CN113265440A - 一种复合酸化剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及酸化剂生物发酵工艺领域，具体是一种复合酸化剂、该复合酸化剂的制备方法及应用。该制备方法涉及五菌种的两轮补料发酵工艺，培养基成本较低，能够使对应菌种组合达成稳定的互惠共生关系，短链脂肪酸的总产出量较高且酸类成分的比例较为稳定。该复合酸化剂包括动物饲养领域公认具备益生作用的五种短链脂肪酸，益生效果稳定可靠。该应用涉及饲养用水领域，易于实施且能兼顾饲养动物的益生效果以及饮水的适口性。

Description

一种复合酸化剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及酸化剂生物发酵工艺领域，具体是一种复合酸化剂、该复合酸化剂的制备方法及应用。
背景技术
酸化剂作为一种动物饲料或饮水的添加剂已在国内外得到广泛应用，酸化剂能够改善肠道微生态环境、抑制和杀灭肠道内的致病微生物。不同种类酸性物质作为酸化剂在益生作用上存在一定差异，因此通常都会复配使用以加强效果。目前业内的主流产品为含无机酸和短链脂肪酸的复合酸化剂。由于通过化学方法制备的无机酸难免会引入有害物质，安全性上不如通过生物发酵途径制备的短链脂肪酸，因此有必要开发仅含短链脂肪酸的复合酸化剂。
短链脂肪酸作为酸化剂能够被后肠吸收，为饲养动物提供能量并降低渗透压，并且短链脂肪酸对于维持大肠的正常功能和结肠上皮细胞的形态和功能具有重要作用。通过多菌种混合发酵工艺能够直接产出复合酸化剂，但目前业内针对多菌种混合发酵产出复合酸化剂的研究还不够深入，如公布号为CN 109805175的发明专利申请公开的复合菌一步发酵方法，其发酵工艺较为简单，很难发挥出多菌种混合发酵的优势。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种涉及多菌种多轮补料混合发酵工艺的复合酸化剂制备方法。
本发明的第二目的在于提供一种通过上述制备方法获得的复合酸化剂。
本发明的第三目的在于提供上述复合酸化剂在饲养用水方面的应用。
为实现上述第一目的，本发明提供一种复合酸化剂的制备方法，其特殊之处在于，包括下列步骤：
S1：分别对凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种进行活化处理；
S2：将经过活化处理的凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种分别进行扩大培养得到处在对数生长期的凝结芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液、嗜酸乳杆菌种子液、丁酸梭菌种子液和巴氏醋酸菌种子液；
S3：向发酵罐中注入100体积份发酵培养基，随后接入3体积份凝结芽孢杆菌种子液和1体积份酿酒酵母种子液作为一级培养液，将一级培养液在30℃下厌氧培养36h至48h；
S4：在一级培养液中接入3体积份嗜酸乳杆菌种子液、3体积份丁酸梭菌种子液和5体积份巴氏醋酸菌种子液，再补充7至14体积份补料培养基后得到二级培养液，对二级培养液在30℃下进行24h至36h的厌氧培养后再补入7至14体积份的补料培养基，随后继续在30℃下厌氧培养36h至48h得到一轮发酵液；
S5：将一轮发酵液通过0.2μm孔径滤膜过滤至剩余17至20体积份后补充83至85体积份发酵培养基和10体积份补料培养基得到三级培养液，并以滤液作为一轮采出液；
S6：将三级培养液在37℃下厌氧培养36h至48h后补入10至17体积份补料培养基，随后继续在37℃下厌氧培养64h至72h得到二轮发酵液；
S7：对二轮发酵液执行高压均质处理充分破碎菌体后再经0.2μm孔径滤膜过滤得到二轮采出液，以一轮采出液和二轮采出液的混合液作为复合酸化剂。
发酵培养基包括70g/L至110g/L的玉米浆、60g/L至90g/L的甘蔗糖蜜、3g/L至5g/L的葡萄糖、2g/L至4.5g/L的蛋白胨、15g/L至35g/L的豆粕、150g/L至200g/L的麸皮浸出液、0.3g/L的硫酸锰和3g/L的磷酸二氢钾，发酵培养基的初始pH值为6.5±0.2。
补料培养基以麸皮浸出液作为溶剂，配制方法为在每升麸皮浸出液中溶解200g至240g的甘蔗糖蜜和250g至320g的玉米浆，补料培养基的初始pH值为7.0±0.2。
由上述方案可见，上述制备方法使用玉米浆、甘蔗糖蜜、豆粕、麸皮浸出液这些廉价易得的原料作为发酵培养基和补料培养基的碳源、氮源和生长因子，可有效降低生产成本。两轮发酵后期通过少量添加成分精简的高浓度补料培养基能够保证培养液的营养供给，使得多个菌种都能充分发挥产酸能力，菌种组合能够持续保持较高的产酸水平。
