CN113234090A - 靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐、制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了靶向降解FoxM1的化合物或其可药用的盐、制备方法及用途。结构如通式(I)所示。实验结果显示，与FoxM1抑制剂FDI‑6相比，本发明的化合物可有效降解转录因子FoxM1，尤其是化合物F‑8，在细胞和动物水平均表现出较好的抗乳腺癌活性。

Description

靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐、制备方法及 用途

技术领域

本发明属于化工医药领域，特别涉及靶向降解FoxM1的化合物或其可药用的盐、制备方法及用途。

背景技术

叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1，FoxM1)是调控细胞增殖的关键转录因子，能促进有丝分裂、推动细胞周期。FoxM1的异常激活与癌细胞的增殖、转移、化疗抵抗和不良预后密切相关，其在乳腺癌、肺癌等多种人类癌细胞中过表达，而在正常细胞中表达较低甚至不表达。敲除FoxM1可抑制肿瘤发生发展并促进凋亡，抑制FoxM1已成为重要的治疗策略。因其作为癌症治疗靶点的潜力，FoxM1被分子和细胞生物学及生物技术方案和研究国际协会(ISMCBBPR)评选为2010年的年度分子。

FoxM1作为增殖特异性转录因子，具有结合DNA和结合其他蛋白激酶等活性。由于蛋白相互作用界面较大，不易被小分子选择性靶向，FoxM1一直被认为是难成药靶点。已报道的FoxM1抑制剂FDI-6被证实通过阻断FoxM1-DNA相互作用，但其抑制活性和抗肿瘤效果还有很大提升空间。目前未见直接靶向FoxM1的抗肿瘤药物上市或应用于临床。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐，其利用靶向嵌合体技术将FoxM1降解。本发明中设计的双功能小分子无需强力结合FoxM1，即可对FoxM1蛋白进行泛素化标记，诱导FoxM1蛋白降解。

本发明的另一目的是提供所述靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐的制备方法和用途。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物。

技术方案：本发明提供的具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐，结构如下：

式中：

L选自碳数为3～10的饱和烷基、碳数为6～10的烷氧基；

D选自D1或D2，结构如下：

本发明的部分化合物包括：

具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

其中，L和D的定义如上所述，

步骤i：化合物7与2-氰基硫代乙酰胺缩合生成化合物8；

步骤ii：化合物8与2-氯-4-氟乙酰苯胺环合生成化合物9；

步骤iii：化合物9脱甲基生成化合物10；

步骤iv～v：化合物10与溴乙酸乙酯成醚生成化合物11，酯水解生成化合物12；

步骤vi：链接链模块首先脱去Boc保护基，然后与化合物12酰胺化反应得到通式I的目标化合物。

所述化合物或其可药用的盐在制备靶向降解FoxM1药物中的用途。

权利要求1或2所述化合物或其可药用的盐在制备治疗乳腺癌等实体瘤的用途。

有益效果：与报道得FoxM1抑制剂相比，本发明公开的FoxM1降解剂在低剂量下即可显著降解FoxM1蛋白，其抑制细胞增殖作用和抗小鼠皮下瘤作用均优于FDI-6。体内外实验显示，本发明公开的FoxM1降解剂抗肿瘤效果优于抑制剂FDI-6，有望成为具有全新作用机制的FoxM1阻断剂。

附图说明：

图1目标化合物F-1～F-8对MDA-MB-231细胞中的FoxM1蛋白降解活性，其中(A)WB实验图；(B)WB条带灰度值；

图2化合物FDI-6和F-8对MDA-MB-231细胞克隆形成抑制活性对比图；

图3化合物FDI-6和F-8抑制裸鼠移植瘤生长活性对比图。

具体实施方式

实施例1：连接链衍生物3a-3d的合成。将化合物1(0.28g，1.0mmol)溶于无水DMF中，在氮气保护下依次加入不同长度的胺类化合物2a-2d(1.0mmol)，DIPEA(0.4g，3.0mmol)，90℃下反应过夜。TLC检测反应完成后，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，有机层用饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得黄色固体3a-3d。

