Res.)》,82:95-102(2009))在一些实施例中，本文所述化合物可与传统流感疫苗共施用。
可与本文所述化合物共施用的化合物的其他实例包含吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感PB1聚合酶域抑制剂、流感CAP结合PB2域抑制剂，例如(3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸)。
本文所述化合物可适用作生物样品或患者的流感病毒复制的抑制剂。这些化合物还可适用于减少生物样品或患者的流感病毒的量(病毒滴度)。其还可适用于生物样品或患者的由流感病毒引起的感染的治疗性及防治性治疗。
本发明还提供制备本文所述化合物的方法。在一些实施例中，所述方法系针对制备由式I、IIA、IIB表示的化合物或其医药学上可接受的盐。
本文公开化合物的制备
本文中公开的化合物可以多种方式使用市售起始原料、文献中已知的化合物或由容易制备的中间物，通过采用本领域技术人元已知的或按照本文公开的标准合成方法及程序来制备。制备有机分子及官能基转化及操作的标准合成方法及程序可从相关科学文献或该领域的标准教科书获得。尽管不限于任一或若干来源，但经典文本，例如Smith,M.B.,March,J.,《马奇氏高等有机化学：反应、机制及结构(March's Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure)》,第5版,John Wiley&Sons:NewYork,2001；及Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,《有机合成中的保护基(Protective Groups inOrganic Synthesis)》,第3版,John Wiley&Sons:New York,1999为此项技术者已知的有用且认可的有机合成参考教科书。举例而言，本申请所述化合物可通过固相合成技术合成，包含Merrifield,《美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)》1963；85:2149；Davis等人,《国际生物化学(Biochem.Intl.)》1985；10:394-414；Larsen等人,《美国化学学会杂志》1993；115:6247；Smith等人,《肽蛋白研究杂志(J.Peptide Protein Res.)》1994；44:183；O'Donnell等人,《美国化学学会杂志》1996；118:6070；Stewart及Young,《固相肽合成(Solid PhasePeptide Synthesis)》,Freeman(1969)；Finn等人,《蛋白(The Proteins)》,第3版,第2卷,第105-253页(1976)；及Erickson等人,《蛋白》,第3版,第2卷,第257-527页(1976)中所描述的固相合成技术。以下描述的合成方法旨在说明制备本发明公开化合物的通用程序而非限制本发明。
本发明所述的合成过程可容许多种官能基；因此可使用各种取代的起始原料。所述过程一般在整个过程结束或接近结束时提供所期望最终化合物，但在某些情况下，可能需要将化合物进一步转化为其医药学上可接受的盐、酯或前药。
一般而言，式(I)化合物可根据流程1合成。
流程1
Figure GDA0003169993220000411
具有结构g的化合物可使用流程1中所示的程序合成。O-保护的、任选取代的4-氧代-1,4-二氢吡啶酯a与任选取代的胺化合物b的反应产生具有结构c的4-氧代-1,4-二氢吡啶酰胺。与适当的羰基化合物d(例如甲醛或其他醛或酮)缩合产生具有结构e的3,4-二氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-1,8-二酮化合物。添加环A部分以形成中间物f然后脱保护产生如本文所述化合物，亦即具有结构g的式I化合物。
化合物a与b的偶合可通过基于化合物a及b的精确性质选择的适当试剂催化。举例而言，化合物a与b的偶联可通过碱催化，例如1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)。偶合反应有时可不需要催化剂。
同样，化合物c与d缩合的适当条件可基于化合物c及d的精确性质选择。举例而言，M可能是氨基部分(如-NH2)，且化合物c与d的偶联可在高温下在溶剂中进行。举例而言，溶剂可能是质子溶剂，例如醇(例如乙醇)，且反应物可经由微波辐照加热。
添加环A部分至具有结构e的化合物的适当反应条件可基于M及环A的反应性部分Z的性质进行选择。举例而言，当M为氨基部分时，Z可能是离去基团(离核体)，例如卤素，例如氯或碘基团，且添加环A至e可使用添加碱添的溶剂中(例如DMF中添加氢化钠)进行。
化合物a、b、d及环A可商购或通过多种方法由市售起始原料制备。
举例而言，具有结构k的环A部分可通过无环状化合物的过渡金属催化环化反应来制备，如流程2所示。
流程2
Figure GDA0003169993220000421
具有结构h的化合物可在适当的催化剂(例如过渡金属催化剂)存在下进行环化。举例而言，当L1为卤素离去基团(例如溴部分)时，铬/镍催化剂(例如CrCl2/NiCl2)可催化h的环化反应以产生具有结构j的化合物。进一步衍生化可产生具有结构k的环A部分，其具有适当的离去基团部分L2，用于添加至具有上文结构e的化合物。可基于部分L2的所期望特性选择衍生化反应。举例而言，结构j的OH部分可用磷酸脱水然后在乙酸存在下用氯气处理而转化成对应于结构k中的L2的氯基团。
手性分离
本文所述化合物可具有不对称中心且以外消旋体、外消旋混合物、个别非对映异构体或对映异构体形式存在，其中所有异构体形式均包含在本申请公开内容中。具有手性中心的本文所述化合物可以光学活性及外消旋形式存在并分离。一些化合物可展现多晶型现象。本文公开内容涵盖拥有本文所述的适用特性的所述化合物的外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物。光学活性形式可通过例如重结晶技术拆分外消旋形式、通过光学活性起始物质的合成、通过手性合成、或通过使用手性固定相层析分离或通过酶促拆分来制备。可以纯化相应化合物，随后衍生化所述化合物以形成本文所述的化合物或纯化所述化合物本身。
可使用本领域中已知的任何方法制备化合物的光学活性形式，包含但不限于用重结晶技术拆分外消旋形式、通过自光学活性起始原料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相层析进行分离。
获得光活性物质的方法的实例至少包含以下。
i)结晶的物理分离：通过将个别对映异构体的宏观结晶人工分离的技术。若存在单独对映异构体的晶体，即物质为聚结物且该晶体在视觉上是不同的，则可使用此技术；
ii)同时结晶：通过将个别对映异构体分别从外消旋体的溶液结晶的技术，仅在外消旋体为固态聚结物时才可行；
iii)酶促拆分：通过对映异构体与酶反应速率的不同而部分或完全分离外消旋体的技术；
iv)酶促不对称合成：其中合成的至少一个步骤使用酶促反应以获得所期望对映异构体的对映异构纯或富含合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成：通过在产物中产生不对称性(即手性)条件下从非手性前体合成所期望对映异构体的合成技术，其可使用手性催化剂或手性助剂来实现；
vi)非对映异构体分离：通过外消旋化合物与对映体纯的试剂(手性助剂)反应的技术，该试剂将单个对映体转化为非对映体。随后，通过他们现在更明显之结构差异，通过层析或结晶分离得到非对映异构体，然后去除手性助剂，获得所期望对映异构体；
vii)一级和二级不对称转化：来自外消旋体的非对映异构体平衡以优先拆分来自所需对映异构体的非对映异构体，或来自所需对映异构体的非对映异构体的优先结晶干扰平衡以使得最终大体上所有物质均转化为来自所需对映异构体的结晶非对映异构体的技术。随后从非对映异构体释放出所期望对映异构体；
viii)动力学解析：此技术是指通过对映异构体与手性非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下之不相等反应速率，实现外消旋体的部分或完全拆分(或部分拆分化合物的进一步拆分)；
ix)从非外消旋前体进行对映异构特异性合成：通过从非手性起始原料获得所期望对映异构体且其中立体化学完整性在合成过程中不会或仅最低限度影响的合成技术；
x)手性液相层析：通过使外消旋体对映异构体与固定相的不同相互作用(包括但不限于通过手性HPLC)在液体流动相中分离的技术。固定相可由手性物质制得或流动相可含有另一手性物质以引起不同相互作用；
xi)手性气相层析：通过使外消旋体挥发且对映异构体在气体流动相中与含有固定非外消旋手性吸附剂相色谱柱的不同相互作用而分离的技术；
xii)手性溶剂萃取：通过优先将一种对映体溶解于特定手性溶剂中而分离出对映体的技术；
xiii)手性膜传输：通过使外消旋体与薄膜屏障接触的技术。隔离层通常分离两种可混溶的流体，一种含有外消旋体，且驱动力(例如浓度或压力差)引起通过跨膜屏障的优先传输。分离通过膜的非外消旋手性性质而进行，所述性质使得仅使外消旋体的一种对映异构体通过。
在一些实施例中使用手性层析法，包含但不限于模拟移动床层析法。多种手性固定相为市售的。
在一些实施例中，本文提供具有式(I)的结构的化合物或其医药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220000441
其中
环A为
Figure GDA0003169993220000451
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R4、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。
还描述段落[00117]的实施例，其中M为N。
还描述段落[00117]的实施例，其中M为CH。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2CH2。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2O或OCH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X'为CH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X为CH2CH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X'为CH2O或OCH2。
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220000481
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220000482
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220000483
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220000484
还描述段落[00117]的实施例，其具有式(IIA)或(IIB)的结构：
Figure GDA0003169993220000491
还描述段落[00117]至[00130]的实施例，其中R1及R2中的至少一个为H。
还描述段落[00117]至[00131]的实施例，其中R1及R2中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00132]的实施例，其中R4为H。
还描述段落[00117]至[00132]的实施例，其中R4为OH或OMe。
还描述段落[00117]至[00134]的实施例，其中R5及R6中的至少一个为H。
还描述段落[00135]的实施例，其中R5及R6中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00134]的实施例，其中R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，任选择1到3个取代基A取代。
还描述段落[00117]至[00135]的实施例，其中R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
还描述段落[00117]至[00138]的实施例，其中R3为C1-6烷基、C3-6碳环基-C1-6亚烷基、C3-6碳环基-O-C1-6亚烷基或3至7元杂环基-C1-6亚烷基。
还描述段落[00139]的实施例，其中R3为乙基、甲基或C1-3亚烷基-环丙基。
还描述段落[00140]的实施例，其中R3为C6碳环基-C1-6亚烷基或C6碳环基-O-C1-6亚烷基且所述C6碳环基为苯基、卤苯基或二卤苯基。
还描述段落[00141]的实施例，其中R3为3至7元杂环基-C1-6亚烷基且所述杂环基为四氢吡喃基。
还描述段落[00117]至[00137]的实施例，其中R3为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
还描述段落[00117]至[00143]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为H。
还描述段落[00144]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为H。
还描述段落[00145]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00145]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为卤素。
还描述段落[00147]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为卤素。
还描述段落[00147]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的两个为卤素且其他为H。
还描述段落[00147]至[00149]的实施例，其中卤素为F。
还描述段落[00117]的实施例，其中
环A为
Figure GDA0003169993220000511
R1、R2、R4、R5及R6中的每一个为H；
M为N；
X及X'中的每一个为CH2；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-，其中杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
取代基A为卤素；及
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H或卤素，条件为Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
还描述段落[00117]的实施例，其中化合物或盐具有
Figure GDA0003169993220000512
Figure GDA0003169993220000521
Figure GDA0003169993220000531
Figure GDA0003169993220000541
的结构。
在一些实施例中，本公开内容提供医药组合物，其包含段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐及医药学上可接受的赋形剂。
在一些实施例中，本公开内容提供抑制A型或B型流感病毒中流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括使病毒与段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐接触。
在一些实施例中，本公开内容提供用于治疗或预防宿主的A型流感或B型流感感染的方法，其包括向宿主施用治疗量的如段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
在一些实施例中，本公开内容提供用于减少宿主中A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括向宿主施用治疗量的段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
在一些实施例中，本公开内容提供用于减少宿主中的流感病毒复制的方法，其包括向宿主施用治疗量的段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
还描述段落[00154]至[00157]的实施例，其其进一步包含使流感病毒与治疗有效量的第二抗病毒剂接触或向宿主施用治疗有效量的第二抗病毒剂。
还描述段落[00158]的实施例，其中第二抗病毒剂为吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感神经胺糖酸苷酶抑制剂、流感PB1聚合酶域抑制剂或流感CAP结合PB2域抑制剂。
还描述段落[00159]的实施例，其中第二抗病毒剂为法匹拉韦、奥司他韦或3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸。
还描述段落[00154]-[00160]的实施例，其进一步包含在化合物之前、之后或与化合物同时向宿主施用流感疫苗。
在一些实施例中，本公开内容提供段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐的用途，其用于治疗A型流感或B型流感病毒感染。
在一些实施例中，本公开内容提供段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐的用途，其用于制造用以治疗A型流感或B型流感病毒感染的药物。
定义及通用术语
出于本公开内容的目的，化学元素根据元素周期表(Periodic Table of theElements),CAS版,《化学及物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)》,第75版来鉴别。另外，有机化学的一般原理描述于《有机化学(Organic Chemistry)》,ThomasSorrell,University Science Books,Sausalito:1999及March’s Advanced OrganicChemistry,第5版,编者：Smith,M.B.及March,J.，John Wiley&Sons,New York:2001中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所述，本文所述化合物任选经例如下文大体上说明或如通过本文所述的特定类别、子类别及物种所例示之一个或多个取代基取代。应了解，词组“任选取代”可与词组“取代或未取代”互换使用。一般而言，术语“取代”无论是否放在术语“任选”之后皆是指既定结构中的一个或多个氢基团经特定取代基的基团置换。除非另有指示，否则任选取代的基团可在该基团的各可取代位置处具有一取代基。当既定结构中超过一个位置可经超过一个选自指定群组的取代基取代时，在各位置处该取代基可能是相同的或不同的。当术语“任选取代”在一列表之前时，所述术语是指所述列表中的所有后续可取代基团。若取代基基团或结构未经鉴别或定义为“任选取代”，则所述取代基基团或结构未取代。在一些情况下，取代基是选自群组A：卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-。
本文所涵盖的取代基的选择及取代基的组合为引起形成稳定或化学上可行的化合物的那些选择及组合。如本文所用，术语“稳定”是指化合物在经历允许其产生、侦测及特定而言其回收、纯化及用于本文所公开的目的中的一个或多个的条件时实质上不改变。在一些实施例中，稳定化合物或化学上可行的化合物为在不存在水分或其他化学反应条件的情况下在40℃或更低的温度下保持至少一周时实质上不改变的化合物。仅涵盖产生稳定结构的取代基的那些选择及组合。这些选择及组合对于本领域技术人员将是显而易见的，且可在无不当实验的情况下确定。
如本文所用，术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃。如本文中所使用的，术语“烯基”是指包括一个或多个双键的直链或分支链烃。如本文所用，术语“炔基”是指包括一个或多个参三键的直链或支链烃。如本文所用，“烷基”、“烯基”或“炔基”中的各个任选如下文所阐述的取代基。在一些实施例中，“烷基”为C1-C14烷基、C1-C6烷基或C1-C4烷基。在一些实施例中，“烯基”为C2-C6烯基或C2-C4烯基。在一些实施例中，“炔基”为C2-C6炔基或C2-C4炔基。术语“亚烷基”是指进一步取代的烷基。举例而言，“碳环基-亚烷基”指示烷基，其为与化合物的其余部分的连接点且也被碳环基基团取代。当亚烷基指示为“C0”时指示不存在亚烷基且也列举的取代基直接连接至化合物的其余部分，例如C3-10碳环基-C0-6亚烷基指示C3-10碳环基直接或经由C1-6亚烷基连接基团连接至化合物的其余部分。
术语“碳环”或“碳环基”是指具有三至十四个环碳原子的仅含有碳的环系统，其可能是饱和的或含有一个或多个不饱和单元或为芳族(即芳基)。在一些实施例中，碳原子数为3至10(即C3-C10碳环基)。在其他实施例中，碳原子数为4至7。在其他实施例中，碳原子数为5或6。所述术语包含单环、双环或多环稠合、螺接或桥接碳环系统。所述术语还包含多环系统，其中碳环可与一个或多个碳环或杂环“稠合”，其中基团或连接点在所述碳环上。“稠合”双环系统包括共享两个毗邻环原子的两个环。桥接双环基团包括共享三个或四个相邻环原子的两个环。螺接双环系统共享一个环原子。碳环基团的实例包含但不限于环烷基(即完全饱和的碳环)及环烯基(即具有一个或多个不饱和度但非芳族的碳环)基团。特定实例包含但不限于环己基、环丙烯基、环丁基及环丙基。
所涵盖的芳族碳环包含单环芳族基团，例如苯基。除非另有指示，否则芳基在环中可具有6至14个碳原子，例如在环中具有6至10个碳原子(即C6-C10芳基)。除非另有指示，否则芳基可未取代或被一个或多个，特定而言1至4个基团，例如来自取代基A的基团取代。芳基可能是独立的(例如苯基)或与另一芳基(例如萘基、蒽基)、环烷基(例如四氢萘基)、杂环烷基和/或杂芳基稠合。例示性芳基包含但不限于苯基、卤苯基(例如氯苯基或氟苯基)、二卤苯基(例如二氯苯基或二氟苯基)、甲基苯基、甲氧苯基、三氟甲基苯基、硝苯基、2,4-甲氧基氯苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、二氢茚基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基及类似基团。
如本文所用，术语“杂环”或“杂环基”是指可能是饱和的或含有一个或多个不饱和单元的非芳环系统或芳环系统，所述环系统具有三至十四个环原子，其中一个或多个(例如1至4个)环原子为例如N、S或O的杂原子。在一些实施例中，环系统可包含3至12个环原子(即3至12元杂环基)、3至7个环原子(即3至7元杂环基)或5至7个环原子(即5至7元杂环基)。在一些实施例中，杂环在环内包括至多三个选自N、S及O的杂原子。在其他实施例中，杂环包括至多两个选自N、S及O的环杂原子。在其他实施例中，杂环包括至多两个选自N及O的环杂原子。所述术语包含单环、双环或多环稠合、螺接或桥接杂环系统。所述术语亦包含多环系统，其中杂环可与一个或多个碳环或杂环或其组合稠合，其中基团或连接点在所述杂环上。杂环的实例包含但不限于：哌啶基、哌嗪基、吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、三氮杂环庚烷基、氮杂环辛基、二氮杂环辛基、三氮杂环辛基、恶唑啶基、异恶唑啶基、噻唑啶基、异噻唑啶基、氧氮杂环辛基、氧氮杂环庚烷基、噻氮环庚烷基、噻氮环辛基、苯并咪唑酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、N-吗啉基(包含例如3-N-吗啉基、4-N-吗啉基、2-N-硫代吗啉基、3-N-硫代吗啉基、4-N-硫代吗啉基)、1-吡咯啶基、2-吡咯啶基、3-吡咯啶基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑啶基、3-噻唑啶基、4-噻唑啶基、1-咪唑啶基、2-咪唑啶基、4-咪唑啶基、5-咪唑啶基、吲哚啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并二硫杂环戊烷基、苯并二噻烷基、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮基及1,3-二氢-咪唑-2-酮基。。所涵盖的芳族杂环基环的实例包含吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻唑基、异噻唑基或噻二唑基，包含例如2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-恶二唑基、5-恶二唑基、2-恶唑基、4-恶唑基、5-恶唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-三唑基、5-三唑基、四唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基、苯并异恶唑基、异噻唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)及异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。
除非本文另有规定，否则术语「杂原子」是指氧、硫、氮或磷中的一个或多个。
如本文所用，“羰基”是指-C(O)-。
如本文所用，“氧代”是指＝O。
如本文所用，如本文所用的术语“烷氧”或“烷硫基”是指如先前所定义经由氧(“烷氧基”，例如-O-烷基)或硫(“烷硫基”，例如-S-烷基)原子连接至分子的烷基。
如本文所用，术语“卤素”及“卤基”是指F、Cl、Br或I。
术语“卤代烷基”及“卤烷氧基”是指视具体情况被一个或多个卤素原子取代的烷基、烯基或烷氧基。此术语包含全氟烷基，例如-CF3及-CF2CF3。
如本文所用，术语“保护基(protecting group)”及“保护基(protective group)”可互换且是指用以暂时阻断具有多个反应性位点的化合物中的一个或多个所需官能基的试剂。在某些实施例中，保护基具有一个或多个或特定而言所有的以下特征：a)以良好产率选择性添加至官能基，得到b)对于在其他反应性位点中的一处或多处发生的反应而言是稳定的受保护基质；及c)可通过不进攻再生的去保护的官能基的试剂以实现高产率的选择性移除。如本领域技术人员所了解的，在一些情况下，试剂不进攻化合物中的其他反应性基团。在其他情况下，所述试剂还可与化合物中的其他反应性基团反应。保护基的实例详述于Greene,T.W.,Wuts,P.G的《有机合成中的保护基(Protective Groups in OrganicSynthesis)》，第三版，John Wiley&Sons,New York:1999(及所述书籍的其他版本)中，其全部内容以引用的方式并入本文中。如本文所用，术语“氮保护基”是指用以暂时阻断多官能化合物中的一个或多个所需氮反应性位点的试剂。优选的氮保护基也拥有以上保护基所例示的特征，且某些例示性氮保护基也详述于Greene,T.W.,Wuts,P.G的《有机合成中的保护基》,第三版,John Wiley&Sons,New York:1999，第7章中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“离去基团”是指通过亲核试剂的亲核攻击而经历置换的基团。
除非另有指示，否则本文所描绘的结构也包含结构的所有异构形式(例如对映异构、非对映异构、顺反异构、构形异构及旋光异构)。举例而言，除非仅特异性地绘制一种异构体，否则本公开内容中包含各不对称中心的R及S构型、(Z)及(E)双键异构体以及(Z)及(E)构形异构体。
因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构、顺/反异构、构形异构及旋光异构混合物属于本公开内容的范围内。
除非另有指示，否则本文所述化合物的所有互变异构形式均在本公开内容的范围内。
另外，除非另有指示，否则本文中所描绘的结构还包含仅旨在包括存在一个或多个经同位素富集原子的不同化合物。举例而言，除了氢被氘或氚置换或碳被富含13C或14C的碳置换的外具有本发明结构的化合物也在本公开内容的范围内。这些化合物适用作例如生物分析中的分析工具或探针。这些化合物(尤其氘类似物)也可在治疗上适用。
术语“键”及“不存在”可互换使用以指示基团不存在。
本文所述化合物在本文中通过其化学结构及/或化学名称定义。在通过化学结构与化学名称提及化合物且化学结构与化学名称矛盾时，化学结构决定化合物的身份。
药学上可接受的盐
本文所述化合物可以以游离形式或在适当情况下以盐形式存在。药学上可接受的那些盐尤其受到关注，因为其适用于施用下文所述的用于医疗用途的化合物。非药学上可接受的盐适用于制造过程以达到分离及纯化目的，且在一些个例中，用于分离本文所述化合物或其中间物的立体异构形式。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指合理的医学判断范围内适用于接触人类及低等动物的组织而无不当副作用(例如毒性、刺激、过敏反应及类似者)且与合理益处/风险比相当的化合物的盐。
药学上可接受的盐为本领域中所熟知。举例而言，S.M.Berge等人在《医药科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中详细描述药学上可接受的盐，该文献以引用的方式并入本文中。本文所述化合物的药学上可接受的盐包含衍生自适合的无机酸及碱以及有机酸及碱的那些盐。可在化合物的最终分离及纯化期间原位制备这些盐。
在本文所述化合物含有碱基或足够碱性的生物电子等排物体时，酸加成盐可通过1)使呈游离碱形式的纯化的化合物与适合的有机或无机酸反应，及2)分离由此形成的盐来制备。实际上，酸加成盐可能是供使用的更适宜的形式，且所述盐的使用相当于游离碱形式的使用。
药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例为与无机酸(例如氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸及过氯酸)或与有机酸(例如乙酸、乙二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的氨盐，或通过使用本领域中所用的其他方法(例如离子交换)形成的盐。其他药学上可接受的盐包含己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬胺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及类似物。
在本文所述化合物含有羧基或足够酸性的生物电子等排物体的时，碱加成盐可通过以下步骤获得：1)使呈酸形式的纯化的化合物与适合的有机或无机碱反应，以及2)分离因此形成的盐来制备。实际上，碱加成盐的使用可能是更适宜的，且所述盐形式本身的使用相当于游离酸形式的使用。衍生自适当碱的盐包含碱金属(例如钠、锂及钾)、碱土金属(例如镁及钙)、铵及N+(C1-4烷基)4盐。本公开内容还设想本文中所公开化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。通过这些季铵化可获得水溶性或油溶性或可分散性产物。
碱加成盐包含药学上可接受的金属盐及胺盐。适合的金属盐包含钠、钾、钙、钡、锌、镁及铝。钠盐及钾盐通常为优选的。在适当时，其他药学上可接受的盐包含使用例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳数烷基磺酸根及芳基磺酸根的相对离子形成的无毒铵、季铵及胺阳离子。适合的无机碱加成盐由金属碱制备，所述金属碱包含氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌及类似物。适合的胺碱加成盐由因其低毒性及医疗用途的可接受性而常用于药物化学的胺制备。氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、离胺酸、精胺酸、鸟胺酸、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苯甲基苯乙基胺、二乙胺、哌嗪、三(羟基甲基)-胺基甲烷、四甲基铵氢氧化物、三乙胺、二苯甲基胺、二苯羟甲胺、去氢松香胺、N-乙基哌啶、苯甲胺、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、碱性胺基酸、二环己胺及类似物。
其他酸及碱在其本身并非药学上可接受时可用于制备在获得本文所述化合物及其药学上可接受的酸或碱加成盐时适用作中间物的盐。
应了解，本公开内容包含不同药学上可接受的盐的混合物/组合，且还包含呈游离形式的化合物及药学上可接受的盐的混合物/组合。
医药组合物
本文所述化合物可调配成进一步包括药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的医药组合物。在一些实施例中，本发明系关于一种医药组合物，其包括本文所述化合物及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物。在一些实施例中，本公开内容包含一种医药组合物，其包括安全且有效量的本文所述化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物。药学上可接受的载体包含例如相对于适当选择预期的给药形式的药物稀释剂、赋形剂或载体。
“有效量”包含“治疗有效量”及“防治有效量”。术语“治疗有效量”是指在治疗及/或改善患者的流感病毒感染方面有效的量。术语“防治有效量”是指在预防及/或实质上减小流感病毒感染爆发的机会或规模方面有效的量。
药学上可接受的载体可含有不会不适当抑制化合物生物活性的惰性成分。药学上可接受的载体应为生物兼容的，例如无毒、非炎性、非免疫原性或在向个体施用时无其他不合需要的反应或副作用。可采用标准医药制剂技术。
如本文所用的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包含呈适用于所期望特定剂型的形式的任何溶剂、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等张剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体黏合剂、润滑剂及类似物。《雷明顿氏医药科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》,第十六版,E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)公开了用于调配药学上可接受的组合物的各种载体及其已知制备技术。除非任何常规载体介质与本文所述的化合物不相容，例如通过产生任何不希望的生物学作用或以有害的方式与药学上可接受的组合物的任何其他组分相互作用，否则预期其使用涵盖于本公开内容的范围内。如本文所用，词组“副作用”涵盖疗法(例如防治剂或治疗剂)不合需要的且不良的作用。副作用始终为不合需要的，但不合需要的作用不一定是不良的。疗法(例如预防剂或治疗剂)的不良作用可能是有害的或不适的或有风险的。副作用包含但不限于发热、发冷、嗜睡、胃肠道毒性(包含胃肠溃疡及糜烂)、恶心、呕吐、神经毒性、肾毒性、肾脏毒性(包含如乳头状坏死及慢性间质性肾炎的病况)、肝毒性(包含血清肝脏酶水平升高)、骨髓毒性(包含白血球减少症、骨髓抑制、血小板减少症及贫血)、口腔干燥、金属味、妊娠延长、无力、嗜眠、疼痛(包含肌肉痛、骨痛及头痛)、脱发、乏力、眩晕、椎体外症状、静坐不能、心血管紊乱及性功能障碍。
可充当药学上可接受的载体的物质的一些实例包含但不限于：离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白(例如人血清白蛋白)；缓冲物质(例如吐温80、磷酸酯、甘胺酸、山梨酸或山梨酸钾)；饱和植物脂肪酸、水、盐或电解质的部分甘油酯混合物(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯啶酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚环氧丙烷嵌段聚合物；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羊毛脂；糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；黄蓍粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；褐藻酸；无热原水；等张生理盐水；林格氏溶液；乙醇；及磷酸酯缓冲溶液；且根据调配者的判断，例如月桂基硫酸钠及硬脂酸镁的其他无毒兼容润滑剂以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂及芳香剂、防腐剂及抗氧化剂也可存在于组合物中。
用于经肺递送的调配物
在一些实施例中，本文所述的医药组合物适用于通过吸入直接经由呼吸道向下呼吸道(例如肺)施用。通过吸入施用的组合物可呈现为可吸入粉末组合物或液体或粉末喷雾剂形式，且可以标准形式使用粉末吸入装置或气溶胶分配装置来施用。这些装置为熟知的。对于通过吸入施用，粉末状调配物通常包括活性化合物以及惰性固体粉末状稀释剂，例如乳糖或淀粉。可吸入干粉组合物可存在于明胶或类似物质的胶囊及药筒或用于吸入器或吹入器的层压铝箔的泡壳中。各胶囊或药筒可通常含有例如约10mg至约100g的各活性化合物。或者，本文所述组合物可在无赋形剂的情况下存在。
可吸入组合物可经封装用于单位剂量或多剂量递送。举例而言，组合物可按类似于以下中所述的方式封装以用于多剂量递送：GB 2242134、美国专利第6,632,666号、第5,860,419号、第5,873,360号及第5,590,645号(均说明“
Figure GDA0003169993220000641
”装置)；或GB2178965、GB2129691、GB2169265、美国专利第4,778,054号、第4,811,731号及第5,035,237号(其说明“
Figure GDA0003169993220000642
”装置)；或EP 69715(“
Figure GDA0003169993220000643
”装置)或GB 2064336及美国专利第4,353,656号(“
Figure GDA0003169993220000644
”装置)。
用于通过吸入局部递送至肺的喷雾组合物可调配为水溶液或悬浮液或自加压封装递送的气溶胶，例如定剂量吸入器(MDI)，其中使用适合的液化推进剂，包含氢氟烷烃，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷及尤其1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷及其混合物。适用于吸入的气溶胶组合物可以悬浮液或溶液的形式呈现。
通过吸入施用的药物通常具有受控制的粒度。用于吸入至支气管系统中的最佳粒度通常为约1μm至约10μm，且在一些实施例中，为约2μm至约5μm。具有大于约20μm的粒度的颗粒一般过大而在吸入时不能达到较小的呼吸道。为达成这些粒度，活性成分的颗粒可经历例如微米尺寸化的粒度减小处理。可通过风选或筛分分离出所需粒度部分。优选地，颗粒将为结晶。
鼻内喷雾剂可使用水性或非水性媒介物由添加例如增稠剂、缓冲盐或调节pH的酸或碱、等张调节剂或抗氧化剂的药剂来调配。
用于通过雾化吸入的溶液可使用水性媒介物由添加例如酸或碱、缓冲盐、等张调节剂或抗微生物剂的药剂来调配。其可通过过滤或在高压釜中加热来灭菌，或以非灭菌产品呈现。雾化器以自调配物水溶液产生的薄雾形式供应气溶胶。
在一些实施例中，本文所述医药组合物可与补充活性成分一起调配。
在一些实施例中，本文所述医药组合物自干粉吸入器施用。
在其他实施例中，本文所述的医药组合物通过气溶胶分配装置任选结合例如“
Figure GDA0003169993220000651
”吸入室的吸入室来施用。
载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液体聚乙二醇及类似物)、其适合的混合物及/或植物油的溶剂或分散介质。例如可以通过使用例如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过维持所需粒度及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。本文所述的组合物中微生物的作用的预防可通过添加抗细菌剂及抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其类似物)来实现。在许多情况下，优选包含等张剂，例如糖或氯化钠。可通过在组合物中使用推迟吸收剂(例如单硬脂酸铝及明胶)来实现延长可注射组合物的吸收。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物可在控制组合物释放的基质内。在一些实施例中，基质可包括：脂质、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己内酯、聚(乙醇)酸、聚(乳)酸、聚己内酯、聚乳酸、聚酸酐、聚丙交酯-共-乙交酯、聚胺基酸、聚氧化乙烯、丙烯酸封端的聚氧化乙烯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯腈、聚磷氮烯、聚(原酸酯)、蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)及其组合，以及例如例如美国专利第6,667,371号；第6,613,355号；第6,596,296号；第6,413,536号；第5,968,543号；第4,079,038号；第4,093,709号；第4,131,648号；第4,138,344号；第4,180,646号；第4,304,767号；第4,946,931号中所公开的聚合物的其他聚合物，所述文献中的各者明确地以全文引用的方式并入本文中。在这些实施例中，基质持续释放药物。
药学上可接受的载体及/或稀释剂也可能包含任何溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及/或抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂及类似物。这些介质及药剂用于医药活性物质的用途为本领域中熟知。除非任何习知介质或药剂与活性成分不兼容，否则预期将其用于医药组合物中。
本文所述的医药组合物可经调配用于根据公知技术施用。参见例如Remington《药学科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)》(第20版，2000)。举例而言，本公开内容的鼻内医药组合物可调配为气溶胶(此术语包含液体与干粉气溶胶)。如本领域技术人员已知，液体颗粒的气溶胶可通过任何适合的手段产生，例如使用压力驱动的气溶胶雾化器或超音波雾化器。参见例如美国专利第4,501,729号。固体颗粒的气溶胶(例如冻干的、冷冻干燥的等)可同样使用任何固体颗粒药剂气溶胶产生器通过医药领域中已知的技术来产生。作为另一实例，本公开内容的医药组合物可调配为按需可溶形式，其提供医药组合物的冻干部分及医药组合物的溶解溶液部分。
在本发明的一些实施例中，医药组合物呈水性悬浮液形式，其可由溶液或悬浮液来制备。对于溶液或悬浮液，剂型可包含亲脂性物质、脂质体(磷脂小泡/膜)及/或脂肪酸(例如棕榈酸)的微胞。在特定实施例中，医药组合物为能够溶解于由经施用、施用及/或递送医药组合物的组织的上皮细胞黏膜所分泌的流体中的溶液或悬浮液，其可有利地增强吸收。
医药组合物可能是水性溶液、非水性溶液或水性溶液与非性水溶液的组合。
适合的水性溶液包含但不限于：水性凝胶、水性悬浮液、水性微球体悬浮液、水性微球体分散液、水性脂质体分散液、脂质体的水性微胞、水性微乳液及前述的任何组合或可溶解于鼻腔黏膜分泌的流体中的任何其他水性溶液。例示性非水性溶液包含但不限于：非水性凝胶、非水性悬浮液、非水性微球体悬浮液、非水性微球体分散液、非水性脂质体分散液、非水性乳液、非水性微乳液及前述的任何组合或可溶解或混合于黏膜分泌的流体中的任何其他非水性溶液。
粉末调配物的实例包含但不限于：纯粉末混合物、微米化粉末、冷冻干燥粉末、冻干粉末、粉末微球、包衣粉末微球、脂质体分散液及前述的任何组合。粉末微球可由各种多醣及纤维素形成，包含但不限于淀粉、甲基纤维素、三仙胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇海藻酸盐、阿拉伯胶、聚葡萄胺糖及其任何组合。
在特定实施例中，组合物为至少部分或甚至大量(例如至少80％、90％、95％或更多)可溶于黏膜分泌的流体中以便有助于吸收的组合物。或者或另外，组合物可与以下一起调配：促进药剂溶解于分泌物内的载体及/或其他物质，包含但不限于脂肪酸(例如棕榈酸)、神经节苷脂(例如GM-1)、磷脂(例如磷脂酰丝胺酸)及乳化剂(例如聚山梨醇酯80)。
本领域技术人员将了解，对于鼻内施用或递送，由于施用的医药组合物的体积一般较小，故鼻分泌物可改变所施用剂量的pH，因为鼻腔中的pH范围可宽达5至8。这些改变可影响可供吸收的未离子化药物的浓度。因此，在代表性实施例中，医药组合物进一步包括缓冲剂以原位维持或调节pH。典型缓冲剂包含但不限于抗坏血酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、麸蛋白、碳酸盐及磷酸盐缓冲剂。
在本公开内容的实施例中，医药组合物的pH经选择以使得黏膜组织的内部环境在施用后处于酸性至中性，其(1)可以未离子化形式提供活性化合物以供吸收；(2)防止更可能出现于碱性环境中的病原性细菌的生长；及(3)降低黏膜刺激的可能性。
对于液体及粉末喷雾剂或气溶胶，医药组合物可经调配以具有任何适合且所需的粒度或液滴大小。在说明性实施例中，颗粒或液滴的大部分及/或平均粒度的范围等于或大于约1、2.5、5、10、15或20微米及/或等于或小于约25、30、40、45、50、60、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425微米(包含前述的所有组合)。大部分及/或平均粒径或液滴大小的适合范围的代表性实例包含但不限于约5至100微米、约10至60微米、约175至325微米及约220至300微米，其有助于安全且有效量的活性化合物例如在鼻腔中(例如在鼻腔上部三分的一、上鼻道、嗅区及/或通向嗅觉神经通路的鼻窦区中)的沉积。一般而言，小于约5微米的颗粒或液滴将沉积于气管或甚至肺中，而为约50微米或更大的颗粒或液滴一般不能达至鼻腔且沉积于鼻前部。
国际专利公开案WO 2005/023335(Kurve Technology,Inc.)描述具有适用于实践本公开内容的代表性实施例的直径大小的颗粒及液滴。在特定实施例中，颗粒或液滴具有约5至30微米、约10至20微米、约10至17微米、约10至15微米、约12至17微米、约10至15微米或约10至12微米的平均直径。所述颗粒可“基本上”具有如本文所述的平均直径或大小，亦即至少约50％、60％、70％、80％、90％或95％或更多的颗粒具有所指示的直径或大小范围。
本文所述的医药组合物可以具有如上文所述的液滴大小的喷雾化或雾化液体形式递送。
根据包括鼻内递送方法的本公开内容的特定实施例，可能期望延长医药组合物在鼻腔中(例如在鼻腔上部三分的一、上鼻道、嗅区及/或鼻窦区中)的滞留时间(例如)以增强吸收。因此，医药组合物任选与以下一起调配：生物黏附聚合物、胶(例如三仙胶)、聚葡萄胺糖(例如高度纯化阳离子多醣)、果胶(或当施用至鼻黏膜时如同凝胶一样稠化或乳化的任何碳水化合物)、微球体(例如淀粉、白蛋白、聚葡萄糖、环糊精)、明胶、脂质体、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、聚葡萄胺糖及/或纤维素(例如甲基或丙基纤维素；羟基或羧基纤维素；羧甲基或羟丙基纤维素)，其为增加在鼻腔中的滞留时间的试剂。作为另一方法，增大调配物的黏度也可提供延长药剂与鼻上皮的接触的手段。医药组合物可调配为鼻乳液、软膏或凝胶，其由于其黏度而提供局部施用的优势。
潮湿及高度血管化的膜可有助于快速吸收；因此，医药组合物任选包括保湿剂，尤其在基于凝胶的组合物的情况下，以确保足够的鼻内水分含量。适合的保湿剂的实例包含但不限于甘油(glycerin/glycerol)、矿物油、植物油、膜调节剂、舒缓剂及/或糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇；及/或甘露糖醇)。保湿剂在医药组合物中的浓度将视所选药剂及调配物而变化。
医药组合物亦任选包含吸收增强剂，例如抑制酶活性、降低黏液的黏度或弹性、降低黏膜纤毛清除作用、打开紧密结合及/或溶解活性化合物的药剂。化学增强剂在本领域中已知且包含螯合剂(例如EDTA)、脂肪酸、胆酸盐、表面活性剂及/或防腐剂。当调配展现较差的膜渗透率、缺乏亲脂性及/或由胺基肽酶降解的化合物时，用于渗透的增强剂可尤其适用。吸收增强剂在医药组合物中的浓度将视所选药剂及调配物而变化。
为了延长储存寿命，任选将防腐剂添加至医药组合物。适合的防腐剂包含但不限于苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇及苯扎氯铵及前述的组合。防腐剂的浓度将视使用的防腐剂、所调配的化合物、调配物及其类似物而变化。在代表性实施例中，防腐剂以约2重量％或更小的量存在。
本文所述的医药组合物任选含有气味剂，例如如EP 0 504 263B1中所描述，以提供对气味的感觉，以便有助于吸入组合物，从而促进至嗅区的递送及/或通过嗅觉神经元触发传输。
作为另一选项，组合物可包括矫味剂，例如以增强味道及/或个体对组合物的可接受性。
经肺施用的多孔颗粒
在一些实施例中，颗粒为多孔的，以使得其具有适当密度以避免在经由吸入器施用时沉积于咽喉后部。相对较大粒度与相对较低密度的组合避免肺中的吞噬作用，提供适当靶向递送，避免组分的全身递送且在肺中提供高浓度的组分。
用于制备这些颗粒及用于递送这些颗粒的代表性方法描述于例如美国专利第7,384,649号、美国专利第7,182,961号、美国专利第7,146,978号、美国专利第7,048,908号、美国专利第6,956,021号、美国专利第6,766,799号及美国专利第6,732,732号中。
公开这些颗粒的其他专利包含美国专利第7,279,182号、美国专利第7,252,840号、美国专利第7,032,593号、美国专利第7,008,644号、美国专利第6,848,197号及美国专利第6,749,835号。
美国专利第7,678,364号公开用于将颗粒递送至肺部系统的方法，其包括：向需要治疗、防治或诊断的患者的呼吸道施用安全且有效量的干粉，所述干粉包括：a)与治疗剂、防治剂或诊断剂复合的多价金属阳离子；b)药学上可接受的载体；及c)含多价金属阳离子的组分，其中所述干粉经喷雾干燥且具有为药剂总重量的约10％w/w或更多的多价金属阳离子总量、约0.4g/cm3或更低的敲紧密度、约5微米至约30微米的中值几何直径及约1至约5微米的空气动力直径。
颗粒中所存在的本文所述化合物或其盐的量可在约0.1重量％至约95重量％的范围内，然而在一些情况下，可甚至高达100％。举例而言，约1至约50％，例如约5至约30％。药物分布于整个颗粒中的颗粒可能是优选的。
在一些实施例中，颗粒包含除上文所述的磷脂外的表面活性剂。如本文所用，术语“表面活性”是指优选吸附至两种不可混溶相的间的界面(例如水与有机聚合物溶液的间的界面、水/空气界面或有机溶剂/空气界面)的任何试剂。表面活性剂一般拥有亲水性部分及亲脂性部分，使得其在吸附至颗粒时易于使各部分达至不吸引类似包衣的颗粒的外部环境，因此减少颗粒集结。表面活性剂也可能促进治疗剂或诊断剂的吸收且提高药剂的生物利用度。
可用于制造本文所述的颗粒的适合的表面活性剂包含但不限于：十六烷醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕榈酸或油酸；甘胆酸盐；表面活性素(surfactin)；泊洛沙姆(poloxamer)；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脱水山梨糖醇三油酸酯(
Figure GDA0003169993220000701
85)；
Figure GDA0003169993220000702
80；及泰洛沙泊(tyloxapol)。
表面活性剂可以约0至约5重量％范围内的量存在于颗粒中。优选地，其可以约0.1至约1.0重量％范围内的量存在于颗粒中。
具有低于约0.4g/cm3的敲紧密度、至少约5μm的中值直径及约1μm至约5μm或约1μm至约3μm的空气动力直径的颗粒更能够避免口咽区中的惯性及重力沉积，且靶向呼吸道或肺深部。使用较大更多孔颗粒是有利的，因为其能够比较小更密集气溶胶颗粒(例如当前用于吸入疗法的那些颗粒)更有效地气溶胶化。
脂质体递送
本文中所描述的组合物宜递送至肺，从而在实际或潜在的流感感染位点处提供化合物。这可以通过经肺递送经由定剂量吸入器或其他经肺递送装置实现，且亦通过使颗粒进入肺中的肺泡周围的微血管床来实现。
包含较小单层囊泡的奈米载体(例如脂质体)显示出优于用于将药物递送至肺的其他已知方法的若干优势，包含延长药物的释放及细胞特异性靶向的药物递送。纳米级药物载体也可能有利于递送水溶性较差的药物，且本文所述化合物中某些水溶性较差的。其他优势包含其提供控制释放、防止被代谢及降解、降低药物毒性及靶向的能力。
脂质体(优选单层囊泡)如通过动态光散射所量测具有小于200nm的大小，且优选特征在于包含化学纯合成磷脂，最佳具有长度至少16个碳的侧链，且含有本文所述化合物中的一个或多个或足以将一定量的其化合物优选递送(即靶向)至肺泡周围的微血管床的其药学上可接受的盐。例如可通过动态光散射使用氦-氖100mW NEC气体激光器及MalvernK7027相关器量测囊泡的直径，理想地每次产生至少两个或三个量测值以用于各大小的测定。
表述“化学纯磷脂”旨在定义基本上不含有害去污部分及引起由其形成的较小单层囊泡(SUV)的聚集的杂质且纯度超过97％的磷脂。优选地，脂质体的直径主要为约50至约160nm，电荷基本上为中性，且掺入侧链长度为16至18个碳原子的磷脂。更佳地，脂质体由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)制备且包含作为囊泡稳定剂的胆固醇(最佳以全部脂质的10％至50％的量)。
脂质体具有高于体温(亦即高于37℃)的熔点也可能是有利的。出于此原因，使用纯磷脂，优选为饱和且具有至少16个碳、优选16个碳与18个碳的间的碳链长度的磷脂可能是有利的。二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)为优选磷脂。胆固醇有助于稳定脂质体且优选以足以提供脂质体稳定性的量添加。最佳地，脂质体进一步包含聚乙二醇化磷脂，例如DSPEPEG。所述方法涉及向患者的血流中引入一定量脂质体，所述脂质体大小小于200nm(优选为单层囊泡)且优选特征在于包含化学纯合成磷脂，最佳具有长度为至少16个碳的侧链，且含有本文所述化合物或足以将一定量化合物优选递送(即靶向)至肺中肺泡周围的微血管床的其药学上可接受的盐或前药。
本文所述化合物可与也如本文所述的其他抗流感药剂组合。这些其他药剂也可能存在于所述脂质体中，可存在于不同脂质体中，或可经由不同途径共施用。
所述脂质体包含本文所述化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐，且任选包含其他抗流感药剂。所述脂质体可通过将磷脂及胆固醇溶解于例如氯仿的适当有机溶剂中且蒸发溶剂以形成脂质膜来制备。若采用离子载体将本文所述化合物载入脂质体中，则可在蒸发前将离子载体添加至脂质溶液。随后将干燥脂质膜于适当水相中再水合，所述水相为例如磷酸盐缓冲盐水或其他生理学上适当的溶液。水溶性药物或治疗剂可含于水合溶液中，但若需要远距离装载，则可将例如上文所描述的螯合剂的装载体添加至水合溶液以包封于脂质体的内部水空间内。
在添加水合溶液时，不同大小的脂质体自发形成且包封一部分水相。其后，使脂质体及悬浮水溶液经受例如挤压的剪切力、音波处理或根据美国专利第4,753,788号中所描述的方法经由均质器进行的处理；以产生特定大小内的囊泡。
随后可处理脂质体以自悬浮溶液移除非所需化合物，例如未包封药物，其可经由例如凝胶层析或超过滤的过程实现。
于干粉气溶胶中的脂质体用于靶向肺递送的用途描述于例如Willis等人,《肺(Lung)》,2012年6月,190(3):251-262中。一个优点为用于制备脂质体的磷脂与内源性肺表面活性剂类似。
施用方法
视所治疗感染的严重程度而定，上文所述的化合物及药学上可接受的组合物可经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以粉剂、软膏或滴剂形式)、经颊、以经口或经鼻喷雾形式、至经肺系统(例如通过使用吸入器，例如定剂量吸入器(metered doseinhaler，MDI))或类似途径向人类及其他动物施用。
用于经口施用的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆及酏剂。除活性化合物的外，液体剂型可含有本领域中通常使用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂；增溶剂及乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂的外，经口组合物也可能包括佐剂，例如湿润剂、乳化剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及芳香剂。
可根据已知技术使用适合的分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可能能是于无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈现在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物及溶剂中，可使用的有水、林格氏溶液(Ringer's solution)、U.S.P.及等张氯化钠溶液。此外，无菌非挥发性油周知地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和的非挥发性油，包含合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，在制备可注射剂时使用脂肪酸，例如油酸。
可注射制剂可被灭菌，例如，通过细菌保留过滤器过滤，或以无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂，其可在溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中之前进行灭菌。
为延长本文所述化合物的作用，通常期望减缓来自皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。此可通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则视其溶解速率而定，而溶解速率又可视晶体尺寸及结晶形式而定。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒介物中来达成非经肠施用的化合物形式的延迟吸收。可注射储库形式通过在可生物降解聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微胶囊基质来制得。视化合物与聚合物的比率及所采用的特定聚合物的性质而定，可控制化合物释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包含聚原酸酯及聚酸酐。积存可注射调配物也可能通过将化合物包覆于与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备。
用于经直肠或经阴道施用的组合物特定地为栓剂，其可通过将本文所述化合物与适合的非刺激性赋形剂或载体(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在体温下为液体且因此在直肠或阴道腔中融化且释放活性化合物。
