CN113197918A - 一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用 - Google Patents

一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于脱发治疗技术领域，具体为一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用，该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P3‑P5代；S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P3‑P5代的间充质干细胞组织获取。通过干细胞外泌体冻干粉作为主要治疗药剂，避免了身体排斥反应；干细胞外泌体冻干粉更容易得到身体接受，且通过制成冻干粉的方式，能够长时间保存；该技术应用广泛，治疗效果较好。

Description

一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用
技术领域
本发明涉及脱发治疗技术领域，具体为一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用。
背景技术
脱发是指头发脱落的现象。正常脱落的头发都是处于退行期及休止期的毛发，由于进入退行期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。病理性脱发是指头发异常或过度的脱落，其原因很多。
间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且安全无不良反应。
对于脱发治疗，现有技术没有较好的治疗效果，且一些药剂会受到身体抗拒，药效不佳。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于干细胞的毛发再生技术的方法及应用，以解决上述背景技术中提出的现有技术没有较好的治疗效果，且一些药剂会受到身体抗拒，药效不佳的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：
S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；
S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P3-P5代；
S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P3-P5代的间充质干细胞组织获取，并将间充质干细胞组织剪碎，将剪碎后的间充质干细胞组织置于新的培养基中，对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养；
S4：获取干细胞外泌体：将步骤S3中培养后的剪碎间充质干细胞组织上清液获取，通过多重离心的方式得到干细胞外泌体；
S5：制作干细胞外泌体冻干粉：将步骤S4中得到的干细胞外泌体获取，将干细胞外泌体与淀粉按照质量比重为1：10-20的比例配比，冻干得到干细胞外泌体冻干粉；
S6：经皮下注射：使用时，将干细胞外泌体冻干粉取出并注入维生素、生理盐水和胰岛素溶化，溶化的液体药剂中维生素、生理盐水和胰岛素分别占有：维生素1μg/mg、生理盐水8-10μg/mg、胰岛素5-7μg/mg，对需要治疗的对象经皮下注射。
优选的，所述间充质干细胞组织来自于脐带、牙髓、脂肪、骨髓骨膜、各器官组织的血管壁或者脐带组织中的间充质干细胞组织。
优选的，所述步骤S1中间充质干细组织在生理盐水中预先浸泡2-3min，之后采用玻璃棒对生理盐水搅动，对其内的间充质干细胞组织清理，搅动速度为30r/min。
优选的，所述步骤S3中间充质干细胞组织剪碎呈尺寸为2-4mm的段状。
优选的，所述步骤S3中对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养过程中，每30min对培养基及内部的剪碎间充质干细胞组织晃动，使得剪碎间充质干细胞组织充分接触氧气和营养物质。
优选的，所述步骤S4中多重离心的方式具体为：将上清液置于离心机中，通过设定离心机转速为400-600r/min，初步过滤去大量大颗粒细胞碎片物质；之后，设定离心机转速为800-1000r/min，得到纯净干细胞外泌体。
优选的，所述步骤S5中冻干方式为：降低温度至零下20-零下10℃，且冻干在无菌环境中进行，待干细胞外泌体与淀粉冷冻后，通过负压抽真空的方式将干细胞外泌体与淀粉内的水分升华分离。
一种基于干细胞的毛发再生技术的应用，该基于干细胞的毛发再生技术应用于脱发小鼠，具体如下：
S1：获取患有脱发的小鼠：将患有脱发症状的饲养小白鼠取出；
S2：按剂量经皮下注射药剂：根据小白鼠年龄、体重对小白鼠选用对应剂量的药剂并注射；
S3：观察小鼠情况：每隔7天对小白鼠注射一次药剂，期间观察小白鼠脱发处生长情况。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1)通过干细胞外泌体冻干粉作为主要治疗药剂，避免了身体排斥反应；
2)干细胞外泌体冻干粉更容易得到身体接受，且通过制成冻干粉的方式，能够长时间保存；
3)该技术应用广泛，治疗效果较好。
附图说明
图1为本发明的方法流程图；
图2为本发明的应用流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
实施例一：
请参阅图1-2，本发明提供一种技术方案：一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：
S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；
