CN111280252A - 长双歧杆菌长亚种、含其的组合物及用途 - Google Patents

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Abstract

一种长双歧杆菌长亚种（Bifidobacterium longum subsp.longum）、含其的组合物及用途，本发明首次发现，长双歧杆菌长亚种具有预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病的作用。

Description

长双歧杆菌长亚种、含其的组合物及用途
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种长双歧杆菌长亚种(Bifidobacteriumlongum subsp.longum)、含其的组合物及用途。
背景技术
人体肠道由大量的微生物组成，这些微生物种类繁多，数量庞大，在人肠道中形成一个复杂的生态系统，其中的微生物的组成与人体健康息息相关。大量研究表明，肠道微生物与很多疾病有着密切的关联，比如糖尿病、肥胖、高血脂等代谢性疾病和结肠炎、类风湿性关节炎等炎症性疾病。健康人体的肠道中有绝大多数的微生物属于有益菌，是人体健康不可缺少的种类，其中双歧杆菌是人肠道中一类重要的菌，双歧杆菌从出生开始在婴儿肠道中定殖，随着年龄的增长，双歧杆菌的含量逐渐下降。双歧杆菌具有抗炎、抗肿瘤、抗衰老以及抑制有害菌等重要功效，同时双歧杆菌也可以通过产生短链脂肪酸(SCFA)和有机酸刺激肠道蠕动，防止便秘等疾病。
溃疡性肠炎(Ulcerative colitis，UC)是炎症性肠病(Inflammatory boweldisease，IBD)的一种，是一种发病机制不明的慢性肠道炎症性疾病。临床病理研究认为UC的发病主要与个体易感基因以及肠道微生物引发的肠粘膜免疫反应有关，其症状主要表现为持续腹痛、腹泻和黏液血便，且病情反复，发病可见任何年龄阶段。
目前，临床上针对UC的用药主要有水杨酸类、糖皮质激素、免疫制剂。水杨酸类药物可以比较好地抑制前列腺素合成，清除氧自由基从而达到缓解炎症反应的目的，临床上治疗UC常见的水杨酸类西药主要是柳氮磺胺吡啶(SASP)，主要针对轻度、中度以及慢性UC患者；糖皮质激素是重症或者爆发性UC患者的首选用药，比如倍他米松；免疫抑制剂如环孢素可以通过抑制T细胞IL-2的产生，影响免疫反应的进展，从而对UC进行抑制。
现有针对UC的三类药物均可以一定程度上对UC进行缓解，但是也都存在一定的副作用，水杨酸类的副作用是引发消化道反应、头痛、网织红细胞增多、精子减少及过敏反应引起的皮疹、肝毒性、白细胞减少、贫血等。糖皮质激素会导致机体代谢紊乱，水潴留等副作用，仅可作为应急用药，不能长期服用。免疫抑制剂治疗对药物依赖性较大，治疗周期长，容易引起肾毒性及二次感染，只能作为一种辅助治疗的手段。
发明内容
本发明提供一种长双歧杆菌长亚种，具有预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病的作用。本发明进一步提供含长双歧杆菌长亚种的组合物及其用途。
根据第一方面，一种实施例中提供一种长双歧杆菌长亚种(Bifidobacteriumlongum subsp.longum)。
在优选实施例中，上述长双歧杆菌长亚种的16s rDNA的序列如SEQ ID NO.:1所示或与SEQ ID NO.:1所示的序列有99％以上的相似度。
在优选实施例中，上述长双歧杆菌长亚种是Bifidobacterium longumsubsp.Longum TM12-24，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC 60408。
在另有一优选例中，上述长双歧杆菌长亚种来自肠道、动物粪便、发酵池、和/或厌氧反应器。
在优选实施例中，上述长双歧杆菌长亚种来源于人或非人哺乳动物。
在优选实施例中，上述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。
根据第二方面，一种实施例中提供一种组合物，该组合物包括：(a)安全有效量的第一方面的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物；以及(b)食品上可接受的载体或药学上可接受的载体。
在优选实施例中，上述组合物用于预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病；其中炎症优选为炎性肠病(IBD)，更优选为溃疡性肠炎(UC)、胃炎、普通肠炎等，特别是溃疡性肠炎(UC)。
在优选实施例中，上述组合物还包括生长因子(较佳地，牛奶生长因子)。
在优选实施例中，上述组合物选自下组：食品组合物、保健组合物、药物组合物、饮料组合物、饲料组合物、或它们的组合。
在优选实施例中，上述组合物为口服制剂。
在优选实施例中，上述组合物为液态制剂、固态制剂、半固态制剂。
在优选实施例中，上述组合物的剂型选自下组：粉末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、舌下含片、或其组合。
在优选实施例中，上述食品组合物包括乳液制品、溶液制品、粉末制品、或悬浮液制品。
在优选实施例中，上述食品组合物包括乳品、乳粉、或乳液。
在优选实施例中，上述液态制剂选自下组：溶液制品或悬浮液制品。
在优选实施例中，上述组合物是益生菌剂、微生态制剂或药物制剂。
在优选实施例中，上述益生菌剂是益生菌奶制品或益生菌片。
在优选实施例中，按组合物的总体积或总重量计，上述组合物含有1×10-1至1×1020cfu/mL或1×10-1至1×1020cfu/g的长双歧杆菌长亚种。
在优选实施例中，按组合物的总体积或总重量计，上述组合物含有1×104至1×1015cfu/mL或1×104至1×1015cfu/g的长双歧杆菌长亚种。
在优选实施例中，上述组合物中，含有0.0001-99wt％，较佳地0.1-90wt％的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物，以上述组合物的总重量计。
在优选实施例中，上述组合物为单元剂型(一片、一粒胶囊或一小瓶)，每个单元剂型中上述组合物的质量为0.05-5g，较佳地为0.1-1g。
在优选实施例中，上述组合物还含有其它益生菌和/或益生元。
在优选实施例中，上述益生菌选自下组：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合。
在优选实施例中，上述益生元选自下组：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、寡聚糖、或其组合。
在优选实施例中，上述组合物还含有有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)。
在优选实施例中，上述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)选自下组：半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E、或其组合，特别是维生素C。
在优选实施例中，上述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)的重量比为0.1-2％，较佳地，0.5-1.5％，更佳地，0.5-1.0％，以上述组合物的总重计。
在优选实施例中，以组合物1g计，上述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)的含量为1mg-20mg，较佳地，5mg-15mg，更佳地，5mg-10mg。
根据第三方面，一种实施例中提供一种第一方面的长双歧杆菌长亚种、或第二方面的组合物在制备用于预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病的组合物中的用途，其中炎症优选为炎性肠病(IBD)，更优选为溃疡性肠炎(UC)、胃炎、普通肠炎等，特别是溃疡性肠炎(UC)。
