CN111285850A - 一类异吲哚啉类化合物、其制备方法、药物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一类可用作CRBN调节剂的如通式(I)所示的异吲哚啉类化合物，其制备方法、药物组合物及应用。具体的，本发明提供的一类多取代异吲哚啉类化合物作为一类结构新颖的CRL4CRBN E3泛素连接酶调节剂具有很好的抗肿瘤活性和免疫调节活性，可以用于制备治疗与CRL4CRBN E3泛素连接酶相关的疾病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一类结构新颖的异吲哚啉类化合物，其药学上可接受的盐、溶剂合物、药物组合物及其在制备治疗或预防多种疾病的药物中的应用。
背景技术
细胞内蛋白质表达的严密调控在细胞行使功能、细胞存活以及分裂过程中发挥着重要作用，许多原发性或获得性疾病通常涉及蛋白质功能异常。传统的调节蛋白功能异常的方法主要是过设计靶向抑制剂或激动剂，这些靶向药物在疾病的治疗中发挥着重要作用。尽管如此，为了获得满意的疗效，这些抑制剂或激动剂通常需要维持在较高的药物浓度以达到有效治疗效果，这也在一定程度上导致了药物的不良反应。另一种调节蛋白质功能异常的方法是改变病理相关蛋白的动态平衡，蛋白质的动态平衡包括蛋白质的合成和降解，例如可以利用小干扰RNA(siRNA)、反义寡聚核苷酸或基因编辑技术来敲除或沉默靶蛋白基因，这些基于核酸的技术通过作用于靶蛋白的转录和翻译过程而改变蛋白质的合成，该类技术最大的局限在于核酸的体内稳定性以及生物利用度较低，进而在一定程度上限制了其应用。另一种调节蛋白质动态平衡的策略是调控蛋白质的降解过程，通过促进或抑制蛋白质的降解可以直接改变靶蛋白在细胞内的表达量。泛素-蛋白酶体系统(UPS)在蛋白质的降解过程中发挥重要作用，在一系列泛素化酶的作用下，靶蛋白可以被泛素化标记，带有特殊泛素标签的蛋白质可以被运送至蛋白酶体并被其降解。
蛋白质的泛素化过程是一个串联的多步反应过程，主要有三类酶参与：E1泛素激活酶，E2泛素结合酶，E3泛素连接酶。根据E3泛素连接酶的保守结构域和作用模式可以将其分成三大类，其中TECT家族和RBR家族E3泛素连接酶在底物泛素化过程中需要先将泛素从E2泛素激活酶上转移至自身，再将泛素从E3泛素连接酶上转移至底物蛋白上。相比较而言，RING家族E3泛素连接酶在整个E3泛素连接酶中占据较大比例，这类E3泛素连接酶上含有RING结构域或RING样结构域，它们能够与E2泛素结合酶结合，促进泛素直接从E2泛素结合酶直接转移至底物蛋白上。CRL4CRBNE3泛素连接酶属于RING家族E3泛素连接酶，它是一种由多个亚基组装而成的蛋白复合物，整个复合物包含底物蛋白识别模块(CRBN)、E2泛素结合酶识别模块(RING结构域)以及二者之间的连接部分(Cullin蛋白)。CRBN在整个蛋白复合物中直接结合底物，控制着整个泛素化过程的底物特异性。
直接作用于CRBN的小分子调节剂可以控制CRL4CRBNE3泛素连接酶的底物选择性。新的研究发现，Cereblon(基因名：CRBN)是免疫调节剂—沙利度胺及其类似物的直接靶点(Science,2010,327,1345；Science,2014,343,301；Science,2014,343,305；Nature,2015,523,183.)。研究证明度胺类免疫调节剂在多发性骨髓瘤细胞系中，通过调控CRBN-泛素连接酶复合物的活性,选择性诱导转录因子IKZF1和IKZF3进行泛素化并降解，这一过程改变了T细胞和B细胞的功能，同时对多发性骨髓瘤细胞产生毒性效应，由此达到治疗多发性骨髓瘤在内的恶性髓系肿瘤的作用。最近的研究表明,来那度胺，一种沙利度胺的类似物，能够通过CRL4CRBNE3泛素连接酶选择性诱导CK1α的泛素化并降解，实现治疗5q缺失型骨髓异常性增生综合征(MDS)，而沙利度胺的另一种结构类似物(CC-885)则能够通过作用于CRL4CRBNE3泛素连接酶选择性诱导并降解GSPT1，对多种肿瘤细胞展现出很强的细胞毒性。
现有研究结果表明：不同度胺类药物分子与靶点CRBN相互作用后，具有不同底物蛋白降解特异性。如来那度胺在治疗多发性骨髓瘤时，其疗效主要是通过选择性降解IKZF1和IKZF3实现；而在治疗5q缺失的骨髓异常性增生综合症(del(5q)MDS)时主要通过降解CK1α达到治疗效果。由于目前发展的度胺类似物中主要是来那度胺对CK1α表现出较强的降解活性，因此是最主要的临床有效的治疗骨髓异常性增生综合征del(5q)MDS的度胺类药物。FDA批准的沙利度胺用于治疗麻风结节性红斑,来那度胺临床实验中用于治疗前列腺癌，泊马度胺临床实验中用于治疗骨髓纤维化症。随着新的度胺类药物的研发和临床实验的开展，度胺类药物分子的适应症也在不断扩展中，在临床试验中，来那度胺可单独或与其它治疗剂联合用药，用于多种癌症、疼痛、中枢神经系统疾病和免疫系统相关的疾病治疗(见WO2012/015986)。
来那度胺、泊马度胺、CC-122、CC-220、CC-885这些已经报化合物的结构与沙利度相似，该类化合物的特点在于，结构上的改变和调整后，化合物具有不同的药理活性和完全不同的治疗效果，进而在临床上可用于治疗不同的适应症。
WO2008115516A2、US8153659B2、US9181216B2、US9920027B2公开了通式为S1所代表的化合物：
WO2011100380 A1、CN102822165B，公开了一类通式为S2所代表的化合物：
通式S2中R1为取代的多种取代的芳基，代表性的化合物为CC-220：
WO2016065980A1、CN105566290A、US10017492B2
通式S3中代表性的化合物为：
WO2007027527A2、CN101291924A、US8481568B2公开了一类通式为S3所代表的化合物：
通式S4、S5中代表性的化合物为：
WO2008027542A2、US8877780B2、US9447070B2公开了一类通式为S3所代表的化合物：
通式S6、S7中代表性的化合物为：
来那度胺及上述部分分子的作用机制是：不同结构的化合物能够和CRBN结合，引起CRBN结合部分构象的改变，从而招募不同的内源性生物大分子与CRBN的结合；进而对潜在不同的内源性底物蛋白进行泛素化并降解，因而能够产生不同的药理活性，在临床实验中用于治疗不同的适应症。
综上所述，来那度胺主要用于治疗治疗多发性骨髓瘤和骨髓异常增生综合征，对其他适应症效果并不理想；其他上述提到的化合物如CC-122，CC-885和CC-220尚处于临床前或临床研究中。因此，开发结构新颖的化合物作为CRL4CRBNE3泛素连接酶调节剂，可以实现进一步提高肿瘤的治疗效果治疗和扩展度胺类药物的新适应症的临床上的需求；结构不同的度胺类分子的药理学活性和药物学性质都不为人所知，各方面的性质和作用都具有不确定性。基于度胺类分子的作用机制，开发新结构的度胺类分子，能够实现招募新的蛋白底物，进而实现的治疗效果的提高和新适应症的扩展。因此，继续开发新颖结构的CRL4CRBNE3泛素连接酶调节剂以拓展新的适应症具有非常重要研究价值和现实意义。
发明内容
本发明的发明人通过对CRL4CRBNE3泛素连接酶与小分子作用的复合物晶体结构(PDB ID：4CI2、5HXB)进行分析获得下述重要信息：CRL4CRBNE3泛素连接酶与小分子存在多个结合口袋，因此可以发展结构复杂的多个结合位点的小分子，实现CRL4CRBNE3泛素连接酶与小分子的有效结合。同时利用分子动力学模拟方法对模型分子和E3泛素连接酶界面进行结构动态和结合位点分析，结合分子对接和基于复合物的药效团匹配策略，通过打分函数对化合物在E3泛素连接酶活性位点的结合模式、相互作用进行评价及结构设计上的计算模拟和优化，获得新型特异性的CRL4CRBNE3泛素连接酶小分子调节剂。基于这些信息，我们设计并合成一系列本申请所述的CRL4CRBNE3泛素连接酶的小分子调节剂，并测试了化合物的活性。部分代表性的化合物在多发性骨髓瘤细胞系(MM.1S)、套细胞淋巴瘤细胞系(Mino)、急性髓系白血病细胞系(MV-4-11)中测试结果表明，新型的小分子调节剂具有非常高的细胞的生长抑制活性，该分子作用于生物体后，通过调节生物体内泛素—蛋白酶体介导的蛋白降解途径，可以调控底物蛋白的降解，进而实现基于CRBN靶点的有效的疾病治疗。
本发明的一个方面是提供如通式(I)所示的化合物、其对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、代谢前体、代谢产物、可药用的盐、酯、前药或其水合物。
本发明的另一个方面是提供如通式(I)所示的化合物的制备方法、制备该类化合物的重要中间体及制备方法。
本发明的另一个方面是提供如通式(I)所示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其特征在于所述化合物用于制备预防或治疗与CRL4CRBN E3泛素连接酶相关的疾病的药物或诊断试剂；优选地，所述与CRL4CRBN E3泛素连接酶相关的疾病包括癌症、疼痛、中枢神经系统疾病和免疫系统疾病。
为了实现上述目的，本发明提供了如下通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢前体、代谢产物、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或C1-C6直链或支链烃基；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
R3为氢、氘或卤素；
n为1，2或3；
A1选自C、N、O、S或者NR5，其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
A3、A4各自独立地选自C、N、O或S；
A1、A3或A4选自C时，A1、A3或A4各自独立地可以被甲基或乙基取代；
A2、A5各自独立地选自C或N；
A7选自C、N、O或S；
A6为C或N，当A6为N时，
与B的连接方式为
n1为0、1、2或3；
n2为0、1、2或3；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR 6)b2–，前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、烷氧基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0，1，2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基取代或未取代的C3-6环烷基；
当X1为-O-时，并且
选自
时，B不为
优选地，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或C1-C6直链或支链烃基；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
R3为氢、氘或卤素；
n为1，2或3；
为选自含有1-3个选自N、O或S杂原子的5元杂芳环、含有1-3个选自N、O或S杂原子的4-6元杂环、4-6元脂肪环，其中5元杂芳环上的碳原子可选地被甲基或乙基取代；
当A6为N时，
与B的连接方式为
或
选自含有选自N、O或S的两个杂原子的五元杂芳环，
优选选自以下基团：
其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–，前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0，1，2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基、取代或未取代的C3-6环烷基；
当X1为-O-时，并且
选自
时，B不为
或
A1、A2、A3、A4、A5、A6和A7定义如前所述。
更优选地，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中，R3为卤素；
X1为-CH2、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或甲基；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
n为1，2或3；
当A6为N时，
与B的连接方式为
或
选自含有选自N、O或S的两个杂原子的五元杂芳环，
优选选自以下基团：
其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、，前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0，1，2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基、取代或未取代的C3-6环烷基；
A1、A2、A3、A4、A5、A6和A7定义如前所述。
进一步优选地，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-或-NH-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或甲基
R3选自为氢、氘或氟；
R2、R4、n、
和B如前所定义和优选。
在一优选实施方式中，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)表示的化合物为通式(I-1)至(I-12)表示的化合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
R3选自为氢、氘或氟；
B的定义如前所述，当X1为-O-时，B不为
在一优选实施方式中，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)表示的化合物为通式(I-13)至(I-18)表示的化合物
其中，X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢或氘；
B的定义如前所述。
在一优选实施方式中，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)表示的化合物为通式(I-19)至(I-24)表示的化合物：
其中，X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢或氘；
R3选自为氢、氘或氟；
n为1，2或3；
B的定义如前所述。
更优选地，通式(I)表示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)表示的化合物选自下列化合物之一：
以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物。
本发明的内容也包含这里公布的任何一种新的中间体。
本发明又一个方面提供了通式(I)所示的化合物的制备方法，所述方法选自如下方法之一：
本申请中起始化合物1A、2E的合成参考文献WO2008115516A2、WO2011100380A1、WO2016065980A1、WO2007027527A2、WO2008027542A2，中间体化合物化合物1B和2B的合成参考本申请中的实施例。
合成方法一：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与上述定义相同；
步骤1-1:化合物1A与1B在三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯条件下反应得到化合物1C；
步骤1-2:化合物1C在叔丁醇钾存在条件下，反应得到化合物1D；
合成方法二：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与上述定义相同；
步骤2-1:化合物2A在二氧化锰存在条件下，反应得到化合物2B；
步骤2-2：化合物2B和化合物2C在叔丁醇钾在四氢呋喃中反应得到化合物2D；
步骤2-3：化合物2D和化合物2E在钯催化剂(例如，醋酸钯)、膦配体(例如，三邻甲基苯基膦)、有机碱(例如，N,N-二异丙基乙胺)条件下反应，获得化合物2F；
步骤2-4：化合物2F在钯碳和常压氢气条件下，反应获得化合物2G；
步骤2-5：化合物1C在叔丁醇钾存在条件下，反应得到化合物2H。
本发明的又一个方面提供了如通式(I)所述的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物、结晶水合物及溶剂合物在用于制备预防或治疗与CRL4CRBNE3泛素连接酶相关的疾病的药物或诊断试剂中的用途。
本发明的又一个方面提供了如通式(I)所示的化合物及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物，结晶水合物、溶剂合物在用于制备治疗或预防由TNF-α产生或由TNF-α活性调节、由IL-2产生或由IL-2活性调节、由IFNγ产生或由IFNγ活性调节异常相关的疾病、病症或病况的药物中的应用。
本发明的另一个方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效剂量的如通式(I)所示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物、结晶水合物、溶剂合物和其它药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物，结晶水合物、溶剂合物，以及另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分。本发明如通式(I)所示的化合物及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物、结晶水合物、溶剂合物可以和另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中产生协同作用。本发明如通式(I)所示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物，结晶水合物及溶剂合物也可以减轻或消除另外一种或多种具有医药学治疗活性成分在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中所产生的毒副作用，反之亦然。
本发明的另一个方面提供一种药物组合物，其中如上所述另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分，包括大分子化合物，例如蛋白、多糖和核酸等；小分子化合物例如无机化合物、有机金属化合物、合成或天然来源的有机小分子化合物等。
本发明的又一个方面提供了一种药物组合物，该优选的方案中，其特征在于所述的药物组合物还进一步包含其他治疗剂，所述的其它治疗剂为地塞米松、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、PD-1抑制剂、PDL-1抑制剂、培美曲塞、托泊替康、阿霉素、硼替佐米、吉西他滨、达卡巴嗪、克拉霉素、长春新碱、阿糖胞苷、泼尼松、多西他赛、氯法拉滨注射液、HDAC抑制剂、雄激素受体抑制剂、雄激素生物合成抑制剂、BTK抑制剂、红血球生长激素、米诺四环素、Elotuzumab、Palbociclib、Nivolumab、Pembrolizumab、Panobinostat、Ublituximab、Romidepsin、Eltrombopag、CAR-T和美法仑中的一种或多种。
本发明的又一个方面是提供如通式(I)所示的化合物用于制备治疗或预防与CRL4CRBN E3泛素连接酶相关的疾病，非限制性地包括癌症、疼痛、神经系统疾病和免疫系统疾病。其特征在于，所述的疾病、病症或病况包括：骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒单核细胞白血病、骨髓纤维化、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、睫状体和慢性黑色素瘤、虹膜黑色素瘤、复发性两眼间黑色素瘤、T细胞淋巴瘤、红系淋巴瘤、成单核细胞和单核细胞白血病、髓性白血病、中枢神经系统淋巴瘤、脑肿瘤、脑膜瘤、脊髓肿瘤、甲状腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、皮肤癌、肾细胞癌、星状细胞瘤、淀粉样变性、I型复杂性局部疼痛综合征、恶性黑色素瘤、神经根病、骨髓纤维化、成胶质细胞瘤、胶质肉瘤、恶性胶质瘤、难治性浆细胞瘤、眼外延伸黑色素瘤、实体瘤、乳头状和滤泡状甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌或原发性巨球蛋白血症。
本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的通式(I)所示的化合物，及其立体异构体、其可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型中的一种或多种，以及至少一种赋形剂、稀释剂或载剂。典型的配方是通过混合本发明的通式(I)表示的化合物及载体、稀释剂或赋形剂制备而成。适宜的载体、稀释剂或赋形剂是本领域技术人员所熟知的，包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性及/或可膨胀性聚合物、亲水性或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等物质。所用的特定载体、稀释剂或赋形剂，将根据本发明的化合物的使用方式和目的而定。一般以本领域技术人员认为可安全有效地给药至哺乳类动物的溶剂为基础而选择溶剂。一般而言，安全的溶剂是无毒性含水溶剂诸如水，以及其他可溶于水或与水混溶的无毒性溶剂。适宜的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(如PEG400、PEG300)等中的一种或多种。该配方也可包括一种或多种缓冲剂、安定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、香料剂、调味剂或其它已知的添加剂，使该药物以可被接受的形式制造或使用。
本发明所述的如通式(I)所示的化合物与至少一种其它药物的组合使用时，两种药物或多种药物可以分开使用也可以组合使用，优选以药学组合物的形式给药。本发明的如通式(I)的化合物或药物组合物能以任一已知的口服、静脉注射、直肠给药、阴道给药、透皮吸收、其它局部或全身给药形式，分开或一起给药至受试者。
这些药物组合物亦可含有一种或多种缓冲剂、安定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、香料剂、调味剂或其它已知的添加剂，使该药物组合物以可被接受的形式制造或使用。
本发明药物优选口服给药途径。用于口服给药的固态剂型可包括胶囊、片剂、粉末或颗粒制剂。在固态剂型中，本发明的化合物或药物组合物与至少一种惰性赋形剂、稀释剂或载剂混合。适宜的赋形剂、稀释剂或载剂包括诸如柠檬酸钠或磷酸二钙的物质，或淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、硅酸等；粘合剂如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等；湿润剂如甘油等；崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、特定的络合硅酸盐、碳酸钠等；溶液阻滞剂如石蜡等；吸收促进剂如季铵化合物等；吸附剂如高岭土、膨润土等；润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠等。在胶囊与片剂的情况下，该剂型亦可包括缓冲剂。类似类型的固态组合物亦可作为软式与硬式填充明胶胶囊中的填料，其使用乳糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂。
上述用于口服给药的液态剂型包括药学上可接受的乳化液、溶液、悬浮液、糖浆液与酏剂。除了本发明的化合物或其组合物之外，该液态剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂及乳化剂诸如乙醇、异丙基醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺；油类(如棉籽油、落花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等)；甘油；四氢糠基醇；聚乙二醇与脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；或这些物质中的几种的混合物等。
除了这些惰性稀释剂之外，该组合物也可包括赋形剂，诸如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、增甜剂、调味剂与香料剂中的一种或多种。就悬浮液而言，除了本发明的化合物或组合之外，可进一步含有载剂诸如悬浮剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醣醇、脱水山梨醣醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂及黄耆胶，或这些物质中几种的混合物等。
用于直肠或阴道投药之组合物优选栓剂，可通过将本发明的化合物或组合与适宜的非刺激性赋形剂或载剂混合而制备，赋形剂或载剂诸如可可豆脂、聚乙二醇或栓剂蜡，其在一般室温为固态而在体温为液态，可在直肠或阴道中熔化而释出活性化合物。
本发明化合物或药物组合物可采用其它局部给药剂型给药，包括膏、粉末、喷剂及吸入剂。该药物可在无菌条件下与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂以及所需要的任一防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用配方、眼用油膏、粉末与溶液，亦意欲涵盖于本发明的范围内。
本发明还提供了如通式(I)所示的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢前体、代谢产物、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物、溶剂化物或晶型作为CRL4CRBNE3泛素连接酶选择性调节剂的用途，调节CUL4CRBN E3泛素连接酶的活性。
本发明还提供了一种如通式(I)所示的化合物及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢前体、代谢产物、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物、溶剂化物或晶型，在制备用于治疗或预防由CRL4CRBNE3泛素连接酶参与的相关疾病的药物中的用途。由CRL4CRBNE3泛素连接酶参与的相关疾病包括(但不限于)肿瘤、中枢系统疾病和免疫性疾病。
在优选实施方案中，本发明涉及一种治疗或预防由TNF-α产生的或由TNF-α活性调节、IL-2产生或有IL-2活性调节异常相关的疾病、病症或病况的方法，所述的方法通过给予受试者治疗或预防有效量的通式(I)所示的异吲哚啉衍生物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素化合物、代谢物和前药中的一种或多种。根据本发明的方法，此类待治疗或预防的疾病、病症和病况的实例包括但不限于癌症：包括实体瘤、TNF-α相关病症、不期望的血管生成相关疾病和病症、疼痛、黄斑变性(MD)相关综合征、皮肤病、角化病、呼吸系统疾病(例如肺部疾病)、免疫缺陷病、中枢神经系统(CNS)疾病、自身免疫性疾病、动脉粥样硬化、遗传、过敏、病毒、睡眠病症及相关综合征、炎性疾病、PDE-4相关疾病或IL-2相关疾病。本领域中众所周知的此类疾病、病症或病况的实例包括但不限于在PCT专利出版物WO2012015986和WO2006018182以及美国专利出版物US20100204227中描述的那些，其中一些在此通过引用将其整体并入本文。
