CN113281433A - 一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法 - Google Patents

一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法，属于药物质量标准技术领域。该方法包括以下步骤：制备供试品溶液：分别称取氢溴酸槟榔碱对照品、厚朴酚对照品、橙皮苷对照品，加乙腈制成对照品溶液；制备供试品溶液：将中药组合物制剂溶于水，加入纤维素酶、脂肪酶，离心、浓缩，加入乙腈‑乙醇混合溶液，超声处理或者振摇，得供试品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪。本发明的检测方法的稳定性和准确性好，精密度高，线性关系良好，为相关治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂质量标准提供了参考依据。

Description

一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法
技术领域
本发明属于药物质量标准技术领域，具体涉及一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法。
背景技术
胃肠型感冒的发病诱因主要是来自外部刺激等因素，天气冷暖变化时发生较多。这是由于冷空气对肠胃刺激，再加上生活习惯不正常，不良饮食等。胃肠型感冒和胃肠炎不一样，主要区别在于，急性胃肠炎患者以前常有不洁饮食史，恶心、呕吐较为剧烈，呕吐物常有刺激性气味，但一般没有发热症状。“胃肠感冒”最常见的原因是病毒菌的感染及饮食的过敏反应。细菌及病毒在喉部侵入发炎后，即会顺着唾液被吞入胃肠中引起胃肠的不适。其表现症状例如呕吐、腹泻、腹痛等，常使用藿香正气片和藿香正气水治疗。
中医认为大腹皮具有行气宽中、利水消肿的功效,常用于缓解食积气滞、脘腹胀满、便秘、水肿、小便不利、等症状，目前许多治疗胃肠型感冒的中药组合物均包含大腹皮、陈皮、厚朴等作为重要有效成分。
例如，CN108619349A公开了一种澄清的藿香正气水，该澄清的藿香正气水包括如下组成成分：苍术：150-170克；陈皮：150-170克；厚朴：150-170克；白芷：230-250克；茯苓：230-250克；大腹皮：230-250克；生半夏：150-170克；甘草浸膏：18-22克；广藿香油：1.5-1.7毫升和紫苏叶油：0.7-0.9毫升。
中国专利申请201210038083.4公开了一种治疗胃肠疾病的中药组合物是由以下重量百分比的原料药制成的口服制剂：山药5-13％、黄柏15-22％、陈皮7-13％、肉桂14-20％、甘草2-8％、广藿香19-25％、佩兰5-10％、大腹皮2-8％、丁香5-10％。同时公开了其含量测定方法，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(28：72为流动相，磷酸二氢钠溶液用磷酸调节pH值至3.0；检测波长为265nm；理论塔板数按盐酸小檗碱计算应不低于5000；对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇1：10020ml，称定重量，超声处理40钟，再称定重量，用盐酸-甲醇1：100补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，加在中性氧化铝柱上，用甲醇50ml洗脱，洗脱液浓缩至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每粒含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4 HCl计，不得少于1.2mg。
目前，针对胃肠型感冒中药制剂的含量测定研究很少，因此亟需提供一种检测方法，以期提高相关药物组合物的质量控制标准。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法。
为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：