S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P3代；
S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P3代的间充质干细胞组织获取，并将间充质干细胞组织剪碎，将剪碎后的间充质干细胞组织置于新的培养基中，对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养；
S4：获取干细胞外泌体：将步骤S3中培养后的剪碎间充质干细胞组织上清液获取，通过多重离心的方式得到干细胞外泌体；
S5：制作干细胞外泌体冻干粉：将步骤S4中得到的干细胞外泌体获取，将干细胞外泌体与淀粉按照质量比重为1：10的比例配比，冻干得到干细胞外泌体冻干粉；
S6：经皮下注射：使用时，将干细胞外泌体冻干粉取出并注入维生素、生理盐水和胰岛素溶化，溶化的液体药剂中维生素、生理盐水和胰岛素分别占有：维生素1μg/mg、生理盐水8μg/mg、胰岛素5μg/mg，对需要治疗的对象经皮下注射。
进一步地，所述间充质干细胞组织来自于脐带、牙髓、脂肪、骨髓骨膜、各器官组织的血管壁或者脐带组织中的间充质干细胞组织。
进一步地，所述步骤S1中间充质干细组织在生理盐水中预先浸泡2min，之后采用玻璃棒对生理盐水搅动，对其内的间充质干细胞组织清理，搅动速度为30r/min。
进一步地，所述步骤S3中间充质干细胞组织剪碎呈尺寸为2mm的段状。
进一步地，所述步骤S3中对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养过程中，每30min对培养基及内部的剪碎间充质干细胞组织晃动，使得剪碎间充质干细胞组织充分接触氧气和营养物质。
进一步地，所述步骤S4中多重离心的方式具体为：将上清液置于离心机中，通过设定离心机转速为400r/min，初步过滤去大量大颗粒细胞碎片物质；之后，设定离心机转速为800r/min，得到纯净干细胞外泌体。
进一步地，所述步骤S5中冻干方式为：降低温度至零下20℃，且冻干在无菌环境中进行，待干细胞外泌体与淀粉冷冻后，通过负压抽真空的方式将干细胞外泌体与淀粉内的水分升华分离。
实施例二：
请参阅图1-2，本发明提供一种技术方案：一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：
S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；
S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P4代；
S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P4代的间充质干细胞组织获取，并将间充质干细胞组织剪碎，将剪碎后的间充质干细胞组织置于新的培养基中，对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养；
S4：获取干细胞外泌体：将步骤S3中培养后的剪碎间充质干细胞组织上清液获取，通过多重离心的方式得到干细胞外泌体；
S5：制作干细胞外泌体冻干粉：将步骤S4中得到的干细胞外泌体获取，将干细胞外泌体与淀粉按照质量比重为1：15的比例配比，冻干得到干细胞外泌体冻干粉；
S6：经皮下注射：使用时，将干细胞外泌体冻干粉取出并注入维生素、生理盐水和胰岛素溶化，溶化的液体药剂中维生素、生理盐水和胰岛素分别占有：维生素1μg/mg、生理盐水9μg/mg、胰岛素6μg/mg，对需要治疗的对象经皮下注射。
进一步地，所述间充质干细胞组织来自于脐带、牙髓、脂肪、骨髓骨膜、各器官组织的血管壁或者脐带组织中的间充质干细胞组织。
进一步地，所述步骤S1中间充质干细组织在生理盐水中预先浸泡2.5min，之后采用玻璃棒对生理盐水搅动，对其内的间充质干细胞组织清理，搅动速度为30r/min。
进一步地，所述步骤S3中间充质干细胞组织剪碎呈尺寸为3mm的段状。
进一步地，所述步骤S3中对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养过程中，每30min对培养基及内部的剪碎间充质干细胞组织晃动，使得剪碎间充质干细胞组织充分接触氧气和营养物质。
进一步地，所述步骤S4中多重离心的方式具体为：将上清液置于离心机中，通过设定离心机转速为500r/min，初步过滤去大量大颗粒细胞碎片物质；之后，设定离心机转速为900r/min，得到纯净干细胞外泌体。
进一步地，所述步骤S5中冻干方式为：降低温度至零下15℃，且冻干在无菌环境中进行，待干细胞外泌体与淀粉冷冻后，通过负压抽真空的方式将干细胞外泌体与淀粉内的水分升华分离。
实施例三：
请参阅图1-2，本发明提供一种技术方案：一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：
S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；
S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P5代；
S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P5代的间充质干细胞组织获取，并将间充质干细胞组织剪碎，将剪碎后的间充质干细胞组织置于新的培养基中，对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养；
S4：获取干细胞外泌体：将步骤S3中培养后的剪碎间充质干细胞组织上清液获取，通过多重离心的方式得到干细胞外泌体；
