CN111394491B - 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用 - Google Patents

蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111394491B
CN111394491B CN201910003980.3A CN201910003980A CN111394491B CN 111394491 B CN111394491 B CN 111394491B CN 201910003980 A CN201910003980 A CN 201910003980A CN 111394491 B CN111394491 B CN 111394491B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mushroom
sequence
delicious
primer
chinese
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910003980.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111394491A (zh
Inventor
赵瑞琳
凌志琳
王慧君
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Microbiology of CAS
Original Assignee
Institute of Microbiology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Microbiology of CAS filed Critical Institute of Microbiology of CAS
Priority to CN201910003980.3A priority Critical patent/CN111394491B/zh
Publication of CN111394491A publication Critical patent/CN111394491A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111394491B publication Critical patent/CN111394491B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用。本发明公开的蘑菇交配型分子标记，为A1)或A2)：A1)蘑菇基因组DNA中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸；A2)含有A1)的DNA片段。实验证明，利用本发明的蘑菇交配型分子标记可以成功鉴定蘑菇的交配型，且准确性高，进一步，将不同的同核体进行性亲和配对，可进行杂交育种选育具有优良性状的品系。

Description

蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域中，蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用。
背景技术
蘑菇属包含广泛栽培的食用菌如双孢蘑菇和姬松茸。蘑菇属的性亲和受到多等位基因交配型A因子控制，在交配型A位点具有相同等位基因的同核体性不亲和，交配型A位点具有不同等位基因的同核体性亲和。异宗配合中，蘑菇成熟子实体产生单核担孢子，萌发的初级菌丝为同核体,同核体菌丝不可育，具有不同交配型因子的同核体之间经质配形成异核体，异核体菌丝才能形成子实体并产生孢子。假同宗配合(或次级同宗配合)中，子实体产异核担孢子，其中包含交配型因子不同的两个细胞核(A1和A2)，异核担孢子萌发的菌丝可形成子实体并产孢。同宗配合中同核体菌丝可形成子实体并产孢。中国美味蘑菇生活史以异宗配合为主，存在部分假同宗配合。
蘑菇育种方法包括杂交育种和优良菌株选择育种。杂交育种中，性亲和的同核体杂交形成可育的异核体，因此选择同核体并识别其交配型非常关键。在蘑菇属物种中，同核体和异核体菌丝均为多核、无锁状联合，因此难以从细胞上区分。依据菌丝生长速率和性亲和配对实验来区分同核体和异核体，相较于分子标记可靠性较低并且耗时较长。裂解扩增多态性序列(CAPS)是根据DNA序列多态性开发的共显性分子标记，这种多态性一般反映等位基因多型性，比如单核苷酸多态性(SNP)或长度多态性(InDel)。
选择能准确反映交配型基因型的分子标记对有效区分同核体和异核体、鉴定同核体交配型至关重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴定蘑菇交配型，所述交配型为异核体和同核体。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了蘑菇交配型分子标记或检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在鉴定或辅助鉴定蘑菇交配型中的应用；
所述蘑菇交配型分子标记为A1)或A2)：
A1)蘑菇基因组DNA中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸；
A2)含有A1)的DNA片段。
上述应用中，A1)所述蘑菇交配型分子标记可为C或T；
A2)所述蘑菇交配型分子标记可为序列1或序列2所示的DNA片段。