一方面，本发明提供一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法，包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：分别称取氢溴酸槟榔碱对照品、厚朴酚对照品、橙皮苷对照品，加乙腈制成对照品溶液；
(2)制备供试品溶液：将中药组合物制剂溶于水，加入纤维素酶、脂肪酶，离心、浓缩，加入乙腈-乙醇混合溶液，超声处理或者振摇，得供试品溶液；
(3)分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪；
液相色谱仪条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱；
检测波长：210-230nm；
流速：0.9-1.3mL/min；
柱温：20-35℃；
进样量：10-30μL；
流动相：乙腈-乙醇-水，体积比40-50:20-30:30-40。
优选的，步骤(1)中，所述对照品溶液为：每lml含氢溴酸槟榔碱40-60μg、厚朴酚90-110μg、橙皮苷对照品40-60μg的对照品溶液。
进一步优选的，步骤(1)中，所述供试品溶液为：每lml含氢溴酸槟榔碱50μg、厚朴酚100μg、橙皮苷对照品50μg的对照品溶液。
优选的，步骤(2)中，所述中药组合物制剂和水的体积比为1:2-3，进一步优选为1:2.5。
优选的，所述水为纯净水、蒸馏水、饮用水等，进一步优选为纯净水。
优选的，步骤(2)中，所述纤维素酶、脂肪酶的总质量和所述中药组合物制剂的体积比为0.04-0.06:10(g：mL)，进一步优选为0.05:10(g：mL)。
优选的，步骤(2)中，所述纤维素酶和脂肪酶的质量比为1-3:2-4，进一步优选为2:3。
优选的，步骤(2)中，加入纤维素酶、脂肪酶后，在40-50℃作用5-15min，进一步优选为45℃作用10min。
优选的，步骤(2)中，所述浓缩为8-15倍浓缩。
优选的，步骤(2)中，所述乙腈-乙醇混合溶液中，乙腈和乙醇和体积比为2-4:1，进一步优选为3:1。
优选的，所述超声处理时间为3-6min，优选为5min。
优选的，所述振摇时间为6-10min，进一步优选为8min。
优选的，液相色谱仪条件：
色谱柱：Diamonsil C18；
检测波长：215nm；
流速：1.1mL/min；
柱温：28℃；
进样量：20μL；
流动相：乙腈-乙醇-水，体积比45:25:40。
另一方面，本发明提供上述含量测定方法在中药组合物制剂的质量控制中的应用。
优选的，所述中药组合物制剂包括以下成分：苍术、陈皮、厚朴、茯苓、大腹皮、枇杷花、生半夏、生姜、白芷、甘草浸膏、广霍香油和紫苏叶油。
本发明的有益效果为：
本发明的检测方法的稳定性和准确性好，精密度高，线性关系良好，为相关治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂质量标准提供了参考依据。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中，若无特殊说明，所用的操作方法均为常规操作方法，所用设备均为常规设备，所用原料均为市售。
岛津LC-20AT高效液相色谱仪；
UC7100S超声波清洗仪；
纤维素酶、脂肪酶：诺维信，酶活700U/g
中药制剂为自制，制备步骤：
配方：苍术140g、陈皮145g、厚朴150g、茯苓230g、大腹皮252g、枇杷花180g、生半夏155g、干姜12g、白芷220g、甘草浸膏18g、广藿香油1.5ml和紫苏叶油0.7ml。
S1、将配方量的苍术、陈皮、厚朴和白芷分别投入渗漉罐中，加入药材量1倍的60％(v/v)乙醇作浸渍溶剂，密闭，浸渍24h后进行渗漉，流速控制为3-5ml/(min·kg)，得到400ml苍术渗漉液、400ml陈皮渗漉液、400ml厚朴渗漉液和500ml白芷渗漉液；
S2、将配方量的茯苓加入提取罐中，煮沸后，80℃保温浸提取二次，第一次加入6倍量的纯化水，温浸提取3h；第二次加入4倍量的纯化水，温浸提取2h后，过80目筛过滤，得到茯苓液；
S3、将配方量的生半夏加冷水浸泡过面，浸泡至内无干心后，将浸泡后的生半夏和干姜加水煎煮两次，第一次加入二者6倍量的纯化水，煎煮3h，第二次加入二者4倍量的纯化水，煎煮2h后，过80目筛过滤，得到煎煮液1；
S4、将配方量的大腹皮和枇杷花，加入二者6倍重量的纯化水，煎煮3h后，过80目筛，得到煎煮液2；
