CN113264873A - 一种依托考昔的纯化及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种依托考昔的纯化方法，包括以下操作：使待纯化的依托考昔原料药与还原剂在溶剂中发生还原反应。还涉及一种制备依托考昔的方法。采用本发明所述的制备方法得到的依托考昔成品纯度大于99.9％，杂质F、杂质20和杂质21的总含量小于0.001％，杂质M未检测到。

Description

一种依托考昔的纯化及制备方法

本申请是申请号为201910047064.X、申请日为2019年1月18日、发明名称为“一种依托考昔的纯化及制备方法”的分案申请。

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种纯化依托考昔的方法，还涉及一种制备依托考昔的方法。

背景技术

依托考昔(etoricoxib)是一种高选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂，具有抗炎、镇痛和解热作用，由默沙东公司研发、生产，目前已在全球84个国家和地区上市。依托考昔通过抑制COX-2，减少前列腺素和血栓素生成而发挥解热镇痛抗炎作用，具有起效快、镇痛强，半衰期长、胃肠道反应轻等优点，其临床疗效较传统非甾体抗炎药(NSAIDs)有所提高，同时可以降低胃肠道等不良反应发生率，是已经证实的治疗急性痛风性关节炎有效的昔布类药物。

在原料药中，任何影响药品纯度的物质均称为杂质。《化学药物杂质研究的技术指导原则》对杂质限度的制定提出了明确的要求。同时，在ICH(人用药品注册技术要求国际协调会议)指南中，对于Q3A(R2)新原料药中的杂质和Q3B(R2)新制剂中的杂质的定性和控制进行了详细描述。杂质中有一类是基因毒性杂质(或称为遗传毒性杂质，GenotoxicImpurity，GTI)，是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。其特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。

目前，合成依托考昔的方法主要是采用麦克公司报道的方法(参见CN 1306425A，实施例2)，该方法以AYTKX01和AYTKX02为原料，经过一锅法合成依托考昔，不分离中间体AYTKX04。用此法得到的产品纯度较低，不易结晶，并且杂质多，尤其是杂质M，其含量大于0.1％，由于其理化性质与原料相近，不易除去，需经过多次精制才能控制限度在0.1％以下，收率损失较大。

在依托考昔合成过程中，还不可避免会产生吡啶氮氧化物杂质F，也可能会产生杂质20和杂质21。其中吡啶氮氧化物属于潜在的基因毒性杂质。

根据ICH M7对于基因毒性杂质的控制要求，按照TTC计算可接受摄入量时，一个具有诱变性的杂质每天每人摄入1.5μg时其风险被认为是可以忽略的(终生暴露情况下理论的患癌风险小于十万分之一)。由于杂质F、杂质20和杂质21属于同一类杂质，其总量应当按照1.5μg/天进行控制。目前，依托考昔制剂最大规格为120mg，经计算得到，依托考昔制剂中杂质F、杂质20和杂质21的含量限度应为0.00125％。

如何进一步减少依托考昔原料药中的杂质含量，是本领域技术人员一致致力解决的问题。

发明内容

本发明涉及一种依托考昔的纯化方法，包括以下操作：

使待纯化的依托考昔原料药与还原剂在溶剂中发生还原反应。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的还原剂为还原性金属或三卤化磷。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的还原剂为还原性金属，所述还原反应在酸的存在下进行待纯化的依托考昔原料药。优选地，所述还原反应的反应温度为50-65℃，更优选为60-65℃。优选地，所述还原反应的反应时间为2-4小时，更优选为2-3小时。优选地，还原剂与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.1-1.0)：1。优选地，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的酸选自醋酸、盐酸、硫酸、氯化铵等，优选为氯化铵或醋酸。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的还原性金属为锌或铁。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中还原剂为锌，锌与依托考昔原料药的摩尔比为(0.1-1.0)：1(例如0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1(例如0.15：1，0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)；

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中还原剂为铁，铁与依托考昔原料药的摩尔比为(0.1-1.0)：1(例如0.2：1，0.3：1，0.4：1，0.5：1，0.6：1，0.7：1，0.8：1或0.9：1)，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1(例如0.15：1，0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的三卤化磷为三氯化磷或三溴化磷，优选为三氯化磷；优选地，所述还原反应的反应温度为20-65℃，更优选为20-25℃；优选地，所述还原反应的反应时间为0.25-2小时，更优选反应时间为0.25-0.5小时；优选地，三卤化磷与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-0.15)：1，更优选用量为(0.06-0.1)：1。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法，其中所述的溶剂为四氢呋喃。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法还包括：析晶的步骤，