根据第四方面，一种实施例中提供一种第一方面的长双歧杆菌长亚种、或第二方面的组合物在制备用于选自下组的一种或多种用途的组合物中的用途：
(i)降低哺乳动物的血脂水平；
(ii)控制哺乳动物体重的降低；
(iii)降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)；
(iv)改善哺乳动物的肠道病变。
在优选实施例中，上述降低哺乳动物的血脂水平包括降低胆固醇水平。
在优选实施例中，上述控制哺乳动物体重的降低指与模型组哺乳动物相比，实验组哺乳动物体重的降低幅度为不超过10％，较佳地，不超过5％，更佳地，不超过2％。
在优选实施例中，上述改善哺乳动物的肠道病变包括减缓结肠长度的缩短、和/或减轻结肠炎症反应。
在优选实施例中，上述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在优选实施例中，上述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。
根据第五方面，一种实施例中提供一种制备第二方面的组合物的方法，包括：
将第一方面的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物与食品上可接受的载体或药学上可接受的载体混合，从而形成第二方面的组合物。
在优选实施例中，上述制备组合物的方法还包括与生长因子混合的步骤。
在优选实施例中，上述制备组合物的方法还包括与有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)混合的步骤。
在优选实施例中，上述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)选自下组：半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E、或其组合。
在优选实施例中，上述制备组合物的方法还包括与益生菌、和/或益生元混合的步骤。
在优选实施例中，上述益生菌选自下组：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合。
在优选实施例中，上述益生元选自下组：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、寡聚糖、或其组合。
在优选实施例中，上述生长因子为牛奶生长因子。
在优选实施例中，上述生长因子选自下组：维生素类物质、嘌呤类物质、嘧啶类物质、或其组合。
在优选实施例中，上述组合物为口服制剂。
根据第六方面，一种实施例中提供一种用于实现选自下组的一种或多种目的的方法，该方法包括：给受试对象施用第二方面的组合物：
(i)降低哺乳动物的血脂水平；
(ii)控制哺乳动物体重的降低；
(iii)降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)；
(iv)改善哺乳动物的肠道病变。
在优选实施例中，上述降低哺乳动物的血脂水平包括降低胆固醇水平。
在优选实施例中，上述控制哺乳动物体重的降低指与模型组哺乳动物相比，实验组哺乳动物体重的降低幅度为不超过10％，较佳地，不超过5％，更佳地，不超过2％。
在优选实施例中，上述改善哺乳动物的肠道病变包括减缓结肠长度的缩短、和/或减轻结肠炎症反应。
在优选实施例中，上述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在优选实施例中，上述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。
在优选实施例中，上述施用包括口服。
在优选实施例中，上述施用剂量为0.01-5g/50kg体重/天，较佳地，0.1-2g/50kg体重/天。
经过研究发现，本发明的长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longumsubsp.longum)，可以有效地降低胆固醇。通过本发明的长双歧杆菌长亚种的治疗，可以有效地控制DSS诱导的UC小鼠体重的下降，抑制小鼠疾病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠的变化，对溃疡性肠炎有明显的缓解作用，能够显著改善溃疡性结肠炎小鼠的表观状态，降低小鼠炎症性反应。因此，本发明的长双歧杆菌长亚种可以制成药物组合物、食品组合物、保健品、辅料添加剂或微生态制剂等产品，用于炎症或炎症相关疾病的预防和/或治疗之中。
保藏信息
菌株名称：Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24
保藏日期：2018年8月24日
保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)
保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼
保藏编号：GDMCC 60408
附图说明
图1显示了胆固醇标准曲线，采用邻苯二甲醛比色法(OPA法)进行胆固醇的检测，通过使用不同浓度(20ug/mL，40ug/mL，60ug/mL，80ug/mL)的胆固醇与OPA进行反应显色，得到标准曲线，线性回归的方程式为：y＝0.0085x+0.0072；相关系数R2为0.9992。
图2显示了对照组、模型组、VSL#3和TM12-24治疗组小鼠的体重的变化。
图3显示了对照组、模型组、VSL#3和TM12-24治疗组小鼠的DAI指数的变化。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他材料、方法所替代。
另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
本发明人经过广泛而深入的研究和实验，意外地发现，长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp.longum)具有预防和/或治疗炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)的作用，将含有本发明的长双歧杆菌长亚种的活性组合物饲喂食实验对象，发现该组合物能够控制体重降低，降低血脂，降低疾病活动指数(DAI)，改善肠道病变，可有效减轻炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)等病症。在此基础上，本发明人完成了本发明。
如本文所用，术语“含有”、“包含”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
如本文所用，术语“生长因子”包括牛奶生长因子，具体地，包括维生素类物质、嘌呤类物质、嘧啶类物质、或其组合的营养物质。其中，维生素类物质包括(但并不限于)：维生素C、维生素E、维生素A、维生素A前体、维生素B6、维生素D3、维生素K、叶酸、或其组合；嘌呤类物质包括(但并不限于)：嘌呤核苷，其中嘌呤核苷包括嘌呤核苷的5’-磷酸酯；嘌呤核苷的5’-磷酸酯选自下组：肌苷酸(肌苷-5’-磷酸酯；IMP)、鸟苷酸(鸟苷-5’-磷酸酯；GMP)、黄苷酸(黄嘌呤核苷-5’-磷酸酯；XMP)、腺苷酸(腺苷-5’-磷酸酯；AMP)、或其组合；嘧啶类物质包括所有含嘧啶结构的物质。
如本文所用，术语“控制哺乳动物体重的降低”、“减缓哺乳动物体重的降低”、“控制哺乳动物体重的下降”、“减缓哺乳动物体重的下降”可互换使用，是指哺乳动物在进行溃疡性肠炎模型构建过程中由于炎症的不断严重，实验动物的体重也随之下降，体重下降的百分比为下降体重占原始体重的百分比。体重下降的程度越高，疾病越严重，本发明的长双歧杆菌长亚种在对哺乳动物溃疡性肠炎治疗过程中可以控制实验动物体重的降低，减缓疾病的症状。
疾病活动指数(DAI)
如本文所用，术语“疾病活动指数”是指结合患者(或患病动物)的体重下降百分率、大便粘稠度和大便出血等3种情况进行综合评分。
长双歧杆菌长亚种及其应用
