CN113176368B - 一种同时检测党参中有效成分含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种同时检测党参中有效成分含量的方法，所述有效成分包括苯丙素类、倍半萜内酯类、核苷类、氨基酸类以及聚乙炔类成分。该方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和样品检测。本发明建立的方法，首次对党参中苯丙素类、倍半萜内酯类、核苷类、氨基酸类和聚乙炔类的指标性成分进行同时检测，实现对党参药材质量进行更加全面的评价和控制。本发明选择的检测指标均为党参药材中含量较高，且具有药理活性的成分。能够为党参药材临床应用的安全性及有效性提供依据。节约了检测时间和成本，不仅准确且简单易行。本发明稳定性好，重复性好，回收率高，具有较强的专属性。
Description
技术领域
本发明涉及一种同时检测有效成分含量的方法，具体涉及一种同时检测党参中有效成分含量的方法，属于中药材质量检测领域。
背景技术
党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf.var.Modesta(Nannf.)L.T.Shen或川党参Codonopsistangshen Oliv.的干燥根。党参味甘、性平，归脾、肺经，具有健脾益肺、养血生津之功效，用于脾肺气虚、食少倦怠、咳嗽虚喘、气血不足、面色萎黄、心悸气短、津伤口渴、内热消渴等症[1]。党参具有增强造血功能、调节血压、保护胃肠道、增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、保护神经、抗菌、抗炎、降血脂等功效，临床上可用于防治高血脂症、低血压、造血功能障碍、急性高原反应以及功能性子宫出血等。
党参的化学成分主要包括苯丙素类、倍半萜内酯类、核苷类等，还有一些氨基酸类以及聚乙炔类成分。其中色氨酸是党参有机酸的主要活性成分，是一种人体必需的氨基酸，人体自身无法合成，对预防糙皮病、抑郁症，改善睡眠和调节情绪，有着很重要的作用；其中聚乙炔类成分主要是党参炔醇(lobetyolin)和党参新物质(lobetyolinin)，这类成分被认为是桔梗科植物在化学分类中的特征性成分，lobetyolin对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用；苯丙素类化合物包括丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷等，是党参中的主要成分，其中党参炔苷的含量最高且最具代表性，具有抗癌、抗菌、抗炎、镇静、降压、调节前列腺素代谢等药理活性，对于胃黏膜损伤及多种实验性胃溃疡均有较好的保护作用，且具有明显的抗溃疡作用。倍半萜内酯类化合物主要包括白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等，该类化合物是抗炎和抗癌的有效成分。
党参化学成分丰富，现行的2020版《中国药典》中仅有党参中党参炔苷的薄层鉴别，而没有规定含量检测，比较单一，不能全面的反映党参药材的质量，不利于党参药材的质量控制以及使用的安全性和稳定性。目前关于党参多成分的含量测定方法已有文献报道，HPLC的检测方法做到了吡咯烷翁B、紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷和白术内酯Ⅲ5成分以及党参炔苷、丁香苷、苍术内酯Ⅰ、苍术内酯Ⅱ和苍术内酯Ⅲ5成分的同测，UPLC-MS的检测方法做到了腺苷、肌苷、尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和2-脱氧腺苷7种核苷类成分含量的同测。但是党参药材的活性成分不只有苯丙素类、倍半萜内酯类和核苷类。
因此，在已有研究基础上，建立一种快速、全面、针对性强的党参药材的质量检测方法具有重要的意义。
发明内容
为了全面的对党参药材质量进行控制，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中党参药材检测指标单一，不利于党参药材的质量控制，进而提供一种快速、全面、针对性强的党参药材的检测方法。本发明技术方案具体如下：
一种同时检测党参中有效成分含量的方法，包括以下步骤：
步骤(1)、供试品溶液的制备：
将本品粉末过三号筛，取0.2～5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％甲醇20～50mL，密塞，称定重量，超声提取30～60分钟，放冷，再称定重量，用50％～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
步骤(2)、对照品溶液的制备：
每1mL对照品溶液含腺苷2.32～23.20μg、色氨酸4.36～43.60μg、丁香苷0.5088～5.0880μg、党参苷I5.64～56.40μg、党参新物质6.12～61.20μg、党参炔苷6.12～61.20μg、白术内酯Ⅲ4.92～49.20μg的溶液；
步骤(3)、样品检测：