S5、将配方量的甘草浸膏，打碎，加水煮沸溶解后，过80目筛，得到甘草液；
S6、向配方量的广藿香油中，加入2倍重量的95％(v/v)乙醇，搅拌溶解，得到广藿香油乙醇溶液；
S7、向配方量的紫苏叶油中，加入2倍重量的95％(v/v)乙醇，搅拌溶解，得到紫苏叶油乙醇溶液；
S8、将步骤S1制备的渗漉液、S2制备的茯苓液、S3制备的煎煮液1、S4制备的煎煮液2和S5制备的甘草液泵入浓缩器中，混合浓缩至相对密度为1.20-1.30(70-85℃测)的浸膏；
S7、向步骤S8制备的浸膏中加入步骤S6制备的广藿香油乙醇溶液和S7制备的紫苏叶油乙醇溶液，搅拌溶解，过滤，用纯化水调整至2050ml，按10ml每瓶灌注，即得。
实施例1含量测定
(1)制备供试品溶液：精密称取氢溴酸槟榔碱对照品、厚朴酚对照品、橙皮苷对照品，加乙腈制成每lml含氢溴酸槟榔碱50μg、厚朴酚100μg、橙皮苷对照品50μg的对照品溶液；
(2)制备供试品溶液：将10mL中药组合物制剂溶于25mL纯净水，加入纤维素酶、脂肪酶0.05g(纤维素酶和脂肪酶的质量比为2:3)，45℃作用10min，置冰浴中冷却10分钟，迅速离心(离心转速为3500r/min，离心时间为5min)，得上清液，将上清液11倍浓缩，将浓缩物放入25mL锥形瓶，加入乙腈-乙醇混合溶液至刻度线，乙腈和乙醇和体积比为3:1，超声处理5min(600W功率)，加入乙腈-乙醇混合溶液补足减失的重量，得供试品溶液；
(3)分别取供试品溶液和对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪；
液相色谱仪条件：
色谱柱：Diamonsil C18；
检测波长：215nm；
流速：1.1mL/min；
柱温：28℃；
进样量：20μL；
流动相：乙腈-乙醇-水(体积比45:25:40)
得到苷对照品色谱图以及供试品色谱图，将供试品色谱图中的槟榔碱峰、厚朴酚峰、橙皮苷峰与对照品色谱图进行对照，测得10mL中药组合物制剂中槟榔碱、厚朴酚、橙皮苷含量分别为167mg，92mg，83mg。
实施例2不同提取方式
2.1
不使用复合酶处理，直接将10mL中药组合物制剂溶于25mL乙腈，强力振摇5分钟，置冰浴中冷却10分钟，迅速离心(离心转速为3500r/min，离心时间为5min)，得上清液，将上清液11倍浓缩，将浓缩物放入25mL锥形瓶，加入乙腈-乙醇混合溶液至刻度线，乙腈和乙醇和体积比为3:1，超声处理5min(600W功率)，加入乙腈-乙醇混合溶液补足减失的重量，得供试品溶液。其余步骤与实施例1相同。
2.2
调整纤维素酶和脂肪酶的质量比为1:4，其余步骤与实施例1相同。
2.3
调整纤维素酶和脂肪酶的质量比为3:2，其余步骤与实施例1相同。
2.4
调整纤维素酶和脂肪酶的质量比为5:0，其余步骤与实施例1相同。
2.5
调整纤维素酶和脂肪酶的质量比为0:5，其余步骤与实施例1相同。
表1.
含量(mg) 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5
槟榔碱 134 166 165 161 162
厚朴酚 72 92 91 85 87
橙皮苷 57 82 82 78 75
实施例3精密度试验
按照实施例1方法重复测定6次，统计RSD(％)结果如下：
表2.
槟榔碱 厚朴酚 橙皮苷
RSD(％) 0.28 0.42 0.26
测定结果RSD均<0.5％，表明精密度良好。
由不同人员，在不同实验室、不同时间按实施例1方法进行测定，结果如下表：
表3.槟榔碱测定结果
Figure BDA0003074075430000071
表4.厚朴酚测定结果
Figure BDA0003074075430000072
表5.橙皮苷测定结果
Figure BDA0003074075430000073
Figure BDA0003074075430000081
实施例4耐用性试验
4.1不同流速
取供试品溶液，按流速0.9mL/min、1.1mL/min、1.3mL/min，分别记录色谱图，统计分离度如下表所示。
表6.
Figure BDA0003074075430000082
本方法在流速变动范围0.9-1.3mL/s时，分离度＞1.5，同时含量测定结果RSD<0.5％，符合要求。
4.2不同柱温
取供试品溶液，按柱温20℃、28℃、35℃，分别记录色谱图，统计分离度如下表所示。
表7.