如本文所用，术语“长双歧杆菌长亚种”，“Bifidobacterium longumsubsp.longum”、“本发明的长双歧杆菌长亚种”可互换使用。在一个优选例中，上述菌株为Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24，保藏号为GDMCC 60408，分离自人(较佳地，健康男性)的粪便中。长双歧杆菌长亚种的生理特性如下：长双歧杆菌长亚种Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24采用PYG培养基进行分离，分离条件为37℃厌氧条件。TM12-24在PYG培养基培养2天的菌落为白色，凸起，菌落较粘稠，直径约2mm。菌体的显微形态为杆状分歧，革兰氏阳性、不产芽孢和鞭毛。过氧化氢酶和氧化酶的测试结果均为阴性，能发酵多种碳水化合物，包括葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、麦芽糖、柳醇、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖、甘露醇、松叁糖、棉籽糖、山梨醇，主要产生乙酸、甲酸、乳酸，可少量产生异丁酸、异戊酸、戊酸、3-甲基丁酸、苯甲酸、丁二酸、己二酸和柠檬酸。并且本发明的长双歧杆菌长亚种Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24对苯唑西林、卡那霉素和新霉素有抗性，对表3中的其他17种抗生素比较敏感。
本发明提供了长双歧杆菌长亚种在治疗和/或预防炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)的应用。受试者用DSS(葡聚糖硫酸钠)进行诱导造模，菌株Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24具有选自下组的一个或多个用途：(i)控制该受试者体重的降低；(ii)降低疾病活动指数(DAI)；(iii)改善肠道病变程度；(iv)降低血脂水平。根据本发明的一个优选例，采用C57bl/6小鼠作为试验小鼠，用DSS(葡聚糖硫酸钠)进行诱导造模，从而获得溃疡性肠炎(UC)模型小鼠，经Bifidobacterium longumsubsp.longum TM12-24治疗的UC模型小鼠，与未接受治疗的对照组(模型组)相比，其体重降低幅度减缓且血脂下降，并且各种与炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)的指标也得到改善，如改善肠道病变程度(包括减缓结肠长度缩短、减轻结肠炎症反应等)、降低疾病活动指数(DAI)等。因此，本发明的菌株能够用以预防和/或治疗炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)。
组合物及其应用
本发明还提供了一种组合物，较佳地，本发明的组合物包括食品组合物、保健组合物、药物组合物、饮料组合物、或饲料组合物，优选地，为药物组合物。本发明的组合物包括有效量的长双歧杆菌长亚种，在一个优选例中，本发明的组合物还包括生长因子(如牛奶生长因子)。在一个优选例中，本发明的组合物还包括选自下组的益生菌：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合；和/或选自下组的益生元：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、寡聚糖、或其组合。在一个优选例中，本发明的组合物还包括选自下组的有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)：半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E、或其组合。以组合物的总重计，有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)的重量比为0.1-2％，较佳地，0.5-1.5％，更佳地，0.5-1.0％。
在一优选例中，本发明的组合物为液态制剂、固态制剂、半固态制剂。
在一优选例中，本发明的液态制剂选自下组：溶液制品或悬浮液制品。
在一优选例中，本发明的组合物的剂型选自下组：粉末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、舌下含片、或其组合。
本发明的组合物可以以口服液、片剂、针剂、口崩片、冻干粉制剂或胶囊的任一种形式给药，优选肠溶剂型(如胶囊)，在本发明中，如无特别说明，本发明所用的赋形剂、药物允许的媒介和载体主要是根据适合菌或其代谢产物特性和所需的特定给药方式进行选择，有利于菌或其代谢产物顺利通过胃而被给药者吸收。这些物质可根据给药途径进行选择。
本发明的组合物可进一步包含那些通常用于药物制剂的赋形剂中任何附加的赋形剂，为的是例如稳定组合物自身，或使其容易地分散或赋予其适宜的味道。
在上述赋形剂当中，菊粉、果糖、淀粉、低聚木糖、二氧化硅、缓冲试剂以及风味剂是合适的实例。
本发明中药物制剂可进一步包含辅助的活性组份。
乳糖、麦芽糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油等都可用作本发明中药物组合物的载体、赋形剂或稀释剂等。
此外，本发明的药物组合物可进一步包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂和香料等。本发明的药物组合物可通过多种公知的方法以肠衣制剂生产，以便于药物组合物的活性成分即微生物能顺利通过胃而不被胃酸所破坏。
另外，本发明的微生物可以常规方法制备的胶囊形式使用。例如，标准赋形剂和本发明的冷干微生物混合制成小球药丸，然后将药丸装填入明胶胶囊中。此外，本发明的微生物和药物允许使用的赋形剂如液体胶、纤维素、硅酸盐或矿物油等混合制作悬浮液或分散液，这种悬浮液或分散液可装入软的明胶胶囊中。
本发明的药物组合物可制成肠衣片供口服使用。本申请中的术语-“肠衣”，包括所有常规药物允许使用的包衣，这些包衣不被胃酸降解，但在小肠中能充分分解并快速释放出本发明的微生物。本发明的肠衣能在合成胃酸如pH＝1的HCl溶液中在36-38℃维持2小时以上，并优选在合成肠液如pH＝7.0的缓冲液中在1.0小时内分解。
本发明的肠衣为以每片约16-30mg进行包衣，较佳地16-25mg，更佳地16-20mg进行包衣。本发明中肠衣厚度为5-100μm，理想的厚度为20-80μm。肠衣成分选自己公开知晓的常规聚合物。
本发明优选的肠衣由纤维素乙酸邻苯二甲酸酯聚合物或偏苯三酸酯聚合物以及异丁烯酸的共聚物(例如，含有40％以上异丁烯酸和含有甲基纤维素邻苯二甲酸羟丙酯或其酯类衍生物的异丁烯酸的共聚物)制备。
本发明中肠衣所使用的纤维素乙酸邻苯二甲酸酯的粘度为约45-90cp，乙酰含量17-26％，邻苯二甲酸含量30-40％。用于肠衣中的纤维素乙酸偏苯三酸酯粘度为约5-21cp，乙酞含量17-26％。纤维素乙酸偏苯三酸酯由Eastman科达公司生产，可用于本发明中的肠衣材料。
用于本发明肠衣中的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，分子量一般为20,000-130,000道尔顿，理想分子量为80,000-100,000道尔顿，羟丙基含量为5-10％，甲氧基含量为18-24％，邻苯二甲酰基含量为21-35％。
用于本发明肠衣中的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯为HP50，由日本Shin-EtsuChemidnl Co.Ltd.生产。HP50含有6-10％羟丙基，20-24％甲氧基，21-27％的丙基，其分子量为84,000道尔顿。另一种肠衣物质为HP55，HP55含有5-9％的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，18-22％甲氧基，27-35％的邻苯二甲酸，其分子量为78,000道尔顿。
本发明肠衣如下制备：使用常规方法将肠衣溶液喷雾到核心上。该肠包衣方法中所有溶剂为醇类(如乙醇)、酮类(如丙酮)、卤代烃化合物(如二氯甲烷)、或其组合物。将软化剂如二-正丁基邻苯二甲酸酯和三乙酸甘油酯加入到肠衣溶液中，其比例为1份包衣物对约0.05份或约0.3份软化剂。喷雾方法优选连续执行，所喷雾的料量可根据包衣所采用的条件进行控制。喷雾压力可随意调节，一般而言，能在平均1-1.5巴压力下获得理想的结果。