用于经口施用的固体剂型包含胶囊、锭剂、丸剂、粉剂及粒剂。在这些固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)及/或以下各者混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及硅酸；b)黏合剂，例如(例如)羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂-琼脂，碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)湿润剂，例如(例如)鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂，例如高岭土及膨润土；及i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、锭剂及丸剂的情形下，剂型也可能包括缓冲剂。
也可能采用类似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及类似物。锭剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备成具有包衣及外壳，例如肠溶包衣及医药制剂技术中熟知的其他包衣。其任选含有乳浊剂，且也可能具有仅在或优选在肠道的某一部分中释放(任选以延迟方式释放)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。也可能采用类似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及类似物。
活性化合物也可能是具有一或多种如上文所提及的赋形剂的微胶囊化形式。锭剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备成具有包衣及外壳，例如肠溶包衣、释放控制包衣及医药制剂技术中熟知的其他包衣。在这些固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如在一般实践中，这些剂型也可能包括除惰性稀释剂外的其他物质，例如制锭润滑剂及其他制锭助剂，例如硬脂酸镁及微晶纤维素。在胶囊、锭剂及丸剂的情况下，剂型也可能包括缓冲剂。其任选含有遮光剂，且也可能具有仅在或优选在肠道的某一部分中释放(任选以延迟方式释放)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。
用于局部或经皮施用本文所述化合物的剂型包含软膏、糊剂、乳膏、乳剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分是在无菌条件下与药学上可接受的载体及如可能是所需的任何所需防腐剂或缓冲剂混杂。眼科制剂、滴耳剂及滴眼剂也涵盖于本公开内容的范围内。另外，本公开内容涵盖使用经皮贴片，其具有向身体提供控制递送化合物的附加优势。这些剂型可通过将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。也可能使用吸收增进剂来增加化合物通过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
本文所述的组合物可经口、非经肠、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式贮器施用。如本文所用，术语“非经肠”包含但不限于皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。特定而言，组合物是经口、腹膜内或静脉内施用。
本文所述的组合物的无菌可注射形式可能是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术使用适合的分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配。无菌可注射制剂也可能是于无毒非经肠可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物及溶剂中，可采用的有水、林格氏溶液及等张氯化钠溶液。此外，无菌非挥发性油公知地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和的非挥发性油，包含合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)适用于制备可注射剂，也可以是天然药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油，尤其聚氧乙烯化形式)。这些油溶液或悬浮液也可能含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂通常用于调配药学上可接受的剂型(包含乳液及悬浮液)。其他通常使用的表面活性剂(例如聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯)及通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他乳化剂或生物可用性增强剂也可能用于制剂的目的。
本文所述的医药组合物可用任何经口可接受的剂型经口施用，所述剂型包含但不限于胶囊、锭剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的锭剂的情况下，常用载体包含但不限于乳糖及玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用，适用的稀释剂包含乳糖及干燥玉米淀粉。当需要将水性悬浮液用于经口使用时，将活性成分与乳化剂及悬浮剂组合。必要时，也可能添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，本文所述的医药组合物可以用于经直肠施用的栓剂形式施用。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体且因此将在直肠中融化以释放药物。这些物质包含但不限于可可脂、蜂腊及聚乙二醇。
本文所述的医药组合物也可能局部施用，当治疗目标包含局部施用可容易地接近的区域或器官时尤其如此，所述治疗目标包含眼、皮肤或下肠道的疾病。用于这些区域或器官中的每一个的适合的局部制剂均易于制备。
用于下肠道的局部施用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)形式或以适合的灌肠调配物形式实现。也可能使用局部经皮贴片。
对于局部施用，医药组合物可以配制成含有悬浮或溶解于一或多种载体中的活性组分的适合的软膏形式。用于本文所述化合物的局部投药的载体包含但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚环氧丙烷化合物、乳化蜡及水。或者，医药组合物可以配制成含有悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适合乳剂或乳膏形式。适合的载体包含但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇及水。
对于眼科用途来说，医药组合物可被配制成为具有或不具有防腐剂(例如苯扎氯铵)的在等张的、具有pH的无菌生理盐水中的微米化悬浮液，或特定而言配制成为在等张的、具有pH的无菌生理盐水中的溶液。或者，对于眼科用途，医药组合物可调配于例如石蜡脂的软膏中。
用于本文所述方法中的化合物可以被配制成单位剂型。术语“单位剂型”是指适合以单位剂量形式用于经受治疗的个体的物理离散单元，其中各单元含有经计算以产生所期望治疗作用的预定量的活性物质，其任选与适合的医药载体结合。单位剂型可用于单一日剂量或多个日剂量(例如每天约1至4次或更多次)中的一个。当使用多个日剂量时，用于各剂量的单位剂型可相同或不同。
通过参考本文所详述的例示性实例，将更全面地理解本公开的内容。然而，这些实例不应解释为限制本公开内容的范围。本公开内容通篇所有引用在此明确地以引用的方式并入。
实施例
实施例1：1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A1)
Figure GDA0003169993220000771
在室温(RT)条件下，向3-羟基-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-1(100g，793mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF；1L)搅拌溶液中添加碳酸钾(219g，1.59mol)及苯甲基溴(188mL，1.59mol)。在80℃下搅拌反应混合物12小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)，将反应混合物用冰冷水(3L)淬灭，用乙酸乙酯(乙酸乙酯)(5×1L)萃取，用硫酸钠(Na2SO4)干燥且在减压下浓缩。将残余物溶解于乙醚(3L)中，用1N HCl(5×1L)、冰冷水(1L)及饱和NaHCO3(2×1L)溶液洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得3-(苯甲氧基)-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-2。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf：0.4。LCMS(ESI)：m/z 217.06(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000781
在室温，向3-(苯甲氧基)-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-2(100g，463mmol)的溴苯(1500mL)搅拌溶液中添加二氧化硒(154g，1.39mol)。在160℃下搅拌反应混合物24小时，通过TLC监测反应进程(约50％转化率)，将反应混合物冷却至室温，过滤过量SeO2固体，且将固体用冰冷水及饱和NaOH溶液淬灭。在减压下浓缩滤液且将粗化合物通过硅胶柱(100至200目)柱层析纯化，并将化合物用40％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，以获得3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛1-3。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。
Figure GDA0003169993220000782
在0℃，向3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛1-3(60g，261mmol)的叔丁醇(1000mL)及水(500mL)的搅拌溶液中添加亚氯酸钠(140g，1565mmol)及磷酸二氢钠(156g，1304mmol)随后在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后(通过TLC监测)，通过浓缩移去约50％的反应体积，随后添加水(1L)，且将混合物用乙醚(2×500mL)萃取，并将水性层用柠檬酸酸化且用10％甲醇(甲醇)/二氯甲烷(DCM)(3×2L)萃取，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得呈灰白色固体的3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸1-4(25g，0.10mol，39％产率)。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 246.99(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000791
在室温向3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸1-4(10g，41mmol)的N-甲基-2-吡咯啶酮(100mL)搅拌溶液中添加碳酸氢钠(6.82g，81.30mmol)及碘代甲烷(MeI)(12.65mL，203mmol)。在50℃下搅拌反应混合物16小时。在起始物质耗尽之后(如通过TLC确定)，将反应混合物冷却至室温且将反应混合物用冰冷水(300mL)淬灭、用乙酸乙酯(2×300mL)萃取、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。将粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸酯1-5。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 261.20(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000801
在室温向甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸酯1-5(15g，58mmol)的二甲基乙酰胺(150mL)搅拌溶液中添加对甲苯磺酸吡啶鎓(43.44g，173mmol)及肼甲酸叔丁酯(9.89g，75.0mmol)。在60℃下搅拌反应混合物16小时。将反应混合物冷却至室温且将其倾入碎冰中，并过滤所得固体以获得甲基-3-(苯甲氧基)-1-(叔丁氧羰基胺基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯1-6。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 375.32(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000802
在室温向甲基-3-(苯甲氧基)-1-(叔丁氧羰基胺基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯1-6(15g，40mmol)的1,4-二噁烷(50mL)搅拌溶液中添加4N HCl/1,4-二噁烷(20mL)。在室温下搅拌反应混合物4小时。反应完成后(通过TLC监测)，蒸馏出1,4-二噁烷溶剂，用碳酸氢钠溶液碱化，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将有机层用盐水溶液(100mL)洗涤且在减压下浓缩以获得甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 274.98(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000811
在密封管中的甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(3g，0.01mmol)的甲醇(30mL)搅拌溶液中，添加DBU(0.38mg，0.02mmol)及甲胺(2M甲醇)(30mL)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用38％乙腈(ACN)/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf:0.4。LCMS(ESI):m/z 274.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000812
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1-7(500mg，1.8mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(55mg，1.8mmol)，随后在140℃下在微波照射下保持30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用32％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 286.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000821
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(80mg，0.280mmol)的无水DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(23mg，1.751mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(115.3mg，0.421mmol)(用于制备，见下文)于无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用57％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-苯甲氧基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 488.4(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000822
将5-苯甲氧基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9(2×30mg，0.06mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液，用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩。粗化合物经制备型HPLC方法纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A1。TLC：15％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 400.42(M+H)+。
制备INT-5
Figure GDA0003169993220000831
在-78℃下向2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-10(50g，0.38mol)的THF(500mL)搅拌溶液中逐滴添加二异丙胺基锂(LDA)(227mL，于THF中2.5M)且将反应混合物升温至-20℃持续2小时且再次冷却至-78℃。现在1小时的时间段内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)苯1-11(93.5g，379mmol，溶解于100mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后将反应混合物升温至室温且搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(400mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化所得粗残余物以获得半纯样品。将其经由反相层析法用ACN及0.1％甲酸/水洗脱再纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-12。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 301.3(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000841
向2-(2-溴苯甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-12(100mg，0.333mmol)的无水DMF(5mL)搅拌溶液中添加NiCl2(4.29mg，0.033mmol)及Cr2Cl2(406mg，3.33mmol)，随后在120℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭用乙醚(100mL×2)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经combi-flash纯化以获得9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇1-13。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z205(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220000842
在0℃下向9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇1-13(1.2g，5.4mmol)的DCM(12mL)搅拌溶液中添加H3PO4(14mL)且在室温下搅拌12小时。反应通过TLC监测。将反应混合物倒入冰水(25mL)中且用乙醚(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经层析纯化以获得9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1-14。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 205(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000851
在室温下向9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1-14(60mg，0.27mol)的AcOH(2mL)中搅拌溶液中吹扫Cl2气25分钟。在起始物质耗尽之后(通过TLC检验)，反应混合物用冰水(5mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化及用乙醚(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经层析纯化以获得4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 274(M+H)+。
实施例2：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A6)
Figure GDA0003169993220000852
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(250mg，0.877mmol；Bn如在上文流程中是指苯甲基)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(70mg，1.75mmol)且搅拌15分钟，随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(327mg，1.05mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/MeCl；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 524.39(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000861
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3(50mg，0.096mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A6。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.34(M+H)+。
实施例3：1-(2,7-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A3)
Figure GDA0003169993220000871
在-78℃下向5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-1(10g，66mmol)的THF(300mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(33mL，于THF中2.0M)且使反应混合物升温至-20℃持续2小时且再次冷却至-78℃。现在1小时的时间段内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-4-氟苯3-2(17g，63mmol，于100mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后使反应混合物升温至室温，随后搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(3×300mL)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。所得粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法使用2％乙酸乙酯/石油醚纯化以获得2-(2-溴-5-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-3。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS(ESI)：m/z 338.93(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000872
向2-(2-溴-5-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-3(1g，2.9mmol)的无水DMF(30mL)搅拌溶液中添加NiCl2(37mg，0.29mmol)及无水Cr2Cl2(3.6g，29mmol)，随后在110℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×150mL)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物未经纯化即用于下一步骤以获得2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3-4。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 259.4。
Figure GDA0003169993220000881
在0℃下向2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3-4(200mg，0.77mmol)的DCM(0.2mL，10体积)搅拌溶液中添加H3PO4(0.2mL，10体积)，且使其在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(25mL)淬灭且用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化以获得2,7-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚3-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 241.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000882
在室温下向2,7-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚3-5(300mg，1.25mmol)的AcOH(9mL)经搅拌溶液中吹扫Cl2气45分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过层析纯化得到4b,9a-二氯-2,7-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚3-6。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z275(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220000891
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(200mg，0.67mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(56mg，1.0mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,7-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚3-6(326mg，1.0mmol)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 524.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000892
将5-(苯甲氧基)-1-(2,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3-7(110mg，0.21mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理，且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤，且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.37(M+H)+。
实施例4：1-(1,8-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A12)
Figure GDA0003169993220000901
在-78℃下向4-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-1(2.5g，17mmol)的THF(100mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(12.5mL，于THF中2.0M)，且使反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-3-氟苯4-2(4.4g，17mmol，于25mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。使反应混合物升温至室温，随后搅拌其2小时。反应完成后(如由TLC所确定)，将反应混合物倾入冰冷NaHCO3溶液中，且随后用乙醚(3×300mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。所得粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法使用2％乙酸乙酯/石油醚纯化以获得2-(2-溴-6-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-3。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)m/z337.15(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000911
向2-(2-溴-6-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-3(2g，5.9mmol)的无水DMF(20mL)搅拌溶液中添加NiCl2(76mg，0.59mmol)，继而添加无水CrCl2(7.2g，59mmol)，且将混合物在110℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×150mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物未经纯化即用于下一步骤以获得1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇]4-4。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 241.18(M-OH)。
Figure GDA0003169993220000912
在0℃下向1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇4-4(1.8g，6.97mmol)的DCM(20mL，11体积)搅拌溶液中添加H3PO4(20mL，11体积)，且使混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用乙醚(3×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化以获得1,8-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚4-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 241.25(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000921
在室温下向1,8-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚4-5(600mg，2.5mmol)的AcOH(20mL)搅拌溶液中吹扫Cl2气30分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得650mg的4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10四氢茚并[1，2a]茚4-6。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS(ESI)：m/z 274.88(M-Cl)。
Figure GDA0003169993220000922
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7mmol)(参见实施例1)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(175mg，4.0mmol)且搅拌20分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10四氢茚并[1,2a]茚4-6(543mg，1.0mmol)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌15分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 524.39(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000931
向5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4-7(80mg，0.15mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液中添加10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)，且在H2气囊气氛下搅拌混合物2小时。反应混合物经由硅藻土过滤，用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板，且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A12。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.13(M+H)+。
实施例5：5-羟基-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A8)
Figure GDA0003169993220000932
在0℃下向2-溴-4,5-二氟苯甲酸5-1(12g，50.6mmol)的THF(120mL)搅拌溶液中添加CDI(12.3g，75.9mmol)。将反应混合物加热至80℃持续4小时。在起始物质耗尽之后，使反应混合物冷却至0℃，随后缓慢逐滴添加NaBH4(1.87g，50.6mmol)/水(10mL)持续10分钟，随后在室温下搅拌反应混合物30分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物倾倒在冰水中且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并将所分离的有机层用盐水溶液洗涤、经Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇5-2。TLC：20％乙酸乙酯/己烷；Rf＝0.5。1H NMR：一致(DMSO)。
Figure GDA0003169993220000941
在0℃下向(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇5-2(9g，41mmol)的DCM(100mL)搅拌溶液中添加三苯基膦(12.68g，48.43mmol)及CBr4(16g，48mmol)，随后在室温下搅拌反应混合物16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用水淬灭且用DCM(2×30mL)萃取，并将所分离的有机层用盐水溶液洗涤、经Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得1-溴-2-(溴甲基)-4,5-二氟苯5-3。TLC：5％乙酸乙酯/己烷；Rf＝0.8。1H NMR：一致(CDCl3)。
Figure GDA0003169993220000942
在-70℃下向5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-4(2g，12mmol)的THF(20mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(4.7mL，于THF中2.5M，1.2当量)，且将反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时的时间段内向所述反应混合物逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-4,5-二氟苯5-3(3.4g，12mmol，溶解于100mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。使反应混合物升温至室温随后搅拌2小时。反应完成后(如由TLC所确定)，将反应混合物倾入冰冷NaHCO3溶液中，且随后用乙醚(40mL×3)萃取，且将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴-4,5-二氟苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-5。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 375.19(M+2)+。
Figure GDA0003169993220000951
向2-(2-溴-4,5-二氟苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-5(900mg，2.43mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NiCl2(31mg，0.24mmol)及Cr2Cl2(2.94g，24.1mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭用乙醚(100mL×2)萃取，且将合并的有机层用Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇5-6。粗化合物不经任何纯化即用于下一步骤。TLC：15％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 277.31(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220000961
在0℃下向2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇5-6(1g粗产物，3.4013mmol)的DCM(20mL，20体积)搅拌溶液中添加H3PO4(10mL，10体积)，且使其达到室温，随后搅拌12小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)将反应混合物用冰水(25mL)淬灭，且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得2,3,6,7-四氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5-7。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 275.54(M-H)-。
Figure GDA0003169993220000962
在室温下向2,3,6,7-四氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5-7(350mg，1.268mmol)的AcOH(3ml)搅拌溶液中吹扫Cl2气持续25分钟。在起始物质耗尽之后(通过TLC监测)将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化得到4b,9a-二氯-2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚5-8。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 363.53(M-HCl)+。
Figure GDA0003169993220000971
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(300mg，1.05mmol)的DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(105mg，2.63mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚5-8(365mg，1.05mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮5-9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 560.37(M+H+)。
Figure GDA0003169993220000972
将5-(苯甲氧基)-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮5-9(120mg，0.214mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC来纯化以获得5-羟基-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A8。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 472.03(M+H)+。
实施例6：3-苯甲基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A4)
Figure GDA0003169993220000981
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-6(200mg，0.72mmol)(参见实施例1)的甲醇(4mL)搅拌溶液中添加DBU(0.027mL，0.18mmol)及苯甲胺(1.56g，14.6mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下移除挥发物且粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-N-苯甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺6-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 350.10(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000982
在微波小瓶中，向1-胺基-N-苯甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺6-1(500mg，1.43mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(47mg，1.57mmol)，随后在140℃下在微波中照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 362.11(M+H)+。
Figure GDA0003169993220000991
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(150mg，0.4155mmol)的无水DMF(1mL)搅拌溶液中添加60％NaH(41mg，1.0mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(171mg，0.623mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用62％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.2(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001001
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-3(45mg，0.07mmol)的甲醇(1.5mL)及乙酸乙酯(1.5mL)搅拌溶液用10％w/w 20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊压力下保持1小时。反应混合物经由硅藻土板过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC来纯化以获得3-苯甲基-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A4。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 476.42(M+H)+。
实施例7：3-环丙基甲基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A2)
Figure GDA0003169993220001002
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(750mg，2.73mmol)(参见实施例1)的甲醇(15mL)搅拌溶液中添加DBU(109mg，0.68mmol)及环丙基甲胺(3.89g，54.7mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(环丙基甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺7-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z314.03(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001011
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(环丙基甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺7-1(400mg，1.28mmol)的乙醇(4mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.4mmol)，随后在140℃下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用32％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 326.49(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001012
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(250mg，0.769mmol)的无水DMF(2mL)搅拌溶液中添加60％NaH(77mg，1.9mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(316mg，1.15mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用57％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 528.45(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001021
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-3(50mg，0.094mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊气氛下保持1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法来纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 440.16(M+H)+。
实施例8：1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A5)
Figure GDA0003169993220001022
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(1g，3.64mmol)(参见实施例1)的四氢呋喃(10mL)及水(3ml)的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.25g，10.94mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物，向粗产物添加水(25mL)，随后用1N水溶液酸化直至约pH 2。通过过滤收集HCl及所得固体以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸8-1。TLC：15％甲醇/DCM及1滴乙酸；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 314.03(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001031
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸8-1(50mg，0.19mmol)的DMF(2mL)搅拌溶液中添加HATU(109mg，0.288mmol)、二异丙基乙胺(0.08mL，0.48mmol)及(四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(110.7mg，0.962mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用38％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺8-2。TLC：15％甲醇/DCM及1滴NH3水溶液；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 358.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001032
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺8-2(500mg，1.40mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.40mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 370.5(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001041
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(225mg，0.609mmol)的无水DMF(2mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(61mg，1.5mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下随后添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(250mg，0.914mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后在相同温度下搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经过100至200硅胶柱层析，通过2％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-4。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 572.5(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001042
将5-(苯甲氧基)-1-(4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-4(140mg，0.245mmol)的甲醇及乙酸乙酯(1:1)(30mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在H2气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤；用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC方法纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A5。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 484.45(M+H)+。
实施例9：1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(2-苯氧基-乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A7)
Figure GDA0003169993220001051
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(200mg，0.729mmol)(参见实施例1)搅拌溶液中添加DBU(22mg，0.145mmol)及2-苯氧基乙烷-1-胺(1g，7.29mmol)，随后在室温下搅拌12小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物通过反相层析法用10％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(2-苯氧基乙基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺9-1。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 380.49(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001052
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(2-苯氧基乙基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺9-1(500mg，1.32mmol)的乙醇(2.5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(4.3mg，1.45mmol)，随后在微波条件下在140℃下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用50％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 392.3(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001061
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-2(150mg，0.383mmol)的无水DMF(5mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(30.6g，1.28mmol)且搅拌10分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(157mg，0.575mmol)(参见实施例1)的无水DMF(2mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 594.4(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001071
将5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-3(2×50mg，0.084mmol)的甲醇(2.5mL)及乙酸乙酯(2.5mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(12mg)处理，且在氢气囊气氛下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤；用10％甲醇/DCM(25mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩洗液。粗化合物通过制备型HPLC来纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 506.42(M+H)+。
实施例10：3-环丙基甲基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并\[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并\[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A9)
Figure GDA0003169993220001072
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(200mg，0.6153mmol)的DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％NaH(61mg，1.5mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(247mg，0.800mmol)(参见实施例14)的DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1与5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.60(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001081
