CN113201469B - 具有灭活菌mn002的微生物制剂及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有灭活菌MN002的微生物制剂及制备方法和应用,所述微生物制剂包括灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)MN002;所述嗜热链球菌MN002于2010年05月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.3817。本发明灭活后嗜热链球菌MN002的产品具有改善结肠炎及其特征肠道菌群、便秘及其特征肠道菌群的效果。
Description
技术领域
本发明涉及具有灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)MN002的微生物制剂及应用。
背景技术
嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)为兼性厌氧或微好氧的革兰氏阳性菌,以两个卵圆型为一对的球菌连成约0.7到0.9微米的长链,嗜热链球菌在选择性培养基中的菌落呈米色。嗜热链球菌属于益生菌,而归入益生菌的微生物都需要在到达肠道时仍然有活性,为此,这些细菌在通过胃肠道的时候都应该是活的。研究表明:嗜热链球菌能到达小肠的上半部,但并不像双歧杆菌那样可以去到大肠。现有技术中公开的嗜热链球菌的功能作用主要包括以下几种:
(1)活的嗜热链球菌可以产生乳糖酶,因此能帮助乳糖不耐受的人们消化乳糖;(2)改善肠道微环境,通过分泌细菌素抑制病原菌的生长;(3)用人类肠表皮细胞做体外实验表明:嗜热链球菌能明显下调白细胞介素IL-6的产量。但是嗜热链球菌对于白细胞介素IL-8、IL-10、T细胞生长因子TGF-β、肿瘤坏死因子TNF-α的产量却没有什么调节作用;(4)用鼠脾细胞做体外实验表明:嗜热链球菌能明显上调鼠脾细胞中的白细胞介素IL-12、干扰素INF-γ、肿瘤坏死因子TNF-α的产量;该益生菌同样能上调白细胞介素IL-4的产量;(5)发酵产物可以调节控制血压;(6)生成的多糖、细菌素、乳酸等具有抗肿瘤活性的作用;(7)产生超氧化物歧化酶(SOD)可以清除体内代谢过程中产生的过量超氧阴离子自由基,延缓衰老。
上述功能作用均是基于活菌而言,且对于采用活菌制成的益生菌产品而言,存在以下众多不足之处而影响产品的功效,包括:(1)在肠管未成熟、炎症或免疫功能不全时,活菌会突破肠壁侵入机体,进而引发炎症;(2)易受抗生素影响,也易造成耐药性基因转移;(3)长期使用活菌制剂使得噬菌体感染与爆发的风险增加;(4)不耐热、易污染、产品不稳定性等加工特性差;(5)低温、避光等产品保存条件较苛刻。
发明内容
因此,本发明提供一种具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂,并公开了灭活的嗜热链球菌MN002的新用途。
一种微生物制剂,包括灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)MN002;所述嗜热链球菌MN002于2010年05月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.3817,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所;该嗜热链球菌MN002又名嗜热链球菌MN-ZLW-002。
进一步的,改善结肠炎特征肠道菌群包括:提升与肠道相关的益生菌的丰度,包括norank_f_Muribaculaceae,Prevotellaceae_UCG-001,Alloprevotella,Ruminococcaceae_UCG-014,Lactobacillus,Muribaculum,Unclassified_f_Ruminococcaceae;降低与肠道相关的有害菌的丰度,包括Lachnospiraceae_NK4A136_group,Alistipes,Bacteroides,Odoribacter,Erysipelatoclostridium。
进一步的,改善便秘特征肠道菌群包括:提升益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的数量;降低有害菌肠杆菌的数量。
