CN113185402B - 一种异绿原酸c的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种异绿原酸C的制备方法，其包括：苦丁茶用丙酮回流提取3h，过滤、干燥，得到苦丁茶提取物；将异绿原酸A与所述苦丁茶提取物混合，再加入5倍剂量的乙醇，回流2.5h，得到所述异绿原酸C。该方法利用苦丁茶提取物使异绿原酸A较大比例转化成异绿原酸C，从而可获得量大的异绿原酸C。

Description

一种异绿原酸C的制备方法
技术领域
本发明涉及化工技术领域，具体涉及一种异绿原酸C的制备方法。
背景技术
绿原酸(Chlorogenic acid)，即3-咖啡酰奎尼酸，是由咖啡酸的羧基与奎尼酸的3-羟基酯化形成的羧酚酸；其异构体通常泛指由奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯化反应缩合而成的有机酸类天然成分，这类物质是植物体内有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类次生代谢产物，广泛存在于植物界中。
由于咖啡酸与奎尼酸结合位置和结合数量的不同，理论上，咖啡酰奎尼酸具有四种异构体，而二咖啡酰奎尼酸具有六种异构体。到目前为止，植物中发现的绿原酸类异构体主要包括绿原酸，新绿原酸(5-caffeoylquinic acid，5-CQA)，隐绿原酸(4-caffeoylquinic acid，4-CQA)，异绿原酸A(3,5-Dicaffeoylquinic acid，3,5-diCQA)，异绿原酸B(3,4-Dicaffeoylquinic acid,3,4-diCQA)、异绿原酸C(4,5-Dicaffeoylquinicacid，4,5-diCQA)和分布较窄的洋蓟素(Cynarin)(1,5-Dicaffeoylquinic acid，1,5-diCQA)。
然而，正由于咖啡酸对奎尼酸的结合位置和结合数量的不同，绿原酸及其异构体在功能上也有较大的差别，异绿原酸A抗胃癌作用突出，不仅能高效抑制HIV-1整合酶，还能抑制HIV-1在组织中的复制；异绿原酸B抗乳腺癌，能抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长和增值；而异绿酸C抗氧化能力明显强于其它异构体。
目前，异绿原酸A的化学合成已有文献报道，而抗氧化能力更强的异绿原酸C仍只能从植物中提取纯化得来，产量低，价格也更高，其合成及转化尚无报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提出一种异绿原酸C的制备方法，该方法利用苦丁茶提取物将异绿原酸A转化成异绿原酸C，可获得量大的异绿原酸C。
为了实现上述目的，本发明的实施例在一方面提出了一种异绿原酸C的制备方法，其包括：
(1)苦丁茶用丙酮回流提取3h，过滤、干燥，得到苦丁茶提取物；
(2)将异绿原酸A与所述苦丁茶提取物混合，再加入5倍剂量的乙醇，回流2.5h，得到所述异绿原酸C。
根据本发明实施例的一种异绿原酸C的制备方法，该方法利用苦丁茶提取物使异绿原酸A较大比例转化成异绿原酸C，从而可获得量大的异绿原酸C。
根据本发明实施例提出的一种异绿原酸C的制备方法，还包括以下特征：
可选地，步骤(1)中，所述丙酮的浓度为70％。
可选地，步骤(2)中，所述异绿原酸A与所述苦丁茶提取物按照1:1的比例混合。
可选地，步骤(2)中，所述乙醇的浓度为40％。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为根据本发明实施例的苦丁茶70％丙酮提取物的液相色谱；
图2为根据本发明实施例的异绿原酸A与苦丁茶提取物1：1的液相色谱；
图3为根据本发明实施例的异绿原酸A与苦丁茶提取物1：1后40％乙醇回流2.5h后的液相色谱，其中，4.98min峰为异绿原酸A，5.46min峰为异绿酸C。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
需要说明的是，以下实施例的材料和试剂包括：
苦丁茶购自广西林业科学研究院。
标准品新绿原酸购自Sigma-Aldrich(美国密歇根州圣路易斯)，3-CQA，4-CQA，3，5-diCQA，4，5-diCQA和3，4-diCQA购自成都Mann-Stewart生物技术有限公司(中国成都)。
乙醇(分析纯，西陇科学股份有限公司)，丙酮(分析纯，上海化学试剂厂)，甲酸(分析纯，上海麦克林生化公司)，乙腈(色谱纯，Tedia Company，美国)。
仪器和设备包括：
Waters Acquity UPLC仪(包括Waters Acquity BEH C18色谱柱、自动进样器、Binary溶剂管理系统，二极管阵列检测器DAD，柱温箱和化学工作站)。Milli-Q Direct 8水纯化系统(法国)，BS124S、BS423S Sartorius电子天平(Sartorius，德国)SB25-12DTD超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，DK-80型电热恒温器(上海精宏实验设备有限公司)，KDM型调温电热套(山东华鲁电热仪器有限公司)。