色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.5～2ml/min，柱温为18℃～22℃；检测波长为260nm～270nm中的一个或两个波长；进样量5～20μl；理论塔板数大于6000；流动相为甲醇或乙腈与甲酸或磷酸组成的混合溶剂；甲酸或磷酸水溶液含甲酸或磷酸的浓度为0.1％～0.5％；
然后进行梯度洗脱，分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
进一步地，所述有效成分为党参药材中腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ。
进一步地，步骤(2)中，每1mL对照品溶液含腺苷9.28μg、色氨酸17.44μg、丁香苷2.0352μg、党参苷I 22.56μg、党参新物质24.48μg、党参炔苷24.48μg、白术内酯Ⅲ19.68μg的溶液，即得。
进一步地，步骤(3)中，按下表进行梯度洗脱；
| 时间min | 甲醇或乙腈(A)％ | 甲酸或磷酸水溶液(B)％ | 总计 |
| 0 | 0～5中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 10 | 8～10中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 36 | 12～20中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 55 | 20～25中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 58 | 20～40中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 60 | 40～55中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 70 | 55～65中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 75 | 65～75中任一数值 | 余量 | 100％ |
| 80 | 0～10中任一数值 | 余量 | 100％ |
进一步地，步骤(3)中，色谱条件：
流速0.8ml/min，柱温20℃；检测波长260nm；进样量20μl；流动相：A-乙腈，B-0.15％甲酸或磷酸水溶液；按下表进行梯度洗脱：
| 时间 | 乙腈(A)％ | 0.15％甲酸水(B)％ | 总计 |
| 0 | 5 | 95 | 100％ |
| 10 | 8 | 92 | 100％ |
| 36 | 14 | 86 | 100％ |
| 55 | 30 | 70 | 100％ |
| 58 | 55 | 45 | 100％ |
| 60 | 60 | 40 | 100％ |
| 70 | 70 | 30 | 100％ |
| 75 | 5 | 95 | 100％ |
| 80 | 5 | 95 | 100％ |
通过以下实验研究对本发明进行进一步说明。
(1)色谱柱的选择：根据本发明建立的HPLC检测方法所选的检测指标包括大极性、中等极性及小极性的成分，且含水溶性及脂溶性化合物，所以选择反相C18色谱柱。
(2)检测波长的选择：对腺苷等7个成分进行全波长扫描，结果腺苷在260nm处；色氨酸在223nm、271nm处；丁香苷在221nm、265nm处；党参苷I在219nm、265nm处；党参新物质在267nm处；党参炔苷在240nm、254nm处、白术内酯Ⅲ在217nm处有最大吸收，综合上述各成分的最大吸收波长，同时兼顾含量较低的成分，最终决定选用260～270nm中的一个或两个波长作为检测波长。
(3)流动相系统的选择：以乙腈(A)-磷酸(B)溶液、乙腈-甲酸(B)溶液的流动相系统为因素进行考察，结果发现，使用不同流动相系统，对各有效成分的峰形及分离度影响不同，乙腈(A)-甲酸(B)溶液流动相系统下各成分分离度、拖尾因子、理论塔板数均较其它流动相条件要好，所以最终选用乙腈(A)-甲酸(B)溶液流动相系统。
(4)供试品的处理方式选择：由于所选检测指标大极性、中等极性、小极性的成分均有，其中还包括水溶性成分，综合考虑各成分的化学性质，初步选定对50％甲醇、70％甲醇、100％甲醇三种溶剂，超声和回流提取两种方式进行考察。结果发现50％～100％甲醇为溶剂，均能提取到其中7种成分，但纯甲醇提取时一些水溶性成分并未提取完全，低浓度的甲醇提取时基线不稳定，峰型较差，为避免成分提取不完全，且保证各成分峰型合格，选用70％甲醇作为提取溶剂。
(5)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.15％甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm；柱温20℃。理论塔板数按党参炔苷峰计算应不低于6000。
(6)专属性实验：在相同试验条件下，采用混合对照品溶液和党参供试品溶液作对照，以70％甲醇溶液作阴性对照。参照步骤(5)所述方法进行测定。结果混合对照品溶液各成分的峰出现在含有党参原药材的供试品溶液中，而在阴性对照溶液中不出现，表明该实验方法具有专属性，混合对照品溶液结果如图1所示，当归供试品溶液结果如图2所示，阴性对照溶液结果如图3所示。