进一步的,还包括提升与便秘相关有益菌的丰度,包括Prevotella_9、Dorea、Anaerostipes、Ruminococcus_2、Blautia、Bifidobacterium、unclassified_f__Lachnospira、[Eubacterium]_hallii_group;还包括降低与便秘相关有害菌的丰度,包括Erysipelotrichaceae_UCG-003、Alistipes、[Ruminococcus]_torques_group、[Ruminococcus]_gnavus_group。
进一步的,嗜热链球菌MN002在制备改善人炎症状态的产品。进一步的,改善人炎症状态包括降低促炎因子分泌和提升抗炎因子分泌,降低促炎因子分泌包括降低TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达量,提升抗炎因子分泌包括上调IL-4和IL-10的表达量。
所述微生物制剂是以灭活后的嗜热链球菌MN002的处理物为活性成分的微生物制剂,所述处理物为嗜热链球菌MN002的培养物、浓缩物、干燥物、液状物、稀释物和破碎物中的至少一种。
还包括至少一种适合于微生物制剂的助剂;所述微生物制剂的剂型为粉末、丸剂、胶囊、颗粒剂、片剂、液体制剂或者凝胶剂。上述的助剂为保护剂或赋形剂。
所述微生物制剂中灭活的嗜热链球菌MN002的数量≥300亿个/g,优选为300-2000亿个/g。
一种含微生物制剂的产品,包括所述的微生物制剂。所述产品为药物、食品、保健品等。
一种微生物制剂的制备方法,包括:
(1)嗜热链球菌MN 002的菌种用培养基进行活化培养获得培养物;
(2)以所述培养物,培养物经过浓缩后获得的浓缩物,或离心收集湿菌体后加入助剂处理获得的干燥物、液化物、稀释物或破碎物作为活性成分,制备得到具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂;所述微生物制剂中灭活的嗜热链球菌MN002的数量≥300亿个/g。
所述步骤(1)中活化培养至对数期,使活菌数达到109cfu/mL以上,活化培养的培养基采用MRS液体培养基;所述助剂为保护剂或赋形剂。
在步骤(2)中,将培养物进行离心,收集湿菌体后加入保护剂,干燥,制备得到具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂。
所述保护剂的选自脱脂奶粉、乳糖、海藻糖、菊粉、麦芽糊精和谷氨酸钠等,所述湿菌体按质量比9:1-2:1加入保护剂,即湿菌体与保护剂的质量比为(9-2):1,所述干燥的条件为70-80℃真空干燥。
灭活的嗜热链球菌MN002在制备以下任意产品中的用途:
A、在制备改善结肠炎产品中的用途;
B、在制备改善便秘的产品中的用途。
所述产品为微生物制剂、药物、食品、保健品等。
本发明技术方案,具有如下优点:
1.本发明提供了一种灭活的嗜热链球菌MN002,该嗜热链球菌MN002灭活后制备成微生物制剂,该微生物制剂不仅仅具有以下独特的优势:a、优良的耐热和pH稳定性,易加工,不受食品形式限制;b、含菌量稳定,品质易控制,且不污染生产线;c、不用冷藏,不受生产、运输等外界条件影响;d、不受抗生素影响,且无耐药基因转移风险;
并且,具有灭活后嗜热链球菌MN002的微生物制剂还能达到有效改善结肠炎、结肠炎相关特征肠道菌群、便秘以及便秘相关特征肠道菌群的效果。
2.本发明提供了含灭活后嗜热链球菌MN002的产品在改善结肠炎及其特征肠道菌群中的应用,通过实验证明:该产品不仅可有效保护结肠组织,及改善体内炎症状态,降低促炎因子分泌,提升抗炎因子分泌;而且能靶向性改善结肠炎特征肠道菌群,提升7个与结肠炎相关有益菌丰度,降低4个与结肠炎相关有害菌丰度,恢复肠道菌群的健康化。
3.本发明提供了含灭活后嗜热链球菌MN002的产品在改善便秘及其特征肠道菌群中的应用,通过实验证明:该产品不仅可显著提高便秘人群的排便次数及改善排便性状;而且还能靶向性改善便秘特征肠道菌群,提升8个与便秘相关有益菌丰度,降低4个与便秘相关有害菌丰度,显著提升肠道菌群代谢产物短链脂肪酸的含量,达到缓解便秘的效果。