发酵环节使用的五种菌能达成稳定的互惠共生关系，一轮发酵中先接种的凝结芽孢杆菌和酿酒酵母可起到分解和改良培养基的作用，凝结芽孢杆菌除能产出乳酸和乙酸外还能产出氨基酸、维生素和多种消化酶，酿酒酵母可产出乙醇，这些产物有的可为后续接种的三种主力产酸菌提供必要的营养，有的则能将培养基进一步分解以便于充分利用。一轮发酵中后接种的巴氏醋酸菌可利用乙醇产出乙酸，嗜酸乳杆菌可产出乳酸和乙酸，丁酸梭菌的产酸种类较为丰富，涵盖了丁酸、乙酸、乳酸、丙酸和甲酸。因此，上述五种菌之间分工明确，一轮发酵通过分阶段培养可显著降低培养基的原料成本。
二轮发酵在更新过培养基后通过提高发酵温度能够提高三种主力产酸菌的生物活性，保证二轮发酵的产酸效率，同时还能抑制酿酒酵母的活性，从而维持酿酒酵母与产酸巴氏醋酸菌之间的物料供需平衡，保证二轮采出液中不含乙醇。二轮采出还涉及菌体的均质破碎处理，除能充分采出短链脂肪酸外还能采出多种胞内物质，进一步丰富复合酸化剂中的益生性成分。经过两轮发酵得到的复合酸化剂以乳酸、乙酸和丁酸作为主要成分，同时还含有少量的丙酸和甲酸，这五种短链脂肪酸的含量比例相对较为稳定，前期研究成果证实以对应比例的这五种酸作为饲养动物的饮用水酸化剂可发挥较为理想的益生作用，具体表现在降低腹泻率和料肉比上。
进一步的方案是，麸皮浸出液为食用小麦麸皮与水按照1:20的重量比混合后在118℃下蒸煮20min并放冷后滤得的滤液。
由上可见，根据国家农业部制定的NY/T 3218-2018，食用小麦麸皮的粗蛋白(干基)含量≥16％，以食用小麦麸皮通过上述提取工艺获得的麸皮浸出液制备发酵培养基和补料培养基可满足五菌种混合培养的营养需求。
进一步的方案是，玉米浆的干物质含量不少于30wt％，且蛋白质含量不少于30wt％。
由上可见，由于培养基用玉米浆目前尚无国家标准，生产实践中确定使用干物质及蛋白质含量最低均达到30wt％的玉米浆制备的发酵培养基和补料培养基即可满足五菌种混合培养的营养需求。
进一步的方案是，步骤S5和S7利用0.2μm孔径规格的陶瓷膜过滤器分别对一轮发酵液和经过高压均质处理的二轮发酵液进行循环过滤。
由上可见，陶瓷膜过滤器兼具高效过滤和精密过滤的优点，可满足本制备方法针对活菌过滤的需求。
进一步的方案是，步骤S7中利用高压均质机在80MPa压力条件下对二轮发酵液执行3至4轮循环高压均质处理。
由上可见，上述循环高压均质处理工艺能够充分破碎菌体并释放胞内产物，有助于提高二轮采出效率。
为实现上述第二目的，本发明提供一种复合酸化剂，其特殊之处在于，该复合酸化剂通过前述制备方法制成。
进一步的方案是，复合酸化剂的pH值为1.5至2，复合酸化剂包括主剂酸和辅剂酸，主剂酸包括乳酸、乙酸和丁酸，辅剂酸包括丙酸和甲酸。
由上可见，上述复合酸化剂包括动物饲养领域公认具备益生作用的五种短链脂肪酸，并且成分比例较为固定，益生效果稳定可靠。
为实现上述第三目的，本发明提供一种前述复合酸化剂在饲养用水领域的应用。
进一步的方案是，上述应用的具体方法为：
将复合酸化剂按照500g/t至1500g/t的比例添加至饮用水中作为饲养用水。
由上可见，由发酵液过滤得到的复合酸化剂中短链脂肪酸浓度较低，若要用作饲料添加剂还需进行浓缩处理，直接添加至饮用水中是较为简便的使用途径，生产实践中确定采取上述添加比例可兼顾饲养动物的益生效果以及饮水的适口性。
具体实施方式
本发明依照以下步骤制备复合酸化剂：
S1：从-80℃冷冻保存的甘油管中取出凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种并分别接入到对应的种子培养基中，完成接种后的凝结芽孢杆菌种子培养基、嗜酸乳杆菌种子培养基和丁酸梭菌种子培养基均置于恒温培养箱内在37℃下培养24h，完成接种后的酿酒酵母种子培养基和巴氏醋酸菌种子培养基则置于在恒温培养箱内在30℃下培养16h，从而实现五个菌种的活化处理；
S2：将经过活化处理的凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种按照1:20的体积比转接至对应的种子培养基中并在30℃下培养24h获得达到对数生长期的对应菌种一级种子液；随后将各一级种子液按照1:20的体积比转接至对应的种子培养基中并在30℃下再培养12h获得达到对数生长期的对应菌种二级种子液，后续以二级种子液作为对应菌种的种子液；两级种子液的培养终点均通过镜检确定，另外嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和巴氏醋酸菌需晚于凝结芽孢杆菌和酿酒酵母48h进行扩大培养；
S3：向发酵罐中注入100体积份发酵培养基，随后接入3体积份凝结芽孢杆菌种子液和1体积份酿酒酵母种子液作为一级培养液，在一轮发酵的第一阶段将一级培养液在30℃下厌氧培养36h至48h；