合成路线如下：

Reagents and conditions：(i)N，N-Diisopropylethylamine，DMF，90℃，12h

(1)N-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-丙基氨基甲酸叔丁酯异吲哚啉-1，3-二酮(3a)的合成

黄色固体(0.22g，45％yield).¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.31(s，1H)，7.53(m，1H)，7.13(d，J＝7.1Hz，1H)，6.98(d，J＝8.6Hz，1H)，6.49(t，J＝5.6Hz，1H)，5.02(s，1H)，4.95(dd，J＝11.8，5.4Hz，1H)，3.57(t，J＝6.0Hz，2H)，3.45(q，J＝6.4Hz，2H)，3.26(d，J＝6.7Hz，2H)，1.98(p，J＝6.2Hz，2H)，1.85-1.76(m，2H)，1.48(s，9H).MS(ESI，m/z)：430.1[M+H]+.

(2)N-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-乙氧乙氧乙基氨基甲酸叔丁酯异吲哚啉-1，3-二酮(3b)的合成

黄色油状物(45％yield).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.05(s，1H)，7.60(t，J＝7.1Hz，1H)，7.1(d，J＝8.7Hz，1H)，7.02(d，J＝6.9Hz，1H)，6.72-6.64(m，1H)，6.58(t，J＝5.8Hz，1H)，5.05(dd，J＝12.8，5.3Hz，1H)，3.60-3.36(m，10H)，3.07-2.52(m，5H)，2.06-1.98(m，1H)，1.36(s，9H).MS(ESI)m/z：505.1[M+H]⁺.

(3)N-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-辛基氨基甲酸叔丁酯异吲哚啉-1，3-二酮(3c)的合成

黄色油状物(40％yield).¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ：11.08(s，1H)，7.58-7.56(m，1H)，7.09(d，J＝8.6Hz，1H)，7.02(d，J＝7.2Hz，1H)，6.74(t，J＝5.4Hz，1H)，6.46(t，J＝5.7Hz，1H)，5.10-4.98(m，1H)，3.30-3.26(m，2H)，2.86-2.49(m，5H)，2.06-2.01(m，1H)，1.58-1.52(m，2H)，1.35-1.21(m，19H).MS(ESI)m/z：501.1[M+H]⁺.

(4)N-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-丙氧乙氧己基氨基甲酸叔丁酯异吲哚啉-1，3-二酮(3d)的合成

黄色油状物(0.2g，35％yield).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.10(s，1H)，7.57(t，J＝7.1Hz，1H)，7.09(d，J＝8.6Hz，1H)，7.01(d，J＝6.8Hz，1H)，6.72(t，J＝5.1Hz，1H)，6.65(t，J＝5.8Hz，1H)，5.04(dd，J＝12.9，5.1Hz，1H)，3.57-3.39(m，14H)，3.00-2.54(m，5H)，2.08-1.98(m，1H)，1.85-1.75(m，2H)，1.65-1.50(m，2H)，1.34(s，9H).MS(ESI)m/z：577.2[M+H]⁺.

实施例2：链接链衍生物6a-6d的合成。化合物4依次进行亲核取代和脱Boc反应得到中间体5，随后与不同长度的胺类化合物2a-2d进行酰胺化得到衍生物6a-6d。

合成路线如下：

Reagents and conditions：(i)tert-butyl 2-bromoacetate，NaHCO₃，KI，DMF，60℃，12h；(ii)TFA，DCM，rt，1h；(iii)DIPEA，HATU，DMF，rt，3h