4.本发明的产品具有食用方便、治疗简单、缓解率高、无毒副作用等特点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实验例1中小鼠结肠组织HE切片图,图中的比例尺度为100μm。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明,并不局限于所述最佳实施方式,不对本发明的内容和保护范围构成限制,任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品,均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者,按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
一种微生物制剂,包括灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)MN002。所述微生物制剂是以灭活后的嗜热链球菌MN002的处理物为活性成分的微生物制剂,所述处理物为嗜热链球菌MN002的培养物、浓缩物、干燥物、液状物、稀释物和破碎物中的至少一种。所述的微生物制剂中还包括至少一种适合于微生物制剂的助剂,例如:保护剂、赋形剂等;所述微生物制剂的剂型为粉末、丸剂、胶囊、颗粒剂、片剂、液体制剂或者凝胶剂。
本发明中上述微生物制剂的制备方法,包括:
(1)嗜热链球菌MN 002的菌种用MRS液体培养基进行活化培养,静置培养至对数期,使活菌数达到109cfu/mL以上;
(2)以所述培养物,培养物经过浓缩后获得的浓缩物,或离心收集湿菌体后加入助剂处理获得的干燥物、液状物、稀释物或破碎物作为活性成分,制备得到具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂;所述微生物制剂中灭活的嗜热链球菌MN002的数量≥300亿个/g
本实施例中公开了一种灭活菌粉,包括灭活的嗜热链球菌MN 002,该灭活菌粉中灭活的嗜热链球菌MN 002的数量约为1000亿个/g,具体制备过程如下:
(1)将发酵菌种嗜热链球菌MN002用MRS液体培养基进行活化培养,37℃条件下静置培养16h,培养至对数期,使活菌数达到109cfu/mL以上;
(2)离心收集湿菌体,加入保护剂,保护剂为脱脂奶粉、乳糖、海藻糖、菊粉、麦芽糊精和谷氨酸钠,湿菌体按体积质量比3:1加入保护剂(湿菌体:保护剂=3:1),80℃真空干燥,得到MN 002灭活菌粉。
上述灭活菌粉的推荐服用方式为口服,服用量为每天不少于200亿个。本实施例中制备的灭活菌粉的服用量为1g/d,建议为每日2次,每次0.5g。
实施例2
一种灭活菌粉,具体制备过程如下:
(1)将发酵菌种嗜热链球菌MN002用MRS液体培养基进行活化培养,37℃条件下静置培养20h,培养至对数期,使活菌数达到109cfu/mL以上;
(2)离心收集湿菌体,加入保护剂,保护剂为脱脂奶粉、乳糖、海藻糖、菊粉、麦芽糊精和谷氨酸钠,湿菌体按质量比7:1加入保护剂(湿菌体:保护剂=7:1),70℃真空干燥,得到MN 002灭活菌粉。
实施例3
一种含微生物制剂的产品,其中添加有实施例1制备得到的灭活菌粉,该产品可以是药物,该产品也可以是保健品,还可以是可以用于改善肠道菌群结构的食品等。
实验例1-改善结肠炎及其特征肠道菌群试验
1、试验设计
8周龄SPF级BALB/c野生型雄性小鼠,自由饮水和采食,适应1周。适应期结束后将小鼠随机分为4组,每组10只,分别为正常组、模型组(即DSS阳性对照组)、低剂量002组和高剂量002组。低剂量002组按小鼠体重灌胃给予8.0×109个/kg的本实施例1的微生物制剂,灌胃体积为0.4ml;高剂量002组按小鼠体重灌胃给予4.0×1010个/kg的本实施例1的微生物制剂,灌胃体积为0.4ml;正常组和DSS阳性对照组灌胃给予相同体积的生理盐水,为期7天。从第8天开始,除正常组,DSS阳性对照组灌胃0.4mL生理盐水和同时自由饮用2.5%(w/v)DSS水溶液,自由饮用7天;而试验组(即低剂量002组和高剂量002组)灌胃0.4mL产品的同时自由饮用2.5%(w/v)DSS水溶液,自由饮用7天,实验周期共14天。
在实验期间,每日称量小鼠体重、进食量和饮水量;每日观察粪便样品便血和便质情况,并计算疾病活动指数(DAI);第14天收集小鼠新鲜粪便样品,保存于-80℃用于后续菌群测定;在实验第14天处死小鼠后,采集其结肠样品,并对结肠样品进行拍照、称重、长度测量实验。