说明书中“药物有效量”、“安全有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。比如，在本发明中，可制备含有1×10-1至1×1020cfu/mL或cfu/g，优选1×10至1×1015cfu/ml或cfu/g(特别的，可含有1×104至1×1010cfu/ml或cfu/g；更特别地，可含有1×106至1×1010cfu/ml或cfu/g)的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物的制剂。
当用于制备药物组合物时，所用的长双歧杆菌长亚种或其代谢产物的有效剂量可随施用的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约1×10-1至1×1020cfu/mL或cfu/g，优选1×10至1×1015cfu/ml或cfu/g(较佳地，可含有1×104至1×1010cfu/ml或cfu/g；更佳地，可含有1×106至1×1010cfu/ml或cfu/g)的活性长双歧杆菌长亚种或发酵产生的活性成分。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
上述的长双歧杆菌长亚种或其代谢产物可通过口服等途径给予。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：培养基、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合长双歧杆菌长亚种或其代谢产物特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和/或固体填充或液体填充的胶囊。口服给药是优选的。
将本发明组合物施用给受试对象/受试者，每天给药1次或多次。给药剂量单位表示其形式上能分开且适用于人类或其他所有哺乳动物个体的剂量。每一单位含有药物允许的载体和有效治疗量的本发明微生物。给药量随病人的体重和炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)的严重程度、所包括的补充活性组份和所使用的微生物而变化。此外如可能，可分开给药，并且如需要可连续给药。因此，上述给药量不会对本发明造成限制。此外，本发明中的“组合物”不仅意味着药品而且表示可作为功能性食品和健康补充食品。在一个优选例中，上述组合物包括：饮料、食品、药品、动物饲料等。
在本发明的一个优选例中，还提供了一种食品组合物，它含有有效量的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物，以及余量的食品上可接受的载体，上述的食品组合物的剂型选自固体、乳品、溶液制品、粉末制品、或悬浮液制品。在一优选例中，上述食品组合物还可含有生长因子(如牛奶生长因子)。在一优选例中，上述组合物还包括选自下组的益生菌：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合；和/或选自下组的益生元：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、寡聚糖、或其组合。在一个优选例中，上述组合物还包括选自下组的有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)：半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E、或其组合。
在一优选例中，上述组合物的配方如下：
1×10至1×1015cfu/mL的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物；以及食品上或药学上可接受的载体，和/或赋形剂。
在另一优选例中，上述组合物的配方如下：
1×104至1×1010cfu/mL的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物；以及食品上或药学上可接受的载体，和/或赋形剂。
微生态制剂
微生态制剂是一种包含益生菌及代谢产物的生物制剂或者是可以增加益生菌的膳食补充剂，可以通过调节、维持肠道内微生态平衡，达到提高人体健康水平的目的。主要包括益生菌、益生元和合生元。
在本发明中，上述微生态制剂包括(a)安全有效量的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物；以及(b)食品上可接受的载体或药学上可接受的载体。在一优选例中，上述制剂还包括生长因子(如牛奶生长因子，较佳地，包括维生素类物质、嘌呤类物质、和/或嘧啶类物质)。在一个优选例中，上述制剂还包括选自下组的益生菌：乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、或其组合；和/或选自下组的益生元：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、寡聚糖、或其组合。在一个优选例中，上述组合物还包括选自下组的有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质(如保护剂)：半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸及其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C(抗坏血酸)、维生素E、或其组合。
长双歧杆菌长亚种的生产方法
通常，长双歧杆菌长亚种可以用常规方法制得。
在本发明中，提供了一种能够大规模生产长双歧杆菌长亚种的方法，具体地，包括如下步骤：
(a)在适合培养的条件下，对本发明的长双歧杆菌长亚种进行培养，从而获得培养产物；
(b)任选地，从培养产物分离长双歧杆菌长亚种菌体和/或其代谢产物；和
(c)任选地，将上一步骤获得的培养产物或长双歧杆菌长亚种菌体和/或其代谢产物与食品上可接受的载体或药学上可接受的载体混合，从而制得组合物。
在本发明中，上述适合培养的条件指任何适于培养本发明的长双歧杆菌长亚种的条件，在一优选实施方式中，上述适合培养的条件指采用PYG培养基于37℃厌氧培养24h-72h。
改善哺乳动物肠道病变的方法
在另一优选例中，改善哺乳动物肠道病变的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。上述实验对象包括哺乳动物，如人。
在另一优选例中，改善哺乳动物肠道病变的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。上述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。
控制哺乳动物体重的下降的方法
在另一优选例中，控制哺乳动物体重的下降的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。上述实验对象包括哺乳动物，如人。
在另一优选例中，控制哺乳动物体重的下降的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。上述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。
降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)的方法
在另一优选例中，降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。上述实验对象包括哺乳动物，如人。
在另一优选例中，降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。上述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。
降低哺乳动物血脂的方法