S4：在一级培养液中接入3体积份嗜酸乳杆菌种子液、3体积份丁酸梭菌种子液和5体积份巴氏醋酸菌种子液，再补充7至14体积份补料培养基后得到二级培养液，在一轮发酵的第二阶段将二级培养液在30℃下进行24h至36h的厌氧培养后再补入7至14体积份的补料培养基，随后继续在30℃下厌氧培养36h至48h得到一轮发酵液；
S5：利用孔径规格为0.2μm的陶瓷膜过滤器将一轮发酵液循环过滤至剩余17至20体积份后向发酵罐中补充83至85体积份发酵培养基和10体积份补料培养基得到三级培养液，并以滤液作为一轮采出液；
S6：进行二轮发酵，具体是将三级培养液在37℃下厌氧培养36h至48h后补入10至17体积份补料培养基，随后继续在37℃下厌氧培养64h至72h得到二轮发酵液；
S7：利用高压均质机在80MPa压力条件下对二轮发酵液执行3至4轮循环高压均质处理后再利用孔径规格为0.2μm的陶瓷膜过滤器进行过滤得到二轮采出液，混合一轮采出液和二轮采出液作为复合酸化剂。
需要注意的是，上述步骤S3、S4和S6的发酵终点实际均通过镜检来确定。
酿酒酵母种子培养基包括25g/L的白砂糖、10g/L的酵母浸粉、20g/L的蛋白胨、1g/L的硫酸锰、0.5g/L的磷酸二氢钾和2g/L的硫酸亚铁，该培养基的初始pH值为5.8±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
凝结芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌使用同一种子培养基，该种子培养基包括10g/L的蛋白胨、5g/L的牛肉粉、4g/L的酵母粉、20g/L的葡萄糖、1g/L的吐温80、2g/L的磷酸氢二钾、5g/L的醋酸钠、2g/L的柠檬酸三铵、0.2g/L的硫酸镁和0.05g/L的硫酸锰，该培养基的初始pH值为6.8±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
巴氏醋酸菌种子培养基包括10g/L的葡萄糖、10g/L的酵母膏和1g/L的碳酸钙，该培养基的初始pH值为6.5±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
丁酸梭菌种子培养基包括10g/L的胰蛋白酶、22g/L的酵母浸粉、26g/L的葡萄糖、1g/L的无水硫酸铵、0.2g/L的硫酸镁、1g/L的碳酸氢钠、0.2g/L的硫酸锰、0.2g/L的氯化钙和0.5g/L的半胱氨酸，该培养基的初始pH值为7.0±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
发酵培养基包括70g/L至110g/L的玉米浆、60g/L至90g/L的甘蔗糖蜜、3g/L至5g/L的葡萄糖、2g/L至4.5g/L的蛋白胨、15g/L至35g/L的豆粕、150g/L至200g/L的麸皮浸出液、0.3g/L的硫酸锰和3g/L的磷酸二氢钾。发酵培养基的初始pH值为6.5±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
补料培养基以麸皮浸出液作为溶剂，配制方法为在每升麸皮浸出液中溶解200g至240g的甘蔗糖蜜和250g至320g的玉米浆。补料培养基的初始pH值为7.0±0.2，灭菌温度为118℃，灭菌时长为20min。
以下各实施例和对比例使用的麸皮浸出液均为符合NY/T3218-2018的食用小麦麸皮与水按照1:20的重量比混合后在118℃下蒸煮20min并放冷后滤得的滤液；使用的玉米浆均来自山东恒仁工贸有限公司，并且干物质和蛋白质含量均不少于30wt％；使用的甘蔗糖蜜均符合QB/T 2684-2005标准，总糖分含量不少于48wt％；使用的豆粕均符合《GB/T19541-2017饲料原料豆粕》标准，总蛋白含量不少于48wt％。
以下各实施例和对比例使用的每一菌种均为相同型号的大泽农公司保藏菌种，且均为通过基因鉴定的自然菌种。具体地，凝结芽孢杆菌源自从土壤中分离得到一株凝结芽孢杆菌，将其序列结果输入NCBI数据库中进行16s rDNA序列同源性分析，确定该菌株与凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)的同源性≥99％，属于芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌；酿酒酵母源自从传统红茶菌中分离得到一株酿酒酵母，将其测序结果输入NCBI数据库中进行18srDNA序列同源性分析，测试菌株与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的同源性≥99％，属于酵母菌属酿酒酵母；巴氏醋酸菌源自从传统醋渣中分离得到一株巴氏醋酸菌，将其测序结果输入NCBI数据库中进行16s