CN110756181A - 一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
Description
技术领域
本发明属于无机材料和分析技术领域,涉及一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂。
本发明还涉及一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法。
背景技术
蛋白质是生命活动的物质基础,其分离分析对认识生命科学现象具有重要作用,然而,无论是从人体还是从基因工程来源的蛋白质,不仅样品组成极其复杂,而且含量变化范围很大,如何从高度复杂的样品中选择性分离和富集低丰度蛋白质是生命科学和基因工程领域长期面临的问题,也是分离科学领域亟待解决的关键问题。迄今,已经发展了多种生物大分子的分离富集方法,离子交换法是生物大分子最常用的分离纯化手段之一,根据吸附剂表面离子交换基团的带电性质,可分为阳离子交换和阴离子交换;根据官能团的解离能力,又可分为强阳/阴离子交换和弱阳/阴离子交换。蛋白质在离子交换吸附剂上的保留与吸附剂表面电荷的性质和数量密切相关。理论上,吸附剂表面的电荷数量越多,即离子交换容量越大,分离纯化的产率越高。
目前,吸附剂的制备大多是将小分子功能团直接键合在基质表面,该方法键合的配基密度小,造成离子交换容量低。随着生物工程和生物制药的快速发展,已经难以满足复杂生物样品的分离纯化要求。因此,制备新型高容量离子交换吸附剂具有重要意义。研究表明,向材料表面引入聚合物大分子是提高吸附容量的有效手段。表面引发-原子转移自由基聚合、可逆加成-断裂链转移聚合、原位自由基聚合等是向材料表面引入聚合物的常用方法,通常,聚合物的分子量与聚合时间、单体浓度和引发剂的密度密切相关,目前,聚合时间和单体浓度对聚合物分子量的影响已经被广泛研究,而对引发剂密度的研究较少,通常,由于基质材料表面的活性位点较少,导致引发剂的密度较低,从而限制了聚合物链密度的提高。因此,提高引发剂的密度对于提高材料表面聚合物链的密度,同时进一步提高吸附剂的吸附容量具有重要的应用价值。
聚乙烯亚胺是一种阳离子聚合物,其价格低廉,分子骨架和支链上都含有大量的氨基便于进一步后修饰,因此,本发明以聚乙烯亚胺为引发剂放大载体,首先将其修饰在Fe3O4磁性纳米粒子表面,然后通过聚乙烯亚胺丰富的氨基与丙烯酰氯反应引入引发剂,最后以丙烯酸为单体、偶氮二异丁腈为催化剂进行自由基聚合反应,从而在Fe3O4磁性纳米粒子表面修饰高密度的羧基聚合物刷,制得高容量阳离子交换磁性纳米吸附剂,并将其应用于蛋白质的分离纯化。该吸附剂在基因工程制药、化工和生物工程领域内具有广泛的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂,一种吸附容量高的、以聚丙烯酸为离子交换基团的阳离子交换磁性纳米吸附剂。
本发明的另一目的是提供一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法。
本发明的第一个技术方案是一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂,具有下式的结构:
本发明的第二个技术方案是一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,具体按以下步骤实施:
步骤1,首先采用溶剂热法合成聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子;
步骤2,将经步骤1合成的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子用丙烯酰氯进行修饰;
步骤3,将步骤2合成的含有丙烯基Fe3O4磁性纳米粒子用聚丙烯酸进行修饰,得到表面修饰聚丙烯酸的磁性纳米吸附剂。
本发明的第二个技术方案的特点还在于:
其中步骤1具体步骤如下:
步骤1.1,称取FeCl3.6H2O置于烧杯中,加入乙二醇对FeCl3.6H2O进行溶解,溶解后加入聚乙烯亚胺搅拌均匀,然后加入无水乙酸钠,加热烧杯至FeCl3.6H2O完全溶解,最后,将溶解好的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜进行干燥;
步骤1.2,将经步骤1.1处理后的溶液自然冷却至室温进行固液分离,将分离出的固体磁性材料用去离子水和乙醇交替清洗3次,然后将固体磁性材料于空干燥箱中干燥,得到聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子;
其中步骤1.1中,FeCl3.6H2O与乙二醇、聚乙烯亚胺的固液比分别为1:24和5:4,FeCl3.6H2O与无水乙酸钠的质量比为5:8,乙二醇为分析纯,聚乙烯亚胺的分子量为1800;
其中步骤1.1中加热烧杯采用30℃水浴加热至FeCl3.6H2O完全溶解,最后,将溶解好的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜,置于鼓风干燥箱中200℃反应8h;
其中步骤2具体步骤如下:
步骤2.1,将经步骤1得到的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子放入干燥的烧瓶中,加入乙腈溶液,然后进行超声分散;