在某些实施方案中，所述析晶包括：

反应结束后，反应液过滤，向滤液中加水析出晶体；

用四氢呋喃和水的混合溶液洗涤所得晶体，干燥。

在某些实施方案中，所述析晶包括：

反应结束后，向反应液中加入碱(例如氢氧化钠)调节pH值为9-10，加水析出晶体；

用四氢呋喃和水的混合溶液洗涤所得晶体，干燥。

在某些实施方案中，本发明所述的纯化方法还包括转晶的步骤，

在某些实施方案中，所述转晶包括：

1)将待转晶的晶体溶于醋酸异丙酯，降温析晶；

2)可选地，将所析出的晶体再次溶于醋酸异丙酯，控制温度在60～70℃加入晶种，保温2～3小时，降温析晶。

本发明还涉及一种制备依托考昔的方法，包括以下操作：

1)获得依托考昔原料药，

2)采用本发明所述的纯化方法对依托考昔原料药进行纯化。

在某些实施方案中，获得依托考昔原料药的方法包括：

使化合物AYTKX04发生闭环反应，得到依托考昔原料药(AYTKX05)

在某些实施方案中，所述闭环反应在有机溶剂中并且在碱的存在下进行，

优选地，所述有机溶剂为四氢呋喃，

优选地，所述碱为浓氨水，

优选地，所述闭环反应的反应温度为60-65℃，

优选地，所述闭环反应的反应时间为3-4小时，

优选地，所述闭环反应结束后，分液，向有机相中加入碳酸氢钠，析出固体。

在某些实施方案中，本发明所述化合物AYTKX04的制备方法包括：

使化合物AYTKX01与化合物AYTKX02发生缩合反应，得到化合物AYTKX04，

在某些实施方案中，所述缩合反应在有机溶剂中，在缩合剂的存在下，并且在氮气保护下进行，

优选地，所述的有机溶剂为四氢呋喃；

优选地，所述的缩合剂为叔丁醇钾；

优选地，所述的缩合反应包括：将化合物AYTKX01加入到有机溶剂中，氮气保护，加入叔丁醇钾，于15-20℃反应10～20分钟，加入化合物AYTKX02，于30-35℃反应0.8～1.5小时，将反应液倒入醋酸中，于30～40℃反应0.8～1.5小时，析出黄色固体，加入正庚烷，降温至5-10℃搅拌，抽滤，得到化合物AYTKX04。优选地，抽滤后将滤饼用THF/正庚烷(例如1:1(v/v))混合溶液洗涤，得到化合物AYTKX04。

在某些实施方案中，本发明所述化合物AYTKX01的制备方法包括：

使化合物AYTKX17与氧化剂发生氧化反应，得到化合物AYTKX01，

优选地，所述氧化反应在有机溶剂中，在催化剂的存在下进行；

优选地，所述的有机溶剂为甲醇；

优选地，所述的催化剂为钨酸钠；

优选地，所述的氧化剂为双氧水；

优选地，所述双氧水的浓度为5％-30％，优选10％；

优选地，双氧水与化合物AYTKX17用量摩尔比为(2.2-3.5)：1，优选2.2：1；

优选地，所述的氧化反应包括：将化合物AYTKX17加入到甲醇中，加钨酸钠，搅拌，缓慢滴加双氧水，滴加完毕反应1.5～2.5小时，加入亚硫酸钠溶液，搅拌，降温至5-10℃搅拌0.8～1.2小时，抽滤，干燥得淡黄色固体，将淡黄色固体加入到乙腈和水的混合溶液中，搅拌，析晶。

本发明的有益技术效果

本发明提供的纯化方法，可以有效去除依托考昔中的基因毒性杂质F、杂质20和杂质21。采用本发明提供的纯化方法对依托考昔原料药进行纯化，得到依托考昔成品中杂质F、杂质20和杂质21的总含量小于0.001％，杂质M未检测到，产品纯度大于99.9％。

此外，本发明提供的制备依托考昔的方法，在用AYTKX01和AYTKX02制备依托考昔的过程中，不采用一锅法操作，而是将中间体AYTKX04分离，然后使之发生闭环反应，得到依托考昔。该方法可以有效提高产品纯度，控制杂质M含量，最终成品中检测不到杂质M。

具体实施方式

下面结合本发明的具体实施例来进一步说明本发明的实质性内容，应理解，以下实施例仅用于说明本发明，但并不以此来限定本发明的保护范围。下面实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的进行。所用药品或试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

虽然以下实施例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，如果未特别说明，下面实施例中所用的材料和操作方法是本领域公知的。

在本发明的实施例中，依托考昔的制备流程如下所示：

在本发明的实施例中，化合物AYTKX17(购于广东莱佛士制药技术有限公司，化学名称为1-(6-甲基-3-吡啶)-2-[4-(甲巯基)苯基]-乙酮，批号为ET04-170112-13)

在本发明的实施例中，化合物AYTKX02(购于广东莱佛士制药技术有限公司，化学名称为2-氯-1,3-双(二甲氨基)三亚甲六氟磷酸盐，批号为ET11-170526-01)