(1)2-((2-(2，6-二氧杂哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(5)的合成

将化合物4(1.0g，3.6mmol)溶于无水DMF(10mL)中，在氮气保护下加入NaHCO₃(0.76g，5.4mmol)和催化量的KI，升温至60℃，搅拌30min后，加入溴乙酸叔丁酯(0.78g，3.96mmol)，继续反应过夜。反应完成后，向反应瓶中加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水，无水硫酸钠干燥，减压蒸去反应溶剂，粗品经柱层析纯化。所得化合物溶于10mL三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液(TFA∶DCM＝1∶1)，常温搅拌1h，旋干溶剂得白色固体5(500mg，粗品)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.14(s，1H)，7.82(dd，J＝8.4，7.4Hz，1H)，7.51(d，J＝7.2Hz，1H)，7.42(d，J＝8.5Hz，1H)，5.13(dd，J＝12.9，5.4Hz，1H)，5.02(s，2H)，3.01-2.82(m，2H)，2.60(dd，J＝17.2，8.4Hz，2H)，2.13-2.01(m，1H).MS(ESI)m/z：333.2[M+H]⁺.

(2)叔丁基(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚基-4-基)氧基)乙酰氨基)丙基)氨基甲酸酯(6a)的合成

将化合物5(0.2g，0.6mmol，1eq)和连接链2a(0.13g，0.72mmol，1.2eq)溶于DMF(3mL)中，常温搅拌下加入DIPEA(0.23g，1.8mmol，3eq)和HATU(0.25g，0.66mmol，1.1eq)，继续搅拌反应1小时，反应完成后，加入乙酸乙酯，并用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水洗涤。乙酸乙酯相无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化得白色固体(0.23g，80％yield)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.09(s，1H)，7.85-7.81(m，1H)，7.53(d，J＝7.4Hz，1H)，7.42(d，J＝8.6Hz，1H)，5.04-4.96(m，1H)，4.72(s，2H)，3.54-3.46(m，4H)，2.82-2.62(m，3H)，2.16-2.06(m，1H)，1.42(s，9H).(ESI)m/z：489.1[M+H]⁺.

(3)叔丁基(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚基-4-基)氧基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(6b)的合成

合成步骤参照化合物6a的合成方法。白色固体(0.26g，78％yield)。¹H NMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.84-7.76(m，1H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.42(d，J＝8.2Hz，1H)，5.13-5.06(m，1H)，4.75(s，2H)，3.67-3.54(m，6H)，3.54-3.48(m，4H)，3.19(t，J＝5.6Hz，2H)，2.96-2.81(m，1H)，2.78-2.65(m，2H)，2.19-2.14(m，1H)，1.40(s，9H).(ESI)m/z：585.1[M+Na]⁺.

(4)叔丁基(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚基-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸酯(6c)的合成

合成步骤参照化合物6a的合成方法。黄色固体(0.26g，78％yield)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.50(s，1H)，7.74(dd，J＝8.3，7.4Hz，1H)，7.56(d，J＝7.3Hz，1H)，7.41(t，J＝5.4Hz，1H)，7.21(d，J＝8.5Hz，1H)，4.97-4.65(m，3H)，4.60(d，J＝9.8Hz，1H)，3.40-3.32(m，2H)，3.12-2.73(m，5H)，2.19-2.14(m，1H)，1.60-1.57(m，2H)，1.41-1.36(m，19H).(ESI)m/z：559.1[M+H]⁺.

(5)叔丁基(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚基-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸酯(6d)的合成

合成步骤参照化合物6a的合成方法。黄色固体(0.23g，60％yield)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ7.76-7.52(m，3H)，7.22(d，J＝8.2Hz，1H)，5.06(t，J＝5.4Hz，1H)，5.02-4.95(m，1H)，4.58(s，2H)，3.72-3.43(m，14H)，3.26-3.14(m，2H)，2.93-2.76(m，3H)，2.28-2.11(m，2H)，1.86-1.74(m，4H)，1.43(s，9H).(ESI)m/z：635.1[M+H]⁺.

