CN113151253A - 一种全血dna提取试剂盒及提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于试剂盒技术领域，尤其为一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris‑HCL和250％的无水乙醇组成。其有益效果是，本发明使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高，便于工作人员进行操作，降低了工作人员的劳动强度，方便研究人员进行后续的实验。
Description
技术领域
本发明属于试剂盒技术领域，具体涉及一种全血DNA提取试剂盒及提取方法。
背景技术
随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点，在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析（GWAS）、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从各类样本中提取基因组DNA，由于血液样本取材方便，所含基因组DNA丰富可靠，因此上述许多研究均以血液作为样本提取完整的基因组DNA。
虽然传统的酚氯仿提取核酸的方法能够获得质量较好的核酸，但是其中用到的化学物质却有着不可忽视的毒性，而且整个提取过程耗时较长，浪费大量的时间和人力物力，进一步来说，现在普及的柱提法核酸提取试剂也能获得质量很好的核酸，毒性也可以忽略，但是耗费的时间同样不可忽视。
发明内容
为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种全血DNA提取试剂盒及提取方法，具有操作过程安全便捷、节省了大量的时间和人力物力的特点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液。
优选的，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。
优选的，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。
优选的，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成。
优选的，所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。
一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：
步骤一：取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，震荡混匀1min，室温静置 10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体；
步骤二：再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液；
步骤三：向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜；
步骤四：向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h；然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中；
步骤五：向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液。
步骤六：加入30～60ul洗脱液，放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高，便于工作人员进行操作，降低了工作人员的劳动强度，方便研究人员进行后续的实验。
2、本发明通过设置缓冲液、蛋白酶K和纯化液，缓冲液能够将全血样本内的红白细胞进行分离，尽可能去除人基因组DNA的影响和干扰，蛋白酶K能够水解破碎细菌细胞，并且降解蛋白，释放细菌基因组DNA，提高了提取试剂盒的提取的工作效率，纯化液能够沉淀糖类、脂类、大量蛋白质和高分子RNA。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为本发明的全血DNA提取方法示意图
图2为本发明的缓冲液配制示意图；
图3为本发明的裂解液配制示意图；
图4为本发明的蛋白酶K配制示意图；
图5为本发明的纯化液配制示意图；
图6为本发明的洗涤液1配制示意图；
图7为本发明的洗涤液2配制示意图；
图8为本发明的洗脱液配制示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
请参阅图1-8，本发明提供以下技术方案：一种全血DNA提取试剂盒，包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液，缓冲液能够将全血样本内的红白细胞进行分离，尽可能去除人基因组DNA的影响和干扰，蛋白酶K能够水解破碎细菌细胞，并且降解蛋白，释放细菌基因组DNA，提高了提取试剂盒的提取的工作效率，纯化液能够沉淀糖类、脂类、大量蛋白质和高分子RNA。
具体的，所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。
具体的，所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。
具体的，所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成，所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。
一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：
步骤一：取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，震荡混匀1min，室温静置 10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体；
步骤二：再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液；
步骤三：向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜；
步骤四：向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h；然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中；
步骤五：向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液。
步骤六：加入30～60ul洗脱液，放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液，本发明使用的试剂中不含苯、氯仿等有毒物质，对人体无危害，提取纯化步骤简单，操作过程安全便捷、基因组DNA产物含量高，完整度好，纯度高，便于工作人员进行操作，降低了工作人员的劳动强度，方便研究人员进行后续的实验。
本发明的工作原理及使用流程：本发明先取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，缓冲液是由 10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，然后震荡混匀1min，室温静置 10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体，其次，再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液，然后，向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，从而吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜，再然后，向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，纯化液由7.5M氯化锂和氯化钠组成，然后振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h，然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中，其次，向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，洗涤液2由5mM的 Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液，最后，加入30～60ul洗脱液，洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：包括缓冲液，裂解液、蛋白酶K，纯化液，洗涤液1、洗涤液2和洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述缓冲液由10mM的Tris、10mM的NaCl、5mM的MgCl2组成，所述裂解液由5mM的异硫氰酸胍、5M的碘化锂、200mM的柠檬酸三钠和5％的Tween20组成。
3.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述蛋白酶K由20mg的蛋白酶K组成，所述纯化液由7.5M的氯化锂和氯化钠组成。
4.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述洗涤液1由4mM的异硫氰酸胍、50mM的Tris-HCL和250％的无水乙醇组成，所述洗涤液2由5mM的Tris-HCL、50mM的NaCL和80％的无水乙醇组成。
5.根据权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒，其特征在于：所述洗脱液由10mM的Tris、1mM的EDTA组成。
6.一种全血DNA提取方法，包括如下步骤：其特征在于：
步骤一：取50～200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中，然后向该离心管中加入0.3倍体积的缓冲液，震荡混匀1min，室温静置 10min，加入离心机，2000rpm低速离心5min，吸弃上层液体；
步骤二：再向每个1.5m离心管中加入等于血液样本8倍体积的红细胞裂解液，将血液样本加入该离心管中，手动振荡混匀，4℃放置20～30min后，2000rpm低速离心15min；离心结束后，吸弃上清液；
步骤三：向上述液体中加入20ul蛋白酶K溶液，吹打混匀后，转移至2.0ml离心管中，65℃水浴0.5～3h，沉淀消失后37℃水浴过夜；
步骤四：向水浴过夜后的混合液中分别加入800μl纯化液，振荡混匀，放入-20℃冰箱30min～1h；然13000rpm高速离心10min，将离心后的上清液倒入新的2.0ml离心管中；
步骤五：向离心管中加入500～800ul洗涤液1和洗涤液2，将该离心管震荡混匀1min，静置30s后，然后吸弃上清液,
步骤六：加入30～60ul洗脱液，放置2min，12000rpm，离心2min，收集液体，即为DNA溶液。
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- 2021-04-20 CN CN202110423715.8A patent/CN113151253A/zh active Pending
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