CN113278523A - 具有细胞定位功能的细胞培养板及其制备方法和细胞定位的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种具有细胞定位功能的细胞培养板及其制备方法和细胞定位的方法。该具有细胞定位功能的细胞培养板的板孔内设有定位区，该定位区能够将板孔内的细胞由定位区的外围区域导向至并定位于该定位区。该定位区对细胞的亲和力大于定位区的外围区域对细胞的亲和力。该细胞培养板是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性而得到。使用该细胞培养板接收由流式细胞仪分选出的细胞，基于定位区与定位区的外围区域对细胞的亲和力的差异促使细胞定位于定位区。本发明提供的细胞培养板及定位方法能够将板孔内的细胞引导至预定区域，实现对细胞的定位。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，特别是涉及对细胞培养板进行改进得到的具有细胞定位功能的细胞培养板、细胞培养板的制备方法和结合荧光激活细胞分选技术实现细胞定位的方法。
背景技术
流式荧光细胞分选(FACS)技术被广泛应用于单克隆细胞分选。流式细胞仪的工作原理是将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，后者与入射的激光束垂直相交，液柱中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中一系列光学系统(透镜、光阑、滤片和检测器等)收集荧光、光散射、光吸收或细胞电阻抗等信号，计算机系统进行收集、储存、显示并分析被测定的各种信号，对各种指标做出统计分析。科研型流式细胞仪还可以根据所规定的参量把指定的细胞亚群由细胞培养板分别接收而从整个群体中分选出来，以便对分选出的细胞进行进一步的研究分析。
然而，现有技术中，由细胞培养板(如96孔板)接收的被分选出的单克隆细胞通常是随机分布在细胞培养板的板孔内不同区域，需要通过人工方式从板孔内寻找粘附的细胞。这种方式产生的问题主要在于：细胞位置不确定，人工通过显微镜观察各板孔内细胞的位置，需要耗费较多的时间，效率低。尤其是对于那些位于细胞培养板的板孔边角的单克隆细胞，很难在显微镜下快速地观察到，容易被忽略。这种需要人工观察寻找粘附的细胞的方式，也导致了分选出的单克隆细胞在后续操作中无法实现自动化。综合分析以上问题产生的主要原因在于，现有的细胞培养板的表面为均匀分布的疏水性材料，表面各区域对细胞的附着力基本一致，因此，被分选出的细胞进入板孔内的位置是随机分布的，没有准确的定位。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种对细胞具有定位功能的器具或方法，能够将细胞培养板的板孔内的细胞引导至预定区域，实现对细胞的定位。
第一方面，为解决上述技术问题，本发明提供一种具有细胞定位功能的细胞培养板，其中，所述细胞培养板的板孔内设有定位区，所述定位区能够将所述板孔内的细胞由所述定位区的外围区域导向至并定位于所述定位区。
具体地，所述定位区对细胞的亲和力大于所述定位区的外围区域对细胞的亲和力。
具体地，所述定位区的疏水性比所述定位区的外围区域的疏水性弱。优选地，所述定位区的外围区域为疏水性，所述定位区为非疏水性。
具体地，所述定位区设置于细胞培养板的板孔内的材料表面。
具体地，所述细胞培养板的各板孔内均设置一个定位区。
具体地，所述定位区位于所述板孔的中心区域。
具体地，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高而形成。
优选地，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
优选地，所述定位区是通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高而形成。即，将该预定区域进行刻蚀而形成定位区。
优选地，所述定位区是通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱而形成。即，将该预定区域进行刻蚀而形成定位区。
优选地，刻蚀方式包括化学刻蚀和物理刻蚀。化学刻蚀是指利用化学试剂与材料表面之间的化学反应来去除、剥离预定区域的表面材料，例如使用溶液、反应离子等。物理刻蚀是指物理手段去除、剥离材料表面的预定区域的表面材料，例如使用光、热、机械力等手段。
优选地，所述定位区是通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱而形成。
具体地，所述定位区的形状可以为任意的规则或不规则的几何图形。优选地，所述定位区的形状为圆形，如此更便于快速和直观地观察。
第二方面，为解决上述技术问题，本发明还提供一种具有细胞定位效果的细胞培养板的制备方法，所述方法包括：通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高，从而形成能够将所述板孔内的细胞导向自身并定位的定位区。