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1a(50mg，0.089mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 476.38(M+H)+。
实施例11：3-环丙基甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A13)
Figure GDA0003169993220001091
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(300mg，0.9mmol)的DMF(6mL)搅拌溶液中添加60％NaH(92mg，2.3mmol)且搅拌20分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(286mg，0.9mmol)(参见实施例13)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用76％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1与5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.44(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001092
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1a(50mg，0.089mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A13。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 476.13(M+H)+。
实施例12：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A14)
Figure GDA0003169993220001101
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(2.0g，7.3mmol)的DBU(0.227mL，1.46mmol)搅拌溶液中添加乙胺(30mL，15体积)，且随后在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用40％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-乙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺12-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 288.43(M+H)。
Figure GDA0003169993220001102
在微波小瓶中，将1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-乙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺12-1(500mg，1.74mmol)添加至乙醇(15mL)中，随后添加三聚甲醛(52mg，1.7mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用30％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 300.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001111
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(400mg，1.34mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(133mg，3.34mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(497mg，1.61mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 538.43(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001121
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3a(60mg，0.11mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩滤液。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A14。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
实施例13：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A10)
Figure GDA0003169993220001122
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(320mg，1.07mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(107mg，2.68mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(398mg，1.28mmol)的无水DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1a。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 538.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001131
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1a(70mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物用乙醚湿磨以获得1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A10。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
INT-3准备
Figure GDA0003169993220001141
在0℃下向吡啶(0.4mL，4.97mmol)及哌啶(0.2mL，2.02mmol)的搅拌溶液中添加丙二酸(732mg，7.04mmol)及3,4-二氟苯甲醛1(500mg，3.52mmol)。将反应混合物回流6小时。用1N HCl酸化反应混合物直至pH 2且将所得固体过滤、用水(250mL)洗涤且干燥以获得3-(3,4-二氟苯基)丙烯酸2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 185.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001142
将3-(3,4-二氟苯基)丙烯酸2(300mg，1.63mmol)的甲醇及乙酸乙酯(1:1，5mL)搅拌溶液用10％w/w的Pd/C(30mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌4小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩以获得3-(3,4-二氟苯基)丙酸3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.25。LCMS：(ESI)：m/z 187.19(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001143
在0℃下向3-(3,4-二氟苯基)丙酸3(5.4g，29.0mmol)的DCM(50mL)搅拌溶液中添加SOCl2(10.5mL，145mmol)且将反应混合物加热至80℃持续3小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物在真空压力下浓缩且随后将粗化合物加入DCM且冷却至0℃，随后在0℃下分批添加AlCl3(4.63g，34.8mmol)至反应混合物且在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物倾入冰水中且用DCM萃取。将有机层用盐水溶液洗涤、用Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 169.1(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001151
在0℃至室温下向5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4(1g，6mmol)的甲醇(25mL)搅拌溶液中逐滴缓慢添加甲醇钠(96mg，1.8mmol)及2-溴苯甲醛(1.14g，6.24mmol)的甲醇(20mL)的溶液，持续16小时。反应混合物用1N HCl(5mL)酸化至pH 3至4，且将所沉淀固体过滤并干燥以获得(E)-2-(2-溴苯甲基茚)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 335.17(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001152
将(E)-2-(2-溴苯甲基茚)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5(1g，3mmol)的THF及乙酸乙酯(1:1，50mL)搅拌溶液用PtO2(100mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌3小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(30mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩且粗产物通过二氧化硅柱纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮6。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.65。LCMS：(ESI)：m/z 336.9(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001161
向2-(2-溴苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮6(4.5g，13mmol)的无水DMF(60mL)搅拌溶液中添加NiCl2(172.7mg，1.339mmol)及Cr2Cl2(16.3g，134mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭用乙醚(2×200mL)萃取。有机层用冰冷水(2×100mL)、盐水溶液洗涤且经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以获得粗2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇7。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 241.21(M-OH)+。
Figure GDA0003169993220001162
在0℃下向2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇7(粗)(6g，23mmol)的DCM(60mL)搅拌溶液中添加H3PO4(60mL)且搅拌2小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)反应混合物用冰水(200mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经二氧化硅用2％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化以获得2,3-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚8。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 241.21(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001171
在室温下向2,3-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚8(3.6g，15mmol)的AcOH(28ml)搅拌溶液中吹扫Cl2气25分钟(使用NaClO4及浓HCl原位产生氯气)。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化及用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3。TLC：100％石油醚；Rf＝0.3。
实施例14：3-苯甲基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A11)
Figure GDA0003169993220001172
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(400mg，1.11mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(110mg，2.77mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(446mg，1.44mmol)(见下文)的DMF(4mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1a。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 600.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001181
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1a(80mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且将洗液在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-苯甲基-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A11。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 512.08(M+H)+。
合成INT-4
Figure GDA0003169993220001191
在-78℃下向4,5-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮2(3.75g，22.3mmol)的THF(110mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(16.7mL，于THF中2M，1.5当量)且使反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时的时间段内向该混合物逐滴添加溶解于100mL THF中的1-溴-2-(溴甲基)苯1(5.57g，22.3mmol)，且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后使反应混合物升温至室温且搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(100mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-4,5-二氟-2,3二氢-1H-茚-1-酮3。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 339.30(M+2)+。
Figure GDA0003169993220001192
向2-(2-溴苯甲基)-4,5-二氟-2,3二氢-1H-茚-1-酮3(1.3g，3.9mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NiCl2(49mg，0.39mmol)及CrCl2(4.7g，39mmol)，随后在120℃下搅拌12小时小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇4。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 241.31(M-OH)。
Figure GDA0003169993220001201
在0℃下向1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇4(500mg，1.94mmol)的DCM(10mL)的搅拌溶液添加H3PO4(10mL，10体积)，使其达至室温且搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(25mL)淬灭且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得1,2-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 241.34(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001202
在室温下向1,2-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5(850mg，3.54mmol)的AcOH(15mL)的搅拌溶液吹扫Cl2气25分钟。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用NaHCO3溶液碱化且用乙醚(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(INT-4)。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 275.33(M-Cl)+。
实施例15：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A15)
Figure GDA0003169993220001211
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(600mg，1.63mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.07mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(605mg，1.95mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 608.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001212
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1a(80mg，0.13mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 520.13(M+H)+。
实施例16：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A16)
Figure GDA0003169993220001221
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.07mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(605mg，1.95mmol)(参见实施例13)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 608.52(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001231
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1a(60mg，0.099mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A16。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 520.13(M+H)+。
实施例17：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-(4-氟-苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A17)
Figure GDA0003169993220001241
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3.5g，13mmol)(参见实施例1)与(4-氟苯基)甲胺(8g，63.8686mmol)的搅拌混合物中添加DBU(1mL)，随后在室温下搅拌16小时。反应混合物直接经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺17-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 368.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001242
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺17-1(500mg，1.36mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(45mg，1.5mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用55％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 380.08(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001251
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2(400mg，1.055mmol)于DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(126mg，3.17mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(425mg，1.37mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×60ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗化合物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱再次纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.65。LCMS：(ESI)：m/z 618.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001252
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3a(60mg，0.097mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(12mg)处理且在H2气氛(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A17。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 530.09(M+H)+。
实施例18：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-(4-氟-苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A23)
Figure GDA0003169993220001261
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2(500mg，1.319mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(160mg，3.96mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(613mg，1.98mmol)(参见实施例13)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗化合物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/二氯甲烷洗脱再次纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1与5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 618.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001271
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1与5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1a(130mg，0.210mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A23。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 530.09(M+H)+。
实施例19：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A18)
Figure GDA0003169993220001281
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(1.4g，5.109mmol)及2-(4-氟苯基)乙-1-胺(3.5g，26mmol)的搅拌溶液中添加DBU(0.5mL)，随后在室温下搅拌16小时。向反应混合物添加水(300mL)且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺19-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 382.52(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001282
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺19-1(480mg，1.26mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.4mmol)，随后在140℃在微波条件下搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用62％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 394.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001291
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2(300mg，0.763mmol)的DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％NaH(76mg，1.908mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(274mg，1.15mmol)(参见实施例14)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z632.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001292
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3a(20mg，0.032mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(2mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/MeCl2(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A18。TLC：10％甲醇/DCM；Rf：0.5。LCMS(ESI)：m/z 544.14(M+H)+。
实施例20：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A19)
Figure GDA0003169993220001301
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(175mg，4.0mmol)且搅拌20分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(543mg，1.0mmol)的无水DMF(5mL)溶液且搅拌1小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得异构体5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1)与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1a)的混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 524.43(M+H)+
Figure GDA0003169993220001311
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1)与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1A)(90mg，0.172mmol)的甲醇(0.5mL)及乙酸乙酯(0.5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(18mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A19。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 436.06(M+H)+.
实施例21：1-(3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A20)
Figure GDA0003169993220001312
在0℃下向6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-1(5g，33.3333mmol)的甲醇(100mL)搅拌溶液中逐滴缓慢添加溶解在甲醇(100mL)中的甲醇钠(540mg，9.999mmol)及2-溴-4-氟苯甲醛(7.03g，34.999mmol)，且在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。反应混合物用1N HCl(5mL)酸化至pH(3至4)且装入水(100mL)，经过滤及干燥以获得(E)-2-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-2。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 334.92(M+H)+
Figure GDA0003169993220001321
将(E)-2-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-2(5g，14.97mmol)的THF及乙酸乙酯(1:1，200mL)搅拌溶液用PtO2(500mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌6小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(100mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴-4-氟苯甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-3。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.42，LCMS(ESI)：m/z 336.93(M+H)+
Figure GDA0003169993220001322
向2-(2-溴-4-氟苯甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-3(2.5g，7.4404mmol)的无水DMF(30mL)搅拌溶液中添加NiCl2(95.98mg，0.744mmol)及CrCl2(9.077g，74.404mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×200mL)萃取。有机层用冰冷水(100mL×2)、盐水溶液洗涤且经硫酸钠干燥并在减压下浓缩以获得粗3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇21-4。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 241.21(M-OH)。
Figure GDA0003169993220001331
在0℃下向3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇21-4(粗)(1.7g，6.5891mmol)的DCM(20mL)搅拌溶液中添加H3PO4(20mL)且搅拌2小时。在起始物质耗尽之后将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶柱层析用1％乙酸乙酯/石油醚洗脱纯化以获得3,6-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚21-5。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.7，LCMS(ESI)：m/z 241.25(M+H)+
Figure GDA0003169993220001332
在室温下向3,6-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚21-6(900mg，3.75mmol)的AcOH(8mL)搅拌溶液吹扫Cl2气25分钟(氯气使用NaClO4及浓HCl原位产生)。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得4b,9a-二氯-3,6-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-9。TLC系统：100％石油醚Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 275.25(M-Cl)+
Figure GDA0003169993220001341
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7543mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(175mg，4.3859mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-3,6-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-9(815.7mg，2.6315mmol)的DMF(4mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得5-(苯甲氧基)-1-(6-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮21-7。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 524.09(M+H)+
Figure GDA0003169993220001342
将溶解在甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)中的5-(苯甲氧基)-1-(6-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮21-7(150mg，0.2868mmol)用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过逆相使用0.05％甲酸/ACN纯化以获得1-(3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A20。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 436.10(M+H)+
实施例22：3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A31)
Figure GDA0003169993220001351
在密封管下向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(1.0g，3.64mmol)的搅拌溶液中添加2-氟-3-氯苯甲胺(2.3mL，18.248mmol)及DBU(0.15mL，0.72mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氯-2-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺22-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 402.02(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001361
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氯-2-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺22-1(800mg，1.99mmol)的乙醇(40mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(60mg，2.00mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用35％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 414.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001362
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-2(250mg，0.605mmol)的DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％NaH(72mg，1.815mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(199mg，0.726mmol)的无水DMF(5mL)溶液,随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-3。此粗产物未经任何纯化即用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 616.40(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001371
将5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-3(220mg粗产物，0.35mmol)的甲醇(10mL)及乙酸乙酯(10mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(50mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土床过滤且用甲醇(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A31。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 528.04(M+H)+。
实施例23：1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A32)
Figure GDA0003169993220001372
向3-苯基丁醛23-1(5g，33.783mmol)的甲醇(50mL)搅拌溶液中添加乙酸铵(25g，337.8mmol)且搅拌30分钟。随后在0℃下添加硼氢化氰钠(1.48g，23.64mmol)且在室温下搅拌16小时。蒸馏出有机溶剂且向粗产物添加水并在0℃下用浓HCl缓慢酸化至pH 3。水性层用DCM(500mL)萃取且随后在0℃下用固体NaOH颗粒碱化至pH 12。随后用DCM(500mL)萃取且将有机层用盐水溶液(200mL)洗涤且经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得3-苯基丁-1-胺23-2。TLC系统：40％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3
Figure GDA0003169993220001381
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲基酯INT-1(1g，3.649mmol)与3-苯基丁-1-胺23-2(2.7g，18.248mmol)的搅拌溶液中添加DBU(0.2mL)，随后在室温下搅拌16小时。反应混合物直接经反相层析法用72％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(3-苯基丁基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺23-3。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 392.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001382
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(3-苯基丁基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺23-3(500mg，1.278mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.406mmol)，随后在140℃下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用56％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-4。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.45，LCMS(ESI)：m/z 404.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001391
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-4(500mg，1.240mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(124mg，3.101mmol)且搅拌30分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(680mg，2.481mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物再次经由100-200硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-5。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 606.57(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001401
将5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-5(60mg，0.099mmol)的甲醇(8mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用15％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A32。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 518.17(M+H)+。
实施例24：3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A9)
Figure GDA0003169993220001402
在-15℃下将溶解在DMF(3mL)中的5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(200mg，0.6153mmol)用60％NaH(61mg，1.5384mmol)处理且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(247mg，0.7999mmol)的DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z564.60(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001411
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1a(50mg，0.0888mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A9。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 476.38(M+H)+
实施例25：3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A13)
Figure GDA0003169993220001421
在-15℃下将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(300mg，0.9mmol)的DMF(6mL)搅拌溶液用60％NaH(92mg，2.3mmol)处理且搅拌20分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(286mg，0.9mmol)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用76％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 564.44(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001422
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1a(50mg，0.0888mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A13。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 476.13(M+H)+
实施例26：1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A10)
Figure GDA0003169993220001431
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(320mg，1.0702mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(107mg，2.680mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(398mg，1.284mmol)的无水DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 538.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001441
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1a(70mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物用乙醚湿磨以获得1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A10。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
实施例27：3-苯甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A21)
Figure GDA0003169993220001442
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(500mg，1.385mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(138mg，3.4625mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(510mg，1.662mmol)的DMF(5mL)中的溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1与3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 600.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001451
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1、3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1a(120mg，0.2003mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得3-苯甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A21。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 512.09(M+H)+
实施例28：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A22)
Figure GDA0003169993220001461
将于甲醇(10体积)中的1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3g，10.9489mmol)添加至2-苯基乙-1-胺(6.62g，54.7445mmol)及DBU(1.5mL，0.5体积)中且在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-苯乙基-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺28-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 364.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001462
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-苯乙基-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺28-1(1.4g，3.856mmol)的乙醇(20mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(127mg，4.2424mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用30％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 376.34(M+H)+
Figure GDA0003169993220001471
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-1(350mg，0.9333mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(112mg，2.799mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(318mg，1.066mmol)的DMF(3mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用75％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 614.42(M+H)+
Figure GDA0003169993220001472
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2a(100mg，0.1631mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A22。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 526.10(M+H)+。
实施例29：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A25)
Figure GDA0003169993220001481
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-1(500mg，1.3333mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(160mg，3.9999mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(454mg，1.4666mmol)的DMF(3mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用75％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 614.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001491
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1a(180mg，0.2936mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(30mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A25。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z526.10(M+H)+
实施例30：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A15)
Figure GDA0003169993220001492
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.065mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚8-3(605mg，1.9512mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 608.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001501
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1a(80mg，0.13179mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 520.13(M+H)+
实施例31 1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A16)
Figure GDA0003169993220001511
在-15℃下向8-3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.065mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下向彼混合物添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(605mg，1.9512mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1a。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 608.52(M+H)+
Figure GDA0003169993220001512
5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1a(60mg，0.0988mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 520.13(M+H)+
实施例32：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A29)
Figure GDA0003169993220001521
