CN113281500A - 一种用于单分子检测的磁珠及其制备方法 - Google Patents

一种用于单分子检测的磁珠及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于单分子检测的磁珠及其制备方法，所述用于单分子检测的磁珠由磁性氨基取代的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚组装而成；本发明首先通过对磁珠表面改性，将氨基引入磁性微珠表面，进而得到具有功能化的磁珠，然后跟吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚反应，得到表面包裹超支化聚缩水甘油醚和吡啶汞配合物改性的羧基磁性微珠，该羧基磁性微珠上的活性基团跟捕获抗体上的氨基反应，同时，吡啶汞配合物的汞金属可以与捕获抗体上的二硫键配位，使捕获抗体与固相载体紧密结合，提高检测的准确性。

Description

一种用于单分子检测的磁珠及其制备方法
技术领域
本发明属于功能材料领域，尤其涉及一种用于单分子检测的磁珠及其制备 方法。
背景技术
单分子检测技术是目前最灵敏的检测手段之一，可实现在分子水平上检测， 其中单分子荧光检测技术发展尤为迅速，广泛应用于生物化学各个领域。单分 子检测具有检测灵敏度高、样品消耗少、操作简单、能在复杂的生物样品环境 中对待测样品进行检测等优点，广泛应用于生物大分子的超灵敏检测。
免疫磁珠是由作为载体的磁性微球和免疫配基结合而成的纳米级材料；以 抗体包被的磁珠为载体，用过抗体与反应介质中特异性抗原结合，形成抗原-抗 体-磁珠复合物，这种复合物在磁场作用下，迅速向磁场移动，使复合物与其他 物质分离，达到分离特异性抗原的目的，磁性微球载体具有超顺磁性特点，可 使免疫磁珠置于磁场时，显示其磁性，从磁场移出时，磁性消除，免疫磁珠重 新分散。
纳米Fe3O4由于制备简单、稳定性高、较强的超顺磁性、生物相容性和表面 易于修饰等特点，成为目前应用最广泛的磁珠材料之一；但Fe3O4磁性粒子化学 稳定性不高，极易被氧化，且表面的活性基团较少，具有强烈的聚集倾向，使 得作为载体的磁性微球与抗体结合不紧密，限制展开应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用 于单分子检测的磁珠；本发明所提供的用于单分子检测的磁珠由磁性氨基取代 的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支 化聚缩水甘油醚组装而成。
本发明首先通过对磁珠表面改性，将氨基引入磁性微珠表面，进而得到具 有功能化的磁珠，然后跟吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰 的超支化聚缩水甘油醚反应，得到表面包裹超支化聚缩水甘油醚和吡啶汞配合 物改性的羧基磁性微珠，该羧基磁性微珠上的活性基团跟捕获抗体上的氨基反 应，同时，吡啶汞配合物的汞金属可以与捕获抗体上的二硫键配位，使捕获抗 体与固相载体紧密结合，提高检测的准确性。
进一步的，所述磁性氨基取代的聚苯乙烯微球与吡啶化合物、无水醋酸汞、 琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚的质量比为1:0.2～0.5:0.2～0.5:1 ～3。
进一步的，所述吡啶化合物为4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶、[2,2':6',2”- 三联吡啶]-4,4',4”-三甲酸、2,2':6',2"-三联吡啶-4-甲酸、[2,2':6',2”-三联吡啶]-3',4'- 二羧酸中的一种。
本发明另一目的在于提供一种用于单分子检测的磁珠的制备方法，步骤如 下：
将磁性氨基取代的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、三乙胺和琥 珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚混合，加热反应，水解，得用于 单分子检测的磁珠。
进一步的，反应是在惰性气体氛围下进行，所述惰性气体为氮气、氩气中 的一种或两者的混合气体；非惰性气体氛围下，反应得到的吡啶汞配合物不稳 定，容易发生解配，失去活性。
进一步的，加入磷酸盐缓冲溶液进行水解。
进一步的，所述磁性氨基取代的聚苯乙烯微球的制备方法，具体步骤如下：
将氨基聚苯乙烯粒子、高分子表面活性剂、硫酸亚铁七水合物和三氯化铁 六水合物混合，室温搅拌，加入碱性水溶液，得磁性氨基取代的聚苯乙烯微球。
进一步的，所述琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚的制备方 法，具体步骤如下：
将超支化聚缩水甘油醚和琥珀酰亚胺基碳酸酯于常温下进行反应，得琥珀 酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚。
进一步的，所述高分子表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、环氧 乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物、氧化乙烯与硅氧烷共聚物中的一种。
进一步的，所述碱性水溶液为氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠 水溶液、碳酸钾水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸氢钾的一种。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明所提供的用于单分子检测的磁珠由磁性氨基取代的聚苯乙烯 微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘 油醚组装而成，磁性氨基取代的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞和琥 珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚之间相互作用，磁珠内各物质之 间的结合力强。