2、实验方法
(1)对DSS致急性溃疡性结肠炎小鼠的表型影响
通过小鼠粪便便血、便质和体重损失三项指标的疾病活动指数(DAI),对小鼠肠炎严重程度进行评估。
(2)对DSS致急性溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响
对粪便样品进行16S rRNA高通量测序。
(3)组织切片
实验结束时,即在实验第14天处死小鼠,采用颈椎脱臼法处死,迅速取出结肠,纵向切开,PBS清洗,测量结肠长度。取实验小鼠远端结肠组织0.6cm,于PBS中清洗3次,将各组结肠样本依次编号,分别置于1.5ml的离心管中,倒入10%的福尔马林1ml常温放置24h,固定后,采用蒸馏水冲洗2-3次,以此除去渗入到结肠样本中多余的固定液,在50℃的恒温培养箱中,依次使用体积百分数为70%、80%的乙醇水溶液脱水90min,转至95%的乙醇水溶液中脱水1h,最后于无水乙醇中脱水2次,时间均为35min,将脱水后的组织样本移至无水乙醇与二甲苯(1:1)混合液中放置45min后,转至二甲苯中保持20min,直至结肠样本呈半透明状,透明后将切片移入二甲苯与石蜡混合液(1:1)中,60℃放置30min,再在熔化的石蜡中保持3h(每隔1h更换1次石蜡)后;采用镊子将其放置到盛有石蜡的模具,并进行包埋,在40℃的水浴锅中展开6μm厚的结肠组织石蜡包埋切片,贴至洁净的载玻片上,65℃烘箱中烤片1h,连续2次将切片移入二甲苯溶液,保持10min溶去切片上的石蜡。然后依次经由:二甲苯与无水乙醇(1:1)混合液-无水乙醇(2次)-95%乙醇-85%乙醇-70%乙醇各3min后,放入蒸馏水中浸5min,采用苏木素-伊红染液;苏木素8min-自来水冲刷-1%盐酸溶液30s-自来水20min-75%、85%乙醇中各5min-伊红2min-95%、无水乙醇2次各5min-无水乙醇与二甲苯混合液(1:1)、二甲苯3次各5min,然后在光镜下观察炎症浸润情况。
(4)炎症因子检测
采用ELISA法检测血清中TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-4,IL-10水平,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
3、实验结果
(1)各组结肠炎小鼠DAI评分。
试验第14天时对各组小鼠进行DAI定量评估,各组结肠炎小鼠DAI评分(n=9)如表1所示。
表1
DAI评分结果显示,模型组的评分最高,显著高于正常组和各干预组,MN 002灭活菌粉干预后,DAI评分与模型组相比显著降低(p<0.05)。
(2)对结肠炎特征肠道菌群的影响
采用第14天收集的小鼠新鲜粪便样品进行检测,检测MN 002灭活菌粉干预对小鼠粪便肠道菌群门水平的影响,检测结果如表2所示;同时检测了各组小鼠粪便肠道菌群各有益菌属的相对丰度,如表3所示,各组小鼠粪便肠道菌群各有害菌属的相对丰度,如表4所示。
表2
通过表2可知:与正常组相比,模型组的厚壁菌门降低,拟杆菌门增加,厚壁菌门与拟杆菌门的比降低,变形菌门增加;与模型组相比,MN 002菌粉干预后肠道菌群门水平趋于向正常组转变,拟杆菌门降低,厚壁菌门与拟杆菌门的比升高,变形菌门降低,
表3
通过对相对丰度大于1%的菌属进行分析,各组各个菌属的相对丰度变化情况如表3所示,与结肠炎相关益生菌有8种,与正常组相比,模型组有7种含量降低,与模型组相比,002低剂量组、002高剂量组分别有7种含量增加。
表4
通过表4可知:与结肠炎相关有害菌有5种,与正常组相比,模型组有5种含量增加,而002低剂量组和002高剂量组分别有5种含量降低。
上述表3和表4中的菌属在以下文件中有相应记载:
[1]Nezar Noor Al-Hebshi,Akram Thabet Nasher,Mohamed Yousef Maryoud,etal.Inflammatory Bacteriome Featuring Fusobacterium Nucleatum and PseudomonasAeruginosa Identified in Association With Oral Squamous Cell Carcinoma[J].SciRep.2017,7(1):1834.
