CN113265483B - 一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。涉及植物分子遗传育种技术领域。包括提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；若扩增得到任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因。本发明发现的分子标记可用于小麦与中间偃麦草远缘杂交过程中中间偃麦草染色体工程系(染色体附加系、代换系、易位系和双二倍体)中4St染色体或4St染色体片段的快速检测。本发明对于小麦遗传育种的理论研究和实际应用均有重要价值。
Description
技术领域
本发明涉及植物分子遗传育种技术领域，更具体的说是涉及一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。
背景技术
自20世纪90年代起，世界小麦单产开始出现徘徊不前的局面，其主要原因是在小麦育种中长期使用少数主栽品种作为亲本，导致遗传基础越来越狭窄，在单产潜力提高有限的情况下，品种的抗病、抗逆、抗虫等能力逐渐下降，使现有品种抵抗灾害风险的能力降低。种质资源作为基因的重要载体，被称为农业领域的“芯片”，随着各国基因资源争夺日益白热化，种质资源短缺已成为制约种业发展和作物品种实现重大突破的主要技术瓶颈。
通过远缘杂交转移偃麦草属植物的优异基因进入小麦，是增加小麦变异类型、拓宽小麦遗传背景、夯实小麦育种基础的重要途径之一。在小麦遗传改良中，偃麦草属的中间偃麦草(Thinopyrum intermedium,2n＝6x＝42,JJsS)是利用最为成功的多年生野生近缘植物，蕴含许多能够增强小麦抗性、改善小麦品质的有益基因，是小麦遗传改良的重要基因资源之一。自从20世纪20年代Dr.N.V.Tsitsin等首次将小麦与偃麦草属植物杂交成功以来，国内外学者通过远缘杂交和染色体工程的方法，诱导偃麦草的外源基因渗入小麦遗传背景中，先后创制了大量包括双二倍体或部分双二倍体、附加系、代换系和易位系等在内的小麦-中间偃麦草和小麦-长穗偃麦草的异源染色体系，并通过回交、辐射等手段，成功培育出许多抗病、优质、高产的小麦新品种，例如小偃6号、小偃503、小偃22、西农509、西农511、西农529等，在小麦生产及抗病、抗逆研究中被广泛应用。这些含小麦近缘植物血缘的异染色体系是研究物种染色体行为与进化、基因定位与克隆的重要素材，也是拓宽小麦遗传基础、抵御小麦重要病虫害、增加小麦产量和提升小麦品质的重要物质基础。
外源染色体的准确鉴定是研究与利用中间偃麦草的重要前提，长期以来，中间偃麦草外源染色体鉴定一直以细胞学手段包括C-带、N-带、GISH、FISH为主，分子标记技术的发展为其分子鉴定提供了新的发展方向。但迄今为止，识别度有限。
因此，如何提供一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，包括：
1)提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；
2)若扩增得到下列任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因；
目标片段包括如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6的核苷酸序列。
优选的：PCR扩增引物对包括如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8的引物序列，或如SEQID NO.9、SEQ ID NO.10的引物序列，或如SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12的引物序列，或如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14的引物序列，或如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16的引物序列，或如SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18的引物序列中的一对或多对。
优选的：PCR扩增体系：2×Taq PCRMix预混液5μL，50ng/μL的上游引物1μL，50ng/μL的下游引物1μL，50～100ng/μL的模板DNA为1.5μL，1.5μL无菌去离子水，反应体系总体积为10μL。
优选的：PCR扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，58℃退火45秒，72℃延伸30秒，运行35个循环；最后72℃延伸10分钟，PCR扩增产物在4℃保存。
本发明还提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的试剂盒，包括上述的任一扩增引物对。
本发明还提供了上述方法或上述的试剂盒在小麦遗传育种中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，相较于现有技术，新发现的分子标记可用于小麦与中间偃麦草远缘杂交过程中中间偃麦草染色体工程系(染色体附加系、代换系、易位系和双二倍体)中4St染色体或4St染色体片段的快速检测。本发明对于小麦遗传育种的理论研究和实际应用均有重要价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-05引物在不同待测植物材料间的扩增结果，各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指104bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
图2附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-15引物在不同待测植物材料间的扩增结果；图2中，各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指165bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
图3附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-25引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指155bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
图4附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-59引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指194bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
图5附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-93引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指103bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