本发明通式(I)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型可用于单一治疗或联合治疗中。当用于联合治疗中时，包含治疗有效剂量的权力要求1所述的式(I)的化合物，其对映异构体、非对映异构体、外消旋体及其混合物，以及其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物，以及另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分。所述的另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分，包括大分子化合物，例如蛋白(抗体或多肽)、多糖和核酸(DNA或RNA)等；和小分子化合物，例如无机化合物、有机金属化合物、合成或天然来源的有机小分子化合物等；此外还包括辐射、外科手术、细胞疗法、激素疗法或细胞因子疗法等。本发明权力要求1所述的如式(I)的化合物，其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体及其混合物，以及其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物可以和另外一种或多种具有医药学治疗活性的成分在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中产生协同作用。本发明权力要求1所述的如式(I)的化合物，其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体及其混合物，以及其药学上可接受的盐、结晶水合物及溶剂合物也可以减轻或消除另外一种或多种具有医药学治疗活性成分在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中所产生的毒副作用，反之亦然。
在另一优选方案中，所述的疾病或功能紊乱包括,但不限于：癌症、与血管生成相关的疾病或功能紊乱、疼痛(包括但不限于复杂性局部疼痛综合症)、黄斑退化及相关功能紊乱、皮肤疾病、肺部功能紊乱、免疫缺陷型疾病、中枢神经系统的损伤及功能紊乱、TNFα相关的疾病或功能紊乱。
在另一优方案中，所述的癌症包括(但不限于)：皮肤癌症(如黑色素瘤)、淋巴系统癌症、乳腺癌、宫颈癌、子宫癌、消化道癌症、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌、口腔癌、脑瘤、头颈部癌、咽喉癌、睾丸癌、肾癌、胰腺癌、脾癌、肝癌、膀胱癌，喉癌以及与艾滋病相关的癌症。本发明所提供的化合物同样对血液瘤和骨髓瘤有效，如能用于治疗多发性骨髓瘤和急慢性白血病。本发明所提供的化合物能用于预防或治疗原发肿瘤和转移性肿瘤。
应理解在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。上述说明，并不意味着以任何形式限制本发明的方面。
通式(I)所示的化合物可以含有一个或多个不对称或手性中心，因此可以以不同立体异构体形式存在。本发明化合物包括所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物(如外消旋混合物)，代谢前体、代谢产物、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，通式(I)所示的化合物还可以以不同互变异构体形式存在，所有这些形式均包括在本发明范围内。
术语“取代”指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中有相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。环状取代基，例如杂环烷基，可以与另一个环相连，例如环烷基，从而形成螺二环系，例如，两个环共用一个碳原子。
本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。本发明中相关结构上的取代，包括取代和未取代，如“可选地”被某种取代基取代，是指包括被某种取代基取代或者未取代的含义。
本发明中提到的当取代基数>1时，取代基可以为相同或不同的取代基，指当某一种结构中取代基数为多个时，取代基组合可以为选自多种不同类型的取代基。
术语“取代”只适用于能够被取代基所取代的位点，不包括在现有的化学知识上不能实现的取代。
术语“互变异构体”是指经由低能垒相互转化的具有不同能量的构造异构体，反应一般导致伴随单键和相邻双键转变的氢原子或质子的形式移动。
术语“对映体”是指互为镜像而不可重叠的立体异构体。
“非对映体”是指具有两个或者两个以上的手性中性，并且不成镜像的立体异构体。
“消旋体”是指两个互为镜像的立体异构体，旋光性相反，互相抵消了旋光性。
“可药用的盐”是指药物分子与对应的有机酸、无机酸或者有机碱、无机碱形成相应的盐的，例如盐酸、甲酸、三氟乙酸、琥珀酸、甲磺酸盐等。
“水合物”是指含有水的化合物。
如本文所用，术语“代谢产物”是指药物分子在体内所经历的化学结构的变化后产生的活性物质，该活性物质一般为前述药物分子的衍生物，其还可被化学修饰。
如本文所用并且除非另有规定，术语“晶型(polymorph)”是指在结晶时，分子在晶格空间的排列不同而形成的一种或多种晶体结构。
如本文所用，术语“溶剂化物”是指通式(I)化合物、其药学上可接受的盐、晶型、立体异构体、同位素化合物、代谢物或前药的一种晶体形式，它还包含一种或多种融入晶体结构中的溶剂分子。溶剂化物可包括化学计量量或非化学计量量的溶剂，并且溶剂中的溶剂分子可能以有序或非有序排列的形式存在。含有非化学计量量溶剂分子的溶剂化物可能是溶剂化物至少丢失一个(但并非全部)溶剂分子得到的。在一个特定实施例中，一种溶剂化物是一种水合物，意味着化合物的结晶形式进一步包括水分子，以水分子作为溶剂。
如本文所用并且除非另有规定，术语“前药”是指包含生物反应官能团的化合物的衍生物，使得在生物条件下(体外或体内)，生物反应官能团可从化合物上裂解或以其他方式发生反应以提供所述化合物。通常，前药无活性，或者至少比化合物本身活性低，使得直到将所述化合物从生物反应官能团上裂解后才能发挥其活性。生物反应官能团可在生物条件下水解或氧化以提供所述化合物。例如，前药可包含可生物水解的基团。可生物水解的基团实例包括但不限于可生物水解的磷酸盐、可生物水解的酯、可生物水解的酰胺、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的氨基甲酸酯和可生物水解的酰脲。有关前药的综述参见，例如J.Rautioetal.，Nature Reviews Drug Discovery 2008，7，255-270 and Prodrugs：Challenges和Rewards(V.Stellaetal.ed.，Springer，2007)。
术语“卤素”包括氟、氯、溴或碘。
术语“烃基”是指只含有碳原子和氢原子的取代基，非限制性地包括甲基、乙基、异丙基、丙基、环己基、苯基等。
术语“C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等。
术语“环烷基”是指饱和或部分不饱和单环或者多环环状烃取代基。单环环烷基非限制性包括环丙基、环丁基、环戊烯基、环己基。多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“环烷基”是指包含取代或未取代的环烷基，环烷基非限制性实施例包含：
术语“芳基”是指具有共轭的p电子体系的6-14元全碳单环或稠合多环基团，优选为6至10元环，更优选苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合与杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。芳基可以是取代的或未取代的，非限制性实施例包含：
术语“杂芳基”是指具有1至4个杂原子作为环原子，其余的环原子为碳的5-14元芳基，其中杂原子包括氧、硫和氮。优选为5-10元。杂芳基优选为5元或6元，如噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合与芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。芳基可以是取代的或未取代的，非限制性实施例包含：
术语“杂环基”是指含有一个或多个饱和和/或部分饱和单环或者多环环状取代基，其包括3至20个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1-4个是杂原子，例如，环氧丙烷、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”是指5-20元，单环之间共用一个原子(称为螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧，硫或者S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳。螺杂环可以稠合与6-10元芳基或5-10元杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为螺杂环。螺杂环基的非限制性实施例包含：
“稠杂环基”指5-20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的p电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：
“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的p电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环。
杂环基环可以稠合与芳基、杂芳基、或环烷基环上，与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：
术语“C1-C6烷氧基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。
术语“C1-C6烷氧基羰基”非限制性地包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基和已氧基羰基等。
术语“卤素取代烷基”是指由单个或者多个卤素取代的直链、支链或者环状烷基，非限制性地包括2-溴乙基、2-溴丙基等。
术语“C2-C10烯基”是指可以为2-10个碳的烯基，如乙烯基、丙烯基、丁烯基、苯乙烯基、苯丙烯基。
术语“C2-C10炔基”是指可以为2-10个碳的炔基，如乙炔基、丙炔基、丁炔基、苯乙炔基、苯丙烯基。
术语“C3-C8环烷基”是指在环上具有3至8个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“5-10元杂环基”是指含有一个或多个饱和和/或部分饱和环，其包括5至10个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳；例如，环氧丙烷、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基。
术语“C3-C6杂环基”是指含有一个或多个饱和和/或部分饱和环，其包括3至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子为碳；例如，环氧丙烷、四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基。
术语“羟基取代烷基”是指由单个或者多个羟基取代的直链、支链或者环状烷基，非限制性地包括(S)-1-羟基异丁-2-基、(R)-1-羟基异丁-2-基等。
本文所用术语“药学上可接受的盐”指药学上可接受的有机或无机盐。示例性盐包括但不限于：硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、Gentisinate、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等酸性氨基酸、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1-1-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。本发明中所用化合物可与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。合适的碱盐包括但不限于铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐、铋和二乙醇胺盐。药学上可接受的盐的综述见Hand book of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use(P.Heinrich Stahland Camille G.Wermuth ed.，Wiley-VCH，2002)。
本发明中所用术语“氘(D)”是氢的一中稳定形态的非放射性同位素，其原子量为2.0144。天然中的氢是以H(氢或氕)、D(2H或氘)和T(3H或氚)同位素混合物的形式存在的，其中氘的丰度为0.0156％。根据本领域普通技术知识，所有含有天然氢原子的化合物结构式中，氢原子实际上表示的是H、D与T的混合物。因此，化合物中任何位点处的氘丰度大于其自然丰度0.0156％时，这些化合物都应该被认为是非天然的或氘富集的。
本发明中所用术语“同位素化合物”是指本发明的通式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、代谢物，或前药中含有一个或多个天然或非天然丰度的原子同位素。本发明也涵盖经同位素标记的本发明化合物，除了一个或多个原子是被原子质量或质量数不同于自然中常见的原子质量或质量数之一原子所置换的事实之外，其是与此述者相同。可纳入本发明的化合物中的同位素实例，包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘及氯之同位素，其分别诸如：2氢、3氢、11碳、13碳、14碳、13氮、15氮、15氧、17氧、18氧、31磷、32磷、35硫、18氟、123碘、125碘及36氯。
某些同位素标记的本发明的化合物(例如用3H和14C标记的那些)用于化合物和/或底物组织分布试验。特别优选氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素，因为它们容易制备和检测。而且，较重的同位素如氘(即2H)进行取代可以提供由较大的代谢稳定性导致的某些治疗优点(例如体内半衰期增加或剂量需求减小)，因而在某些情况下可能是优选的。正电子发射同位素，例如15O、13N、11C和18F用于正电子发射体层摄影术(PET)研究，以检查底物受体占用率。同位素标记的本发明的化合物一般可以遵循类似于在方案和/或下文实施例中所公开的方法，通过用同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂来制备。本发明的化合物的所有同位素变体，无论是否具有放射性，都包括在本发明的范围内。
本发明中可以氘代的化合物位置可以在多个不同的位置进行氘代，氘代的位置有如下形式，但不限制于以下形式：
通式(I)中化合物氘带的位置，还可以选自在X1、X2、
或B部位，进行一个或多个不同位置的氘代。
在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。
附图说明
图1为化合物与CRBN相互作用实验结果。
具体实施方法
一、制备实施例
关键中间体的合成：
中间体1：2-甲基-3-(甲氧基甲氧基)苯甲酸甲酯
液用二氯甲烷稀释,依次用水和饱和食盐水洗涤,无水硫酸镁干燥,过滤，减压浓缩.所得油状物经硅胶柱层析得到2-甲基-3-(甲氧基甲氧基)苯甲酸甲酯10.27g,产率81％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(s,1H),7.01(s,1H),6.80(d,J＝8.4Hz,1H),3.58(s,3H),2.30(t,J＝8.0Hz,2H),1.94–1.82(m,1H),1.80–1.67(m,1H),1.37(s,3H).
中间体2：2-溴甲基-3-(甲氧基甲氧基)苯甲酸甲酯
剂，所得残余物经硅胶柱层析得2-溴甲基-3-(甲氧基甲氧基)苯甲酸甲酯12.74g,产率90％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(dd,J＝6.4,2.6Hz,1H),7.30(dd,J＝9.6,5.4Hz,2H),5.29(s,2H),5.07(s,2H),3.92(s,3H),3.52(s,3H).
中间体3：5-胺基-4-(4-(甲氧基甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯
下搅拌反应1小时,再转移至40℃继续反应21.5小时。减压除去乙腈，所得残余物溶解于二氯甲烷中，有机相用饱和氯化铵洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩.所得油状物用己烷/乙酸乙酯(5:1)的混合溶液洗涤,减压干燥得到5-胺基-4-(4-(甲氧基甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯(5.9g,84％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(d,J＝7.1Hz,1H),7.41(t,J＝7.7Hz,1H),7.28(s,1H),5.59(s,1H),5.35–5.20(m,2H),4.93(dd,J＝8.9,6.1Hz,1H),4.45(q,J＝17.5Hz,2H),3.64(s,3H),3.51(s,3H),2.52–2.15(m,4H).
中间体4：5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯
剂，所得残余物经硅胶柱层析得到目标产物5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯,2.48g,产率85％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.04(s,1H),7.57(s,1H),7.31(t,J＝7.7Hz,1H),7.19(dd,J＝34.5,24.1Hz,2H),6.99(d,J＝7.9Hz,1H),5.76(s,1H),4.72(dd,J＝10.4,4.7Hz,1H),4.48(d,J＝17.4Hz,1H),4.31(d,J＝17.4Hz,1H),3.50(s,3H),2.33–2.12(m,3H),2.12–1.96(m,1H).
中间体5：5-胺基-4-(4-(2-炔丙氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯
2h,减压除溶剂，经快速分离柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯＝4：1→二氯甲烷/甲醇＝20：1)得到5-胺基-4-(4-(2-炔丙氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯1.06g,，产率94％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(s,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.31(dd,J＝15.3,7.6Hz,2H),7.22(s,1H),4.96(d,J＝2.4Hz,2H),4.72(dd,J＝10.5,4.7Hz,1H),4.52(d,J＝17.6Hz,1H),4.39(d,J＝17.6Hz,1H),3.65(t,J＝2.4Hz,1H),3.51(s,3H),2.30–2.15(m,3H),2.13–2.02(m,1H).
中间体6：3-(1-氧代-4-(2-炔丙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮
相同温度反应15min后，加入350ul 1N HCl淬灭，加入80ml乙酸乙酯，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除溶剂，得到3-(1-氧代-4-(2-炔丙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮862mg,产率96％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),7.52(t,J＝7.8Hz,1H),7.36(d,J＝7.5Hz,1H),7.32(d,J＝7.7Hz,1H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.96(d,J＝2.4Hz,2H),4.40(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.64(t,J＝2.4Hz,1H),2.91(ddd,J＝17.4,13.6,5.3Hz,1H),2.62–2.54(m,1H),2.48–2.38(m,1H),2.04–1.94(m,1H).
中间体7：5-胺基-4-(4-(3-丁炔-1-氧)-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯
10.4,4.9Hz,1H),4.51(d,J＝17.6Hz,1H),4.36(d,J＝17.6Hz,1H),4.20(t,J＝6.3Hz,2H),3.50(s,3H),2.93(t,J＝2.6Hz,1H),2.69(td,J＝6.4,2.6Hz,2H),2.29–2.13(m,3H),2.11–1.99(m,1H).
中间体8：3-(4-(3-丁炔-1-氧)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮
＝13.3,5.1Hz,1H),4.37(d,J＝17.4Hz,1H),4.22(dd,J＝12.0,5.6Hz,3H),2.97–2.83(m,2H),2.62-2.54(m,2H),2.62–2.53(m,1H),2.48–2.37(m,1H),1.98(dt,J＝10.2,4.0Hz,1H).
中间体9：(S)-3-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-3-甲基哌啶-2,6-二酮
加入N,N-二异丙基乙胺(818ul,4.95mmol),反应体系加热至60℃反应24h,减压浓缩，加入20ml乙酸回流24h,减压除醋酸，经快速分离柱层析得到(S)-3-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-3-甲基哌啶-2,6-二酮399mg，收率65％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.86(s,1H),10.14(s,1H),7.31(t,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝7.3Hz,1H),7.00(d,J＝7.9Hz,1H),4.59(d,J＝17.4Hz,1H),4.48(d,J＝17.4Hz,1H),2.78–2.52(m,3H),1.94–1.82(m,1H),1.68(s,3H).
中间体10：(S)-3-甲基-3-(1-氧代-4-(2-丙炔-1-氧)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮
(26ul,0.438mmol),0℃充分冷却，逐滴加入偶氮二甲酸二异丙酯(108ul,0.548mmol),随后升至室温反应2h,减压除溶剂，经快速分离柱层析得到白色固体85mg,收率75％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.85(s,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(dd,J＝15.2,7.8Hz,2H),4.97(d,J＝2.3Hz,2H),4.67(d,J＝17.6Hz,1H),4.54(d,J＝17.6Hz,1H),3.64(t,J＝2.3Hz,1H),2.78-2.52(m,3H),1.89(dt,J＝9.1,4.1Hz,1H),1.69(s,3H).
中间体11：(S)-4-羟基-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-)异吲哚啉-1,3-二酮
的甲苯(20mL),搅拌下加入三乙胺(187ul,1.34mmol),将反应液加热至120℃分水反应48h(连接分水器)。反应完毕后，减压除去溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经柱层析得到(S)-4-羟基-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-)异吲哚啉-1,3-二酮110mg,白色固体，收率31％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.07(s,1H),10.97(s,1H),7.62(dd,J＝8.3,7.3Hz,1H),7.22(dd,J＝15.6,7.7Hz,2H),2.72–2.64(m,1H),2.57-2.52(m,2H),2.05–1.99(m,1H),1.86(s,3H).
中间体12：(S)-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-)-4-(2-丙炔-1-氧)异吲哚啉-1,3-二酮
溶解于15mL干燥四氢呋喃中,将反应液用冰浴冷却，再加入DIAD(144ul,0.73mmol)，加料完毕，将反应液升至室温反应，反应完全后，减压浓缩除去溶剂，经柱层析得到白色固体98mg,收率84％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),7.85–7.80(m,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.43(d,J＝7.1Hz,1H),5.04(d,J＝2.3Hz,2H),3.69(t,J＝2.3Hz,1H),2.75–2.61(m,1H),2.57-2.52(m,3H),2.07–1.97(m,1H),1.87(s,3H).
叠氮中间体的一般合成方法：
叠氮合成方法1：冰浴冷却条件下，将芳香胺(1equiv.)溶解于水和浓盐酸(v/v＝5:1)的混合溶剂中，逐滴加入亚硝酸钠(1.3equiv.)的水溶液),反应液于0℃下冷却搅拌反应15分钟后加入叠氮化钠的水溶液(1.2equiv.)，将反应液转移至室温反应2小时，反应完毕，乙酸乙酯稀释萃取，硅胶柱分离得到相应的芳基叠氮化合物。
叠氮合成方法2：将烷基溴代物(1eqiv.)溶于DMF中，加入叠氮化钠(2eqiv.),反应液升至80℃反应过夜.反应完毕，反应液用乙酸乙酯萃取，硅胶柱分离得到烷基叠氮化合物。
叠氮合成方法3：将化合物醇衍生物(1equiv.)溶于干燥的二氯甲烷中，加入三乙胺(2equiv.)，DMAP(0.1equiv.),4-甲苯磺酰氯(1.1equiv.),室温反应2h,二氯甲烷稀释，依次用水、饱和氯化铵和饱和NaCl洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。将粗品溶于DMF中，加入叠氮化钠(1.2eq),升温至80℃,反应过夜,反应完全后，用乙酸乙酯稀释，依次用水洗和饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除溶剂，经快速分离柱层析得产物,
叠氮合成方法4:将化合物醇衍生物(1equiv.)溶于干燥的四氢呋喃中，加入三苯基膦(2eqiv.)和偶氮二甲酸二乙酯(2eqiv.),0℃充分冷却，在氮气保护条件下，加入叠氮磷酸二苯酯(2eqiv.),升至室温反应2h.反应完毕，减压除去溶剂，经硅胶柱分离得到产物。
叠氮合成方法5：将醇衍生物(1eqiv.)溶于四氢呋喃中，加入叠氮磷酸二苯酯(1.5eqiv.),DBU(2eqiv.),加热回流6h,减压除去溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经快速分离柱层析得到产物
叠氮合成方法6：(a)将NaN3(9eqiv.)溶于2mL水中，加入3mL二氯甲烷，冰浴冷却逐滴加入三氟甲磺酸酐(1.8eqiv.),相同温度反应2h,分液，水层用二氯甲烷(2×2mL)，合并有机层，有机层用饱和碳酸钠溶液洗涤，分液，直接用于下一步；(b)将烷基胺类衍生物溶于10mL甲醇和2mL水中，加入五水硫酸铜(0.02eqiv.)和无水碳酸钾(1eqiv.),搅拌下逐滴加入第一步产物的二氯甲烷溶液,室温搅拌过夜，二氯甲烷萃取，水层用1N HCl中和，二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸镁干燥，旋干得产物.