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2(500mg，1.272mmol)的DMF(8mL)搅拌溶液中添加60％NaH(152mg，3.816mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(591mg，1.908mmol)的DMF(7mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物再次经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1及5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.15(M+H)+
Figure GDA0003169993220001531
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1a(70mg，0.1109mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A29。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.11(M+H)+
实施例33：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A26)
Figure GDA0003169993220001532
将1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3.0g，10.9489mmol)添加至(3-氟苯基)甲胺(6.8mL，54.7445mmol)及DBU(0.47mL，2.1897mmol)，且随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺33-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 368.34(M+H)
Figure GDA0003169993220001541
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺33-1(500mg，1.3623mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(40.8mg，1.3623mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 380.09(M+H)+
Figure GDA0003169993220001542
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2(550mg，1.4511mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.6277mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(539mg，1.7413mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 618.39(M+H)+
Figure GDA0003169993220001551
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3a(200mg，0.3241mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A26。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 530.09(M+H)+
实施例34：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A24)
Figure GDA0003169993220001561
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2(550mg，1.4511mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.6277mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(539mg，1.7413mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 618.13(M+H)+
Figure GDA0003169993220001562
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1a(140mg，0.2269mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A24。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 530.09(M+H)+
实施例35：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A27)
Figure GDA0003169993220001571
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(2g，7.0mmol)的搅拌溶液中添加DBU(2体积)及2-(3-氟苯基)乙-1-胺(4.76mL，36mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺35-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 382.35(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001581
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺35-1(500mg，1.31mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(39mg，1.31mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 394.1(M+H)。
Figure GDA0003169993220001582
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2(200mg，0.508mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(61mg，1.526mmol)且搅拌30分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(167mg，0.508mmol)的DMF(4mL)溶液且搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3及5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.11(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001591
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3、5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3a(110mg，0.174mmol)的甲醇(4mL)及乙酸乙酯(4mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A27。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.45(M+H)+。
实施例36：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A28)
Figure GDA0003169993220001592
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2(600mg，1.5mmol)的DMF(12mL)搅拌溶液中添加60％NaH(152mg，3.8mmol)且搅拌30分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(604mg，1.8mmol)的DMF(6mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用78％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1及5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.47(M+H)+。
Figure GDA0003169993220001601
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1a(125mg，0.198mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A28。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.38(M+H)+。
实施例37：5-羟基-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A30)
Figure GDA0003169993220001611
向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9(105mg，0.215mmol)的二甲基乙酰胺(DMA)(2mL)搅拌溶液中添加LiCl(181mg，4.312)且加热至45℃搅拌2天。反应混合物经由硅藻土过滤且用ACN(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩。粗化合物经制备型HPLC纯化以获得5-羟基-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A30。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 398.34(M+H)+。
实施例38：1-(1-氯-2-氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A46)
Figure GDA0003169993220001621
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(600mg，2.105mmol)的无水DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(252mg，6.31mmol)且搅拌30分钟。随后，在-20℃下添加1,4b,9a-三氯-2-氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚1(892mg，2.73mmol)且搅拌溶液1小时。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1-氯-2-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2。
随后，将2(150mg，0.278mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用20％Pd(OH)2/碳(25mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/二氯甲烷(50mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC纯化以获得1-(1-氯-2-氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A46)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 452.14(M+H)+。
化合物A43、A44、A45、A47、A49、A52、A55、A58、A59、A60、A61、A64、A65、A66、A67、A68、A69、A70、A71、A72、A73、A74、A75、A76、A77、A78、A79、A80、A81、A82、A83、A84、A85、A86、A88、A90、A91、A94、A95、A96、A97、A98、A102、A105、A108、A110、A111、A112、A114、A115、A117、A118、A121、A122、A129、A131、A137、A138、A139、A141及A142以与化合物A46相同的方式合成。
实施例39：1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A48)
Figure GDA0003169993220001631
在0℃下向9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1(2.1g，10.29mmol)的丙酮、水(16:1.8)(10体积)搅拌溶液中添加NMMO(4.1mL，30.88mmol)及锇酸钾(378mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌溶液16小时。反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(1×150mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗茚并[1,2-a]茚-4b,9a(9H,10H)-二醇2。此产物不经任何纯化即用于下一步骤。
随后，在0℃下向茚并[1,2-a]茚-4b,9a(9H,10H)-二醇2(1.5g，6.78mmol)的THF(75mL)搅拌溶液中添加60％NaH(271mg，6.78mmol)，继而添加乙基碘化物(0.5mL，6.78mmol)，且在室温下搅拌溶液16小时。将反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(2×150mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得残余物。残余物经由反相层析法用50％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得化合物9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3与4b-乙氧基-4b,10-二氢茚并[1,2-a]茚-9a(9H)-醇3A的混合物。此产物用于下一步骤。
在室温下向9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇(3)与4b-乙氧基-4b,10-二氢茚并[1,2-a]茚-9a(9H)-醇3A(380mg，1.27mmol)的混合物搅拌溶液中，添加溶解于乙酸乙酯(5mL)中的5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(338mg，1.27mmol)，以及溶解在乙酸乙酯(6mL，19.06mmol)中的50％T3P。随后将溶液加热至110℃持续16小时。将反应混合物用冰冷水(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到残余物，所述残余物通过制备型HPLC纯化以获得1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A48)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.1LCMS(ESI):m/z 458.26(M+H)+。
化合物A54、A56、A57、A62及A63以与化合物A48相同的方式合成。
实施例40：1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A50)
Figure GDA0003169993220001641
在密封管中向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯的异丙基胺(12.5mL)搅拌溶液中添加DBU(0.3mL，1.82mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏反应混合物，经反相层析法用32％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1。
随后，在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1(500mg，1.66mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(49mg，1.66mmol)，且将溶液在140℃下用微波辐射处理30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。残余物经反相层析法用40％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-异丙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(2)。
随后，向5-(苯甲氧基)-3-异丙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2(300mg，0.958mmol)的搅拌溶液中添加，溶解于乙酸乙酯(5mL)中的9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇(271mg，1.149mmol)，且在室温下向此溶液添加溶解于乙酸乙酯(6mL，9.58mmol)中的50％T3P。随后将反应混合物加热至100℃持续16小时。将反应混合物用冰冷水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗产物5-(苯甲氧基)-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4。
随后，将粗5-(苯甲氧基)-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4(550mg，1.03mmol)的甲醇(10mL)及乙酸乙酯(10mL)搅拌溶液用20％Pd(OH)2/碳(100mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(30mL)洗涤，随后在减压下浓缩以获得残余物，所述残余物通过制备型HPLC纯化以获得5-羟基-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A50)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.2LCMS(ESI):m/z 442.36(M+H)+。
化合物A51、A89、A116及A126以与化合物A50相同的方式合成。
实施例41：3-环丁基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A92)
Figure GDA0003169993220001661
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯(8g，29.19mmol)的环丁胺1(12.46mL，145.98mmol)搅拌溶液中添加DBU(1.26mL，5.83mmol)且在室温下搅拌反应混合物16小时。在减压下完全蒸馏反应混合物，且经由反相层析法用30％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化残余物以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺2。
随后，在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺2(1g，3.19mmol)的乙醇(15mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(124mg，4.15mmol)，且在140℃下在微波条件下照射溶液30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。所得残余物经由反相层析法用40％乙腈/0.1％甲酸/水中洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-环丁基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3。
随后，在室温下向5-(苯甲氧基)-3-环丁基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3(500mg，1.53mmol)的DMSO(10mL)搅拌溶液中添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(572mg，1.84mmol)及KOH(258mg，4.61mmol)，且搅拌此溶液16小时。用冰水(40mL)淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(2×40mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。将由此获得的残余物经由反相层析法用80％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-环丁基-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4。
随后，将5-(苯甲氧基)-3-环丁基-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4(300mg，0.53mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(100mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤，用甲醇(20mL)洗涤，且将滤液在减压下浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得3-环丁基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A92)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.2LCMS(ESI):m/z 476.58(M+H)+。
化合物A93、A99、A100、A103、A104、A113、A122、A123、A124、A125、A128、A130、A132、A133及A140以与化合物A92相同的方式合成。
实施例42：2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)及2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A107)
Figure GDA0003169993220001681
在0℃下向(2-羟基乙基)胺基甲酸叔丁酯(5g，31.05mmol)于二氯甲烷(50mL)搅拌溶液中添加戴斯-马丁试剂(dess-martinperiodinane)(15.8g，37.26mmol)且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷(150mL)稀释且用20％次溶液(5×100mL)淬灭、经硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗(2-氧代乙基)胺基甲酸叔丁酯2。此残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。
随后，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1(1.5g，5.49mmol)的搅拌溶液中添加溶解于乙醇(15mL)中的(2-氧代乙基)胺基甲酸叔丁酯2(3.05g，19.22mmol)，且在密封管中将溶液加热至120℃持续16小时。来反应混合物减压蒸发以获得残余物，所述残余物通过反相层析法用30％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯化合物((5-(苯甲氧基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯3。
随后，在-20℃下向((5-(苯甲氧基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯3(500mg，1.20mmol)及4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(449mg，1.44mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.62mmol)，且搅拌溶液2小时。反应混合物用冰冷水(40mL)淬灭且滤出固体并在真空下干燥以获得残余物。残余物经由反相层析法用70％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得((5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯4。
随后，在0℃下向((5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯4(180mg，0.27mmol)的二氯甲烷(5mL)搅拌溶液中添加TMsOTf(0.38mL，1.65mmol)，且搅拌溶液1小时。将反应混合物用氨水溶液碱化且在减压下蒸发。由此获得的残余物经由制备型HPLC纯化以获得纯2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)。TLC系统：20％甲醇/DCMRf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 463.08(M+H)+。
随后，向2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)(65mg，0.14mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液中添加20％Pd(OH)2/碳(20mg)，且在氢气囊压力下搅拌混合物5小时。反应混合物经由硅藻土过滤，且硅藻土床用在减压下浓缩的10％甲醇/二氯甲烷(10mL)洗涤。由此获得的残余物经由制备型HPLC纯化以获得2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A107)。TLC系统：20％甲醇/DCM Rf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 465.10(M+H)+。
本文所公开的其他化合物可通过与上文的一般方法及实施例类似的方法制备。
实施例43：关于所选化合物的资料
活体外抗病毒分析
抗流感病毒分析：通过XTT染料还原量测MDCK细胞(雌性可卡犬肾上皮细胞，ATCCCCL-34)中A型流感(病毒株A/PR/8/34，ATCC VR-95)或B型流感(细胞培养适应病毒株B/Lee/40，ATCC VR-1535)复制后病毒诱导的细胞病变效应(CPE)及细胞存活力的抑制效果(Appleyard等人《抗菌化学疗法(J Antimicrob Chemother.)》1(增刊4):49-53,1975及Shigeta等人《抗菌剂化学疗法(Antimicrob Agents Chemother)》41(7):1423-1427,1997.)。使用补充有10％加热灭活胎牛血清(FBS)、2mM L-谷酰胺酸、100U/mL青霉素、100μg/ml链霉素、1mM丙酮酸钠及0.1mM NEAA的杜尔贝科氏最低必需培养基(Dulbecco'sMinimum Essential Medium，DMEM)，以每孔体积100μL使MDCK细胞(每孔1×104个细胞)在96孔平底组织培养盘中生长成单层。在测定当天，细胞单层用DPBS洗涤三次。从ATCC获得病毒在MDCK细胞中生长以产生病毒原液池。以所需起始浓度的两倍将测试化合物稀释到分析培养基中(DMEM、2mML-谷酰胺酸、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、50ng/ml TPCK处理的胰蛋白酶、0.1mM NEAA及1mM丙酮酸钠)，且连续稀释。以100μL/孔的体积一式三份地添加测试化合物以用于测定功效，一式两份地添加以用于测定细胞毒性，且以单一孔/浓度添加以用于在即将添加经稀释的病毒前进行比色评估。以利巴韦林及奥司他韦甲酸酯作为对照化合物同时进行评估。从冰箱(-80℃)取出病毒的预滴定等分供试样品，且在生物安全柜中快速解冻。病毒在分析培养基中稀释，使得以体积100μL添加至各孔的病毒量为经测定在感染后4天得到85％至95％细胞杀灭率的量。在37℃下在4小时培育后通过甲
Figure GDA0003169993220001702
染料XTT的还原来量测且在450nm下(参考波长为650nm)使用Softmax Pro 4.6软件以分光光度法量测仅含有培养基的细胞对照、含有培养基及病毒的病毒感染对照、含有培养基及以下各项的细胞毒性对照：在37℃下培育，5％CO2孵育四天，CPE的抑制(增加细胞存活率)。使用微软
Figure GDA0003169993220001701
XLfit4通过四参数曲线拟合分析来计算病毒感染孔的CPE还原百分比及未感染药物对照孔的细胞存活率百分比。
(表B中报告针对A型流感(H1N1)的效力且表C中报告针对B型流感(Lee/B40)的效力，如下：+++++；EC50，<0.125μM；++++；EC50，0.125-0.250μM；+++：EC50，0.250-0.375μM；++：EC50，0.375-0.5μM；及+：EC50，>0.5μM
表B-A型流感(H1N1)
Figure GDA0003169993220001711
Figure GDA0003169993220001721
Figure GDA0003169993220001731
Figure GDA0003169993220001741
Figure GDA0003169993220001751
表C-流感B
Figure GDA0003169993220001752
Figure GDA0003169993220001761
Figure GDA0003169993220001771
Figure GDA0003169993220001781
Figure GDA0003169993220001791
吡咯并吡嗪和吡啶并三嗪类流感病毒复制抑制剂
技术领域
本申请大体上涉及流感病毒复制的抑制剂，以及向需要治疗的患者投与所述抑制剂而治疗或预防流感感染的方法。
背景技术
流感以季节性流行方式在全世界传播，导致每年数十万人死亡，在大流行性年份中数百万人死亡。举例而言，20世纪发生了三次流感大流行，且杀死数千万人，其中各次大流行均由人类病毒的新型病毒株的出现而引起。通常，这些新型病毒株是由于现有流感病毒自其他动物物种传播至人类而产生。
流感主要经由感染者咳嗽或打喷嚏时产生的较大携带病毒的液滴在人与人的间传播；这些较大液滴可随后停留于感染者附近(例如约6英尺内)的易感个体的上呼吸道的黏膜表面上。传播也可能经由与呼吸道分泌物直接接触或间接接触(例如触摸经流感病毒污染的表面且随后触摸眼、鼻或口)而发生。在症状出现前1天至症状开始后约5天，成人可能将流感传播给其他人。幼儿及免疫系统较弱者可在症状发作后10天或更多天仍具传染性。
流感病毒为正黏液病毒科的RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五个属：A型流感病毒属、B型流感病毒属、C型流感病毒属、传染性鲑鱼贫血症病毒属(Isavirus)及托高土病毒属(Thogotovirus)。
A型流感病毒属可引起季节性流感及大流行性流感流行。其具有一种物种，A型流感病毒，且野生水鸟为多种A型流感的天然宿主。偶尔，病毒会传播至其他物种且随后可在家禽中引起破坏性爆发或导致人类流感大流行。A型病毒是三种流感类型的中最具毒性的人类病原体，且引起最严重的疾病。A型流感病毒可基于抗体对这些病毒的响应再分为不同血清型。按已知人类大流行性死亡的数目排序的人类中已确认的血清型为：H1N1(其于1918年引起西班牙流感)、H2N2(其于1957年引起亚洲流感)、H3N2(其于1968年引起香港流感)、H5N1(2007至2008年流感季节的大流行性威胁)、H7N7(其为潜在的大流行性威胁)、H1N2(存在于人类及猪中的地方病)、H9N2、H7N2、H7N3及H10N7。
B型流感病毒属可引起季节性流感，且具有一种物种，即B型流感病毒。B型流感几乎完全感染人类且不如A型流感常见。已知易受B型流感感染影响的唯一一种其他动物为海豹。此类型流感以相比A型慢2至3倍的速率突变，且因此基因多样性较低，仅具有一种B型流感血清型。由于此抗原多样性缺乏，通常在早期获得对B型流感的一定程度的免疫性。然而，B型流感充分突变使得持续免疫性变得不可能。抗原变化速率降低以及其受限的宿主范围(抑制交叉物种抗原转移)，确保不会发生B型流感的大流行。
C型流感病毒属具有一种物种，即C型流感病毒，其感染人类及猪且可引起严重疾病及局部流行。然而，C型流感不如其他类型常见，且似乎通常引起儿童的轻度疾病。
各血清型及属的流感病毒在结构上极其类似。流感病毒基因组由填充至尺寸变化的棒状结构的八个单股RNA组成，称为核糖核蛋白复合物(RNP)。各RNP含有独特病毒RNA、支架核蛋白的多个复本及由PA、PB1及PB2子单元组成的异源三聚病毒聚合酶，所述异源三聚病毒聚合酶催化病毒基因组的转录及复制。流感聚合酶复合物的近期生物化学及结构研究，为了解流感聚合酶的夺帽(cap-snatching)及RNA合成机理提供了见解。简而言之，PB2端帽结合域首先通过结合其5'端帽来隔离宿主前mRNA。随后PA，核酸内切酶子单元，在端帽下游切割捕获的mRNA前10-13核苷酸。PB2子单元随后旋转约700，将加帽的引物导引至PB1聚合酶活性位点中。PB1子单元与PB2及PA子单元直接相互作用。这些子单元在不同流感病毒株中含有高度保守域，且已成为有吸引力的抗流感药物靶标。除聚合酶复合物以外，流感基因组编码自己的神经胺糖酸苷酶(NA)、血球凝集素(HA)、核蛋白(NP)、基质蛋白M1与M2及非结构蛋白NS1与NS2。NA是抗病毒药物奥司他韦(oseltamivir)及扎那米韦(Relenza)的靶标。这些药物是唾液酸类似物，抑制NA酶的活性，从而减缓后代病毒从感染细胞中释放。
流感由于失去生产力及相关医疗治疗而产生直接成本，以及由于预防性措施而产生间接成本。在美国，流感每年造成总共超过100亿美元的成本，而据估计未来的大流行可能引起数千亿美元的直接及间接成本。预防性成本也较高。全世界政府已花费数十亿美元来为潜在H5N1禽流感大流行做准备及计划，其中费用与购买药物和疫苗以及进行灾难演习和改善边境管制策略相关联。
当前流感的治疗选项包含接种疫苗和使用抗病毒药品的化学疗法或化学防治。使用流感疫苗进行针对流感的疫苗接种通常推荐用于高风险群体，例如儿童及老年人，或患有哮喘、糖尿病或心脏病的人。然而，有可能接种疫苗后仍患上流感。所述疫苗各季节针对几种特定流感病毒株进行重新调配，但可能无法包含在所述季节在世界范围内有效感染人群的所有病毒株。制造商花费约六个月调配及生产应对季节性流行所需的数百万剂量；偶尔，在那段时间里，新型或被忽视的病毒株变得突出，且感染已经接种疫苗的人群(如2003至2004流感季中的福建H3N2流感)。因为疫苗需要约两周才变得有效，因此有可能恰巧在接种疫苗之前就感染了所述疫苗应预防的特定病毒株。
另外，这些流感疫苗的有效性是可变的。归因于病毒的高突变率，特定流感疫苗通常提供不超过几年的保护。针对某一年调配的疫苗在下一年可能无效，因为流感病毒随时间推移而快速变化，且不同的病毒株占据优势。
由于不存在RNA校对酶，流感vRNA的RNA依赖性RNA聚合酶大约每一万个核苷酸(其为流感vRNA的大致长度)产生一次核苷酸插入错误。因此，几乎每一种新制造的流感病毒均为突变型抗原漂移。当超过一个病毒株已感染单个细胞时，将基因组分离成vRNA的八个独立片段可实现vRNA的混合或再配。随之而来的病毒遗传学的迅速变化产生了抗原转移，使病毒感染新的宿主物种及快速战胜保护性免疫。
抗病毒药物也可能用以治疗流感，其中NA抑制剂尤其有效，但病毒可对批准的NA抗病毒药物产生耐药性。另外，已经有多种耐药性大流行性甲型流感病毒出现的证明。耐药性大流行性A型流感变成重大公共卫生威胁。除了耐药性A型流感病毒之外，NA抑制剂还被批准用于治疗早期流感感染(流感症状发作48小时内)。
因此，仍需要用于治疗流感感染的药物，例如具有扩大的治疗窗口和/或降低的对病毒滴度的敏感性。
发明内容
本申请大体上是关于治疗流感的方法，抑制流感病毒复制的方法，减少流感病毒量的方法，可用于这些方法的化合物及组合物。
一方面，本申请提供式I化合物及其药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220001831
其中环A为
Figure GDA0003169993220001832
Figure GDA0003169993220001833
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选1到3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10环烷基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R3、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的两个RN可与它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的任一个独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。在一些情况下，化合物为式(IIA)或(IIB)化合物：
Figure GDA0003169993220001861
进一步提供向生物样品或患者投与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物的方法。
还提供由使病毒与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物接触来抑制所述A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。在一些情况下，抑制A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性包含向患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
进一步提供由施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物来降低宿主中A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。
还提供由使病毒与安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物接触来抑制所述A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。在一些情况下，抑制A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性包含向患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
进一步提供由施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物来降低宿主中的A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法。
本申请还提供通过向生物样品或患者施用安全且有效量的如申请所公开的例如由式I、IIA或IIB中的任一个表示的化合物而减少所述生物样品或患者中的流感病毒量的方法。
进一步提供治疗或预防患者的A型流感或B型流感感染的方法，其包括向所述患者施用安全且有效量的如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB表示的化合物。
还提供医药组合物，其包括如本申请所公开的例如由式I、IIA或IIB中的任一个表示的化合物或其医药学上可接受的盐及医药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂或媒介物。
本申请还提供所述化合物的用途，其用于抑制或减少生物样品或患者流感病毒的复制，用于减少生物样品或患者的流感病毒量，或用于治疗患者的流感。
本申请进一步提供所述化合物的用途，其用于制造用以治疗患者流感的药物，用于减少生物样品或患者的流感病毒的量，或用于抑制生物样品或患者流感病毒的复制。
实施方式
本申请公开了化合物及此类化合物在抑制流感病毒中的用途。本申请一方面大体上市关于所述化合物或医药学上可接受的盐，或包括此类化合物或其医药学上可接受盐的医药学上可接受组合物的用途，其用于抑制生物样品或患者流感病毒的复制，用于减少生物样品或患者的流感病毒的量(降低病毒滴度)及用于治疗患者的流感。
本申请的化合物
本申请提供式(I)化合物或其医药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220001881
其中
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R4、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的两个RN可与它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的任一个独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。
在一些实施例中，M为N。在一些实施例中，M为CH。
在一些实施例中，X为CH2或CH2CH2。在一些实施例中，X为OCH2或CH2O。在一些实施例中，X为CH2。在一些实施例中，X为CH2CH2。在一些实施例中，X为OCH2。在一些实施例中，X为CH2O。
在一些实施例中，X'为CH2或CH2CH2。在一些实施例中，X'为OCH2或CH2O。在一些实施例中，X'为CH2。在一些实施例中，X'为CH2CH2。在一些实施例中，X'为OCH2。在一些实施例中，X'为CH2O。
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001911
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001912
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001913
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001914
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001915
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001921
在一些实施例中，环A为
Figure GDA0003169993220001922
在一些情况下，化合物为以下者，其中
环A为
Figure GDA0003169993220001923
R1、R2、R4、R5及R6中的每一个为H；
M为N；
X及X'中的每一个为CH2；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的1至3者取代的3至7元杂环基-C(O)-，其中杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
取代基A为卤素；及
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H或卤素，条件为Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
在一些情况下，化合物具有式(IIA)或(IIB)的结构：
Figure GDA0003169993220001924
在一些实施例中，R1及R2中的至少一个为H。在一些实施例中，R1及R2均为H。在一些实施例中，R1为H。在一些实施例中，R2为H。
在一些实施例中，R1及R2中的一个为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基C1-3烷氧基。在一些实施例中，R4为H。在一些实施例中，R4为OH或OMe。在一些实施例中，R4为OH。在一些实施例中，R4为OMe。在一些实施例中，R4为CHF2。
在一些实施例中，R5及R6中的至少一个为H。在一些实施例中，R5及R6均为H。在一些实施例中，R5为H。在一些实施例中，R6为H。
在一些实施例中，R5及R6中的一个为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
在一些实施例中，R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
在一些实施例中，R3为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
在一些实施例中，R3为C1-6烷基、C3-6碳环基-C1-6亚烷基、C3-6碳环基-O-C1-6亚烷基或3至7元杂环基-C1-6亚烷基。在一些实施例中，R3为乙基、甲基或C1-3亚烷基-环丙基。在一些实施例中，R3为C6碳环基-C1-6亚烷基或C6碳环基-O-C1-6亚烷基且C6碳环基为苯基、卤苯基或二卤苯基。在一些实施例中，R3为3至7元杂环基-C1-6亚烷基且杂环基为四氢吡喃基。
在一些实施例中，取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-。
在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的一个、两个、三个、四个、五个或六个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为H。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H。
在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的一个、两个、三个、四个、五个或六个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为卤素。在一些实施例中，Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为卤素。在一些实施例中，卤素为F。
应当理解，各变量值的选择是导致形成稳定或化学上可行的化合物的选择。
所涵盖特定化合物包含下表中的化合物。显示了特定立体异构中心的化合物至少表示相对立体异构，且可指绝对立体异构。不指示特定立体异构中心指示的化合物表示该对称性中心处立体异构中心的混合物。
化合物可是表A中所列的化合物或其医药学上可接受的盐。
表A
Figure GDA0003169993220001951
Figure GDA0003169993220001961
Figure GDA0003169993220001971
Figure GDA0003169993220001981
Figure GDA0003169993220001991
Figure GDA0003169993220002001
Figure GDA0003169993220002011
Figure GDA0003169993220002021
Figure GDA0003169993220002031
Figure GDA0003169993220002041
Figure GDA0003169993220002051
Figure GDA0003169993220002061
Figure GDA0003169993220002071
Figure GDA0003169993220002081
Figure GDA0003169993220002091
使用方法
本文所述化合物或其医药学上可接受的盐可用于降低生物样品(例如经感染细胞培养物)的病毒滴度或人类的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。
如本文所用，术语流感病毒介导的病况、流感感染或流感可互换使用以表示由流感病毒感染引起的疾病。
流感是由流感病毒引起的影响鸟类及哺乳动物的感染性疾病。流感病毒为正黏液病毒科的RNA病毒，所述正黏液病毒科包括五个属：A型流感病毒属、B型流感病毒属、C型流感病毒属、传染性鲑鱼贫血症病毒属及托高土病毒属。A型流感病毒属具有一个物种，A型流感病毒，其可基于抗体对这类病毒的响应再分为不同血清型：H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3、H7N9及H10N7。B型流感病毒属具有一个物种，B型流感病毒。B型流感几乎完全感染人类且不如A型流感常见。C型流感病毒属具有一个物种，C型流感病毒，其感染人类及猪且可引起重度疾病及局部流行。然而，C型流感病毒不如其他类型常见，且似乎通常引起儿童的轻度疾病。
在一些实施例中，流感或流感病毒与A型或B型流感病毒相关。在一些实施例中，流感或流感病毒与A型流感病毒相关。在一些特定实施例中，A型流感病毒为H1N1、H2N2、H3N2、H7N9或H5N1。
在人类中，流感的常见症状为发冷、发热、咽炎、肌肉疼痛、严重头痛、咳嗽、虚弱及全身不适。在更严重情况下，流感引起肺炎，其可致死，尤其对于幼儿及老年人而言。尽管其常常与感冒混淆，但流感为严重得多的疾病且由不同类型的病毒引起。流感可引起恶心及呕吐，尤其对于儿童，但这些症状更像不相关的胃肠炎的特征，流感有时称为“胃流感”或“24小时流感”。
流感的症状可在感染之后一至两天相当突然地开始。通常，第一症状为发冷或畏寒，但发热在感染早期亦常见，其中体温范围为38℃至39℃(约100℉至103℉)。许多人病情严重以致卧床数天，其全身疼痛不适，所述疼痛不适在其背部及腿部较严重。流感的症状可包含：身体疼痛(尤其关节及咽喉)、极端寒冷及发热、疲乏、头痛、眼部刺激流泪、眼部发红、皮肤(尤其面部)红肿、口腔红肿、咽喉红肿及鼻部发红、腹痛(患B型流感的儿童)。流感的症状并非特异性的，而是与许多病原体迭加(“流感类疾病”)。通常，需要实验室数据以便确认诊断。
术语“疾病”、“病症”及“病况”可在本文中互换使用以指流感病毒介导的医学或病理学病况。
如本文所用，术语“个体”、“宿主”及“患者”可互换使用。术语“个体”、“宿主”及“患者”是指动物(例如，例如鸡、鹌鹑或火鸡的鸟类或哺乳动物)，特定而言，哺乳动物包含非灵长类动物(例如牛、猪、马、羊、兔、天竺鼠、大鼠、猫、狗或小鼠)及灵长类动物(例如猴、黑猩猩或人类)，且更特定而言为人类。在一些实施例中，个体为非人类动物，例如家畜(例如马、牛、猪或羊)或宠物(例如狗、猫、天竺鼠或兔)。在一优选实施例中，个体为“人类”。
如本文所用，术语“生物样品”包含但不限于细胞培养物或其提取物；获自哺乳动物的活检物质或其提取物；血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其他体液或其提取物。
如本文所用，术语“抑制流感病毒的复制”包含降低病毒复制的量(例如降低至少10％)及完全遏制病毒复制(亦即100％降低病毒复制的量)两者。在一些实施例中，流感病毒的复制抑制至少50％、至少65％、至少75％、至少85％、至少90％或至少95％。
流感病毒复制可通过本领域中已知的任何适合的方法量测。举例而言，可量测生物样品(例如经感染细胞培养物)的流感病毒滴度或人类的流感病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。更特定而言，对于基于细胞的分析，在细胞经活体外培养的各情况下，在存在或不存在测试剂的情况下将病毒添加至培养物，且在合适时间长度后评估病毒依赖性端点。对于典型分析，可使用适于流感病毒株A/波多黎各(Puerto Rico)/8/34的马丁-达比(Madin-Darby)犬肾细胞(MDCK)及标准组织培养物。可使用的第一类细胞分析视经感染目标细胞的死亡(亦即称为细胞病变效应(CPE)的过程)而定，其中病毒感染引起细胞来源的耗竭及细胞的最终裂解。在第一类细胞分析中，微量滴定盘的孔中的较小部分细胞经感染(通常1/10至1/1000)，使病毒在48至72小时内经历若干轮复制，随后使用细胞ATP含量相较于未感染对照物的减小来量测细胞死亡的量。可采用的第二类细胞分析视经感染细胞中的病毒特异性RNA分子的增殖而定，其中使用分支链DNA杂交方法(bDNA)直接量测RNA水平。在第二类细胞分析中，较低数目的细胞最初于微量滴定盘的孔中感染，使病毒在经感染细胞中复制且传播至其他轮的细胞，随后所述细胞裂解且测量病毒RNA含量。通常在18至36小时后提早停止此分析，此时所有目标细胞仍有活力。病毒RNA通过杂交至固定于分析盘的孔的特异性寡核苷酸探针、随后通过与连接至报告酶的其他探针杂交而扩增讯号来定量。
如本文所用，“病毒滴度”或“滴度”为病毒浓度的量度。滴度测试可采用连续稀释从本质上仅评估为正或负的分析型程序获得近似数量信息。滴度对应于仍产生正读数的最高稀释因子；举例而言，前8次连续两倍稀释中的正读数转换为1:256的滴度。特定实例为病毒滴度。为确定滴度，将制备若干稀释液，例如10-1、10-2、10-3、…、10-8。仍感染细胞的病毒的最低浓度为病毒滴度。
如本文所用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指治疗性与防治性治疗。举例而言，治疗性治疗包含由施用一或多种疗法(例如一或多种治疗剂，例如本文所述的化合物或组合物)引起减轻或改善流感病毒介导的病况的进展、严重程度及/或持续时间，或改善流感病毒介导的病况的一或多种症状(特定而言，一或多种可辨别的症状)。在特定实施例中，治疗性治疗包含改善流感病毒介导的病况的至少一个可量测身体参数。在其他实施例中，治疗性治疗包含通过身体上例如稳定可辨别症状、通过生理学上例如稳定身体参数或两者来抑制流感病毒介导的病况的进展。在其他实施例中，治疗性治疗包含减轻或稳定流感病毒介导的感染。抗病毒药物可用于社区环境中治疗患有流感的人群以减轻症状的严重程度且减少其患病天数。
术语“化学疗法”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于治疗病症或疾病。
如本文所用，术语“防治”、“防治性”、“防治性使用”及“防治性治疗”是指目的在于预防而非治疗或治愈疾病的任何医学或公共卫生程序。如本文所用，术语“预防(prevent/prevention/preventing)”是指降低患上或罹患给定病况的风险，或降低或抑制并非患病但已成为或可能接近成为患病人元的个体的复发或所述病况。术语“化学防治”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于预防病症或疾病。
如本文所用，防治性使用包含在已侦测到爆发的情形下使用，以预防感染在处于严重流感并发症的高风险下的大量人群彼此紧密接触生活的场所(例如医院病房、日托中心、监狱、疗养院等)中传染或传播。还包含在需要保护以免发生流感但在接种疫苗后并未获得保护(例如归因于较弱免疫系统)的人群中的使用，或在疫苗对其不可用时或在其由于副作用无法接受疫苗时的使用。还包含在接种疫苗后两周期间或在接种疫苗之后但在疫苗有效之前的任何时段期间的使用。防治性使用还可包含治疗并未患流感或不认为具有并发症高风险的人以降低感染流感且将其传染给与他/她紧密接触的高风险的人(例如医疗保健工作者、疗养院工作者等)的机会。
如本文所用且根据美国疾病控制中心(United States Center for DiseaseControl；US CDC)，流感“爆发”定义为在彼此接近的人群中(例如在辅助生活设施的同一区域中，在同一家庭中等)于48至72小时时段内发生的急性发热性呼吸道疾病(AFRI)相对于正常背景速率急剧提高或当所分析的群体中的任何个体测试为流感阳性时。通过任何测试方法确认的流感的一种情况即视为爆发。
如本文所用，“指示病例(index case)”、“原发病例(primary case)”或“零号患者(patient zero)”为流行病研究的群体样品中的首个患者。指示病例为指示爆发存在的第一个患者。可能发现更早的病例，且将其标记为原发、继发、三发等。
在一些实施例中，本发明所述的方法为针对易患由流感病毒感染引起的并发症的患者(特定而言人类)的预防性或防治性措施。本文所述的防治性方法可在已确认指示病例或爆发的情形下使用，以防止感染在社区或人群的其余部分中传播。
在一些实施例中，本申请所述的方法作为防治性措施应用于小区或人群的成元，特定而言人类，以防止感染传播。
如本文所用，“有效量”是指足以引起所期望生物反应的量。在本发明中，所需生物反应为抑制流感病毒的复制，减少流感病毒的量或减轻或改善流感病毒感染的严重程度、持续时间、进展或发作，预防流感病毒感染的加快，预防与流感病毒感染相关的症状的复发、显现、发作或进展，或增强或改良针对流感感染使用的另一疗法的防治性或治疗性作用。向个体施用的化合物的精确量将视施用模式、感染的类型、严重程度以及个体的特征(例如一般健康状况、年龄、性别、体重及对药物的耐受性)而定。熟习此项技术者将能够依据这些及其他因素判定适当的剂量。当与其他抗病毒剂联合施用时，例如当与抗流感药物联合施用时，第二药物的有效量将视所用药物的类型而定。安全量为具有最小副作用的量，如本领域中熟习此项技术者可容易确定的量。获批药物的适合剂量为已知的且可由熟习此项技术者根据个体的病况、所治疗病况的类型及正使用的本发明所述化合物的量进行调整。在未明确地标注用量的情况下，应假设安全且有效用量量。举例而言，本文所述化合物可以约0.01至100mg/kg体重/天的间的剂量范围向个体施用以用于治疗性或防治性治疗。
如本文所用，本文所述化合物或组合物的“安全且有效量”为不在患者中引起过度或有害副作用的化合物或组合物的有效量。
一般而言，给药方案可根据各种因素进行选择，所述因素包含：所治疗的病症及病症的严重程度；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别及膳食；所采用的特定化合物的施用时间、施用途径及排泄率；个体的肾及肝功能；及所采用的特定化合物或其盐、治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物；以及医学技术中熟知的类似因素。熟习此项技术者可容易确定及开立用于治疗、预防、抑制(完全或部分)或遏制疾病进展所需的本文所述化合物的安全且有效量。
本文所述化合物的剂量可在约0.01至约100mg/kg体重/天、约0.01至约50mg/kg体重/天、约0.1至约50mg/kg体重/天或约1至约25mg/kg体重/天的间的范围内。应当理解，每天的给药总量可以单次剂量施用或可以多次施用，例如一天两次(例如每12小时)、一天三次(例如每8小时)或一天四次(例如每6小时)。
对于治疗性治疗，可在症状(例如鼻塞、咽喉痛、咳嗽、疼痛、乏力、头痛及发冷/盗汗)发作的例如48小时内(或40小时内、或小于2天、或小于1.5天或24小时内)向患者施用本文所述化合物。治疗性治疗可持续任何合适的持续时间，例如，5天、7天、10天、14天等。对于社区爆发期间的防治性治疗，可在例如指示病例的症状发作的2天内向患者给予本文所述化合物，且可持续任何合适的持续时间，例如7天、10天、14天、20天、28天、35天、42天等。
组合疗法
本文所述化合物或其医药学上可接受的盐可单独或与其他适合的治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)组合施用。当采用组合疗法时，可使用第一量的如本文所述的化合物(例如式I、IIA或IIB中任一个的化合物)或其医药学上可接受的盐及第二量的其他适合的治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)达成安全且有效量。在一些情况下，第二抗病毒剂为吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感神经胺糖酸苷酶抑制剂、流感PB1聚合酶域抑制剂或流感CAP结合PB2域抑制剂。