步骤2.2,经步骤2.1处理后,搅拌烧瓶中的溶液,搅拌的同时滴加丙烯酰氯溶液,室温下搅拌12h,得到含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子;
其中步骤2.1中Fe3O4与乙腈溶液的固液比是1:100,乙腈为色谱纯;所述步骤2.2中,Fe3O4与丙烯酰氯溶液的固液比为4:25;
其中步骤3具体步骤如下:
在烧瓶中加入丙烯酸水溶液,将经步骤2.2得到的含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子分散至烧瓶中,然后将烧瓶抽真空并充入氮气,然后在氮气的保护下加入偶氮二异丁腈/乙腈溶液,封闭烧瓶振荡反应,得到表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂;
其中步骤3中Fe3O4与丙烯酸水溶液的固液比是100:1,丙烯酸水溶液的浓度范围10mg/mL,Fe3O4与偶氮二异丁腈/乙腈溶液的固液比为4:5,偶氮二异丁腈/乙腈溶液的浓度为10mg/mL;
其中步骤3中将烧瓶在50℃的环境,150r/min的振荡频率下反应10h。
本发明的有益效果是:
本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法简单有效,制得的磁性吸附剂比表面积大、磁场感应性好;作为阳离子交换吸附剂,对碱性蛋白质具有较高的吸附容量和选择性,可用于实际样品中碱性蛋白质的分离富集,在生物大分子的分离纯化领域具有良好的实用价值和应用前景。
附图说明
图1为本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法示意图;
图2为本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法中表面修饰聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒子(A)和表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米粒子(B)的透射电镜图;
图3为本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法中表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对不同蛋白质的等温吸附线;
图4为本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法中表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对标准蛋白质混合溶液的分离效果图;
图5为本发明的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法中表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对鸡蛋清稀释液的分离效果图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明提供了一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂,具有下式的结构:
本发明还提供了一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,如图1所示,具体按以下步骤实施:
步骤1,首先采用溶剂热法合成聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子,具体包括以下步骤:
步骤1.1,称取FeCl3.6H2O置于烧杯中,加入乙二醇对FeCl3.6H2O进行溶解,FeCl3.6H2O与乙二醇的固液比分别为1:24,乙二醇为分析纯,溶解后加入分子量为1800的聚乙烯亚胺搅拌均匀,FeCl3.6H2O聚乙烯亚胺的固液比为5:4,然后加入无水乙酸钠,FeCl3.6H2O与无水乙酸钠的质量比为5:8,30℃水浴加热烧杯至FeCl3.6H2O完全溶解,最后,将溶解好的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜,置于鼓风干燥箱中200℃反应8h;
步骤1.2,将经步骤1.1处理后的溶液自然冷却至室温进行固液分离,将分离出的固体磁性材料用去离子水和乙醇交替清洗3次,然后将固体磁性材料于空干燥箱中干燥,得到聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子。
步骤2,将经步骤1合成的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子用丙烯酰氯进行修饰,具体包括以下步骤:
步骤2.1,将经步骤1得到的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子放入干燥的烧瓶中,加入色谱纯乙腈溶液,Fe3O4与乙腈溶液的固液比是1:100,然后进行超声分散;
步骤2.2,经步骤2.1处理后,搅拌烧瓶中的溶液,搅拌的同时滴加丙烯酰氯溶液,Fe3O4与丙烯酰氯溶液的固液比为4:25,室温下搅拌12h,得到含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子。