在本发明的实施例中，采用高效液相色谱法检测样品中的杂质M的含量，检测方法如下：

1、色谱条件

高效液相色谱仪：waters e2695-2489

检测器：紫外

色谱柱：Inertsil ODS-3V，4.6×250mm，3μm

2％磷酸溶液的配制：量取磷酸2ml，加水至100ml，摇匀备用。

0.02M磷酸二氢钠溶液(pH2.95±0.05)的配制：取磷酸二氢钠一水合物约2.76g，精密称定，加水1000ml溶解，混匀，用2％磷酸溶液调节pH至2.95，用0.45μm滤膜滤过，备用。

流动相的配制：量取0.02M磷酸二氢钠溶液(pH2.95±0.05)740ml，乙腈260ml，混匀，超声3～5min。

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

进样量：50μl

检测波长：235nm

2、溶液配制

空白溶液配制：取流动相适量，作为空白溶液。

依托考昔对照品贮备液I的配制：取依托考昔对照品约5mg，精密称定，置100ml量瓶，加乙腈-水(1:1(v/v))溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

杂质M对照品贮备液I的配制：取杂质M对照品约5mg，精密称定，分别置于不同的100ml量瓶，加乙腈-水(1:1(v/v))溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

依托考昔对照品贮备液II的配制：精密量取依托考昔对照品贮备液I1.0ml，置于10ml量瓶，加乙腈-水(1:1(v/v))稀释至刻度，即得。

杂质M对照品贮备液II的配制：精密量取杂质M对照品贮备液I 1.0ml，置于10ml量瓶，加乙腈-水(1:1)稀释至刻度，摇匀，即得。

混合对照品溶液配制：精密量取依托考昔对照品贮备液II 1.0ml和杂质M对照品贮备液II 1.0ml，置于同一50ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液的配制：取依托考昔对照品约5mg，精密称定，置于50ml量瓶，再精密量取杂质M对照品贮备液II 1.0ml，置同一50ml量瓶，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

供试品溶液的配制：取供试品约10mg，精密称定，置于100ml量瓶，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3、系统适用性试验

精密量取系统适用性溶液50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论塔板数按依托考昔峰计算应不低于5000，依托考昔峰与杂质M峰之间的分离度应不小于2.0。

4、测定

精密量取混合对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使混合对照品中主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的10～20％，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

空白溶液的色谱图中，主峰位置及各杂质峰位置无干扰。混合对照品溶液连续进样6针的色谱图中，主峰和各杂质峰面积RSD应不大于10％，各质控混合对照品溶液的色谱图中主峰和各杂质峰面积RSD不得大于15％。

5、结果计算

采用外标法以峰面积计算，公式如下：

式中：

A_杂＝供试品溶液中单个已知杂质的峰面积

A_杂对＝混合对照品溶液中杂质峰面积

C_供＝供试品溶液浓度

C_杂对＝混合对照品溶液中杂质对照品的浓度

P_杂对＝杂质对照品纯度

在本发明的实施例中，采用高效液相色谱法检测样品中的杂质F、杂质20和杂质21的含量，检测方法如下：

1、色谱条件

高效液相色谱仪：waters e2695-2489

检测器：紫外

色谱柱：Inertsil ODS-3V，4.6×250mm，3μm

2％磷酸溶液的配制：量取磷酸2ml，加水至100ml，摇匀备用。

0.02M磷酸二氢钠溶液(pH＝2.95±0.05)的配制：取磷酸二氢钠一水合物约5.52g，精密称定，加水2000ml使溶解，混匀，用2％磷酸溶液调节pH至2.95，用0.45μm滤膜滤过，备用。

流动相A的配制：量取0.02M磷酸二氢钠溶液(pH＝2.95±0.05)900ml，乙腈100ml，混匀，超声3～5min。

流动相B的配制：量取0.02M磷酸二氢钠溶液(pH＝2.95±0.05)200ml，乙腈800ml，混匀，超声3～5min。

按下表进行梯度洗脱：

柱温：35℃

流速：1.0ml/min

进样量：50μl

检测波长：235nm

2、溶液配制

溶剂配制：量取0.02M磷酸二氢钠溶液(pH＝2.95±0.05)740ml，乙腈260ml，混匀。

混合对照品溶液配制：取杂质21、杂质F对照品各约5mg(由于杂质F与杂质20出峰时间一致，故只称取杂质F和杂质21进行样品配制)，精密称定，置于不同的100ml量瓶，加乙腈-水(1:1(v/v))溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质对照品贮备液I。分别精密量取杂质21和杂质F对照品贮备液I1.0ml，置于不同的100ml量瓶，加乙腈-水(1:1(v/v))稀释至刻度，摇匀，作为杂质21和杂质F对照品贮备液II。再分别精密量取杂质21和杂质F对照品贮备液Ⅱ各1.0ml，置同一50ml量瓶，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

供试品溶液配制：取供试品约10mg，精密称定，置于10ml量瓶，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3、测定

精密量取混合对照品溶液、供试品溶液和空白溶剂各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。空白溶剂中，各杂质峰位置无干扰。混合对照品溶液6针各杂质峰面积RSD不得大于10％，各质控混合对照品溶液各杂质峰面积RSD不得大于15％。