图6附图为本发明提供的分子标记sacThiC11-108引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指129bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。
下述具体实施例中，所使用的实验材料的来源如下：
小麦-中间偃麦草4St附加系L4可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
普通小麦品种中国春可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
普通小麦品种上林小麦可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
普通小麦品种墨脱小麦可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
拟鹅冠草PI499493可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
中间偃麦草Z1141可市购，也可从各育种单位或种质库引进；
DNA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；
引物序列由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；
Taq PCR Mix预混液购自生工生物工程(上海)股份有限公司，OrderNO.B639295；
测序由生工生物工程(上海)股份有限公司完成；
其他的实验材料试剂或者仪器设备，如未作特殊说明，均表示为本领域常规市售可得。
实施例1
待测植物材料中分子标记sacThiC11-05的检测(核苷酸序列为：
TGAAGCCACGACTCTTACCTACTTCAGCCATTCAATTTTGTATACCATCAATTCAGAGTCCATCATCTTCCTGATGTAATCCTAGACAACTTTTGCAAAGCTCC，如SEQ ID NO.1)
检测分子标记sacThiC11-05的引物为sacThiC11-05-F和sacThiC11-05-R，它们的序列如下：
sacThiC11-05-F：5'-TGAAGCCACGACTCTTACCT-3'，如SEQ ID NO.7；
sacThiC11-05-R：5'-GGAGCTTTGCAAAAGTTGTCT-3'，如SEQ ID NO.8。
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-05-F和sacThiC11-05-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的104bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系如下表1所示：
表1实施例1的PCR反应体系
| 试剂 | 体积 | 规格 |
| 2×TaqPCR Mix预混液 | 5μL | 1.0mL |
| sacThiC11-05-F | 1μL | 50ng/μL |
| sacThiC11-05-R | 1μL | 50ng/μL |
| 模板DNA | 1.5μL | 50～100ng/μL |
| 无菌去离子水 | 1.5μL | |
| 总体积 | 10μL |
PCR扩增程序为：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，58℃退火45秒，72℃延伸30秒，运行35个循环；最后72℃延伸10分钟。PCR扩增产物可以在4℃保存。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图1所示。从图1可以看出，小麦-中间偃麦草4St附加系L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于104bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，小麦-中间偃麦草4St附加系L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
实施例2
待测植物材料中分子标记sacThiC11-15的检测(CTGCTCCAGCTCAGAACAATCCCTCCCTGCAGCGCACGCGGAACAGCACGCATTTGTTCGGCGCCCGCCCCGAGGCCGGCCGTCCGGTGTCGCAATCCCGTCGTTCCCAGTCCCGTCCCCGTCAAACGGAATCCCTCGCCGGGAGGTGAACCCAACGAAACAAAC，如SEQ ID NO.2)
检测分子标记sacThiC11-15的引物为sacThiC11-15-F和sacThiC11-15-R，它们的序列如下：
sacThiC11-15-F：5'-CTGCTCCAGCTCAGAACAAT-3'，如SEQ ID NO.9；
sacThiC11-15-R：5'-GTTTGTTTCGTTGGGTTCAC-3'，如SEQ ID NO.10。
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-15-F和sacThiC11-15-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的165bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系、程序除引物不同外，同实施例1。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图2所示，从图2可以看出，L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于165bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
实施例3
待测植物材料中分子标记sacThiC11-25的检测(GTGGAGCTTTTGCTTCTGCCCGAGCATTTCAGAAAAAAGCAGGTGGCCTTTTGTTGCTGTAGCACATACACACACATTACAGATAGAGAGCTCGTTAGGCAGAGAGAAGGAGCCTGCGTGAACTAGAACTGCAGGGGAACCTTGAGCAACGAATA，如SE Q ID NO.3)
检测分子标记sacThiC11-25的引物为sacThiC11-25-F和sacThiC11-25-R，它们的序列如下：
sacThiC11-25-F：5'-GTGGAGCTTTTGCTTCTGC-3'，如SEQ ID NO.11；
sacThiC11-25-R：5'-TATTCGTTGCTCAAGGTTCC-3'，如SEQ ID NO.12。