上述应用中，所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质可包括检测所述蘑菇交配型分子标记的引物对，所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1为蘑菇基因组中与序列表中序列1的第220位上游特异结合的单链DNA，所述引物2为蘑菇基因组中与序列表中序列1的第220位下游特异结合的单链DNA。
上述应用中，所述引物1和所述引物2的序列分别可为序列表中序列3和4。
上述应用中，所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质可由所述引物对和限制性内切酶RsaI组成。
本发明还提供了鉴定或辅助鉴定蘑菇交配型的方法，所述交配型为A1型同核体、A2型同核体和异核体，所述方法包括：
检测待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸，根据该核苷酸确定所述待测蘑菇的交配型：如所述待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸仅为C，所述待测蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸仅为T，所述待测蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸为C和T，所述待测蘑菇为异核体蘑菇。
所述A1型同核体和所述A2型同核体均为同核体。
上述方法中，检测待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸可包括：利用引物1和引物2对所述待测蘑菇的基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物的序列，根据PCR扩增产物的序列确定所述待测蘑菇的基因型：
如所述PCR扩增产物的序列为序列1，所述待测蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述PCR扩增产物的序列为序列2，所述待测蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述PCR扩增产物的序列为序列1和2，所述待测蘑菇为异核体蘑菇；
所述引物1和所述引物2的序列分别为序列表中序列3和4。
上述方法中，检测所述PCR扩增产物的序列可通过测序进行，根据测序峰图是否存在双峰位点确定所述待测蘑菇的基因型：
如所述PCR扩增产物不存在双峰位点，所述待测蘑菇为同核体蘑菇；如所述PCR扩增产物存在双峰位点，所述待测蘑菇为异核体蘑菇。
上述方法中，检测待测蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸包括：利用引物1和引物2对所述待测蘑菇的基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；利用限制性内切酶RsaI酶切所述PCR扩增产物，得到酶切产物；检测所述酶切产物，根据所述酶切产物确定所述待测蘑菇的基因型：
如所述酶切产物为大小分别为218bp和187bp的两条DNA片段，所述待测蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述酶切产物为大小为405bp的DNA片段，所述待测蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述酶切产物为大小分别为405bp、218bp和187bp的三条DNA片段，所述待测蘑菇为异核体蘑菇；
所述引物1和所述引物2的序列分别为序列表中序列3和4。
检测所述酶切产物可为检测所述酶切产物的大小。检测所述酶切产物的大小可通过电泳或测序完成。
本发明还提供了蘑菇育种方法，所述方法包括：按照所述鉴定或辅助鉴定蘑菇交配型的方法鉴定待测蘑菇的基因型，选择A1型同核体和A2型同核体的蘑菇进行杂交完成蘑菇育种。
本发明还提供了下述X1)或X2)的产品：
X1)所述蘑菇交配型分子标记；
X2)所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质。
本发明还提供了下述任一应用：
Y1)所述蘑菇交配型分子标记在制备检测蘑菇交配型产品中的应用；
Y2)所述蘑菇交配型分子标记在蘑菇育种中的应用；
Y3)所述蘑菇交配型分子标记在生产蘑菇中的应用；
Y4)所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在制备检测蘑菇交配型产品中的应用；
Y5)所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在蘑菇育种中的应用；
Y6)所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在生产蘑菇中的应用；
Y7)所述鉴定或辅助鉴定蘑菇交配型的方法在蘑菇育种中的应用；
Y8)所述鉴定或辅助鉴定蘑菇交配型的方法在生产蘑菇中的应用。
本发明中，所述交配型为所述交配型为A1型同核体、A2型同核体和异核体，在蘑菇育种中，选择A1型同核体和A2型同核体的蘑菇进行杂交完成育种，所述杂交过程中，A1型同核体和A2型同核体发生细胞融合，产生异核化现象，得到异核体蘑菇。在蘑菇生产中，选择异核体蘑菇生产蘑菇。
本发明中，所述蘑菇可为中国美味蘑菇。所述待测蘑菇可为中国美味蘑菇。