4、结果计算

采用外标法计算，公式如下：

式中：

A_杂＝供试品溶液中单个杂质的峰面积

A_杂对＝混合对照品溶液中杂质峰面积

C_供＝供试品溶液浓度

C_杂对＝混合对照品溶液中杂质对照品的浓度

P_对＝杂质对照品纯度

干燥失重％＝干燥失重项下结果

对照例1采用CN 1306425A报道的方法合成AYTKX05

向100mL三口瓶中加入化合物AYTKX01(2.0g，6.91mmol，购于成都克莱蒙医药科技有限公司，批号为20160401)和超干四氢呋喃(THF，15ml)，氮气保护下搅拌，控温0-10℃，分批次加入叔丁醇钾(0.85g，7.60mmol)，控温10-20℃反应15min，然后一次性加入化合物AYTKX02(2.23g，7.26mmol，购于成都克莱蒙医药科技有限公司，批号为20160301)，补加5ml超干四氢呋喃，控温20-25℃反应1h，将反应液倒入醋酸(2.90g，48.37mmol)中，保温20-25℃反应1.5h，滴加浓氨水(2.66g，76.01mmol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应2-3h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加120ml饱和碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1h左右。抽滤，用5ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得2.09g黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率84.4％。经检测，AYTKX05中杂质M的含量为0.50％，纯度为96.36％。

实施例1

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备

1.1)向20L的反应釜中加入化合物AYTKX17(800.0g，3.109mol)，甲醇(7200ml)和钨酸钠(20.51g，0.062mol)，搅拌，得到黄色悬浊液，缓慢滴加10％双氧水(2325.9g，6.840mol)，控制温度在50℃以下，滴加完毕后控温40-50℃之间反应2h，TLC显示反应基本完全，加入溶于800ml水的亚硫酸钠(78.4g，0.622mol)溶液，搅拌20min，再降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用纯化水500ml×2洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得淡黄色固体827.1g，收率为92.0％。在10L三口瓶中加入步骤1.1)所得淡黄色固体(825.0g)，加入乙腈(3300ml)和纯化水(2475ml)，加热升温至回流搅拌0.5h，溶液为悬浊液，降温析晶，控温5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用900ml乙腈/水(1:2(v/v))混合液洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得706.0g淡黄色固体，即为化合物AYTKX01，收率为78.5％。

1.2)向20L反应釜中加入化合物AYTKX01(703.0g，2.430mol)和超干四氢呋喃(THF，6300ml)，氮气保护下搅拌，控温10-15℃，分批次加入叔丁醇钾(313.5g，2.794mol)，控温15-20℃反应15min，然后一次性加入化合物AYTKX02(782.2g，2.551mol)，控温30-35℃反应1h，将反应液倒入醋酸(1021.3g，17.010mol)中，保温30-40℃反应1h，有黄色固体析出，加入正庚烷(2109ml)，降温至5-10℃左右搅拌30min，抽滤，滤饼用1500ml THF/正庚烷(1:1(v/v))混合溶液洗涤，得到黄色固体化合物AYTKX04，直接投入下一步。

1.3)将步骤1.2)所得化合物AYTKX04装入20L反应釜中，加入2812ml THF，滴加浓氨水(1158.5g，17.01mol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应3-4h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加5600ml 3％碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1h左右。抽滤，用1000ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得629.0黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率72.1％。经检测，AYTKX05中杂质F、杂质20和杂质21的总含量为0.0072％，杂质M的含量为0.0107％。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

2.1)向5L三口瓶中加入步骤1)所得AYTKX05(627.7g，1.750mol)和THF(2510ml)，搅拌，加入锌粉(22.8g，0.350mol)，溶于63ml纯化水的氯化铵(14.0g，0.260mol)溶液，加热至60℃以上反应2h，抽滤，滤液中加入5020ml纯化水，有固体析出，降温搅拌，5-10℃搅拌1h左右，抽滤，滤饼用1200ml THF/H₂O(1:2)混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得614.4g黄色固体AYTKX06，收率97.9％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20和杂质21总量小于0.001％，杂质M未检测到。

2.2)向5L三口瓶中加入AYTKX06(593.0g，1.653mol)，醋酸异丙酯(2370ml)，水浴加热回流溶解，澄清后加入活性炭搅拌约1h，抽滤，滤液降温析晶，降至5-10℃搅拌1-2h，抽滤，滤饼用300ml醋酸异丙酯洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得501.4g类白色固体AYTKX07，收率84.6％。

2.3)在5L三口瓶中加入AYTKX07(500.0g，1.394mol)，醋酸异丙酯(2250ml)，水浴加热搅拌至回流溶解，控温65±2℃加入晶种，观察到晶种不溶解，保温析晶2-3h，开始梯度降温，保持每半小时降5℃的速率，降温至5-10℃后搅拌1-2h，抽滤，滤饼用300ml醋酸异丙酯洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得435.7g类白色固体，即为依托考昔的终产品AYTKX0，收率87.1％。经检测，依托考昔的终产品AYTKX0的纯度为99.93％，其中杂质F、杂质20和杂质21总量小于0.001％，杂质M未检测到。

