CN113151185B - 分泌抗fgf18单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗、应用 - Google Patents

分泌抗fgf18单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗、应用 Download PDF

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Abstract

本发明技术提供的分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株为2C5D6或/和3E4F7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CGMCC NO.C202091或/和CGMCC NO.C202092。本发明还提供分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；以及提供了含有所述单克隆抗体的试剂盒；本发明的单克隆抗体能在制备检测FGF18蛋白试剂中应用。本发明通过获得分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，获得针对FGF18不同抗原表位的单克隆抗体2种，特异性强且灵敏度高，可通过配对检测体液(如血液、尿液等)中FGF18蛋白含量，应用于检测FGF18蛋白过量表达或诊断以FGF18蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。

Description

分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗、应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株。
背景技术
成纤维细胞生长因子(FGFs)是由约150-200氨基酸组成的多肽，以两种密切相关的形式存在，即碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)。FGFs作为细胞间信号分子，在胚胎发生和分化过程中起重要作用。其对很多种属的骨细胞是一种潜在的丝裂原，能诱导包括成纤维细胞，成软骨细胞、平滑肌细胞、成骨细胞、神经外胚层、骨骼肌细胞的复制。其中，FGF18是一个由207氨基酸组成的高度保守蛋白，与已发现的FGFs其他成员有30％-70％的同源性，最早由日本科学家从老鼠胚胎中分离得到。小鼠FGF18与人及大鼠的氨基酸序列具有99.5％和99％的同源性。在结构上，FGF18和FGF8、FGF17相似，为同一亚家族成员，具有70％-80％的氨基酸序列同源性。
FGF18存在于多种细胞类型中，其功能不仅仅局限于骨骼发育，可刺激众多间质细胞和上皮细胞及组织的增殖，包括肺、肾脏、心脏、睾丸、脾脏、骨骼肌和大脑。有研究表明，FGF18是对多种细胞有效的分裂素，在肝脏和小肠发育过程中扮演着重要的角色。此外，FGF18在血管形成、形态发生、肿瘤生长和其他细胞组织发育过程中发挥着重要的作用，例如miR-21-5p靶向结合FGF18基因, 激活PI3K/Akt信号通路,从而促进人鼻咽癌组织及CNE1细胞的增殖；FGF18也是促进卵巢癌进展的一个重要因子。因此FGF18的定量检测具有重要的临床意义。而市场上现有的检测试剂盒，体系中多采用多克隆抗体，抗体特异性差，不能区分FGF18高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对 FGF18检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。因此急需获得特异性识别FGF18蛋白单克隆抗体，满足临床样本检测要求，提高检测的灵敏度和特异性。
本发明通过双抗体夹心的原理，利用高亲和力高特异性配对单克隆抗体制备检测试剂盒，采用全自动化学发光仪检测样品浓度。
发明内容
现有的检测体系中多采用多克隆抗体；抗体特异性差，不能区分FGF18高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对FGF18检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。
为了解决上述存在的问题，本发其中一个目的为提供一种分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株；本发明的目的之二在于提供分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；本发明的目的之三在于提供含有所述单克隆抗体的试剂盒；本发明的目的之四在于提供所述单克隆抗体在制备检测FGF18蛋白试剂中的应用。
本发明技术方案的其中一方面，提供了分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株为2C5D6和/或3E4F7，保藏于中国典型培养物保藏中心，(保藏中心地址为：中国.武汉.武汉大学，日期：2020-06-19，电话：027-68752319)， 2C5D6保藏编号为CGMCCNO.C202091,3E4F7保藏编号为CGMCC NO.C202092。