实施例3：本发明关键中间体11的合成方法

路线如下：

(1)3-氨基-N-(4-氟苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(9)的合成

将化合物7(2.0g，8.1mmol)和2-氰基硫代乙酰胺(0.89g，8.9mmol)加入25mL乙醇溶液中，并加入0.4mL三乙胺，升温至80℃，反应2h。反应完成后无需后处理，直接向反应液中加入2-氯-4-氟乙酰苯胺(1.67g，8.9mmol)和K₂CO₃(3.35g，24.3mmol)，在80℃条件下继续反应4h。反应毕，有大量黄色固体析出，冷却，过滤得粗品9(3.2g，85％yield)，无需纯化直接用于下一步反应。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ9.81(s，1H)，8.33-8.20(m，3H)，7.70(dd，J＝8.9，5.1Hz，2H)，7.19(dd，J＝20.8，11.9Hz，2H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H)，6.78(s，2H)，3.87(s，3H)，2.04-1.93(m，1H).MS(ESI)m/z：462.1[M+H]⁺.

(2)3-氨基-N-(4-氟苯基)-6-(4-羟基苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(10)的合成

将化合物9(2g，4.4mmol)溶在无水二氯甲烷中(30mL)，在冰浴条件下，缓慢滴加三溴化硼溶液(26.4mmol)，常温搅拌24h。反应完成后，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并用CH₂Cl₂萃取，柱层析纯化得黄色固体化合物10(1.67g，85％yield).MS(ESI)m/z：446.1[M-H]⁺.

(3)乙基2-(4-(3-氨基-2-((4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基)苯氧基)乙酸酯(11)的合成

将化合物10(0.8g，1.78mmol)和溴乙酸乙酯(0.6g，3.58mmol)加入到6mL无水DMF溶液中，并加入K₂CO₃(0.27g，2mmol)，升温至60℃，反应8h。反应完成后，冷却，向反应液中加入水，用乙酸乙酯溶液萃取，柱层析得黄色固体11(0.85g，90％yield)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.32-8.23(m，3H)，7.78-7.66(m，2H)，7.31-7.09(m，4H)，6.81(s，2H)，4.93(s，2H)，4.22(q，J＝7.1Hz，2H)，1.26(dd，J＝8.8，5.3Hz，3H).MS(ESI)m/z：534.1[M+H]⁺.

(4)2-(4-(3-氨基-2-((4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-6-基)苯氧基)乙酸(12)的合成

将化合物11(0.64g，1.2mmol)和氢氧化锂(84mg，3.6mmol)加入到四氢呋喃和水的混合溶液中(THF/H₂O：4+4mL)，室温反应12h。反应完成后，加入稀盐酸中和，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化得黄色固体12(0.52g，85％yield)。¹H NMR (300 MHz，DMSO-d₆)δ9.82(s，1H)8.32-8.23(m，3H)，7.79-7.67(m，2H)，7.32-7.09(m，4H)，6.79(s，2H)，4.92(s，2H).MS(ESI)m/z：534.1[M+H]⁺.MS(ESI)m/z：506.1[M+H]⁺.

实施例4：本发明靶向FoxM1降解剂的合成路线如下：

(1)3-氨基-6-(4-(2-((3-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)氨基)-2-羰基乙氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-1)的合成

将连接链模块3a(0.167g，0.39mmol)溶在DCM和TFA的混合物溶液中(2mL+2mL)，室温反应30min，反应完成后，减压旋去溶剂，所得粗品直接用于下一步反应。将上述所得粗品和关键中间体12(0.2g，0.39mmol)溶在无水DMF溶液中(4mL)中，冰浴下加入DIPEA(0.15g，1.17mmol)，搅拌30min，缓慢加入HATU(0.163g，0.43mmol)，室温反应4h。反应完成后，加入乙酸乙酯稀释，加入饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，柱层析纯化得黄色固体F-1(0.21g，65％yield)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.11(s，1H)，9.83(s，1H)，8.40-8.20(m，4H)，7.79-7.67(m，2H)，7.56(t，J＝7.7Hz，1H)，7.29-7.13(m，4H)，7.10-6.94(m，2H)，6.79(s，1H)，6.71(s，1H)，5.05(dd，J＝12.6，5.1Hz，1H)，4.63(s，2H)，3.34-3.21(m，4H)，2.94-2.83(m，1H)，2.02(d，J＝6.6Hz，1H)，1.80-1.69(m，2H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.28，170.57，169.29，167.98，167.76，164.12，161.39，160.33，160.00，158.08，156.70，146.69，145.51，136.67，135.27，132.72，132.26，129.85，129.46，124.37，124.08，124.01，118.12，117.56，115.74，115.66，115.48，113.53，110.82，109.64，101.16，67.56，49.01，39.49，36.36，31.46，29.51，29.13，22.63.HRMS(E5I)：m/z，calcd for C₃₉H₃₁F₄N₇O₇S[M+H]⁺，818.2015，found 818.1992.