rDNA序列同源性分析，测试菌株与巴氏醋酸菌(Acetobacterpasteurianus)的同源性≥99％，属于醋酸菌属巴氏醋酸菌；嗜酸乳杆菌源自从奶制品中分离得到一株嗜酸乳杆菌，将其测序结果输入NCBI数据库中进行16s rDNA序列同源性分析，测试菌株与嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的同源性≥99％，属于乳杆菌属嗜酸乳杆菌；丁酸梭菌源自从土壤中分离得到一株丁酸梭菌，将其测序结果输入NCBI数据库中进行16s rDNA序列同源性分析，测试菌株与丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)的同源性≥99％，属于梭菌属丁酸梭菌；仅用于对比例的植物乳杆菌源自从泡菜中分离得到一株植物乳杆菌，将其测序结果输入NCBI数据库中进行16s rDNA序列同源性分析，测试菌株与植物乳杆菌(Lactobacilluplantarum)的同源性≥99％，属于乳杆菌属植物乳杆菌。
对比例中针对植物乳杆菌采用与凝结芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌相同的菌种活化及扩大培养方法，并且使用的种子培养基也完全一致。
实施例和对比例
实施例一至三以及对比例一至四均采用1000L规格带有恒温和搅拌功能的发酵罐进行发酵培养，发酵培养期间始终以75rpm至100rpm的转速实施搅拌，并且步骤S3中发酵培养基的添加量均为600L，即具体到每个实施例和对比例，每个体积份均为6L，实施例一至三以及对比例一至四的发酵培养基及补料培养基成分比例均参见表1。
表1：培养基成分表
Figure BDA0003082253460000081
注：上表中除“补料甘蔗糖蜜”和“补料玉米浆”栏反映的是补料培养基中对应成分的添加量外，其余栏均代表发酵培养基中对应成分的添加量。
实施例一按照前述流程制备复合酸化剂，步骤S3中凝结芽孢杆菌种子液的接种量为18L，酿酒酵母种子液的接种量为6L，厌氧培养时长为40h；步骤S4中在一级培养液的基础上添加18L嗜酸乳杆菌种子液、18L丁酸梭菌种子液、30L巴氏醋酸菌种子液和42L补料培养基得到二级培养液，对二级培养液进行24h厌氧培养后补入64L补料培养基，随后继续培养36h得到一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余102L后补充510L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6对三级培养液进行48h厌氧培养后补入60L补料培养基，随后继续培养64h得到二轮发酵液。
实施例二按照前述流程制备复合酸化剂，步骤S3和S4中五种菌的种子液接种量均与实施例一保持一致，步骤S3的厌氧培养时长为36h，步骤S4中在一轮发酵第二阶段开始前补充60L补料培养基，二级培养液经过32h厌氧培养后补入50L补料培养基，随后继续培养48h得到一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余120L后补充498L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6对三级培养液进行42h厌氧培养后补入90L补料培养基，随后继续培养68h得到二轮发酵液。
实施例三按照前述流程制备复合酸化剂，步骤S3和S4中五种菌的种子液接种量均与实施例一保持一致，步骤S3的厌氧培养时长为48h，步骤S4中在一轮发酵第二阶段开始前补充84L补料培养基，二级培养液经过36h厌氧培养后补入84L补料培养基，随后继续培养42h得到一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余108L后补充505L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6对三级培养液进行36h厌氧培养后补入102L补料培养基，随后继续培养72h得到二轮发酵液。
实施例一至三的总收率均达到95％，制得复合酸化剂的pH值均在1.5至2的范围内且不含乙醇。
对比例一基本按照前述流程制备复合酸化剂，但仅使用凝结芽孢杆菌、酿酒酵母、巴氏醋酸菌和嗜酸乳杆菌这四种菌制备复合酸化剂，因此步骤S1和S2不涉及丁酸梭菌的活化和扩大培养。步骤S3中凝结芽孢杆菌种子液的接种量为18L，酿酒酵母种子液的接种量为6L，厌氧培养时长为36h；步骤S4中在一级培养液的基础上添加18L嗜酸乳杆菌种子液、30L巴氏醋酸菌种子液和42L补料培养基得到二级培养液，对二级培养液进行36h厌氧培养后补入42L补料培养基，随后继续培养36h得到一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余102L后补充500L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6对三级培养液进行48h厌氧培养后补入100L补料培养基，随后继续培养64h得到二轮发酵液。