实施例的合成：
合成路线1：
其中，R1、R2、R3、R4、X2和B的定义与上述定义相同,S-1为上述中间体，S-2为上述叠氮中间体，反应条件见下具体实施例中。
实施例1:3-(4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(1)
以苄基叠氮和中间体6为原料，通过合成路线1，制备方法如下：
mg,0.0268mmol,0.2equiv.)溶解于二甲基亚砜-水的混合溶液(v/v＝4:1,5mL)中，向反应液中加入二异丙基乙基胺(22μL,0.134mmol,1equiv.)，待反应液混合均匀后，加入抗坏血酸钠(13mg，0.067mmol，0.5eq),继续搅拌反应1分钟，向反应液中加入三[(1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺(TBTA,7mg,0.0134mmol)，所得反应液于室温下搅拌反应30分钟。反应完毕，向反应混合液中加入水和铜离子吸附剂(CupriSorb)，反应混合液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化铵和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压干燥，所得粗品用HPLC分离得到纯的3-(4-((1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮34mg,白色固体，收率59％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.33(s,1H),7.54–7.47(m,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(dt,J＝15.5,7.1Hz,6H),5.61(s,2H),5.29(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.4Hz,1H),2.96–2.82(m,1H),2.56(d,J＝15.9Hz,1H),2.41(dt,J＝13.2,11.2Hz,2H),1.96(dd,J＝13.7,6.9Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H21N5O4[M+H]+:432.16，实测值为432.30。
实施例2:3-(1-氧代-4-((1-(吡啶-4-甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(2)
-2,6-二酮23.7mg,收率12％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.56(d,J＝5.7Hz,2H),8.38(s,1H),7.55–7.48(m,1H),7.45(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.2Hz,1H),7.19(d,J＝5.7Hz,2H),5.70(s,2H),5.33(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.35(d,J＝17.5Hz,1H),4.19(d,J＝17.4Hz,1H),2.90(ddd,J＝17.4,13.8,5.4Hz,1H),2.58(d,J＝2.3Hz,1H),2.47–2.34(m,1H),2.01–1.88(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H20N6O4[M+H]+:433.16，实测值为433.30。
实施例3:3-(1-氧代-4-((1-(吡啶-3-甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(3)
29.2mg,收率17％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.61(d,J＝1.7Hz,1H),8.55(dd,J＝4.7,1.2Hz,1H),8.38(s,1H),7.73(dt,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.53–7.47(m,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),7.42–7.38(m,1H),7.34(d,J＝7.2Hz,1H),5.68(s,2H),5.30(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),2.90(ddd,J＝17.7,13.7,5.4Hz,1H),2.59(s,1H),2.41(qd,J＝13.3,4.4Hz,1H),2.01–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H20N6O4[M+H]+:433.15，实测值为433.30。
实施例4:3-(1-氧代-4-((1-(喹啉-4-甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(4)
啶-2,6-二酮10.1mg,收率14％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.87(d,J＝4.4Hz,1H),8.40(s,1H),8.24(d,J＝8.3Hz,1H),8.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.86–7.77(m,1H),7.74–7.65(m,1H),7.53–7.47(m,1H),7.44(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.3Hz,1H),7.06(d,J＝4.4Hz,1H),6.22(s,2H),5.75(s,1H),5.33(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),2.96–2.83(m,1H),2.58(d,J＝2.1Hz,1H),2.40(ddd,J＝26.2,13.1,4.4Hz,1H),1.96(dt,J＝10.2,3.1Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H22N6O4[M+H]+:483.17，实测值为483.35。
实施例5:3-(4-((1-(3-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(5)
6.93–6.84(m,3H),4.32(s,2H),3.83(s,3H).
步骤2：以3-甲氧基苄基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(3-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮19.5mg,收率46％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.33(s,1H),7.53–7.47(m,1H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.31–7.25(m,1H),6.92–6.88(m,2H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),5.57(s,2H),5.30(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.5Hz,1H),3.72(s,3H),2.90(ddd,J＝17.5,13.8,5.4Hz,1H),2.61–2.52(m,1H),2.41(ddd,J＝17.6,13.3,5.0Hz,1H),2.02-1.93(ddd,J＝11.1,8.4,5.9Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H23N5O5[M+H]+:462.17，实测值为462.38。
实施例6:3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(6)
J＝8.9,3.6Hz,2H),7.52(d,J＝5.3Hz,2H),4.44(s,2H).
步骤2：以3-三氟甲基苄基叠氮和中间体6为起始原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮4.3mg，收率9％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.39(s,1H),7.72(d,J＝7.0Hz,2H),7.62(q,J＝8.1Hz,2H),7.52–7.47(m,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.34(d,J＝7.1Hz,1H),5.74(s,2H),5.31(s,2H),5.10(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),2.90(ddd,J＝17.2,13.8,5.4Hz,1H),2.60–2.53(m,1H),2.40(ddd,J＝17.6,13.5,4.7Hz,1H),2.01–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H20F3N5O4[M+H]+:500.15，实测值为500.38。
实施例7:3-(4-((1-(3-吗啉苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(7)
升至室温反应过夜,乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经硅胶柱层析得到无色油状物3.89g,收率96.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),7.21(dt,J＝15.3,7.6Hz,2H),4.71(s,2H),0.95(s,9H),0.11(s,6H).
步骤2：将3-溴苄氧基二甲基叔丁基硅醚(2g,6.64mmol)，吗啉(1.65ml,18.98mmol),Pd2(dba)3(61mg,0.067mmol)，(+)-BINAP(108mg,0.17mmol),叔丁醇钠(1.28g,13.28mmol)加入到100mL两口瓶中，加入20ml甲苯，用氮气置换3次，并在氮气保护下回流反应过夜。反应完毕，用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯稀释，有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除溶剂，粗品直接投下一步。将上述粗品溶于20mL四氢呋喃,加入的四丁基氟化铵(1M/L的四氢呋喃溶液,10.8mL),室温反应1h,减压除溶剂，用乙酸乙酯溶解，有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经硅胶柱层析(PE:EA＝3：1to 1:1).得到3-羟甲基苯基吗啡啉1g,黄色固体，两步总收率79％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26(d,J＝15.7Hz,1H),6.93(s,1H),6.85(t,J＝7.8Hz,2H),4.65(s,2H),3.92–3.79(t,J＝4.7Hz,4H),3.25–3.08(t,J＝4.7Hz,4H).
步骤3:将3-羟甲基苯基吗啡啉(0.2g,1.036mmol)溶于10mL干燥的四氢呋喃中，加入三苯基膦(543mg,2.07mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(326μL,2.07mmol),0℃充分冷却，氮气保护条件下加入叠氮磷酸二苯酯(446μL,2.071mmol),升至室温反应2h.减压浓缩，经快速分离柱层析得到4-(3-叠氮甲基苯基)吗啡啉176mg,无色油状物，收率78％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29(d,J＝7.8Hz,1H),6.88(dd,m,1H),6.83(m,2H),4.30(s,2H),3.89–3.84(t,J＝4.8Hz,4H),3.20–3.15(t,J＝4.8Hz,4H).
步骤4：以4-(3-叠氮甲基苯基)吗啡啉和中间体6为起始原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(3-吗啉苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮17.5mg,白色固体，收率35％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.32(s,1H),7.52–7.46(m,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.20(t,J＝7.9Hz,1H),6.94(s,1H),6.89(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.72(d,J＝7.6Hz,1H),5.52(s,2H),5.29(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.5Hz,1H),3.74–3.68(t,J＝4.7Hz,4H),3.09–3.04(t,J＝4.7Hz,4H),2.90(ddd,J＝17.4,13.6,5.3Hz,1H),2.59–2.53(m,1H),2.40(qd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.00–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H28N6O5[M+H]+:517.21，实测值为517.44。
实施例8:3-(4-((1-(4-吗啉苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(8)
NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23(d,J＝8.6Hz,2H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),4.25(s,2H),3.89–3.83(t,J＝4.8Hz,4H),3.21–3.15(t,J＝4.8Hz,4H).
步骤2：以4-(4-叠氮甲基苯基)吗啡啉和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(4-吗啉苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮25mg,白色固体，收率48％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.25(s,1H),7.53–7.47(m,1H),7.44(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.23(d,J＝8.7Hz,2H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.47(s,2H),5.27(s,2H),5.09(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.32(d,J＝17.4Hz,1H),4.17(d,J＝17.4Hz,1H),3.77–3.67(m,4H),3.13–3.04(m,4H),2.95–2.83(m,1H),2.59–2.53(m,1H),2.41(ddd,J＝17.7,13.5,4.7Hz,1H),1.98–1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H28N6O5[M+H]+:517.21，实测值为517.44。
实施例9:3-(4-((1-(3-二甲胺基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(9)
8.3,7.5Hz,1H),7.28-7.23(m,1H),6.71(m,1H),6.66(s,1H),4.29(s,2H),2.97(s,6H).
步骤2：以3-叠氮甲基-N,N-二甲基苯胺和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(3-二甲胺基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮11.3mg,白色固体，收率24％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.31(s,1H),7.52–7.47(m,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.70–6.64(m,2H),6.55(d,J＝7.4Hz,1H),5.51(s,2H),5.29(s,2H),5.09(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.5Hz,1H),2.95–2.88(m,1H),2.86(s,6H),2.57(m,1H),2.40(qd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.00–1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H26N6O4[M+H]+:475.20，实测值为475.44。
实施例10:3-((4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-)-1-氧代异吲哚啉-4-)氧代)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-)甲基)苯甲酸甲酯(10)
1.5Hz,2H),7.49(dt,J＝15.1,7.6Hz,2H),4.40(s,2H),3.93(s,3H).
步骤2：以3-叠氮甲基苯甲酸甲酯和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-((4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-)-1-氧代异吲哚啉-4-)氧代)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-)甲基)苯甲酸甲酯22.8mg,白色固体，收率48％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.37(s,1H),7.93(d,J＝9.2Hz,2H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.57–7.46(m,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.2Hz,1H),5.71(s,2H),5.30(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),3.85(s,3H),2.96–2.84(m,1H),2.59-2.54(m,1H),2.41(m,1H),2.01–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H23N5O6[M+H]+:490.16，实测值为490.40。
实施例11:3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(11)
同合成路线1及实施例1，得3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮16.8mg,收率43％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.38(s,1H),7.48(dt,J＝21.5,8.4Hz,3H),7.33(dd,J＝8.6,6.6Hz,4H),5.69(s,2H),5.31(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),2.97–2.80(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.40(qd,J＝13.3,4.4Hz,1H),1.97(dd,J＝11.1,5.6Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H20F3N5O5[M+H]+:516.14，实测值为516.32。
实施例12:3-(4-((1-(4-(吗啉甲基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(12)
MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝8Hz,2H),7.27(d,J＝8Hz,2H),4.32(s,2H),3.76–3.66(m,4H),3.50(s,2H),2.49–2.39(m,4H).
步骤2：以4-(4-叠氮甲基苄基)吗啡啉和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(4-(吗啉甲基)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮20.2mg,白色固体，收率28％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.31(s,1H),7.52–7.47(m,1H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝7.3Hz,1H),7.29(q,J＝8.4Hz,4H),5.58(s,2H),5.29(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.5Hz,1H),3.57–3.52(t,J＝8.0Hz,4H),3.43(s,2H),2.95–2.83(m,1H),2.56(m,1H),2.47–2.35(m,1H),2.31(t,J＝8.0Hz,4H),1.99–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H30N6O5[M+H]+:531.23，实测值为531.58。
实施例13:3-(4-((1-((1H-苯并[d]咪唑-5-)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(13)
应液用甲醇淬灭，减压浓缩除去溶剂，向反应混合液中加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取(3×80mL)，合并有机层，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析，得到(1H-苯并[d]咪唑-5-)甲醇94mg,无色液体，收率13％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.36(s,1H),8.15(s,1H),7.57–7.44(m,2H),7.14(d,J＝9.3Hz,1H),5.14(t,J＝5.6Hz,1H),4.58(d,J＝5.6Hz,2H).
步骤2:将(1H-苯并[d]咪唑-5-)甲醇(87mg,0.59mmol)溶于10mL四氢呋喃中，随后加入叠氮磷酸二苯酯(140μL,0.65mmol),DBU(98μL,0.708mmol),加热回流6h。反应完毕，减压除去溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析得到6-叠氮甲基-1H-苯[d]咪唑69.5mg,收率68％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.54(s,1H),8.25(s,1H),7.61(m,2H),7.20(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),4.52(s,2H).
步骤3：以6-叠氮甲基-1H-苯[d]咪唑和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得3-(4-((1-((1H-苯并[d]咪唑-5-)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮5.8mg,收率13％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),10.94(s,1H),8.31(s,1H),8.23(s,1H),7.70–7.59(m,1H),7.58–7.46(m,2H),7.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝7.1Hz,1H),7.20(ddd,J＝15.9,6.7,4.8Hz,1H),5.69(s,2H),5.27(s,2H),5.08(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.32(d,J＝17.5Hz,1H),4.16(d,J＝17.4Hz,1H),2.95–2.81(m,1H),2.59–2.54(m,1H),2.40(ddd,J＝29.1,14.3,5.7Hz,1H),1.98–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H21N7O4[M+H]+:472.17，实测值为472.40。
实施例14:3-(4-((1-(3-(1H-咪唑-1-)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(14)
应体系加热回流反应5h,减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得到1-(3-羟甲基苯基)-1H-咪唑166mg,无色油状物，收率47.6％。
步骤2：以1-(3-羟甲基苯基)-1H-咪唑为原料，制备方法同叠氮合成方法2，得到1-(3-叠氮甲基苯基)-1H-咪唑无色油状物86mg,收率90％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.51(t,J＝7.9Hz,1H),7.40–7.29(m,3H),7.25–7.18(m,2H),4.44(s,2H).
步骤3：以1-(3-叠氮甲基苯基)-1H-咪唑和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(3-(1H-咪唑-1-)苄基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮14mg,白色固体，收率22％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.40(s,1H),8.24(s,1H),7.71(d,J＝6.3Hz,2H),7.63(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.48(dt,J＝18.9,7.7Hz,3H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(s,1H),5.68(s,2H),5.30(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),2.90(ddd,J＝18.7,13.6,5.3Hz,1H),2.58-2.4(m,1H),2.41(ddd,J＝26.9,13.5,4.6Hz,1H),2.00–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H23N7O4[M+H]+:498.18，实测值为498.43。
实施例15:3-(1-氧代-4-((1-苯基-1H-1,2,3-三唑l-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(15)
收率4％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.99(s,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,2H),7.62(t,J＝7.8Hz,2H),7.57–7.46(m,3H),7.36(d,J＝6.6Hz,1H),5.41(s,2H),5.11(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.85(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.45–2.31(m,1H),2.01–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H19N5O4[M+H]+:418.14，实测值为418.35。
实施例16:3-(4-((1-(3-羟基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(16)
8.1Hz,1H),6.61(td,J＝7.8,2.1Hz,2H),6.50(t,J＝2.2Hz,1H),5.04(s,1H)。
步骤2：以3-叠氮苯酚和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(3-羟基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮24.6mg,白色固体，收率42％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),10.08(s,1H),8.92(s,1H),7.56–7.47(m,2H),7.41–7.34(m,2H),7.32–7.28(m,2H),6.89(ddd,J＝8.1,2.3,1.1Hz,1H),5.38(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.61-2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝17.5,13.4,4.7Hz,1H),2.01–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H19N5O5[M+H]+:434.14，实测值为434.26。
实施例17:3-(1-氧代-4-((1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(17)
CDCl3)δ7.21(d,J＝8.8Hz,2H),7.04(d,J＝8.8Hz,2H).
步骤2：以4-三氟甲氧基苯基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮16.8mg,白色固体，收率33％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.03(s,1H),8.06(d,J＝9.0,2H),7.64(d,J＝9.0Hz,2H),7.56-7.45(m,2H),7.36(d,J＝6.8Hz,1H),5.42(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.85(m,1H),2.61-2.53(m,1H),2.42(m,1H),2.01-1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H18F3N5O5[M+H]+:502.13，实测值为502.22。
实施例18:3-(4-((1-(2,3-二氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(18)
7.23(m,2H),7.10(dd,J＝7.3,2.1Hz,1H).
步骤2：以2,3-二氯苯基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(2,3-二氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮44.9mg,白色固体，收率55％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.79(s,1H),7.93(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.72(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),7.62(t,J＝8.1Hz,1H),7.52(m,2H),7.36(d,J＝6.6Hz,1H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.97-2.84(m,1H),2.62-2.53(m,1H),2.49-2.37(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H17Cl2N5O4[M+H]+:486.07，实测值为486.16。
实施例19:3-(4-((1-(4-吗啉苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(19)
＝9.0Hz,2H),3.89–3.82(t,J＝4.8Hz,4H),3.15–3.08(t,J＝4.8Hz,4H).
步骤2：以4-(4-叠氮苯基)吗啡啉和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到白色固体47.7mg,收率57％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.84(s,1H),7.72(d,J＝9.0Hz,2H),7.57–7.45(m,2H),7.35(d,J＝6.9Hz,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,2H),5.37(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.22(d,J＝17.5Hz,1H),3.81–3.68(m,4H),3.24–3.13(m,4H),2.97–2.83(m,1H),2.62-2.53(m,1H),2.48-2.35(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值C26H26N6O5[M+H]+:503.20，实测值为503.30。
实施例20:3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(20)
6.99(td,J＝8.4,1.4Hz,2H),6.87(s,1H).
步骤2：以3-三氟甲氧基苯基叠氮和中间体为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮52.2mg,白色粉末，收率62％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.09(s,1H),8.04–7.98(m,2H),7.76(t,J＝8.4Hz,1H),7.58–7.47(m,3H),7.36(dd,J＝7.1,0.9Hz,1H),5.42(s,2H),5.11(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48-2.35(m,1H),2.02–1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H18F3N5O5[M+H]+:502.13，实测值为502.22。
实施例21:3-(4-((1-(4-羟基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(21)
J＝8.8Hz,2H),4.79(s,1H).
步骤2：以4-叠氮苯酚和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(4-羟基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮42.6mg,白色固体，收率59％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.99(s,1H),8.79(s,1H),7.69–7.63(m,2H),7.55–7.46(m,2H),7.37–7.33(m,1H),6.97–6.91(m,2H),5.37(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.22(d,J＝17.5Hz,1H),2.91(ddd,J＝17.6,13.7,5.4Hz,1H),2.61–2.54(m,1H),2.42(ddd,J＝26.0,13.0,4.2Hz,1H),2.02-1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H19N5O5[M+H]+:434.14，实测值为434.26。
实施例22:3-(4-((1-(3-吗啉苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(22)
6.87(m,1H),6.84(d,J＝7.8Hz,1H),6.78(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),3.88–3.82(t,J＝4.7Hz,4H),3.16(t,J＝4.7Hz,4H).
步骤2：以4-(3-叠氮苯基)吗啡啉和中间体6为原料，制备方法同实施例1，得到3-(4-((1-(3-吗啉苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮33.3mg,白色固体，收率40％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.98(s,1H),7.56–7.46(m,2H),7.39(m,3H),7.29(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),7.06(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.39(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.80–3.70(t,J＝4.6Hz,4H),3.28–3.16(t,J＝4.6Hz,4H),2.97–2.83(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.48-2.35(m,1H),2.01-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H26N6O5[M+H]+:503.20，实测值为503.30。
实施例23：3-(4-((1-(苯并[d]噻唑-6-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(23)
7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.20(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H)
步骤2：以6-叠氮苯并[d]噻唑和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得3-(4-((1-(苯并[d]噻唑-6-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮mg,收率％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.52(s,1H),9.04(s,1H),8.79(d,J＝2.2Hz,1H),8.30(d,J＝8.8Hz,1H),8.09(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.57–7.48(m,2H),7.36(dd,J＝6.8,1.1Hz,1H),5.44(s,2H),5.11(dd,J＝13.4,4.9Hz,1H),4.40(d,J＝17.5Hz,1H),4.25(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.85(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝26.7,13.7,4.7Hz,1H),2.03–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H18N6O4S[M+H]+:475.11，实测值为475.17。
实施例24：3-(1-氧代-4-((1-(4-(((R)-四氢呋喃-3-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(24)
(104mg，1.184mmol)和三苯基膦(310mg，1.18mmol)的四氢呋喃溶液(6mL)中，反应液升至室温反应过夜。反应完毕，减压除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得到(S)-3-(4-叠氮苯氧基)四氢呋喃41mg,棕色固体，收率33.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.98–6.92(m,2H),6.88–6.82(m,2H),4.89(ddt,J＝6.1,4.3,2.2Hz,1H),4.03–3.87(m,4H),2.25–2.09(m,2H).
步骤2：以(S)-3-(4-叠氮苯氧基)四氢呋喃和中间体6为原料，制备方法同合成路线1实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-(((R)-四氢呋喃-3-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮30mg,收率44％；1H NMR(400MHz,DMSO),δ10.97(s,1H),8.87(s,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.56-7.46(m,2H),7.35(d,J＝7.1Hz,1H),7.13(d,J＝9.0Hz,2H),5.39(s,2H),5.13-5.09(m,2H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.91-3.73(m,4H),2.97-2.83(m,1H),2.63–2.54(m,1H),2.48-2.35(m,1H),2.33–2.20(m,1H),2.01–1.92(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H25N5O6[M+H]+:504.18，实测值为504.28。
实施例25：3-(1-氧代-4-((1-(4-(((S)-四氢呋喃-3-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(25)
CDCl3)δ6.98–6.92(m,2H),6.88–6.82(m,2H),4.89(ddt,J＝6.2,4.3,2.2Hz,1H),4.04–3.84(m,4H),2.27–2.05(m,2H).
步骤2：以(R)-3-(4-叠氮苯氧基)四氢呋喃和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-(((S)-四氢呋喃-3-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮51mg,收率75％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.87(s,1H),7.80(d,J＝9.0Hz,2H),7.57–7.45(m,2H),7.36(d,J＝6.6Hz,1H),7.13(d,J＝9.0Hz,2H),5.39(s,2H),5.15–5.05(m,2H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.95–3.73(m,4H),2.97-2.83(m,1H),2.63–2.54(m,1H),2.48-2.35(m,1H),2.33–2.20(m,1H),2.03–1.92(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H25N5O6[M+H]+:504.18，实测值为504.24。
实施例26：3-(4-((1-(1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(26)
(d,J＝2.0Hz,1H),7.25(t,J＝2.8Hz,1H),6.89(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.52(t,J＝2.1Hz,1H).