在本申请所述的一些实施例中，本文所述化合物或其医药学上可接受的盐及其他治疗剂各自以安全且有效量(即各自以若单独施用则治疗有效的量)施用。在一些实施例中，化合物及其他治疗剂各自以单独不提供治疗作用的量(低于治疗量剂量)施用。在一些实施例中，化合物可以安全且有效量施用，而其他治疗剂以低于治疗量剂量施用。在一些实施例中，化合物可以低于治疗量剂量施用，而其他治疗剂(例如适合的癌症治疗剂)以安全且有效量施用。
如本文所用，术语“组合疗法”、“组合”及“共施用(co-administration/coadministration)”可互换使用以指使用多于一种疗法(例如一或多种防治剂及/或治疗剂)。所述术语的使用不限制向个体施用的疗法(例如防治剂及/或治疗剂)的次序。
共施用可涵盖以基本上同时的方式，例如以单一医药组合物形式，例如具有固定比率的第一量及第二量的胶囊或锭剂，或以多个各自的单独胶囊或锭剂形式施用组合的第一量及第二量的化合物。此外，这些共施用也可涵盖以任一次序以依序方式使用组合的各化合物。
在一些实施例中，本申请是针对使用所述化合物或医药组合物用于抑制生物样品或患者的流感病毒复制或治疗或预防患者的流感病毒感染的组合疗法的方法。因此，本文所述医药组合物还包括如本文所述的流感病毒复制抑制剂与展现抗流感病毒活性的抗病毒化合物的组合的医药组合物。
使用方法还包含用本文所述化合物或用本文所述的化合物与另一抗病毒药物的组合进行化学疗法及用流感疫苗进行疫苗接种的组合。
当共施用涉及分开施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂时，在足够接近的时间内施用化合物及药物，以具有所期望治疗作用。举例而言，各施用的间的时段可在数分钟至数小时范围内且可通过考虑各化合物的特性(例如效能、溶解度、生物可用性、血浆半衰期及动力学概况)选定以产生所期望的治疗作用。举例而言，如本文所述化合物及第二治疗剂可在彼此的约24小时内、在彼此的约16小时内、在彼此的约8小时内、在彼此的约4小时内、在彼此的约1小时内或在彼此的约30分钟内以任何次序施用。
更特定而言，第一疗法(例如防治剂或治疗剂，例如本发明化合物)可在向个体施用其他治疗剂(例如抗病毒药物或流感疫苗)之前(例如之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用。
应理解，共施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂的方法可产生增强或协同治疗作用，其中组合作用大于由分开施用第一量的如本文所述化合物及第二量的其他治疗剂所产生的累加作用。
如本文所用，术语“协同”是指本发明化合物及另一疗法(例如防治剂或治疗剂)的组合，其比所述疗法的累加作用更有效。疗法组合(例如防治剂或治疗剂的组合)的协同作用可允许使用较低剂量的疗法中的一个或多个及/或以更低频率向个体施用所述疗法。能够利用较低剂量的疗法(例如防治剂或治疗剂)及/或以更低频率施用所述疗法可降低与向个体施用所述疗法相关的毒性而不降低所述疗法在预防、控制或治疗病症方面的功效。此外，协同作用可使得药物在预防、控制或治疗病症方面的功效提高。最后，疗法组合(例如防治剂或治疗剂的组合)的协同作用可避免或降低与任一单独疗法的使用相关的不利或非所需副作用。
当使用本发明化合物的组合疗法与流感疫苗组合时，可施用两种治疗剂以使得各施用的间的时段可更长(例如数天、数周或数月)。
协同作用的存在可使用用于评估药物相互作用的适合的方法来判定。适合的方法包含例如S型-Emax(Sigmoid-Emax)方程式(Holford,N.H.G.及Scheiner,L.B.，《临床药物动力学(Clin.Pharmacokinet.)》6:429-453(1981))，Loewe加成方程式(Loewe,S及Muischnek,H.,《实验病理学及药理学档案(Arch.Exp.Pathol.Pharmacol.)》114:313-326(1926))及中效方程式(Chou,T.C.及Talalay,P.，《酶调节进展(Adv.Enzyme Regul.)》22:27-55(1984))。上文提及的各方程式可结合实验数据应用以产生有助于评估药物组合的作用的对应图表。与上文提及的方程式相关的对应图表分别为浓度-作用曲线、等效线图曲线及组合指数曲线。
抗流感疫苗
本文所述化合物可与抗流感疫苗结合防治性施用。这些疫苗可例如经由皮下或鼻内投与来施用。经由皮下注射的疫苗接种通常在血清中诱导出具有中和活性的IgG抗体，且对于预防病况发展成例如肺炎及类似的更严重病况极其有效。然而，在作为感染位点的上呼吸道黏膜中，IgA是主要防治性组分。由于IgA并不能够通过皮下施用诱导，因此对于通过鼻内途径施用疫苗也是有利的。
抗病毒抑制剂
各种其他化合物可与本文所述化合物组合使用以治疗或预防流感感染。批准的化合物包含神经胺糖酸苷酶(NA)抑制剂、离子通道(M2)抑制剂、聚合酶(PB1)抑制剂及其他流感抗病毒剂。
存在三种用于对抗流感病毒的FDA批准的流感抗病毒药物，包含
Figure GDA0003169993220002171
(扎那米韦)、
Figure GDA0003169993220002172
(奥司他韦磷酸盐)及
Figure GDA0003169993220002173
(帕拉米韦(peramivir))。更早期药物，例如
Figure GDA0003169993220002174
(金刚胺(amantadine))及
Figure GDA0003169993220002175
(金刚乙胺(rimantadine))经批准用于治疗及预防A型流感。
神经胺糖酸苷酶(NA)抑制剂为阻断神经胺糖酸苷酶的一类药物。其通常用作抗病毒药物，因为他们通过防止流感病毒经由自宿主细胞出芽而繁殖来阻断流感病毒的病毒神经胺酸酶的功能。代表性神经胺糖酸苷酶抑制剂包含奥司他韦
Figure GDA0003169993220002181
扎那米韦
Figure GDA0003169993220002182
拉尼娜米韦(laninamivir)
Figure GDA0003169993220002183
及帕拉米韦
Figure GDA0003169993220002184
也可使用M2抑制剂。基质-2(M2)蛋白作为质子选择性离子通道蛋白质，整体处于A型流感病毒的病毒包膜中。
抗流感病毒药物金刚胺为M2 H+通道的特异性阻断剂。金刚烷胺(aminoadamantane)(包含金刚胺及金刚乙胺)因病毒耐药性而广泛地舍弃，但组合疗法可减轻这些药物耐药性的发展，因为对一种活性剂产生耐药性的病毒仍可由组合疗法中的其他药物进行治疗。
流感RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的抑制剂包含例如某些吡嗪甲酰胺衍生物，例如法匹拉韦(favipiravir)(T-705或
Figure GDA00031699932200021811
)及在PCT WO 2013/138236中所描述的化合物。Muratore等人，《美国科学院院报(PNAS)》,109(16),6247-6252(2012年4月)中所公开的其他化合物包含以下：
Figure GDA0003169993220002185
可与本文所述化合物共施用的特定实例包含神经胺糖酸苷酶抑制剂，例如
Figure GDA0003169993220002186
及扎那米韦
Figure GDA0003169993220002187
病毒离子信道(M2蛋白)阻断剂，例如金刚胺
Figure GDA0003169993220002188
及金刚乙胺
Figure GDA0003169993220002189
及WO 2003/015798中所述的抗病毒药物，包含法匹拉韦
Figure GDA00031699932200021810
(参见Ruruta等人,《抗病毒研究(Antiviral Res.)》,82:95-102(2009))在一些实施例中，本文所述化合物可与传统流感疫苗共施用。
可与本文所述化合物共施用的化合物的其他实例包含吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感PB1聚合酶域抑制剂、流感CAP结合PB2域抑制剂，例如(3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸)。
本文所述化合物可适用作生物样品或患者的流感病毒复制的抑制剂。这些化合物还可适用于减少生物样品或患者的流感病毒的量(病毒滴度)。其还可适用于生物样品或患者的由流感病毒引起的感染的治疗性及防治性治疗。
本发明还提供制备本文所述化合物的方法。在一些实施例中，所述方法系针对制备由式I、IIA、IIB表示的化合物或其医药学上可接受的盐。
本文公开化合物的制备
本文中公开的化合物可以多种方式使用市售起始原料、文献中已知的化合物或由容易制备的中间物，通过采用本领域技术人元已知的或按照本文公开的标准合成方法及程序来制备。制备有机分子及官能基转化及操作的标准合成方法及程序可从相关科学文献或该领域的标准教科书获得。尽管不限于任一或若干来源，但经典文本，例如Smith,M.B.,March,J.,《马奇氏高等有机化学：反应、机制及结构(March's Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure)》,第5版,John Wiley&Sons:NewYork,2001；及Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,《有机合成中的保护基(Protective Groups inOrganic Synthesis)》,第3版,John Wiley&Sons:New York,1999为此项技术者已知的有用且认可的有机合成参考教科书。举例而言，本申请所述化合物可通过固相合成技术合成，包含Merrifield,《美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)》1963；85:2149；Davis等人,《国际生物化学(Biochem.Intl.)》1985；10:394-414；Larsen等人,《美国化学学会杂志》1993；115:6247；Smith等人,《肽蛋白研究杂志(J.Peptide ProteinRes.)》1994；44:183；O'Donnell等人,《美国化学学会杂志》1996；118:6070；Stewart及Young,《固相肽合成(Solid PhasePeptide Synthesis)》,Freeman(1969)；Finn等人,《蛋白(The Proteins)》,第3版,第2卷,第105-253页(1976)；及Erickson等人,《蛋白》,第3版,第2卷,第257-527页(1976)中所描述的固相合成技术。以下描述的合成方法旨在说明制备本发明公开化合物的通用程序而非限制本发明。
本发明所述的合成过程可容许多种官能基；因此可使用各种取代的起始原料。所述过程一般在整个过程结束或接近结束时提供所期望最终化合物，但在某些情况下，可能需要将化合物进一步转化为其医药学上可接受的盐、酯或前药。
一般而言，式(I)化合物可根据流程1合成。
流程1
Figure GDA0003169993220002201
具有结构g的化合物可使用流程1中所示的程序合成。O-保护的、任选取代的4-氧代-1,4-二氢吡啶酯a与任选取代的胺化合物b的反应产生具有结构c的4-氧代-1,4-二氢吡啶酰胺。与适当的羰基化合物d(例如甲醛或其他醛或酮)缩合产生具有结构e的3,4-二氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-1,8-二酮化合物。添加环A部分以形成中间物f然后脱保护产生如本文所述化合物，亦即具有结构g的式I化合物。
化合物a与b的偶合可通过基于化合物a及b的精确性质选择的适当试剂催化。举例而言，化合物a与b的偶联可通过碱催化，例如1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)。偶合反应有时可不需要催化剂。
同样，化合物c与d缩合的适当条件可基于化合物c及d的精确性质选择。举例而言，M可能是氨基部分(如-NH2)，且化合物c与d的偶联可在高温下在溶剂中进行。举例而言，溶剂可能是质子溶剂，例如醇(例如乙醇)，且反应物可经由微波辐照加热。
添加环A部分至具有结构e的化合物的适当反应条件可基于M及环A的反应性部分Z的性质进行选择。举例而言，当M为氨基部分时，Z可能是离去基团(离核体)，例如卤素，例如氯或碘基团，且添加环A至e可使用添加碱添的溶剂中(例如DMF中添加氢化钠)进行。
化合物a、b、d及环A可商购或通过多种方法由市售起始原料制备。
举例而言，具有结构k的环A部分可通过无环状化合物的过渡金属催化环化反应来制备，如流程2所示。
流程2
Figure GDA0003169993220002211
具有结构h的化合物可在适当的催化剂(例如过渡金属催化剂)存在下进行环化。举例而言，当L1为卤素离去基团(例如溴部分)时，铬/镍催化剂(例如CrCl2/NiCl2)可催化h的环化反应以产生具有结构j的化合物。进一步衍生化可产生具有结构k的环A部分，其具有适当的离去基团部分L2，用于添加至具有上文结构e的化合物。可基于部分L2的所期望特性选择衍生化反应。举例而言，结构j的OH部分可用磷酸脱水然后在乙酸存在下用氯气处理而转化成对应于结构k中的L2的氯基团。
手性分离
本文所述化合物可具有不对称中心且以外消旋体、外消旋混合物、个别非对映异构体或对映异构体形式存在，其中所有异构体形式均包含在本申请公开内容中。具有手性中心的本文所述化合物可以光学活性及外消旋形式存在并分离。一些化合物可展现多晶型现象。本文公开内容涵盖拥有本文所述的适用特性的所述化合物的外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物。光学活性形式可通过例如重结晶技术拆分外消旋形式、通过光学活性起始物质的合成、通过手性合成、或通过使用手性固定相层析分离或通过酶促拆分来制备。可以纯化相应化合物，随后衍生化所述化合物以形成本文所述的化合物或纯化所述化合物本身。
可使用本领域中已知的任何方法制备化合物的光学活性形式，包含但不限于用重结晶技术拆分外消旋形式、通过自光学活性起始原料合成、通过手性合成或通过使用手性固定相层析进行分离。
获得光活性物质的方法的实例至少包含以下。
i)结晶的物理分离：通过将个别对映异构体的宏观结晶人工分离的技术。若存在单独对映异构体的晶体，即物质为聚结物且该晶体在视觉上是不同的，则可使用此技术；
ii)同时结晶：通过将个别对映异构体分别从外消旋体的溶液结晶的技术，仅在外消旋体为固态聚结物时才可行；
iii)酶促拆分：通过对映异构体与酶反应速率的不同而部分或完全分离外消旋体的技术；
iv)酶促不对称合成：其中合成的至少一个步骤使用酶促反应以获得所期望对映异构体的对映异构纯或富含合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成：通过在产物中产生不对称性(即手性)条件下从非手性前体合成所期望对映异构体的合成技术，其可使用手性催化剂或手性助剂来实现；
vi)非对映异构体分离：通过外消旋化合物与对映体纯的试剂(手性助剂)反应的技术，该试剂将单个对映体转化为非对映体。随后，通过他们现在更明显之结构差异，通过层析或结晶分离得到非对映异构体，然后去除手性助剂，获得所期望对映异构体；
vii)一级和二级不对称转化：来自外消旋体的非对映异构体平衡以优先拆分来自所需对映异构体的非对映异构体，或来自所需对映异构体的非对映异构体的优先结晶干扰平衡以使得最终大体上所有物质均转化为来自所需对映异构体的结晶非对映异构体的技术。随后从非对映异构体释放出所期望对映异构体；
viii)动力学解析：此技术是指通过对映异构体与手性非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下之不相等反应速率，实现外消旋体的部分或完全拆分(或部分拆分化合物的进一步拆分)；
ix)从非外消旋前体进行对映异构特异性合成：通过从非手性起始原料获得所期望对映异构体且其中立体化学完整性在合成过程中不会或仅最低限度影响的合成技术；
x)手性液相层析：通过使外消旋体对映异构体与固定相的不同相互作用(包括但不限于通过手性HPLC)在液体流动相中分离的技术。固定相可由手性物质制得或流动相可含有另一手性物质以引起不同相互作用；
xi)手性气相层析：通过使外消旋体挥发且对映异构体在气体流动相中与含有固定非外消旋手性吸附剂相色谱柱的不同相互作用而分离的技术；
xii)手性溶剂萃取：通过优先将一种对映体溶解于特定手性溶剂中而分离出对映体的技术；
xiii)手性膜传输：通过使外消旋体与薄膜屏障接触的技术。隔离层通常分离两种可混溶的流体，一种含有外消旋体，且驱动力(例如浓度或压力差)引起通过跨膜屏障的优先传输。分离通过膜的非外消旋手性性质而进行，所述性质使得仅使外消旋体的一种对映异构体通过。
在一些实施例中使用手性层析法，包含但不限于模拟移动床层析法。多种手性固定相为市售的。
在一些实施例中，本文提供具有式(I)的结构的化合物或其医药学上可接受的盐：
Figure GDA0003169993220002231
其中
环A为
Figure GDA0003169993220002241
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基且任选使用1到3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；
R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选使用1到3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R4、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；
各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且
Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。
还描述段落[00117]的实施例，其中M为N。
还描述段落[00117]的实施例，其中M为CH。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2CH2。
还描述段落[00117]至[00119]的实施例，其中X为CH2O或OCH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X'为CH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X为CH2CH2。
还描述段落[00117]至[00122]的实施例，其中X'为CH2O或OCH2。
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220002271
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220002272
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220002273
还描述段落[00117]至[00125]的实施例，其中环A为
Figure GDA0003169993220002274
还描述段落[00117]的实施例，其具有式(IIA)或(IIB)的结构：
Figure GDA0003169993220002281
还描述段落[00117]至[00130]的实施例，其中R1及R2中的至少一个为H。
还描述段落[00117]至[00131]的实施例，其中R1及R2中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00132]的实施例，其中R4为H。
还描述段落[00117]至[00132]的实施例，其中R4为OH或OMe。
还描述段落[00117]至[00134]的实施例，其中R5及R6中的至少一个为H。
还描述段落[00135]的实施例，其中R5及R6中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00134]的实施例，其中R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，任选择1到3个取代基A取代。
还描述段落[00117]至[00135]的实施例，其中R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，且任选被1至3个取代基A取代。
还描述段落[00117]至[00138]的实施例，其中R3为C1-6烷基、C3-6碳环基-C1-6亚烷基、C3-6碳环基-O-C1-6亚烷基或3至7元杂环基-C1-6亚烷基。
还描述段落[00139]的实施例，其中R3为乙基、甲基或C1-3亚烷基-环丙基。
还描述段落[00140]的实施例，其中R3为C6碳环基-C1-6亚烷基或C6碳环基-O-C1-6亚烷基且所述C6碳环基为苯基、卤苯基或二卤苯基。
还描述段落[00141]的实施例，其中R3为3至7元杂环基-C1-6亚烷基且所述杂环基为四氢吡喃基。
还描述段落[00117]至[00137]的实施例，其中R3为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
还描述段落[00117]至[00143]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为H。
还描述段落[00144]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为H。
还描述段落[00145]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H。
还描述段落[00117]至[00145]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两个为卤素。
还描述段落[00147]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少四个为卤素。
还描述段落[00147]的实施例，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的两个为卤素且其他为H。
还描述段落[00147]至[00149]的实施例，其中卤素为F。
还描述段落[00117]的实施例，其中
环A为
Figure GDA0003169993220002301
R1、R2、R4、R5及R6中的每一个为H；
M为N；
X及X'中的每一个为CH2；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-，其中杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
取代基A为卤素；及
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H或卤素，条件为Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
还描述段落[00117]的实施例，其中化合物或盐具有
Figure GDA0003169993220002302
Figure GDA0003169993220002311
Figure GDA0003169993220002321
Figure GDA0003169993220002331
的结构。
在一些实施例中，本公开内容提供医药组合物，其包含段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐及医药学上可接受的赋形剂。
在一些实施例中，本公开内容提供抑制A型或B型流感病毒中流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括使病毒与段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐接触。
在一些实施例中，本公开内容提供用于治疗或预防宿主的A型流感或B型流感感染的方法，其包括向宿主施用治疗量的如段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
在一些实施例中，本公开内容提供用于减少宿主中A型或B型流感病毒中的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括向宿主施用治疗量的段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
在一些实施例中，本公开内容提供用于减少宿主中的流感病毒复制的方法，其包括向宿主施用治疗量的段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐。
还描述段落[00154]至[00157]的实施例，其其进一步包含使流感病毒与治疗有效量的第二抗病毒剂接触或向宿主施用治疗有效量的第二抗病毒剂。
还描述段落[00158]的实施例，其中第二抗病毒剂为吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感神经胺糖酸苷酶抑制剂、流感PB1聚合酶域抑制剂或流感CAP结合PB2域抑制剂。
还描述段落[00159]的实施例，其中第二抗病毒剂为法匹拉韦、奥司他韦或3-(2-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸。
还描述段落[00154]-[00160]的实施例，其进一步包含在化合物之前、之后或与化合物同时向宿主施用流感疫苗。
在一些实施例中，本公开内容提供段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐的用途，其用于治疗A型流感或B型流感病毒感染。
在一些实施例中，本公开内容提供段落[00117]至[00152]中的任一个的化合物或盐的用途，其用于制造用以治疗A型流感或B型流感病毒感染的药物。
定义及通用术语
出于本公开内容的目的，化学元素根据元素周期表(Periodic Table of theElements),CAS版,《化学及物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)》,第75版来鉴别。另外，有机化学的一般原理描述于《有机化学(Organic Chemistry)》,ThomasSorrell,University Science Books,Sausalito:1999及March’s Advanced OrganicChemistry,第5版,编者：Smith,M.B.及March,J.，John Wiley&Sons,New York:2001中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所述，本文所述化合物任选经例如下文大体上说明或如通过本文所述的特定类别、子类别及物种所例示之一个或多个取代基取代。应了解，词组“任选取代”可与词组“取代或未取代”互换使用。一般而言，术语“取代”无论是否放在术语“任选”之后皆是指既定结构中的一个或多个氢基团经特定取代基的基团置换。除非另有指示，否则任选取代的基团可在该基团的各可取代位置处具有一取代基。当既定结构中超过一个位置可经超过一个选自指定群组的取代基取代时，在各位置处该取代基可能是相同的或不同的。当术语“任选取代”在一列表之前时，所述术语是指所述列表中的所有后续可取代基团。若取代基基团或结构未经鉴别或定义为“任选取代”，则所述取代基基团或结构未取代。在一些情况下，取代基是选自群组A：卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-。
本文所涵盖的取代基的选择及取代基的组合为引起形成稳定或化学上可行的化合物的那些选择及组合。如本文所用，术语“稳定”是指化合物在经历允许其产生、侦测及特定而言其回收、纯化及用于本文所公开的目的中的一个或多个的条件时实质上不改变。在一些实施例中，稳定化合物或化学上可行的化合物为在不存在水分或其他化学反应条件的情况下在40℃或更低的温度下保持至少一周时实质上不改变的化合物。仅涵盖产生稳定结构的取代基的那些选择及组合。这些选择及组合对于本领域技术人员将是显而易见的，且可在无不当实验的情况下确定。
如本文所用，术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃。如本文中所使用的，术语“烯基”是指包括一个或多个双键的直链或分支链烃。如本文所用，术语“炔基”是指包括一个或多个参三键的直链或支链烃。如本文所用，“烷基”、“烯基”或“炔基”中的各个任选如下文所阐述的取代基。在一些实施例中，“烷基”为C1-C14烷基、C1-C6烷基或C1-C4烷基。在一些实施例中，“烯基”为C2-C6烯基或C2-C4烯基。在一些实施例中，“炔基”为C2-C6炔基或C2-C4炔基。术语“亚烷基”是指进一步取代的烷基。举例而言，“碳环基-亚烷基”指示烷基，其为与化合物的其余部分的连接点且也被碳环基基团取代。当亚烷基指示为“C0”时指示不存在亚烷基且也列举的取代基直接连接至化合物的其余部分，例如C3-10碳环基-C0-6亚烷基指示C3-10碳环基直接或经由C1-6亚烷基连接基团连接至化合物的其余部分。
术语“碳环”或“碳环基”是指具有三至十四个环碳原子的仅含有碳的环系统，其可能是饱和的或含有一个或多个不饱和单元或为芳族(即芳基)。在一些实施例中，碳原子数为3至10(即C3-C10碳环基)。在其他实施例中，碳原子数为4至7。在其他实施例中，碳原子数为5或6。所述术语包含单环、双环或多环稠合、螺接或桥接碳环系统。所述术语还包含多环系统，其中碳环可与一个或多个碳环或杂环“稠合”，其中基团或连接点在所述碳环上。“稠合”双环系统包括共享两个毗邻环原子的两个环。桥接双环基团包括共享三个或四个相邻环原子的两个环。螺接双环系统共享一个环原子。碳环基团的实例包含但不限于环烷基(即完全饱和的碳环)及环烯基(即具有一个或多个不饱和度但非芳族的碳环)基团。特定实例包含但不限于环己基、环丙烯基、环丁基及环丙基。
所涵盖的芳族碳环包含单环芳族基团，例如苯基。除非另有指示，否则芳基在环中可具有6至14个碳原子，例如在环中具有6至10个碳原子(即C6-C10芳基)。除非另有指示，否则芳基可未取代或被一个或多个，特定而言1至4个基团，例如来自取代基A的基团取代。芳基可能是独立的(例如苯基)或与另一芳基(例如萘基、蒽基)、环烷基(例如四氢萘基)、杂环烷基和/或杂芳基稠合。例示性芳基包含但不限于苯基、卤苯基(例如氯苯基或氟苯基)、二卤苯基(例如二氯苯基或二氟苯基)、甲基苯基、甲氧苯基、三氟甲基苯基、硝苯基、2,4-甲氧基氯苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、二氢茚基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基及类似基团。
如本文所用，术语“杂环”或“杂环基”是指可能是饱和的或含有一个或多个不饱和单元的非芳环系统或芳环系统，所述环系统具有三至十四个环原子，其中一个或多个(例如1至4个)环原子为例如N、S或O的杂原子。在一些实施例中，环系统可包含3至12个环原子(即3至12元杂环基)、3至7个环原子(即3至7元杂环基)或5至7个环原子(即5至7元杂环基)。在一些实施例中，杂环在环内包括至多三个选自N、S及O的杂原子。在其他实施例中，杂环包括至多两个选自N、S及O的环杂原子。在其他实施例中，杂环包括至多两个选自N及O的环杂原子。所述术语包含单环、双环或多环稠合、螺接或桥接杂环系统。所述术语亦包含多环系统，其中杂环可与一个或多个碳环或杂环或其组合稠合，其中基团或连接点在所述杂环上。杂环的实例包含但不限于：哌啶基、哌嗪基、吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、三氮杂环庚烷基、氮杂环辛基、二氮杂环辛基、三氮杂环辛基、恶唑啶基、异恶唑啶基、噻唑啶基、异噻唑啶基、氧氮杂环辛基、氧氮杂环庚烷基、噻氮环庚烷基、噻氮环辛基、苯并咪唑酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、N-吗啉基(包含例如3-N-吗啉基、4-N-吗啉基、2-N-硫代吗啉基、3-N-硫代吗啉基、4-N-硫代吗啉基)、1-吡咯啶基、2-吡咯啶基、3-吡咯啶基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑啶基、3-噻唑啶基、4-噻唑啶基、1-咪唑啶基、2-咪唑啶基、4-咪唑啶基、5-咪唑啶基、吲哚啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并二硫杂环戊烷基、苯并二噻烷基、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮基及1,3-二氢-咪唑-2-酮基。。所涵盖的芳族杂环基环的实例包含吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻唑基、异噻唑基或噻二唑基，包含例如2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-恶二唑基、5-恶二唑基、2-恶唑基、4-恶唑基、5-恶唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-三唑基、5-三唑基、四唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、吖啶基、苯并异恶唑基、异噻唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基、喹啉基(例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)及异喹啉基(例如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。
除非本文另有规定，否则术语「杂原子」是指氧、硫、氮或磷中的一个或多个。
如本文所用，“羰基”是指-C(O)-。
如本文所用，“氧代”是指＝O。
如本文所用，如本文所用的术语“烷氧”或“烷硫基”是指如先前所定义经由氧(“烷氧基”，例如-O-烷基)或硫(“烷硫基”，例如-S-烷基)原子连接至分子的烷基。
如本文所用，术语“卤素”及“卤基”是指F、Cl、Br或I。
术语“卤代烷基”及“卤烷氧基”是指视具体情况被一个或多个卤素原子取代的烷基、烯基或烷氧基。此术语包含全氟烷基，例如-CF3及-CF2CF3。
如本文所用，术语“保护基(protecting group)”及“保护基(protective group)”可互换且是指用以暂时阻断具有多个反应性位点的化合物中的一个或多个所需官能基的试剂。在某些实施例中，保护基具有一个或多个或特定而言所有的以下特征：a)以良好产率选择性添加至官能基，得到b)对于在其他反应性位点中的一处或多处发生的反应而言是稳定的受保护基质；及c)可通过不进攻再生的去保护的官能基的试剂以实现高产率的选择性移除。如本领域技术人员所了解的，在一些情况下，试剂不进攻化合物中的其他反应性基团。在其他情况下，所述试剂还可与化合物中的其他反应性基团反应。保护基的实例详述于Greene,T.W.,Wuts,P.G的《有机合成中的保护基(Protective Groups in OrganicSynthesis)》，第三版，John Wiley&Sons,New York:1999(及所述书籍的其他版本)中，其全部内容以引用的方式并入本文中。如本文所用，术语“氮保护基”是指用以暂时阻断多官能化合物中的一个或多个所需氮反应性位点的试剂。优选的氮保护基也拥有以上保护基所例示的特征，且某些例示性氮保护基也详述于Greene,T.W.,Wuts,P.G的《有机合成中的保护基》,第三版,John Wiley&Sons,New York:1999，第7章中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“离去基团”是指通过亲核试剂的亲核攻击而经历置换的基团。
除非另有指示，否则本文所描绘的结构也包含结构的所有异构形式(例如对映异构、非对映异构、顺反异构、构形异构及旋光异构)。举例而言，除非仅特异性地绘制一种异构体，否则本公开内容中包含各不对称中心的R及S构型、(Z)及(E)双键异构体以及(Z)及(E)构形异构体。
因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构、顺/反异构、构形异构及旋光异构混合物属于本公开内容的范围内。
除非另有指示，否则本文所述化合物的所有互变异构形式均在本公开内容的范围内。
另外，除非另有指示，否则本文中所描绘的结构还包含仅旨在包括存在一个或多个经同位素富集原子的不同化合物。举例而言，除了氢被氘或氚置换或碳被富含13C或14C的碳置换的外具有本发明结构的化合物也在本公开内容的范围内。这些化合物适用作例如生物分析中的分析工具或探针。这些化合物(尤其氘类似物)也可在治疗上适用。
术语“键”及“不存在”可互换使用以指示基团不存在。
本文所述化合物在本文中通过其化学结构及/或化学名称定义。在通过化学结构与化学名称提及化合物且化学结构与化学名称矛盾时，化学结构决定化合物的身份。
药学上可接受的盐
本文所述化合物可以以游离形式或在适当情况下以盐形式存在。药学上可接受的那些盐尤其受到关注，因为其适用于施用下文所述的用于医疗用途的化合物。非药学上可接受的盐适用于制造过程以达到分离及纯化目的，且在一些个例中，用于分离本文所述化合物或其中间物的立体异构形式。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指合理的医学判断范围内适用于接触人类及低等动物的组织而无不当副作用(例如毒性、刺激、过敏反应及类似者)且与合理益处/风险比相当的化合物的盐。
药学上可接受的盐为本领域中所熟知。举例而言，S.M.Berge等人在《医药科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中详细描述药学上可接受的盐，该文献以引用的方式并入本文中。本文所述化合物的药学上可接受的盐包含衍生自适合的无机酸及碱以及有机酸及碱的那些盐。可在化合物的最终分离及纯化期间原位制备这些盐。
在本文所述化合物含有碱基或足够碱性的生物电子等排物体时，酸加成盐可通过1)使呈游离碱形式的纯化的化合物与适合的有机或无机酸反应，及2)分离由此形成的盐来制备。实际上，酸加成盐可能是供使用的更适宜的形式，且所述盐的使用相当于游离碱形式的使用。
药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例为与无机酸(例如氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸及过氯酸)或与有机酸(例如乙酸、乙二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的氨盐，或通过使用本领域中所用的其他方法(例如离子交换)形成的盐。其他药学上可接受的盐包含己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬胺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及类似物。
在本文所述化合物含有羧基或足够酸性的生物电子等排物体的时，碱加成盐可通过以下步骤获得：1)使呈酸形式的纯化的化合物与适合的有机或无机碱反应，以及2)分离因此形成的盐来制备。实际上，碱加成盐的使用可能是更适宜的，且所述盐形式本身的使用相当于游离酸形式的使用。衍生自适当碱的盐包含碱金属(例如钠、锂及钾)、碱土金属(例如镁及钙)、铵及N+(C1-4烷基)4盐。本公开内容还设想本文中所公开化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。通过这些季铵化可获得水溶性或油溶性或可分散性产物。
碱加成盐包含药学上可接受的金属盐及胺盐。适合的金属盐包含钠、钾、钙、钡、锌、镁及铝。钠盐及钾盐通常为优选的。在适当时，其他药学上可接受的盐包含使用例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳数烷基磺酸根及芳基磺酸根的相对离子形成的无毒铵、季铵及胺阳离子。适合的无机碱加成盐由金属碱制备，所述金属碱包含氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌及类似物。适合的胺碱加成盐由因其低毒性及医疗用途的可接受性而常用于药物化学的胺制备。氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、离胺酸、精胺酸、鸟胺酸、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苯甲基苯乙基胺、二乙胺、哌嗪、三(羟基甲基)-胺基甲烷、四甲基铵氢氧化物、三乙胺、二苯甲基胺、二苯羟甲胺、去氢松香胺、N-乙基哌啶、苯甲胺、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、碱性胺基酸、二环己胺及类似物。
其他酸及碱在其本身并非药学上可接受时可用于制备在获得本文所述化合物及其药学上可接受的酸或碱加成盐时适用作中间物的盐。
应了解，本公开内容包含不同药学上可接受的盐的混合物/组合，且还包含呈游离形式的化合物及药学上可接受的盐的混合物/组合。
医药组合物
本文所述化合物可调配成进一步包括药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的医药组合物。在一些实施例中，本发明系关于一种医药组合物，其包括本文所述化合物及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物。在一些实施例中，本公开内容包含一种医药组合物，其包括安全且有效量的本文所述化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物。药学上可接受的载体包含例如相对于适当选择预期的给药形式的药物稀释剂、赋形剂或载体。
“有效量”包含“治疗有效量”及“防治有效量”。术语“治疗有效量”是指在治疗及/或改善患者的流感病毒感染方面有效的量。术语“防治有效量”是指在预防及/或实质上减小流感病毒感染爆发的机会或规模方面有效的量。
药学上可接受的载体可含有不会不适当抑制化合物生物活性的惰性成分。药学上可接受的载体应为生物兼容的，例如无毒、非炎性、非免疫原性或在向个体施用时无其他不合需要的反应或副作用。可采用标准医药制剂技术。
如本文所用的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包含呈适用于所期望特定剂型的形式的任何溶剂、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等张剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体黏合剂、润滑剂及类似物。《雷明顿氏医药科学(Remington'sPharmaceutical Sciences)》,第十六版,E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)公开了用于调配药学上可接受的组合物的各种载体及其已知制备技术。除非任何常规载体介质与本文所述的化合物不相容，例如通过产生任何不希望的生物学作用或以有害的方式与药学上可接受的组合物的任何其他组分相互作用，否则预期其使用涵盖于本公开内容的范围内。如本文所用，词组“副作用”涵盖疗法(例如防治剂或治疗剂)不合需要的且不良的作用。副作用始终为不合需要的，但不合需要的作用不一定是不良的。疗法(例如预防剂或治疗剂)的不良作用可能是有害的或不适的或有风险的。副作用包含但不限于发热、发冷、嗜睡、胃肠道毒性(包含胃肠溃疡及糜烂)、恶心、呕吐、神经毒性、肾毒性、肾脏毒性(包含如乳头状坏死及慢性间质性肾炎的病况)、肝毒性(包含血清肝脏酶水平升高)、骨髓毒性(包含白血球减少症、骨髓抑制、血小板减少症及贫血)、口腔干燥、金属味、妊娠延长、无力、嗜眠、疼痛(包含肌肉痛、骨痛及头痛)、脱发、乏力、眩晕、椎体外症状、静坐不能、心血管紊乱及性功能障碍。
可充当药学上可接受的载体的物质的一些实例包含但不限于：离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白(例如人血清白蛋白)；缓冲物质(例如吐温80、磷酸酯、甘胺酸、山梨酸或山梨酸钾)；饱和植物脂肪酸、水、盐或电解质的部分甘油酯混合物(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯啶酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚环氧丙烷嵌段聚合物；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羊毛脂；糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；黄蓍粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；褐藻酸；无热原水；等张生理盐水；林格氏溶液；乙醇；及磷酸酯缓冲溶液；且根据调配者的判断，例如月桂基硫酸钠及硬脂酸镁的其他无毒兼容润滑剂以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂及芳香剂、防腐剂及抗氧化剂也可存在于组合物中。
用于经肺递送的调配物
在一些实施例中，本文所述的医药组合物适用于通过吸入直接经由呼吸道向下呼吸道(例如肺)施用。通过吸入施用的组合物可呈现为可吸入粉末组合物或液体或粉末喷雾剂形式，且可以标准形式使用粉末吸入装置或气溶胶分配装置来施用。这些装置为熟知的。对于通过吸入施用，粉末状调配物通常包括活性化合物以及惰性固体粉末状稀释剂，例如乳糖或淀粉。可吸入干粉组合物可存在于明胶或类似物质的胶囊及药筒或用于吸入器或吹入器的层压铝箔的泡壳中。各胶囊或药筒可通常含有例如约10mg至约100g的各活性化合物。或者，本文所述组合物可在无赋形剂的情况下存在。
可吸入组合物可经封装用于单位剂量或多剂量递送。举例而言，组合物可按类似于以下中所述的方式封装以用于多剂量递送：GB 2242134、美国专利第6,632,666号、第5,860,419号、第5,873,360号及第5,590,645号(均说明“
Figure GDA0003169993220002431
”装置)；或GB2178965、GB2129691、GB2169265、美国专利第4,778,054号、第4,811,731号及第5,035,237号(其说明“
Figure GDA0003169993220002432
”装置)；或EP 69715(“
Figure GDA0003169993220002433
”装置)或GB 2064336及美国专利第4,353,656号(“
Figure GDA0003169993220002434
”装置)。
用于通过吸入局部递送至肺的喷雾组合物可调配为水溶液或悬浮液或自加压封装递送的气溶胶，例如定剂量吸入器(MDI)，其中使用适合的液化推进剂，包含氢氟烷烃，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷及尤其1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷及其混合物。适用于吸入的气溶胶组合物可以悬浮液或溶液的形式呈现。
通过吸入施用的药物通常具有受控制的粒度。用于吸入至支气管系统中的最佳粒度通常为约1μm至约10μm，且在一些实施例中，为约2μm至约5μm。具有大于约20μm的粒度的颗粒一般过大而在吸入时不能达到较小的呼吸道。为达成这些粒度，活性成分的颗粒可经历例如微米尺寸化的粒度减小处理。可通过风选或筛分分离出所需粒度部分。优选地，颗粒将为结晶。
鼻内喷雾剂可使用水性或非水性媒介物由添加例如增稠剂、缓冲盐或调节pH的酸或碱、等张调节剂或抗氧化剂的药剂来调配。
用于通过雾化吸入的溶液可使用水性媒介物由添加例如酸或碱、缓冲盐、等张调节剂或抗微生物剂的药剂来调配。其可通过过滤或在高压釜中加热来灭菌，或以非灭菌产品呈现。雾化器以自调配物水溶液产生的薄雾形式供应气溶胶。
在一些实施例中，本文所述医药组合物可与补充活性成分一起调配。
在一些实施例中，本文所述医药组合物自干粉吸入器施用。
在其他实施例中，本文所述的医药组合物通过气溶胶分配装置任选结合例如“
Figure GDA0003169993220002441
”吸入室的吸入室来施用。
载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液体聚乙二醇及类似物)、其适合的混合物及/或植物油的溶剂或分散介质。例如可以通过使用例如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过维持所需粒度及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。本文所述的组合物中微生物的作用的预防可通过添加抗细菌剂及抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其类似物)来实现。在许多情况下，优选包含等张剂，例如糖或氯化钠。可通过在组合物中使用推迟吸收剂(例如单硬脂酸铝及明胶)来实现延长可注射组合物的吸收。
在一些实施例中，本文所述的医药组合物可在控制组合物释放的基质内。在一些实施例中，基质可包括：脂质、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己内酯、聚(乙醇)酸、聚(乳)酸、聚己内酯、聚乳酸、聚酸酐、聚丙交酯-共-乙交酯、聚胺基酸、聚氧化乙烯、丙烯酸封端的聚氧化乙烯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯腈、聚磷氮烯、聚(原酸酯)、蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)及其组合，以及例如例如美国专利第6,667,371号；第6,613,355号；第6,596,296号；第6,413,536号；第5,968,543号；第4,079,038号；第4,093,709号；第4,131,648号；第4,138,344号；第4,180,646号；第4,304,767号；第4,946,931号中所公开的聚合物的其他聚合物，所述文献中的各者明确地以全文引用的方式并入本文中。在这些实施例中，基质持续释放药物。
药学上可接受的载体及/或稀释剂也可能包含任何溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及/或抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂及类似物。这些介质及药剂用于医药活性物质的用途为本领域中熟知。除非任何习知介质或药剂与活性成分不兼容，否则预期将其用于医药组合物中。
本文所述的医药组合物可经调配用于根据公知技术施用。参见例如Remington《药学科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)》(第20版，2000)。举例而言，本公开内容的鼻内医药组合物可调配为气溶胶(此术语包含液体与干粉气溶胶)。如本领域技术人员已知，液体颗粒的气溶胶可通过任何适合的手段产生，例如使用压力驱动的气溶胶雾化器或超音波雾化器。参见例如美国专利第4,501,729号。固体颗粒的气溶胶(例如冻干的、冷冻干燥的等)可同样使用任何固体颗粒药剂气溶胶产生器通过医药领域中已知的技术来产生。作为另一实例，本公开内容的医药组合物可调配为按需可溶形式，其提供医药组合物的冻干部分及医药组合物的溶解溶液部分。
在本发明的一些实施例中，医药组合物呈水性悬浮液形式，其可由溶液或悬浮液来制备。对于溶液或悬浮液，剂型可包含亲脂性物质、脂质体(磷脂小泡/膜)及/或脂肪酸(例如棕榈酸)的微胞。在特定实施例中，医药组合物为能够溶解于由经施用、施用及/或递送医药组合物的组织的上皮细胞黏膜所分泌的流体中的溶液或悬浮液，其可有利地增强吸收。
医药组合物可能是水性溶液、非水性溶液或水性溶液与非性水溶液的组合。
适合的水性溶液包含但不限于：水性凝胶、水性悬浮液、水性微球体悬浮液、水性微球体分散液、水性脂质体分散液、脂质体的水性微胞、水性微乳液及前述的任何组合或可溶解于鼻腔黏膜分泌的流体中的任何其他水性溶液。例示性非水性溶液包含但不限于：非水性凝胶、非水性悬浮液、非水性微球体悬浮液、非水性微球体分散液、非水性脂质体分散液、非水性乳液、非水性微乳液及前述的任何组合或可溶解或混合于黏膜分泌的流体中的任何其他非水性溶液。
粉末调配物的实例包含但不限于：纯粉末混合物、微米化粉末、冷冻干燥粉末、冻干粉末、粉末微球、包衣粉末微球、脂质体分散液及前述的任何组合。粉末微球可由各种多醣及纤维素形成，包含但不限于淀粉、甲基纤维素、三仙胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇海藻酸盐、阿拉伯胶、聚葡萄胺糖及其任何组合。
在特定实施例中，组合物为至少部分或甚至大量(例如至少80％、90％、95％或更多)可溶于黏膜分泌的流体中以便有助于吸收的组合物。或者或另外，组合物可与以下一起调配：促进药剂溶解于分泌物内的载体及/或其他物质，包含但不限于脂肪酸(例如棕榈酸)、神经节苷脂(例如GM-1)、磷脂(例如磷脂酰丝胺酸)及乳化剂(例如聚山梨醇酯80)。
本领域技术人员将了解，对于鼻内施用或递送，由于施用的医药组合物的体积一般较小，故鼻分泌物可改变所施用剂量的pH，因为鼻腔中的pH范围可宽达5至8。这些改变可影响可供吸收的未离子化药物的浓度。因此，在代表性实施例中，医药组合物进一步包括缓冲剂以原位维持或调节pH。典型缓冲剂包含但不限于抗坏血酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、麸蛋白、碳酸盐及磷酸盐缓冲剂。
在本公开内容的实施例中，医药组合物的pH经选择以使得黏膜组织的内部环境在施用后处于酸性至中性，其(1)可以未离子化形式提供活性化合物以供吸收；(2)防止更可能出现于碱性环境中的病原性细菌的生长；及(3)降低黏膜刺激的可能性。
对于液体及粉末喷雾剂或气溶胶，医药组合物可经调配以具有任何适合且所需的粒度或液滴大小。在说明性实施例中，颗粒或液滴的大部分及/或平均粒度的范围等于或大于约1、2.5、5、10、15或20微米及/或等于或小于约25、30、40、45、50、60、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425微米(包含前述的所有组合)。大部分及/或平均粒径或液滴大小的适合范围的代表性实例包含但不限于约5至100微米、约10至60微米、约175至325微米及约220至300微米，其有助于安全且有效量的活性化合物例如在鼻腔中(例如在鼻腔上部三分的一、上鼻道、嗅区及/或通向嗅觉神经通路的鼻窦区中)的沉积。一般而言，小于约5微米的颗粒或液滴将沉积于气管或甚至肺中，而为约50微米或更大的颗粒或液滴一般不能达至鼻腔且沉积于鼻前部。
国际专利公开案WO 2005/023335(Kurve Technology,Inc.)描述具有适用于实践本公开内容的代表性实施例的直径大小的颗粒及液滴。在特定实施例中，颗粒或液滴具有约5至30微米、约10至20微米、约10至17微米、约10至15微米、约12至17微米、约10至15微米或约10至12微米的平均直径。所述颗粒可“基本上”具有如本文所述的平均直径或大小，亦即至少约50％、60％、70％、80％、90％或95％或更多的颗粒具有所指示的直径或大小范围。
本文所述的医药组合物可以具有如上文所述的液滴大小的喷雾化或雾化液体形式递送。
根据包括鼻内递送方法的本公开内容的特定实施例，可能期望延长医药组合物在鼻腔中(例如在鼻腔上部三分的一、上鼻道、嗅区及/或鼻窦区中)的滞留时间(例如)以增强吸收。因此，医药组合物任选与以下一起调配：生物黏附聚合物、胶(例如三仙胶)、聚葡萄胺糖(例如高度纯化阳离子多醣)、果胶(或当施用至鼻黏膜时如同凝胶一样稠化或乳化的任何碳水化合物)、微球体(例如淀粉、白蛋白、聚葡萄糖、环糊精)、明胶、脂质体、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、聚葡萄胺糖及/或纤维素(例如甲基或丙基纤维素；羟基或羧基纤维素；羧甲基或羟丙基纤维素)，其为增加在鼻腔中的滞留时间的试剂。作为另一方法，增大调配物的黏度也可提供延长药剂与鼻上皮的接触的手段。医药组合物可调配为鼻乳液、软膏或凝胶，其由于其黏度而提供局部施用的优势。
潮湿及高度血管化的膜可有助于快速吸收；因此，医药组合物任选包括保湿剂，尤其在基于凝胶的组合物的情况下，以确保足够的鼻内水分含量。适合的保湿剂的实例包含但不限于甘油(glycerin/glycerol)、矿物油、植物油、膜调节剂、舒缓剂及/或糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇；及/或甘露糖醇)。保湿剂在医药组合物中的浓度将视所选药剂及调配物而变化。
医药组合物亦任选包含吸收增强剂，例如抑制酶活性、降低黏液的黏度或弹性、降低黏膜纤毛清除作用、打开紧密结合及/或溶解活性化合物的药剂。化学增强剂在本领域中已知且包含螯合剂(例如EDTA)、脂肪酸、胆酸盐、表面活性剂及/或防腐剂。当调配展现较差的膜渗透率、缺乏亲脂性及/或由胺基肽酶降解的化合物时，用于渗透的增强剂可尤其适用。吸收增强剂在医药组合物中的浓度将视所选药剂及调配物而变化。
为了延长储存寿命，任选将防腐剂添加至医药组合物。适合的防腐剂包含但不限于苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇及苯扎氯铵及前述的组合。防腐剂的浓度将视使用的防腐剂、所调配的化合物、调配物及其类似物而变化。在代表性实施例中，防腐剂以约2重量％或更小的量存在。
本文所述的医药组合物任选含有气味剂，例如如EP 0 504 263 B1中所描述，以提供对气味的感觉，以便有助于吸入组合物，从而促进至嗅区的递送及/或通过嗅觉神经元触发传输。
作为另一选项，组合物可包括矫味剂，例如以增强味道及/或个体对组合物的可接受性。
经肺施用的多孔颗粒
在一些实施例中，颗粒为多孔的，以使得其具有适当密度以避免在经由吸入器施用时沉积于咽喉后部。相对较大粒度与相对较低密度的组合避免肺中的吞噬作用，提供适当靶向递送，避免组分的全身递送且在肺中提供高浓度的组分。
用于制备这些颗粒及用于递送这些颗粒的代表性方法描述于例如美国专利第7,384,649号、美国专利第7,182,961号、美国专利第7,146,978号、美国专利第7,048,908号、美国专利第6,956,021号、美国专利第6,766,799号及美国专利第6,732,732号中。
公开这些颗粒的其他专利包含美国专利第7,279,182号、美国专利第7,252,840号、美国专利第7,032,593号、美国专利第7,008,644号、美国专利第6,848,197号及美国专利第6,749,835号。
美国专利第7,678,364号公开用于将颗粒递送至肺部系统的方法，其包括：向需要治疗、防治或诊断的患者的呼吸道施用安全且有效量的干粉，所述干粉包括：a)与治疗剂、防治剂或诊断剂复合的多价金属阳离子；b)药学上可接受的载体；及c)含多价金属阳离子的组分，其中所述干粉经喷雾干燥且具有为药剂总重量的约10％w/w或更多的多价金属阳离子总量、约0.4g/cm3或更低的敲紧密度、约5微米至约30微米的中值几何直径及约1至约5微米的空气动力直径。
颗粒中所存在的本文所述化合物或其盐的量可在约0.1重量％至约95重量％的范围内，然而在一些情况下，可甚至高达100％。举例而言，约1至约50％，例如约5至约30％。药物分布于整个颗粒中的颗粒可能是优选的。
在一些实施例中，颗粒包含除上文所述的磷脂外的表面活性剂。如本文所用，术语“表面活性”是指优选吸附至两种不可混溶相的间的界面(例如水与有机聚合物溶液的间的界面、水/空气界面或有机溶剂/空气界面)的任何试剂。表面活性剂一般拥有亲水性部分及亲脂性部分，使得其在吸附至颗粒时易于使各部分达至不吸引类似包衣的颗粒的外部环境，因此减少颗粒集结。表面活性剂也可能促进治疗剂或诊断剂的吸收且提高药剂的生物利用度。
可用于制造本文所述的颗粒的适合的表面活性剂包含但不限于：十六烷醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕榈酸或油酸；甘胆酸盐；表面活性素(surfactin)；泊洛沙姆(poloxamer)；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脱水山梨糖醇三油酸酯(
Figure GDA0003169993220002491