具体地，所述改性是对细胞培养板的各板孔内的唯一的一个预定区域进行改性。即，各板孔内仅形成一个定位区。
具体地，所述改性是对细胞培养板的板孔内中心区域的材料表面进行改性。即，定位区是位于所述板孔的中心区域。
具体地，所述定位区形成于细胞培养板的板孔内的材料表面。
优选地，通过所述改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。由于疏水性会排斥细胞，使细胞不易粘附，因此，预定区域的材料表面的疏水性减弱，即能够达到对细胞的亲和力提高的效果。
优选地，所述物理或化学方式是指刻蚀方式。通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高，从而形成定位区。由于细胞培养板的板孔的表面材料具有疏水性特点，当通过刻蚀方式有选择地去除表面的疏水性材料后，预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，即形成了对细胞的亲和力更好的定位区。
优选地，通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，从而形成定位区。在其他实施方式中，还可以采用溶液、反应离子等化学刻蚀手段或者热、机械力等物理刻蚀。
优选地，所述激光烧蚀使用辐射功率2～8mw/cm2的激光进行照射。
优选地，所述激光持续照射时间为20～60s。
优选地，所述激光烧蚀形成面积8000～10000mm2的定位区。
第三方面，为解决上述技术问题，本发明还提供一种使细胞培养板的板孔内的细胞定位的方法，所述方法包括：
采用物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高，从而形成能够引导所述板孔内的细胞导向自身的定位区，得到具有细胞定位功能的细胞培养板；
使用所述具有细胞定位功能的细胞培养板接收由流式细胞仪分选出的细胞，基于定位区与定位区的外围区域对细胞的亲和力的差异促使细胞定位于所述定位区。
具体地，所述由流式细胞仪分选出的细胞为单克隆细胞。
具体地，所述细胞培养板的各板孔内均具有唯一的一个定位区域。
具体地，所述定位区位于所述板孔的中心区域，细胞被定位于所述板孔的中心区域。
优选地，通过所述改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
优选地，所述物理或化学方式是指刻蚀方式。通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高，从而形成定位区。
优选地，通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，从而形成定位区。在其他实施方式中，还可以采用溶液、反应离子等化学刻蚀手段或者热、机械力等物理刻蚀。
本申请所提供的具有细胞定位功能的细胞培养板，是以现有的细胞培养板进行改进，在其各板孔内设置一个定位区，该定位区能够将板孔内的细胞导向自身，从而实现对细胞的定位。
本申请所提供的具有细胞定位功能的细胞培养板，主要是利用表面材料对细胞的亲和力差异来实现对细胞的引导。相对而言，亲和力弱的表面材料不利于细胞的附着，亲和力强表面材料有利于细胞的附着，因此，在总体上会表现出亲和力弱的表面材料排斥细胞而亲和力强的表面材料吸引细胞的效果，最终实现将细胞导向并定位于亲和力强的表面材料所在区域，即细胞导向并定位于亲和力相对更强的定位区。
细胞培养板的表面材料通常为疏水性材料。采用物理或化学方式去除预定区域表面原有的疏水性材料涂层之后，细胞更容易粘附在被处理过的疏水性相对更弱的区域。而原先那些没有被处理过的区域仍然是较强的疏水性，会排斥细胞，使细胞不能粘附。
将定位区的位置统一化地设置于细胞培养板的某一固定区域(比如板孔的中心区域)，使各板孔内的细胞均有序地排列在该固定区域，从而在调节好显微镜的视野之后可以实现在显微镜下自动化观察各板孔内的细胞，或自动化地配合其他的成像或拍照技术，不需人工参与对各板孔内的细胞分布的寻找，省时省力。
本申请所提供的细胞培养板的定位区可采用各种合适的物理或化学方式对材料表面进行改性而得到。一种优选的制备方式是采用激光烧蚀技术。激光与普通光的区别是激光具有连贯性、单色性、方向性和高强度。持续的激光照射表面材料，使表面材料部分或全部气化或蒸发，处理过的表面无需后续处理。经一次照射处理即可在预定区域形成位置准确、形状固定的定位区。激光烧蚀技术操作方便，成本低廉、一次照射处理即可完成改性，无需后续清理操作，生产效率高。而其他表面处理技术，通常都需要多步反应和后续处理才能完成表面处理。
本申请所提供的细胞培养板在赋予了细胞定位功能之外，没有改变细胞培养板原有的结构和用途，仍然满足原先的各种功能，并且可以与市场上的多种单细胞分选平台相结合，用于细胞分选后的各种自动化操作进程。
本申请中，“亲和力”是指细胞附着于细胞培养板表面的能力。
本申请中，“改性”是指通过物理和化学手段改变材料物质形态或性质的方法。
附图说明
图1为现有的细胞培养板的结构示意图。
图2为本发明的细胞培养板的结构示意图。
图3为本发明的细胞培养板的制备方法及其用于细胞定位的一具体实施例的流程示意图。