在本发明的一个实施例中，所述中国美味蘑菇为中国美味蘑菇ZRL20160001及其单孢分离菌株，中国美味蘑菇ZRL20160001-SSI88(A1A2型异核体)、ZRL20160001-SSI65(A1型同核体)、ZRL20160001-SSI55(A2型同核体)已于2017年6月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号分别为CGMCC No.14341、CGMCC No.14343、CGMCC No.14342。
实验证明，利用本发明的蘑菇交配型分子标记可成功检测蘑菇的交配型，且准确性高，将不同的同核体进行性亲和配对，可进行杂交育种选育具有优良性状的品系。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：Agaricus sinodeliciosus
生物材料的菌株编号：ZRL20160001-S88
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2017年6月19日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.14341
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：Agaricus sinodeliciosus
生物材料的菌株编号：ZRL20160001-S55
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2017年6月19日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.14342
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：Agaricus sinodeliciosus
生物材料的菌株编号：ZRL20160001-S65
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2017年6月19日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.14343
附图说明
图1为序列比对结果。图1第1-7行左侧字符均为菌株编号。
图2为PCR产物的测序峰图和序列比对结果。上图为测序峰图，下图为两个单孢分离菌株的序列比对结果。其中峰图的双峰位置为序列的SNP位点，序列包括A1和A2型序列(即序列1和2)。
图3为酶切产物电泳图。其中，M为DNA分子量标准，对照表示菌株ZRL20160001-S88，其余泳道为单孢分离菌株，117-123均为A2型同核体，124-126均为A1型同核体。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA/RNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA/RNA的3′末端核苷酸。
实施例1、利用蘑菇交配型分子标记鉴定蘑菇交配型
本实施例发现了一个与中国美味蘑菇(Agaricus sinodeliciosus)交配型有关的分子标记，记为蘑菇交配型分子标记，该分子标记为蘑菇基因组DNA中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸，该分子标记在蘑菇基因组中为C和T。
在蘑菇基因组中，当蘑菇交配型分子标记仅为C时，目的蘑菇为同核体菌株；当蘑菇交配型分子标记仅为T时，目的蘑菇为同核体菌株；当蘑菇交配型分子标记为C和T时，目的蘑菇为异核体菌株。
1、蘑菇交配型的鉴定
提取7份中国美味蘑菇子实体标本基因组DNA，使用引物1和引物2对各标本基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物。引物1和2的序列分别为序列表中序列3和4。
所用扩增体系为：引物1 1μl,引物2 1μl，PCR mix 12μl(博迈得，北京)，ddH2O 10μl，DNA模板1μl。
扩增条件为：起始模板变性95℃，5min，模板变性94℃，30s，退火54℃，40s，延伸72℃，40s，35个循环，72℃，10min。
对扩增产物进行测序，检查测序峰图，各标本的交配型分子标记序列中均存在1个或2个SNP位点的差异，序列比对如图1所示，其中一个SNP位点为蘑菇基因组DNA中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸。
收集中国美味蘑菇ZRL20160001(标本保藏于中国科学院微生物研究所菌物标本馆，保藏编号为HMAS 281182)成熟子实体弹射的孢子，并用无菌水制成孢子悬浮液，梯度稀释后涂布到PDA固体培养基平板，25℃黑暗培养一段时间后，孢子萌发，将单个孢子萌发的菌丝分离转接到CYM固体培养基平板和斜面，25℃黑暗条件下培养，获得140个单孢分离菌株。
提取各单孢分离菌株的基因组DNA，利用引物1和引物2对各菌株的基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物。PCR产物DNA纯化后利用RsaI酶切，酶切产物使用2％琼脂糖凝胶电泳检测，利用亲本ZRL20160001以及其后代ZRL20160001-S88、ZRL20160001-S65和ZRL20160001-S55作为对照。中国美味蘑菇子实体后代中的三种交配型基因型的单孢分离菌株ZRL20160001-S88、ZRL20160001-S65和ZRL20160001-S55均已于2017年6月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号分别为CGMCC No.14341、CGMCCNo.14343、CGMCC No.14342。其中ZRL20160001-S88为A1A2型异核体，ZRL20160001-S65为A1型同核体，ZRL20160001-S55为A2型同核体。