(2)通过对磁珠表面改性，将氨基引入磁性微珠表面，进而得到具有功能 化的磁珠，然后跟吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支 化聚缩水甘油醚反应，得到表面包裹超支化聚缩水甘油醚和吡啶汞配合物改性 的羧基磁性微珠，该羧基磁性微珠上的活性基团跟捕获抗体上的氨基反应，同 时，吡啶汞配合物的汞金属可以与捕获抗体上的二硫键配位，使捕获抗体与固 相载体紧密结合，提高检测的准确性。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发 明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是 本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域 普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当 属于本发明保护的范围。
实施例1
N2保护下，称取3mol硼砂、3.5mol硫酸铵、500mL超纯水加入1000mL支 口烧瓶中，不断搅拌下，加入0.5mol苯乙烯，80℃下反应12小时，制备得到聚 苯乙烯粒子悬浮液。
将100mL氨基苯乙烯加入到4L的质量分数为0.6％硫酸化蓖麻油水溶液进 行乳化，然后加入到分散于400mL 0.6％硫酸化蓖麻油水溶液中的质量分数为 10％的聚苯乙烯粒子悬浮液，不断搅拌18小时，加入4.0g过氧化苯甲酰、30g 数均分子量为5000的聚乙烯吡咯烷酮和2L的水，不断搅拌4小时后，氮气保 护下，80℃反应20小时，制备得氨基取代的聚苯乙烯微球。
实施例2
将上述制备得到的5g氨基聚苯乙烯粒子分散至200mL水和100mL乙醇中， 加入0.5g数均分子量为5000的聚环氧乙烷、4.5g硫酸亚铁七水合物和8g三氯 化铁六水合物，室温搅拌1小时，加入80mL 2M氢氧化钾水溶液，然后升温至 85℃继续搅拌2小时，反应结束后反应液抽滤并用水洗涤至中性，得磁性氨基 取代的聚苯乙烯微球。
实施例3
将超支化聚缩水甘油醚溶解于二甲基甲酰胺中，配制成10mg/mL的溶液， 取1mL，加入20mg琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)于常温下进行反应，得DSC修 饰的超支化聚缩水甘油醚(DSC-HPG)。
实施例4
在氮气氛围下，将10mg上述制备得到的磁性氨基聚苯乙烯微球分散于 100mL二氯甲烷中，加入7mmol 4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶、少量三乙 胺，置于常温常压下密闭搅拌反应24小时后，加入50mL的无水乙腈和7mmol 的无水醋酸汞，加热回流2天后，滴加1mL10mg/mL的溶于二甲基甲酰胺的 DSC-HPG溶液，于摇床中反应30min。反应结束后，向反应体系中加入2mL 50mM PBS溶液继续反应30min，将多余的NHS酯水解后，使用50mM磷酸盐 缓冲溶液(PBS溶液)(pH＝7.5)清洗三次，清洗过程中使用磁性分离架分离磁性 微球，清洗结束后，使用2mL 50mM PBS溶液(pH＝7.5)重悬，得用于单分子检 测的磁珠。
实施例5
将实施例4的4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶替换成[2,2':6',2”-三联吡 啶]-4,4',4”-三甲酸，其余与实施例3相同，得用于单分子检测的磁珠。
实施例6
将实施例4的4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶替换成2,2':6',2"-三联吡啶 -4-甲酸，其余与实施例3相同，得用于单分子检测的磁珠。
实施例7
将实施例4的4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶替换成[2,2':6',2”-三联吡 啶]-3',4'-二羧酸，其余与实施例3相同，得用于单分子检测的磁珠。
对比例1：
滴加500μL的DSC-HPG溶液，于摇床中反应30min。反应结束后，向反应 体系中加入1mL 50mM PBS溶液继续反应30min，将多余的NHS酯水解后，使 用50mM PBS溶液(pH＝7.5)清洗三次，清洗过程中使用磁性分离架分离磁性微 球，清洗结束后，使用1mL 50mM PBS溶液(pH＝7.5)重悬，得高分子改性的磁 珠。
对比例2：
在氮气氛围下，将10g上述制备得到的磁性氨基聚苯乙烯微球分散于100mL 二氯甲烷中，加入0.7mmol 4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶、少量三乙胺，置 于常温常压下密闭搅拌反应24小时后，加入50mL的无水乙腈和0.7mmol的无 水醋酸汞，加热回流2天后，使用50mM PBS溶液(pH＝7.5)清洗三次，清洗过程 中使用磁性分离架分离磁性微球，清洗结束后，使用2mL 50mM PBS溶液(pH＝7.5) 重悬，得吡啶汞配合物改性的磁珠。
检测荧光强度：
对实施例4～7和对比例1～2制备得到的1g磁珠加入100g 1-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，混合均匀后震荡反应30分钟，使用1000μL 50mM PBS溶液(pH＝7.5)对磁珠进行离心清洗；将用200mM碳酸氢钠缓冲液(pH ＝8.0)稀释人乙型肝炎E抗体到1mg/mL后，加入到磁球溶液中，置于300rpm 37℃摇床上反应4h，反应结束后使用500μL50mM PBS溶液(pH＝7.5)清洗悬浮 磁球，清洗三次，制得磁球-人乙型肝炎E抗体复合物。
用HRP标记各磁球-人乙型肝炎E抗体复合物，然后在1g HRP标记各磁球 -人乙型肝炎E抗体复合物中分别加入1g乙型肝炎E抗原(HBeAg)，形成抗 体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