实施例2：

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备

1.1)向500mL反应釜中加入化合物AYTKX17(20.0g，77.72mmol)，180ml甲醇和钨酸钠(0.51g，1.55mmol)，搅拌，得到黄色悬浊液，缓慢滴加30％双氧水(26.44g，233.15mol)，控制温度在60℃以下，滴加完毕后控温在55-60℃之间反应1h，TLC显示反应基本完全，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用纯化水30ml×2洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得17.5g淡黄色固体。在500mL三口瓶中加入所得淡黄色固体(17.5g)，加入乙腈(106ml)和纯化水(210ml)，加热升温至回流搅拌0.5h，溶液为悬浊液，降温析晶，控温5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用20ml乙腈/水(1:2(v/v))混合液洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得16.22g淡黄色固体，即为化合物AYTKX01，收率为72.1％。

1.2)向500mL反应釜中加入AYTKX01(15.0g，51.84mmol)和超干THF(165ml)，氮气保护下搅拌，控温10-15℃，分批次加入叔丁醇钾(6.69g，59.62mmol)，控温15-20℃反应15min，然后一次性加入化合物AYTKX02(16.69g，54.43mmol)，控温30-35℃反应1h，将反应液倒入醋酸(21.79g，362.88mmol)中，保温30-40℃反应1h，有黄色固体析出，加入正庚烷(60mL)，降温至5-10℃左右搅拌30min，抽滤，滤饼用30ml THF/正庚烷(2.5:1(v/v))混合溶液洗涤，得到黄色固体化合物AYTKX04，直接投入下一步。

1.3)将步骤1.2)所得化合物AYTKX04装入500mL反应釜中，加入75mL THF，滴加25％浓氨水(24.72g，362.88mmol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应3-4h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加150mL 3％碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1h左右。抽滤，用20mlL THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得12.25g黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率65.9％。经检测，AYTKX05中杂质F、杂质20的总含量为0.01％。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

向100mL三口瓶中加入步骤1)所得AYTKX05(2.0g，5.57mmol)和THF(8ml)，搅拌，加入铁粉(0.125g，2.23mmol)和0.5ml纯化水的氯化铵(0.119g，2.23mmol)溶液，加热至60℃以上反应2h，抽滤，滤液中加入16ml纯化水，有固体析出，降温搅拌，5-10℃搅拌1h左右，抽滤，滤饼用4ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得1.74g淡红色固体AYTKX06，收率87.0％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

实施例3：

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备

1.1)向500mL反应釜中加入AYTKX17(20.0g，77.72mmol)，200ml甲醇和钨酸钠(0.51g，1.55mmol)，搅拌，得到黄色悬浊液，缓慢滴加30％双氧水(26.44g，233.15mol)，控制温度在60℃以下，滴加完毕后控温55-60℃之间反应2h，TLC显示反应基本完全，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用纯化水30ml×2洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得19.22g淡黄色固体，收率为85.46％。在500mL三口瓶中加入所得淡黄色固体(18.5g)，加入乙腈(130ml)和纯化水(220ml)，加热升温至回流搅拌0.5h，溶液为悬浊液，降温析晶，控温5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用20ml乙腈/水(1:2(v/v))混合液洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得16.7g淡黄色固体AYTKX01，收率为90.3％。

1.2)向500mL反应釜中加入AYTKX01(15.2g，52.53mmol)和167ml超干THF，氮气保护下搅拌，控温10-15℃，分批次加入叔丁醇钾(6.79g，60.41mmol)，控温15-20℃反应15min，然后一次性加入化合物AYTKX02(16.91g，55.16mmol)，控温30-35℃反应1h，将反应液倒入醋酸(22.08g，367.71mmol)中，保温30-40℃反应1h，有黄色固体析出，加入正庚烷(61mL)，降温至5-10℃左右搅拌30min，抽滤，滤饼用30ml THF/正庚烷(2.5:1(v/v))混合溶液洗涤，得到黄色固体化合物AYTKX04，直接投入下一步。

1.3)将步骤1.2)所得化合物AYTKX04装入500mL反应釜中，加入76mL THF，滴加25％浓氨水(25.05g，367.71mmol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应3-4h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加150mL 3％碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1h左右。抽滤，用20mlL THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得10.2g黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率54.2％。经检测，AYTKX05中杂质F、杂质20的总含量为0.0054％。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

100mL三口瓶中加入步骤1)所得AYTKX05(1.0g，2.78mmol)和THF(6ml)，搅拌，加入铁粉(0.16g，2.86mmol)，纯化水(2ml)和醋酸(0.093g，1.55mmol)，加热至60℃以上反应3h，抽滤，滤液中加入10ml纯化水，有固体析出，降温搅拌，10-15℃搅拌1h左右，抽滤，滤饼用10ml THF/H₂O(1:2)混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得0.76g灰褐色固体，收率76.0％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