本发明技术方案的其中一方面，提供了上述的分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，2C5D6或3E4F7单克隆抗体的抗原表位处于FGF18 蛋白的C端或FGF18蛋白的M段，处于FGF18蛋白的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；处于FGF18蛋白的M段的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。
本发明技术方案的其中一方面，提供了FGF18蛋白检测试剂盒，FGF18蛋白检测试剂盒包含上述单克隆抗体(即2C5D6分泌的单克隆抗体)的磁微粒。
本发明技术方案的其中一方面，提供了FGF18蛋白检测试剂盒，FGF18蛋白检测试剂盒还包含校准品FGF18蛋白、碱性磷酸酶标记的检测抗体(即3E4F7 分泌的单克隆抗体)和化学发光底物。
本发明技术方案的其中一方面，提供了FGF18蛋白检测试剂盒，化学发光底物为AMPPD，单克隆抗体的磁微粒即(包被抗体)为杂交瘤细胞株2C5D6分泌的单克隆抗体，检测抗体为杂交瘤细胞株3E4F7分泌的单克隆抗体。
本发明技术方案的其中一方面，提供了上述单克隆抗体的应用，单克隆抗体用于制备检测FGF18蛋白过量表达或诊断以FGF18蛋白异常表达的试剂中。
本发明技术方案的其中一方面，提供了上述单克隆抗体的应用，上述试剂用于制备FGF18蛋白检测试剂盒。
本发明的有益效果在于：本发明通过获得分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，获得针对FGF18不同抗原表位的单克隆抗体2种，特异性强且灵敏度高，可通过配对检测体液(如血液、尿液等)中FGF18蛋白含量，应用于检测FGF18 蛋白过量表达或诊断以FGF18蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。
附图说明
图1为重组FGF18蛋白SDS-PAGE电泳图；
图2为2C5D6和3E4F7抗体SDS-PAGE电泳图；
图3为FGF18截短蛋白免疫印迹WB检测结果；
图4为装载试剂的检测条。
具体实施方式
下述的实施例是为了进一步说明本发明的一些优选实施例，并非全部实施例。本领域专业人员在没有进行创造性劳动的前提下做出的基于本发明的其他实施例，都属于本发明的权利保护范围。下面将结合附图对本发明作进一步的说明。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、FGF18的重组蛋白表达和纯化
从卵巢癌组织提取RNA后经随机引物RT-PCR得到的cDNA为模板，设计引物进行FGF18基因的克隆，引物具体为：FGF18-F：5’-ACACACCCTGCCTAG-3’(SEQ ID NO.1)；FGF18-R：5’-GGGCGCTGAATACAT-3’)(SEQ ID NO.2)。扩增的FGF18 基因插入到含有6×His标签的pcDNA3.1载体上，得FGF18-pcDNA3.1。然后将FGF18-pcDNA3.1转化至DH5α，挑取阳性克隆并大量培养后，用高纯度质粒提取试剂盒提取重组质粒FGF18-pcDNA3.1。重组质粒转入293T细胞中，并同时转染pcDNA3.1空载体作为阴性对照，分别在含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养72h，收集上清，利用0.22μm滤膜过滤上清液。
将所得500mL滤液进行非变性条件下的Ni-NTA亲和层析，平衡缓冲液为 50mMPBS、10mM咪唑、150mM NaCl，pH 7.6。上样完毕后，清洗10mL；用50mM PBS、250mM咪唑、150mMNaCl，pH7.6洗脱，收集洗脱液。利用10kD超滤管浓缩蛋白溶液，将蛋白保存于pH 7.450mMPBS缓冲液中，-80℃保存。纯化的蛋白进行SDS-PAGE电泳纯度鉴定，分子量大小在23.99kD左右，灰度分析表明蛋白纯度达到95％以上，见图1。
实施例2、FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备
小鼠免疫：用FGF18蛋白免疫3批BALB/c小鼠，每次3只。每只小鼠每次免疫50μg抗原。首次免疫FGF18抗原与弗氏完全佐剂1:1混合，随后FGF18 与弗氏不完全完全佐剂1:1混合，每隔两周免疫一次，共免疫3次，第三次免疫十天后断尾采血，检测血清效价。
杂交瘤细胞融合：检测小鼠血清效价达到1:10000后用FGF18抗原(不含佐剂)腹腔加强免疫(30μg)，3天后无菌取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞大约按4:1比例混合在50mL离心管，用培养基洗涤两次后弃上清，然后加入1mL预热50％PEG-1450作用
1min后，水浴中缓缓摇动90s，立即缓慢滴加37℃预热的无血清DMEM培养基15mL，37℃水浴5min，然后补加无血清DMEM培养基至40mL，1000rpm/mim 离心10min弃上清，加40mL预热的HAT培养基，轻吹打混匀，转移至已铺饲养细胞的96孔培养板中，每孔100μL，置培养箱中培养。鉴定细胞上清，对阳性杂交瘤进行3次克隆筛选，得到分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞3株，分别为 2C5D6、4D8G7和3E4F7。
实施例3、FGF18单克隆抗体制备、纯化、效价检测及特异性分析