步骤2：以5-叠氮-1H-吲哚和中间体6为原料，制备方法同实施例1，得到3-(4-((1-(1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮37mg,收率61％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.45(s,1H),10.98(s,1H),8.88(s,1H),8.01(s,1H),7.60–7.48(m,5H),7.36(dd,J＝6.7,1.2Hz,1H),6.61–6.51(m,1H),5.40(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.40(d,J＝17.5Hz,1H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.83(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.47–2.35(m,1H),2.03–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H20N6O4[M+H]+:457.15，实测值为457.25。
实施例27：3-(4-((1-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(27)
解于5mL DMF中，将反应液加热至80℃反应过夜。反应完毕，将反应液用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得到2-(5-叠氮-1H-吲哚-1-)-N,N-二甲基乙基-1-胺61.7mg,红棕色油状物，收率43％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(d,J＝8.7Hz,1H),7.28(d,J＝2.0Hz,1H),7.17(d,J＝3.1Hz,1H),6.89(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),6.44(d,J＝3.1Hz,1H),4.21(t,J＝7.1Hz,2H),2.69(t,J＝7.1Hz,2H),2.29(s,6H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H29N7O4[M+H]+:528.23，实测值为528.73。
步骤2：以2-(5-叠氮-1H-吲哚-1-)-N,N-二甲基乙基-1-胺和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮41mg,收率58％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.90(s,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.56(d,J＝3.1Hz,1H),7.52(q,J＝6.8Hz,2H),7.36(dd,J＝6.6,1.4Hz,1H),6.57(d,J＝3.1Hz,1H),5.40(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.40(d,J＝17.5Hz,1H),4.35(t,J＝6.5Hz,2H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),2.98–2.83(m,1H),2.70(t,J＝6.5Hz,2H),2.61-2.54(m,1H),2.40-2.45(m,1H),2.23(s,6H),2.03-1.93(m,1H).
实施例28：3-(4-((1-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(28)
升至室温继续搅拌反应30min,加入2-溴乙基甲基醚(71.3ul,0.759mmol),再升温至60℃反应过夜。反应完毕，反应液加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机层用分别用水和饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，减压除溶剂，经硅胶柱层析得到5-叠氮-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚124.5mg，黄色油状物，收率93％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(d,J＝8.7Hz,1H),7.29(d,J＝2.1Hz,1H),7.19(d,J＝3.1Hz,1H),6.89(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),6.44(d,J＝3.1Hz,1H),4.27(t,J＝5.5Hz,2H),3.70(t,J＝5.5Hz,2H),3.31(s,3H).
步骤2：以5-叠氮-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得3-(4-((1-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮39mg,收率56％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.90(s,1H),8.02(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(d,J＝8.8Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.57–7.48(m,3H),7.39–7.24(m,2H),6.58(d,J＝3.1Hz,1H),5.40(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.46–4.35(m,3H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),3.67(t,J＝5.2Hz,2H),3.22(s,3H),2.97-2.85(m,1H),2.61-2.53(m,1H),2.42-2.35(m,1H),2.02–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H26N6O5[M+H]+:515.20，实测值为515.27。
实施例29：3-(1-氧代-4-((1-(4-((2H-四氢吡喃-4-)甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(29)
(400MHz,CDCl3)δ6.97–6.92(m,2H),6.89–6.85(m,2H),4.02(dd,J＝10.8,3.7Hz,2H),3.78(d,J＝6.4Hz,2H),3.45(td,J＝11.9,2.1Hz,2H),2.12–1.99(m,1H),1.75(dd,J＝13.0,1.8Hz,2H),1.46(ddd,J＝25.3,12.1,4.5Hz,2H).
步骤2：以4-((4-叠氮苯氧基)甲基)四氢-2H-吡喃和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-((2H-四氢吡喃-4-)甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮37mg,收率52％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.87(s,1H),7.79(d,J＝8.9Hz,2H),7.57–7.45(m,2H),7.35(d,J＝7.0Hz,1H),7.14(d,J＝8.9Hz,2H),5.38(s,2H),5.11(dd,J＝13.2,4.9Hz,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.4Hz,1H),3.89(dd,J＝15.2,4.7Hz,4H),3.40–3.25(m,2H),2.99–2.83(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.42(m,1H),2.10–1.89(m,2H),1.72-1.63(m,2H),1.34(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H29N5O6[M+H]+:532.21，实测值为532.26。
实施例30：3-(1-氧代-4-((1-(4-((2H-四氢吡喃-4-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(30)
MHz,CDCl3)δ6.97–6.93(m,2H),6.93–6.88(m,2H),4.43(tt,J＝7.8,3.8Hz,1H),4.02–3.92(m,2H),3.57(ddd,J＝11.6,8.3,3.2Hz,2H),2.05–1.95(m,2H),1.77(dtd,J＝12.4,8.2,3.8Hz,2H).
步骤2：以4-(4-叠氮苯氧基)四氢-2H-吡喃和中间体6为原料，制备方法合成路线1及同实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-((2H-四氢吡喃-4-)氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮16mg,收率18％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.87(s,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.57–7.45(m,2H),7.35(d,J＝6.9Hz,1H),7.19(d,J＝9.0Hz,2H),5.38(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.73–4.62(m,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.86(dt,J＝11.1,4.2Hz,2H),3.55–3.44(m,2H),2.99–2.83(m,1H),2.57(dd,J＝17.9,1.8Hz,1H),2.42(ddd,J＝26.3,13.3,4.4Hz,1H),2.00(dd,J＝12.5,3.9Hz,3H),1.67–1.53(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H27N5O6[M+H]+:518.20，实测值为518.23。
实施例31：3-(4-((1-(4-(环氧丙烷-3-氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(31)
拌反应30min，再加入对氟硝基苯(170ul,1.60mmol),将反应体系升至室温反应过夜。反应完毕，反应体系加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠洗涤，干燥，减压除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得到3-(4-硝基苯氧基)氧杂环丁烷207mg,黄色固体，收率79％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24–8.17(m,2H),6.81–6.73(m,2H),5.34–5.25(m,1H),5.02(t,J＝7.1Hz,2H),4.81–4.73(m,2H).
步骤2:将3-(4-硝基苯氧基)氧杂环丁烷(196mg,1mmol)溶于10mL甲醇中，向反应溶液中依次加入氯化铵(267mg,5mmol),锌粉(327mg,5mmol)以及少量醋酸，反应液室温反应1h,经硅藻土过滤，减压除去溶剂，用乙酸乙酯稀释，有机层依次用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经硅胶柱层析得到3-(4-胺基苯氧基)氧杂环丁烷133mg,黄色固体，收率68％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.62(d,J＝8.7Hz,2H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),5.14–5.06(m,1H),4.92(t,J＝6.7Hz,2H),4.74(dd,J＝7.0,5.6Hz,2H).
步骤3：制备方法同1，得到3-(4-叠氮苯氧基)氧杂环丁烷108.4mg,黄色固体，收率74％；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.98–6.91(m,2H),6.72–6.66(m,2H),5.22–5.11(m,1H),4.96(t,J＝6.8Hz,2H),4.75(dd,J＝7.2,5.5Hz,2H).
步骤4：以3-(4-叠氮苯氧基)氧杂环丁烷和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(4-(环氧丙烷-3-氧)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮33mg,收率55％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.87(s,1H),7.80(d,J＝12.3Hz,2H),7.58–7.45(m,2H),7.35(d,J＝6.9Hz,1H),7.01(d,J＝9.0Hz,2H),5.41–5.33(m,3H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.96(t,J＝6.7Hz,2H),4.57(dd,J＝7.3,5.0Hz,2H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.22(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.81(m,1H),2.56(dd,J＝10.9,9.1Hz,1H),2.46–2.31(m,1H),2.04–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H23N5O6[M+H]+:490.16，实测值为490.21。
实施例32：3-(4-((1-(4-环丙氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(32)
于冰浴冷却下反应30min，再加入对氟硝基苯(219ul,2.07mmol)。将反应液升至室温反应过夜，反应完毕后，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经硅胶柱层析得到1-环丙氧基-4-硝基苯148mg,黄色油状物，收率48％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24–8.17(m,2H),7.15–7.08(m,2H),3.86-3.80(m,1H),0.91–0.78(m,4H).
步骤2：将1-环丙氧基-4-硝基苯(145mg,0.81mmol)溶于6mL甲醇中,依次加入锌粉(265mg，4.05mmol)和氯化铵(217mg,4.05mmol)，并于室温下搅拌反应2h,反应完毕后，反应液经硅藻土过滤，减压除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得到1-环丙氧基-4-苯胺84mg,黄色油状物，收率69％。
步骤3：制备方法同实施例中步骤，得到1-环丙氧基-4-苯基叠氮24mg,红棕色油状物，收率25％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.06–7.00(m,2H),6.98–6.92(m,2H),3.75–3.66(m,1H),0.77(ddd,J＝6.4,3.9,2.5Hz,4H).
步骤4：以1-环丙氧基-4-苯基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例中1，得到3-(4-((1-(4-环丙氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮39mg,白色固体收率70％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.86(s,1H),7.81(d,J＝9.0Hz,2H),7.57–7.45(m,2H),7.36(d,J＝6.3Hz,1H),7.25(d,J＝9.0Hz,2H),5.39(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),3.93(tt,J＝6.0,2.9Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝26.4,13.3,4.4Hz,1H),2.01-1.92(m,1H),0.85-0.79(m,2H),0.72-0.67(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H23N5O5[M+H]+:474.17，实测值为474.27。
实施例33：3-(4-((1-(4-(2-羟乙基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(33)
J＝8.7Hz,1H),7.60(d,J＝2.2Hz,1H),7.20(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H)、
步骤2：以2-(4-叠氮苯基)-1-乙醇和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例中1得到3-(4-((1-(4-(2-羟乙基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮35mg,白色固体，收率57％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.93(s,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.56–7.51(m,1H),7.50(d,J＝7.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝7.0Hz,1H),5.40(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.70(t,J＝5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),3.66(dd,J＝12.0,6.7Hz,2H),2.97–2.85(m,1H),2.81(t,J＝6.8Hz,2H),2.64-2.52(m,1H),2.49–2.36(m,1H),2.03–1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H23N5O5[M+H]+:462.17，实测值为462.27。
实施例34:(S)-3-甲基-3-(1-氧代-4-((1-(4-(三氟甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(34)
基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮38mg,白色固体，收率77％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.86(s,1H),9.04(s,1H),8.06(d,J＝9.1Hz,2H),7.65(d,J＝8.6Hz,2H),7.54–7.47(m,2H),7.27(dt,J＝6.2,2.9Hz,1H),5.42(s,2H),4.65(d,J＝17.6Hz,1H),4.53(d,J＝17.6Hz,1H),2.79–2.57(m,3H),1.87(dt,J＝9.2,4.3Hz,1H),1.67(s,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H20F3N5O5[M+H]+:516.14，实测值为516.28。
实施例35:(S)-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-)-4-((1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(35)
基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-1,3-二酮16mg,白色固体，收率22％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.03(s,1H),8.07(d,J＝9.0Hz,2H),7.87–7.80(m,1H),7.74(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝7.1Hz,1H),5.49(s,2H),2.73–2.52(m,3H),2.04–1.97(m,1H),1.85(s,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18F3N5O6[M+H]+:530.12，实测值为530.22。
实施例36：(S)-3-(4-((1-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)-3-甲基哌啶-2,6-二酮(36)
啶-2,6-二酮24mg，白色固体，收率32％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.86(s,1H),8.91(s,1H),8.02(d,J＝1.9Hz,1H),7.72(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.55–7.47(m,3H),7.28-7.24(m,1H),6.58(d,J＝3.1Hz,1H),5.41(s,2H),4.66(d,J＝17.7Hz,1H),4.54(d,J＝17.6Hz,1H),4.41(t,J＝5.2Hz,2H),3.68(t,J＝5.2Hz,2H),3.22(s,3H),2.68(dtd,J＝16.7,12.2,5.0Hz,3H),1.87(dt,J＝12.8,4.5Hz,1H),1.67(s,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H28N6O5[M+H]+:529.21，实测值为529.33。
实施例37：(S)-4-((1-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-)异吲哚啉-1,3-二酮(37)
1H),7.87–7.81(m,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝8.9Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.52(d,J＝3.1Hz,1H),7.42(d,J＝7.1Hz,1H),6.58(d,J＝3.0Hz,1H),5.47(s,2H),4.41(t,J＝5.2Hz,2H),3.68(t,J＝5.2Hz,2H),3.22(s,3H),2.73–2.52(m,3H),2.06–1.95(m,1H),1.86(s,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H26N6O6[M+H]+:543.19，实测值为543.32。
实施例38:2-(2,6-二氧代哌啶-3-)-4-((1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(38)
甲氧基)异吲哚啉-1,3-二酮63.2mg,白色固体，收率42％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),9.05(s,1H),8.07(d,J＝9.0Hz,2H),7.89–7.83(m,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,2H),7.50(d,J＝7.2Hz,1H),5.53(s,2H),5.08(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),2.88(ddd,J＝16.9,13.9,5.3Hz,1H),2.62–2.53(m,1H),2.49-2.40(m,1H),2.05-1.98(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H16F3N5O6[M+H]+:516.11，实测值为516.17。
合成路线2：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与上述定义相同；
步骤1:将5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯(1当量),醇衍生物(2当量),三苯基膦(2当量)溶于干燥的四氢呋喃中，氮气保护的条件下，逐滴加入DIAD(2当量)，室温反应过夜，反应完全后，减压浓缩，经快速分离柱层析纯化得到2S-C。
步骤2：将上一步得到的1C(1当量)溶于干燥的四氢呋喃中，0℃充分冷却，加入叔丁醇钾(1.05当量),0℃反应15分钟,加入1N HCl淬灭，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机层依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除溶剂，残余物经HPLC纯化得到产物2S-D。
实施例39:3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(39)
溶解于20mL DMA中,在氮气保护下加热至70℃反应24h。反应完毕后，将反应液冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，经柱层析得到5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑230mg,收率40％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.07(s,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.28(s,2H).
步骤2：氮气保护下将5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑(137mg,0.56mmol)溶解于20mL干燥四氢呋喃中，将反应液冷却至-78℃，逐滴加入正丁基锂(2.5mol/L，0.25mL，0.62mmol)，继续搅拌反应30min后，向反应液中加入DMF(48ul,0.62mmol),反应液继续于-78℃反应1h，再升至室温反应2h。反应完毕后，反应液用1N HCl调至PH5，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到产物139mg，收率91％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.97(s,1H),8.25(s,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H).
步骤3：将5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-2-甲醛(132mg,0.48mmol)溶于6mL甲醇和6mL四氢呋喃混合溶液中,冰浴冷却下加入硼氢化钠(18mg，0.48mmol)，将反应液升至室温反应1h。反应完全后，反应液加水淬灭，减压除去溶剂，用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩经柱层析得到5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-2-甲醇103mg，收率77％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.15(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,2H),7.44(d,J＝8.1Hz,2H),6.17(t,J＝5.9Hz,1H),4.74(d,J＝5.9Hz,2H).
步骤4：以5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-2-甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮24mg,白色固体，收率42％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),8.29(s,1H),7.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.54(t,J＝7.8Hz,1H),7.49–7.38(m,4H),5.63(s,2H),5.14(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.47(d,J＝17.5Hz,1H),4.32(d,J＝17.5Hz,1H),2.98–2.87(m,1H),2.63–2.55(m,1H),2.48-2.42(m,1H),2.07–1.95(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18F3N3O5S[M+H]+:518.09，实测值为518.08。
实施例40:3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)噁唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(40)
应1h。反应完毕，减压浓缩除去溶剂，向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和氯化钠洗涤，干燥，过滤，减压除去溶剂，残余物经柱层析得到4-三氟甲氧基苯基噁唑887mg,黄色固体，收率82％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(s,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,2H),7.36(s,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,2H).
步骤2：在氮气保护条件下将4-三氟甲氧基苯基噁唑(879mg,3.84mmol)的溶解于30mL干燥THF中，将反应液冷却至-78℃，向反应液中逐滴加入正丁基锂(2.5mol/L，1.69ml，4.22mmol)，继续反应30min后，加入DMF(325ul,4.22mmol)，反应液在-78℃继续反应1h后，升至室温反应2h。反应完全后，反应液用1N HCl调至PH5左右，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品直接投下一步。
步骤3：将上一步粗品溶于10mL甲醇和10mL THF的混合溶液中,冰浴冷却下加入硼氢化钠(145mg，3.84mmol)，将反应液升至室温反应1h,反应完全后加水淬灭，减压除去溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩经硅胶柱层析得到5-(4-三氟甲氧基苯基)噁唑-2-甲醇450mg，两步总收率45％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.69(s,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,2H),5.75(t,J＝6.2Hz,1H),4.56(d,J＝6.2Hz,2H).
步骤4：以5-(4-三氟甲氧基苯基)噁唑-2-甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)噁唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮15mg,收率30％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),7.89–7.79(m,3H),7.56–7.43(m,4H),7.38(d,J＝7.3Hz,1H),5.47(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.42(d,J＝17.5Hz,1H),4.26(d,J＝17.5Hz,1H),2.94–2.80(m,1H),2.59-2.52(m,1H),2.47–2.36(m,1H),2.02–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18F3N3O6[M+H]+:502.11，实测值为502.22。
实施例41:3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(41)
二磷(522mg,2.73mmol),回流反应1.5h。反应完毕后，将反应液冷却至室温，加乙酸乙酯稀释，有机相依次用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩经硅胶柱层析得到白色固体200mg,收率61％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝8.9Hz,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),4.55(q,J＝7.1Hz,2H),1.48(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2：将5-(4-三氟甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酸乙酯(200mg,0.63mmol)溶于甲醇(15mL)和THF(15mL)的混合溶液中，将反应液冰浴冷却，加入硼氢化钠(71mg，1.885mmol)，再升至室温反应过夜,反应完全后加水淬灭，减压除去溶剂，残余物用乙酸乙酯溶解，依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩经硅胶柱柱层析得到5-(4-三氟甲氧基苯基)-1,3,4-噻二唑-2-甲醇145mg,白色固体收率84％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝8.9Hz,2H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),4.55(q,J＝7.1Hz,2H),1.48(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤3：制备方法同合成路线2，8mg,收率56％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.15(d,J＝8.9Hz,2H),7.60–7.51(m,3H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.41(d,J＝7.0Hz,1H),5.81(s,2H),5.13(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.45(d,J＝17.5Hz,1H),4.30(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.86(m,1H),2.62–2.55(m,1H),2.48–2.38(m,1H),2.05–1.96(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H17F3N4O5S[M+H]+:519.09，实测值为519.26。
实施例42:3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(42)
mg,7.29mmol)加入到50mL两颈瓶中，抽换气三次后，加入甲苯15mL,乙醇3.5mL,水3.5mL,抽换气1次，反应体系在氮气保护下回流反应过夜，减压旋干，用乙酸乙酯稀释，有机相用水洗涤，水层再用乙酸乙酯萃取一次，合并有机层，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析得到5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲醛，淡黄色固体474mg,收率76％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),7.88–7.82(m,2H),7.33(d,J＝3.7Hz,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,2H),6.85(d,J＝3.7Hz,1H).
步骤2：将5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲醛(469mg,1.83mmol)溶于20mL甲醇中，搅拌条件下加入NaBH4(41.613mg,1.1mmol),室温反应2h,减压浓缩，残余物溶解于乙酸乙酯中，用1N HCl洗涤一次，水层用乙酸乙酯萃取一次，合并有机层,依次用水、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲醇472mg,收率100％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71–7.63(m,2H),7.23(d,J＝8.7Hz,2H),6.60(d,J＝3.3Hz,1H),6.39(d,J＝3.3Hz,1H),4.67(d,J＝4.3Hz,2H).
步骤3：以5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)呋喃-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮10.2mg,收率22.6％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.94(s,1H),7.85–7.80(m,2H),7.56–7.50(m,1H),7.45(m,,3H),7.36(d,J＝6.7Hz,1H),7.03(d,J＝3.4Hz,1H),6.78(d,J＝3.4Hz,1H),5.30(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.37(d,J＝17.5Hz,1H),4.21(d,J＝17.5Hz,1H),2.89(ddd,J＝17.5,13.5,5.4Hz,1H),2.59–2.52(m,1H),2.42(ddd,J＝18.1,13.6,4.9Hz,1H),1.99–1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H19F3N2O6[M+H]+:501.12，实测值为501.24。
实施例43:3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(43)
步骤1：将4-三氟甲氧基苯甲酸甲酯(3.7g,16.8mmol)和85％水合
88％)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.90(s,1H),8.01–7.88(m,2H),7.45(d,J＝8.1Hz,2H),4.54(s,2H).
步骤2：在0℃下，将草酰氯单乙酯(1.65mL,14.80mmol)于N2保护条件下逐滴加入到4-三氟甲氧基苯甲酰肼(3.26g,14.80mmol)的二氯甲烷(55mL)悬浊液中，0℃下继续反应0.5h,再升至室温反应1h。所得反应液用饱和碳酸氢钠洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到黄色固体3.6g，直接投下一步。
步骤3：在0℃下，向步骤2所得产物(2.0g，6.25mmol)的甲苯(50ml)悬浊液中加入吡啶(614μL,7.5mmol),随后逐滴加入SOCl2(1.36mL,18.74mmol)。投料完毕将反应液加热回流过夜，减压浓缩除去溶剂，所得固体残余物用二氯甲烷溶解，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析2-(4-三氟甲氧基苯基)-5-羧酸乙酯1.48g,收率78％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36–8.09(m,2H),7.39(d,J＝8.2Hz,2H),4.56(q,J＝7.1Hz,2H),1.49(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤4：0℃条件下，将硼氢化钠(156mg,4.13mmol)加入到2-(4-三氟甲氧基苯基)-5-羧酸乙酯(500mg,1.65mmol)的甲醇(8ml)和四氢呋喃(8ml)的混合溶液中，搅拌反应10min后，升至室温反应过夜，反应完全后加水淬灭，减压浓缩，乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，减压除溶剂，经快速硅胶柱层析得到白色固体430mg,收率100％.