步骤3,将步骤2合成的含有丙烯基Fe3O4磁性纳米粒子用聚丙烯酸进行修饰,得到表面修饰聚丙烯酸的磁性纳米吸附剂,具体步骤如下:
在烧瓶中加入浓度10mg/mL的丙烯酸水溶液,将经步骤2.2得到的含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子分散至烧瓶中,Fe3O4与丙烯酸水溶液的固液比是1:100,然后将烧瓶抽真空并充入氮气,然后在氮气的保护下加入浓度为10mg/mL偶氮二异丁腈/乙腈溶液,Fe3O4与偶氮二异丁腈/乙腈溶液的固液比为4:5,封闭烧瓶,将烧瓶在50℃的环境,150r/min的振荡频率下反应10h,得到表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂。
如图2所示为表面修饰聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒子(A)和表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米粒子(B)的透射电镜图:图中显示它们具有良好的均一性和分散性,粒径分别约为250nm和260nm,且修饰聚丙烯酸后可观察到聚合物涂层。
实施例
一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,具体按以下步骤实施:
步骤1,采用溶剂热法合成聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子:称取2.5gFeCl3.6H2O于烧杯中,加入60mL乙二醇使其充分溶解,再加入2mL的聚乙烯亚胺(分子量为1800),搅拌均匀,然后加入4.0g无水乙酸钠,30℃水浴加热并磁力搅拌30min使其充分溶解,最后,将搅拌好的溶液转移到容积为100mL的聚四氟乙烯反应釜,置于鼓风干燥箱中200℃反应8h,自然冷却至室温后将产物倒入烧杯中并用磁铁进行液固分离,倾去上层溶剂,收集下层的磁性材料并用去离子水和乙醇交替清洗3次,之后将得到的磁性材料于空干燥箱中50℃干燥6h,即得到聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子;
步骤2,将由步骤1合成的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子用丙烯酰氯修饰:取干燥的两颈瓶,加入80mL乙腈、0.8g聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子,超声分散,然后在室温下边搅拌边滴加5mL丙烯酰氯(2min滴完),室温下搅拌反应12h,即可得到含有丙烯基Fe3O4磁性纳米粒子,之后用乙腈清洗产物4次后备用;
步骤3,将由步骤2合成的含有丙烯基Fe3O4磁性纳米粒子上修饰聚丙烯酸:向两颈烧瓶中加入80mL、10mg/mL的丙烯酸水溶液,并将上述步骤2的产物分散于其中,然后将体系抽真空并充入氮气,并氮气保护下迅速加入1mL、10mg/mL的偶氮二异丁腈/乙腈溶液,封闭反应瓶,在50℃的环境、150r/min的振荡频率下反应10h后停止反应,即可得到表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂,用去离子水反复洗涤产物,50℃干燥6h备用。
实施例2,表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂用于标准蛋白质混合溶液的分离:
用pH为7.0的50mm的磷酸盐缓冲液配制含有0.5mg/mLBSA、Lyz和OVA的标准蛋白质混合溶液,称取50mg表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂分散于2mL上述蛋白质混合溶液中,在25℃环境、150r/min振荡条件下反应6h,反应结束后,将吸附了蛋白质的吸附剂用2mL,pH为7.0的缓冲液清洗两次,再用1mL含有1mol/L的NaCl、pH为7.0的缓冲液洗脱被吸附的蛋白质,将吸附前的蛋白质溶液、吸附后的蛋白质溶液和洗脱液进行12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;
实施例3,表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂用于鸡蛋清中溶菌酶的纯化
样品的制备:取新鲜的生鸡蛋,分离蛋清与蛋黄,取5mL蛋清,向其中加入45mL、pH为7.0的50mm的磷酸盐缓冲液,室温下搅拌30min,于40℃环境、10000r/min离心15min,取上层清液作为鸡蛋清样品;
溶菌酶的纯化:称取50mg表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂加入到2mL稀释后的蛋清样品中,25℃条件下150r/min持续振荡反应6h;反应完成后,将粒子用pH为7的缓冲液2mL依次清洗两次,再用1mL含有1mol/L的NaCl,pH为7的缓冲液洗脱被吸附的蛋白质,将吸附前的蛋清溶液、吸附后的蛋清溶液洗脱液进行12%SDS-聚丙烯酰胺电泳分析。
实施例分析:如图3所示为表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对不同蛋白质的等温吸附线,对比可知该吸附剂对碱性蛋白质溶菌酶(Lys)和细胞色素C(Cyt-C)具有较高的吸附容量,分别为93.46、222.22μg/mg,而对酸性蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)几乎没有吸附,说明该吸附剂对碱性蛋白质具较高的吸附容量和选择性。