单抗腹水制备：将筛选的3种杂交瘤细胞株分别在培养基中培养至90％密度，收集细胞，将细胞稀释至3×106个/mL。10-12周BALB/c小鼠适应性饲养一周后，腹腔注射免疫抑制剂液体石蜡，0.5mL/只，7d后腹部接种稳定分泌抗体、状态较好的杂交瘤细胞，约(1-2)X106/只，7-10d后，待小鼠腹部膨胀，抽取腹水，合并收集腹水上清。
抗体纯化：收集小鼠腹水，用0.45μm的滤器过滤溶液，加入终浓度为50％的硫酸铵固体，4℃搅拌均匀后，静置1h，12000rpm收集沉淀，并用50mM PBS 溶液重溶沉淀。将得到的粗纯化抗体以1mL/min流速上样到Protein A-Sepharose亲和层析柱中，用5个柱体积的结合缓冲液(50mMPBS，pH7.0)清洗，然后用0.1M甘氨酸-盐酸溶液pH2.7洗脱抗体(每个收集管预先加入1M pH 9.0Tris缓冲液中和)，得到目的抗体，并用50mM PBS溶液透析3次。将透析后的抗体进行10％SDS-PAGE电泳，结果显示，3种抗体在55kD与25kD处有条带，灰度分析纯度均大于90％，2C5D6、4D8G7和3E4F7抗体SDS-PAGE见图2 所示。
单克隆抗体效价检测：以1μg/ml的重组FGF18蛋白的碳酸盐缓冲液(pH 9.5)，100μl体积4℃过夜包被微孔板，梯度稀释各个抗体(1：1000，1：2000， 1：4000，1：8000，1:16000，1:32000，1:64000，1:128000)，加入羊抗鼠 IgG-AP(50ng/ml)，确定纯化后单克隆抗体效价(S/N>2.1)，2C5D6、3E4F7和4D8G7 单克隆抗体效价均为1：128000。
单克隆抗体特异性分析：分别以1μg/ml的FGF18、FGF8和FGF17蛋白的 CBS缓冲液100μl体积4℃过夜包被微孔板，将各个抗体倍比稀释(500ng/ml、 250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、15.625ng/ml、7.8125ng/ml 和0ng/ml)后加入到微孔反应板，然后加入羊抗鼠IgG-AP(50ng/ml)，结果如表 1所示。结果确定2C5D6特异性识别FGF18蛋白，3E4F7和4D8G7与FGF8和FGF17 蛋白均可反应。
表1、单克隆抗体特异性分析
Figure RE-GDA0003087490180000051
Figure RE-GDA0003087490180000061
实施例4、FGF18单克隆抗体配对验证
以3μg/ml 2C5D6抗体包被微孔反应板，加入100μl不同浓度 (10-1600pg/mL)的FGF18校准品，37℃孵育60min，洗涤后分别加入100μL浓度为100ng/ml的AP标记的3E4F7抗体和4D8G7抗体，并于37℃孵育60min，洗涤后加入AMPPD化学发光底物于仪器测定其化学发光值，结果如表2所示。从结果上看，2C5D6与3E4F7配对更佳，灵敏度和发光值更高。
表2.FGF18单克隆抗体配对结果
校准品(pg/ml) 3E4F7 4D8G7
0 8 10
50 214.36 212.43
100 460.68 793.62
200 929.72 578.19
400 1821.57 464.87
800 3744.12 1248.52
1600 5327.48 2571.43
实施例5、FGF18单克隆抗体表位鉴定
重组截断FGF18蛋白构建表达：根据FGF18蛋白序列，设计了N、M、C端的序列以及FGF18全长蛋白(记为FGF18-F)，连接表达载体pET30a，并转入表达菌株BL21(DE3)中。在LB培养基中，IPTG 0.1mmol/L 25℃条件下过夜诱导FGF18 截断重组蛋白可溶性表达。原核重组表达经6×His标签亲和纯化，纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳，纯度均在90％以上。
FGF18-N片段(28-56)：EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQ(SEQ ID NO.3)；
FGF18-M片段(57-128)：
LYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECV(SEQ ID NO.4)；
FGF18-C片段(170-207)：DVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPA(SEQ IDNO.5)
FGF18-F片段(2 8-207)：
MYSAPSACTCLCLHFLLLCFQVQVLVAEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGK HIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKV LENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIR PTHPA(SEQ IDNO.6)
蛋白免疫印迹法WB确认抗体识别表位：重组蛋白FGF18-N/M/C、FGF18全长4种蛋白取5μg上样，进行15％SDS-PAGE电泳。电泳完成后，150V恒压条件下，蛋白转0.45pgmPVDF。转膜完成后利用含5％BSA的PBST溶液37℃封闭两小时。分别用5μg/mL的抗体(2C5D6/3E4F7)溶液37℃孵育1小时。孵育完成后，加入50ng/ml的兔抗鼠IgG-HRP孵育1小时。清洗完成后，加入DAB显色液进行显色。FGF18全长蛋白作为阳性对照，FGF18-N/M/C片段位置棕色沉淀物质，则表明抗体识别该目的片段。结果显示，2C5D6抗体识别FGF18蛋白的C段，3E4F7 抗体识别FGF18蛋白M段，见图3。