步骤5：以2-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((5-(4-三氟甲氧基苯基)-1,3,4-噁二唑-2-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮32.9mg,收率46％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.18–8.12(m,2H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.58–7.52(m,1H),7.49(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝7.3Hz,1H),5.67(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.44(d,J＝17.5Hz,1H),4.29(d,J＝17.5Hz,1H),2.91(ddd,J＝17.5,13.6,5.3Hz,1H),2.60-2.54(m,1H),2.47–2.35(m,1H),2.03–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H17F3N4O6[M+H]+:503.11，实测值为503.75。
实施例44:3-(1-氧代-4-((2-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-5-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(44)
钯(245mg,0.212mmol)加入到100ml两口瓶中，加入甲苯(30ml)和水(5ml),N2保护下回流反应过夜。反应完毕，加水稀释，乙酸乙酯萃取，水层用再用乙酸乙酯萃取1次，合并有机层，用饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析，得到产物2-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-5-羧酸乙酯(白色固体，335mg,收率69％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(s,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.8Hz,2H),4.40(q,J＝7.1Hz,2H),1.41(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2：在0℃，将LiAlH4(2.2mL,2.2mmol)分批加入到2-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-5-羧酸乙酯(460mg,1.45mmol)的THF溶液中，15min后，升至室温反应1.5h,加水淬灭，过滤，旋干，柱层析。得到黄色固体399mg,收率100％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99–7.92(m,2H),7.72(s,1H),7.29(d,J＝8.1Hz,2H),4.91(d,J＝5.0Hz,2H),2.01(t,J＝5.0Hz,1H).
步骤3：以2-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-5-甲醇和中间体6为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((2-(4-三氟甲氧基苯基)噻唑-5-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮67.7mg,白色固体，收率52％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.08-8.04(m,3H),7.55-7.49(m,3H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(d,J＝7.3Hz,1H),5.58(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.39(d,J＝17.4Hz,1H),4.24(d,J＝17.4Hz,1H),2.96–2.83(m,1H),2.60-2.54(m,1H),2.47–2.37(m,1H),2.03–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18F3N3O5S[M+H]+:518.09，实测值为518.08。
实施例45:3-(1-氧代-4-((2-(4-三氟甲氧基苯基)噁唑-5-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(45)
溶液中，1h后，逐滴加入(10min)二碘乙烷(2.31g，8.184mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液，相同温度反应1h,升至室温反应，TLC监测，反应完全后，加入冷的乙醚100ml和饱和硫代硫酸钠，萃取分液，有机层用饱和氯化钠洗一次，旋干，柱层析。得到2-碘噁唑-5-羧酸乙酯(白色固体，1.5g,收率50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2：将2-碘噁唑-5-羧酸乙酯(800mg,3mmol),4-三氟甲氧基苯硼酸(618mg，4.5mmol)，碳酸钾(1.24mg,9mmol),Pd(PPh3)4(347mg,0.3mmol)加入到100ml两口瓶中，加入dioxane(20mL)和水(3mL),N2保护回流过夜，水稀释，乙酸乙酯(EA)萃取，水层用EA萃取1次，合并有机层，用饱和NaCl洗，干燥，旋干，柱层析。得到水解产物2-(4-三氟甲氧基苯基)-噁唑-5-羧酸(476mg)；1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.79(s,1H),8.17(d,J＝8.8Hz,2H),8.06(s,1H),7.59(d,J＝8.3Hz,2H).
步骤3：在0℃下，将硼烷(1M/L,5.2mL,5.2mmol)的THF溶液逐滴加入2-(4-三氟甲氧基苯基)-噁唑-5-羧酸(474mg,1.735mmol)的THF(10mL)溶液中，升至室温反应2h,反应完毕，过量硼烷用甲醇淬灭，减压旋干，硅胶柱层析得到白色固体250mg,收率56％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.13–8.02(d,J＝8.1Hz,2H),7.54(d,J＝8.1Hz,2H),7.22(s,1H),5.49(t,J＝5.8Hz,1H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H).
步骤4：制备方法同合成路线2及实施例40，得到白色固体32.6mg,收率27.8％；1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.95(s,1H),8.15–8.07(m,2H),7.56-7.52(m,4H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.40–7.35(m,1H),5.42(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.95–2.83(m,1H),2.61–2.52(m,1H),2.42(ddd,J＝26.1,13.2,4.4Hz,1H),2.00–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18F3N3O6[M+H]+:502.11，实测值为502.25。
实施例46：3-(4-((2-(苯并[d]噻唑-2-)噻唑-5-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(46)
热至130℃反应16h,冷却至室温，乙酸乙酯稀释，硅藻土过滤，依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除溶剂，经快速分离柱层析得到(2-(苯并[d]噻唑-2-)噻唑-5-)甲醇68mg,黄色固体，收率27％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.19(d,J＝7.8Hz,1H),8.11(d,J＝7.7Hz,1H),7.96–7.87(m,1H),7.63–7.49(m,2H),5.81(t,J＝5.7Hz,1H),4.79(d,J＝5.7Hz,2H).
步骤2：以(2-(苯并[d]噻唑-2-)噻唑-5-)甲醇和中间体4为原料，制备方法同同合成路线2，得到3-(4-((2-(苯并[d]噻唑-2-)噻唑-5-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮23mg,收率32％；1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.20(d,J＝7.9Hz,2H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),7.60(dd,J＝11.1,4.1Hz,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,2H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(d,J＝7.4Hz,1H),5.64(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.43(d,J＝17.5Hz,1H),4.28(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.63–2.54(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.04–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H18N4O4S2[M+H]+:491.08，实测值为491.15。
实施例47：3-(1-氧代-4-((5'-三氟甲氧基-[2,2'-联噻唑]-5-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(47)
步骤1：将2-溴噻唑(1g,6.10mmol),醋酸钯(137mg，0.61mmol),四
反应完全后，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯曾经无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经快速分离柱层析得到联噻唑385mg,黄色固体，收率37.5％；1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.90(d,2H,J＝2.8Hz),7.45(d,2H,J＝2.8Hz).
步骤2：将2,2'-联噻唑(375mg,2.23mmol)和NBS(1.59g,8.92mmol)溶解于DMF(15ml)中，加热至60℃反应过夜。反应完毕，反应液用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠洗涤，减压除溶剂，经快速分离柱层析得到5,5'-二溴-2,2'-联噻唑612mg,白色固体，收率84％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,2H).
步骤3：-78℃条件下，将正丁基锂(356ul,0.889mmol)在氮气保护条件下逐滴加入到5,5'-二溴-2,2'-联噻唑(276mg,0.85mmol)的干燥THF溶液(25mL)中,-78℃反应1h后，加入DMF(69ul,0.89mmol),TLC监测反应完全后，反应液用1N盐酸淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL),有机层依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经硅胶柱层析得到5'-溴-[2,2'-联噻唑]-5-甲醛147mg,黄色固体，收率63％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.09(s,1H),8.42(s,1H),7.87(s,1H).
步骤4：将5'-溴-[2,2'-联噻唑]-5-甲醛(140mg,0.51mmol)溶于10mL DMF中，加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(227ul，1.79mmol)和碘化亚铜(29mg,0.153mmol)，加热至85℃反应18h,加入水(20mL),用乙酸乙酯(60mL)萃取,有机层依次用水和饱和氯化钠洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到黄色固体95mg，产物粗品直接投下一步。
步骤5：将上一步得到粗品的溶于5mL四氢呋喃和5mL甲醇的混合溶液中，冰浴冷却条件下加入硼氢化钠(19mg,0.51mmol)，将反应液升至室温反应1h,反应完毕，加水淬灭，再用乙酸乙酯(50ml)萃取，乙酸乙酯层依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经HPLC纯化得到白色固体28mg,两步收率21％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(d,J＝1.0Hz,1H),7.80(s,1H),4.96(dd,J＝6.0,1.0Hz,2H),2.05(t,J＝6.0Hz,1H).
步骤6：以(5'-三氟甲基)-[2,2'-联噻唑]-5-)甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((5'-三氟甲氧基-[2,2'-联噻唑]-5-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮29mg,白色固体，收率74％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.63(d,J＝1.1Hz,1H),8.21(s,1H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(d,J＝7.3Hz,1H),5.63(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.41(d,J＝17.5Hz,1H),4.26(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.83(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.03–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C21H15F3N4O4S2[M+H]+:509.05，实测值为509.19。
实施例48:3-(1-氧代-4-((1-((四氢-2H-吡喃-4-)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(48)
应液用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，经硅胶柱层析得到2H-四氢吡喃-4-甲基叠氮227mg,无色油状物96％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.98(dd,J＝11.4,4.4Hz,2H),3.38(td,J＝11.9,1.9Hz,2H),3.18(d,J＝6.8Hz,2H),1.86–1.73(m,1H),1.65(dd,J＝13.0,1.7Hz,2H),1.34(ddd,J＝25.1,12.2,4.5Hz,2H).
步骤2：以2H-四氢吡喃-4-甲基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-((四氢-2H-吡喃-4-)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮6mg,白色固体，收率14％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.95(s,1H),8.24(s,1H),7.53–7.47(m,1H),7.44(dd,J＝8.1,0.7Hz,1H),7.34(dd,J＝7.3,0.7Hz,1H),5.30(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.34(d,J＝17.5Hz,1H),4.28(d,J＝7.2Hz,2H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),3.82(dd,J＝11.2,3.0Hz,2H),3.23(td,J＝11.6,2.1Hz,2H),2.90(ddd,J＝17.5,13.5,5.3Hz,1H),2.61–2.54(m,1H),2.42(ddd,J＝26.2,13.1,4.3Hz,1H),2.13–2.01(m,1H),2.00–1.93(m,1H),1.41–1.31(m,2H),1.29–1.17(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H25N5O5[M+H]+:440.19，实测值为440.44。
实施例49:3-(1-氧代-4-((1-苯乙基-1H-1,2,3-三唑l-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(49)
J＝1.4Hz,1H),7.23(m,2H),3.51(t,J＝7.3Hz,2H),2.90(t,J＝7.3Hz,2H).
步骤2：以2-苯基乙基叠氮和中间体6为原料，制备方法同实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-苯乙基-1H-1,2,3-三唑l-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮11.2mg,收率25％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),8.16(s,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),7.28–7.13(m,5H),5.28(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.62(t,J＝7.3Hz,2H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.17(d,J＝17.5Hz,1H),3.15(t,J＝7.3Hz,2H),2.97–2.82(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.47-2.36(m,1H),2.02–1.91(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H23N5O4[M+H]+:446.18，实测值为446.41。
实施例50:3-(1-氧代-4-((1-((R)-1-苯乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(50)
7.30(m,3H),4.63(q,J＝6.8Hz,1H),1.55(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：以(R)-1-苯基乙基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得3-(1-氧代-4-((1-((R)-1-苯乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮39.6mg,收率32％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.39(s,1H),7.54–7.48(m,1H),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.41–7.24(m,7H),5.95(m,1H),5.28(s,2H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.34(d,J＝17.5Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.82(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.41(qd,J＝13.3,4.4Hz,1H),1.98–1.92(m,1H),1.89(d,J＝7.1Hz,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H23N5O4[M+H]+:446.18，实测值为446.41。
实施例51:3-(1-氧代-4-((1-((S)-1-苯乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(51)
(m,3H),4.63(q,J＝6.8Hz,1H),1.55(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤2：以(S)-1-苯基乙基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得3-(1-氧代-4-((1-((S)-1-苯乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮31.5mg,收率52％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.39(s,1H),7.54–7.41(m,2H),7.39-7.30(m,6H),5.96(q,J＝7.0Hz,1H),5.28(s,2H),5.10(dd,J＝13.0,4.4Hz,1H),4.34(d,J＝17.5Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.82(m,1H),2.59-2.52(m,1H),2.47-2.35(m,1H),2.02–1.92(m,1H),1.89(d,J＝6.9Hz,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H23N5O4[M+H]+:446.18，实测值为446.37。
实施例52:3-(4-((1-((R)-1-甲氧基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(52)
步骤2：以(R)-(2-叠氮-3-甲氧基丙基)苯和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((R)-1-甲氧基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮47.7mg，白色固体，收率58％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.22(s,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.41(s,1H),7.35(s,1H),7.18–7.11(m,3H),7.05-7.02(m,2H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,4.9Hz,1H),5.03(m,1H),4.34(dd,J＝17.4,2.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),3.79(dd,J＝10.3,8.0Hz,1H),3.69(dd,J＝10.4,4.1Hz,1H),3.21(d,J＝6.2Hz,3H),3.19–3.08(m,2H),2.91(ddd,J＝17.5,13.7,5.4Hz,1H),2.60-2.54(m,1H),2.47-2.53(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H27N5O5[M+H]+:490.20，实测值为490.29。
实施例53:3-(4-((1-((R)-1-羟基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(53)
(m,1H),2.93–2.80(m,2H),1.79(s,1H).
步骤2：以(R)-2-叠氮-3-苯基-1-丙醇和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((R)-1-羟基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮38mg,白色固体，收率48％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.23(s,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(m,3H),7.04(m,2H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.87–4.76(m,1H),4.34(d,J＝17.5Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),3.84–3.73(m,2H),3.21(dd,J＝14.0,5.5Hz,1H),3.11(dd,J＝14.0,9.5Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.60-2.54(m,1H),2.47-2.35(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H25N5O5[M+H]+:476.19，实测值为476.26。
实施例54:3-(4-((1-((S)-1-羟基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(54)
步骤2：以(S)-2-叠氮-3-苯基-1-丙醇和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((S)-1-羟基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮26.6mg,收率33％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.24(s,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.3Hz,1H),7.18–7.09(m,3H),7.04(d,J＝7.5Hz,2H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.87–4.78(m,1H),4.34(dd,J＝17.4,3.2Hz,1H),4.19(dd,J＝17.5,1.5Hz,1H),3.83–3.72(m,2H),3.21(dd,J＝14.0,5.6Hz,1H),3.11(dd,J＝14.0,9.6Hz,1H),2.89(d,J＝12.4Hz,1H),2.60-2.54(m,1H),2.47-2.35(m,1H),2.03-1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H25N5O5[M+H]+:476.19，实测值为476.26。
实施例55:3-(4-((1-((S)-1-甲氧基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(55)
3.76-3.67(m,1H),3.49(dd,J＝10.0,3.9Hz,1H),3.42-3.37(m,4H),2.84(ddd,J＝21.6,13.8,7.1Hz,2H).
步骤2：以(S)-(2-叠氮-3-甲氧基丙基)苯和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((S)-1-甲氧基-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮54.8mg,白色固体，收率67％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),8.23(s,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.40(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝7.2Hz,1H),7.17–7.11(m,3H),7.03(m,2H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),5.08–4.98(m,1H),4.34(dd,J＝17.4,2.5Hz,1H),4.18(d,J＝17.5Hz,1H),3.79(dd,J＝10.2,8.0Hz,1H),3.69(dd,J＝10.4,4.0Hz,1H),3.20(s,3H),3.19–3.08(m,2H),2.91(ddd,J＝17.6,13.8,5.3Hz,1H),2.60-2.52(m,1H),2.42(m,1H),2.01–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H27N5O5[M+H]+:490.20，实测值为490.33。
实施例56:3-(4-((1-((S)-1-(二甲胺基)-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(56)
步骤1：制备方法同叠氮合成方法6,得到(S)-2-叠氮-N,N-二甲基-3-苯
备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((S)-1-(二甲胺基)-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮41.1mg,白色固体，收率49％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),8.19(d,J＝1.4Hz,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),7.13-7.09(m,3H),6.99–6.92(m,2H),5.24(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),5.00-4.90(m,1H),4.33(dd,J＝17.5,3.0Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),3.19(dd,J＝14.0,4.9Hz,1H),3.06(dd,J＝14.0,9.8Hz,1H),2.96-2.87(m,2H),2.64-2.54(m,2H),2.48–2.35(m,1H),2.11(s,6H),2.02–1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H30N6O4[M+H]+:503.23，实测值为503.30。
实施例57:3-(4-((1-((R)-1-(二甲胺基)-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(57)
2.75(dd,J＝13.9,8.1Hz,1H),2.47(dd,J＝12.8,8.7Hz,1H),2.32(dd,J＝12.8,4.6Hz,1H),2.28(s,6H).
步骤2：以(R)-2-叠氮-N,N-二甲基-3-苯基-1-丙胺和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-((R)-1-(二甲胺基)-3-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮51.1mg,白色固体，收率61％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),8.19(d,J＝1.5Hz,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),7.11(m,3H),6.99–6.92(m,2H),5.25(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),5.01-4.91(m,1H),4.33(dd,J＝17.5,2.8Hz,1H),4.18(d,J＝17.4Hz,1H),3.19(dd,J＝14.1,5.0Hz,1H),3.06(dd,J＝13.9,9.7Hz,1H),2.98–2.85(m,2H),2.69–2.54(m,2H),2.48-2.35(m,1H),2.13(s,6H),2.02-1.90(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H30N6O4[M+H]+:503.23，实测值为503.34。
实施例58:3-(1-氧代-4-((1-((R)-1-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(58)
步骤2：以(R)-1-苯基-2-丙基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-((R)-1-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮41.5mg,白色固体，收率54％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),8.23(s,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.36–7.33(m,1H),7.19–7.13(m,3H),7.03-7.01(m,2H),5.26(s,2H),5.12(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),5.00–4.90(m,1H),3.14(d,J＝7.5Hz,2H),2.92(ddd,J＝17.8,13.8,5.3Hz,1H),2.62–2.55(m,1H),2.43(ddd,J＝26.5,13.3,4.4Hz,1H),2.02–1.92(m,1H),1.51(d,J＝6.7Hz,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H25N5O4[M+H]+:460.19，实测值为460.32。
实施例59:3-(1-氧代-4-((1-((S)-1-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(59)
后，向反应液中加入(R)-N-Boc-1-羟基-3-苯基-2-丙胺(1.66g,6.61mmol)的二氯甲烷溶液(10mL),反应液升至室温反应2h。反应完全后，反应液依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析得到(R)-N-Boc-1-碘代-3-苯基-2-丙胺1.62g,白色固体，收率68％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34–7.25(m,5H),4.69(d,J＝7.1Hz,1H),3.59(m,1H),3.40(dd,J＝10.0,4.4Hz,1H),3.16(dd,J＝10.2,3.7Hz,1H),2.91(dd,J＝13.5,5.8Hz,1H),2.76(dd,J＝13.6,8.3Hz,1H),1.43(s,9H).
步骤2：将(R)-N-Boc-1-碘代-3-苯基-2-丙胺(1.62g,4.48mmol)溶于30mL甲醇,加入三乙胺(3.12ml,22.4mmol)和10％Pd/C(162mg)，在H2(1atm)存在条件下反应5h。反应完毕，反应液经硅藻土过滤，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析得到(S)-N-Boc-1-苯基-2-丙胺824mg,淡黄色固体，收率78％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32-7.27(m,2H),7.23-7.16(m,3H),4.44-4.31(m,1H),3.97-3.85(m,1H),2.84(dd,J＝12.9,5.0Hz,1H),2.68-2.62(m,1H),1.42(s,9H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H).
步骤3：将(S)-N-Boc-1-苯基-2-丙胺(824mg，3.94mmol)溶于20mL盐酸二氧六环，室温反应过夜。反应完毕，减压除去溶剂，向反应体系中加水，用饱和碳酸氢钠溶液调PH至碱性，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机层，经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到(S)-1-苯基-2-丙胺414mg,无色油状物，收率74％。
步骤4：制备同方法6,得(S)-1-苯基-2-丙基叠氮65mg,收率40％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36–7.18(m,5H),3.76–3.62(m,1H),2.84(dd,J＝13.6,7.3Hz,1H),2.73(dd,J＝13.6,6.5Hz,1H),1.27(d,J＝6.5Hz,3H).
步骤5：以(S)-1-苯基-2-丙基叠氮和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(1-氧代-4-((1-((S)-1-苯丙基-2-)-1H-1,2,3-三唑-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮35.8mg,白色固体，收率47％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),8.23(s,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.40(d,J＝8.1Hz,1H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),7.18–7.10(m,3H),7.03-7.01(m,2H),5.25(s,2H),5.12(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),5.01–4.87(m,1H),4.33(dd,J＝17.4,2.4Hz,1H),4.18(d,J＝17.2Hz,1H),3.14(d,J＝7.4Hz,2H),2.91(ddd,J＝17.7,14.0,5.5Hz,1H),2.62–2.55(m,1H),2.42(ddd,J＝26.0,12.9,4.2Hz,1H),2.02–1.92(m,1H),1.50(d,J＝6.7Hz,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H25N5O4[M+H]+:460.19，实测值为460.32。
实施例60：3-(1-氧代-4-(2-(1-苯基-1H-1,2,3-三唑-4-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(60)
1H),7.87(d,J＝8.2Hz,2H),7.59(t,J＝7.9Hz,2H),7.48(q,J＝7.7Hz,2H),7.32(dd,J＝7.8,4.8Hz,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.44(t,J＝6.5Hz,2H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.21(d,J＝17.4Hz,1H),3.23(t,J＝6.5Hz,2H),2.97–2.83(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.38(ddd,J＝26.3,13.3,4.4Hz,1H),2.02–1.82(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H21N5O4[M+H]+:432.16，实测值为432.23。
实施例61：3-(1-氧代-4-(2-(1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(61)
-4-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮40.1mg,白色固体，收率54％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),8.73(s,1H),8.05–7.98(m,2H),7.62(d,J＝8.7Hz,2H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.45(t,J＝6.4Hz,2H),4.34(d,J＝17.4Hz,1H),4.21(d,J＝17.4Hz,1H),3.23(t,J＝6.4Hz,2H),2.98–2.84(m,1H),2.63–2.52(m,1H),2.40(qd,J＝13.3,4.3Hz,1H),2.01-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H20F3N5O5[M+H]+:516.14，实测值为516.17。
合成路线3：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与上述定义相同。
实施例62：3-(1-氧代-4-(2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)乙基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(62)
的二氯甲烷中，搅拌条件下加入二氧化锰(570mg,6.56mmol),反应体系在室温条件下，反应过夜，TLC监测反应完全后，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，经快速柱层析得到白色固体164mg,收率98％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.83(s,1H),8.26–8.21(m,2H),7.95(s,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H).