(2)3-氨基-6-(4-(2-((2-(2-(2-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-羰基乙氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-2)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-2(0.19g，55％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.11(s，1H)，9.82(s，1H)，8.32-8.22(m，2H)，8.16(s，1H)，7.72(d，J＝5.0Hz，2H)，7.57(dd，J＝17.8，10.4Hz，1H)，7.22(t，J＝8.7Hz，2H)，7.13(dd，J＝19.4，8.6Hz，4H)，7.03(t，J＝9.1Hz，1H)，6.79(s，2H)，6.59(s，1H)，5.06(dd，J＝12.5，5.3Hz，1H)，4.61(s，2H)，3.63(s，3H)，3.57(d，J＝6.4Hz，6H)，3.47(dd，J＝18.5，5.2Hz，6H)，2.87(dd，J＝26.6，13.2Hz，2H)，2.04(d，J＝5.3Hz，2H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.28，170.57，169.41，167.85，167.74，164.12，161.40，160.29，160.01，158.09，156.74，146.81，145.53，136.64，135.27，132.53，129.85，129.46，124.09，124.02，118.12，117.82，115.71，115.68，115.50，111.12，109.71，101.12，70.18，70.07，69.34，67.42，49.02，42.15，38.79，31.77，31.46，29.51，29.18，27.03，22.61，14.43.HRMS(ESI)：m/z，calcd for C₄₂H₃₈F₄N₇O₉S[M+H]⁺，892.2382，found 892.2383.

(3)3-氨基-6-(4-(2-((8-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)辛基)氨基)-2-羰基乙氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-3)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-3(0.17g，50％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.11(s，1H)，9.80(s，1H)，8.33-8.24(m，2H)，8.14(s，1H)，7.71(dd，J＝7.7，5.7Hz，1H)，7.58-7.50(m，1H)，7.21(t，J＝8.8Hz，1H)，7.13(t，J＝13.2Hz，2H)，7.01(dd，J＝11.9，7.9Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.47(s，1H)，5.06(dd，J＝12.6，5.0Hz，1H)，4.60(s，2H)，3.22(d，J＝6.1Hz，2H)，3.15(d，J＝5.9Hz，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.02(dd，J＝20.6，15.4Hz，1H)，1.52(s，2H)，1.44(s，2H)，1.25(s，9H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.29，170.59，169.42，167.76，167.57，164.09，161.40，160.35，158.47，156.70，146.81，145.50，136.67，135.26，133.58，132.62，129.80，129.42，124.06，124.00，118.11，117.49，115.72，115.66，115.48，110.81，109.46，108.31，101.12，67.52，49.01，42.28，38.73，31.46，29.52，29.22，29.13，26.77，22.62.HRMS(ESI)：m/z，calcd forC₄₄H₄₂F₄N₇O₇S[M+H]⁺，888.2797，found 888.2793.