在另一优选例中，降低哺乳动物血脂的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。上述实验对象包括哺乳动物，如人。
在另一优选例中，降低哺乳动物血脂的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。上述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。
预防和/或治疗炎症相关疾病的方法
在另一优选例中，预防和/或治疗炎症相关疾病的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、饮料组合物、或其组合。上述实验对象包括哺乳动物，如人。
在另一优选例中，预防和/或治疗炎症相关疾病的方法包括：摄取本发明的药物组合物、食品组合物、或动物饲料，或其组合。上述实验对象为动物，较佳地为鼠类，兔类。
菌种保藏
本发明的菌种长双歧杆菌长亚种Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24(与保藏名称相同)已于2018年8月24日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号：GDMCC 60408。
本发明的主要优点包括：
(a)本发明的长双歧杆菌长亚种能够显著改善与炎症相关疾病(如炎症性肠病，例如溃疡性肠炎、胃炎、普通肠炎)相关的指标(如控制体重下降、改善肠道病变程度(包括减缓结肠长度缩短、减轻结肠炎症反应等)、降低疾病活动指数(DAI)等)。
(b)本发明的长双歧杆菌长亚种能够显著降低血脂(如胆固醇水平)。
(c)本发明的长双歧杆菌长亚种Bifidobacterium longum subsp.longum TM12-24对UC小鼠的治疗具体表现为：可有效控制DSS诱导的UC小鼠体重的下降，抑制小鼠疾病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠的变化，并对胆固醇具有降解作用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中的条件，或按照《微生物：实验手册》(James Cappuccino和Natalie Sherman编，Pearson Education出版社)中的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
如无特别说明，实施例所用的材料和试剂均为市售产品。
实施例1：长双歧杆菌长亚种TM12-24的分离鉴定
1、样品收集
分离样品来自于一位14岁健康的男性粪便，将粪便采集至无菌的样品管中，1h内带回实验室进行分选。
2、双歧杆菌的分离纯化
收集的新鲜样品立刻转移至厌氧操作箱中，取0.2g样品于1ml无菌的PBS(磷酸缓冲液)中，充分震荡混匀，然后进行梯度稀释涂布，培养基采用PYG培养基(购自环凯微生物科技公司)，具体配方是(1L)：蛋白胨5g，胰化酪蛋白5g，酵母粉10g，牛肉膏5g，葡萄糖5g，K2HPO4 2g，Tween 80 1mL，Cysteine-HCl·H2O 0.5g，血红素5mg，维生素K1 1uL，无机盐溶液(每L无机盐溶液含有CaCl2·2H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.5g，K2HPO4 1g，KH2PO4 1g，NaHCO3 10g，NaCl 2g)40mL，刃天青1mg，蒸馏水950mL，调节pH至6.8～7.0，115℃灭菌25min。固体培养基加入1.5％的琼脂，在厌氧操作箱中倾倒。涂布的平板置于37℃厌氧培养，厌氧的气体组分为N2：CO2：H2＝90：5：5。培养3天后，挑取单菌落进行划线分纯，获得每株单菌的纯培养。
3、菌种保藏
对获得的纯培养菌株进行培养，至浓度约为1×109cfu/ml，取400ul菌液添加40％甘油400ul，使其甘油浓度达到20％，然后进行-80℃超低温保藏。
4、16S rDNA鉴定
将获得的分离菌株在液体PYG培养基中培养24h，取1ml菌液进行10000r/min离心5min，收集菌体，提取基因组DNA。以基因组DNA作为模板，使用16S rDNA通用引物(8F-AGAGTTTGATCATGGCTCAG(SEQ ID NO：2)和1492R-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT(SEQ ID NO：3))进行PCR扩增，扩增体系为：10×PCR缓冲液，3uL；dNTP，2.5uL；27F，0.5uL；1492R，0.5uL；Taq酶，0.3uL；模板，1uL；ddH2O，18.2uL。PCR扩增条件为：95℃预变性4min，然后95℃变性30s，57℃退火40s，72℃延伸1min 30s，30个循环。将获得的16S rDNA扩增产物进行电泳检测、纯化、3730测序，获得长度为1400bp的16S rDNA序列(见序列表中SEQ ID NO：1)。将这段序列在Genebank中进行比对分析，获得TM12-24的鉴定结果为长双歧杆菌长亚种Bifidobacterium longum subsp.longum。
5、TM12-24的生理生化特征
在PYG培养基上培养48小时，TM12-24的菌落是白色、圆形、凸起，菌落直径约1.5mm。在1000倍的显微镜下观察，菌体呈现分歧长杆状，革兰氏染色为阳性，没有芽孢和鞭毛产生。TM12-24的过氧化氢酶反应为阴性，氧化酶阴性，严格厌氧，碳源利用情况使用API20A试剂盒(购自法国梅里埃)进行检测。结果如表1(+，表示阳性反应；-，表示阴性反应；±表示弱阳性反应)。
表1
编号 反应 结果 编号 反应 结果
1 吲哚产生 - 11 明胶水解 -
2 脲素(脲酶) - 12 七叶灵 -
3 葡萄糖 + 13 甘油 -
4 甘露醇 ± 14 纤维二糖 ±
5 乳糖 + 15 甘露糖 +
6 蔗糖 + 16 松叁糖 ±
7 麦芽糖 + 17 棉籽糖 +
8 柳醇 + 18 山梨醇 ±
9 木糖 + 19 鼠李糖 -
10 阿拉伯糖 + 20 海藻糖 -
实施例2：长双歧杆菌长亚种TM12-24的生物活性物质
TM12-24的生物活性物质主要考察代谢产物中的短链脂肪酸(SCFA)和有机酸产生情况。
1、样品预处理
将TM12-24培养48h，取1ml菌液进行10000r/min离心5min，取上清，准备进行短链脂肪酸(SCFA)和有机酸的检测。
2、SCFA的测定
SCFA的检测主要检测乙酸、丙酸、丁酸、戊酸这4种物质的含量。采用安捷伦气象色谱仪(GC-7890B,Agilent)，选用HP-INNOWax(Cross-Linked PEG)，30m×0.25mm×0.25um的毛细柱进行分析，检测器为氢火焰离子检测器，GC参数设置为柱温：180～200℃；气化室温度：240℃；检测温度：210℃；进样量：2μL；载气流量：N2，50mL/min；氢气流量：50mL/min；空气流量：600～700ml/min。
3、有机酸的测定
有机酸的检测标准品选用：3-甲基丁酸，戊酸，奎宁酸，乳酸，草酸，丙二酸，苯甲酸，马来酸，丁二酸，反富马酸，苹果酸，己二酸，酒石酸，莽草酸，柠檬酸，异柠檬酸和L-抗坏血酸。仍然采用安捷伦气象色谱仪(GC-7890B,Agilent)，色谱柱选用122-5532G DB-5ms(40m×0.25mm×0.25um)，柱温：270～290℃；进样口温度：250℃；气体流量:0.86ml/min。
4、实验结果
结果如表2所示。
表2
Figure BDA0001897404530000161
实施例3：长双歧杆菌长亚种TM12-24的抗生素敏感情况
考察TM12-24对常见20种抗生素的敏感情况，采用药敏纸片法进行实验，取培养至对数期的TM12-24的菌液100ul进行平板涂布，将抗生素药敏片贴在平板表面，37℃培养48h，测量抑菌圈大小，其结果如表3。
表3
Figure BDA0001897404530000171
结果显示，TM12-24对苯唑西林、卡那霉素和新霉素有抗性，对其他17种抗生素比较敏感。
实施例4：长双歧杆菌长亚种TM12-24的降胆固醇特性
1、TM12-24的胆盐水解酶活性