步骤2:0℃条件下，将叔丁醇钾(160mg,1.39mmol)加入到PPh3+CH3I-(562mg,1.39mmol)的干燥四氢呋喃溶液中，相同温度，氮气保护条件下反应45min,将2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-甲醛(143mg,0.56mmol)的四氢呋喃溶液(5ml)逐滴加入到反应体系中，滴加完后升至室温反应2h,LC-MSS监测反应完全后，加入冰水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取(2×40ml),合并有机层，有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，经快速柱层析得到淡黄色油状物123mg,收率87％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.30(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(s,1H),6.57(dd,J＝17.5,11.3Hz,1H),5.83(d,J＝17.5Hz,1H),5.37(d,J＝11.4Hz,1H).
步骤3：将2-(4-(三氟甲氧基)苯基)-5-乙烯基噁唑(120mg，0.47mmol)，5-氨基-4-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸甲酯(167mg,.47mmol)，醋酸钯(11mg,0.047mmol)，三(邻甲基苯基)磷(23mg，0.075mmol),N,N-二异丙基乙胺(117μL,0.71mmol)的乙腈溶液,用氮气置换三次，氮气保护条件下，90℃反应过夜，LC-MSS监测反应完全后，减压浓缩，用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化钠溶液洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，经快速柱层析得到白色固体67mg。
步骤4：将(Z)-5-氨基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)乙烯基)异吲哚啉-2-基)戊酸(67mg,0.126mmol)溶于5ml甲醇中,加入7mg的10％Pd/C，氢气常压下室温反应过夜，LC-MSS监测反应完全后，过滤，旋干直接投下一步。
步骤5：将上一步得到粗品5-氨基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)乙基)异吲哚啉-2-基)戊酸甲酯(67mg.127mmol)溶于3ml干燥的四氢呋喃中，0℃条件下，加入叔丁醇钾(16mg,0.14mmol),相同温度反应半小时，LC-MSS监测反应完全后，加入甲酸淬灭，减压浓缩，经HPLC纯化得到白色固体20mg,收率31.5％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(d,J＝7.2Hz,1H),7.55–7.43(m,4H),7.04(s,1H),5.12(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.44(d,J＝17.2Hz,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,1H),3.18–3.10(m,2H),3.10–3.03(m,2H),2.96–2.84(m,1H),2.60-2.52(m,1H),2.33(qd,J＝13.3,4.6Hz,1H),1.97–1.88(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H20F3N3O5[M+H]+:500.14，实测值为500.30。
实施例63：3-(1-氧代-4-(3-(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)丙基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(63)
13.3,5.1Hz,1H),4.47(d,J＝17.2Hz,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,1H),2.97–2.86(m,1H),2.85–2.72(m,4H),2.58(d,J＝17.2Hz,1H),2.37(dt,J＝13.0,8.8Hz,1H),2.06-1.97(m,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H22F3N3O5[M+H]+:514.15，实测值为514.37。
实施例64：3-(1-氧代-4-((1-(4-三氟甲氧基苯基)吖丁啶-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(64)
DMSO中，在氮气保护条件下加热至90℃反应18h。反应完毕，将反应液冷却至室温，加乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩再经硅胶柱层析得到1-(4-三氟甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-甲醇71mg,棕色固体，收率44％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.13(d,J＝8.8Hz,2H),6.43(d,J＝8.9Hz,2H),4.75(t,J＝5.3Hz,1H),3.83(t,J＝7.6Hz,2H),3.60–3.51(m,4H),2.80-2.72(m,1H).
步骤2：以1-(4-三氟甲氧基苯基)氮杂环丁烷-3-甲醇和中间体4为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-((1-(4-三氟甲氧基苯基)吖丁啶-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮，白色固体。
步骤3：制备方法同合成路线2，得产物51mg,收率65％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),7.49(t,J＝7.8Hz,1H),7.31(dd,J＝13.1,7.7Hz,2H),7.15(d,J＝8.3Hz,2H),6.53–6.45(m,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.35(d,J＝6.6Hz,2H),4.26(d,J＝17.4Hz,1H),4.13(d,J＝17.4Hz,1H),3.99(t,J＝7.7Hz,2H),3.74–3.68(m,2H),3.20–3.08(m,1H),2.97–2.85(m,1H),2.62-2.55(m,1H),2.48-2.30(m,1H),2.02–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H22F3N3O5[M+H]+:490.15，实测值为490.25。
实施例65:3-(1-氧代-4-(((S)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(65)
反应24h。反应完成后，反应液用乙酸乙酯稀释，饱和氯化钠洗涤，柱层析纯化得到123mg(S)-(1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲醇，黄色油状物,收率54％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝5.5Hz,1H),8.15(d,J＝8.5Hz,1H),7.91(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(dd,J＝11.2,4.0Hz,1H),7.32–7.23(m,1H),6.31(d,J＝5.5Hz,1H),3.82–3.56(m,6H),2.65–2.51(m,1H),2.13(dq,J＝12.1,6.1Hz,1H),1.85(dq,J＝12.4,7.7Hz,1H).
步骤2：将5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯(50mg，0.17mmol,1.0eq)，(S)-(1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲醇(82mg，0.34mmol，2.0eq)溶于20ml四氢呋喃中，加入三苯基膦(89mg，0.34mmol，2.0eq)完全溶解，加入偶氮二异丁腈(67ul，0.34mmol，2.0eq)，室温反应2小时。反应完成后，旋走溶剂，TLC纯化得到5-胺基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(((S)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)氧代戊酸甲酯60mg，白色固体，收率69％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(d,J＝5.5Hz,1H),8.21(d,J＝8.3Hz,1H),8.01(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(t,J＝7.2Hz,1H),7.47–7.36(m,3H),7.02(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),6.53(d,J＝5.6Hz,1H),6.38(s,1H),5.53(s,1H),4.91(dd,J＝8.7,6.3Hz,1H),4.42(q,J＝17.5Hz,2H),4.15(d,J＝6.6Hz,2H),3.93(dd,J＝9.8,7.1Hz,1H),3.82(dd,J＝9.6,5.0Hz,2H),3.68(dd,J＝9.9,6.9Hz,1H),3.64–3.61(m,3H),2.97–2.87(m,1H),2.47–2.28(m,4H),2.24–2.15(m,1H),2.04(dd,J＝12.4,7.7Hz,1H).
步骤3：5-胺基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(((S)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)氧代戊酸甲酯(30mg，0.06mmol，1.0eq)溶于10ml干燥的四氢呋喃，冰浴条件下加入叔丁醇钾(7mg，0.06mmol，1eq)，10分钟后开始检测反应。反应完成后，加入5ul甲酸淬灭反应，旋走溶剂，HPLC纯化得到3-(1-氧代-4-(((S)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮11mg，白色固体，收率39％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.94(s,1H),8.60(d,J＝8.5Hz,1H),8.46(s,1H),7.91(dt,J＝8.5,7.3Hz,2H),7.63(t,J＝7.7Hz,1H),7.49(t,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝7.5Hz,1H),7.27(d,J＝8.2Hz,1H),6.80(d,J＝7.3Hz,1H),5.11(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.47-3.76(m,8H),2.98-2.86(m,2H),2.65–2.54(m,1H),2.38-2.25(m,2H),2.15-2.04(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H26N4O4[M+H]+:471.20，实测值为471.39。
实施例66:3-(1-氧代-4-(((R)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(66)
步骤1：将(R)-吡咯烷-3-甲醇(50mg,0.49mmol,1.5eq)，4-氯喹啉(54mg，0.33mmol，1eq)，碳酸钾(138mg，0.99mmol，3eq)溶于5ml DMF，120℃反应24h。反应完成后，乙酸乙酯稀释，饱和氯化钠洗涤，柱层析纯化得到(R)-(1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲醇273mg，黄色油状物，收率49％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝5.4Hz,1H),8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.96(dd,J＝8.6Hz，0.8Hz，1H),7.61–7.54(m,1H),7.36–7.30(m,1H),6.44(d,J＝5.5Hz,1H),3.84–3.68(m,5H),3.60(dd,J＝9.8,7.0Hz,1H),2.60(dt,J＝14.0,6.8Hz,1H),2.18(td,J＝12.1,6.0Hz,1H),1.88(ddd,J＝15.8,12.3,7.9Hz,2H),1.71(s,1H).
步骤2：将5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯(50mg，0.17mmol,1.0eq)，(R)-吡咯烷-3-甲醇(82mg，0.34mmol，2.0eq)溶于20ml四氢呋喃中，加入三苯基膦(89mg，0.34mmol，2.0eq)完全溶解，加入偶氮二甲酸二异丙酯(67ul，0.34mmol，2.0eq)，室温反应2小时。反应完成后，旋走溶剂，TLC纯化得到60mg，白色固体，收率69％；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(d,J＝5.5Hz,1H),8.21(d,J＝8.3Hz,1H),8.01(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(t,J＝7.2Hz,1H),7.47–7.36(m,3H),7.02(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),6.53(d,J＝5.6Hz,1H),6.38(s,1H),5.53(s,1H),4.91(dd,J＝8.7,6.3Hz,1H),4.42(q,J＝17.5Hz,2H),4.15(d,J＝6.6Hz,2H),3.93(dd,J＝9.8,7.1Hz,1H),3.82(dd,J＝9.6,5.0Hz,2H),3.68(dd,J＝9.9,6.9Hz,1H),3.64–3.61(m,3H),2.97–2.87(m,1H),2.47–2.28(m,4H),2.24–2.15(m,1H),2.04(dd,J＝12.4,7.7Hz,1H).
步骤3：5-胺基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(((R)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)氧代戊酸甲酯(20mg，0.04mmol，1.0eq)溶于10ml干燥的四氢呋喃，冰浴条件下加入叔丁醇钾(4.5mg，0.06mmol，1eq)，10分钟后开始检测反应。反应完成后，加入5ul甲酸淬灭反应，旋走溶剂，HPLC纯化得到3-(1-氧代-4-(((R)-1-(喹啉-4-)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮8.4mg，白色固体，收率45％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.60(d,J＝8.6Hz,1H),8.49–8.42(t,J＝8.6Hz，1H),7.96–7.86(m,2H),7.63(ddd,J＝8.5,6.6,1.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.4Hz,1H),7.27(d,J＝8.1Hz,1H),6.81(d,J＝7.2Hz,1H),5.10(dd,J＝13.5,5.1Hz,1H),4.37-3.58(m,8H)2.98–2.83(m,2H),2.67–2.54(m,1H),2.35-2.27(m,2H),2.15–2.03(m,1H),1.99-1.89(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H26N4O4[M+H]+:471.20，实测值为471.39。
实施例67:3-(1-氧代-4-((1-(喹啉-4-)哌啶-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(67)
Hz,1H),8.00–7.94(m,2H),7.70(ddd,J＝8.4,6.8,4.2Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.4Hz,1H),7.29(d,J＝8.1Hz,1H),7.22(d,J＝7.1Hz,1H),5.13(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.40(d,J＝17.3Hz,1H),4.24(dd,J＝15.2,10.9Hz,3H),4.15–4.06(m,2H),3.50(t,J＝12.9Hz,2H),2.92(ddd,J＝17.8,13.4,5.1Hz,1H),2.58(ddd,J＝5.1,4.2,1.8Hz,1H),2.48–2.37(m,1H),2.34–2.22(m,1H),2.10–1.94(m,3H),1.64(dd,J＝24.2,12.2Hz,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H28N4O4[M+H]+:485.21，实测值为485.38。
实施例68：3-(1-氧代-4-(2-(1-(喹啉-4-)哌啶-4-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(68)
1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.31(dd,J＝14.3,7.8Hz,2H),7.20(d,J＝7.1Hz,1H),5.13(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.40(d,J＝17.4Hz,1H),4.34–4.02(m,5H),3.46(t,J＝12.6Hz,2H),3.01–2.85(m,1H),2.60(d,J＝17.6Hz,1H),2.49–2.38(m,1H),2.04-1.95(m,4H),1.82(dd,J＝11.9,5.6Hz,2H),1.54(dd,J＝22.8,11.3Hz,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C29H30N4O4[M+H]+:499.23，实测值为499.84。
实施例69：3-(1-氧代-4-(2-(1-(喹啉-4-)吖丁啶-3-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(69)
无需进一步纯化得到213mg(100％)无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.09(t,J＝8.6Hz,1H),3.68(s,3H),3.60(dd,J＝8.8,5.5Hz,1H),2.91–2.84(m,0H),2.63(d,J＝7.9Hz,1H),1.43(s,3H).
步骤2：将2-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-)乙酸甲酯(213mg，0.93mmol，1.0eq)溶于5mL二氯甲烷，加入5ml三氟乙酸，室温反应30分钟。反应完成后，旋走溶剂。得到黄色油状物。将黄色油状物溶于10mL DMF中，加入4-氯-喹啉(304mg，1.86mmol，2.0eq)，无水碳酸钾(524mg，3.72mmol，4.0eq)，120℃反应过夜。反应完成后，乙酸乙酯稀释，饱和氯化钠洗涤，柱层析纯化得到2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙酸甲酯134mg，黄色油状物，收率56％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(d,J＝5.3Hz,1H),8.01(d,J＝8.6Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.63(s,1H),7.38(d,J＝7.1Hz,1H),6.20(d,J＝5.3Hz,1H),4.60(t,J＝8.1Hz,2H),4.09(dd,J＝8.1,5.6Hz,2H),3.75(s,3H),3.23(ddd,J＝13.3,7.9,5.4Hz,2H),2.82(d,J＝7.8Hz,2H).
步骤3：将2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙酸甲酯(152mg，0.59mmol，1.0eq)溶于10mL四氢呋喃中，冰浴条件下加入DIBAL-H(1M，1.25ml，2.1eq)。反应完成后，旋走溶剂，柱层析纯化得到2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙醇94mg，黄色油状物，收率70％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.48(d,J＝5.3Hz,1H),7.97(d,J＝7.9Hz,1H),7.92(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(ddd,J＝8.3,6.9,1.3Hz,1H),7.34(ddd,J＝8.2,6.9,1.2Hz,1H),6.15(d,J＝5.3Hz,1H),4.53(t,J＝8.1Hz,2H),4.06(dd,J＝7.9,5.8Hz,2H),3.76(t,J＝6.2Hz,2H),3.00(ddd,J＝13.6,7.7,5.8Hz,1H),1.99(dd,J＝13.6,6.3Hz,3H).
步骤4：将5-胺基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-)-5-氧代戊酸甲酯(50mg，0.17mmol,1.0eq)，2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙醇(78mg，0.34mmol，2.0eq)溶于20ml四氢呋喃中，加入三苯基膦(89mg，0.34mmol，2.0eq)完全溶解，加入偶氮二异丁腈(67ul，0.34mmol，2.0eq)，室温反应2小时。反应完成后，旋走溶剂，TLC纯化得到5-胺基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙氧基)异吲哚啉-2-)戊酸甲酯68mg，白色固体，收率82％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(d,J＝5.4Hz,1H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(t,J＝7.3Hz,1H),7.48–7.38(m,3H),7.02(dd,J＝6.4,2.4Hz,1H),6.43(s,1H),6.19(d,J＝5.5Hz,1H),5.54(s,1H),4.93(dd,J＝8.8,6.3Hz,1H),4.59(dd,J＝14.6,7.9Hz,2H),4.54–4.47(m,1H),4.39(d,J＝17.4Hz,1H),4.18–4.11(m,4H),3.61(d,J＝6.6Hz,3H),3.17–3.02(m,1H),2.48–2.17(m,7H).
步骤5：5-胺基-5-氧代-4-(1-氧代-4-(2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙氧基)异吲哚啉-2-)戊酸甲酯(80mg，0.16mmol，1.0eq)溶于10ml干燥的四氢呋喃，冰浴条件下加入叔丁醇钾(18mg，0.16mmol，1eq)，10分钟后开始检测反应。反应完成后，加入5ul甲酸淬灭反应，旋走溶剂，HPLC纯化得到3-(1-氧代-4-(2-(1-(喹啉-4-)氮杂环丁烷-3-)乙氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮11mg，白色固体，收率14％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.56(s,1H),11.02(s,1H),8.42(dd,J＝6.6,4.8Hz,1H),8.19(d,J＝9.8Hz,1H),7.96–7.90(m,1H),7.87(dd,J＝8.4,1.0Hz,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.4Hz,1H),7.27(d,J＝7.9Hz,1H),6.42(d,J＝7.1Hz,1H),5.14(dd,J＝13.5,5.3Hz,2H),4.87–4.78(m,1H),4.58(d,J＝11.1Hz,1H),4.42(dd,J＝11.7,8.7Hz,1H),4.25(dd,J＝18.7,12.0Hz,4H),3.15(s,1H),3.00–2.88(m,1H),2.61(d,J＝15.4Hz,1H),2.40(ddd,J＝26.0,15.8,9.0Hz,2H),2.22(dd,J＝13.5,7.9Hz,2H),2.08–1.97(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H26N4O4[M+H]+:471.20，实测值为471.81。
实施例70：3-(1-氧代-4-(((R)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(70)
步骤2：以(S)-1-(4-三氟甲氧基苯基)吡咯啉-3-甲醇和中间体6为原料，制备方法同合成路线2，得到3-(1-氧代-4-(((R)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮36.9mg,白色固体，收率39％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),7.48(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(dd,J＝18.5,7.8Hz,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.57(d,J＝9.1Hz,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.40(d,J＝17.4Hz,1H),4.22(d,J＝17.4Hz,1H),4.20-4.13(m,2H),3.46(dd,J＝9.5,7.5Hz,1H),3.41–3.34(m,1H),3.29-3.25(m,1H),3.17(dd,J＝9.6,6.3Hz,1H),2.97–2.77(m,2H),2.63–2.54(m,1H),2.48–2.37(m,1H),2.20(td,J＝12.4,7.4Hz,1H),2.04–1.88(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H24F3N3O5[M+H]+:504.17，实测值为504.24。
实施例71：3-(1-氧代-4-(((S)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(71)
气保护下加热至90℃反应过夜，反应完毕，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析，得到(R)-1-(4-三氟甲氧基苯基)吡咯啉-3-甲醇83mg,淡红色油状物，收率32％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.13(d,J＝8.8Hz,2H),6.53(d,J＝8.8Hz,2H),4.69(s,1H),3.47–3.35(m,2H),3.33–3.17(m,4H),2.43(m,1H),2.03(m,1H),1.74(m,1H).