实施例4：

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备

1.1)向20L反应釜中加入AYTKX17(1000g，3.886mol)，9000ml甲醇和钨酸钠(25.64g，0.078mol)，搅拌，得到黄色悬浊液，缓慢滴加10％双氧水(2907.4g，8.549mol)，控制温度在60℃以下，滴加完毕后控温55-60℃之间反应2h，TLC显示反应基本完全，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用纯化水1000mL×2洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得1008g淡黄色固体，收率为90.0％。在20L反应釜中加入所得淡黄色固体(1000g)，加入乙腈(4000ml)和纯化水(3000ml)，加热升温至回流搅拌0.5h，溶液为悬浊液，降温析晶，控温5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用1500ml乙腈/水(1:2(v/v))混合液洗涤，45-55℃鼓风干燥至恒重，得890.0g淡黄色固体，即为化合物AYTKX01，收率为89.0％。

1.2)向20L反应釜中加入AYTKX01(860.0g，2.972mol)和8600ml超干THF，氮气保护下搅拌，控温10-15℃，分批次加入叔丁醇钾(383.55g，3.418mol)，控温15-20℃反应15min，然后一次性加入AYTKX02(956.9g，3.121mol)，控温30-35℃反应1h，将反应液倒入醋酸(1249.3g，20.81mol)中，保温30-40℃反应1h，有黄色固体析出，加入正庚烷(3440mL)，降温至5-10℃左右搅拌30min，抽滤，滤饼用2.1L THF/正庚烷(2.5:1(v/v))混合溶液洗涤，得到黄色固体AYTKX04，直接投入下一步。

1.3)将步骤1.2)所得AYTKX04装入20L反应釜中，加入4300mL THF，滴加25％浓氨水(1417.2g，20.81mol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应3-4h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加8600mL 3％碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1h左右。抽滤，用1200mlL THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得698.0g黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率65.5％。经检测，AYTKX05中杂质F、杂质20的总含量为0.01％。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

向100ml三口瓶中加入步骤1)所得AYTKX05(3.0g，8.36mmol)，THF(9ml)，搅拌，加入三氯化磷(0.073ml，0.836mmol)，保温20-25℃反应1h，加入1mol/L NaOH水溶液(4ml)，调节pH为9-10，再加入14ml纯化水析晶，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用5ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得2.86g淡黄色固体AYTKX06，收率95.3％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

实施例5：

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备同实施例3。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

向100ml三口瓶中加入AYTKX05(3.0g，8.36mmol)和THF(9ml，3V)，搅拌，加入三氯化磷(0.073ml，0.836mmol)，保温20-25℃反应2h，加入1mol/L NaOH水溶液(4ml)，调节pH为9-10，再加入14ml纯化水析晶，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用5ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得3.02g淡黄色固体，收率100％。AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

实施例6：

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备同实施例3。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

向100ml三口瓶中加入AYTKX05(3.0g，8.36mmol)，THF(9ml，3V)，搅拌，加入三氯化磷(0.073ml，0.836mmol)，保温60-65℃回流反应0.5h，降温至30℃左右后加入1mol/L NaOH水溶液(4ml)，调节pH为9-10，再加入14ml纯化水析晶，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用5ml THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得2.81g淡黄色固体AYTKX06，收率93.7％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

实施例7

1)依托考昔(化合物AYTKX05)的制备

1.1)向2L三口瓶中加入AYTKX17(100g，0.389mol)，900ml甲醇和钨酸钠(2.64g，0.008mol)，搅拌，得到黄色悬浊液，缓慢滴加10％双氧水(291.0g，0.856mol)，控制温度在50℃以下，滴加完毕后控温40-50℃之间反应2h，TLC显示反应基本完全，加入溶于100ml水的亚硫酸钠(9.8g，0.078mol)溶液，搅拌20min，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼用纯化水100mL×2洗涤，得138.2g淡黄色固体。在2L三口瓶中加入所得淡黄色固体(138.0g)，加入乙腈(400ml)和纯化水(300ml)，加热升温至回流搅拌1h，溶液为悬浊液，过夜降温析晶，次日抽滤，滤饼在40-45℃真空干燥至恒重，得86.2g淡黄色固体，即为化合物AYTKX01，收率为76.8％。

1.2)向2L三口瓶中加入AYTKX01(86.0g，0.297mol)和774ml超干THF，氮气保护下搅拌，控温15-20℃，分批次加入叔丁醇钾(38.36g，0.342mol)，控温15-20℃反应15min，然后一次性加入AYTKX02(95.69g，0.312mol)，用86ml超干THF冲洗瓶壁，控温30-35℃反应1h，将反应液倒入醋酸(124.94g，2.081mol)中，保温30-40℃反应1h，有黄色固体析出，加入正庚烷(258mL)，降温至5-10℃左右搅拌30min，抽滤，滤饼用200ml THF/正庚烷(2.5:1(v/v))混合溶液洗涤，得到黄色固体AYTKX04，直接投入下一步。