85)；
Figure GDA0003169993220002492
80；及泰洛沙泊(tyloxapol)。
表面活性剂可以约0至约5重量％范围内的量存在于颗粒中。优选地，其可以约0.1至约1.0重量％范围内的量存在于颗粒中。
具有低于约0.4g/cm3的敲紧密度、至少约5μm的中值直径及约1μm至约5μm或约1μm至约3μm的空气动力直径的颗粒更能够避免口咽区中的惯性及重力沉积，且靶向呼吸道或肺深部。使用较大更多孔颗粒是有利的，因为其能够比较小更密集气溶胶颗粒(例如当前用于吸入疗法的那些颗粒)更有效地气溶胶化。
脂质体递送
本文中所描述的组合物宜递送至肺，从而在实际或潜在的流感感染位点处提供化合物。这可以通过经肺递送经由定剂量吸入器或其他经肺递送装置实现，且亦通过使颗粒进入肺中的肺泡周围的微血管床来实现。
包含较小单层囊泡的奈米载体(例如脂质体)显示出优于用于将药物递送至肺的其他已知方法的若干优势，包含延长药物的释放及细胞特异性靶向的药物递送。纳米级药物载体也可能有利于递送水溶性较差的药物，且本文所述化合物中某些水溶性较差的。其他优势包含其提供控制释放、防止被代谢及降解、降低药物毒性及靶向的能力。
脂质体(优选单层囊泡)如通过动态光散射所量测具有小于200nm的大小，且优选特征在于包含化学纯合成磷脂，最佳具有长度至少16个碳的侧链，且含有本文所述化合物中的一个或多个或足以将一定量的其化合物优选递送(即靶向)至肺泡周围的微血管床的其药学上可接受的盐。例如可通过动态光散射使用氦-氖100mW NEC气体激光器及MalvernK7027相关器量测囊泡的直径，理想地每次产生至少两个或三个量测值以用于各大小的测定。
表述“化学纯磷脂”旨在定义基本上不含有害去污部分及引起由其形成的较小单层囊泡(SUV)的聚集的杂质且纯度超过97％的磷脂。优选地，脂质体的直径主要为约50至约160nm，电荷基本上为中性，且掺入侧链长度为16至18个碳原子的磷脂。更佳地，脂质体由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)制备且包含作为囊泡稳定剂的胆固醇(最佳以全部脂质的10％至50％的量)。
脂质体具有高于体温(亦即高于37℃)的熔点也可能是有利的。出于此原因，使用纯磷脂，优选为饱和且具有至少16个碳、优选16个碳与18个碳的间的碳链长度的磷脂可能是有利的。二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)为优选磷脂。胆固醇有助于稳定脂质体且优选以足以提供脂质体稳定性的量添加。最佳地，脂质体进一步包含聚乙二醇化磷脂，例如DSPEPEG。所述方法涉及向患者的血流中引入一定量脂质体，所述脂质体大小小于200nm(优选为单层囊泡)且优选特征在于包含化学纯合成磷脂，最佳具有长度为至少16个碳的侧链，且含有本文所述化合物或足以将一定量化合物优选递送(即靶向)至肺中肺泡周围的微血管床的其药学上可接受的盐或前药。
本文所述化合物可与也如本文所述的其他抗流感药剂组合。这些其他药剂也可能存在于所述脂质体中，可存在于不同脂质体中，或可经由不同途径共施用。
所述脂质体包含本文所述化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐，且任选包含其他抗流感药剂。所述脂质体可通过将磷脂及胆固醇溶解于例如氯仿的适当有机溶剂中且蒸发溶剂以形成脂质膜来制备。若采用离子载体将本文所述化合物载入脂质体中，则可在蒸发前将离子载体添加至脂质溶液。随后将干燥脂质膜于适当水相中再水合，所述水相为例如磷酸盐缓冲盐水或其他生理学上适当的溶液。水溶性药物或治疗剂可含于水合溶液中，但若需要远距离装载，则可将例如上文所描述的螯合剂的装载体添加至水合溶液以包封于脂质体的内部水空间内。
在添加水合溶液时，不同大小的脂质体自发形成且包封一部分水相。其后，使脂质体及悬浮水溶液经受例如挤压的剪切力、音波处理或根据美国专利第4,753,788号中所描述的方法经由均质器进行的处理；以产生特定大小内的囊泡。
随后可处理脂质体以自悬浮溶液移除非所需化合物，例如未包封药物，其可经由例如凝胶层析或超过滤的过程实现。
于干粉气溶胶中的脂质体用于靶向肺递送的用途描述于例如Willis等人,《肺(Lung)》,2012年6月,190(3):251-262中。一个优点为用于制备脂质体的磷脂与内源性肺表面活性剂类似。
施用方法
视所治疗感染的严重程度而定，上文所述的化合物及药学上可接受的组合物可经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以粉剂、软膏或滴剂形式)、经颊、以经口或经鼻喷雾形式、至经肺系统(例如通过使用吸入器，例如定剂量吸入器(metered doseinhaler，MDI))或类似途径向人类及其他动物施用。
用于经口施用的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆及酏剂。除活性化合物的外，液体剂型可含有本领域中通常使用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂；增溶剂及乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂的外，经口组合物也可能包括佐剂，例如湿润剂、乳化剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及芳香剂。
可根据已知技术使用适合的分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可能能是于无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈现在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物及溶剂中，可使用的有水、林格氏溶液(Ringer's solution)、U.S.P.及等张氯化钠溶液。此外，无菌非挥发性油周知地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和的非挥发性油，包含合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，在制备可注射剂时使用脂肪酸，例如油酸。
可注射制剂可被灭菌，例如，通过细菌保留过滤器过滤，或以无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂，其可在溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中之前进行灭菌。
为延长本文所述化合物的作用，通常期望减缓来自皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。此可通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则视其溶解速率而定，而溶解速率又可视晶体尺寸及结晶形式而定。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒介物中来达成非经肠施用的化合物形式的延迟吸收。可注射储库形式通过在可生物降解聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微胶囊基质来制得。视化合物与聚合物的比率及所采用的特定聚合物的性质而定，可控制化合物释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包含聚原酸酯及聚酸酐。积存可注射调配物也可能通过将化合物包覆于与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备。
用于经直肠或经阴道施用的组合物特定地为栓剂，其可通过将本文所述化合物与适合的非刺激性赋形剂或载体(例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在体温下为液体且因此在直肠或阴道腔中融化且释放活性化合物。
用于经口施用的固体剂型包含胶囊、锭剂、丸剂、粉剂及粒剂。在这些固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)及/或以下各者混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及硅酸；b)黏合剂，例如(例如)羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂-琼脂，碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)湿润剂，例如(例如)鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂，例如高岭土及膨润土；及i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、锭剂及丸剂的情形下，剂型也可能包括缓冲剂。
也可能采用类似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及类似物。锭剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备成具有包衣及外壳，例如肠溶包衣及医药制剂技术中熟知的其他包衣。其任选含有乳浊剂，且也可能具有仅在或优选在肠道的某一部分中释放(任选以延迟方式释放)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。也可能采用类似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，例如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及类似物。
活性化合物也可能是具有一或多种如上文所提及的赋形剂的微胶囊化形式。锭剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备成具有包衣及外壳，例如肠溶包衣、释放控制包衣及医药制剂技术中熟知的其他包衣。在这些固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如在一般实践中，这些剂型也可能包括除惰性稀释剂外的其他物质，例如制锭润滑剂及其他制锭助剂，例如硬脂酸镁及微晶纤维素。在胶囊、锭剂及丸剂的情况下，剂型也可能包括缓冲剂。其任选含有遮光剂，且也可能具有仅在或优选在肠道的某一部分中释放(任选以延迟方式释放)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。
用于局部或经皮施用本文所述化合物的剂型包含软膏、糊剂、乳膏、乳剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分是在无菌条件下与药学上可接受的载体及如可能是所需的任何所需防腐剂或缓冲剂混杂。眼科制剂、滴耳剂及滴眼剂也涵盖于本公开内容的范围内。另外，本公开内容涵盖使用经皮贴片，其具有向身体提供控制递送化合物的附加优势。这些剂型可通过将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。也可能使用吸收增进剂来增加化合物通过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
本文所述的组合物可经口、非经肠、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式贮器施用。如本文所用，术语“非经肠”包含但不限于皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。特定而言，组合物是经口、腹膜内或静脉内施用。
本文所述的组合物的无菌可注射形式可能是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术使用适合的分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配。无菌可注射制剂也可能是于无毒非经肠可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物及溶剂中，可采用的有水、林格氏溶液及等张氯化钠溶液。此外，无菌非挥发性油公知地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和的非挥发性油，包含合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)适用于制备可注射剂，也可以是天然药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油，尤其聚氧乙烯化形式)。这些油溶液或悬浮液也可能含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂通常用于调配药学上可接受的剂型(包含乳液及悬浮液)。其他通常使用的表面活性剂(例如聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯)及通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他乳化剂或生物可用性增强剂也可能用于制剂的目的。
本文所述的医药组合物可用任何经口可接受的剂型经口施用，所述剂型包含但不限于胶囊、锭剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的锭剂的情况下，常用载体包含但不限于乳糖及玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用，适用的稀释剂包含乳糖及干燥玉米淀粉。当需要将水性悬浮液用于经口使用时，将活性成分与乳化剂及悬浮剂组合。必要时，也可能添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，本文所述的医药组合物可以用于经直肠施用的栓剂形式施用。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体且因此将在直肠中融化以释放药物。这些物质包含但不限于可可脂、蜂腊及聚乙二醇。
本文所述的医药组合物也可能局部施用，当治疗目标包含局部施用可容易地接近的区域或器官时尤其如此，所述治疗目标包含眼、皮肤或下肠道的疾病。用于这些区域或器官中的每一个的适合的局部制剂均易于制备。
用于下肠道的局部施用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)形式或以适合的灌肠调配物形式实现。也可能使用局部经皮贴片。
对于局部施用，医药组合物可以配制成含有悬浮或溶解于一或多种载体中的活性组分的适合的软膏形式。用于本文所述化合物的局部投药的载体包含但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚环氧丙烷化合物、乳化蜡及水。或者，医药组合物可以配制成含有悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适合乳剂或乳膏形式。适合的载体包含但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇及水。
对于眼科用途来说，医药组合物可被配制成为具有或不具有防腐剂(例如苯扎氯铵)的在等张的、具有pH的无菌生理盐水中的微米化悬浮液，或特定而言配制成为在等张的、具有pH的无菌生理盐水中的溶液。或者，对于眼科用途，医药组合物可调配于例如石蜡脂的软膏中。
用于本文所述方法中的化合物可以被配制成单位剂型。术语“单位剂型”是指适合以单位剂量形式用于经受治疗的个体的物理离散单元，其中各单元含有经计算以产生所期望治疗作用的预定量的活性物质，其任选与适合的医药载体结合。单位剂型可用于单一日剂量或多个日剂量(例如每天约1至4次或更多次)中的一个。当使用多个日剂量时，用于各剂量的单位剂型可相同或不同。
通过参考本文所详述的例示性实例，将更全面地理解本公开的内容。然而，这些实例不应解释为限制本公开内容的范围。本公开内容通篇所有引用在此明确地以引用的方式并入。
实施例
实施例1：1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A1)
Figure GDA0003169993220002561
在室温(RT)条件下，向3-羟基-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-1(100g，793mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF；1L)搅拌溶液中添加碳酸钾(219g，1.59mol)及苯甲基溴(188mL，1.59mol)。在80℃下搅拌反应混合物12小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)，将反应混合物用冰冷水(3L)淬灭，用乙酸乙酯(乙酸乙酯)(5×1L)萃取，用硫酸钠(Na2SO4)干燥且在减压下浓缩。将残余物溶解于乙醚(3L)中，用1N HCl(5×1L)、冰冷水(1L)及饱和NaHCO3(2×1L)溶液洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得3-(苯甲氧基)-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-2。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf：0.4。LCMS(ESI)：m/z 217.06(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002571
在室温，向3-(苯甲氧基)-2-甲基-4H-吡喃-4-酮1-2(100g，463mmol)的溴苯(1500mL)搅拌溶液中添加二氧化硒(154g，1.39mol)。在160℃下搅拌反应混合物24小时，通过TLC监测反应进程(约50％转化率)，将反应混合物冷却至室温，过滤过量SeO2固体，且将固体用冰冷水及饱和NaOH溶液淬灭。在减压下浓缩滤液且将粗化合物通过硅胶柱(100至200目)柱层析纯化，并将化合物用40％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，以获得3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛1-3。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。
Figure GDA0003169993220002572
在0℃，向3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲醛1-3(60g，261mmol)的叔丁醇(1000mL)及水(500mL)的搅拌溶液中添加亚氯酸钠(140g，1565mmol)及磷酸二氢钠(156g，1304mmol)随后在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后(通过TLC监测)，通过浓缩移去约50％的反应体积，随后添加水(1L)，且将混合物用乙醚(2×500mL)萃取，并将水性层用柠檬酸酸化且用10％甲醇(甲醇)/二氯甲烷(DCM)(3×2L)萃取，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得呈灰白色固体的3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸1-4(25g，0.10mol，39％产率)。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 246.99(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002581
在室温向3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸1-4(10g，41mmol)的N-甲基-2-吡咯啶酮(100mL)搅拌溶液中添加碳酸氢钠(6.82g，81.30mmol)及碘代甲烷(MeI)(12.65mL，203mmol)。在50℃下搅拌反应混合物16小时。在起始物质耗尽之后(如通过TLC确定)，将反应混合物冷却至室温且将反应混合物用冰冷水(300mL)淬灭、用乙酸乙酯(2×300mL)萃取、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。将粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析纯化，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸酯1-5。TLC：40％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 261.20(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002591
在室温向甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-4H-吡喃-2-甲酸酯1-5(15g，58mmol)的二甲基乙酰胺(150mL)搅拌溶液中添加对甲苯磺酸吡啶鎓(43.44g，173mmol)及肼甲酸叔丁酯(9.89g，75.0mmol)。在60℃下搅拌反应混合物16小时。将反应混合物冷却至室温且将其倾入碎冰中，并过滤所得固体以获得甲基-3-(苯甲氧基)-1-(叔丁氧羰基胺基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯1-6。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 375.32(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002592
在室温向甲基-3-(苯甲氧基)-1-(叔丁氧羰基胺基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯1-6(15g，40mmol)的1,4-二噁烷(50mL)搅拌溶液中添加4N HCl/1,4-二噁烷(20mL)。在室温下搅拌反应混合物4小时。反应完成后(通过TLC监测)，蒸馏出1,4-二噁烷溶剂，用碳酸氢钠溶液碱化，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将有机层用盐水溶液(100mL)洗涤且在减压下浓缩以获得甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 274.98(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002601
在密封管中的甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(3g，0.01mmol)的甲醇(30mL)搅拌溶液中，添加DBU(0.38mg，0.02mmol)及甲胺(2M甲醇)(30mL)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用38％乙腈(ACN)/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf:0.4。LCMS(ESI):m/z 274.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002602
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1-7(500mg，1.8mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(55mg，1.8mmol)，随后在140℃下在微波照射下保持30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用32％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 286.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002611
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(80mg，0.280mmol)的无水DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(23mg，1.751mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(115.3mg，0.421mmol)(用于制备，见下文)于无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用57％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-苯甲氧基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 488.4(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002612
将5-苯甲氧基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9(2×30mg，0.06mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液，用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩。粗化合物经制备型HPLC方法纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A1。TLC：15％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 400.42(M+H)+。
制备INT-5
Figure GDA0003169993220002621
在-78℃下向2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-10(50g，0.38mol)的THF(500mL)搅拌溶液中逐滴添加二异丙胺基锂(LDA)(227mL，于THF中2.5M)且将反应混合物升温至-20℃持续2小时且再次冷却至-78℃。现在1小时的时间段内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)苯1-11(93.5g，379mmol，溶解于100mLTHF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后将反应混合物升温至室温且搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(400mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化所得粗残余物以获得半纯样品。将其经由反相层析法用ACN及0.1％甲酸/水洗脱再纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-12。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 301.3(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002631
向2-(2-溴苯甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮1-12(100mg，0.333mmol)的无水DMF(5mL)搅拌溶液中添加NiCl2(4.29mg，0.033mmol)及Cr2Cl2(406mg，3.33mmol)，随后在120℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭用乙醚(100mL×2)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经combi-flash纯化以获得9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇1-13。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z205(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220002632
在0℃下向9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇1-13(1.2g，5.4mmol)的DCM(12mL)搅拌溶液中添加H3PO4(14mL)且在室温下搅拌12小时。反应通过TLC监测。将反应混合物倒入冰水(25mL)中且用乙醚(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经层析纯化以获得9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1-14。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 205(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002641
在室温下向9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1-14(60mg，0.27mol)的AcOH(2mL)中搅拌溶液中吹扫Cl2气25分钟。在起始物质耗尽之后(通过TLC检验)，反应混合物用冰水(5mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化及用乙醚(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经层析纯化以获得4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 274(M+H)+。
实施例2：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A6)
Figure GDA0003169993220002642
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(250mg，0.877mmol；Bn如在上文流程中是指苯甲基)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(70mg，1.75mmol)且搅拌15分钟，随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(327mg，1.05mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/MeCl；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 524.39(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002651
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2-3(50mg，0.096mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A6。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.34(M+H)+。
实施例3：1-(2,7-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A3)
Figure GDA0003169993220002661
在-78℃下向5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-1(10g，66mmol)的THF(300mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(33mL，于THF中2.0M)且使反应混合物升温至-20℃持续2小时且再次冷却至-78℃。现在1小时的时间段内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-4-氟苯3-2(17g，63mmol，于100mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后使反应混合物升温至室温，随后搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(3×300mL)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。所得粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法使用2％乙酸乙酯/石油醚纯化以获得2-(2-溴-5-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-3。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS(ESI)：m/z 338.93(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002662
向2-(2-溴-5-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮3-3(1g，2.9mmol)的无水DMF(30mL)搅拌溶液中添加NiCl2(37mg，0.29mmol)及无水Cr2Cl2(3.6g，29mmol)，随后在110℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×150mL)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物未经纯化即用于下一步骤以获得2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3-4。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 259.4。
Figure GDA0003169993220002671
在0℃下向2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3-4(200mg，0.77mmol)的DCM(0.2mL，10体积)搅拌溶液中添加H3PO4(0.2mL，10体积)，且使其在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(25mL)淬灭且用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化以获得2,7-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚3-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 241.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002672
在室温下向2,7-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚3-5(300mg，1.25mmol)的AcOH(9mL)经搅拌溶液中吹扫Cl2气45分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过层析纯化得到4b,9a-二氯-2,7-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚3-6。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z275(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220002681
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(200mg，0.67mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(56mg，1.0mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,7-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚3-6(326mg，1.0mmol)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 524.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002682
将5-(苯甲氧基)-1-(2,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3-7(110mg，0.21mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理，且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤，且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,7-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.37(M+H)+。
实施例4：1-(1,8-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A12)
Figure GDA0003169993220002691
在-78℃下向4-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-1(2.5g，17mmol)的THF(100mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(12.5mL，于THF中2.0M)，且使反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时内逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-3-氟苯4-2(4.4g，17mmol，于25mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。使反应混合物升温至室温，随后搅拌其2小时。反应完成后(如由TLC所确定)，将反应混合物倾入冰冷NaHCO3溶液中，且随后用乙醚(3×300mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗化合物。所得粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法使用2％乙酸乙酯/石油醚纯化以获得2-(2-溴-6-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-3。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)m/z337.15(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002701
向2-(2-溴-6-氟苯甲基)-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4-3(2g，5.9mmol)的无水DMF(20mL)搅拌溶液中添加NiCl2(76mg，0.59mmol)，继而添加无水CrCl2(7.2g，59mmol)，且将混合物在110℃下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×150mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物未经纯化即用于下一步骤以获得1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇]4-4。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 241.18(M-OH)。
Figure GDA0003169993220002702
在0℃下向1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇4-4(1.8g，6.97mmol)的DCM(20mL，11体积)搅拌溶液中添加H3PO4(20mL，11体积)，且使混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用乙醚(3×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶(100至200目)柱层析法纯化以获得1,8-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚4-5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 241.25(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002711
在室温下向1,8-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚4-5(600mg，2.5mmol)的AcOH(20mL)搅拌溶液中吹扫Cl2气30分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得650mg的4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10四氢茚并[1，2a]茚4-6。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS(ESI)：m/z 274.88(M-Cl)。
Figure GDA0003169993220002712
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7mmol)(参见实施例1)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(175mg，4.0mmol)且搅拌20分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10四氢茚并[1,2a]茚4-6(543mg，1.0mmol)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌15分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4-7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 524.39(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002721
向5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4-7(80mg，0.15mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液中添加10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)，且在H2气囊气氛下搅拌混合物2小时。反应混合物经由硅藻土过滤，用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板，且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A12。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 436.13(M+H)+。
实施例5：5-羟基-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A8)
Figure GDA0003169993220002722
在0℃下向2-溴-4,5-二氟苯甲酸5-1(12g，50.6mmol)的THF(120mL)搅拌溶液中添加CDI(12.3g，75.9mmol)。将反应混合物加热至80℃持续4小时。在起始物质耗尽之后，使反应混合物冷却至0℃，随后缓慢逐滴添加NaBH4(1.87g，50.6mmol)/水(10mL)持续10分钟，随后在室温下搅拌反应混合物30分钟。在起始物质耗尽之后，将反应混合物倾倒在冰水中且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并将所分离的有机层用盐水溶液洗涤、经Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇5-2。TLC：20％乙酸乙酯/己烷；Rf＝0.5。1H NMR：一致(DMSO)。
Figure GDA0003169993220002731
在0℃下向(2-溴-4,5-二氟苯基)甲醇5-2(9g，41mmol)的DCM(100mL)搅拌溶液中添加三苯基膦(12.68g，48.43mmol)及CBr4(16g，48mmol)，随后在室温下搅拌反应混合物16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用水淬灭且用DCM(2×30mL)萃取，并将所分离的有机层用盐水溶液洗涤、经Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得1-溴-2-(溴甲基)-4,5-二氟苯5-3。TLC：5％乙酸乙酯/己烷；Rf＝0.8。1H NMR：一致(CDCl3)。
Figure GDA0003169993220002732
在-70℃下向5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-4(2g，12mmol)的THF(20mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(4.7mL，于THF中2.5M，1.2当量)，且将反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时的时间段内向所述反应混合物逐滴添加1-溴-2-(溴甲基)-4,5-二氟苯5-3(3.4g，12mmol，溶解于100mL THF中)且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。使反应混合物升温至室温随后搅拌2小时。反应完成后(如由TLC所确定)，将反应混合物倾入冰冷NaHCO3溶液中，且随后用乙醚(40mL×3)萃取，且将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴-4,5-二氟苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-5。TLC：10％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 375.19(M+2)+。
Figure GDA0003169993220002741
向2-(2-溴-4,5-二氟苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5-5(900mg，2.43mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NiCl2(31mg，0.24mmol)及Cr2Cl2(2.94g，24.1mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水淬灭用乙醚(100mL×2)萃取，且将合并的有机层用Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇5-6。粗化合物不经任何纯化即用于下一步骤。TLC：15％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 277.31(M-H2O)。
Figure GDA0003169993220002751
在0℃下向2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇5-6(1g粗产物，3.4013mmol)的DCM(20mL，20体积)搅拌溶液中添加H3PO4(10mL，10体积)，且使其达到室温，随后搅拌12小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)将反应混合物用冰水(25mL)淬灭，且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得2,3,6,7-四氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5-7。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.8。LCMS：(ESI)：m/z 275.54(M-H)-。
Figure GDA0003169993220002752
在室温下向2,3,6,7-四氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5-7(350mg，1.268mmol)的AcOH(3ml)搅拌溶液中吹扫Cl2气持续25分钟。在起始物质耗尽之后(通过TLC监测)将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化得到4b,9a-二氯-2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚5-8。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 363.53(M-HCl)+。
Figure GDA0003169993220002761
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(300mg，1.05mmol)的DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％的NaH(105mg，2.63mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3,6,7-四氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚5-8(365mg，1.05mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮5-9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 560.37(M+H+)。
Figure GDA0003169993220002762
将5-(苯甲氧基)-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮5-9(120mg，0.214mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC来纯化以获得5-羟基-3-甲基-1-(2,3,6,7-四氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A8。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 472.03(M+H)+。
实施例6：3-苯甲基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A4)
Figure GDA0003169993220002771
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-6(200mg，0.72mmol)(参见实施例1)的甲醇(4mL)搅拌溶液中添加DBU(0.027mL，0.18mmol)及苯甲胺(1.56g，14.6mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下移除挥发物且粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-N-苯甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺6-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 350.10(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002772
在微波小瓶中，向1-胺基-N-苯甲基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺6-1(500mg，1.43mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(47mg，1.57mmol)，随后在140℃下在微波中照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 362.11(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002781
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(150mg，0.4155mmol)的无水DMF(1mL)搅拌溶液中添加60％NaH(41mg，1.0mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(171mg，0.623mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用62％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.2(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002791
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-3(45mg，0.07mmol)的甲醇(1.5mL)及乙酸乙酯(1.5mL)搅拌溶液用10％w/w 20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊压力下保持1小时。反应混合物经由硅藻土板过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC来纯化以获得3-苯甲基-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A4。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 476.42(M+H)+。
实施例7：3-环丙基甲基-1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A2)
Figure GDA0003169993220002792
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(750mg，2.73mmol)(参见实施例1)的甲醇(15mL)搅拌溶液中添加DBU(109mg，0.68mmol)及环丙基甲胺(3.89g，54.7mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(环丙基甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺7-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z314.03(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002801
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(环丙基甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺7-1(400mg，1.28mmol)的乙醇(4mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.4mmol)，随后在140℃下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用32％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 326.49(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002802
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(250mg，0.769mmol)的无水DMF(2mL)搅拌溶液中添加60％NaH(77mg，1.9mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(316mg，1.15mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经反相层析法用57％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 528.45(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002811
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-3(50mg，0.094mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊气氛下保持1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法来纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 440.16(M+H)+。
实施例8：1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A5)
Figure GDA0003169993220002812
向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1-4-二氢吡啶-2-甲酸酯INT-1(1g，3.64mmol)(参见实施例1)的四氢呋喃(10mL)及水(3ml)的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.25g，10.94mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物，向粗产物添加水(25mL)，随后用1N水溶液酸化直至约pH 2。通过过滤收集HCl及所得固体以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸8-1。TLC：15％甲醇/DCM及1滴乙酸；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 314.03(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002821