绿原酸类成分的UPLC检测：
色谱柱为Waters Acquity BEH C18柱(2.1mm×50mm，1.7um)，柱温35℃，流动相A为0.1％甲酸，流动相B为乙腈，流速0.3mL/min。洗脱条件：0～5min，A相由90％线性变化为80％，5～9min，A相80％线性变化为60％，9～12min，A相由60％线性变化为90％。DAD检测器，检测波长326nm。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
苦丁茶粉碎，过80目筛，备用。
取粉碎的苦丁茶100g放入2L烧瓶内，加入1000mL70％丙酮，回流提取1.5h，过滤，滤渣中再加入1000mL70％丙酮，继续回流1.5h，过滤。合并滤液，旋蒸浓缩后冻干，得苦丁茶提取物42.43g。
结果如图1所示，经液相色谱测试，该苦丁茶提取物中异绿原酸A的含量为24.16％，异绿原酸C的含量为9.01％。
取上述苦丁茶提取物10g，异绿原酸A 10g加入烧瓶内，再加入100mL 40％(V/V)乙醇；结合图2，此时烧瓶内的异绿原酸A的总量是12.42g，异绿原酸C的含量是0.9g；回流2.5h，经取样稀释过滤，液相测试，结果如图3，异绿原酸C的总量为7.58g，异绿原酸A的总量为5.41g。
由此说明，烧瓶内的异绿原酸A已有53.78％转化为异绿原酸C。
将上述回流液过滤，倒入旋蒸瓶内旋蒸浓缩，过树酯柱，再制备纯化得异绿原酸C组分7.03g，异绿原酸A组分4.8g。
对比例1
取异绿原酸A10g加入烧瓶内，再加入100mL 40％(V/V)乙醇，回流2.5h，经取样稀释过滤，液相测试，异绿原酸C的总量为0.39g，异绿原酸A的总量为8.96g。
由此说明，烧瓶内的异绿原酸A中若不加入苦丁茶提取物，在40％乙醇中仍较稳定，只有少量转化为异绿原酸C。
对比例2
取粉碎的苦丁茶100g放入2L烧瓶内，加入1000mL70％丙酮，回流提取1.5h，过滤，滤渣中再加入1000mL70％丙酮，继续回流1.5h，过滤。合并滤液，旋蒸浓缩后冻干，得苦丁茶提取物42.43g。
结果如图1所示，经液相色谱测试，该苦丁茶提取物中异绿原酸A的含量为24.16％，异绿原酸C的含量为9.01％。
取上述苦丁茶提取物10g，异绿原酸A 10g加入烧瓶内，再加入100mL 60％(V/V)乙醇；此时烧瓶内的异绿原酸A的总量是12.42g，异绿原酸C的含量是0.9g；回流2.5h，经取样稀释过滤，液相测试，异绿原酸C的总量为5.89g，异绿原酸A的总量为6.78g。
由此说明，乙醇浓度为60％时，异绿原酸C的转化率为40.17％。低于乙醇浓度为40％时的转化率。
对比例3
取粉碎的苦丁茶100g放入2L烧瓶内，加入1000mL70％丙酮，回流提取1.5h，过滤，滤渣中再加入1000mL70％丙酮，继续回流1.5h，过滤。合并滤液，旋蒸浓缩后冻干，得苦丁茶提取物42.43g。
结果如图1所示，经液相色谱测试，该苦丁茶提取物中异绿原酸A的含量为24.16％，异绿原酸C的含量为9.01％。
取上述苦丁茶提取物10g，异绿原酸A 10g加入烧瓶内，再加入100mL 40％(V/V)乙醇；此时烧瓶内的异绿原酸A的总量是12.42g，异绿原酸C的含量是0.9g；回流1.5h，取样，标记为1.5h样品，再回流1h，标记为2.5h样品；继续回流1h，取样，标记为3.5h样品。样品经稀释过滤，液相测试计算，结果为：
回流1.5h，异绿原酸C的总量为5.17g，异绿原酸A的总量为7.62g。
回流2.5h，异绿原酸C的总量为7.58g，异绿原酸A的总量为5.41g。
回流3.5h，异绿原酸C的总量为7.83g，异绿原酸A的总量为5.01g。
由此说明，2.5h之前，异绿原酸C转化较快，而2.5h之后，异绿原酸C转化明显变慢。
综上，根据本发明的实施例的方法，利用苦丁茶提取物使异绿原酸A可较大比例转化成异绿原酸C，从而可获得量大的异绿原酸C，为获得抗氧化能力更强的异绿原酸C提供了一个简单的新方法。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (3)

1.一种异绿原酸C的制备方法，其特征在于，包括：
(1)苦丁茶用丙酮回流提取3h，过滤、干燥，得到苦丁茶提取物；
(2)将异绿原酸A与所述苦丁茶提取物混合，再加入5倍剂量的乙醇，回流2.5h，得到所述异绿原酸C，所述乙醇的浓度为40％。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述丙酮的浓度为70％。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述异绿原酸A与所述苦丁茶提取物按照1:1的比例混合。
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CN106198782A (zh) * 2016-06-24 2016-12-07 广州中医药大学 一种可同时实现苦丁茶中18个组份的含量分析和相似度评价的质量控制方法

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