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-25-F和sacThiC11-25-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的155bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系、程序除引物不同外，同实施例1。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图3所示，从图3可以看出，L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于155bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
实施例4
待测植物材料中分子标记sacThiC11-59的检测(GCTGACTGAATCTGGTTGCTACTCGGCTCGCACTGCATACCTGCTGCAGTTTATGGGCTGGACACAATCAGATTTCAGGAAATAATTCTGGCACACTTGGGCGCCGGCGAAGTGCAAATTTTTCGTCTAGCTGCTACTTCAAAACCACATTTGGTGTGCGGACATATTACAGTAAAGGGGCTGTCCTAATGAAT，如SEQ ID NO.4)
检测分子标记sacThiC11-59的引物为sacThiC11-59-F和sacThiC11-59-R，它们的序列如下：
sacThiC11-59-F：5'-GCTGACTGAATCTGGTTGCT-3'，如SEQ ID NO.13；
sacThiC11-59-R：5'-ATTCATTAGGACAGCCCCTT-3'，如SEQ ID NO.14；
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-59-F和sacThiC11-59-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的194bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系、程序除引物不同外，同实施例1。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图4所示，从图4可以看出，L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于194bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
实施例5
待测植物材料中分子标记sacThiC11-93的检测(CCGGCAACCCGTGATGTGCATGAGCACAACCGAGCAGCTGCAGTTTCCGGGATGAGCCGGCGACATGCTCGAGTTTGGTGTTCGATGTGATTTAGTTTAGTGG，如SEQ ID NO.5)
检测分子标记sacThiC11-93的引物为sacThiC11-93-F和sacThiC11-93-R，它们的序列如下：
sacThiC11-93-F：5'-CCGGCAACCCGTGATGT-3'，如SEQ ID NO.15；
sacThiC11-93-R：5'-CCACTAAACTAAATCACATCGAACA-3'，如SEQ ID NO.16。
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-93-F和sacThiC11-93-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的103bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系、程序除引物不同外，同实施例1。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图5所示，从图5可以看出，L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于103bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
实施例6
待测植物材料中分子标记sacThiC11-108的检测(GAGAAGAGGAGGGTGTGGTCGGATCGCTCCGCCGCCTTGACCCTGGAGAGCCGCCTCCACTCCGGCTGCGAGAGGGACAGAGCTGGCCTGCTTGATTCGAGTAAAATAGAGGCGGATTCTGAATTCCTA，如SEQ ID NO.6)
检测分子标记sacThiC11-108的引物为sacThiC11-108-F和sacThiC11-108-R，它们的序列如下：
sacThiC11-108-F：5'-GAGAAGAGGAGGGTGTGGTC-3'，如SEQ ID NO.17；
sacThiC11-108-R：5'-TAGGAATTCAGAATCCGCCT-3'，如SEQ ID NO.18。
检测的过程如下：
提取待检测植株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，以sacThiC11-108-F和sacThiC11-108-R为引物进行PCR扩增，扩增完成后，通过电泳分离扩增产物，能够扩增出相应的129bp的DNA条带的，即为含有中间偃麦草4St染色体或4St染色体片段的植物材料。
其中，所使用的PCR反应体系、程序除引物不同外，同实施例1。
PCR扩增产物的电泳检测条件如下：扩增产物加2μL 6×Loading Buffer后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，电泳条件为恒压220V，电泳时间为60分钟。电泳检测的结果如图6所示，从图6可以看出，L4、拟鹅冠草PI499493、中间偃麦草Z1141可以扩增出对应于129bp位置的DNA条带，普通小麦中国春、上林小麦、墨脱小麦无相应条带，表明，L4、PI499493、Z1141中含有4St染色体。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 山西农业大学
<120> 一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgaagccacg actcttacct acttcagcca ttcaattttg tataccatca attcagagtc 60
catcatcttc ctgatgtaat cctagacaac ttttgcaaag ctcc 104
<210> 2
<211> 165
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ctgctccagc tcagaacaat ccctccctgc agcgcacgcg gaacagcacg catttgttcg 60
gcgcccgccc cgaggccggc cgtccggtgt cgcaatcccg tcgttcccag tcccgtcccc 120
gtcaaacgga atccctcgcc gggaggtgaa cccaacgaaa caaac 165
<210> 3
<211> 155
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtggagcttt tgcttctgcc cgagcatttc agaaaaaagc aggtggcctt ttgttgctgt 60