1.3)将步骤1.2)所得AYTKX04装入2L三口瓶中，加入344mL THF，滴加25％浓氨水(141.73g，2.081mol)，滴加完毕后加热至60-65℃反应3-4h，TLC显示基本反应完全，静置分液，有机相滴加690mL2％碳酸氢钠水溶液，有固体析出，降温搅拌，在5-10℃搅拌1-2h。抽滤，用150mlL THF/H₂O(1:2(v/v))混合溶液洗涤，40-45℃真空干燥至恒重，得79.65g黄色固体，即为依托考昔(化合物AYTKX05)，收率74.7％。经检测，AYTKX05中杂质F、杂质20的总含量为0.0084％。

2)依托考昔(化合物AYTKX05)的纯化

向100ml三口瓶中加入步骤1)所得AYTKX05(10.0g，27.86mmol)，THF(30ml)，搅拌，加入三氯化磷(0.195ml，2.23mmol)，保温20-25℃反应15min，加入1mol/L NaOH水溶液(12.1ml)，调节pH为9-10，再加入45ml纯化水析晶，降温至5-10℃搅拌1h，抽滤，滤饼在40-45℃真空干燥至恒重，得9.70g淡黄色固体AYTKX06，收率97.0％。经检测，AYTKX06中杂质F、杂质20的总含量小于0.001％。

本发明还涉及下述项目：

1.一种依托考昔的纯化方法，包括以下操作：

使待纯化的依托考昔原料药与还原剂在溶剂中发生还原反应。

2.项目1所述的纯化方法，其中所述的还原剂为还原性金属或三卤化磷。

3.项目1所述的纯化方法，其中：

所述的还原剂为还原性金属，所述还原反应在酸的存在下进行待纯化的依托考昔原料药，

优选地，所述的酸选自醋酸、盐酸、硫酸、氯化铵等，优选为氯化铵或醋酸。

4.项目2或3所述的纯化方法，其中所述的还原性金属为锌或铁。

5.项目2所述的纯化方法，其中所述的三卤化磷为三氯化磷或三溴化磷，优选为三氯化磷。

6.项目1至5任一项所述的纯化方法，其中所述的溶剂为四氢呋喃。

7.项目3所述的纯化方法，其中：

所述还原反应的反应温度为50-65℃，更优选为60-65℃；

优选地，所述还原反应的反应时间为2-4小时，更优选为2-3小时。

8.项目3或7所述的纯化方法，其中：

还原剂与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.1-1.0)：1，

优选地，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1；

优选地，还原剂为锌，锌与依托考昔原料药的摩尔比为(0.1-1.0)：1(例如0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1(例如0.15：1，0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)；

优选地，还原剂为铁，铁与依托考昔原料药的摩尔比为(0.1-1.0)：1(例如0.2：1，0.3：1，0.4：1，0.5：1，0.6：1，0.7：1，0.8：1或0.9：1)，酸与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-1.0)：1(例如0.15：1，0.2：1，0.3：1，0.4：1或0.5：1)。

9.项目3或7所述的纯化方法，还包括：析晶的步骤，

优选地，所述析晶包括：

反应结束后，反应液过滤，向滤液中加水析出晶体；

用四氢呋喃和水的混合溶液洗涤所得晶体，干燥。

10.项目5所述的纯化方法，其中：

所述还原反应的反应温度为20-65℃，更优选为20-25℃；

优选地，所述还原反应的反应时间为0.25-2小时，更优选反应时间为0.25-0.5小时；

优选地，三卤化磷与依托考昔原料药的用量摩尔比为(0.05-0.15)：1，更优选用量为(0.06-0.1)：1。

11.项目10所述的纯化方法，还包括：析晶的步骤，

优选地，所述析晶包括：

反应结束后，向反应液中加入碱(例如氢氧化钠)调节pH值为9-10，加水析出晶体；

用四氢呋喃和水的混合溶液洗涤所得晶体，干燥。

12.项目9或11所述的纯化方法，还包括转晶的步骤，

优选地，所述转晶包括：

1)将待转晶的晶体溶于醋酸异丙酯，降温析晶；

2)可选地，将所析出的晶体再次溶于醋酸异丙酯，控制温度在60～70℃加入晶种，保温2～3小时，降温析晶。

13.一种制备依托考昔的方法，包括以下操作：

1)获得依托考昔原料药，

2)采用项目1至12任一项所述的纯化方法对依托考昔原料药进行纯化。

14.一种制备依托考昔原料药的方法，包括：

使化合物AYTKX04发生闭环反应，得到依托考昔原料药(AYTKX05)