S5：制作干细胞外泌体冻干粉：将步骤S4中得到的干细胞外泌体获取，将干细胞外泌体与淀粉按照质量比重为1：20的比例配比，冻干得到干细胞外泌体冻干粉；
S6：经皮下注射：使用时，将干细胞外泌体冻干粉取出并注入维生素、生理盐水和胰岛素溶化，溶化的液体药剂中维生素、生理盐水和胰岛素分别占有：维生素1μg/mg、生理盐水10μg/mg、胰岛素7μg/mg，对需要治疗的对象经皮下注射。
进一步地，所述间充质干细胞组织来自于脐带、牙髓、脂肪、骨髓骨膜、各器官组织的血管壁或者脐带组织中的间充质干细胞组织。
进一步地，所述步骤S1中间充质干细组织在生理盐水中预先浸泡3min，之后采用玻璃棒对生理盐水搅动，对其内的间充质干细胞组织清理，搅动速度为30r/min。
进一步地，所述步骤S3中间充质干细胞组织剪碎呈尺寸为4mm的段状。
进一步地，所述步骤S3中对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养过程中，每30min对培养基及内部的剪碎间充质干细胞组织晃动，使得剪碎间充质干细胞组织充分接触氧气和营养物质。
进一步地，所述步骤S4中多重离心的方式具体为：将上清液置于离心机中，通过设定离心机转速为600r/min，初步过滤去大量大颗粒细胞碎片物质；之后，设定离心机转速为1000r/min，得到纯净干细胞外泌体。
进一步地，所述步骤S5中冻干方式为：降低温度至零下10℃，且冻干在无菌环境中进行，待干细胞外泌体与淀粉冷冻后，通过负压抽真空的方式将干细胞外泌体与淀粉内的水分升华分离。
上述三个实施方案应用到脱发小白鼠上具体如下：
一种基于干细胞的毛发再生技术的应用，该基于干细胞的毛发再生技术应用于脱发小鼠，具体如下：
S1：获取患有脱发的小鼠：将患有脱发症状的饲养小白鼠取出；
S2：按剂量经皮下注射药剂：根据小白鼠年龄、体重对小白鼠选用对应剂量的药剂并注射；
S3：观察小鼠情况：每隔7天对小白鼠注射一次药剂，期间观察小白鼠脱发处生长情况。
经过实验可得，三个实施例用于小白鼠上均使得小白鼠脱发位置缓解并重新生发。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明；因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内，不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：该基于干细胞的毛发再生技术的方法的具体步骤如下：
S1：获取干细胞：从需要治疗的对象身体上获取间充质干细胞组织，将获取的间充质干细胞组织置于生理盐水中洗净；
S2：培养干细胞：将步骤S1中洗净的间充质干细胞组织获取，置于培养基中培养，直至间充质干细胞组织培养至P3-P5代；
S3：转移培养干细胞：将步骤S2中培养至P3-P5代的间充质干细胞组织获取，并将间充质干细胞组织剪碎，将剪碎后的间充质干细胞组织置于新的培养基中，对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养；
S4：获取干细胞外泌体：将步骤S3中培养后的剪碎间充质干细胞组织上清液获取，通过多重离心的方式得到干细胞外泌体；
S5：制作干细胞外泌体冻干粉：将步骤S4中得到的干细胞外泌体获取，将干细胞外泌体与淀粉按照质量比重为1：10-20的比例配比，冻干得到干细胞外泌体冻干粉；
S6：经皮下注射：使用时，将干细胞外泌体冻干粉取出并注入维生素、生理盐水和胰岛素溶化，溶化的液体药剂中维生素、生理盐水和胰岛素分别占有：维生素1μg/mg、生理盐水8-10μg/mg、胰岛素5-7μg/mg，对需要治疗的对象经皮下注射。
2.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述间充质干细胞组织来自于脐带、牙髓、脂肪、骨髓骨膜、各器官组织的血管壁或者脐带组织中的间充质干细胞组织。
3.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述步骤S1中间充质干细组织在生理盐水中预先浸泡2-3min，之后采用玻璃棒对生理盐水搅动，对其内的间充质干细胞组织清理，搅动速度为30r/min。
4.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述步骤S3中间充质干细胞组织剪碎呈尺寸为2-4mm的段状。
5.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述步骤S3中对剪碎后的间充质干细胞组织继续培养过程中，每30min对培养基及内部的剪碎间充质干细胞组织晃动，使得剪碎间充质干细胞组织充分接触氧气和营养物质。
6.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述步骤S4中多重离心的方式具体为：将上清液置于离心机中，通过设定离心机转速为400-600r/min，初步过滤去大量大颗粒细胞碎片物质；之后，设定离心机转速为800-1000r/min，得到纯净干细胞外泌体。
7.根据权利要求1所述的一种基于干细胞的毛发再生技术的方法，其特征在于：所述步骤S5中冻干方式为：降低温度至零下20-零下10℃，且冻干在无菌环境中进行，待干细胞外泌体与淀粉冷冻后，通过负压抽真空的方式将干细胞外泌体与淀粉内的水分升华分离。
8.一种基于干细胞的毛发再生技术的应用，其特征在于：该基于干细胞的毛发再生技术应用于脱发小鼠，具体如下：
S1：获取患有脱发的小鼠：将患有脱发症状的饲养小白鼠取出；
S2：按剂量经皮下注射药剂：根据小白鼠年龄、体重对小白鼠选用对应剂量的药剂并注射；
S3：观察小鼠情况：每隔7天对小白鼠注射一次药剂，期间观察小白鼠脱发处生长情况。
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