(7)线性关系：取各对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇溶解，配制成每1mL含腺苷23.20μg、色氨酸43.60μg、丁香苷5.0880μg、党参苷I56.40μg、党参新物质61.20μg、党参炔苷61.20μg、白术内酯Ⅲ49.20μg的溶液，作为对照品储备液。分别精密吸取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10mL混合对照品储备液置10mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取各混合对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，参照(5)所述方法测定，结果腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ分别在2.32～23.20μg/mL、4.36～43.60μg/mL、0.5088～5.0880μg/mL、5.64～56.40μg/mL、6.12～61.20μg/mL、6.12～61.20μg/mL、4.92～49.20μg/mL范围内具有良好的线性关系；结果见表1。
表1线性关系考察结果
| 对照品 | 标准曲线 | <![CDATA[R<sup>2</sup>]]> | 线性范围 |
| 腺苷 | Y＝26830X－1421.6 | 0.999 9 | 2.3200～23.2000 |
| 色氨酸 | Y＝21520X－3226.7 | 0.999 8 | 4.3600～43.6000 |
| 丁香苷 | Y＝73727X－356.9 | 0.999 9 | 0.5088～5.0880 |
| 党参苷I | Y＝31567X－3054.5 | 0.999 9 | 5.6400～56.4000 |
| 党参新物质 | Y＝18248X－5262.4 | 0.999 6 | 6.1200～61.2000 |
| 党参炔苷 | Y＝21092X－2956.8 | 0.999 8 | 6.1200～61.2000 |
| 白术内酯Ⅲ | Y＝1377X－217.88 | 0.999 4 | 4.9200～49.2000 |
(8)精密度考察：精密量取专属性考察项下混合对照品溶液20μl，参照(5)所述方法注入液相色谱仪，连续进样6次测定。结果表明各成分的RSD％在0.24～1.28之间。表明仪器精密度好，结果见表2。
表2精密度实验结果表
| 对照品 | RSD％ |
| 腺苷 | 0.92 |
| 色氨酸 | 0.62 |
| 丁香苷 | 0.68 |
| 党参苷I | 0.33 |
| 党参新物质 | 0.89 |
| 党参炔苷 | 0.24 |
| 白术内酯Ⅲ | 1.28 |
(9)重复性考察：制备6份平行供试品溶液，精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，参照(5)所述方法测定。结果表明：各成分RSD％在1.01～3.65之间，重复性好。结果见表3。
表3重复性实验结果表
| 对照品 | RSD％ |
| 腺苷 | 1.01 |
| 色氨酸 | 1.51 |
| 丁香苷 | 3.65 |
| 党参苷I | 2.94 |
| 党参新物质 | 2.24 |
| 党参炔苷 | 2.27 |
| 白术内酯Ⅲ | 1.91 |
(10)稳定性考察：制备供试品溶液，分别于0h，2h，4h，6h，8h，10h，12h，24h精密吸取上述溶液20μl，注入液相色谱仪。按(5)所述方法测定，结果表明供试品溶液在室温放置24h内稳定，RSD％在0.37～2.84之间。结果见表4。
表4稳定性实验结果表
| 供试品 | RSD％ |
| 腺苷 | 1.14 |
| 色氨酸 | 0.48 |
| 丁香苷 | 1.11 |
| 党参苷I | 0.99 |
| 党参新物质 | 0.45 |
| 党参炔苷 | 0.37 |
| 白术内酯Ⅲ | 2.84 |
(11)加样回收率试验：精密称取党参药材粉末(过三号筛)(批号：GSDS20200610，腺苷含量0.0157％、色氨酸含量0.0266％、丁香苷含量0.0022％、党参苷I含量0.0284％、党参新物质含量0.0365％、党参炔苷含量0.0465％、白术内酯Ⅲ含量0.0145％)6份，每份约2.0g，精密称定，按照0.5:1、1:1、1:1.5比例加入混合对照品储备液，置250mL具塞锥形瓶中，加70％甲醇至20mL，称定重量，密塞，超声30min，放冷，再次称定重量，70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。取6份供试品溶液，根据(5)所述条件测定腺苷等7个成分的峰面积，计算各成分的含量、回收率。结果各成分平均回收率在99.09％～103.68％，RSD值在1.21％～3.68％之间。表明加入的对照品能准确地回收，测定方法准确可靠。试验结果见表5。
表5加样回收结果表