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[3]Yvonne Konkol,Anni ina Keskitalo,Heikki Vuorikoski,et al.ChronicNonbacterial Prostate Inflammation in a Rat Model Is Associated With Changesof Gut Microbiota That Can Be Modified With a Galactoglucomannan-RichHemicellulose Extract in the Diet[J].BJU Int.2019,123(5):899-908.
[4]Chien-Li Chen,Pei-Yu Hsu,Tzu-Ming Pan.Therapeutic Effects ofLactobacillus Paracasei Subsp.Paracasei NTU 101Powder on Dextran SulfateSodium-Induced Colitis in Mice[J].J Food Drug Anal.2019,27(1):83-92。
(3)结肠组织病理切片分析
所述小鼠结肠组织HE切片如图1所示。通过图1可知:
正常组:小鼠的结肠黏膜结构保持完整,隐窝正常,腺体排列整齐,未见黏膜溃烂,无炎性细胞的浸润。
模型组:黏膜组织结构损伤明显,光镜下可见黏膜严重缺损、出血,腺体、隐窝破坏,炎症细胞浸润严重,深度达整个黏膜层,部分小鼠累及黏膜下层,见图1中模型组箭头指向位置,表明小鼠UC模型造模成功。
低剂量002组:组织黏膜层损伤,局部肠腺结构消失,被增生的结缔组织取代,伴有少量炎性细胞浸润,见图1中低剂量002组中箭头指向位置。
高剂量002组:组织结构完整,上皮细胞形态正常,未见脱落,肠腺数量丰富,排列紧密,形态正常,肠腔内可见少量脱落的上皮样细胞。
综上,低剂量002组和高剂量002组均可有效保护结肠组织结构完整性,减少炎症细胞浸入。
(4)炎症因子检测
对处死时获得的小鼠血液进行检测,检测小鼠血清中炎症因子的表达情况,检测结果如表5所示。
表5
通过表5中炎症因子水平可知:与对照相比,模型组中促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达量显著升高,抗炎因子IL-4和IL-10的表达量显著下降。与模型组相比,低剂量002和高剂量002均显著下调了TNF-α、IFN-γ、IL-6的表达量,上调了IL-4和IL-10的表达量。
通过上述检测结果可知:本发明利用嗜热链球菌MN 002的灭活菌粉,能靶向性改善结肠炎特征肠道菌群,提升7个与结肠炎相关有益菌丰度,降低4个与结肠炎相关有害菌丰度。嗜热链球菌MN 002的灭活菌粉可有效保护结肠组织,及改善体内炎症状态,降低促炎因子分泌,提升抗炎因子分泌。
实验例2-改善便秘及特征肠道菌群试验
参考《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》设计以下试验。
1、纳入者标准
(1)年龄18-65岁者。
(2)每周大便次数3-4次者。
(3)长期或间歇性便秘、大便不成形者优先。
(4)排便次数不规律者优先。
(5)肠胃敏感或有胃肠道疾病者优先。
2、试验设计
根据实验计划招募80人,受试者按照便秘症状(排便次数、粪便性状、症状持续时间等)招募,尽可能考虑到影响结果的主要因素如年龄、性别、日常饮食、便秘原因等,每个年龄段人数尽量保持均衡,以保证组内可比性。受试者每日服用实施例1中的灭活菌粉2次,每次0.5g,口服,服用量为1g/d。
3、实验方法:
(1)缓解便秘功效性观察
受试者每日记录服用受试样品的情况。
1.1每日排便次数:受试者记录每日排便次数的变化。
1.2排便状况:根据排便困难程度(腹痛或肛门烧灼感、下坠感、不适感,有否便频但排便困难而量少等症状)分为I~IV级,统计积分值。
I级(0分):排便正常。
II级(1分):仅有下坠感、不适感。