对比例二基本按照前述流程制备复合酸化剂，但在菌种选择方面以植物乳杆菌替换凝结芽孢杆菌，步骤S1和S2按照凝结芽孢杆菌的活化和扩大培养方法培育植物乳杆菌种子液，步骤S3中植物乳杆菌种子液的接种量为18L，酿酒酵母种子液的接种量为6L，厌氧培养时长为42h；步骤S4中在一级培养液的基础上添加18L嗜酸乳杆菌种子液、18L丁酸梭菌种子液、30L巴氏醋酸菌种子液和60L补料培养基得到二级培养液，对二级培养液进行36h厌氧培养后补入42L补料培养基，随后继续培养48h得到一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余110L后补充500L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6对三级培养液进行42h厌氧培养后补入80L补料培养基，随后继续培养68h得到二轮发酵液。
对比例三基本按照前述流程制备复合酸化剂，步骤S3和S4中五种菌的种子液接种量均与实施例一保持一致，但在一轮发酵第二阶段后期以及二轮发酵后期都不添加补料培养基。步骤S3的厌氧培养时长为48h，步骤S4中在一轮发酵第二阶段开始前补充80L补料培养基，并以经过36h厌氧培养的二级培养液作为一轮发酵液；步骤S5将一轮发酵液循环过滤至剩余108L后补充500L发酵培养基和60L补料培养基作为三级培养基；步骤S6以经过36h厌氧培养的三级培养液作为二轮发酵液。
对比例四基本按照前述流程制备复合酸化剂，步骤S3和S4中五种菌的种子液接种量均与实施例一保持一致，但不做二轮发酵。步骤S3的厌氧培养时长为48h，步骤S4中在一轮发酵第二阶段开始前补充80L补料培养基，对二级培养液进行36h厌氧培养后补入80L补料培养基，随后继续培养42h得到一轮发酵液，将一轮发酵液按照步骤S7执行均质和过滤处理，并以获得的采出液作为复合酸化剂。
复合酸化剂成分检测
采用HPLC-UV-DAD技术检测实施例一至三以及对比例一至四制备的复合酸化剂中乳酸、乙酸、丁酸、丙酸和甲酸的含量，仪器方面使用Agilent 1260Infinity II型高效液相色谱仪以及配套的Diode Array Detector WR型二极管阵列检测器。本检测方法采取等度洗脱，色谱分离条件如下：
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq(5μm 4.6mm×150mm)；
流动相：5％乙腈+95％0.02mol/L KH2PO4(pH2.0)；
流速：1.0mL/min；
进样量：10μL；
进样时间：标准品10min，样品30min；
柱温：35℃；
检测波长：210nm。
本检测方法涉及的试剂包括甲醇(色谱纯，主要用在洗柱和平衡流程中)、乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯，用于调节0.02mol/L KH2PO4溶液的pH)、磷酸二氢钾(无水、分析纯)，且使用的水均为色谱级超纯水。本检测方法使用Sigma-Aldrich的乳酸标准品和甲酸标准品，以及Dr.Ehrenstorfer的乙酸标准品、丙酸标准品和丁酸标准品分别配制浓度为26mg/mL的对应品种标准品母液，再量取五种短链脂肪酸的标准品母液各500μL混合得到2.5mL混合标准液，稀释环节取1mL混合标准液加至装有1mL水的10mL离心管中混匀，重复上述稀释步骤4次得到标准系列梯度，过0.22μm滤膜后加至进样瓶中。
将复合酸化剂样品在10000rpm转速条件下离心20min后取上清液，并用0.22μm滤膜过滤后装入进样瓶，跑样前还需对检测设备执行洗柱和平衡流程，本部分不做详细介绍，实施例一至三及对比例一至四对应的复合酸化剂的成分及具体含量如表2所示。
表2：实施例和对比例的复合酸化剂成分表
乳酸(g/L) 乙酸(g/L) 丁酸(g/L) 丙酸(g/L) 甲酸(g/L)
实施例一 27.96±0.82 30.15±0.78 20.13±0.56 7.03±0.27 3.24±0.20
实施例二 30.48±0.73 32.18±0.91 20.97±0.61 6.94±0.33 3.34±0.14
实施例三 29.34±0.85 30.76±0.69 21.82±0.47 7.87±0.21 3.94±0.12
对比例一 23.16±0.68 22.83±0.59 —— 1.55±0.14 0.78±0.05