步骤2：以(R)-1-(4-三氟甲氧基苯基)吡咯啉-3-甲醇和中间体4为原料，制备方法同实施例70，得到3-(1-氧代-4-(((S)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯啉-3-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮9.3mg,收率10％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),7.48(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(dd,J＝18.7,7.8Hz,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.58(d,J＝9.1Hz,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.33(d,J＝17.5Hz,1H),4.24(d,J＝17.4Hz,1H),4.21–4.12(m,2H),3.47(dd,J＝9.5,7.6Hz,1H),3.41–3.24(m,2H),3.17(dd,J＝9.5,6.2Hz,1H),2.96–2.86(m,1H),2.82(dt,J＝13.5,6.8Hz,1H),2.63–2.54(m,1H),2.46–2.34(m,1H),2.24-2.16(m,1H),2.01–1.88(m,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H24F3N3O5[M+H]+:504.17，实测值为504.24。
实施例72：3-(1-氧代-4-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)环己基)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(72)
3.7Hz,1H),4.39(dd,J＝17.5,6.0Hz,1H),4.28–4.19(m,2H),3.99(d,J＝5.8Hz,1H),2.99–2.84(m,1H),2.61(ddd,J＝31.9,16.7,6.4Hz,2H),2.49–2.38(m,1H),2.26–2.15(m,1H),2.04–1.92(m,2H),1.85(dd,J＝10.4,2.0Hz,2H),1.66(ddd,J＝14.2,8.9,3.8Hz,3H),1.57–1.42(m,1H),1.26(ddd,J＝20.0,13.0,5.0Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C27H27F3N2O5[M+H]+:517.19，实测值为517.18。
实施例73：3-(1-氧代-4-((1-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌啶-4-)甲氧基)异吲哚啉-2-)哌啶-2,6-二酮(73)
9.0Hz,2H),7.01(d,J＝9.2Hz,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.24(d,J＝17.5Hz,1H),4.03(d,J＝5.9Hz,2H),3.74(d,J＝12.4Hz,2H),2.97–2.85(m,1H),2.72(t,J＝11.6Hz,2H),2.62–2.54(m,1H),2.49–2.39(m,1H),2.03–1.92(m,2H),1.89(d,J＝13.4Hz,2H),1.44(qd,J＝12.0,3.7Hz,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H26F3N3O5[M+H]+:518.18，实测值为518.39。
实施例74:3-(4-((1-(4-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-oxoisoindolin-2-基)哌啶-2,6-二酮(74)
(m,2H),7.72–7.65(m,2H),7.56–7.46(m,2H),7.36(d,J＝6.4Hz,1H),5.41(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.98–2.83(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝26.7,13.3,4.4Hz,1H),2.02–1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H18ClN5O4[M+H]+:452.10，实测值为452.30。
实施例75:3-(4-((1-(3,4-二氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(75)
7.34(dd,J＝13.8,7.0Hz,1H),5.42(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.84(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.02–1.95(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H17Cl2N5O4[M+H]+:486.07，实测值为486.21。
实施例76:3-(4-((1-((3S，5S，7S)-金刚烷-1-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(76)
叠氮化合物同叠氮合成方法6,化合物制备方法同合成路线1及实施
4.36(d,J＝17.5Hz,1H),4.19(d,J＝17.5Hz,1H),2.90(ddd,J＝18.7,13.6,5.1Hz,1H),2.60–2.53(m,1H),2.48-2.38(m,1H),2.18(s,9H),2.00–1.93(m,1H),1.74(s,6H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H29N5O4[M+H]+:476.22，实测值为476.45。
实施例77:3-(6-氟-1-氧代-4-((1-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(77)
8.02(m，2H)，7.65(d，J＝8.5Hz，2H)，7.48(dd，J＝11.4，2.0Hz，1H)，7.15(dd,J＝7.3,2.0Hz,1H),5.43(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.36(d,J＝17.4Hz,1H),4.20(d,J＝17.4Hz,1H),2.90(ddd,J＝17.3,13.5,5.0Hz,1H),2.61–2.53(m,1H),2.47-2.35(m,1H),2.02-1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H17F4N5O5[M+H]+:520.12，实测值为520.26。
实施例78:3-(1-氧代-4-((1-(苯基-D5)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(78)
Hz,1H),4.39(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.85(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.47–2.36(m,1H),2.02–1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H14D5N5O4[M+H]+:423.18，实测值为423.34。
实施例79:3-(6-氟-1-氧代-4-((1-(苯基-D5)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(79)
13.3,5.0Hz,1H),4.36(d,J＝17.5Hz,1H),4.21(d,J＝17.5Hz,1H),2.90(ddd,J＝17.0,13.7,5.1Hz,1H),2.61–2.53(m,1H),2.47-2.35(m,1H),2.02–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C22H13D5FN5O4[M+H]+:441.17，实测值为441.34。
实施例80:3-(6-氟-1-氧代-4-((2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)甲氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(80)
2H),4.37(d,J＝17.4Hz,1H),4.20(d,J＝17.4Hz,1H),2.89(ddd,J＝17.6,13.6,5.2Hz,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.00–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H17F4N3O6[M+H]+:520.11，实测值为520.29。
实施例81:3-(6-氟-1-氧代-4-((5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-基)甲氧基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(81)
2H),5.10(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.40(d,J＝17.2Hz,1H),4.24(d,J＝17.2Hz,1H),2.96–2.84(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.06–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H17F4N3O6[M+H]+:520.11，实测值为520.29。
实施例82:3-(1-氧代-4-((2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)甲基)氨基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(82)
步骤1：将(2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)甲醇(170mg,0.66mmol)溶于干燥的二氯甲烷中，搅拌条件下加入二氧化锰(570mg,6.56mmol),反应体系在室温条件下，反应过夜，TLC监测反应完全后，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，经快速硅胶柱层析得到白色固体164mg,收率98％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.83(s,1H),8.26–8.21(m,2H),7.95(s,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H)
步骤2：室温条件下，将2-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-甲醛(56mg,0.220mmol)和来那度胺(38mg,0.147mmol)溶于2ml乙酸和2ml二氯甲烷中，搅拌1小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(93mg,0.44mmol),氮气保护条件下室温反应过夜。TLC监测反应完全后,反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液调PH至8左右，加入乙酸乙酯(30ml×2)萃取，分液，有机层用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，经HPLC纯化得到白色固体44mg,收率60％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.99(s,1H),8.04(d,J＝8.9Hz,2H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.7Hz,1H),7.27(s,1H),7.00(d,J＝7.4Hz,1H),6.95(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(t,J＝5.8Hz,1H),5.09(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.54(d,J＝5.8Hz,2H),4.28(d,J＝17.2Hz,1H),4.17(d,J＝17.2Hz,1H),2.96–2.84(m,1H),2.65–2.56(m,1H),2.35–2.23(m,1H),2.07-2.00(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H19F3N4O5[M+H]+:501.14，实测值为501.28。
实施例83:3-(4-((1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(83)
步骤1:室温条件下，将三乙胺(284μL,2.04mmol)加入到(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)肼(500mg,2.04mmol)和2-乙酰基-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯(378mg,2.04mmol)的乙腈(20mL)悬浊液中，搅拌过夜，TLC监测反应完全后，减压浓缩，经快速硅胶柱层析得到产物630mg，收率84％。
步骤2：将1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(630mg,1.72mmol)溶于15ml干燥的四氢呋喃中，冰浴冷却，逐滴加入1mol/L的四氢铝锂的四氢呋喃溶液(2.6mL),滴加完后升至室温反应1小时，TLC监测反应完全后,加入冰水淬灭，过滤，滤液减压浓缩经快速硅胶柱层析得到产物100mg,收率18％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.24(s,2H),7.68(s,1H),4.92(t,J＝5.4Hz,1H),4.39(d,J＝5.4Hz,2H),2.03(s,3H).
步骤3：(1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)甲醇(80mg,0.246mmol)，5-氨基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸甲酯(48mg,0.164mmol)和三苯基膦(64.5mg，0.246mmol)置于25ml圆底烧瓶中。反应体系用氮气置换，加入5mL干燥四氢呋喃。向反应体系中加入偶氮二甲酸二异丙酯(48μL，0.246mmol)。反应体系在室温反应3h。TLC监测反应完全后减压浓缩，柱层析得到产物72mg，收率73％。
步骤4：将上一步得到的产物(72mg,0.12mmol)溶于干燥的THF中,0℃条件下加入叔丁醇钾(15mg,0.13mmol),相同温度反应30分钟,加入1N HCl淬灭,乙酯乙酯稀释，用饱和氯化钠洗涤，干燥，经HPLC纯化，得到白色固体36mg,收率53％1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.26(s,2H),7.89(s,1H),7.52(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.1Hz,1H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),5.19(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.38(d,J＝17.3Hz,1H),4.24(d,J＝17.3Hz,1H),2.96–2.85(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.10(s,3H),2.00–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H19Cl2F3N4O4[M+H]+:567.08，实测值为567.21。
实施例84:3-(4-((1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(84)
步骤1：在50mL圆底烧瓶中加入浓硫酸(1mL)和NaNO2(297mg,4.31mmol),冷却至5-10℃之间，逐滴加入2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯胺(1g,4.06mmol)的乙酸(4mL)溶液，搅拌10分钟后，升至室温反应30分钟，然后置于60℃反应1h.将反应体系冷却至0℃，加入二氯化锡(3.16g,16.67mmol)的37％盐酸(2.5mL)溶液，反应20分钟后过滤，将滤渣加入到28％的氨水(30mL)和冰的混合物中，搅拌分钟后，反应体系用乙醚萃取(100mL×2),合并有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，减压浓缩得到白色固体689mg,收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.50(s,2H),6.12(s,1H),4.46(s,2H).
步骤2:室温条件下，将三乙胺(367μL,2.64mmol)加入到((2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)肼(689mg,2.64mmol)和2-乙酰基-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯(489mg,2.64mmol)的乙腈(15mL)悬浊液中，搅拌过夜，TLC监测反应完全后,减压浓缩，经快速硅胶柱层析得到产物883mg，收率87％。
步骤3：将1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(883mg,2.30mmol)溶于15ml干燥的四氢呋喃中，冰浴冷却，逐滴加入1mol/L的四氢铝锂的四氢呋喃溶液(3.45mL),滴加完后升至室温反应1小时，TLC监测反应完全后,加入冰水淬灭，过滤，滤液减压浓缩经快速硅胶柱层析得到产物563mg,收率72％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.95(s,2H),7.65(s,1H),4.91(t,J＝5.4Hz,1H),4.38(d,J＝5.4Hz,2H),2.02(s,3H).
步骤4：(1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)甲醇(140mg,0.410mmol)，5-氨基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸甲酯(80mg,0.274mmol)和三苯基膦(108mg，0.410mmol)置于25ml圆底烧瓶中。反应体系用氮气置换，加入5mL干燥四氢呋喃。向反应体系中加入偶氮二甲酸二异丙酯(81μL，0.410mmol)。反应体系在室温反应3h。TLC监测反应完全后减压浓缩，柱层析得到产物145mg，收率86％。
步骤5：将上一步得到的产物(145mg,0.237mmol)溶于干燥的THF(5mL)中,0℃条件下加入叔丁醇钾(29mg,0.259mmol),相同温度反应30分钟,加入1N HCl淬灭,乙酯乙酯稀释，用饱和氯化钠洗涤，干燥，经HPLC纯化，得到白色固体94mg,收率68.4％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),7.96(s,2H),7.87(s,1H),7.52(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.3Hz,1H),5.18(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.38(d,J＝17.4Hz,1H),4.23(d,J＝17.4Hz,1H),2.96–2.85(m,1H),2.61–2.54(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.09(s,3H),2.02-1.94(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H19Cl2F3N4O5[M+H]+:583.08，实测值为583.26。
实施例85:3-(4-((1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(85)
步骤1：在50mL圆底烧瓶中加入浓硫酸(1mL)和NaNO2(297mg,4.31mmol),冷却至5-10℃之间，逐滴加入2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯胺(1g,4.06mmol)的乙酸(4mL)溶液，搅拌10分钟后，升至室温反应30分钟，然后置于60℃反应1小时.将反应体系冷却至0℃，加入二氯化锡(3.16g,16.67mmol)的37％盐酸(2.5mL)溶液，反应20分钟后过滤，将滤渣加入到28％的氨水(30mL)和冰的混合物中，搅拌分钟后，反应体系用乙醚萃取(100mL×2),合并有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，减压浓缩得到白色固体689mg,收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.50(s,2H),6.12(s,1H),4.46(s,2H).
步骤2:室温条件下，将三乙胺(352μL,2.53mmol)加入到((2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)肼(660mg,2.53mmol)和乙酰丙酮酸甲酯(399.6mg,2.53mmol)的乙腈(20mL)悬浊液中，搅拌过夜，TLC监测反应完全后,减压浓缩，经快速硅胶柱层析得到产物430mg，收率44％。
步骤3：将1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(430mg,1.12mmol)溶于3ml干燥的四氢呋喃中，冰浴冷却，逐滴加入1mol/L的四氢铝锂的四氢呋喃溶液(1.35mL),滴加完后升至室温反应4小时，TLC监测反应完全后,加入冰水淬灭，过滤，滤液减压浓缩经快速硅胶柱层析得到产物90mg,收率10％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(d,J＝0.5Hz,2H),6.24(s,1H),4.43(s,2H),2.33(s,3H).
步骤4：(1-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇(90mg,0.264mmol)，5-氨基-4-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸甲酯(51.4mg,0.176mmol)和三苯基膦(69.2mg，0.264mmol)置于25ml圆底烧瓶中。反应体系用氮气置换，加入5mL干燥四氢呋喃。向反应体系中加入偶氮二甲酸二异丙酯(52μL，0.264mmol)。反应体系在室温反应2h。TLC监测反应完全后减压浓缩，柱层析得到产物30.8mg，收率28％。
步骤5：将上一步得到的产物(30.8mg,0.05mmol)溶于干燥的THF(1mL)中,0℃条件下加入叔丁醇钾(5.6mg,0.05mmol),相同温度反应30分钟,加入1N HCl淬灭,乙酯乙酯稀释，用饱和氯化钠洗涤，干燥，经HPLC纯化，得到白色固体20mg,收率68％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.00(s,1H),7.88(s,1H),7.67–7.52(m,1H),7.45-7.41(m,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,2H),6.55(s,1H),5.15–5.05(m,3H),4.14(d,J＝17.4Hz,1H),4.04(d,J＝17.3Hz,1H),2.98–2.85(m,1H),2.64–2.54(m,1H),2.42-2.32(m,1H),2.25(s,3H),2.04–1.93(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C25H19Cl2F3N4O5[M+H]+:583.08，实测值为583.26。
实施例86:3-(4-((1-((1R，3S，5R，7S)-3-羟基金刚烷-1-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-吡啶-2-基)哌啶-2,6-二酮(86)
＝13.3,5.1Hz,1H),4.80(s,1H),4.36(d,J＝17.5Hz,1H),4.20(d,J＝17.5Hz,1H),2.96–2.84(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.48–2.36(m,1H),2.31(s,2H),2.11–1.93(m,7H),1.71–1.50(m,6H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H29N5O5[M+H]+:492.22，实测值为492.39。
实施例87:3-(4-((1-((1R，3R，5R，7R)-金刚烷-2-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(87)
(m,2H),7.34(d,J＝6.6Hz,1H),5.31(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.57-4.55(m,1H),4.35(d,J＝17.5Hz,1H),4.20(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.84(m,1H),2.66(s,2H),2.61–2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝17.5,13.4,4.5Hz,1H),2.01–1.89(m,6H),1.80–1.67(m,5H),1.60(d,J＝12.7Hz,2H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C26H29N5O4[M+H]+:476.22，实测值为476.45。
实施例88:3-(4-((1-(1-((1S，3S)-金刚烷-1-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(88)
(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39–4.27(m,2H),4.20(d,J＝17.4Hz,1H),2.96–2.83(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.42(ddd,J＝17.6,13.6,4.5Hz,1H),2.01–1.86(m,4H),1.62(d,J＝11.9Hz,3H),1.51(d,J＝9.5Hz,6H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H),1.27(d,J＝11.8Hz,3H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H33N5O4[M+H]+:504.25，实测值为504.43。
实施例89:3-(4-((1-((1R，3R，5S，7R)-3,5-二甲基金刚烷-1-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(89)
(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),4.35(d,J＝17.5Hz,1H),4.19(d,J＝17.5Hz,1H),2.97–2.83(m,1H),2.64–2.55(m,1H),2.42(ddd,J＝26.4,13.5,4.6Hz,1H),2.028-2.22(m,1H),2.05–1.92(m,3H),1.83(q,J＝11.8Hz,4H),1.46(d,J＝12.1Hz,2H),1.37(d,J＝12.3Hz,2H),1.30–1.18(m,2H),0.90(s,6H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C28H33N5O4[M+H]+:504.25，实测值为504.44。
实施例90:3-(1-氧代-4-(((2-(3-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)甲基)氨基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(90)
7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.00(d,J＝7.3Hz,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.32(t,J＝5.8Hz,1H),5.11(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.55(d,J＝5.8Hz,2H),4.29(d,J＝17.2Hz,1H),4.17(d,J＝17.2Hz,1H),2.99–2.84(m,1H),2.65–2.57(m,1H),2.30(qd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.08-2.01(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H19F3N4O5[M+H]+:501.13，实测值为501.29。
实施例91:3-(4-((2-(3,4-二氯苯基)噁唑-5-基)甲氧基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮
(25mL)溶液中，1h后，逐滴加入(10min)二碘乙烷(2.31g，8.184mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液，相同温度反应1h,升至室温反应，TLC监测，反应完全后，加入冷的乙醚100ml和饱和硫代硫酸钠，萃取分液，有机层用饱和氯化钠洗一次，旋干，柱层析。得到2-碘噁唑-5-羧酸乙酯(白色固体，1.5g,收率50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),1.38(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤2：将2-碘噁唑-5-羧酸乙酯(215mg,0.81mmol),3,4-二氯苯硼酸(200mg，1.05mmol)，碳酸钾(336mg,2.43mmol),Pd(PPh3)4(92mg,0.08mmol)加入到100ml两口瓶中，加入dioxane(5mL)和水(1mL),N2保护回流过夜，水稀释，乙酸乙酯(EA)萃取，水层用EA萃取1次，合并有机层，用饱和NaCl洗，干燥，旋干，柱层析。得到产物2-(3,4-二氯苯基)噁唑-5-羧酸乙酯(125mg)；
步骤3：在0℃下，将四氢铝锂加入2-(3,4-二氯苯基)噁唑-5-羧酸乙酯(125mg,0.439mmol)的THF(3mL)溶液中，升至室温反应0.5h,反应完毕，加入乙酸乙酯淬灭，减压旋干，硅胶柱层析得到(2-(3,4-二氯苯基)噁唑-5-基)甲醇83mg,收率78％；
步骤4：制备方法同合成路线2及实施例40，得到白色固体30mg,收率47％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.61–7.48(m,3H),7.38(d,J＝7.0Hz,1H),5.43(s,2H),5.10(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.40(d,J＝17.6Hz,1H),4.23(d,J＝17.6Hz,1H),2.96–2.85(m,1H),2.61–2.54(m,1H),2.45–2.34(m,1H),2.01–1.92(m,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C23H17Cl2N3O5[M+H]+:486.05，实测值486.24。
实施例92:3-(4-((1-(4-环丙氧基-2-氟苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮
冰浴条件下加水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，经硅胶柱层析得到1-环丙氧基-2-氟-4-硝基苯(670mg),收率39.5％。
步骤2：将1-环丙氧基-2-氟-4-硝基苯(670mg,3.40mmol)溶于20mL甲醇中，加入67mg钯碳，反应体系在常压氢气条件下反应过夜，反应完全后，过滤，减压浓缩得到4-环丙氧基-3-氟苯胺(530mg)。
步骤3：合成4-叠氮基-1-环丙氧基-2-氟苯的制备方法同叠氮合成方法1。
步骤4：以4-叠氮基-1-环丙氧基-2-氟苯和中间体6为原料，制备方法同合成路线1及实施例1，得到3-(4-((1-(4-(环丙氧基-2-氟苯基))-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-氧代异氰酸酯吲哚-2-基)磷脂-2,6-二酮；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),8.91(s,1H),7.86(dd,J＝11.9,2.6Hz,1H),7.75(d,J＝8.9Hz,1H),7.61(t,J＝8.9Hz,1H),7.56–7.45(m,2H),7.36(d,J＝7.1Hz,1H),5.39(s,2H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.38(d,J＝17.5Hz,1H),4.23(d,J＝17.5Hz,1H),4.09–4.01(m,1H),2.96–2.84(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.45–2.35(m,1H),2.02–1.93(m,1H),0.89–0.71(m,4H).UPLC-MS(ESI)理论值为C25H22FN5O5[M+H]+:492.16，实测值492.32.
实施例93:3-(1-氧代-4-((((5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基)异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮
饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和氯化钠洗涤，干燥，过滤，减压除去溶剂，残余物经柱层析得到4-三氟甲氧基苯基噁唑887mg,黄色固体，收率82％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(s,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,2H),7.36(s,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,2H).
步骤2：在氮气保护条件下将4-三氟甲氧基苯基噁唑(879mg,3.84mmol)的溶解于30mL干燥THF中，将反应液冷却至-78℃，向反应液中逐滴加入正丁基锂(2.5mol/L，1.69ml，4.22mmol)，继续反应30min后，加入DMF(325ul,4.22mmol)，反应液在-78℃继续反应1h后，升至室温反应2h。反应完全后，反应液用1N HCl调至PH5左右，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到产物(500mg)。
步骤3：以上一步得到的5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲醛为原料，制备方法同实施例82还原胺化条件得到3-(1-氧代-4-((((5-(4-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基]异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(12mg).1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),7.81–7.72(m,2H),7.68(s,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,2H),7.30(t,J＝7.7Hz,1H),6.96(dd,J＝32.8,7.6Hz,2H),6.49(t,J＝6.1Hz,1H),5.12(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.59(d,J＝6.1Hz,2H),4.30(d,J＝17.2Hz,1H),4.19(d,J＝17.2Hz,1H),2.99–2.86(m,1H),2.62(d,J＝17.0Hz,1H),2.32(qd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.04(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H).UPLC-MS(ESI)理论值为C24H19F3N4O5[M+H]+:501.13，实测值501.28.