(12)耐用性实验：制备供试品溶液3份，精密吸取供试品溶液20μl，分别在不同变动因素：设备、色谱柱、柱温下分别进样，记录腺苷等8个成分的峰面积，计算含量，考察色谱条件的耐用性。结果各条件下，各成分含量的RSD％值均小于3％，表明该色谱条件耐用性良好。结果见表6。
表6耐用性实验结果表
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)本发明选择的检测指标腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ，它们既是党参药材中苯丙素类、氨基酸类、核苷类、倍半萜内酯类和聚乙炔类的代表性化学成分，也是主要的药理活性成分。
(2)本发明建立的党参药材的HPLC含量测定方法，对党参中苯丙素类、氨基酸类、核苷类、倍半萜内酯类、聚乙炔类的指标性成分进行同时检测，实现对党参药材质量进行更加全面的评价和控制。
(3)本发明操作简便，适用性好，能稳定的用于党参药材的含量测定。且本发明选择的检测指标均为党参药材中含量较高，且具有药理活性的成分。能够为党参药材临床应用的安全性及有效性提供依据。
(4)本发明首次通过高效液相色谱法同时检测腺苷等7个成分的含量，节约了检测时间和成本，不仅准确且简单易行。实现了对党参药材质量的全面评价和控制，从而为党参药材临床用药的有效性、安全性提供了保障。本发明稳定性好，重复性好，回收率高，具有较强的专属性。
附图说明
图1为本发明的实验中混合对照品溶液的液相色谱图；
图2为本发明的实验中党参药材样品溶液的液相色谱图；
图3为本发明的实验中阴性对照溶液的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1
本实施例的同时检测党参中有效成分含量的方法，通过HPLC测定不同产地党参药材中的腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ含量。具体包括如下步骤：
步骤(1)对照品溶液的制备：
精密称取腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ对照品适量，加甲醇配制成每1ml含腺苷9.28μg、色氨酸17.44μg、丁香苷2.0352μg、党参苷I22.56μg、党参新物质24.48μg、党参炔苷24.48μg、白术内酯Ⅲ19.68μg的溶液，即得。
步骤(2)供试品溶液的制备：
取不同产地试验样品，取本品粉末(过三号筛)约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
步骤(3)样品检测：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速0.8mL/min，以乙腈为流动相A，以0.15％甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm；柱温20℃。理论塔板数按党参炔苷峰计算应不低于6000。
| 时间 | 乙腈(A)％ | 0.15％甲酸水(B)％ | 总计 |
| 0 | 5 | 95 | 100％ |
| 10 | 8 | 92 | 100％ |
| 36 | 14 | 86 | 100％ |
| 55 | 30 | 70 | 100％ |
| 58 | 55 | 45 | 100％ |
| 60 | 60 | 40 | 100％ |
| 70 | 70 | 30 | 100％ |
| 75 | 5 | 95 | 100％ |
| 80 | 5 | 95 | 100％ |
分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本实施例的党参样品产地及含量测定结果见表7。
表7党参样品含量测定结果
根据含量检测结果来看，该法可稳定用于党参药材含量检测。
实施例2
本实施例的同时检测党参中有效成分含量的方法，通过HPLC测定不同党参饮片中的腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ的含量。具体包括如下步骤：
步骤(1)对照品溶液的制备：
精密称取腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ对照品适量，加甲醇配制成每1ml含腺苷2.32μg、色氨酸4.36μg、丁香苷0.5088μg、党参苷I 5.64μg、党参新物质6.12μg、党参炔苷6.12μg、白术内酯Ⅲ4.92μg的溶液，即得。
步骤(2)供试品溶液的制备：
取不同饮片样品，取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇20mL，密塞，称定重量，超声60分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
步骤(3)样品检测：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速0.5mL/min，以乙腈为流动相A，以0.10％甲酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为265nm；柱温18℃。理论塔板数按党参炔苷计算应不低于6000。
| 时间 | 乙腈(A)％ | 0.15％甲酸水(B)％ | 总计 |