III级(2分):下坠感、不适感明显,或有便频但排便困难而量少,较少出现腹痛或肛门烧灼感。
IV级(3分):经常出现腹痛或肛门烧灼感,影响排便。
1.3粪便性状
根据布里斯托(Bristol)粪便性状分类法将粪便性状分为I~III级。
I级(0分):像香肠或蛇,平滑而且软;像香肠,但在它的表面有裂痕;软的团块,有明显的边缘(容易排出)。
II级(1分):香肠形状,但有团块;松散的块状,边缘粗糙,像泥浆状的粪便。
III级(2分):分离的硬团,像果核(不易排出)。
1.4粪便中短链脂肪酸含量
色谱条件:检测器为FID氢火焰离子检测器;FFAP毛细管色谱柱,60-80目(酸洗、硅烷化)不锈钢柱(25m×0.320mm);升温程序:80℃保持1min,以10℃/min升至140℃,保持5min,以25℃/min升至240℃,保持4min;载气(N2)压力260kPa;氮气流速为40mL/min,氢气流速为30mL/min,空气流速为400mL/min;进样量1μL;检测温度280℃。N2000色谱工作站收集信号并检测。
1.5调节便秘特征肠道菌群功能
按照《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》检测肠道菌群,对粪便内双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌和产气荚膜梭菌进行计数。
通过16s rDNA测序确定(Illumina Miseq平台高通量基因组测序)和重点分析对便秘肠道菌群的特征性变化。
4、实验结果
(1)排便状况变化
排便次数、排便状况积分、粪便性状积分是能反应便秘状况的有效指标。试食后与试食前比较,排便次数极显著增加(P<0.01),最后一次排便状况积分极显著降低(P<0.01),最后一次粪便性状积分极显著降低(P<0.01)。检测结果见表6。
表6
上述结果表明试食含嗜热链球菌MN 002的灭活菌粉有利于提高排便次数,减少排便不适,形成软便改善粪便的质量。
(2)对便秘特征肠道菌群的影响
检测灭活菌粉对便秘人群粪便中五种细菌的影响,结果如表7所示。
表7
由表7可以看出,便秘人群试食MN 002灭活菌粉后,粪便中益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的数量与试食前相比显著增加(P<0.05),有害菌肠杆菌的数量显著减少(P<0.05),其他细菌的数量与试食前相比没有显著差异(P>0.05)。
检测MN 002灭活菌粉对便秘人群优势菌门的影响,结果如表8所示。
表8
便秘人群与健康人群相比,拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度减少、厚壁菌门(Firmicutes)丰度增加、变形菌门丰度减少(Proteobacteria)。由表8所示,食用MN 002灭活菌粉后,三种优势菌门均趋于向健康人群转变,减少了便秘人群的厚壁菌门丰度,增加了拟杆菌门和变形菌门的丰度。
选取了与便秘相关的13个菌属,包括8个有益菌属和4个有害菌属。检测MN 002灭活菌粉对便秘特征菌群的影响,结果如表9所示。
表9
通过表9的检测结果可知:MN 002灭活菌粉提升了8个与便秘相关有益菌的丰度,降低了4个与便秘相关有害菌的丰度。结果表明MN 002灭活菌粉具有改善便秘特征性肠道菌群的效果。
上述表9中的菌种在以下文件中有相应记载
[1]Huang Lin Sheng,et al(2018).Analysis of fecal microbiota inpatients with functional constipation undergoing treatment withsynbiotics.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious DiseasesOfficial Publication of the European Society of Clinical Microbiology 37.3.