15.项目14所述的制备方法，其中所述闭环反应在有机溶剂中并且在碱的存在下进行，

优选地，所述有机溶剂为四氢呋喃，

优选地，所述碱为浓氨水，

优选地，所述闭环反应的反应温度为60-65℃，

优选地，所述闭环反应的反应时间为3-4小时，

优选地，所述闭环反应结束后，分液，向有机相中加入碳酸氢钠，析出固体。

16.项目13或14所述的制备方法，其中化合物AYTKX04的制备方法包括：

使化合物AYTKX01与化合物AYTKX02发生缩合反应，得到化合物AYTKX04，

17、项目16所述的制备方法，其中所述缩合反应在有机溶剂中，在缩合剂的存在下，并且在氮气保护下进行，

优选地，所述的有机溶剂为四氢呋喃；

优选地，所述的缩合剂为叔丁醇钾；

优选地，所述的缩合反应包括：将化合物AYTKX01加入到有机溶剂中，氮气保护，加入叔丁醇钾，于15-20℃反应10～20分钟，加入化合物AYTKX02，于30-35℃反应0.8～1.5小时，将反应液倒入醋酸中，于30～40℃反应0.8～1.5小时，析出黄色固体，加入正庚烷，降温至5-10℃搅拌，抽滤，得到化合物AYTKX04，优选地，抽滤后将滤饼用THF/正庚烷(例如1:1(v/v))混合溶液洗涤，得到化合物AYTKX04。

18、项目16所述的制备方法，其中化合物AYTKX01的制备方法包括：

使化合物AYTKX17与氧化剂发生氧化反应，得到化合物AYTKX01，

优选地，所述氧化反应在有机溶剂中，在催化剂的存在下进行；

优选地，所述的有机溶剂为甲醇；

优选地，所述的催化剂为钨酸钠；

优选地，所述的氧化剂为双氧水；

优选地，所述双氧水的浓度为5％-30％，更优选10％；

优选地，双氧水与的化合物AYTKX17用量摩尔比为(2.2-3.5)：1，更优选2.2：1；

优选地，反应温度为35-65℃，更优选40-50℃。

优选地，所述的氧化反应包括：将化合物AYTKX17加入到甲醇中，加钨酸钠，搅拌，缓慢滴加双氧水，滴加完毕反应1.5～2.5小时，加入亚硫酸钠溶液，搅拌，降温至5-10℃搅拌0.8～1.2小时，抽滤，干燥得淡黄色固体，将淡黄色固体加入到乙腈和水的混合溶液中，搅拌，析晶。

19.项目13所述的制备方法，其中获得依托考昔原料药的方法如项目14至18任一项所述。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (5)

1.一种制备依托考昔原料药的方法，包括：

使化合物AYTKX01与化合物AYTKX02发生缩合反应，得到化合物AYTKX04，

使化合物AYTKX04发生闭环反应，得到依托考昔原料药(AYTKX05)

其中所述缩合反应在有机溶剂中，在缩合剂的存在下，并且在氮气保护下进行，

所述的有机溶剂为四氢呋喃；所述的缩合剂为叔丁醇钾；

所述的缩合反应包括：将化合物AYTKX01加入到有机溶剂中，氮气保护，加入叔丁醇钾，于15-20℃反应10～20分钟，加入化合物AYTKX02，于30-35℃反应0.8～1.5小时，将反应液倒入醋酸中，于30～40℃反应0.8～1.5小时，析出黄色固体，加入正庚烷，降温至5-10℃搅拌，抽滤，得到化合物AYTKX04。

2.权利要求1所述的方法，其中抽滤后将滤饼用THF和正庚烷的混合溶液洗涤，得到化合物AYTKX04。

3.权利要求2所述的方法，其中THF和正庚烷的比例为1:1(v/v)。

4.权利要求1所述的制备方法，其中所述闭环反应在有机溶剂中并且在碱的存在下进行，

优选地，所述有机溶剂为四氢呋喃，

优选地，所述碱为浓氨水，

优选地，所述闭环反应的反应温度为60-65℃，

优选地，所述闭环反应的反应时间为3-4小时，

优选地，所述闭环反应结束后，分液，向有机相中加入碳酸氢钠，析出固体。

5.权利要求16所述的制备方法，其中化合物AYTKX01的制备方法包括：

使化合物AYTKX17与氧化剂发生氧化反应，得到化合物AYTKX01，

优选地，所述氧化反应在有机溶剂中，在催化剂的存在下进行；

优选地，所述的有机溶剂为甲醇；

优选地，所述的催化剂为钨酸钠；

优选地，所述的氧化剂为双氧水；

优选地，所述双氧水的浓度为5％-30％，更优选10％；

优选地，双氧水与的化合物AYTKX17用量摩尔比为(2.2-3.5)：1，更优选2.2：1；

优选地，反应温度为35-65℃，更优选40-50℃。

优选地，所述的氧化反应包括：将化合物AYTKX17加入到甲醇中，加钨酸钠，搅拌，缓慢滴加双氧水，滴加完毕反应1.5～2.5小时，加入亚硫酸钠溶液，搅拌，降温至5-10℃搅拌0.8～1.2小时，抽滤，干燥得淡黄色固体，将淡黄色固体加入到乙腈和水的混合溶液中，搅拌，析晶。