胆盐水解酶采用TDCA(牛磺去氧胆酸钠)法进行检测，配制TDCA平板，PYG固体培养基中添加4％的TDCA和0.37g/L的CaCl2，将TM12-24培养至浓度约108cfu/ml，取10ul菌液滴在直径为0.6mm的滤纸片上，滤纸片置于TDCA平板表面，37℃培养2天，观察滤纸片周边产生的白色沉淀情况，白色沉淀的直径代表胆盐水解酶的活性。
通过测量，TM12-24的白色沉淀的直径为10mm，表明TM12-24具有胆盐水解酶的活性。
2、TM12-24的体外降胆固醇情况
胆固醇的含量测定方法采用邻苯二甲醛比色法(OPA法)，通过菌株在含一定浓度的胆固醇培养基中培养一段时间的胆固醇含量前后的变化来考察对胆固醇的降解能力。具体方法如下：
(1)胆固醇培养基的配制和实验菌株的培养
称取一定质量的胆固醇溶解于乙醇中，浓度为10mg/mL，过滤除菌。将配置好的PYG培养基分别加入10mg/mL的胆盐(高压灭菌)，10％质量浓度的巯基乙酸钠(过滤除菌)和胆固醇，充分混匀，然后按照3％的接种量将待测菌株接种至该培养基中，待测菌株除了TM12-24，还选用另外一株商业降胆固醇益生菌植物乳杆菌Lp299v(购自瑞典Probi公司)作比较，两种菌都在37℃厌氧条件下培养72h。
(2)标准曲线的制作
精确量取0.5mg/mL的胆固醇标准溶液40uL，80uL，120uL，160uL，200uL于干净试管中，加入无水乙醇定容至1mL，每个试管中加入OPA 4mL(0.5mg邻苯二甲醛加入到1mL冰醋酸)，震荡混匀，室温静置10min，然后加入2mL的浓硫酸混匀，静置反应10min，于550nm处测定吸光度。以浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标绘制标准曲线(图1)，通过计算，线性回归的方程式为：y＝0.0085x+0.0072；相关系数R2为0.9992。
(3)培养基中胆固醇的测定
将含有胆固醇的PYG培养基培养好的菌液进行10000r/min的离心，收集上清，进行胆固醇检测，同时以未接种的胆固醇PYG培养基作为空白对照组。取1ml待测样品于干净的试管中，加入95％乙醇6ml和50％的KOH 4ml，震荡混匀，然后在60℃水浴中进行皂化反应10min，迅速进行冷却，加入10ml正己烷进行萃取，充分混匀，室温静置20min，量取8ml有机相(正己烷层)到另一洁净试管中，然后在60℃水浴中进行氮气吹干，加入4ml 0.5g/L邻苯二甲醛乙酸溶液，室温静置10min，添加2ml浓H2SO4反应10min，最后测量在550nm处的吸光值。
(4)胆固醇降解率的计算
根据标准曲线计算培养前后培养基中胆固醇的含量，胆固醇的降解率按以下公式进行计算：
L＝(A-B)/A×100％
L：胆固醇降解率；A：未接种菌的胆固醇培养基中胆固醇的含量；B：待测菌株培养48h培养液中胆固醇的含量。
(5)胆固醇降解结果
通过计算，得到TM12-24的胆固醇降解率为74％，而Lp299v降解率为70％，由此说明TM12-24比Lp299v具有更强的胆固醇降解能力。
实施例5：长双歧杆菌长亚种TM12-24对UC小鼠的治疗
本实施例所选取的小鼠模型为：DSS诱导的溃疡性肠炎小鼠模型，采用C57bl/6小鼠(购自湖北医学实验动物中心)，8周龄，体重20g±2g，小鼠饲养环境为SPF级，适应性喂养1周进行DSS诱导，连续给小鼠饮用0.2％的DSS(葡聚糖硫酸钠，分子量36000-50000)7天。通过采用VSL#3(购自美国Sigma Tau)作为阳性对照，比较TM12-24和VSL#3的治疗效果。
试验小鼠总计48只，随机分为4组，每组12只，其中包括对照组(control组)，DSS诱导的模型组(每只每天灌胃0.2ml PBS)，TM12-24治疗组和VSL#3治疗组。TM12-24处理过程为：培养24h的TM12-24菌液，离心收集菌体，用PBS进行悬浮，调整菌浓度至1×109cfu/ml，每只小鼠每天灌胃200ul的TM12-24。VSL#3也采用PBS进行悬浮，同样调节浓度至1×109cfu/ml，每只小鼠每天灌胃200ul。治疗方法采用边造模边给药的方式，每天记录小鼠体重、饮食和饮水情况，同时观察小鼠的粪便性状及粪便隐血情况，分别在第1天、第3天、第5天和第7天计算小鼠的疾病活动指数(DAI)，DAI评分详见表4。实验持续7天，益生菌和PBS的日灌胃量为200ul。实验结束后处死小鼠，所有小鼠取血、脱颈、取结肠、拍照、称重、量取结肠长度。结肠组织保存于-80℃冰箱和多聚甲醛中。
表4.DAI指数评分表
Figure BDA0001897404530000191
Figure BDA0001897404530000201
表中的大便性状：正常大便-成形大便；松散大便-不粘附于肛门的糊状、半成型大便；稀便-可粘附于肛门的稀样水便。其中便血情况：正常小鼠便血为阳性；肉眼血便为红色或褐色；隐血阳性为不明显的肉眼血便，使用四甲基联苯胺进行检测。DAI指数等于体重、大便性状以及大便隐血/肉眼血便三个积分之和。
治疗前后小鼠的体重变化如下表5和图2所示：
表5
Figure BDA0001897404530000202
从表5和图2中的结果可以得知，对照组小鼠的体重基本维持缓慢升高的趋势，DSS诱导的模型组小鼠的体重逐渐下降，第3天开始体重下降的比较显著(*P<0.05)，第5天开始，二者之间的差异显著程度更加明显(**P<0.01)。而TM12-24和VSL#3的治疗可以减缓UC小鼠体重的下降，在第7天，TM12-24和VSL#3小鼠的体重下降的控制相对于模型组比较显著(▲P<0.05)。说明这两组益生菌可以控制UC引起的体重下降情况。通过比较第7天各组的体重数值可以发现TM12-24组小鼠的体重略高于VSL#3，说明TM12-24在控制UC小鼠体重降低的能力好于VSL#3。
DSS诱导的溃疡性肠炎的小鼠由于体重下降、大便性状和便血情况的变化引起DAI指数的变化，小鼠DAI指数在治疗前后的变化如表6和图3：
表6
Figure BDA0001897404530000211
表6和图3数据表明，对照组小鼠的DAI维持一个正恒定的低水平，而DSS诱导的小鼠由于出现一系列病理，导致DAI逐渐升高，第3天开始模型组小鼠DAI相对对照组变得极显著(**P<0.01)，第7天模型组小鼠DAI达到最高水平。益生菌的干预可以控制DAI的升高，TM12-24和VSL#3组小鼠在第7天的DAI相对于模型组得到了一定程度的控制(▲P<0.05)。通过第7天的DAI数值可以发现TM2-14组小鼠的DAI略低于VSL#3，可以说明TM12-24在控制UC小鼠DAI升高的效果优于VSL#3。
UC模型小鼠的结肠组织会发生改变，主要是因为溃疡和炎症的发生导致结肠组织缩短，治疗结束后，通过解剖测量的小鼠结肠长度见表7。
表7
Figure BDA0001897404530000212
Figure BDA0001897404530000221
表7结果显示，在进行DSS诱导7天后的小鼠(模型组)的结肠组织缩短情况比较严重，与对照组相比较差异极显著(**P<0.01)。而益生菌TM12-24和VSL#3的干预可以显著控制小鼠结肠的缩短(相对于模型组▲P<0.05)。通过表中数据可以发现TM12-24组小鼠的结肠长度比VSL#3组小鼠结肠长度长，可以说明TM12-24在控制UC小鼠结肠缩短的能力强于VSL#3。
实施例6：含长双歧杆菌长亚种TM12-24的食品组合物
原料配比如表8。
表8
Figure BDA0001897404530000222
按照上述配方比例混合牛奶、白糖，搅拌至完全混合，预热，20Mpa压力均质，90℃左右杀菌5-10分钟，冷却至40-43℃，混入保护剂维生素C，接种1-100×106cfu/g的长双歧杆菌长亚种TM12-24菌，即制成含长双歧杆菌长亚种TM12-24菌的食品组合物。
实施例7：含长双歧杆菌长亚种TM12-24的药物组合物
原料配比见表9。
表9
Figure BDA0001897404530000223
Figure BDA0001897404530000231