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-羧酸8-1(50mg，0.19mmol)的DMF(2mL)搅拌溶液中添加HATU(109mg，0.288mmol)、二异丙基乙胺(0.08mL，0.48mmol)及(四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(110.7mg，0.962mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经反相层析法用38％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺8-2。TLC：15％甲醇/DCM及1滴NH3水溶液；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 358.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002822
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺8-2(500mg，1.40mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.40mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用43％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 370.5(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002831
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(225mg，0.609mmol)的无水DMF(2mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(61mg，1.5mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下随后添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(250mg，0.914mmol)(参见实施例1)的无水DMF(1mL)溶液，随后在相同温度下搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经过100至200硅胶柱层析，通过2％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-4。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 572.5(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002832
将5-(苯甲氧基)-1-(4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-4(140mg，0.245mmol)的甲醇及乙酸乙酯(1:1)(30mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在H2气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤；用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土板且将洗液在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC方法纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A5。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 484.45(M+H)+。
实施例9：1-(9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(2-苯氧基-乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A7)
Figure GDA0003169993220002841
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(200mg，0.729mmol)(参见实施例1)搅拌溶液中添加DBU(22mg，0.145mmol)及2-苯氧基乙烷-1-胺(1g，7.29mmol)，随后在室温下搅拌12小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物通过反相层析法用10％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(2-苯氧基乙基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺9-1。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 380.49(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002842
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(2-苯氧基乙基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺9-1(500mg，1.32mmol)的乙醇(2.5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(4.3mg，1.45mmol)，随后在微波条件下在140℃下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经反相层析法用50％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 392.3(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002851
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-2(150mg，0.383mmol)的无水DMF(5mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(30.6g，1.28mmol)且搅拌10分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(157mg，0.575mmol)(参见实施例1)的无水DMF(2mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 594.4(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002861
将5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮9-3(2×50mg，0.084mmol)的甲醇(2.5mL)及乙酸乙酯(2.5mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(12mg)处理，且在氢气囊气氛下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤；用10％甲醇/DCM(25mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩洗液。粗化合物通过制备型HPLC来纯化以获得1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(2-苯氧基乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A7。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 506.42(M+H)+。
实施例10：3-环丙基甲基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并\[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并\[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A9)
Figure GDA0003169993220002862
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(200mg，0.6153mmol)的DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％NaH(61mg，1.5mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(247mg，0.800mmol)(参见实施例14)的DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1与5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.60(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002871
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮10-1a(50mg，0.089mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理，且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A9。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 476.38(M+H)+。
实施例11：3-环丙基甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A13)
Figure GDA0003169993220002881
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(300mg，0.9mmol)的DMF(6mL)搅拌溶液中添加60％NaH(92mg，2.3mmol)且搅拌20分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(286mg，0.9mmol)(参见实施例13)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用76％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1与5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 564.44(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002882
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮11-1a(50mg，0.089mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM (20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A13。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 476.13(M+H)+。
实施例12：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A14)
Figure GDA0003169993220002891
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(2.0g，7.3mmol)的DBU(0.227mL，1.46mmol)搅拌溶液中添加乙胺(30mL，15体积)，且随后在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用40％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-乙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺12-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 288.43(M+H)。
Figure GDA0003169993220002892
在微波小瓶中，将1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-乙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺12-1(500mg，1.74mmol)添加至乙醇(15mL)中，随后添加三聚甲醛(52mg，1.7mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用30％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 300.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002901
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(400mg，1.34mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(133mg，3.34mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(497mg，1.61mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 538.43(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002911
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-3a(60mg，0.11mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气囊压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩滤液。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A14。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
实施例13：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A10)
Figure GDA0003169993220002912
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(320mg，1.07mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(107mg，2.68mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(398mg，1.28mmol)的无水DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1a。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 538.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002921
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮13-1a(70mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物用乙醚湿磨以获得1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A10。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
INT-3准备
Figure GDA0003169993220002931
在0℃下向吡啶(0.4mL，4.97mmol)及哌啶(0.2mL，2.02mmol)的搅拌溶液中添加丙二酸(732mg，7.04mmol)及3,4-二氟苯甲醛1(500mg，3.52mmol)。将反应混合物回流6小时。用1N HCl酸化反应混合物直至pH 2且将所得固体过滤、用水(250mL)洗涤且干燥以获得3-(3,4-二氟苯基)丙烯酸2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 185.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002932
将3-(3,4-二氟苯基)丙烯酸2(300mg，1.63mmol)的甲醇及乙酸乙酯(1:1，5mL)搅拌溶液用10％w/w的Pd/C(30mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌4小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩以获得3-(3,4-二氟苯基)丙酸3。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.25。LCMS：(ESI)：m/z 187.19(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002933
在0℃下向3-(3,4-二氟苯基)丙酸3(5.4g，29.0mmol)的DCM(50mL)搅拌溶液中添加SOCl2(10.5mL，145mmol)且将反应混合物加热至80℃持续3小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物在真空压力下浓缩且随后将粗化合物加入DCM且冷却至0℃，随后在0℃下分批添加AlCl3(4.63g，34.8mmol)至反应混合物且在室温下搅拌16小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物倾入冰水中且用DCM萃取。将有机层用盐水溶液洗涤、用Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物。粗化合物通过柱层析纯化以获得5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 169.1(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002941
在0℃至室温下向5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮4(1g，6mmol)的甲醇(25mL)搅拌溶液中逐滴缓慢添加甲醇钠(96mg，1.8mmol)及2-溴苯甲醛(1.14g，6.24mmol)的甲醇(20mL)的溶液，持续16小时。反应混合物用1N HCl(5mL)酸化至pH 3至4，且将所沉淀固体过滤并干燥以获得(E)-2-(2-溴苯甲基茚)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z 335.17(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002942
将(E)-2-(2-溴苯甲基茚)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮5(1g，3mmol)的THF及乙酸乙酯(1:1，50mL)搅拌溶液用PtO2(100mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌3小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(30mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩且粗产物通过二氧化硅柱纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮6。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.65。LCMS：(ESI)：m/z 336.9(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002951
向2-(2-溴苯甲基)-5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮6(4.5g，13mmol)的无水DMF(60mL)搅拌溶液中添加NiCl2(172.7mg，1.339mmol)及Cr2Cl2(16.3g，134mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭用乙醚(2×200mL)萃取。有机层用冰冷水(2×100mL)、盐水溶液洗涤且经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以获得粗2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇7。TLC：20％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 241.21(M-OH)+。
Figure GDA0003169993220002952
在0℃下向2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇7(粗)(6g，23mmol)的DCM(60mL)搅拌溶液中添加H3PO4(60mL)且搅拌2小时。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)反应混合物用冰水(200mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经二氧化硅用2％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化以获得2,3-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚8。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 241.21(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002961
在室温下向2,3-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚8(3.6g，15mmol)的AcOH(28ml)搅拌溶液中吹扫Cl2气25分钟(使用NaClO4及浓HCl原位产生氯气)。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用碳酸氢钠溶液碱化及用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3。TLC：100％石油醚；Rf＝0.3。
实施例14：3-苯甲基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A11)
Figure GDA0003169993220002962
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(400mg，1.11mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(110mg，2.77mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(446mg，1.44mmol)(见下文)的DMF(4mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1a。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 600.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002971
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮14-1a(80mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且将洗液在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-苯甲基-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A11。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 512.08(M+H)+。
合成INT-4
Figure GDA0003169993220002981
在-78℃下向4,5-二氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮2(3.75g，22.3mmol)的THF(110mL)搅拌溶液中逐滴添加LDA(16.7mL，于THF中2M，1.5当量)且使反应混合物升温至-20℃持续2小时并再次冷却至-78℃。在1小时的时间段内向该混合物逐滴添加溶解于100mL THF中的1-溴-2-(溴甲基)苯1(5.57g，22.3mmol)，且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。随后使反应混合物升温至室温且搅拌2小时。如由TLC所确定反应完成后，将反应混合物倾入冰冷碳酸氢钠溶液中，且随后用乙醚(100mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以得到粗产物。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴苯甲基)-4,5-二氟-2,3二氢-1H-茚-1-酮3。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 339.30(M+2)+。
Figure GDA0003169993220002982
向2-(2-溴苯甲基)-4,5-二氟-2,3二氢-1H-茚-1-酮3(1.3g，3.9mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NiCl2(49mg，0.39mmol)及CrCl2(4.7g，39mmol)，随后在120℃下搅拌12小时小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇4。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 241.31(M-OH)。
Figure GDA0003169993220002991
在0℃下向1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-醇4(500mg，1.94mmol)的DCM(10mL)的搅拌溶液添加H3PO4(10mL，10体积)，使其达至室温且搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(25mL)淬灭且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得1,2-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.7。LCMS：(ESI)：m/z 241.34(M+H)+。
Figure GDA0003169993220002992
在室温下向1,2-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚5(850mg，3.54mmol)的AcOH(15mL)的搅拌溶液吹扫Cl2气25分钟。在起始物质耗尽之后(如由TLC所确定)将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用NaHCO3溶液碱化且用乙醚(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(INT-4)。TLC：5％乙酸乙酯/石油醚；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 275.33(M-Cl)+。
实施例15：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A15)
Figure GDA0003169993220003001
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(600mg，1.63mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.07mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(605mg，1.95mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 608.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003002
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮15-1a(80mg，0.13mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 520.13(M+H)+。
实施例16：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-3-(四氢-吡喃-4-基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A16)
Figure GDA0003169993220003011
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮8-3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.07mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(605mg，1.95mmol)(参见实施例13)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.4。LCMS：(ESI)：m/z 608.52(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003021
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮16-1a(60mg，0.099mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A16。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.3。LCMS：(ESI)：m/z 520.13(M+H)+。
实施例17：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-(4-氟-苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A17)
Figure GDA0003169993220003031
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3.5g，13mmol)(参见实施例1)与(4-氟苯基)甲胺(8g，63.8686mmol)的搅拌混合物中添加DBU(1mL)，随后在室温下搅拌16小时。反应混合物直接经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺17-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 368.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003032
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺17-1(500mg，1.36mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(45mg，1.5mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用55％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 380.08(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003041
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2(400mg，1.055mmol)于DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(126mg，3.17mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(425mg，1.37mmol)(参见实施例14)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×60ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗化合物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱再次纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.65。LCMS：(ESI)：m/z 618.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003042
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-3a(60mg，0.097mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(12mg)处理且在H2气氛(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A17。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.1。LCMS：(ESI)：m/z 530.09(M+H)+。
实施例18：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-(4-氟-苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A23)
Figure GDA0003169993220003051
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮17-2(500mg，1.319mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(160mg，3.96mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(613mg，1.98mmol)(参见实施例13)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗化合物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/二氯甲烷洗脱再次纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1与5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 618.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003061
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1与5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮18-1a(130mg，0.210mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A23。TLC：5％甲醇/DCM；Rf＝0.2。LCMS：(ESI)：m/z 530.09(M+H)+。
实施例19：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢-9H-茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A18)
Figure GDA0003169993220003071
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(1.4g，5.109mmol)及2-(4-氟苯基)乙-1-胺(3.5g，26mmol)的搅拌溶液中添加DBU(0.5mL)，随后在室温下搅拌16小时。向反应混合物添加水(300mL)且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用70％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺19-1。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 382.52(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003072
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(4-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺19-1(480mg，1.26mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.4mmol)，随后在140℃在微波条件下搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用62％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.5。LCMS：(ESI)：m/z 394.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003081
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2(300mg，0.763mmol)的DMF(3mL)搅拌溶液中添加60％NaH(76mg，1.908mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(274mg，1.15mmol)(参见实施例14)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3a的异构混合物。TLC：10％甲醇/DCM；Rf＝0.6。LCMS：(ESI)：m/z632.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003082
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-3a(20mg，0.032mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(1mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(2mg)处理且在气囊H2气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/MeCl2(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A18。TLC：10％甲醇/DCM；Rf：0.5。LCMS(ESI)：m/z 544.14(M+H)+。
实施例20：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A19)
Figure GDA0003169993220003091
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加NaH(于矿物油中60％)(175mg，4.0mmol)且搅拌20分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(543mg，1.0mmol)的无水DMF(5mL)溶液且搅拌1小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得异构体5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1)与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1a)的混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 524.43(M+H)+
Figure GDA0003169993220003101
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1)与5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(20-1A)(90mg，0.172mmol)的甲醇(0.5mL)及乙酸乙酯(0.5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(18mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床并在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A19。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 436.06(M+H)+。
实施例21：1-(3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A20)
Figure GDA0003169993220003102
在0℃下向6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-1(5g，33.3333mmol)的甲醇(100mL)搅拌溶液中逐滴缓慢添加溶解在甲醇(100mL)中的甲醇钠(540mg，9.999mmol)及2-溴-4-氟苯甲醛(7.03g，34.999mmol)，且在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。反应混合物用1N HCl(5mL)酸化至pH(3至4)且装入水(100mL)，经过滤及干燥以获得(E)-2-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-2。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 334.92(M+H)+
Figure GDA0003169993220003111
将(E)-2-(2-溴-4-氟苯亚甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-2(5g，14.97mmol)的THF及乙酸乙酯(1:1，200mL)搅拌溶液用PtO2(500mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌6小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用THF(100mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗产物通过硅胶柱层析纯化以获得2-(2-溴-4-氟苯甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-3。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.42，LCMS(ESI)：m/z 336.93(M+H)+
Figure GDA0003169993220003112
向2-(2-溴-4-氟苯甲基)-6-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮21-3(2.5g，7.4404mmol)的无水DMF(30mL)搅拌溶液中添加NiCl2(95.98mg，0.744mmol)及CrCl2(9.077g，74.404mmol)，随后在120℃下搅拌12小时。在起始物质耗尽之后，反应混合物用冰水淬灭且用乙醚(2×200mL)萃取。有机层用冰冷水(100mL×2)、盐水溶液洗涤且经硫酸钠干燥并在减压下浓缩以获得粗3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇21-4。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 241.21(M-OH)。
Figure GDA0003169993220003121
在0℃下向3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇21-4(粗)(1.7g，6.5891mmol)的DCM(20mL)搅拌溶液中添加H3PO4(20mL)且搅拌2小时。在起始物质耗尽之后将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物通过硅胶柱层析用1％乙酸乙酯/石油醚洗脱纯化以获得3,6-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚21-5。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.7，LCMS(ESI)：m/z 241.25(M+H)+
Figure GDA0003169993220003122
在室温下向3,6-二氟-9,10-二氢茚并[1,2-a]茚21-6(900mg，3.75mmol)的AcOH(8mL)搅拌溶液吹扫Cl2气25分钟(氯气使用NaClO4及浓HCl原位产生)。在起始物质耗尽之后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭且用碳酸氢钠溶液碱化并用乙醚(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由层析纯化以获得4b,9a-二氯-3,6-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-9。TLC系统：100％石油醚Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 275.25(M-Cl)+
Figure GDA0003169993220003131
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮INT-6(500mg，1.7543mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(175mg，4.3859mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-3,6-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-9(815.7mg，2.6315mmol)的DMF(4mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤、经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得5-(苯甲氧基)-1-(6-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮21-7。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 524.09(M+H)+
Figure GDA0003169993220003132
将溶解在甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)中的5-(苯甲氧基)-1-(6-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮21-7(150mg，0.2868mmol)用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过逆相使用0.05％甲酸/ACN纯化以获得1-(3,6-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A20。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 436.10(M+H)+
实施例22：3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A31)
Figure GDA0003169993220003141
在密封管下向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(1.0g，3.64mmol)的搅拌溶液中添加2-氟-3-氯苯甲胺(2.3mL，18.248mmol)及DBU(0.15mL，0.72mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氯-2-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺22-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 402.02(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003151
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氯-2-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺22-1(800mg，1.99mmol)的乙醇(40mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(60mg，2.00mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用35％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-2。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 414.07(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003152
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-2(250mg，0.605mmol)的DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％NaH(72mg，1.815mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(199mg，0.726mmol)的无水DMF(5mL)溶液,随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-3。此粗产物未经任何纯化即用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.3，LCMS(ESI)：m/z616.40(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003161
将5-(苯甲氧基)-3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮22-3(220mg粗产物，0.35mmol)的甲醇(10mL)及乙酸乙酯(10mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(50mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土床过滤且用甲醇(20mL)洗涤且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得3-(3-氯-2-氟苯甲基)-1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A31。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 528.04(M+H)+。
实施例23：1-(9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A32)
Figure GDA0003169993220003162
向3-苯基丁醛23-1(5g，33.783mmol)的甲醇(50mL)搅拌溶液中添加乙酸铵(25g，337.8mmol)且搅拌30分钟。随后在0℃下添加硼氢化氰钠(1.48g，23.64mmol)且在室温下搅拌16小时。蒸馏出有机溶剂且向粗产物添加水并在0℃下用浓HCl缓慢酸化至pH 3。水性层用DCM(500mL)萃取且随后在0℃下用固体NaOH颗粒碱化至pH 12。随后用DCM(500mL)萃取且将有机层用盐水溶液(200mL)洗涤且经Na2SO4干燥且在减压下浓缩以获得3-苯基丁-1-胺23-2。TLC系统：40％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3
Figure GDA0003169993220003171
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲基酯INT-1(1g，3.649mmol)与3-苯基丁-1-胺23-2(2.7g，18.248mmol)的搅拌溶液中添加DBU(0.2mL)，随后在室温下搅拌16小时。反应混合物直接经反相层析法用72％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(3-苯基丁基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺23-3。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 392.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003172
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-(3-苯基丁基)-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺23-3(500mg，1.278mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(42mg，1.406mmol)，随后在140℃下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用56％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-4。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.45，LCMS(ESI)：m/z 404.16(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003181
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-4(500mg，1.240mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(124mg，3.101mmol)且搅拌30分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-5(680mg，2.481mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物再次经由100-200硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-5。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 606.57(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003191
将5-(苯甲氧基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-苯基丁基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮23-5(60mg，0.099mmol)的甲醇(8mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用15％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A32。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 518.17(M+H)+。
实施例24：3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A9)
Figure GDA0003169993220003192
在-15℃下将溶解在DMF(3mL)中的5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(200mg，0.6153mmol)用60％NaH(61mg，1.5384mmol)处理且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(247mg，0.7999mmol)的DMF(1mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1a。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 564.60(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003201