如图4为表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对标准蛋白质混合溶液的分离效果图。图中蛋白质混合溶液(条带2)由酸性蛋白质(BSA、OVA)碱性蛋白质(Lyz)组成,经过吸附剂纯化以后(条带4)仅可看到Lyz的条带,表明碱性蛋白质被纯化出来,因此该吸附剂可应用于混合蛋白质样品中碱性蛋白质的分离纯化。
如图5为表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂对鸡蛋清稀释液的分离效果图:图中鸡蛋清样品中含有大量的酸性蛋白质(条带1:伴清蛋白、OVA、卵蛋白抑制剂)和少量的碱性蛋白质(Lyz),经过吸附剂纯化以后(条带4)仅可看到Lyz的条带,表明Lyz被分离纯化出来,因此该吸附剂可应用于复杂生物样品中碱性蛋白质的分离纯化。
Claims (10)
2.根据权利要求1所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,具体按以下步骤实施:
步骤1,首先采用溶剂热法合成聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子;
步骤2,将经步骤1合成的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子用丙烯酰氯进行修饰;
步骤3,将步骤2合成的含有丙烯基Fe3O4磁性纳米粒子用聚丙烯酸进行修饰,得到表面修饰聚丙烯酸的磁性纳米吸附剂。
3.根据权利要求2所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤1具体步骤如下:
步骤1.1,称取FeCl3.6H2O置于烧杯中,加入乙二醇对FeCl3.6H2O进行溶解,溶解后加入聚乙烯亚胺搅拌均匀,然后加入无水乙酸钠,加热烧杯至FeCl3.6H2O完全溶解,最后,将溶解好的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜进行干燥;
步骤1.2,将经步骤1.1处理后的溶液自然冷却至室温进行固液分离,将分离出的固体磁性材料用去离子水和乙醇交替清洗3次,然后将固体磁性材料于空干燥箱中干燥,得到聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子。
4.根据权利要求3所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤1.1中,FeCl3.6H2O与乙二醇、聚乙烯亚胺的固液比分别为1:24和5:4,FeCl3.6H2O与无水乙酸钠的质量比为5:8,乙二醇为分析纯,聚乙烯亚胺的分子量为1800。
5.根据权利要求3所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤1.1中加热烧杯采用30℃水浴加热至FeCl3.6H2O完全溶解,最后,将溶解好的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜,置于鼓风干燥箱中200℃反应8h。
6.根据权利要求2所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤2具体步骤如下:
步骤2.1,将经步骤1得到的聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒子放入干燥的烧瓶中,加入乙腈溶液,然后进行超声分散;
步骤2.2,经步骤2.1处理后,搅拌烧瓶中的溶液,搅拌的同时滴加丙烯酰氯溶液,室温下搅拌12h,得到含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子。
7.根据权利要求6所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤2.1中Fe3O4与乙腈溶液的固液比是1:100,乙腈为色谱纯;所述步骤2.2中,Fe3O4与丙烯酰氯溶液的固液比为4:25。
8.根据权利要求2所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤3具体步骤如下:
在烧瓶中加入丙烯酸水溶液,将经步骤2.2得到的含有丙烯基的Fe3O4磁性纳米粒子分散至烧瓶中,然后将烧瓶抽真空并充入氮气,然后在氮气的保护下加入偶氮二异丁腈/乙腈溶液,封闭烧瓶振荡反应,得到表面修饰聚丙烯酸的Fe3O4磁性纳米吸附剂。
9.根据权利要求8所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤3中Fe3O4与丙烯酸水溶液的固液比是100:1,丙烯酸水溶液的浓度范围10mg/mL,Fe3O4与偶氮二异丁腈/乙腈溶液的固液比为4:5,偶氮二异丁腈/乙腈溶液的浓度为10mg/mL。
10.根据权利要求8所述的一种表面修饰聚丙烯酸的磁性吸附剂的制备方法,其特征在于,所述步骤3中将烧瓶在50℃的环境,150r/min的振荡频率下反应10h。
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