对比例二 20.48±0.72 25.25±0.47 13.46±0.63 5.34±0.76 1.48±0.07
对比例三 21.24±0.61 26.83±0.45 15.35±0.47 4.79±0.42 1.98±0.06
对比例四 17.49±0.62 46.52±0.68 2.93±0.41 1.78±0.26 ——
注：每个实施例和对比例都检测了三个平行样，每格中的数据实际给出了每组三个平行样的检测值范围，数据在“±”前的部分代表三个平行样的检测值中位数。
从表2可以看出，实施例一至三制得的复合酸化剂中五种短链脂肪酸的含量均较为稳定，复合酸化剂以乳酸、乙酸和丁酸作为主要成分，并且含有少量的丙酸和甲酸。
对比例一仅涉及四菌种的混合发酵，并未使用丁酸梭菌，对应菌种组合总体产短链脂肪酸的能力相对三个实施例差距明显，且产物中不含丁酸。对比例二使用植物乳杆菌替代凝结芽孢杆菌，对应菌种组合总体产短链脂肪酸的能力也明显弱于三个实施例，表明即使都为同型发酵乳酸菌，由于植物乳杆菌在产酶及维生素方面的能力较弱，即改良发酵培养基营养条件的能力较差，因此相同培养条件下对应菌种组合的营养供应较差，产酸量也相应偏低。综上，通过将三个实施例与对比例一和二进行比较可知本发明采用的五个菌种在对应发酵工艺下能够达成良好的互惠共生关系，对应菌种组合整体产短链脂肪酸的能力较强。
对比例三由于一轮发酵第二阶段后期以及二轮发酵后期都不添加补料培养基，实际发酵周期较短，不能充分发挥菌种组合的产酸能力，会带来产酸量方面的损失。对比例四则只做第一轮发酵，会进一步限制菌种组合产酸能力的发挥，因此产物中五种短链脂肪酸的含量都远低于三个实施例，甚至都检不出甲酸。综上，通过将三个实施例与对比例三和四进行比较可知本发明采取的两轮补料发酵工艺能够充分发挥预设菌种组合的产酸能力，保证产品中各种短链脂肪酸都达到目标含量。
抑菌效果测试
取实施例一至三以及对比例一至四制备的复合酸化剂分别进行针对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌这四种指示菌的抑菌效果测试。
复合酸化剂针对产气荚膜梭菌的抑菌效果测试使用1.0×108cfu/mL的产气荚膜梭菌菌液，先在无菌培养皿中倒入15mL TSC琼脂培养基，凝固后涂布100μL浓度上述菌液，在培养基上放置牛津杯，再倒入冷却至40℃的TSC琼脂培养基，凝固后轻轻取出牛津杯，在牛津杯对应的孔中加入100μL复合酸化剂，随后将培养皿加盖并置于37℃恒温条件下培养24h后观察并测量抑菌圈直径。
复合酸化剂针对另外三种指示菌也可参考上述方法进行抑菌效果测试，具体使用1.0×108cfu/mL的金黄色葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液和沙门氏菌菌液，在无菌培养皿中倒入15mL的Baird-Parker琼脂培养基，凝固后涂布100μL单一品种上述菌液，将牛津杯均匀放置在培养基上，稍微下压使其与培养基之间接触面无空隙，在牛津杯中加入100μL复合酸化剂，随后将培养皿加盖并置于37℃恒温条件下培养24h后观察并测量抑菌圈直径。
三个实施例以及四个对比例制备的复合酸化剂针对四种指示菌的抑菌测试结果如表3所示，从表3可以看出，对应于三个实施例的复合酸化剂由于短链脂肪酸的总含量较高且各种酸的比例适宜，针对四种指示菌都表现出了较好的抑菌效果，且针对不同指示菌的抑菌效果差异较小，针对大肠杆菌的抑菌效果最为突出。而对应于四个对比例的复合酸化剂由于短链脂肪酸的总含量偏低且各种酸之间的比例不稳定，针对四种指示菌的抑菌效果较实施例弱，且针对不同指示菌的抑菌效果差异也较大。综上，通过比较实施例和对比例的抑菌测试结果可以看出，本发明五菌种两轮补料发酵工艺产出的复合酸化剂的抑菌效果稳定可靠，且针对四种常见的肠道致病菌都有良好的抑菌效果。
表3：复合酸化剂对于4种指示菌的抑菌效果
产气荚膜梭菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 沙门氏菌
实施例一 18.45±0.33c 19.12±0.39c 23.54±0.42c 19.98±0.51c
实施例二 18.67±0.25c 19.45±0.33c 24.13±0.27d 20.23±0.44cd
实施例三 18.83±0.46c 19.56±0.38c 24.65±0.53de 20.31±0.46cd
对比例一 9.37±0.23a 10.13±0.31a 13.53±0.27a 11.44±0.39a
对比例二 10.33±0.18b 13.03±0.42b 16.82±0.36b 18.96±0.47b
对比例三 9.97±0.34d 12.06±0.35d 15.49±0.26f 17.57±0.45e
对比例四 8.34±0.16e 9.54±0.22e 12.45±0.26g 10.96±0.31f