(4)3-氨基-6-(4-((16-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代-7，10，13-氧杂-3-氮杂十六烷基)氧代)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-4)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-4(0.21g，55％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.11(s，1H)，9.80(d，J＝16.7Hz，1H)，8.31-8.22(m，2H)，8.17(s，1H)，7.71(dd，J＝8.6，5.0Hz，2H)，7.58-7.51(m，1H)，7.21(dd，J＝18.5，9.7Hz，1H)，7.12(dd，J＝20.3，8.6Hz，3H)，7.03(t，J＝11.1Hz，1H)，6.79(s，1H)，6.59(s，1H)，5.06(dd，J＝12.6，5.2Hz，1H)，4.61(s，2H)，3.62(d，J＝4.9Hz，2H)，3.57(d，J＝6.6Hz，4H)，3.49(d，J＝5.6Hz，2H)，3.45(d，J＝5.0Hz，2H)，3.33(d，J＝3.7Hz，2H)，2.90(dd，J＝21.9，9.0Hz，1H)，2.52(s，6H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.28，170.57，169.41，167.85，167.74，164.12，161.39，160.28，160.01，158.09，156.72，146.81，145.51，136.63，135.25，132.53，129.85，129.45，124.09，124.02，118.12，117.82，115.71，115.67，115.50，113.59，111.12，109.71，101.13，70.18，70.07，69.34，67.42，49.03，42.16，40.90，38.79，31.46，22.61.HRMS(ESI)：m/z，calcd for C₄₆H₄₅F₄N₇O₁₀S[M+Na]⁺，986.2777，found 986.2770.

(5)3-氨基-6-(4-(2-((3-(2-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧代)乙酰胺基)丙基)氨基)-2-羰基乙氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-5)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-5(0.15g，45％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.14(s，1H)，9.83(s，1H)，8.28(d，J＝9.2Hz，2H)，8.22(s，1H)，8.02(s，1H)，7.81(t，J＝7.8Hz，1H)，7.71(dd，J＝13.5，4.8Hz，3H)，7.49(d，J＝7.2Hz，1H)，7.43-7.37(m，1H)，7.26-7.13(m，3H)，6.80(s，1H)，5.14(dd，J＝12.6，5.2Hz，1H)，4.80(s，2H)，4.61(s，2H)，4.24(t，J＝6.5Hz，1H)，4.05(dd，J＝15.6，9.2Hz，1H)，3.99(t，J＝6.5Hz，2H)，3.19(d，J＝5.5Hz，4H)，2.94-2.85(m，2H)，2.74(d，J＝15.1Hz，1H)，2.04(dd，J＝16.7，11.3Hz，2H)，1.65(dd，J＝13.8，6.8Hz，3H)，1.61-1.48(m，4H)，1.36(ddd，J＝31.0，15.0，7.2Hz，5H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.26，172.95，170.37，169.72，167.76，167.38，167.20，165.93，164.12，161.40，160.31，160.01，158.09，156.76，155.53，145.52，137.42，135.27，133.52，132.18，132.01，129.86，129.48，129.14，124.08，124.02，120.88，118.17，117.30，116.53，115.75，115.67，115.50，101.12，73.36，68.16，67.51，65.50，64.97，64.24，49.27，43.53，36.60，36.42，31.42，30.55，30.46，29.65，29.51，22.47，19.13，19.04，14.03.HRMS(ESI)：m/z，calcd for C₄₁H₃₃F₄N₇O₉S[M+H]⁺，876.2069，found876.2069.

(6)3-氨基-6-(4-((14-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧代)-2，13-二氧代-6，9-二氧杂-3，12-二氮杂十四基)氧代)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-6)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-6(0.17g，46％yield).HRMS(ESI)：m/z，calcd for C₄₄H₃₉F₄N₇O₁₁S[M+H]⁺，950.2437，found 950.2415.

(7)3-氨基-6-(4-(2-((8-(2-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧代)乙酰胺基)辛基)氨基)-2-羰基乙氧基)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-7)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-7(0.15g，42％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.14(d，J＝13.9Hz，1H)，9.82(d，J＝14.1Hz，1H)，8.30(d，J＝9.0Hz，3H)，8.18(s，1H)，7.94(s，1H)，7.82(t，J＝7.9Hz，1H)，7.72(dd，J＝9.1，5.1Hz，2H)，7.51(d，J＝7.2Hz，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，1H)，7.28-7.10(m，4H)，6.81(s，1H)，5.14(dd，J＝12.9，5.3Hz，1H)，4.78(s，2H)，4.61(s，2H)，3.22-3.09(m，5H)，2.97-2.83(m，1H)，2.05(dd，J＝13.2，5.9Hz，1H)，1.44(d，J＝8.7Hz，6H).HRMS(ESI)：m/z，calcd forC₄₆H₄₄F₄N₇O₉S[M+H]⁺，946.2852，found 946.2837.