用吖啶酯标记各磁球-人乙型肝炎E抗体复合物，并加入含有0.5％过氧化 氢溶液的0.2M的硝酸溶液和含有1％Tween-20的0.5M氢氧化钠溶液的激发 物，用荧光测试仪测定浓度为50ng/mL的乙型肝炎E抗原的荧光强度。
25℃下，将1g各磁球-人乙型肝炎E抗体复合物加入三氟乙酸40ml (TFA:H2O＝1:2)中，室温搅拌10分钟，使用磁性分离架分离各磁球-人乙型肝炎 E抗体复合物，收集磁性固体，并用HRP标记，再分别加入1g乙型肝炎E抗原 (HBeAg)，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
25℃下，将1g各磁球-人乙型肝炎E抗体复合物加入三氟乙酸40ml (TFA:H2O＝1:2)中，室温搅拌10分钟，使用磁性分离架分离各磁球-人乙型肝炎 E抗体复合物，收集磁性固体，并用吖啶酯标记，再分别加入1g乙型肝炎E抗 原(HBeAg)，并加入含有0.5％过氧化氢溶液的0.2M的硝酸溶液和含有1％ Tween-20的0.5M氢氧化钠溶液的激发物，用荧光测试仪测定浓度为50ng/mL 的乙型肝炎E抗原的荧光强度。
表1.各实施例和对比例制得的磁球-人乙型肝炎E抗体复合物处理前后与抗 原结合的显色结果和荧光强度值。
Figure BDA0003078089860000071
Figure BDA0003078089860000081
从表1中可以发现实施例4～7制得的磁球-人乙型肝炎E抗体复合物没有经 过三氟乙酸处理，与乙型肝炎E抗原结合后显示深黄色，且实施例4～7制得的 磁球-人乙型肝炎E抗体复合物没有经过三氟乙酸处理，与乙型肝炎E抗原结合 后，颜色差别不大，而对比例1～2制得的磁球-人乙型肝炎E抗体复合物没有经 过三氟乙酸处理，与乙型肝炎E抗原结合后显示淡黄色，说明实施例4～7制得 的磁球比对比例1～2制得的磁珠结合更多的人乙型肝炎E抗体。
实施例4～7制得的磁球-人乙型肝炎E抗体复合物经过三氟乙酸处理前后相 比于对比例1～2，荧光强度变化小，说明实施例4～7制得的磁球与抗体结合的更 牢固。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限 制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人 员应当理解，技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式 进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求 保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于单分子检测的磁珠，其特征在于，所述用于单分子检测的磁珠由磁性氨基取代的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚组装而成。
2.根据权利要求1所述的用于单分子检测的磁珠，其特征在于，所述磁性氨基取代的聚苯乙烯微球与吡啶化合物、无水醋酸汞、琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚的质量比为1:0.2～0.5:0.2～0.5:1～3。
3.根据权利要求1所述的用于单分子检测的磁珠，其特征在于，所述吡啶化合物为4'-(4-羧基苯基)-2,2':6',2”-三联吡啶、[2,2':6',2”-三联吡啶]-4,4',4”-三甲酸、2,2':6',2"-三联吡啶-4-甲酸、[2,2':6',2”-三联吡啶]-3',4'-二羧酸中的一种。
4.一种用于单分子检测的磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将磁性氨基取代的聚苯乙烯微球、吡啶化合物、无水醋酸汞、三乙胺和琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚混合，加热反应，水解，得用于单分子检测的磁珠。
5.根据权利要求4所述的用于单分子检测的磁珠的制备方法，其特征在于，反应是在惰性气体氛围下进行，所述惰性气体为氮气、氩气中的一种或两者的混合气体。
6.根据权利要求4所述的用于单分子检测的磁珠的制备方法，其特征在于，加入磷酸盐缓冲溶液进行水解。
7.根据权利要求4所述的用于单分子检测的磁珠制备方法，其特征在于，所述磁性氨基取代的聚苯乙烯微球的制备方法包括如下步骤：
将氨基聚苯乙烯粒子、高分子表面活性剂、硫酸亚铁七水合物和三氯化铁六水合物混合，室温搅拌，加入碱性水溶液，得磁性氨基取代的聚苯乙烯微球。
8.根据权利要求4所述的用于单分子检测的磁珠制备方法，其特征在于，所述琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚的制备方法包括如下步骤：
将超支化聚缩水甘油醚和琥珀酰亚胺基碳酸酯于常温下进行反应，得琥珀酰亚胺基碳酸酯修饰的超支化聚缩水甘油醚。
9.根据权利要求7所述的用于单分子检测的磁珠制备方法，其特征在于，所述高分子表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、环氧乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物、氧化乙烯与硅氧烷共聚物中的一种。
10.根据权利要求7所述的用于单分子检测的磁珠制备方法，其特征在于，所述碱性水溶液为氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸钾水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸氢钾的一种。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4259223A (en) * 1976-03-29 1981-03-31 California Institute Of Technology Cross-linked polyvinyl pyridine coated glass particle catalyst support and aqueous composition or polyvinyl pyridine adducted microspheres