Figure BDA0003074075430000083
本方法在柱温变动范围20-35℃时，分离度＞1.5，同时含量测定结果RSD<0.5％，符合要求。
4.3不同色谱柱
取供试品溶液，按不同色谱柱，分别记录色谱图，统计分离度如下表所示。
表8.
条件 Diamonsil C18 Thermo Hypersil Gold
1 3.2 1.9
2 3.2 1.9
3 3.3 2.0
4 3.2 2.0
5 3.2 1.9
本方法在使用不同色谱柱时，分离度＞1.5，同时含量测定结果RSD<0.5％，符合要求。
实施例5线性范围
表9.
回归方程 r
槟榔碱 y＝21.398x-8.633 0.9999
厚朴酚 y＝18.426x-9.214 0.9999
橙皮苷 y＝25.774x-6.089 0.9999
三种成分相关系数均为0.9999，表明线性关系良好。
实施例6重复性试验
按照实施例1的提取方法，制备6份样品，并按照实施例1的测试方法进行测定，计算RSD(％)，结果如下表所示。
表10.
槟榔碱 厚朴酚 橙皮苷
RSD(％) 0.24 0.41 0.32
按照实施例2.1的提取方法，制备6份样品，并按照实施例1的测试方法进行测定，计算RSD(％)，结果如下表所示
表11.
槟榔碱 厚朴酚 橙皮苷
RSD(％) 1.69 0.97 2.34
可以看出，实施例2.1的提取方法重复性较差。
按照实施例2.2的提取方法，制备6份样品，并按照实施例1的测试方法进行测定，计算RSD(％)，结果如下表所示。
表12.
槟榔碱 厚朴酚 橙皮苷
RSD(％) 0.68 0.52 0.78
实施例7稳定性试验
取同一批按实施例1方法制备的供试品溶液，分别于放置0、4、8、12、16、24、36、48h时进样测定10次，计算RSD(％)，结果如下表所示。
表13.
槟榔碱 厚朴酚 橙皮苷
RSD(％) 0.91 1.25 0.88
结果表明供试品溶液在48h内质量基本稳定。
上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种治疗胃肠型感冒的中药组合物制剂的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：分别称取氢溴酸槟榔碱对照品、厚朴酚对照品、橙皮苷对照品，加乙腈制成对照品溶液；
(2)制备供试品溶液：将中药组合物制剂溶于水，加入纤维素酶、脂肪酶，离心、浓缩，加入乙腈-乙醇混合溶液，超声处理或者振摇，得供试品溶液；
(3)分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪；
液相色谱仪条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱；
检测波长：210-230nm；
流速：0.9-1.3mL/min；
柱温：20-35℃；
进样量：10-30μL；
流动相：乙腈-乙醇-水，体积比40-50:20-30:30-40。
2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对照品溶液为：每lml含氢溴酸槟榔碱40-60μg、厚朴酚90-110μg、橙皮苷对照品40-60μg的对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述中药组合物制剂和水的体积比为1:2-3。
4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述纤维素酶、脂肪酶的总质量和所述中药组合物制剂的体积比为0.04-0.06:10(g：mL)。
5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述纤维素酶和脂肪酶的质量比为1-3:2-4。
6.根据权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述纤维素酶和脂肪酶的质量比为2:3。
7.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，加入纤维素酶、脂肪酶后，在40-50℃下作用5-15min。
8.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙腈-乙醇混合溶液中，乙腈和乙醇和体积比为2-4:1。
9.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，液相色谱仪条件为：
色谱柱：Diamonsil C18；
检测波长：215nm；
流速：1.1mL/min；
柱温：28℃；
进样量：20μL；
流动相：乙腈-乙醇-水，体积比45:25:40。
10.权利要求1-9任一项所述含量测定方法在中药组合物制剂的质量控制中的应用，所述中药组合物制剂包括以下成分：苍术、陈皮、厚朴、茯苓、大腹皮、枇杷花、生半夏、生姜、白芷、甘草浸膏、广霍香油和紫苏叶油。
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