实施例6、FGF18检测试剂盒
本实施例提供一种化学发光免疫检测试剂条，试剂条分别设有一个样本孔4 和一个检测孔3，从样本孔4依次设有九个试剂孔2、两个反应孔1，如图4(1- 反应孔；2-试剂孔；3-检测孔；4-样本孔；5-手把区)。由于所述试剂条除了样本孔中样本为外源添加外，试剂孔中的试剂为预先封装进试剂条，采用铝塑复合材料进行封膜，这些试剂含有包被捕获抗体2C5D6的磁珠保存液、清洗液、AP 标记3E4F7检测抗体保存液、底物等试剂。
(一)样本-磁珠孵育
将50μL血浆样本加入试剂条的样本孔4中，将试剂条加入到配套的分析仪器中，仪器中的移液模块将50μL样本转移至反应孔1中，随后将试剂孔2 中的100μL含包被捕获抗体2C5D6的磁珠保存液转移至样本所在反应孔1，仪器的温育结构维持反应孔1恒温状态，为37度，30min。
(二)磁珠转移清洗
上一步温育结束，仪器的磁分离模块将反应孔1中的磁微粒吸附富集，随后移液模块将不含磁微粒的废液吸去。然后，移液模块将试剂孔2中的清洗液加入反应孔1中，同时，磁分离模块关闭，移液模块对反应孔1进行吹打混合，静止30秒，磁分离模块启动，将磁微粒吸附，移液模块将清洗液吸去，完成一次清洗。以上清洗步骤进行三次。
(三)检测抗体结合
当清洗完成后，仪器模块将试剂孔2中的200μL AP标记3E4F7抗体转移至反应孔1中，吹打，将磁微粒和抗体混合，仪器的温育结构维持反应孔1恒温状态，为37度，30min。
(四)磁珠转移清洗
上一步温育结束，仪器的磁分离模块将反应孔1中的磁微粒吸附富集，随后移液模块将不含磁微粒的废液吸去。然后，移液模块将试剂孔2中的清洗液加入反应孔1中，同时，磁分离模块关闭，移液模块对反应孔1进行吹打混合，静止30秒，磁分离模块启动，将磁微粒吸附，移液模块将清洗液吸去，完成一次清洗。以上清洗步骤进行三次。
(五)信号检测
当上一步清洗完成后，移液模块将反应底物从试剂孔2中转移至反应孔1 中，随后，吹打混匀，将混合液吸取转移至检测孔3中，仪器的信号测定模块对检测孔3的信号进行信号采集分析，获得对应的浓度值。
(六)信号检测
FGF18检测试剂盒用于卵巢癌诊断:从医院收集100例卵巢癌患者术前血清；同时收集100例健康人员血清。使用FGF18检测试剂盒检测卵巢癌、正常人血清中FGF18浓度。ROC曲线统计结果显示，曲线下面积为0.924，以150ng/mL 作为检测参考值，FGF18检测试剂盒特异性为95％，灵敏度为92％。
综上所述，本发明提供的单克隆抗体均可用于样品中FGF18蛋白的检测，且特异性强、灵敏度高。2种单克隆抗体特异识别FGF18的不同区段，可通过配对检测体液中人FGF18蛋白含量，应用于检测FGF18蛋白过量表达或诊断以 FGF18蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。
上述的实施例是为了进一步说明本发明的一些优选实施例，并非全部实施例。本领域专业人员在没有进行创造性劳动的前提下做出的基于本发明的其他实施例，都属于本发明的权利保护范围。
序列表
<110> 苏州仁端生物医药科技有限公司
<120> 分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗、应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
acacaccctg cctag 15
<210> 2
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gggcgctgaa tacat 15
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 3
Glu Glu Asn Val Asp Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg Ala
1 5 10 15
Arg Asp Asp Val Ser Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln
20 25
<210> 4
<211> 72
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 4
Leu Tyr Ser Arg Thr Ser Gly Lys His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg
1 5 10 15
Ile Ser Ala Arg Gly Glu Asp Gly Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val
20 25 30
Glu Thr Asp Thr Phe Gly Ser Gln Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr
35 40 45
Glu Phe Tyr Leu Cys Met Asn Arg Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro
50 55 60
Asp Gly Thr Ser Lys Glu Cys Val
65 70
<210> 5