US4795698A (en) * 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5155166A (en) * 1990-06-18 1992-10-13 Eastman Kodak Company Use of 1-(1-pyrrolidinylcarbonyl)pyridinium salts to attach compounds to carboxylated particles and a kit containing same
WO2006069676A1 (de) * 2004-12-23 2006-07-06 Schering Ag Hydroxypyridinon-derivate, deren metallkomplexe und deren verwendung zur herstellung von konjugaten mit biomolekülen
WO2006069678A1 (de) * 2004-12-23 2006-07-06 Schering Ag Konjugate von hydroxypyridinonderivat-metallkomplexen mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für die nmr-diagnostik
TW200745554A (en) * 2006-06-06 2007-12-16 Chin-Yih Hong Diagnostic methods using magnetic nanoparticles
CN104316679A (zh) * 2014-10-29 2015-01-28 南京基蛋生物科技有限公司 超支化聚缩水甘油醚修饰纳米磁性微球在化学发光免疫分析中的应用
CN105467112A (zh) * 2015-11-27 2016-04-06 温州生物材料与工程研究所 一种应用于免疫检测的免疫磁珠及其制备方法
CN107490681A (zh) * 2017-09-29 2017-12-19 安徽安龙基因科技有限公司 一种EpCAM抗体免疫磁珠的制备方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4259223A (en) * 1976-03-29 1981-03-31 California Institute Of Technology Cross-linked polyvinyl pyridine coated glass particle catalyst support and aqueous composition or polyvinyl pyridine adducted microspheres
US4795698A (en) * 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5155166A (en) * 1990-06-18 1992-10-13 Eastman Kodak Company Use of 1-(1-pyrrolidinylcarbonyl)pyridinium salts to attach compounds to carboxylated particles and a kit containing same
WO2006069676A1 (de) * 2004-12-23 2006-07-06 Schering Ag Hydroxypyridinon-derivate, deren metallkomplexe und deren verwendung zur herstellung von konjugaten mit biomolekülen
WO2006069678A1 (de) * 2004-12-23 2006-07-06 Schering Ag Konjugate von hydroxypyridinonderivat-metallkomplexen mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für die nmr-diagnostik
TW200745554A (en) * 2006-06-06 2007-12-16 Chin-Yih Hong Diagnostic methods using magnetic nanoparticles
CN104316679A (zh) * 2014-10-29 2015-01-28 南京基蛋生物科技有限公司 超支化聚缩水甘油醚修饰纳米磁性微球在化学发光免疫分析中的应用
CN105467112A (zh) * 2015-11-27 2016-04-06 温州生物材料与工程研究所 一种应用于免疫检测的免疫磁珠及其制备方法
CN107490681A (zh) * 2017-09-29 2017-12-19 安徽安龙基因科技有限公司 一种EpCAM抗体免疫磁珠的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TAHER ALIZADEH ET AL: "Application of an Hg2+ selective imprinted polymer as a new modifying agent for the preparation of a novel highly selective and sensitive electrochemical sensor for the determination of ultratrace mercury ions", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 *
张有娟等: "4, 4′-联吡啶桥联汞配位聚合物[Hg(C10H8N2)I2]n合成和结构", 《安阳师范学院学报》 *

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