附图标记说明：
1为细胞培养板；
2为板孔；
3为定位区；
4为外围区域；
5为细胞；
S1为改性；
S2为流式荧光细胞分选。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
如图2所示为一种具有细胞定位功能的细胞培养板1，其与图1所示现有常规的细胞培养板1的主要区别在于，该具有细胞定位功能的细胞培养板1的板孔2内设有定位区3，该定位区3具有引导细胞的功能，能够将该板孔2内的细胞由该定位区3的外围区域4导向至并定位于该定位区3。
现有的细胞培养板1的板孔2内表面为均匀分布的疏水性材料，如图1中灰色区域所示。而本申请提供的具有细胞定位功能的细胞培养板1的板孔2内表面设置有定位区3，如图2中白色圆形区域所示，定位区3的外周是外围区域4，其表面仍为均匀分布的疏水性材料，如图2中灰色圆环形区域所示。
图2所示的具有细胞定位功能的细胞培养板1中，定位区3主要是利用板孔2内的表面材料对细胞的亲和力差异来实现对细胞的引导。也就是，板孔2内的定位区3对细胞的亲和力大于板孔2内的定位区3的外围区域4对细胞的亲和力。因此，亲和力弱的表面材料排斥细胞的附着，而亲和力强的表面材料吸引细胞的附着，最终实现了将细胞定位于亲和力强的表面材料所在区域，即细胞导向并定位于亲和力相对更强的定位区3。
在一些具体的实施方式中，板孔2内的表面材料对细胞的亲和力可以在一定程度上用板孔2内的表面材料的疏水性和/或亲水性来体现。通常，疏水性材料的表面对细胞有一定的排斥力，不利于细胞的附着。如果在疏水性材料的表面设置一个疏水性相对更弱的区域，则该疏水性材料上接受的细胞应当很容易附着于疏水性相对更弱的区域。因此，如果以疏水性的强弱来设计该具有细胞定位功能的细胞培养板，则要求定位区3的疏水性比定位区3的外围区域4的疏水性更弱。在一些优选的实施方式中，该定位区3的外围区域4为疏水性，而定位区3为非疏水性。例如定位区3可设计为增加亲水性涂层而形成亲水性区域，利于细胞的附着。
图2所示的具有细胞定位功能的细胞培养板1中，定位区3是设置于细胞培养板1的板孔2内的材料表面。每个板孔2内仅设置一个定位区3。通常，该定位区3具有规则的几何图形，比如圆形。优选地，将该定位区3设置于板孔2内表面的中心区域，有利于对细胞的定位。
该具有细胞定位功能的细胞培养板1中，定位区3的形成方法是：通过物理或化学方式对细胞培养板1的板孔2内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高。经改性后的区域即为定位区3。上述定位区3的形成方法是该具有细胞定位功能的细胞培养板1的制备方法的技术关键。由上述定位区3的形成方法可以直接地得出该具有细胞定位功能的细胞培养板1的制备方法包括：通过物理或化学方式对细胞培养板1的板孔2内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高，从而形成能够将所述板孔内的细胞导向自身并定位的定位区3。
当以疏水性的强弱来体现板孔2内的表面材料对细胞的亲和力的大小时，则定位区3的形成方法也可以是：通过物理或化学方式对细胞培养板1的板孔2内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
具体实施中，前述的物理或化学方式包括刻蚀方式。刻蚀方式包括化学刻蚀或物理刻蚀。通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板1的板孔2内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高或者使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，从而形成定位区3。化学刻蚀包括使用与表面材料相反应的溶液试剂、反应离子等去除表面材料。物理刻蚀包括使用光照、热接触、机械力等手段来去除表面材料。一种优选的实施方式是，通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板1的板孔2内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱而形成定位区3。激光烧蚀的方式具有操作方便、无废料清理、刻蚀区域形状规则、可控性强等优点。一种具体的激光烧蚀方式中，使用辐射功率2～8mw/μm2的激光进行照射，持续照射时间为20～60s。通过激光照射，在板孔的内表面形成面积8000～10000μm2的圆形定位区3。激光可以自动设定，瞄准要处理的细胞培养板1(如96孔板)的板孔2内表面，进行刻蚀。板孔2内表面的疏水性材料吸收激光能量后会蒸发或气化。激光能够有效地去除材料表面原有的疏水性排斥细胞的涂层，使细胞可以更容易地粘附在被处理过的区域。那些没有被激光照射的区域仍然是疏水性排斥细胞的，细胞不能粘附。这样就形成了疏水性相对更弱的定位区3。所有通过FACS分选出来的单克隆细胞被接受于细胞培养板1的各板孔2内，并且由于表面材料差异化的疏水性而被定位于定位区3。各板孔2内的定位区3统一化地刻蚀于相同位置，例如均刻蚀于板孔2内底部的中心区域，从而达到使各孔板2内的细胞统一有序地排列，便于观察和后续的自动化操作，无需人工再分别进行调节，省时省力。