按照比例将乳糖、酵母粉、蛋白胨以纯净水混合均匀，预热到60-65℃，20Mpa压力均质，90℃左右杀菌20-30分钟，冷却至36-38℃，混入保护剂维生素C，接入长双歧杆菌长亚种TM12-24活菌(1-500×106cfu/mL)，36-38℃发酵至pH值为6.0，离心，冷冻干燥至水份含量小于3％，即制备长双歧杆菌长亚种TM12-24菌冷冻干燥物。称取0.5克长双歧杆菌长亚种TM12-24冷冻干燥物与麦芽糊精等量混合后装入胶囊中，即制成含长双歧杆菌长亚种TM12-24菌的药物组合物。
实施例8：用于治疗溃疡性肠炎(UC)的药物的制备方法
1、菌液准备：将长双歧杆菌长亚种TM12-24(1×109cfu/ml)进行厌氧培养，厌氧培养基采用PYG培养基，经过37℃厌氧发酵2-3天。
2、生长因子制备：将脱脂牛奶、酪蛋白进行混合、离心、超滤获得牛奶生长因子粗提物(含有维生素类物质、嘌呤类物质、嘧啶类物质等成分)。
3、药物剂型制作：将5体积生长因子和1体积的保护剂维生素C加入到100体积的TM12-24发酵的菌液中，充分搅拌混匀，然后加入淀粉辅料(如麦芽糊精)制备药物剂型。
以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳华大生命科学研究院
<120> 长双歧杆菌长亚种、含其的组合物及用途
<130> 18I27194
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1314
<212> DNA
<213> Bifidobacterium longum subsp. longum
<400> 1
cgggatccat caggctttgc ttggtggtga gagtggcgaa cgggtgagta atgcgtgacc 60
gacctgcccc atacaccgga atagctcctg gaaacgggtg gtaatgccgg atgctccagt 120
tgatcgcatg gtcttctggg aaagctttcg cggtatggga tggggtcgcg tcctatcagc 180
ttgacggcgg ggtaacggcc caccgtggct tcgacgggta gccggcctga gagggcgacc 240
ggccacattg ggactgagat acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt 300
gcacaatggg cgcaagcctg atgcagcgac gccgcgtgag ggatggaggc cttcgggttg 360
taaacctctt ttatcgggga gcaagcgtga gtgagtttac ccgttgaata agcaccggct 420
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcaag cgttatccgg aattattggg 480
cgtaaagggc tcgtaggcgg ttcgtcgcgt ccggtgtgaa agtccatcgc ttaacggtgg 540
atccgcgccg ggtacgggcg ggcttgagtg cggtagggga gactggaatt cccggtgtaa 600
cggtggaatg tgtagatatc gggaagaaca ccaatggcga aggcaggtct ctgggccgtt 660
actgacgctg aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac 720
gccgtaaacg gtggatgctg gatgtggggc ccgttccacg ggttccgtgt cggagctaac 780
gcgttaagca tcccgcctgg ggagtacggc cgcaaggcta aaactcaaag aaattgacgg 840
gggcttgaca tgttcccgac ggtcgtagag atacggcttc ccttcggggc gggttcacag 900
gtggtgcatg gtcgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 960
gcaaccctcg ccccgtgttg ccagcggatt atgccgggaa ctcacggggg accgccgggg 1020
ttaactcgga ggaaggtggg gatgacgtca gatcatcatg ccccttacgt ccagggcttc 1080
acgcatgcta caatggccgg tacaacggga tgcgacgcgg cgacgcggag cggatccctg 1140
aaaaccggtc tcagttcgga tcgcagtctg caactcgact gcgtgaaggc ggagtcgcta 1200
gtaatcgcga atcagcaacg tcgcggtgaa tgcgttcccg ggccttgtac acaccgcccg 1260
tcaagtcatg aaagtgggca gcacccgaag ccggtggcct aaccccttgt ggga 1314
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 2
agagtttgat catggctcag 20
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 3
tagggttacc ttgttacgac tt 22

Claims (10)

1. 一种长双歧杆菌长亚种（Bifidobacterium longum subsp. longum），优选地，所述长双歧杆菌长亚种的16s rDNA的序列如SEQ ID NO.:1所示或与SEQ ID NO.:1所示的序列有99%以上的相似度；更优选地，所述长双歧杆菌长亚种是Bifidobacterium longum subsp. Longum TM12-24，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC 60408。
2.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括：(a)安全有效量的权利要求1所述的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物；以及(b)食品上可接受的载体或药学上可接受的载体。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病；
优选地，所述炎症为炎性肠病（IBD）；
更优选地，所述炎症为溃疡性肠炎。
4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物选自下组：食品组合物、保健组合物、药物组合物、饮料组合物、饲料组合物、或它们的组合；
优选地，所述组合物是益生菌剂、微生态制剂或药物制剂；
更优选地，所述益生菌剂是益生菌奶制品或益生菌片。
5.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还含有有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质；
优选地，所述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质选自半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基茴香醚、二丁基甲基甲苯、生育酚、竹叶抗氧化物、D-异抗坏血酸或其钠盐、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、磷脂、维生素C和维生素E中的至少一种；
更优选地，所述有助于保持长双歧杆菌长亚种活力的物质是维生素C；
优选地，所述组合物还含有其它益生菌和/或益生元；
更优选地，所述益生菌选自乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少一种；
更优选地，所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚乳果糖、大豆低聚糖、菊粉和寡聚糖中的至少一种。