(8)3-氨基-6-(4-((19-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧代)-2，18-二氧杂-7，10，13-三氧杂-3，17-二氮杂十九烷基)氧代)苯基)-N-(4-氟苯基)-4-(三氟甲基)噻吩并[2，3-b]吡啶-2-甲酰胺(F-8)的合成

根据实施例4所描述的化合物F-1的合成方法，合成黄色固体F-8(0.16g，40％yield).¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.11(s，1H)，9.79(s，1H)，8.27(dd，J＝22.5，13.7Hz，3H)，8.13(t，J＝5.6Hz，1H)，7.93(t，J＝5.5Hz，1H)，7.85-7.75(m，1H)，7.70(dd，J＝8.9，5.1Hz，2H)，7.48(d，J＝7.2Hz，1H)，7.39(d，J＝8.5Hz，1H)，7.26-7.10(m，4H)，6.77(s，2H)，5.12(dd，J＝12.7，5.4Hz，1H)，4.76(s，2H)，4.59(s，2H)，3.50(d，J＝4.5Hz，4H)，3.46(d，J＝4.8Hz，4H)，3.40(dd，J＝9.4，6.1Hz，4H)，3.21(dd，J＝12.3，6.0Hz，4H)，2.95-2.85(m，1H)，2.58(dd，J＝24.6，11.7Hz，2H)，2.04(dd，J＝12.3，6.2Hz，1H)，1.68(dq，J＝13.5，6.6Hz，4H).¹³C NMR(126MHz，DMSO-d₆)δ173.21，170.31，167.64，167.18，165.96，164.09，161.39，160.32，160.00，158.08，156.71，155.47，145.48，137.36，135.27，133.49，132.26，129.84，129.42，124.05，123.99，120.85，118.12，117.30，116.51，115.71，115.63，115.45，113.55，101.20，70.21，70.03，70.01，68.69，68.41，68.15，67.51，49.30，36.37，36.25，31.42，29.74，29.69，29.49，22.47.HRMS(ESI)：m/z，calcd for C₄₈H₄₇F₄N₇O₁₂5[M+Na]⁺，1044.2831，found 1044.2834.

实施例5：Western blot检测化合物对MDA-MB-231细胞中FoxM1表达的影响

1、实验方法

MDA-MB-231细胞经化合物处理完毕后，弃去培养基，PBS洗涤2-3次，依次加入蛋白酶抑制剂和RIPA裂解液，使细胞裂解完全，然后进行离心(4℃，12,000g，10min)，上层液即为得到的总蛋白溶液。参照试剂盒的说明书，根据待测蛋白分子量的不同，配制10％或12％的分离胶和5％的压缩胶，灌制SDS-PAGE凝胶。加入适量提前预冷的1×电泳缓冲液后，将之前生物标记的样品或细胞内总蛋白提取物加入泳道中(预染蛋白Maker和样品)。80V稳压电泳约30min，待样品进入分离胶后，调整电压为120V继续电泳。待目的条带到达合适位置时(参照预染蛋白Maker的位置)，结束电泳。电泳至溴酚蓝刚跑出即可终止，进行转模。将目的蛋白的条带剥离出来，贴上PVDF膜，通过电泳，转移至PVDF膜上，后用5％脱脂牛奶于脱色摇床上封闭1h。加入一抗，4℃孵育过夜，而后用TBST洗涤三次，每次洗涤时间为5min。加入二抗，室温下孵育30min，而后用TBST洗涤三次，每次洗涤时间为5min。提前于暗室中按照ECLA∶ECLB＝1∶1的比例配置ECL混合溶液，然后将处理好的PVDF膜面朝上放在曝光匣中，加入配置好的ECL混合溶液反应1-2min后弃去反应液，根据显影试剂的发光强度调整曝光条件，开始曝光。扫描所得胶片，用Photoshop整理去色，蛋白表达量使用Image Pro Plus 6.0软件对光密度值进行分析，蛋白相对表达量计算为目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值。