该具有细胞定位功能的细胞培养板1可以统一化制造和生产，也可以在实验室条件下进行快速地制备。尤其是以激光烧蚀为例，适合在实验室条件下方便地制备。
应用前述的细胞培养板1进行细胞定位的方法包括：使用该具有细胞定位功能的细胞培养板1接收由流式细胞仪分选出的细胞，基于定位区3与定位区3的外围区域4对细胞的亲和力的差异引导细胞定位于该定位区3。
如图3所示，为本发明的细胞培养板1的制备方法及其用于细胞定位的一具体实施例的流程示意图，该流程示意图中主要步骤为S1改性和S2流式荧光细胞分选。图3显示，细胞培养板1为96孔板，采用激光烧蚀技术对该96孔板的各板孔2进行S1改性处理，使被改性区域的表面材料被去除。原表面材料的疏水性强，经激光烧蚀处理后的疏水性材料被蒸发或气化，疏水性减弱。改性区域位于板孔2内表面的中心区域，形成了圆形的定位区3(如白色圆形区域所示)。定位区3的周围是未经改性处理的仍然具有较强疏水性的圆环形的外围区域4(如黑色圆环形区域所示)。将经S2流式荧光细胞分选技术分选出的细胞5接受于上述经改性后的孔板2内。外围区域4的较强疏水性会排斥细胞5的附着，使细胞5只能在定位区3粘附，从而达到定位细胞的效果。
综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。
Claims (26)
1.一种具有细胞定位功能的细胞培养板，其特征在于，所述细胞培养板的板孔内设有定位区，所述定位区能够将所述板孔内的细胞由所述定位区的外围区域导向至并定位于所述定位区。
2.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区对细胞的亲和力大于所述定位区的外围区域对细胞的亲和力。
3.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区的疏水性比所述定位区的外围区域的疏水性弱。
4.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于，所述细胞培养板的各板孔内均设置一个定位区。
5.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区位于所述板孔的中心区域。
6.如权利要求2所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高而形成。
7.如权利要求3所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区是通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
8.如权利要求6所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区是通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高而形成。
9.如权利要求7所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区是通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱而形成。
10.如权利要求8或9所述的细胞培养板，其特征在于，所述刻蚀方式包括化学刻蚀和物理刻蚀。
11.如权利要求8或9所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区是通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱而形成。
12.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区的形状可以为任意的规则或不规则的几何图形。
13.如权利要求12所述的细胞培养板，其特征在于，所述定位区的形状为圆形。
14.一种具有细胞定位效果的细胞培养板的制备方法，其特征在于，所述方法包括：通过物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高，从而形成能够将所述板孔内的细胞导向自身并定位的定位区。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述改性是对细胞培养板的各板孔内的唯一的一个预定区域进行改性。
16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述改性是对细胞培养板的板孔内中心区域的材料表面进行改性。
17.如权利要求14所述的方法，其特征在于，通过所述改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
18.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述物理或化学方式是指刻蚀方式；通过所述刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高，从而形成定位区。