结果显示，这140个单孢分离菌株中，有71株的酶切产物的电泳条带为两条(大小分别为218bp和187bp)，说明这71株菌株为同核体(记为A1型同核体)，测序结果显示，这71株菌株的扩增产物的序列均为序列表中序列1；有48株的酶切产物的电泳条带为一条(大小为405bp)，说明这48株菌株也为同核体(记为A2型同核体)，测序结果显示，这48株菌株的扩增产物的序列均为序列表中序列2；有21株的酶切产物的电泳条带为三条(大小分别为405bp、218bp和187bp)，说明这21株菌株为异核体，记为A1A2型异核体，测序结果显示，这21株菌株的扩增产物的序列均为序列表中序列1和2。部分菌株酶切产物的电泳结果如图3所示，图中对照为中国美味蘑菇ZRL20160001。
结果显示，使用交配型分子标记对ZRL20160001子实体的140个单孢分离菌株的交配型进行分析，鉴定出71株A1型同核体、48株A2型同核体，21株A1A2型异核体。将鉴定出的同核体进行性亲和试验，验证交配型分子标记是否准确反映该物种的交配型基因型。
2、性亲和试验
将步骤1鉴定出的A1型、A2型同核体菌丝进行两两配对，配对时将两个同核体接种在同一平板的不同位置，中间间隔约3cm，25℃黑暗条件下培养，每组配对设置3个重复。待两个同核体菌丝相互接触后，观察接触处菌丝生长的变化情况。菌丝接触区有新的、生长迅速的菌丝表明产生异核化现象，记为阳性反应；菌丝接触区无变化则为阴性反应，未发生异核化。
在所有的配对实验中，A1型同核体菌丝与A2型同核体菌丝配对均产生异核化现象，产生异核体，而A1型同核体菌丝与A1型同核体菌丝配对以及A2型同核体菌丝与A2型同核体菌丝配对均未发生异核化现象，表明在中国美味蘑菇中，利用蘑菇交配型分子标记鉴定同核体及其交配型准确性高。
3、出菇实验：
将步骤2杂交得到的异核体进行栽培，结果显示这些异核体均能形成子实体，表明A1型同核体菌丝与A2型同核体菌丝间发生质配，形成可育的异核体。
将步骤1鉴定出的异核体进行栽培，结果显示这些异核体均能形成子实体，表明，利用蘑菇交配型分子标记鉴定异核体准确性高。
以上实验说明，利用蘑菇交配型分子标记能对中国美味蘑菇的交配型进行准确的分类。将不同的同核体进行性亲和配对，可进行杂交育种选育具有优良性状的品系。
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 405
<212> DNA
<213> 中国美味蘑菇（Agaricus sinodeliciosus）
<400> 1
acaggcgcag atgattatgc gctcggcgcc agatgaggaa cctagaagaa gattatacat 60
tgcgtcgaat tcgagtgcgg agaaggatat caacacactg gaagagttgt tgagagctag 120
ggctgaattg gctaggttgg ttggcaggcg aagtttcgca catatgactc tggatgacaa 180
gatggccaaa acacctggtg agtgtctgtc cttgatgtac caggaaaagc accaacgaaa 240
cacagaaaat gtcgtgaatt tcttggatgc tcttagaaga cacacccggc cttctgctga 300
gagcgctctc cgcgctctaa gttcccgaaa acaggcgcac catggtctct cctcaccacc 360
cwtaattcaa gcctgggacc gtgactttta ttgcccacct gaacc 405
<210> 2
<211> 405
<212> DNA
<213> 中国美味蘑菇（Agaricus sinodeliciosus）
<400> 2
acaggcgcag atgattatgc gctcggcgcc agatgaggaa cctagaagaa gattatacat 60
tgcgtcgaat tcgagtgcgg agaaggatat caacacactg gaagagttgt tgagagctag 120
ggctgaattg gctaggttgg ttggcaggcg aagtttcgca catatgactc tggatgacaa 180
gatggccaaa acacctggtg agtgtctgtc cttgatgtat caggaaaagc accaacgaaa 240
cacagaaaat gtcgtgaatt tcttggatgc tcttagaaga cacacccggc cttctgctga 300
gagcgctctc cgcgctctaa gttcccgaaa acaggcgcac catggtctct cctcaccacc 360
cwtaattcaa gcctgggacc gtgactttta ttgcccacct gaacc 405
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acaggcgcag atgattatgc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggttcaggtg ggcaataaaa 20

Claims (8)

1.蘑菇交配型分子标记或检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在鉴定或辅助鉴定中国美味蘑菇交配型中的应用；