实施例94:3-(1-氧代-4-((((2-(2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-5-基)甲基)氨基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
7.47(d,J＝8.2Hz,2H),7.30(t,J＝7.7Hz,1H),6.96(dd,J＝32.8,7.6Hz,2H),6.49(t,J＝6.1Hz,1H),5.12(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.59(d,J＝6.1Hz,2H),4.30(d,J＝17.2Hz,1H),4.19(d,J＝17.2Hz,1H),2.99–2.86(m,1H),2.62(d,J＝17.0Hz,1H),2.32(qd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.04(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H)。UPLC-MS(ESI)理论值为C24H19F3N4O5[M+H]+:501.13，实测值501.28。
二、试验实施例
本发明还测试了实施例化合多取代异吲哚啉类化合物对三大类血液肿瘤细胞系的活性，代表性的细胞系有：多发性骨髓瘤细胞系(MM.1S)、套细胞淋巴瘤细胞系(Mino)、急性髓系白血病细胞系(MV-4-11)。测试这三类代表性的细胞系的细胞增殖抑制活性。药理学实验所需要的实验材料除特殊说明外，均为商业购买。
1.化合物对MM.1S细胞增殖的作用
MM.1S细胞用1640加10％胎牛血清培养并收集，按7天的作用时间稀释细胞浓度，在96孔细胞板中每孔加入180ul细胞悬液，使其细胞数为20000个。对照细胞孔加入20ul终浓度为0.2％的DMSO，化合物由10mM母液5倍梯度稀释，同样加20ul到化合物细胞孔(DMSO终浓度为0.2％)。细胞放入37℃，5％CO2培养箱孵育7天。按MTS试剂盒(Promega,G5430)配制反应液后，每孔加入20μL，37℃，5％CO2培养箱孵育3-4小时。用酶标板读取490nm吸收光值，并以690nm吸收光值作为背景值，以OD490-OD690为最终原始数据。化合物的抑制率计算公式为：抑制率＝(ODDMSO-OD化合物)/(ODDMSO-O空白)×100％。化合物的增殖抑制IC50由Graph PadPrism 5.0拟合。实验重复三次，每次用三个平行实验计算计算平均数和标准差。细胞活性测试结果见下表1：A表示细胞活性IC50<150nM,B表示细胞活性150nM≤IC50≤20μM，C表示细胞活性IC50>20μM。
表1.化合物对MM.1S细胞增殖的抑制活性
基于以上化合物细胞生长抑制活性测试结果，本发明的一些实施例化合物对多发性骨髓瘤MM.1S细胞生长具有很好的抑制活性，部分化合物的活性与阳性化合物相当或优于阳性化合物。另一方面，这些结构多样性化合物的开发，为获得更高活性的药物分子和药学性质更佳的分子，提供可选择的分子来源。因此，本发明的化合物可以用于预防和治疗与调节CRBN(CRL4CRBNE3泛素连接酶)活性相关的疾病，如多发性骨髓瘤或非限制性的包括其他潜在的肿瘤疾病、疼痛、神经系统疾病和免疫系统疾病。
2.化合物对Mino细胞增殖的作用
Mino细胞用1640加15％胎牛血清培养并收集，按3天的作用时间稀释细胞浓度，在96孔细胞板中每孔加入90ul细胞悬液，使其细胞数为8000个。对照细胞孔加入10ul终浓度为0.2％的DMSO，化合物由10mM母液5倍梯度稀释，同样加10ul到化合物细胞孔(DMSO终浓度为0.2％)。细胞放入37℃，5％CO2培养箱孵育3天。按MTS试剂盒(Promega,G5430)配制反应液后，每孔加入20μL，37℃，5％CO2培养箱孵育3-4小时。用酶标板读取490nm吸收光值，并以690nm吸收光值作为背景值，以OD490-OD690为最终原始数据。化合物的抑制率计算公式为：抑制率＝(ODDMSO-OD化合物)/(ODDMSO-O空白)×100％。化合物的增殖抑制IC50由Graph Pad Prism5.0拟合。实验重复三次，每次用三个平行实验计算计算平均数和标准差。细胞活性测试结果见下表2：A表示细胞活性IC50<150nM,B表示细胞活性150nM≤IC50≤20μM，C表示细胞活性IC50>20μM。
表2.化合物对Mino细胞增殖的抑制活性
| 化合物编号 | 抑制活性(IC<sub>50</sub>) | 化合物编号 | 抑制活性(IC<sub>50</sub>) |
| 17 | A | 41 | B |
| 18 | A | 42 | A |
| 19 | B | 43 | A |
| 20 | A | 44 | A |
| 23 | A | 45 | A |
| 24 | A | 70 | B |
| 25 | A | 71 | B |
| 26 | A | 90 | A |
| 28 | A | 93 | B |
| 29 | B | Lenalidomide | C |
| 30 | A | Pomalidomide | B |
| 39 | B | CC-122 | B |
| 40 | A | CC-220 | A |
基于以上部分实施例化合物对细胞生长抑制活性测试结果发现，本发明的一些实施例化合物对套细胞淋巴瘤Mino细胞生长具有很好的抑制活性，部分化合物的活性与阳性化合物相当或优于阳性化合物。另一方面，这些结构多样性化合物的开发，为获得更高活性的药物分子和药学性质更佳的分子，提供可选择的分子来源。因此，本发明的化合物拓宽了度胺类药物在血液瘤疾病治疗中的应用范围，可以用于拓展到血液肿瘤的其他适应症，比如作为套细胞淋巴瘤疾病的活性分子，作为制备预防或治疗该类疾病的药物或诊断试剂的用途。
因此本发明的化合物可以作为强效新型的CRBN调节剂，用于预防和治疗与调节CRBN(CRL4CRBNE3泛素连接酶)活性相关的疾病，如多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤或非限制性的包括其他潜在的肿瘤疾病、疼痛、神经系统疾病和免疫系统疾病。
3.化合物对MV-4-11细胞增殖的作用
MV-4-11细胞用IMDM加10％胎牛血清培养并收集，按7天的作用时间稀释细胞浓度，在96孔细胞板中每孔加入180ul细胞悬液，使其细胞数为2000个。对照细胞孔加入20ul终浓度为0.2％的DMSO，化合物由10mM母液5倍梯度稀释，同样加20ul到化合物细胞孔(DMSO终浓度为0.2％)。细胞放入37℃，5％CO2培养箱孵育7天。按MTS试剂盒(Promega,G5430)配制反应液后，每孔加入20μL，37℃，5％CO2培养箱孵育3-4小时。用酶标板读取490nm吸收光值，并以690nm吸收光值作为背景值，以OD490-OD690为最终原始数据。化合物的抑制率计算公式为：抑制率＝(ODDMSO-OD化合物)/(ODDMSO-O空白)×100％。化合物的增殖抑制IC50由GraphPad Prism 5.0拟合。实验重复三次，每次用三个平行实验计算计算平均数和标准差。细胞活性测试结果见下表3：A表示细胞活性IC50<1μM,B表示细胞活性1μM≤IC50≤20μM，C表示细胞活性IC50>20μM。
表3.化合物对MV-4-11细胞增殖的抑制活性
| 化合物 | 抑制活性(IC<sub>50</sub>) | 化合物 | 抑制活性(IC<sub>50</sub>) |
| 18 | A | 75 | A |
| 20 | B | 76 | A |
| 26 | A | 77 | A |
| 28 | A | 81 | A |
| 55 | B | CC-122 | C |
| 70 | B | Lenalidomide | C |
| 71 | B | Pomalidomide | C |
| 74 | A | CC-220 | C |
基于以上部分实施例化合物急性髓性白血病细胞系(MV-4-11)的细胞生长抑制活性测试结果发现，本发明的一些实施例化合物对急性白血病细胞MV-4-11细胞具有非常好的抑制活性。多个化合物的IC50处于纳摩尔级别，表中测试的化合物最好的活性IC50可以达到<10nM；然而阳性化合物无论是已经上市的药物来那度胺(Lenalidomide)或泊马度胺(Pomalidomide)，还是目前在临床的化合物CC-122或者CC-220在急性白血病细胞MV-4-11细胞上的细胞抑制活性(IC50)都是大于20μM。从上述表中测试结果发现，本发明的部分化合物对急性白血病细胞MV-4-11细胞增殖的抑制抑制活性强于相关阳性化合物的，最好的化合物活性是阳性化合物的2000倍以上。
因此，本发明的化合物拓宽了度胺类药物在血液瘤疾病治疗中的应用范围，可以用于拓展到血液肿瘤的其他适应症，比如作为急性白血病的抑制剂，作为制备治疗该类疾病的药物。因此本发明的化合物可以作为强效新型的CRBN调节剂，用于预防和治疗与调节CRBN(CRL4CRBNE3泛素连接酶)活性相关的疾病，如多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、急性白雪病或非限制性的包括其他潜在的肿瘤疾病、疼痛、神经系统疾病和免疫系统疾病。
4.化合物在其他细胞系的活性测试
本实验中使用的人类三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468及MDA-MB-231都购买于上海细胞库，其中使用加有10％胎牛血清(FBS)及1％双抗的L-15培养基，在37℃，不含CO2的培养箱中培养MDA-MB-468及MDA-MB-231细胞。结直肠癌细胞HCT-116使用加1％双抗、10％胎牛血清(FBS)的McCOY's 5A培养液；前列腺癌细胞DU145使用加1％双抗、10％胎牛血清(FBS)的MEM培养液；前列腺癌细胞PC-3使用加1％双抗、10％胎牛血清(FBS)的F-12K培养液；在37℃，5％CO2的环境中生长。
在细胞活性测试实验中，根据细胞生长情况将合适浓度的90μL细胞悬液加入到96孔细胞培养板中，将每种需要测试的化合物用对应的培养基进行梯度稀释，取10μL稀释的化合物加入到90μL的细胞中，然后在37℃培养4天，细胞增殖通过WST-8进行分析，WST-8可以被细胞中的乳酸脱氢酶还原为黄色的甲瓒产物，取10μL的WST-8试剂(DOJINDO)加入到细胞中，在37℃下反应1小时以上，用DMSO处理的细胞作为阳性对照。用酶标板读取490nm吸收光值，并以690nm吸收光值作为背景值，以OD490-OD690为最终原始数据，并用GraphPadPrism6软件处理数据。。化合物的抑制率计算公式为：抑制率＝(ODDMSO-OD化合物)/(ODDMSO-O空白)×100％。化合物的增殖抑制IC50由Graph Pad Prism 5.0拟合。实验重复三次，每次用三个平行实验计算计算平均数和标准差。细胞活性测试结果见下表4：A表示细胞活性IC50<1μM,B表示细胞活性1μM≤IC50≤20μM，C表示细胞活性IC50>20μM，NT表述未测试。
表4.化合物对其他肿瘤细胞增殖的抑制活性
| 化合物 | DU145 | PC-3 | MDA-MB-231 | HCT-116 |
| Lenalidomide | C | C | C | C |
| 45 | B | B | C | B |
| 30 | B | B | B | B |
从上表我们可以发现，本发明的化合物(45，30)分别在人前列腺癌细胞株(PC-3、DU145)、三阴性乳腺癌(MDA-MB-231)和人结肠癌细胞株(HCT116)中也有一定的活性。因此，本发明的化合物可以用于用于预防和治疗制备其他其他潜在的肿瘤疾病、疼痛、神经系统疾病和免疫系统疾病中药物的应用。
5.TNF-a活性抑制实验及方法：
该实验所有操作按目前该类实验常规的实验流程进行。采用健康志愿者的外周血，通过常规标准的流程收集并用1640培养基(+10％FBS)培养获得PBMC。PBMC复苏后离心，重悬于无血清培养基，计数后调整密度为6.25X10^5/ml；然后接种160ul到96孔板，1X10^5/well；加入20ul 10X化合物和DMSO，在培养箱中培养1小时；再加入20ul 10XLPS，终浓度为1ug/ml，在培养箱中培养72小时；1500rpm离心细胞板，并按ELISA操作吸取50ul上清；按试剂盒操作后，用酶标仪在450nm读数。化合物的浓度为10nM，加DMSO为对照组。该实验中所用的材料:96 well plate(Corning,#3599)，ELISA试剂盒(Thermo)，LPS(Sigma,USA)。测试结果见下表5。
表5.化合物对TNF-a活性抑制测试
| 化合物 | TNF-a抑制率(％) |
| Lenalidomide | <50 |
| CCC-135(化合物17) | >50 |
从上表测试结果发现，本发明的部分实施例化合物可用于抑制或调节TNF-α的活性。因此本发明提供如通式(I)所示的化合物可用于制备治疗或预防由TNF-α产生或由TNF-α活性调节异常相关的疾病、病症或病况的药物中的应用。
6.化合物调节IL-2的表达变化实验及方法：
该实验所有操作按目前该类实验常规的实验流程进行。采用健康志愿者的外周血，通过常规标准的流程收集并用1640培养基(+10％FBS)培养获得PBMC。PBMC复苏后离心，重悬于无血清培养基，计数后调整密度为6.25X10^5/ml；然后接种160ul到96孔板，各2孔，1X10^5/well；加入20ul 10X化合物和DMSO，在培养箱中培养1小时；再加入20ul 10X anti-human CD3，终浓度为10ug/ml，在培养箱中培养24小时；1500rpm离心细胞板，并按ELISA操作吸取50ul上清；按试剂盒操作后，用酶标仪在450nm读数。化合物的浓度为10nM，加DMSO为对照组。该实验中所用的材料:96 well plate(Corning,#3599)，ELISA试剂盒(Thermo)，LPS(Sigma,USA)。测试结果见下表5。
表6.化合物对IL-2的表达变化实验测试
从上表测试结果发现，本发明的部分实施例化合物可用于调节IL-2的表达。因此本发明提供如通式(I)所示的化合物可用于制备治疗或预防由IL-2产生或由IL-2活性调节异常相关的疾病、病症或病况的药物中的应用。
7.化合物调节IFNγ的表达变化实验及方法：
该实验所有操作按目前该类实验常规的实验流程进行。采用健康志愿者的外周血，通过常规标准的流程收集并用1640培养基(+10％FBS)培养获得PBMC。PBMC复苏后离心，重悬于无血清培养基，计数后调整密度为6.25X10^5/ml；然后接种160ul到96孔板，各2孔，1X10^5/well；加入20ul 10X化合物和DMSO，在培养箱中培养1小时；再加入20ul 10X anti-human CD3，终浓度为10ug/ml，在培养箱中培养24小时；1500rpm离心细胞板，并按ELISA操作吸取50ul上清；按试剂盒操作后，用酶标仪在450nm读数。化合物的浓度为10nM，加DMSO为对照组。该实验中所用的材料:96 well plate(Corning,#3599)，ELISA试剂盒(Thermo)，LPS(Sigma,USA)。从下表测试结果发现，本发明的实施例化合物可用于调节IFNγ的表达。
表7.化合物对IFNγ的表达变化实验测试
从上表测试结果发现，本发明的部分实施例化合物可用于调节IFNγ的表达。因此本发明提供如通式(I)所示的化合物可用于制备治疗或预防由IFNγ产生或由IFNγ活性调节异常相关的疾病、病症或病况的药物中的应用。
8.化合物与CRBN相互作用验证实验
研究证明来那度胺免疫调节剂在血液肿瘤细胞系中，通过与CRBN结合进而调控CRBN-泛素连接酶复合物的活性,选择性诱导转录因子IKZF1和IKZF3进行泛素化并降解，由此达到治疗恶性血液肿瘤的作用(Science,2014,343,301；Science,2014,343,305；Nature,2015,523,183.)。通过利用高效亲和磁性纳米粒子“FG beads”，在磁珠上预先连接沙利度胺的类似物，该连接沙利度胺的磁珠(Thalidomide FG beads)可以钓取CRBN蛋白(Leukemia，2012，26，2326；Science，2010，327，1345)。本实验中通过NP-400细胞裂解液裂解血液肿瘤Mino细胞，离心获得澄清细胞裂解液后均匀分成三个样品，在这个三个样品中分别加入Thalidomide FG beads，将Thalidomide FG beads与细胞裂解液在4℃孵育6小时，孵育完成后用磁力架分离磁珠，用NP-400裂解液重悬分离，重复3次，获得去除多余细胞裂解液的磁珠。三组磁珠样品分别用含有DMSO的NP-400裂解液(对照组)、含500mM实施例化合物17的NP-400裂解液、含1mM来那度胺的NP-400裂解液，于25℃孵育15分钟；洗脱两次后合并获得洗脱液，将该洗脱液用SDS Loading Buffer加热变性，通过Western blotting用CRBN的抗体(Proteintech)检测每个样品中CRBN的量。实验结果如下图1。
通过上述实验结果可以发现，实施例化合物17能将CRBN从与沙利度胺结合的磁珠上洗脱下来，分别与DMSO组和阳性化合物来那度胺组对照，其作用原理与来那度胺类似，而只用DMSO不能竞争CRBN与沙利度胺的结合。因此，实施例化合与CRBN具有很好的作用能力。因此，本发明中的实施例化合物能够作为CRL4CRBNE3泛素连接酶调节剂，通过调控CRBN-泛素连接酶复合物的活性,选择性诱导底物蛋白进行泛素化并降解，可用于制备预防或治疗与CRL4CRBN E3泛素连接酶相关的疾病的药物或诊断试剂。
综上所述，本发明提供了一类结构新颖的取代异吲哚啉类化合物，其中部分代表性化合物对测试的血液瘤细胞表现出非常强的增殖抑制活性。此外，本发明提供的部分代表性化合物在其他肿瘤细胞系中也有一定的活性。因此，本发明中结构新颖的化合物可以用于制备预防或治CRL4CRBNE3泛素连接酶相关疾病的药物或诊断试剂，可以实现进一步提高肿瘤的治疗效果治疗和扩展度胺类药物的新适应症的临床上的需求；有望克服现有度胺类药物的应用局限。此项特征不仅可以有效弥补现有度胺药物的不足，更能将其适应症拓展到新的领域，因此具有非常重要研究价值和应用前景。
Claims (15)
1.一类如下通式(I)所示的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或C1-C6直链或支链烃基；
R2、R4各种独立地选自氢、氘；
R3选自为氢、氘或卤素；
n为1、2或3；
A1选自C、N、O、S或者NR5，其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
A3或A4各自独立地选自C、N、O或S；
A1、A3或A4选自C时，A1、A3或A4各自独立地可以被甲基或乙基取代；
A2或A5各自独立地选自C或N；
A7选自C、N、O或S；
A6为C或N，当A6为N时，
与B的连接方式为
n1为0、1、2或3；
n2为0、1、2或3；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–,前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、烷氧基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0、1、2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基、取代或未取代的C3-6环烷基；
当X1为-O-时，并且
选自
时，B不为
2.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或C1-C6直链或支链烃基；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
R3选自为氢、氘或卤素；
n为1、2或3；
当A6为N时，
与B的连接方式为
或
选自含有选自N、O或S的两个杂原子的五元杂芳环，
优选选自以下基团：
其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–，前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0、1、2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基、取代或未取代的C3-6环烷基；
当X1为-O-时，并且
选自
时，B不为
3.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中，R3为卤素；
X1为-CH2、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或甲基；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
n为1、2或3；
当A6为N时，
与B的连接方式为
或
选自含有选自N、O或S的两个杂原子的五元杂芳环，
优选选自以下基团：
其中R5选自C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基或C3-C6环烷基；
B为(6-10元芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-10元杂芳基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-14元杂环基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、(5-16元环烷基)–(CH2)b1–(CHR6)b2–、，前述芳基、杂芳基、杂环基或环烷基被选自以下一个或多个基团所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基羰基、C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、卤素取代的C1-C6烷氧基、羟基取代的C1-C6烷氧基、氰基取代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基氧基、C3-C8杂环基、C3-C8杂环基氧基、C3-C8杂环基亚甲基、卤素取代或未取代的苯基、卤素取代或未取代的苄基、卤素取代或未取代的苯氧基、C5-C6杂芳基、-NHC(O)Ra1、-NHC(O)ORa2、-NRa3Ra4，其中Ra1、Ra2、Ra3和Ra4各自独立地为氢原子、由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C1-6烷基、或由卤素、羟基、氰基取代或未取代的C3-6环烷基；
b1为0、1、2或3；
b2为0或1；
R6选自氘、C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基烷基、-CH2NHC(O)Ra5、-CH2NRa6Ra7、其中Ra5、Ra6、和Ra7各自独立地为氢原子、由卤素、羟基取代或未取代的C1-3烷基、或由卤素、羟基、取代或未取代的C3-6环烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物：
其中X1为-CH2-或-NH-；
X2为-CH2-或-CO-；
R1为氢、氘、氟或甲基；
R3选自为氢、氘或氟；
R2、R4、n、
和B同权利要求1。
5.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)所示的化合物为通式(I-1)至(I-12)表示的化合物：
其中X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢、氘；
R3选自为氢、氘或氟；
B同权利要求1，当X1为-O-时，B不为
6.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)所示的化合物为通式(I-13)至(I-18)表示的化合物：
其中，X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢或氘；
B同权利要求1。
7.根据权利要求1所述的化合物以及它们互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)表示的化合物为通式(I-19)至(I-24)表示的化合物：
其中，X1为-CH2-、-NH-或-O-；
X2为-CH2-或-CO-；
R2、R4各自独立地选自氢或氘；
R3选自为氢、氘或氟；
n为1、2或3；
B同权利要求1。
8.根据权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物，其中通式(I)所示的化合物为下列化合物之一：
9.制备权利要求1-8所述通式(I)所示的化合物的方法，所述方法选自如下方法之一：
合成方法一：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与权利要求1中定义相同；
步骤1-1:化合物1A与1B在三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯条件下反应得到化合物1C；
步骤1-2:化合物1C叔丁醇钾存在条件下，反应得到化合物1D；
合成方法二：
其中，R1、R2、R3、R4、A1、A3、A4和B的定义与权利要求1中定义相同；
步骤2-1：化合物2A在二氧化锰存在条件下，反应得到化合物2B；
步骤2-2：化合物2B和化合物2C在叔丁醇钾在四氢呋喃中反应得到化合物2D；
步骤2-3：化合物2D和化合物2E在钯催化剂、膦配体、有机碱条件下反应，获得化合物2F；
步骤2-4：化合物2F在钯碳和常压氢气条件下，反应获得化合物2G；
步骤2-5：化合物1C叔丁醇钾存在条件下，反应得到化合物2H。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物在用于制备预防或治疗与CRL4CRBNE3泛素连接酶相关的疾病的药物中的用途；优选地，所述与CRL4CRBNE3泛素连接酶相关的疾病为癌症、疼痛、中枢神经系统疾病及免疫系统疾病。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药或其水合物在制备治疗或预防由TNF-α产生或由TNF-α活性调节、由IL-2产生或由IL-2活性调节、由IFNγ产生或由IFNγ活性调节异常相关的疾病、病症或病况的药物中的应用。
12.一种药物组合物，所述的药物组合物包含治疗有效剂量的权利要求1所述的化合物、其互变异构体、对映体、非对映体、消旋体、代谢产物、代谢前体、同位素化合物、可药用的盐、酯、前药、其水合物、结晶水合物、溶剂合物和其它药学上可接受的载体。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其进一步包含另一种或多种具有医药学治疗活性的成分，在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中产生协同作用；或者减轻或消除另外一种或多种具有医药学治疗活性成分在预防或治疗特定疾病或功能紊乱过程中所产生的毒副作用。
14.根据权利要求12所述的药物组合物，其进一步包含选自地塞米松、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、PD-1抑制剂、PDL-1抑制剂、培美曲塞、托泊替康、阿霉素、硼替佐米、吉西他滨、达卡巴嗪、克拉霉素、长春新碱、阿糖胞苷、泼尼松、多西他赛、氯法拉滨注射液、HDAC抑制剂、雄激素受体抑制剂、雄激素生物合成抑制剂、BTK抑制剂、红血球生长激素、米诺四环素、Elotuzumab、Palbociclib、Nivolumab、Pembrolizumab、Panobinostat、Ublituximab、Romidepsin、Eltrombopag、CAR-T和美法仑中的一种或多种。
15.根据权利要求11所述的应用，其中，所述的疾病、病症或病况选自：骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒单核细胞白血病、骨髓纤维化、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、睫状体和慢性黑色素瘤、虹膜黑色素瘤、复发性两眼间黑色素瘤、T细胞淋巴瘤、红系淋巴瘤、成单核细胞和单核细胞白血病、髓性白血病、急性髓性白血病、中枢神经系统淋巴瘤、脑肿瘤、脑膜瘤、脊髓肿瘤、甲状腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、皮肤癌、肾细胞癌、星状细胞瘤、淀粉样变性、I型复杂性局部疼痛综合征、恶性黑色素瘤、神经根病、骨髓纤维化、成胶质细胞瘤、胶质肉瘤、恶性胶质瘤、难治性浆细胞瘤、眼外延伸黑色素瘤、实体瘤、乳头状和滤泡状甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌或原发性巨球蛋白血症。
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