6. 根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，按所述组合物的总体积或总重量计，所述组合物含有1×10-1至1×1020 cfu/mL或1×10-1至1×1020 cfu/g的长双歧杆菌长亚种；
优选地，按所述组合物的总体积或总重量计，所述组合物含有1×104至1×1015 cfu/mL或1×104至1×1015 cfu/g的长双歧杆菌长亚种。
7.一种权利要求1所述的长双歧杆菌长亚种、或权利要求2至6任一项所述的组合物在制备用于预防和/或治疗炎症或炎症相关疾病的组合物中的用途；
优选地，所述炎症为炎性肠病（IBD）；
更优选地，所述炎症为溃疡性肠炎。
8.一种权利要求1所述的长双歧杆菌长亚种、或权利要求2至6任一项所述的组合物在制备用于选自下组的一种或多种用途的组合物中的用途：
(i) 降低哺乳动物的血脂水平；
(ii) 控制哺乳动物体重的降低；
(iii) 降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)；
(iv) 改善哺乳动物的肠道病变。
9.一种制备权利要求2至6任一项所述的组合物的方法，其特征在于，所述方法包括：
将权利要求1所述的长双歧杆菌长亚种和/或其代谢产物与食品上可接受的载体或药学上可接受的载体混合，从而形成权利要求2至6任一项所述的组合物。
10.一种用于实现选自下组的一种或多种目的的方法，其特征在于，所述方法包括：给受试对象施用权利要求2至6任一项所述的组合物：
(i) 降低哺乳动物的血脂水平；
(ii) 控制哺乳动物体重的降低；
(iii) 降低哺乳动物的疾病活动指数(DAI)；
(iv) 改善哺乳动物的肠道病变。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113293113A (zh) * 2021-06-21 2021-08-24 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mi-186及其应用
CN113430133A (zh) * 2021-06-24 2021-09-24 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种能够缓解溃疡性结肠炎的复合益生菌、制备方法及其应用
CN114657084A (zh) * 2021-11-12 2022-06-24 南昌大学 一种缓解溃疡性结肠炎的长双歧杆菌及其应用
CN114728028A (zh) * 2019-04-17 2022-07-08 纽泰克温图斯公司 包括具有增强的持久性的新微生物的组合物、新微生物和益生元的协同组合
CN117736940A (zh) * 2024-02-18 2024-03-22 广州同康生物科技有限公司 一种改善肠道健康的长双歧杆菌长亚种bn08及其后生元

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1796540A (zh) * 2004-12-29 2006-07-05 王敖喜 具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途
CN102899261A (zh) * 2011-03-11 2013-01-30 光晟生物科技股份有限公司 可产生高免疫激活反应的长双歧杆菌长亚种分离株及可刺激免疫激活的组合物
CN103275893A (zh) * 2013-05-06 2013-09-04 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 长双歧杆菌和动物双歧杆菌的复合菌剂及其制备方法
CN108410763A (zh) * 2018-03-14 2018-08-17 浙江同创越诚健康科技有限公司 长双歧杆菌tc01及其应用和应用其的产品
CN108486000A (zh) * 2018-03-12 2018-09-04 江南大学 一种双歧杆菌单菌发酵乳制备方法及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1796540A (zh) * 2004-12-29 2006-07-05 王敖喜 具有抗肠道致病菌和抗氧化特性的双歧杆菌及其用途
CN102899261A (zh) * 2011-03-11 2013-01-30 光晟生物科技股份有限公司 可产生高免疫激活反应的长双歧杆菌长亚种分离株及可刺激免疫激活的组合物
CN103275893A (zh) * 2013-05-06 2013-09-04 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 长双歧杆菌和动物双歧杆菌的复合菌剂及其制备方法
CN108486000A (zh) * 2018-03-12 2018-09-04 江南大学 一种双歧杆菌单菌发酵乳制备方法及其应用
CN108410763A (zh) * 2018-03-14 2018-08-17 浙江同创越诚健康科技有限公司 长双歧杆菌tc01及其应用和应用其的产品

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114728028A (zh) * 2019-04-17 2022-07-08 纽泰克温图斯公司 包括具有增强的持久性的新微生物的组合物、新微生物和益生元的协同组合
US11752178B2 (en) * 2019-04-17 2023-09-12 Nutech Ventures Methods for the isolation of microbes with enhanced persistance and compositions with such microbes
CN113293113A (zh) * 2021-06-21 2021-08-24 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mi-186及其应用
CN113293113B (zh) * 2021-06-21 2022-07-29 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mi-186及其应用
CN113430133A (zh) * 2021-06-24 2021-09-24 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种能够缓解溃疡性结肠炎的复合益生菌、制备方法及其应用
CN114657084A (zh) * 2021-11-12 2022-06-24 南昌大学 一种缓解溃疡性结肠炎的长双歧杆菌及其应用
CN114657084B (zh) * 2021-11-12 2024-01-30 南昌大学 一种缓解溃疡性结肠炎的长双歧杆菌及其应用
CN117736940A (zh) * 2024-02-18 2024-03-22 广州同康生物科技有限公司 一种改善肠道健康的长双歧杆菌长亚种bn08及其后生元
CN117736940B (zh) * 2024-02-18 2024-04-23 广州同康生物科技有限公司 一种改善肠道健康的长双歧杆菌长亚种bn08及其后生元

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Assignee: BGI PRECISION NUTRITION (SHENZHEN) TECHNOLOGY CO.,LTD.

Assignor: BGI SHENZHEN

Contract record no.: X2022440020021

Denomination of invention: Bifidobacterium longum subsp. longum, its compositions and uses

License type: Common License

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