agcacataca cacacattac agatagagag ctcgttaggc agagagaagg agcctgcgtg 120
aactagaact gcaggggaac cttgagcaac gaata 155
<210> 4
<211> 194
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gctgactgaa tctggttgct actcggctcg cactgcatac ctgctgcagt ttatgggctg 60
gacacaatca gatttcagga aataattctg gcacacttgg gcgccggcga agtgcaaatt 120
tttcgtctag ctgctacttc aaaaccacat ttggtgtgcg gacatattac agtaaagggg 180
ctgtcctaat gaat 194
<210> 5
<211> 103
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ccggcaaccc gtgatgtgca tgagcacaac cgagcagctg cagtttccgg gatgagccgg 60
cgacatgctc gagtttggtg ttcgatgtga tttagtttag tgg 103
<210> 6
<211> 129
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gagaagagga gggtgtggtc ggatcgctcc gccgccttga ccctggagag ccgcctccac 60
tccggctgcg agagggacag agctggcctg cttgattcga gtaaaataga ggcggattct 120
gaattccta 129
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
tgaagccacg actcttacct 20
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ggagctttgc aaaagttgtc t 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ctgctccagc tcagaacaat 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gtttgtttcg ttgggttcac 20
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gtggagcttt tgcttctgc 19
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tattcgttgc tcaaggttcc 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gctgactgaa tctggttgct 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
attcattagg acagcccctt 20
<210> 15
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
ccggcaaccc gtgatgt 17
<210> 16
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ccactaaact aaatcacatc gaaca 25
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gagaagagga gggtgtggtc 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
taggaattca gaatccgcct 20
Claims (6)
1.一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，包括：
提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；
若扩增得到下列任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因；
所述目标片段包括如SEQ ID NO .1~SEQ ID NO .6所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，所述PCR的扩增引物对包括如SEQ ID NO .7和SEQ ID NO .8所示的引物序列，或如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO .10所示的引物序列，或如SEQ ID NO .11和SEQ ID NO .12所示的引物序列，或如SEQ ID NO .13和SEQ ID NO .14所示的引物序列，或如SEQ ID NO .15和SEQ IDNO .16所示的引物序列，或如SEQ ID NO .17和SEQ ID NO .18所示的引物序列中的一对或多对。
3.根据权利要求1所述的一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，所述PCR的扩增体系：2×Taq PCR Mix预混液5 μL，50 ng/μL的上游引物1 μL，50 ng/μL的下游引物1 μL，50~100 ng/μL的模板DNA为1.5 μL，1.5 μL无菌去离子水，反应体系总体积为10 μL。
4.根据权利要求1所述的一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，所述PCR的扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，58℃退火45秒，72℃延伸30秒，运行35个循环；最后72℃延伸10分钟，PCR扩增产物在4℃保存。
5.一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的扩增引物对。
6.权利要求1~4任一所述方法或权利要求5所述的试剂盒在小麦遗传育种中的应用，其特征在于，用于快速鉴定中间偃麦草4St染色体。
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Applications Claiming Priority (1)
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-
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|---|
| 十个八倍体小偃麦的细胞学鉴定和染色体构成分析;亓晓蕾等;《作物学报》;20170731;第43卷(第07期);第967-973页 * |
| 小偃麦部分双二倍体及其异附加系异源染色体的GISH分析;吉万全等;《遗传学报》;19990410;第26卷(第02期);第163-167页 * |
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