[2]ParthasarathyG,Chen J,Chen X et al(2016)Relationship betweenmicrobiota of the colonic mucosa vs feces and symptoms,colonic transit,andmethane production in female patients with chronicconstipation.Gastroenterology 150(2):367–379.
[3]Khalif IL,Quigley EM,Konovitch EA,Maximova ID(2005)Alterations inthe colonic flora and intestinal permeability and evidence of immuneactivation in chronic constipation.Dig Liver Dis 37(11):838–849.
(3)对便秘人群短链脂肪酸的影响
短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)含量是益生菌缓解便秘效果的重要评价指标,SCFAs能通过降低肠道pH值抑制致病菌的生长,促进有益菌的增殖,从而改善肠道微环境,缓解结肠炎症,从而缓解便秘。SCFAs同时也是肠道微生态与慢性便秘关系的重要靶点。在近端结肠端,丁酸能加快结肠长传播频率,抑制短传播频率,乙酸、丙酸均抑制长短传播,而在远端结肠端,丁酸加快结肠推进速度,丙酸减慢结肠推进速度。
检测MN 002灭活菌粉干预前后,MN 002灭活菌粉对便秘人群短链脂肪酸的影响,检测结果如表10所示。
表10
通过表10可知:MN 002灭活菌粉干预前后,乙酸含量(μg/g)增加21.60%,丙酸(μg/g)增加31.88%,丁酸(μg/g)增加19.64%,总酸(乙酸、丙酸、丁酸含量的总和)增加23.37%。人群试食前后,乙酸、丙酸、丁酸、总酸含量均上升。
通过上述表5-表10的检测结果可知:本发明利用嗜热链球菌MN 002的灭活菌粉,能靶向性改善便秘特征肠道菌群,提升8个与便秘相关有益菌丰度,降低4个与便秘相关有害菌丰度,显著提升肠道菌群代谢产物短链脂肪酸的含量。同时,嗜热链球菌MN 002的灭活菌粉还能显著提高便秘人群的排便次数及改善排便性状。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (9)
1.灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) MN002在制备以下任意产品中的用途:
A、在制备改善结肠炎及其特征肠道菌群的产品中的用途;
B、在制备改善便秘及其特征肠道菌群的产品中的用途;
所述嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) MN002的保藏编号为CGMCCNo.3817。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述产品为微生物制剂、保健品、药物或食品。
3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述微生物制剂包括灭活的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)MN002。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述微生物制剂为以灭活后的嗜热链球菌MN002 的处理物为活性成分的微生物制剂,所述处理物为嗜热链球菌MN002 的培养物、浓缩物、干燥物、液状物、稀释物和破碎物中的至少一种。
5.根据权利要求3或 4 所述的用途,其特征在于,所述微生物制剂还包括至少一种适合于微生物制剂的助剂;所述微生物制剂的剂型为粉末、丸剂、胶囊、颗粒剂、片剂、液体制剂或者凝胶剂。
6.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述微生物制剂中灭活的嗜热链球菌MN002的数量≥300亿个/g。
7.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述微生物制剂的制备方法,包括:
(1)嗜热链球菌MN 002的菌种进行活化培养获得培养物;
(2)以所述培养物,培养物经过浓缩后获得的浓缩物,或离心收集湿菌体后加入助剂处理获得的干燥物、液化物、稀释物或破碎物作为活性成分,制备得到具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于,所述步骤(1)中活化培养至对数期,使活菌数达到109cfu/mL以上,活化培养的培养基采用MRS液体培养基;和/或在所述步骤(2)中,将培养物进行离心,收集湿菌体后加入保护剂,干燥,制备得到具有灭活的嗜热链球菌MN002的微生物制剂。
9.根据权利要求8所述的用途,其特征在于,所述保护剂选自脱脂奶粉、乳糖、海藻糖、菊粉、麦芽糊精和谷氨酸钠,所述湿菌体与保护剂的质量比为(9-2):1,所述干燥的条件为70-80℃真空干燥。
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