2、实验结果

如图1所示，已报道的FoxM1抑制剂FDI-6在测试浓度下(@10μM)对FoxM1蛋白无降解作用，而本发明公开的化合物F-1～F-8对FoxM1表现出不同程度的降解作用；其中化合物F-7和F-8的降解活性较好(图1A：FoxM1蛋白条带图)；化合物F-7和F-8在10μM浓度下几乎将FoxM1全部降解了，其降解效率接近90％(图1B：FoxM1蛋白含量柱状图)。

实施例6：F-8抗MDA-MB-231细胞克隆形成实验

1、实验方法

取各组对数生长期的MDA-MB-231细胞，胰酶常规消化，离心，弃上清液后，用0.1％PBS重悬细胞调整细胞密度至1×103cells/well。接种于6孔板中(每个孔的细胞数相同，每孔设置3个复孔)。十字法摇匀，镜下观察确定混匀后放入孵箱孵育。定期观察细胞密度及状态，必要时换液。培养7天后。弃去培养液，PBS洗三次。4％多聚甲醛固定半小时。弃液，结晶紫染色15-20分钟。弃染液，PBS洗脱浮色，晾干拍照，计数分析。

2、实验结果

如图2细胞克隆形成实验结果所示，与DMSO组相比，3μM的FDI-6对MDA-MB-231细胞的形成无显著性影响，而3μM的F-8显著性抑制了MDA-MB-231细胞的形成，表明本发明公开的FoxM1降解剂F-8抗MDA-MB-231细胞增殖活性优于已报道的FoxM1抑制剂FDI-6。

实施例7：小鼠体内抗肿瘤活性测试实验

1、实验方法

选取裸小鼠适应性饲养一周，待体重约为18±2g，每只小鼠腋下注射0.2ml的MDA-MB-231细胞悬液，细胞浓度5×106/ml。小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100mm3左右后将动物随机分组记为第0天，然后开始按照分组方式中的给药方法给药。对照组小鼠同时被给予等体积生理盐水。使用测量瘤径的方法，动态评估受试化合物的体内抗肿瘤活性。开始给药后(FDI-6：10mg/Kg/day；F-8：10mg/Kg/day)，每两天称量小鼠体重并使用游标卡尺记录肿瘤生长大小，给药结束后，同一时间段处死各组小鼠，手术剥取瘤块称重。肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长宽。

2、实验结果

如图3所示，通过建立裸小鼠MDA-MB-231移植瘤模型，探究化合物F-8的体内抗肿瘤活性。化合物给药14天后，化合物组移植瘤组织肿瘤细胞生长数量明显减少，且化合物F-8组肿瘤体积改善明显优于对照化合物FDI-6组。提示：本发明公开的FoxM1降解剂F-8的体内抗乳腺癌活性优于报道的FoxM1抑制剂FDI-6。

Claims (6)

1.一种具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐，结构如下：

式中：

L选自碳数为3～10的饱和烷基、碳数为6～10的烷氧基；

D选自D1或D2，结构如下：

2.权利要求1所述的具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐，为如下任一种：

3.一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求1或2所述的具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。

4.具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

其中，

L和D的定义如前述，

(1)化合物7与2-氰基硫代乙酰胺缩合生成化合物8；

(2)化合物8与2-氯-4-氟乙酰苯胺环合生成化合物9；

(3)化合物9脱甲基生成化合物10；

(4)化合物10与溴乙酸乙酯成醚生成化合物11，酯水解生成化合物12；

(5)链接链模块首先脱去Boc保护基，然后与化合物12酰胺化反应得到通式I的目标化合物。

5.权利要求1或2所述具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐在制备靶向降解FoxM1药物中的用途。

6.权利要求1或2所述具有通式(I)的靶向泛素化降解FoxM1的化合物或其可药用的盐在制备治疗三阴性乳腺癌等实体瘤中的用途。

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