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮24-1a(50mg，0.0888mmol)的甲醇(1mL)及乙酸乙酯(1mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM (20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A9。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 476.38(M+H)+
实施例25：3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A13)
Figure GDA0003169993220003211
在-15℃下将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮7-2(300mg，0.9mmol)的DMF(6mL)搅拌溶液用60％NaH(92mg，2.3mmol)处理且搅拌20分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(286mg，0.9mmol)的DMF(3mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用76％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1a。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 564.44(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003212
将5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1及5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮25-1a(50mg，0.0888mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)的搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM (20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得3-(环丙基甲基)-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A13。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 476.13(M+H)+
实施例26：1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A10)
Figure GDA0003169993220003221
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮12-2(320mg，1.0702mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(107mg，2.680mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(398mg，1.284mmol)的无水DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 538.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003231
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟-4b,9-二氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮26-1a(70mg，0.13mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物用乙醚湿磨以获得1-(2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚-4b-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A10。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 450.09(M+H)+。
实施例27：3-苯甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A21)
Figure GDA0003169993220003232
在-15℃下向3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮6-2(500mg，1.385mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(138mg，3.4625mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(510mg，1.662mmol)的DMF(5mL)中的溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1与3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 600.38(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003241
将3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1、3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮27-1a(120mg，0.2003mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得3-苯甲基-1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A21。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 512.09(M+H)+
实施例28：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A22)
Figure GDA0003169993220003251
将于甲醇(10体积)中的1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3g，10.9489mmol)添加至2-苯基乙-1-胺(6.62g，54.7445mmol)及DBU(1.5mL，0.5体积)中且在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-苯乙基-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺28-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 364.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003252
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-N-苯乙基-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺28-1(1.4g，3.856mmol)的乙醇(20mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(127mg，4.2424mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用30％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 376.34(M+H)+
Figure GDA0003169993220003261
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-1(350mg，0.9333mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(112mg，2.799mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(318mg，1.066mmol)的DMF(3mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用75％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 614.42(M+H)+
Figure GDA0003169993220003262
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-2a(100mg，0.1631mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A22。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 526.10(M+H)+。
实施例29：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A25)
Figure GDA0003169993220003271
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮28-1(500mg，1.3333mmol)的DMF(5mL)搅拌溶液中添加60％NaH(160mg，3.9999mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(454mg，1.4666mmol)的DMF(3mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用75％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6，LCMS(ESI)：m/z 614.42(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003281
将5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1与5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮29-1a(180mg，0.2936mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(30mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-苯乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A25。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z526.10(M+H)+
实施例30：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A15)
Figure GDA0003169993220003282
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.065mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚8-3(605mg，1.9512mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1a的异构混合物。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 608.14(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003291
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1与5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮30-1a(80mg，0.13179mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 520.13(M+H)+
实施例31 1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A16)
Figure GDA0003169993220003301
在-15℃下向8-3(600mg，1.626mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(162mg，4.065mmol)且搅拌15分钟。在-15℃下向彼混合物添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(605mg，1.9512mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用65％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1a。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 608.52(M+H)+
Figure GDA0003169993220003302
5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮31-1a(60mg，0.0988mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在氢气氛围(气囊压力)下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A15。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 520.13(M+H)+
实施例32：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A29)
Figure GDA0003169993220003311
在-25℃下向5-(苯甲氧基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮19-2(500mg，1.272mmol)的DMF(8mL)搅拌溶液中添加60％NaH(152mg，3.816mmol)且搅拌15分钟。随后在-25℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(591mg，1.908mmol)的DMF(7mL)溶液且搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用82％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得具有杂质的化合物。粗产物再次经由60-120硅胶柱层析用1％甲醇/DCM洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1及5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.15(M+H)+
Figure GDA0003169993220003321
将5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮32-1a(70mg，0.1109mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(10mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(4-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A29。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.11(M+H)+
实施例33：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A26)
Figure GDA0003169993220003322
将1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(3.0g，10.9489mmol)添加至(3-氟苯基)甲胺(6.8mL，54.7445mmol)及DBU(0.47mL，2.1897mmol)，且随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用60％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺33-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 368.34(M+H)
Figure GDA0003169993220003331
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯甲基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺33-1(500mg，1.3623mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(40.8mg，1.3623mmol)，随后在140℃下在微波反应器下照射30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用58％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 380.09(M+H)+
Figure GDA0003169993220003332
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2(550mg，1.4511mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.6277mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(539mg，1.7413mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 618.39(M+H)+
Figure GDA0003169993220003341
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3及3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-3a(200mg，0.3241mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(20mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A26。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 530.09(M+H)+
实施例34：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A24)
Figure GDA0003169993220003351
在-15℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮33-2(550mg，1.4511mmol)的DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.6277mmol)且搅拌15分钟。随后在-15℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(539mg，1.7413mmol)的DMF(5mL)溶液，随后搅拌2小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得3-苯甲基-5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1及5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 618.13(M+H)+
Figure GDA0003169993220003352
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1、5-(苯甲氧基)-1-(2,3-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮34-1a(140mg，0.2269mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物通过制备型HPLC纯化以获得化合物1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯甲基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A24。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 530.09(M+H)+
实施例35：1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A27)
Figure GDA0003169993220003361
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯INT-1(2g，7.0mmol)的搅拌溶液中添加DBU(2体积)及2-(3-氟苯基)乙-1-胺(4.76mL，36mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下完全蒸馏出反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺35-1。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3，LCMS(ESI)：m/z 382.35(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003371
在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-(3-氟苯乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺35-1(500mg，1.31mmol)的乙醇(5mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(39mg，1.31mmol)，随后在140下在微波中搅拌30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。粗化合物经由反相层析法用45％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4，LCMS(ESI)：m/z 394.1(M+H)。
Figure GDA0003169993220003372
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2(200mg，0.508mmol)的DMF(4mL)搅拌溶液中添加60％NaH(61mg，1.526mmol)且搅拌30分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-4(167mg，0.508mmol)的DMF(4mL)溶液且搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用80％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3及5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.11(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003381
将5-(苯甲氧基)-1-(7,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3、5-(苯甲氧基)-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-3a(110mg，0.174mmol)的甲醇(4mL)及乙酸乙酯(4mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A27。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.45(M+H)+。
实施例36：1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A28)
Figure GDA0003169993220003382
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮35-2(600mg，1.5mmol)的DMF(12mL)搅拌溶液中添加60％NaH(152mg，3.8mmol)且搅拌30分钟。随后在-20℃下添加4b,9a-二氯-2,3-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚INT-3(604mg，1.8mmol)的DMF(6mL)溶液，随后搅拌30分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用78％ACN/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1及5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1a。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 632.47(M+H)+。
Figure GDA0003169993220003391
将5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1、5-(苯甲氧基)-1-(6,7-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮36-1a(125mg，0.198mmol)的甲醇(3mL)及乙酸乙酯(3mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(15mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/DCM(20mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC方法纯化以获得1-(2,3-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-(3-氟苯乙基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A28。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 544.38(M+H)+。
实施例37：5-羟基-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A30)
Figure GDA0003169993220003401
向5-(苯甲氧基)-3-(环丙基甲基)-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮1-9(105mg，0.215mmol)的二甲基乙酰胺(DMA)(2mL)搅拌溶液中添加LiCl(181mg，4.312)且加热至45℃搅拌2天。反应混合物经由硅藻土过滤且用ACN(20mL)洗涤硅藻土板且在减压下浓缩。粗化合物经制备型HPLC纯化以获得5-羟基-1-(茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮A30。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2，LCMS(ESI)：m/z 398.34(M+H)+。
实施例38：1-(1-氯-2-氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A46)
Figure GDA0003169993220003411
在-20℃下向5-(苯甲氧基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(600mg，2.105mmol)的无水DMF(15mL)搅拌溶液中添加60％NaH(252mg，6.31mmol)且搅拌30分钟。随后，在-20℃下添加1,4b,9a-三氯-2-氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚1(892mg，2.73mmol)且搅拌溶液1小时。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗化合物经由反相层析法用90％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱纯化以获得5-(苯甲氧基)-1-(1-氯-2-氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2。
随后，将2(150mg，0.278mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用20％Pd(OH)2/碳(25mg)处理且在气囊氢气压力下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用10％甲醇/二氯甲烷(50mL)洗涤硅藻土床且在减压下浓缩。粗化合物经由制备型HPLC纯化以获得1-(1-氯-2-氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A46)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5，LCMS(ESI)：m/z 452.14(M+H)+。
化合物A43、A44、A45、A47、A49、A52、A55、A58、A59、A60、A61、A64、A65、A66、A67、A68、A69、A70、A71、A72、A73、A74、A75、A76、A77、A78、A79、A80、A81、A82、A83、A84、A85、A86、A88、A90、A91、A94、A95、A96、A97、A98、A102、A105、A108、A110、A111、A112、A114、A115、A117、A118、A121、A122、A129、A131、A137、A138、A139、A141及A142以与化合物A46相同的方式合成。
实施例39：1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A48)
Figure GDA0003169993220003421
在0℃下向9,10-二氢茚并[1,2-a]茚1(2.1g，10.29mmol)的丙酮、水(16:1.8)(10体积)搅拌溶液中添加NMMO(4.1mL，30.88mmol)及锇酸钾(378mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌溶液16小时。反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(1×150mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗茚并[1,2-a]茚-4b,9a(9H,10H)-二醇2。此产物不经任何纯化即用于下一步骤。
随后，在0℃下向茚并[1,2-a]茚-4b,9a(9H,10H)-二醇2(1.5g，6.78mmol)的THF(75mL)搅拌溶液中添加60％NaH(271mg，6.78mmol)，继而添加乙基碘化物(0.5mL，6.78mmol)，且在室温下搅拌溶液16小时。将反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(2×150mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得残余物。残余物经由反相层析法用50％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得化合物9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇3与4b-乙氧基-4b,10-二氢茚并[1,2-a]茚-9a(9H)-醇3A的混合物。此产物用于下一步骤。
在室温下向9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇(3)与4b-乙氧基-4b,10-二氢茚并[1,2-a]茚-9a(9H)-醇3A(380mg，1.27mmol)的混合物搅拌溶液中，添加溶解于乙酸乙酯(5mL)中的5-(苯甲氧基)-3-乙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(338mg，1.27mmol)，以及溶解在乙酸乙酯(6mL，19.06mmol)中的50％T3P。随后将溶液加热至110℃持续16小时。将反应混合物用冰冷水(40mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤、用硫酸钠干燥且在减压下浓缩以得到残余物，所述残余物通过制备型HPLC纯化以获得1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A48)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.1LCMS(ESI):m/z 458.26(M+H)+。
化合物A54、A56、A57、A62及A63以与化合物A48相同的方式合成。
实施例40：1-(9a-乙氧基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-乙基-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A50)
Figure GDA0003169993220003431
在密封管中向甲基-1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸酯的异丙基胺(12.5mL)搅拌溶液中添加DBU(0.3mL，1.82mmol)，随后在室温下搅拌16小时。在减压下蒸馏反应混合物，经反相层析法用32％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1。
随后，在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-异丙基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1(500mg，1.66mmol)的乙醇(10mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(49mg，1.66mmol)，且将溶液在140℃下用微波辐射处理30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。残余物经反相层析法用40％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-异丙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(2)。
随后，向5-(苯甲氧基)-3-异丙基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮2(300mg，0.958mmol)的搅拌溶液中添加，溶解于乙酸乙酯(5mL)中的9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-醇(271mg，1.149mmol)，且在室温下向此溶液添加溶解于乙酸乙酯(6mL，9.58mmol)中的50％T3P。随后将反应混合物加热至100℃持续16小时。将反应混合物用冰冷水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗产物5-(苯甲氧基)-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4。
随后，将粗5-(苯甲氧基)-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4(550mg，1.03mmol)的甲醇(10mL)及乙酸乙酯(10mL)搅拌溶液用20％Pd(OH)2/碳(100mg)处理且在气囊氢气氛围下搅拌2小时。反应混合物经由硅藻土过滤且用甲醇(30mL)洗涤，随后在减压下浓缩以获得残余物，所述残余物通过制备型HPLC纯化以获得5-羟基-3-异丙基-1-(9a-甲基-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A50)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.2LCMS(ESI):m/z 442.36(M+H)+。
化合物A51、A89、A116及A126以与化合物A50相同的方式合成。
实施例41：3-环丁基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A92)
Figure GDA0003169993220003451
向1-胺基-3-(苯甲氧基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酸甲酯(8g，29.19mmol)的环丁胺1(12.46mL，145.98mmol)搅拌溶液中添加DBU(1.26mL，5.83mmol)且在室温下搅拌反应混合物16小时。在减压下完全蒸馏反应混合物，且经由反相层析法用30％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化残余物以获得1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺2。
随后，在微波小瓶中，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-环丁基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺2(1g，3.19mmol)的乙醇(15mL)搅拌溶液中添加三聚甲醛(124mg，4.15mmol)，且在140℃下在微波条件下照射溶液30分钟。在起始物质耗尽后，在减压下浓缩反应混合物。所得残余物经由反相层析法用40％乙腈/0.1％甲酸/水中洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-环丁基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3。
随后，在室温下向5-(苯甲氧基)-3-环丁基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮3(500mg，1.53mmol)的DMSO(10mL)搅拌溶液中添加4b,9a-二氯-1,2-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(572mg，1.84mmol)及KOH(258mg，4.61mmol)，且搅拌此溶液16小时。用冰水(40mL)淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(2×40mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。将由此获得的残余物经由反相层析法用80％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得5-(苯甲氧基)-3-环丁基-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4。
随后，将5-(苯甲氧基)-3-环丁基-1-(1,2-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮4(300mg，0.53mmol)的甲醇(5mL)及乙酸乙酯(5mL)搅拌溶液用10％w/w的20％Pd(OH)2/碳(100mg)处理且在氢气囊气氛下搅拌1小时。反应混合物经由硅藻土过滤，用甲醇(20mL)洗涤，且将滤液在减压下浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得3-环丁基-1-(1,2-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A92)。TLC系统：10％DCM/甲醇；Rf：0.2LCMS(ESI):m/z 476.58(M+H)+。
化合物A93、A99、A100、A103、A104、A113、A122、A123、A124、A125、A128、A130、A132、A133及A140以与化合物A92相同的方式合成。
实施例42：2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)及2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A107)
Figure GDA0003169993220003471
在0℃下向(2-羟基乙基)胺基甲酸叔丁酯(5g，31.05mmol)于二氯甲烷(50mL)搅拌溶液中添加戴斯-马丁试剂(dess-martinperiodinane)(15.8g，37.26mmol)且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷(150mL)稀释且用20％次溶液(5×100mL)淬灭、经硫酸钠干燥且在减压下浓缩以获得粗(2-氧代乙基)胺基甲酸叔丁酯2。此残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。
随后，向1-胺基-3-(苯甲氧基)-N-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-甲酰胺1(1.5g，5.49mmol)的搅拌溶液中添加溶解于乙醇(15mL)中的(2-氧代乙基)胺基甲酸叔丁酯2(3.05g，19.22mmol)，且在密封管中将溶液加热至120℃持续16小时。来反应混合物减压蒸发以获得残余物，所述残余物通过反相层析法用30％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得纯化合物((5-(苯甲氧基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯3。
随后，在-20℃下向((5-(苯甲氧基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯3(500mg，1.20mmol)及4b,9a-二氯-1,8-二氟-4b,9,9a,10-四氢茚并[1,2-a]茚(449mg，1.44mmol)的无水DMF(10mL)搅拌溶液中添加60％NaH(145mg，3.62mmol)，且搅拌溶液2小时。反应混合物用冰冷水(40mL)淬灭且滤出固体并在真空下干燥以获得残余物。残余物经由反相层析法用70％乙腈/0.1％甲酸/水洗脱来纯化以获得((5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯4。
随后，在0℃下向((5-(苯甲氧基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-3-甲基-4,6-二氧代-2,3,4,6-四氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)胺基甲酸叔丁酯4(180mg，0.27mmol)的二氯甲烷(5mL)搅拌溶液中添加TMsOTf(0.38mL，1.65mmol)，且搅拌溶液1小时。将反应混合物用氨水溶液碱化且在减压下蒸发。由此获得的残余物经由制备型HPLC纯化以获得纯2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)。TLC系统：20％甲醇/DCMRf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 463.08(M+H)+。
随后，向2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A106)(65mg，0.14mmol)的甲醇(2mL)及乙酸乙酯(2mL)搅拌溶液中添加20％Pd(OH)2/碳(20mg)，且在氢气囊压力下搅拌混合物5小时。反应混合物经由硅藻土过滤，且硅藻土床用在减压下浓缩的10％甲醇/二氯甲烷(10mL)洗涤。由此获得的残余物经由制备型HPLC纯化以获得2-(胺甲基)-1-(1,8-二氟-9a,10-二氢茚并[1,2-a]茚-4b(9H)-基)-5-羟基-3-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,6-二酮(A107)。TLC系统：20％甲醇/DCM Rf：0.1，LCMS(ESI)：m/z 465.10(M+H)+。
本文所公开的其他化合物可通过与上文的一般方法及实施例类似的方法制备。
实施例43：关于所选化合物的资料
活体外抗病毒分析
抗流感病毒分析：通过XTT染料还原量测MDCK细胞(雌性可卡犬肾上皮细胞，ATCCCCL-34)中A型流感(病毒株A/PR/8/34，ATCC VR-95)或B型流感(细胞培养适应病毒株B/Lee/40，ATCC VR-1535)复制后病毒诱导的细胞病变效应(CPE)及细胞存活力的抑制效果(Appleyard等人《抗菌化学疗法(J Antimicrob Chemother.)》1(增刊4):49-53,1975及Shigeta等人《抗菌剂化学疗法(Antimicrob Agents Chemother)》41(7):1423-1427,1997.)。使用补充有10％加热灭活胎牛血清(FBS)、2mM L-谷酰胺酸、100U/mL青霉素、100μg/ml链霉素、1mM丙酮酸钠及0.1mM NEAA的杜尔贝科氏最低必需培养基(Dulbecco'sMinimum Essential Medium，DMEM)，以每孔体积100μL使MDCK细胞(每孔1×104个细胞)在96孔平底组织培养盘中生长成单层。在测定当天，细胞单层用DPBS洗涤三次。从ATCC获得病毒在MDCK细胞中生长以产生病毒原液池。以所需起始浓度的两倍将测试化合物稀释到分析培养基中(DMEM、2mML-谷酰胺酸、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、50ng/ml TPCK处理的胰蛋白酶、0.1mM NEAA及1mM丙酮酸钠)，且连续稀释。以100μL/孔的体积一式三份地添加测试化合物以用于测定功效，一式两份地添加以用于测定细胞毒性，且以单一孔/浓度添加以用于在即将添加经稀释的病毒前进行比色评估。以利巴韦林及奥司他韦甲酸酯作为对照化合物同时进行评估。从冰箱(-80℃)取出病毒的预滴定等分供试样品，且在生物安全柜中快速解冻。病毒在分析培养基中稀释，使得以体积100μL添加至各孔的病毒量为经测定在感染后4天得到85％至95％细胞杀灭率的量。在37℃下在4小时培育后通过甲
Figure GDA0003169993220003492
染料XTT的还原来量测且在450nm下(参考波长为650nm)使用Softmax Pro 4.6软件以分光光度法量测仅含有培养基的细胞对照、含有培养基及病毒的病毒感染对照、含有培养基及以下各项的细胞毒性对照：在37℃下培育，5％CO2孵育四天，CPE的抑制(增加细胞存活率)。使用微软
Figure GDA0003169993220003491
XLfit4通过四参数曲线拟合分析来计算病毒感染孔的CPE还原百分比及未感染药物对照孔的细胞存活率百分比。
(表B中报告针对A型流感(H1N1)的效力且表C中报告针对B型流感(Lee/B40)的效力，如下：+++++；EC50，<0.125μM；++++；EC50，0.125-0.250μM；+++：EC50，0.250-0.375μM；++：EC50，0.375-0.5μM；及+：EC50，>0.5μM
表B-A型流感(H1N1)
Figure GDA0003169993220003501
Figure GDA0003169993220003511
Figure GDA0003169993220003521
Figure GDA0003169993220003531
Figure GDA0003169993220003541
表C-流感B
Figure GDA0003169993220003542
Figure GDA0003169993220003551
Figure GDA0003169993220003561
Figure GDA0003169993220003571
Figure GDA0003169993220003581

Claims (24)

1.一种具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003040544310000011
其中
环A为
Figure FDA0003040544310000012
M为N或CH；
X及X'中的每一个独立地为CH2、CH2CH2、OCH2或CH2O；
R1及R2中的每一个独立地为H、卤素、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷氧基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-OC(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R3及R5与其所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，且可任选地经1至3个取代基A取代；
当存在时，R4为H、OH、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基；R5及R6各自独立地为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基羰基、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基-O-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-C(O)-、任选被1至3个取代基A取代的C3-8碳环基-OC(O)-、任选被取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-OC(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
R5及R6与其所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S的环杂原子的3至7元杂环基，且任选地经1至3个取代基A取代；
任选地R1、R2、R3、R5及R6中的一个可为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1，
其中：
各RN及Rx1独立地为氢、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，或
连接至同一氮原子的两个RN可与它们所连接的所述氮原子一起形成具有0至2个选自N、O及S的其他环杂原子的3至8元杂环基；各Rx2独立地为任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6烯基、任选被1至3个取代基A取代的C2-6炔基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基或任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基，且所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子，并且Z为键或C1-6亚烷基；
取代基A为卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、氧代、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷基-OH、C3-10碳环基、3至7元杂环基、C6-10芳基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基、C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、C3-10碳环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基、3至7元杂环基-O-C1-6亚烷基、3至7元杂环基-C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6亚烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)O-、NHC1-6烷基、C1-6烷基-C(O)NH-、C1-6卤代烷基-C(O)NH、C1-6烷基-NHC(O)-、C1-6烷基-SO2-、C1-6烷基-SO-及C1-6烷基SO2NH-；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个独立地为H、卤素、CN、OH、CO2H、CHO、NH2、NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基或C1-6烷基-OH。
2.权利要求1所述的化合物或盐，其中M为N。
3.权利要求1所述的化合物或盐，其具有式(IIA)或(IIB)的结构：
Figure FDA0003040544310000041
4.权利要求1至3中任意一项所述的化合物或盐，其中R1及R2中的至少一个为H。
5.权利要求1至4中任意一项所述的化合物或盐，其中R4为(i)H，或(ii)OH或OMe。
6.权利要求1至5中任意一项所述的化合物或盐，其中R5及R6中的至少一个为H。
7.权利要求1至5中任意一项所述的化合物或盐，其中R5及R6与它们所连接的原子一起形成C3-7碳环基或具有1至3个选自N、O及S环杂原子的3至7元杂环基，且任选地经1至3个取代基A取代。
8.权利要求1至6中任意一项所述的化合物或盐，其中R3及R5与它们所连接的原子一起形成具有总共1至4个选自N、O及S的环杂原子的5至7元杂环基，并且可任选地经1至3个取代基A取代。
9.权利要求1至8中任意一项所述的化合物或盐，其中R3为C1-6烷基、C3-6碳环基-C1-6亚烷基、C3-6碳环基-O-C1-6亚烷基或3至7元杂环基-C1-6亚烷基。
10.权利要求1至7中任意一项所述的化合物或盐，其中R3为
-Z-N(RN)(RN)、
-Z-N(RN)-SO2--Rx2、
-Z-C(O)-N(RN)-SO2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)-Rx1、
-Z-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-S(O)0-2-Rx2、
-Z-N(RN)-C(O)O-Rx1、
-Z-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)、
-Z-C(O)-N(RN)-C(O)-N(RN)(RN)，或
-Z-N(RN)-C(O)-C(O)-Rx1。
11.权利要求1至10中任意一项所述的化合物或盐，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
12.权利要求1至11中任意一项所述的化合物或盐，其中Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为卤素。
13.权利要求12所述的化合物或盐，其中卤素为F。
14.权利要求1所述的化合物或盐，其中
环A为
Figure FDA0003040544310000051
R1、R2、R4、R5及R6中的每一个为H；
M是N；
X及X'中的每一个为CH2；
R3为H、OH、CO2H、CN、CHO、任选被1至3个取代基A取代的C1-6烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的C3-10碳环基-O-C1-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C0-6亚烷基、任选被1至3个取代基A取代的3至7元杂环基-C(O)-，其中所述杂环基包括1至4个独立地选自N、O及S的环杂原子；
取代基A为卤素；并且
Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的每一个为H或卤基，条件是Q1、Q2、Q3、Q4、Q5及Q6中的至少两者为H。
15.权利要求1所述的化合物或盐，其具有以下结构：
Figure FDA0003040544310000061
Figure FDA0003040544310000071
Figure FDA0003040544310000081
Figure FDA0003040544310000091
16.药物制剂，其包含权利要求1-15中任一项所述的化合物或盐，以及药学上可接受的赋形剂。
17.抑制A型或B型流感病毒中流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括使所述病毒与权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐接触。
18.用于治疗或预防宿主中A型流感或B型流感感染的方法，其包括向所述宿主施用治疗量的权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐。
19.用于降低宿主中A型或B型流感病毒的流感聚合酶PA的核酸内切酶活性的方法，其包括向所述宿主施用治疗量的权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐。
20.用于减少宿主中流感病毒复制的方法，其包括向所述宿主施用治疗量的权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐。
21.权利要求17至20中任一项所述的方法，其进一步包括使所述流感病毒与治疗有效量的第二抗病毒剂接触，或向所述宿主施用治疗有效量的第二抗病毒剂。
22.权利要求21所述的方法，其中所述第二抗病毒剂为吡嗪甲酰胺抗病毒化合物、流感神经胺糖酸苷酶抑制剂、流感PB1聚合酶域抑制剂或流感CAP结合PB2域抑制剂。
23.权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐的用途，其用于治疗A型流感或B型流感病毒感染。
24.权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐的用途，其用于制造用以治疗A型流感或B型流感病毒感染的药物。
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