19.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述物理或化学方式是指激光方式；通过所述激光刻蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，从而形成定位区。
20.一种使细胞培养板的板孔内的细胞定位的方法，其特征在于，所述方法包括：
采用物理或化学方式对细胞培养板的板孔内预定区域的材料表面进行改性，使预定区域的材料表面在改性后相比改性前对细胞的亲和力提高，从而形成能够引导所述板孔内的细胞导向自身的定位区，得到具有细胞定位功能的细胞培养板；
使用所述具有细胞定位功能的细胞培养板接收由流式细胞仪分选出的细胞，基于定位区与定位区的外围区域对细胞的亲和力的差异促使细胞定位于所述定位区。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述由流式细胞仪分选出的细胞为单克隆细胞。
22.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述细胞培养板的各板孔内均具有唯一的一个定位区域。
23.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述定位区位于所述板孔的中心区域，细胞被定位于所述板孔的中心区域。
24.如权利要求20所述的方法，其特征在于，通过所述改性，使预定区域的材料表面的疏水性在改性后相比改性前减弱。
25.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述物理或化学方式是指刻蚀方式；通过刻蚀方式有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域在去除后相比去除前对细胞的亲和力提高，从而形成定位区。
26.如权利要求20所述的方法，其特征在于，通过激光烧蚀有选择地将细胞培养板的板孔内表面的预定区域的表面材料进行去除，使预定区域的材料表面的疏水性在去除后相比去除前减弱，从而形成定位区。
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Citations (5)
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|---|---|---|---|---|
| CN101048493A (zh) * | 2004-10-29 | 2007-10-03 | 财团法人北九州产业学术推进机构 | 细胞组织微芯片及细胞组织的形成方法 |
| US20090170190A1 (en) * | 2006-02-24 | 2009-07-02 | Taiji Nishi | Cell culture container and method of producing the same |
| CN104774763A (zh) * | 2015-04-24 | 2015-07-15 | 何向锋 | 一种微片式单细胞克隆分离培养板及单细胞克隆分离方法 |
| CN106047706A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-10-26 | 西北工业大学 | 一种基于单细胞捕获实现细胞定位培养芯片及其使用及制备方法 |
| CN215887047U (zh) * | 2021-05-08 | 2022-02-22 | 上海碧博生物医药科技有限公司 | 具有细胞定位功能的细胞培养板 |
-
2021
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101048493A (zh) * | 2004-10-29 | 2007-10-03 | 财团法人北九州产业学术推进机构 | 细胞组织微芯片及细胞组织的形成方法 |
| US20090170190A1 (en) * | 2006-02-24 | 2009-07-02 | Taiji Nishi | Cell culture container and method of producing the same |
| CN104774763A (zh) * | 2015-04-24 | 2015-07-15 | 何向锋 | 一种微片式单细胞克隆分离培养板及单细胞克隆分离方法 |
| CN106047706A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-10-26 | 西北工业大学 | 一种基于单细胞捕获实现细胞定位培养芯片及其使用及制备方法 |
| CN215887047U (zh) * | 2021-05-08 | 2022-02-22 | 上海碧博生物医药科技有限公司 | 具有细胞定位功能的细胞培养板 |
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