注：每个实施例和对比例都做了三个平行样，每格中的数据实际给出的是每组样品的检测值范围，数据在“±”前的部分代表三个平行样的检测值中位数。另外上表中通过对数据标注不同字母来表示显著性差异情况，字母完全不同的组代表差异显著P＜0.05，字母不完全相同的组代表有一定的趋势0.05＜P＜0.1，表格中各抑菌圈直径数据均已排除空白对照的影响。
动物养殖试验
选取杜长大三元断奶仔猪960头，随机分为4组，每组设置4个重复，每个重复60头，4个组分别为对照组、试验组一、试验组二和试验组三。对照组使用普通饮用水作为饲养用水，三个试验组均以添加过实施例一制备的复合酸化剂的饮用水作为饲养用水，试验组一按照每吨饮用水500g复合酸化剂的比例进行添加，试验组二按照每吨饮用水1000g复合酸化剂的比例进行添加，试验组三按照每吨饮用水1500g复合酸化剂的比例进行添加，对照组和三个试验组均饲喂同种饲料，试验期为30天。试验期间密切观察各重复仔猪的采食、饮水情况以及健康状况，记录各重复仔猪的每日采食量，并计算平均日采食量和料肉比，观察各重复仔猪的每日腹泻情况并计算腹泻率。试验开始和结束当天以重复为单位，对仔猪进行空腹称重，计算平均日增重，相关计算方法如下：
料肉比＝全期饲料消耗量/全期仔猪增重；
腹泻率(％)＝【试验期内腹泻仔猪头数/(试验仔猪头数×试验天数)】×100％。(注：“试验期内腹泻仔猪头数”为试验期内每日发生腹泻的仔猪头数之和)
动物养殖试验的结果如表4所示，从表4可以看出以较低添加比例(500g/t至1500g/t)将本发明制备的复合酸化剂添加至饮用水中得到的饲养用水能够有效控制断奶仔猪的腹泻情况，同时还能促进断奶仔猪的生长并降低料肉比。综合考虑饲喂成本、益生效果和适口性后可确定以1000g/t的添加比例将本发明制备的复合酸化剂添加至饮用水中作为饲养用水可发挥其针对仔猪的最佳益生效果。
表4：不同复合酸化剂添加比例下的饲养用水对仔猪体重及腹泻率的影响
对照组 试验组一 试验组二 试验组三
初重/kg 7.58±0.12 7.48±0.14 7.52±0.15 7.56±0.16
末重/kg 18.42±0.25a 18.77±0.31ab 19.26±0.23c 18.95±0.21b
平均日增重/g 361.33±10.02a 376.67±11.21ab 391.33±7.67ab 379.67±9.56b
平均日采食量/g 614.27±13.21 632.80±14.31 624.25±10.74 622.65±10.82
料肉比 1.70±0.03a 1.68±0.05ab 1.60±0.04c 1.64±0.03bc
腹泻率/％ 4.6 3.1 1.9 2.7
注：上表中通过对数据标注不同字母来表示显著性差异情况，字母完全不同的组代表差异显著P＜0.05，字母不完全相同的组代表有一定的趋势0.05＜P＜0.1。

Claims (9)

1.一种复合酸化剂的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
S1：分别对凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种进行活化处理；
S2：将经过活化处理的凝结芽孢杆菌菌种、酿酒酵母菌种、嗜酸乳杆菌菌种、丁酸梭菌菌种和巴氏醋酸菌菌种分别进行扩大培养得到处在对数生长期的凝结芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液、嗜酸乳杆菌种子液、丁酸梭菌种子液和巴氏醋酸菌种子液；
S3：向发酵罐中注入100体积份发酵培养基，随后接入3体积份凝结芽孢杆菌种子液和1体积份酿酒酵母种子液作为一级培养液，将一级培养液在30℃下厌氧培养36h至48h；
S4：在一级培养液中接入3体积份嗜酸乳杆菌种子液、3体积份丁酸梭菌种子液和5体积份巴氏醋酸菌种子液，再补充7至14体积份补料培养基后得到二级培养液，对二级培养液在30℃下进行24h至36h的厌氧培养后再补入7至14体积份的补料培养基，随后继续在30℃下厌氧培养36h至48h得到一轮发酵液；
S5：将一轮发酵液通过0.2μm孔径滤膜过滤至剩余17至20体积份后补充83至85体积份发酵培养基和10体积份补料培养基得到三级培养液，并以滤液作为一轮采出液；
S6：将三级培养液在37℃下厌氧培养36h至48h后补入10至17体积份补料培养基，随后继续在37℃下厌氧培养64h至72h得到二轮发酵液；
S7：对二轮发酵液执行高压均质处理充分破碎菌体后再经0.2μm孔径滤膜过滤得到二轮采出液，以一轮采出液和二轮采出液的混合液作为复合酸化剂；