| 0 | 10 | 90 | 100％ |
| 10 | 10 | 90 | 100％ |
| 36 | 25 | 75 | 100％ |
| 55 | 35 | 65 | 100％ |
| 58 | 55 | 45 | 100％ |
| 60 | 65 | 35 | 100％ |
| 70 | 75 | 25 | 100％ |
| 75 | 10 | 90 | 100％ |
| 80 | 10 | 90 | 100％ |
分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本实施例的党参饮片品种及含量测定结果见表8。
表8党参样品含量测定结果
根据含量检测结果来看，该法可稳定用于党参药材含量检测。
实施例3
本实施例的同时检测党参中有效成分含量的方法，通过HPLC测定不同干燥方式的党参药材中的腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ含量包括如下步骤：
步骤(1)对照品溶液的制备：
精密称取腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ对照品适量，加甲醇配制成每1ml含腺苷23.20μg、色氨酸43.60μg、丁香苷5.088μg、党参苷I56.40μg、党参新物质61.20μg、党参炔苷61.20μg、白术内酯Ⅲ49.20μg的溶液，即得。
步骤(2)供试品溶液的制备：
取本品粉末(过三号筛)约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入100％甲醇30mL，密塞，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用100％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
步骤(3)样品检测：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速2.0mL/min，以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为270nm；柱温22℃。理论塔板数按党参炔苷峰计算应不低于6000。
分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，
即得。
本实施例的党参样品干燥方式及含量测定结果见表9。
表9党参样品含量测定结果表
根据含量检测结果来看，该法可稳定用于党参药材含量检测。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种同时检测党参中有效成分含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤（1）、供试品溶液的制备：
将本品粉末过三号筛，取0.2~5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%~100%甲醇20~50mL，密塞，称定重量，超声提取30~60分钟，放冷，再称定重量，用50%~100%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
步骤（2）、对照品溶液的制备：
每1mL对照品溶液含腺苷2.32~23.20μg、色氨酸4.36~43.60μg、丁香苷0.5088~5.0880μg、党参苷I5.64~56.40μg、党参新物质6.12~61.20μg、党参炔苷6.12~61.20μg、白术内酯Ⅲ4.92~49.20μg的溶液；
步骤（3）、样品检测：
色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.5~2ml/min，柱温为18℃~22℃；检测波长为260nm~270nm中的一个或两个波长；进样量5~20μl；理论塔板数大于6000；流动相为乙腈与甲酸组成的混合溶剂；甲酸水溶液含甲酸的浓度为0.15%；
然后进行梯度洗脱，分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各5~20μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
按下表进行梯度洗脱：
。
2.根据权利要求1所述的同时检测党参中有效成分含量的方法，其特征在于，所述有效成分为党参药材中腺苷、色氨酸、丁香苷、党参苷Ⅰ、党参新物质、党参炔苷、白术内酯Ⅲ。
3.根据权利要求1所述的同时检测党参中有效成分含量的方法，其特征在于：
步骤（2）中，每1mL对照品溶液含腺苷9.28 μg、色氨酸17.44 μg、丁香苷2.0352 μg、党参苷I 22.56 μg、党参新物质24.48 μg、党参炔苷24.48 μg、白术内酯Ⅲ 19.68 μg的溶液，即得。
4.根据权利要求1所述的同时检测党参中有效成分含量的方法，其特征在于：步骤（3）中，色谱条件：
流速0.8ml/min，柱温20℃；检测波长260nm；进样量20μl。
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