所述蘑菇交配型分子标记为序列1和序列2所示的DNA片段，其中，序列1的第220位核苷酸为C，序列2的第220位核苷酸为T。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质包括检测所述蘑菇交配型分子标记的引物对，所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1为蘑菇基因组中与序列表中序列1的第220位上游特异结合的单链DNA，所述引物2为蘑菇基因组中与序列表中序列1的第220位下游特异结合的单链DNA。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述引物1和所述引物2的序列分别为序列表中序列3和4。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质由所述引物对和限制性内切酶RsaI组成。
5.鉴定或辅助鉴定中国美味蘑菇交配型的方法，所述交配型为A1型同核体、A2型同核体和异核体，所述方法包括：
检测待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸，根据该核苷酸确定所述待测中国美味蘑菇的交配型：如所述待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸仅为C，所述待测中国美味蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸仅为T，所述待测中国美味蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸为C和T，所述待测中国美味蘑菇为异核体蘑菇。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：检测待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸包括：利用引物1和引物2对所述待测中国美味蘑菇的基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物的序列，根据PCR扩增产物的序列确定所述待测中国美味蘑菇的基因型：
如所述PCR扩增产物的序列为序列1，所述待测中国美味蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述PCR扩增产物的序列为序列2，所述待测中国美味蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述PCR扩增产物的序列为序列1和2，所述待测中国美味蘑菇为异核体蘑菇；
所述引物1和所述引物2的序列分别为序列表中序列3和4。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：检测待测中国美味蘑菇基因组中对应于序列表中序列1的第220位的核苷酸包括：利用引物1和引物2对所述待测中国美味蘑菇的基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；利用限制性内切酶RsaI酶切所述PCR扩增产物，得到酶切产物；检测所述酶切产物，根据所述酶切产物确定所述待测中国美味蘑菇的基因型：
如所述酶切产物为大小分别为218bp和187bp的两条DNA片段，所述待测中国美味蘑菇为A1型同核体蘑菇；如所述酶切产物为大小为405bp的DNA片段，所述待测中国美味蘑菇为A2型同核体蘑菇；如所述酶切产物为大小分别为405bp、218bp和187bp的三条DNA片段，所述待测中国美味蘑菇为异核体蘑菇；
所述引物1和所述引物2的序列分别为序列表中序列3和4。
8.下述任一应用：
Y1）权利要求1中所述蘑菇交配型分子标记在制备检测中国美味蘑菇交配型产品中的应用；
Y2）权利要求1-4中任一所述检测所述蘑菇交配型分子标记的物质在制备检测中国美味蘑菇交配型产品中的应用。
CN201910003980.3A 2019-01-03 2019-01-03 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用 Active CN111394491B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910003980.3A CN111394491B (zh) 2019-01-03 2019-01-03 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910003980.3A CN111394491B (zh) 2019-01-03 2019-01-03 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111394491A CN111394491A (zh) 2020-07-10
CN111394491B true CN111394491B (zh) 2021-12-28

Family

ID=71426973

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910003980.3A Active CN111394491B (zh) 2019-01-03 2019-01-03 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111394491B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112646920A (zh) * 2020-12-31 2021-04-13 杭州市农业科学研究院 一种秀珍菇同核体菌丝鉴定的InDel标记方法