发酵培养基包括70g/L至110g/L的玉米浆、60g/L至90g/L的甘蔗糖蜜、3g/L至5g/L的葡萄糖、2g/L至4.5g/L的蛋白胨、15g/L至35g/L的豆粕、150g/L至200g/L的麸皮浸出液、0.3g/L的硫酸锰和3g/L的磷酸二氢钾，发酵培养基的初始pH值为6.5±0.2；
补料培养基以麸皮浸出液作为溶剂，配制方法为在每升麸皮浸出液中溶解200g至240g甘蔗糖蜜和250g至320g玉米浆，补料培养基的初始pH值为7.0±0.2。
2.如权利要求1所述的复合酸化剂的制备方法，其特征在于：
所述麸皮浸出液为食用小麦麸皮与水按照1:20的重量比混合后在118℃下蒸煮20min并放冷后滤得的滤液。
3.如权利要求1所述的复合酸化剂的制备方法，其特征在于：
所述玉米浆的干物质含量不少于30wt％，且蛋白质含量不少于30wt％。
4.如权利要求1所述的复合酸化剂的制备方法，其特征在于：
步骤S5和S7利用0.2μm孔径规格的陶瓷膜过滤器分别对一轮发酵液和经过高压均质处理的二轮发酵液进行循环过滤。
5.如权利要求1所述的复合酸化剂的制备方法，其特征在于：
步骤S7中利用高压均质机在80MPa压力条件下对二轮发酵液执行3至4轮循环高压均质处理。
6.一种复合酸化剂，其特征在于：
该复合酸化剂通过如权利要求1至5中任意一项所述的制备方法制成。
7.如权利要求6所述的复合酸化剂，其特在于：
包括主剂酸和辅剂酸，所述主剂酸包括乳酸、乙酸和丁酸，所述辅剂酸包括丙酸和甲酸，该复合酸化剂的pH值为1.5至2。
8.权利要求6所述的复合酸化剂在饲养用水中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，该应用的具体方法为：
将所述复合酸化剂按照500g/t至1500g/t的比例添加至饮用水中作为饲养用水。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107828698A (zh) * 2017-12-01 2018-03-23 广州金水动物保健品有限公司 一种复合菌制剂及其制备方法和应用
CN108130296A (zh) * 2018-01-17 2018-06-08 厦门昶科生物工程有限公司 一种丁酸梭菌高密度连续发酵的方法及丁酸梭菌微生态制剂的制备方法
CN109805175A (zh) * 2018-12-29 2019-05-28 华南协同创新研究院 一种酸化剂、其复合菌一步发酵制备方法与应用
CN109943617A (zh) * 2017-12-21 2019-06-28 鼎唐能源科技股份有限公司 生产丁酸及／或其盐类的方法
CN111500508A (zh) * 2020-05-31 2020-08-07 郑州大学 一种丁酸梭状芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌液体混合发酵方法
CN111513177A (zh) * 2020-04-09 2020-08-11 宁夏乙征生物工程有限公司 一种中草药发酵饲料的制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107828698A (zh) * 2017-12-01 2018-03-23 广州金水动物保健品有限公司 一种复合菌制剂及其制备方法和应用
CN109943617A (zh) * 2017-12-21 2019-06-28 鼎唐能源科技股份有限公司 生产丁酸及／或其盐类的方法
CN108130296A (zh) * 2018-01-17 2018-06-08 厦门昶科生物工程有限公司 一种丁酸梭菌高密度连续发酵的方法及丁酸梭菌微生态制剂的制备方法
CN109805175A (zh) * 2018-12-29 2019-05-28 华南协同创新研究院 一种酸化剂、其复合菌一步发酵制备方法与应用
CN111513177A (zh) * 2020-04-09 2020-08-11 宁夏乙征生物工程有限公司 一种中草药发酵饲料的制备方法
CN111500508A (zh) * 2020-05-31 2020-08-07 郑州大学 一种丁酸梭状芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌液体混合发酵方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QUAN ZHOU等: "Kinetic modeling of lactic acid and acetic acid effects on butanol fermentation by clostridium saccharoperbutylacetonicum", 《FUEL.》 *

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