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 5
Asp Val His Phe Met Lys Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln
1 5 10 15
Lys Pro Phe Lys Tyr Thr Thr Val Thr Lys Arg Ser Arg Arg Ile Arg
20 25 30
Pro Thr His Pro Ala
35
<210> 6
<211> 207
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 6
Met Tyr Ser Ala Pro Ser Ala Cys Thr Cys Leu Cys Leu His Phe Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Phe Gln Val Gln Val Leu Val Ala Glu Glu Asn Val Asp
20 25 30
Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg Ala Arg Asp Asp Val Ser
35 40 45
Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Tyr Ser Arg Thr Ser Gly Lys
50 55 60
His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg Ile Ser Ala Arg Gly Glu Asp Gly
65 70 75 80
Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val Glu Thr Asp Thr Phe Gly Ser Gln
85 90 95
Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Cys Met Asn Arg
100 105 110
Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro Asp Gly Thr Ser Lys Glu Cys Val
115 120 125
Phe Ile Glu Lys Val Leu Glu Asn Asn Tyr Thr Ala Leu Met Ser Ala
130 135 140
Lys Tyr Ser Gly Trp Tyr Val Gly Phe Thr Lys Lys Gly Arg Pro Arg
145 150 155 160
Lys Gly Pro Lys Thr Arg Glu Asn Gln Gln Asp Val His Phe Met Lys
165 170 175
Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln Lys Pro Phe Lys Tyr Thr
180 185 190
Thr Val Thr Lys Arg Ser Arg Arg Ile Arg Pro Thr His Pro Ala
195 200 205

Claims (7)

1.分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为2C5D6或/和3E4F7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CGMCC NO.C202091或/和CGMCCNO.C202092。
2.根据权利要求1所述的分泌抗FGF18单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的抗原表位处于FGF18蛋白的C端或FGF18蛋白的M段，处于FGF18蛋白的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；处于FGF18蛋白的M段的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。
3.FGF18蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述FGF18蛋白检测试剂盒包含权利要求2所述的单克隆抗体的磁微粒。
4.根据权利要求3所述的FGF18蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述FGF18蛋白检测试剂盒还包含校准品FGF18蛋白、碱性磷酸酶标记的检测抗体和化学发光底物。
5.根据权利要求4所述的FGF18蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为AMPPD，所述单克隆抗体的磁微粒中的单克隆抗体为杂交瘤细胞株2C5D6分泌的单克隆抗体，所述碱性磷酸酶标记的检测抗体中的单克隆抗体为杂交瘤细胞株3E4F7分泌的单克隆抗体。
6.根据权利要求2所述的单克隆抗体的应用，其特征在于，所述单克隆抗体用于制备检测FGF18蛋白过量表达或诊断以FGF18蛋白异常表达的试剂中。
7.根据权利要求6所述的单克隆抗体的应用，其特征在于，所述试剂用于制备FGF18蛋白检测试剂盒。
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