CN115838821A (zh) * 2022-09-28 2023-03-24 上海市农业科学院 一种鉴定双孢蘑菇w192单孢菌株交配型的三引物组合物及鉴定方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5304721A (en) * 1992-06-18 1994-04-19 Sylvan Spawn Laboratory Incorporated Method for the production of high proportions of homokaryons in breeding stock of the mushroom Agaricus bisporus
CN101608213A (zh) * 2008-06-17 2009-12-23 上海市农业科学院 一种真姬菇交配型基因的鉴别方法
CN102732620A (zh) * 2012-06-11 2012-10-17 江南大学 一种快速鉴定啤酒酵母单倍体的方法
CN103184280B (zh) * 2013-02-04 2014-12-10 北京市农林科学院 鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对is-818
CN103276070B (zh) * 2013-05-20 2014-09-03 北京市农林科学院 鉴别花脸香蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-879b
WO2018013603A1 (en) * 2016-07-12 2018-01-18 Amycel, Inc. White hybrid mushrooms for commercial production
CN106434927A (zh) * 2016-09-30 2017-02-22 上海市农业科学院 一种中国美味蘑菇（Agaricus sinodeliciosus）的鉴定方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Offspring analysis using two CAPS markers in the edible mushroom Agaricus sinodeliciosus;Zhi-Lin Ling等;《中国菌物学会2018年学术年会论文汇编》;20180831;333 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111394491A (zh) 2020-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101095220B1 (ko) 배추 뿌리혹병 저항성 연관 분자표지 및 이의 용도
CN113584216B (zh) 小麦粒重基因TaCYP78A16的KASP标记开发及其应用
CN109468315B (zh) 水稻耐淹基因Sub1共显性分子标记及应用
CN111733281B (zh) 一种用于鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的分子标记及其应用
CN107312870B (zh) 与辣椒不育恢复基因紧密连锁的分子标记、方法及应用
CN109628628B (zh) 水稻抗稻瘟病基因Pi2的SNP标记的开发和应用
CN111394491B (zh) 蘑菇交配型分子标记及其在鉴定蘑菇交配型中的应用
WO2007125958A1 (ja) テンサイ黒根病抵抗性品種選抜マーカーとその選抜方法
CN115094156A (zh) 水稻耐高温基因tt1的kasp标记开发及其应用
CN111471790A (zh) 与小麦籽粒灌浆速率QTL QGfr.sicau-7D.1紧密连锁的分子标记及应用
CN112176080B (zh) 特异性检测剑麻紫色卷叶病植原体的巢式pcr引物组、试剂盒及检测方法
CN113528703A (zh) 水稻稻瘟病抗性基因Pid3-A4的KASP分子标记开发及其应用
CN116144831B (zh) 用于鉴定金耳单核体交配型的引物组合及鉴定方法
CN112813192A (zh) 小麦抗叶锈病基因Lr13的分子标记HBAU-LrZH22及其检测引物和应用
CN111378781A (zh) 一种快速高效鉴别水稻耐盐基因skc1的分子标记引物及应用
CN109161609B (zh) 小麦抗叶锈病基因Lr42的SNP分子标记、检测方法及应用
CN106636406B (zh) 与小麦寡分蘖基因Ltn3共分离的分子标记R207及其应用
CN105671053B (zh) 一种普通小麦高千粒重基因及其应用
CN112609018B (zh) 一种水稻粒型相关基因glw2的snp分子标记及其应用
CN111560460B (zh) 一组与大豆抗灰斑病7号生理小种性状相关的snp标记及其应用
CN115094158A (zh) 水稻稻瘟病抗性基因Pid4的KASP标记开发及其应用
CN109536633B (zh) 与玉米抗灰斑病主效QTL-qRgls2共分离的SNP标记及应用
CN109338004B (zh) 一种检测灰霉病菌对啶酰菌胺抗性的引物组合、试剂盒和方法
CN108546778B (zh) 一种用于检测黄瓜抗白粉病性状的snp分子标记及其应用
CN103789431B (zh) 辅助筛选和培育抗条锈病小麦新品系的专用引物、试剂和试剂盒及其选育方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant