CN113151069B - 一种枯草芽孢杆菌及其在制备抗菌肽、饲料中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种枯草芽孢杆菌，其特征在于：该菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是中国北京，保藏日期是2020年11月03日，保藏编号为CGMCC No.20997。所述枯草芽孢杆菌可以分泌三种特定抗菌肽，所述枯草芽孢杆菌及其代谢产物具有抗菌和抗炎症的双重效果。本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌的多种用途。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其在制备抗菌肽、饲料中的应用

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其代谢产物，属于微生物领域。

技术背景

魏氏梭菌又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)，是临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌。它广泛分布于自然界，存在于很多健康动物的肠道中，当饲养和环境条件改变时，可引起畜禽的产气荚膜梭菌病。在家禽和母猪养殖领域，产气荚膜梭菌是重要的危害动物健康的病原菌，其分为三种等级：当肠道中的产气荚膜梭菌<10⁴CFU/g，不影响动物的生产性能和健康水平，当处于10⁴-10⁶CFU/g，动物处于亚临床状态，没有明显的病理症状，但其生产性能下降，表现为饲料转化率降低、产蛋率降低、母猪繁殖性能下降；当处于>10⁶CFU/g，其表现为临床状态，如精神倦怠、粪便带血、肠道出血和胀气，死亡率高等症状，所以预防肠道中产气荚膜梭菌的过度增殖，对动物肠道健康及提高养殖效益具有重要意义。而传统的方法是在饲料中添加抗生素如恩拉霉素、维吉尼亚霉素等，效果较好，但极容易造成抗生素的残留影响食品安全。近些年，随着规模化养殖的普及和扩大，抗生素的泛滥用和超量添加，给人类健康造成潜在威胁。中华人民共和国农业农村部公告第194号要求，自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。开发替代抗生素类新型促生长饲料添加剂成为研究的热点。

枯草芽孢杆菌作为公认安全的益生菌，具有促进动物生长，无药残、绿色环保的饲料添加剂。而一般的枯草芽孢杆菌不产生抗菌肽，无法直接针对产气荚膜梭菌起抑制所用，从而难以达到理想的效果。而近期许多重要研究发现，能够产生抗菌肽的枯草芽孢杆菌具有改善动物健康，降低肠道病原菌数目以及抗感染的作用，是潜在的抗生素替代品(Pathogen elimination by probiotic Bacillus via signaling interference，Nature，2018，562：532–537)。比如，表面活性素(Surfactin)是一种环状脂肽生物表面活性剂，是由β-羟基脂肪酸和7个氨基酸组成的环状脂肽组成，可介导单价和二价阳离子(如钙离子)穿过脂质双层膜的通量。Surfactin可以作为抗微生物佐剂，具有抗菌，抗真菌，抗支原体和溶血作用。iturin通过破坏靶细胞的细胞膜而具有抗真菌感染的作用，同时对革兰氏阳性病原菌具有一定的抑制作用。Mersacidin是上世纪90年代发现的一类具有很强抑菌作用的抗菌多肽，其由21个氨基酸组成，多种革兰氏阳性病原菌具有抑制作用(Gabriele，FEMS Microbiology Letters 127(1995)121-126)。

现有技术中枯草芽孢杆菌产生的抗菌肽单一，大部分对产气荚膜梭菌没有抑制作用或抑制作用较弱，无法对坏死性肠炎起到预防和治疗作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以分泌特定抗菌肽配方的枯草芽孢杆菌。所述枯草芽孢杆菌及其代谢产物具有抗菌和抗炎症的双重效果。

本发明的目的是通过以下措施实现的：

一种枯草芽孢杆菌，其特征在于：该菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是中国北京，保藏日期是2020年11月03日，保藏编号为CGMCCNo.20997。

本发明提供了上述枯草芽孢杆菌在制备抗菌和/或抗炎生物兽药或功能性饲料添加剂中的新用途。

优选的，所述枯草芽孢杆菌在制备抗菌肽中的用途。

本发明所述枯草芽孢杆菌，可以产生3种特定抗菌肽，对产气荚膜梭菌具有很强的抑菌作用，对促进动物生长和降低肠道产气荚膜梭菌数量具有明显的作用，同时还具有抗炎效果。

本发明另一目的在于提供上述枯草芽孢杆菌的代谢产物。

一种抗菌肽组合物，包括表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(iturin)、Mersacidin。优选的，所述表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(iturin)、Mersacidin的质量比为15～20：5～10：10～15。具体的，所述枯草芽孢杆菌可至少产生三种抗菌肽Surfactin、iturin、Mersacidin，产量为1.5g/L、0.8g/L和1.4g/L。

上述枯草芽孢杆菌或其发酵产物和/或上述抗菌肽组合物在饲料中的应用。

本发明另一目的在于提供一种饲料。

一种饲料，包含所述枯草芽孢杆菌或其发酵产物和/或所述抗菌肽组合物，所述枯草芽孢杆菌添加量为100-200g/T。可明显降低家禽粪便中产气荚膜梭菌数量，提高饲料转化率。

采用上述的枯草芽孢杆菌制备所述的抗菌肽组合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：挑取枯草芽孢杆菌(CGMCC No.20997)单菌落3-5个，接种于5mL营养肉汤培养基，培养11-12小时，再转接于100mL营养肉汤培养基，继续培养8小时后，接种于50L发酵罐中。

步骤2：发酵罐培养基为：淀粉3g/L，豆粕粉2g/L，硫酸铵为0.5g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，调节pH＝6.5-7.0。在发酵罐培养12小时，通过补碱液(20％NaOH)和柠檬酸(25％)，保持pH＝6.5-7.0，溶氧>85％。

步骤3：将发酵好的培养基放入均质仪中，加入可溶性淀粉20％，麦芽糊精5％、硫酸钠0.5％，均质30min；

步骤4：将均质好的发酵液，进行喷雾干燥，采用仪器为YC-2100中试型真空喷雾干燥机(上海雅程)，条件为：进口温度150℃，出口温度90℃，真空度-0.05～-0.08MPa。

有益效果

1.本发明公开了一种枯草芽孢杆菌及其含有三种抗菌肽的代谢产物的制备方法，其可以作为饲料添加剂，可以替代抗生素，促进动物生长，减少坏死性肠炎发病率，提高饲料转化率。在饲料添加剂、生物兽药、食品添加剂方面具有广阔的应用前景。

2、根据目前养殖现场的情况，本发明提供一株枯草芽孢杆菌，可以同时产生3种抗菌肽，对产气荚膜梭菌具有很强的抑菌作用，对促进动物生长和降低肠道产气荚膜梭菌数量具有明显的作用，对坏死性肠炎起到预防和治疗作用，同时还具有抗炎症的作用。

3、本发明提供的枯草芽孢杆菌及其代谢产物的抑菌稳定性十分优秀，高温耐受性好，肠液、胃液中的抑菌活性留存率高。

4、本发明具有提高生产性能并治疗和预防坏死性肠炎等作用，所述枯草芽孢杆菌及代谢产物能提高日增重、降低肉鸡料肉比；在攻毒状态可以抑制家禽肠道产气荚膜梭菌，降低炎症反应，能够改善家禽肠道健康。

5、本发明所述制备抗菌肽组合物的方法简便易操作，工序少劳动强度小，降低了资源和人力成本，适合工业化应用。

附图说明

图1 surfactin(上)及其代谢产物提取物质(下)HPLC图谱

图2 iturin对照品(A)(sigma)和发酵液提取物(B)图谱分析

图3 Mersacidin对照品(A)(sigma)和发酵液提取物(B)图谱分析

图4 Surfactin基因簇结构

图5 Mersacidin基因簇结构

图6 Iturin基因簇结构

图7本发明所述三种抗菌肽氨基酸结构

具体实施方式

下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术人员的一本理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

下面将结合实施例对本发明的实施方式进行详细描述，实施例中未注明具体条件的，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商的，为可以通过商购获得的常规产品。

实施例

一、抗梭菌枯草芽孢杆菌的筛选：

(1)收集发酵食品、微生态制剂等样品，按照1：100置于营养肉汤培养基中摇床震荡培养12h

(2)将培养好的营养肉汤进行梯度稀释并涂布，涂布营养琼脂平皿长出单菌落30-300个之间，选取差异较大的单菌落，用灭菌牙签将差异较大的单菌落培养于96孔板(孔板中每个孔放置100μL营养肉汤培养基)，继续培养12小时。

(3)将培养好的96孔板离心，取上清液，备用

(4)将产气荚膜梭菌CVCC2027在BHI培养基中厌氧培养12小时

(5)将TSC培养基灭菌后，55℃保温，然后将培养好的产气荚膜梭菌按照1：100加入TSC培养基，摇匀，将培养基倾倒于培养皿中

(6)培养皿凝固后，用打孔器打孔，将上清液取50μL滴入孔中，厌氧培养12-16小时，观察抑菌圈情况，能产生明显抑菌圈的小孔的上清液所对应的菌即为可抑制产气荚膜梭菌的目的菌。

(7)试验从2000株菌种，筛选到5株能产生明显抑菌圈的菌，选取产生抑菌圈最大的目的菌进行进一步验证

(8)验证后，其产生抑菌效果稳定，抑菌效果明显

(9)菌株进行全基因组测序和分析，鉴定其为枯草芽孢杆菌。

二、枯草芽孢杆菌及其代谢产物的制备

步骤1：挑取枯草芽孢杆菌(CGMCC No.20997)单菌落3-5个，接种于5mL营养肉汤培养基，培养11-12小时，再转接于100mL营养肉汤培养基，继续培养10小时后，接种于50L发酵罐中。

步骤2：发酵罐培养基为：淀粉(80目)3g/L，豆粕粉(80目)2g/L，硫酸铵为0.5g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，调节pH＝6.5-7.0。在发酵罐培养12小时，通过补碱液(20％NaOH)和柠檬酸(50％)，保持pH＝6.5-7.0，溶氧>85％。

步骤3：将发酵好的培养基中加入可溶性淀粉20％，麦芽糊精5％、硫酸钠0.5％，均质30min；

步骤4：将均质好的发酵液，采用仪器为中试型真空喷雾干燥机(上海雅程)，条件为：进口温度150℃，出口温度90℃，真空度-0.05～-0.08MPa。

三、全基因组测序和数据挖掘预测抗菌物质

菌株测序在北京诺禾致源科技有限公司进行，细菌基因组二代de novo建库(详细步骤请参阅北京全式金生物技术有限公司产品手册KP201_2021-03-12)，HiSeq 4000测序平台，测序策略PE150。测序数据分析：Fastp软件对测序数据执行质量控制、接头删除和质量过滤操做；采用Unicycler软件对上述数据进行组装；组装序列采用Dfast，抗生素和次级代谢产物基因簇分析采用Antismash。

序列分析后，获得surfactin、iturin和mersacidin的完整基因簇(表1)。同时还得到细菌素Bacilleane和Bacillibactin合成相关的部分基因簇，但其通路不完整，故不予考虑。

表1基因组挖掘抗菌物质相关基因

四、高效液相色谱对抗菌物质的检测

三种抗菌肽氨基酸序列结构如图7。

(1)surfactin：(CAS No.:24730-31-2)

(2)Iturin：(CAS No.:52229-90-0)

(3)Mersacidin：(CAS No.:128104-18-7)

检测方法：将发酵液离心(8000rpm)，收集上清液，用HCl调节pH＝2.0，置于4℃冰箱8～10小时，离心去上清液，等体积甲醇抽提。根据所参考文献，对surfactin、iturin、mersacidin进行高效液相检测。

Surfactin色谱条件为：色谱柱：COSMOSIL 5AR-II(4.6×250mm)；进样量：10μl；柱温：35℃；检测波长：210nm；流速：0.84ml/min：溶剂：A：乙腈(含0.1％TFA)和B：水(含0.1％TFA)。梯度变化条件为：0～9min，A 60％～93％，B 40％～7％；9～20mia，A 93％，B 7％(参考文献：食品科学，2009,30(06)：188-190)。

iturin色谱条件为：色谱柱：COSMOSIL 5AR-II(4.6×250mm)；进样量：10μl；柱温：30℃；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min：溶剂：A：乙腈(含0.1％TFA)和B：水(含0.1％TFA)。梯度变化条件为：0～5min，A 60％，B 40％；5～15min，A 60％～90％，B 40％～10％；15～25min，A 90％，B 10％(参考文献：微生物学通报，2016，43(8)：1715-1724)。

Mersacidin色谱条件为：色谱柱：COSMOSIL 5AR-II(4.6×250mm)；进样量：10μl；柱温：30℃；检测波长：220nm；流速：1.0ml/min：溶剂：A：乙腈(含0.1％TFA)和B：水(含0.1％TFA)。梯度变化条件为：0～12min，A 95～70％，B 5％～30％；12～16min，A 70％～67％，B30％～33％；16～18min，A 67％～0％，B 33％～100％(参考文献：FEMS MicrobiologyLetters，1995，127：121-126)。

如图1，其提取物的图谱与surfactin对照品(sigma)的图谱保留时间和特征吸收峰一致，说明其代谢产物为surfactin，通过计算，其代谢产物中surfactin含量为1.5g/L。如图2，其提取物的图谱与iturin对照品(sigma)的图谱保留时间和特征吸收峰一致，说明其代谢产物为iturin，通过计算，其代谢产物中iturin含量为0.8g/L。如图3，其提取物的图谱与mersacidin对照品(sigma)的图谱保留时间和特征吸收峰一致，说明其代谢产物为mersacidin，通过计算，其代谢产物中mersacidin含量为1.4g/L。

五、枯草芽孢杆菌及其代谢产物的抑菌稳定性

表2.1不同温度水浴处理10min对抑菌活性的影响

将枯草芽孢杆菌发酵提取物分别在65、75和85℃处理10min后，与对照(室温)比较抑菌圈直径，计算活性留存率，发现不同温度处理，其活性保持在90％以上，可以耐受高温。

表2.2人工肠液对抑菌活性的影响

将枯草芽孢杆菌发酵提取物分别人工肠液(人工肠液按照《中华人民共和国药典》(2015年版Ⅳ部)配制：取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1 000mL)处理不同时间后后，与对照(0min)比较抑菌圈直径，计算活性留存率，发现经过90min，其活性留存率95％，说明其能够耐受肠液。

表2.3人工胃液对抑菌活性的影响

将枯草芽孢杆菌发酵提取物分别人工胃液(人工胃液按照《中华人民共和国药典》(2015年版Ⅳ部)配制：取稀盐酸16.4mL，加水约800mL与胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000mL)处理不同时间后后，与对照(0min)比较抑菌圈直径，计算活性留存率，发现经过90min，其活性留存率大于90％，说明其能够耐受胃液。

六、枯草芽孢杆菌及其代谢产物在动物生产方面的应用

6.1枯草芽孢杆菌及其代谢产物对肉鸡生产性能和粪便梭菌数的影响

选取1000只1日龄AA肉鸡，随机分为5个处理，每个处理200只鸡。肉鸡饲喂不含抗生素的玉米-豆粕型粉料。试验处理组分为：空白对照组，基础日粮；阳性对照抗生素组，基础日粮+10ppm恩拉霉素，试验组组分别添加100、200、300g/T枯草芽孢杆菌及其代谢产物。

表3.1日粮中不同枯草芽孢杆菌及其代谢产物添加水平对肉鸡生产性能的影响

a,b,c同行数据肩标字母不相同者差异显著(P<0.05)。

试验发现，不同添加量的枯草芽孢杆菌及代谢产物都能提高日增重、降低肉鸡料肉比，其中，300g/T组与对照组、抗生素组差异明显(P<0.05)。与对照组相比，抗生素组和不同剂量枯草芽孢杆菌及其代谢产物都能显著降低肠道产气荚膜梭菌数量(P<0.05)。试验说明，枯草芽孢杆菌及其代谢产物能降低肉鸡肠道产气荚膜梭菌数量，提高动物健康，从而改善生产性能。

6.2枯草芽孢杆菌及其代谢产物对产气荚膜梭菌攻毒肉鸡生产性能和肠道

选取3000只1日龄ROSS 308肉鸡，随机分为5个处理，每个处理600只鸡。肉鸡饲喂不含抗生素的玉米-豆粕型粉料。试验处理组分为：

空白对照(阴性对照)：无任何处理，即正常饲喂，不攻毒，不饮药物；

试验组1：产气荚膜梭菌饮水攻毒(10⁶CFU/mL，攻毒7-14d，下同)；

试验组2：产气荚膜梭菌攻毒，日粮中添加亚甲基水杨酸杆菌肽(BND)10ppm；

试验组3：产气荚膜梭菌攻毒，日粮中添加枯草芽孢杆菌及其代谢产物100g/T；

试验组4：产气荚膜梭菌攻毒，日粮中添加枯草芽孢杆菌及其代谢产物200g/T；

产气荚膜梭菌CVCC 2027接种于BHI培养基，37℃厌氧条件下培养18h；然后将发酵液接种于巯基乙酸盐培养基，37℃厌氧条件下培养24h。于7-14日龄，攻读组饮水中添加10⁶CFU/mL，连续饮水7d，空白对照组的肉鸡灌服等体积的0.75％生理盐水。于试验1、35d，每个重复随机抽取50只鸡，测定初重、末重。于试验1、21d，每个重复随机抽取50只鸡，收集粪便，测定粪便产气荚膜梭菌数量，采集血清，测定血清中细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α等)：

表3.2枯草芽孢杆菌及其代谢产物对攻毒肉鸡生产性能的影响

a,b,c同行数据肩标字母不相同者差异显著(P<0.05)。

试验发现，攻毒后，末重、日采食量明显降低(P<0.05)，粪便产气荚膜梭菌数量明显增加(P<0.05)，而添加抗生素BND和100、200g/T枯草芽孢杆菌及其代谢产物都能明显降低攻毒后的粪便产气荚膜梭菌数量(P<0.05)，添加枯草芽孢杆菌及其代谢产物的料肉比明显低于对照组及攻毒组(P<0.05)，同时发现，抗生素BND和100、200g/T枯草芽孢杆菌及其代谢产物都能降低炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量，同时，100、200g/T枯草芽孢杆菌及其代谢产物能明显提高抑炎因子IL-10的表达量，而抗生素BND与攻毒组无差异，这说明枯草芽孢杆菌及其代谢产物能明显抑制肠道梭菌数量，调节肠道健康，同时，具有降低炎症反应，从而改善生产性能。

综上所述，枯草芽孢杆菌(CGMCC No.20997)具有抑制家禽肠道产气荚膜梭菌、改善家禽肠道健康，从而减少坏死性肠炎的发生和提高家禽生产性能。

序列表

<110> 安杰利（重庆）生物科技有限公司

<120>一种枯草芽孢杆菌及其在制备抗菌肽、饲料中的应用

<160>

<210> 1

<211> 12060

<212> DNA

<213> Surfactin基因簇序列

<220>

<221>

<222> （708）..（11462）

<223> srfAA

<222> （11484）..（22247）

<223> srfAB

<222>（22282）..（26118）

<223> srfAC

<222>（26138）..（26869）

<223> srfAD

<400> 1

tatccactcc tcttttttgt gtatttacat tctatagagt gccccgcatg ttgagaagta 60

cgcactttga agtctaatag ttactttgag gatactgtcc ccgcaggcaa tgcgctttgt 120

ttcagcaaaa ctgcgtggta gtataaattt gcggtttaat gaaatcatat tgcgaacgat 180

taaatctcct gtttcggttc ttgcgctgtt ttttccccat cagctaatat atgaaaacta 240

ttttcattct gccataactg gatattcgaa agatttatac tatagtttaa agatttttaa 300

ttttacataa ataatatttt taaaaataaa ttgcgggatg ccgcaaaata ccctctggaa 360

ttgtcggaat ttttttcggt gtgccgaatg aaacttttca cccatttttc ggtgataaaa 420

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taagggagaa ttgacaattt tatcttaaaa aggggaggcg cacacatatg gaaataactt 720

tttatccttt aacaaatgct caaaaacgta tctggtatac agaaaaattc tatccgaaca 780

caagtatttc aaatcttgcc gggttcggga aactcatttc tgatgacggc gtacaggctc 840

attacgttga gaaagcgata caggaattcg tccggcggta tgagtcgatg agaatccgtc 900

tgcggcttga tgatgagggg gagcccgttc aatatgtgag cgaataccgt ccgctgacta 960

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agcagatgct cgggatgttc gtatctacgg tgcctgtgcg gacaagcgtt gacggaggac 1620

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aaaaatatcc gtataacctg cttgtcaatg atttgcgcgc ttcgaaaagt tcgctgagca 1740

gattgtttac ggtagctctg gagtaccagg tgatgcagtg gcagaaaaaa gagaatctgt 1800

ccttcctgac agaccctatt ttcagcggaa gcggtacaaa tgatatttcg attcatgtga 1860

aggaacgatg ggacactggg aaattgacga ttgattttga ctatcgcagc gacatattca 1920

agggagagga gattgtatct gtttctgaac gtttgatcac gctgattgaa gatgcgattt 1980

catctcctga tcgcataatt gatgagctta ctcttctttc tgaatccgag aaagagcggc 2040

tgctgacacg ggcctccggc aatccggtga attaccgcgg ggagatgacg ataccggggc 2100

tgtttgaaga gaaagtgaag tcactgtctg acaaaccggc ggtggtgtat gaaggccgaa 2160

cattgtccta tcgcacattg catgaacagt caggccgaat tgccggacgc cttcttaaag 2220

ccgggatatc agccgatact cctgtcgcgg tgctgcttgg ccgttctgag cgtgtcattg 2280

cggcaatatt gggaattttg aaagcgggcg gcgcctatgt gccgatagat cctgattttc 2340

cggcggatcg gattcagtac attttggagg acagcggagc gaaggctgtt ttgacggagg 2400

ccggaataca ggcgcctgta tcggatgccg aaccgattga ttttgacgag gctgttcagt 2460

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cgtcaggtac aaccgggcgg ccgaaaggcg tgatgattga gcaccggcaa gttcatcatc 2580

tggtgcaatc actgcagcag gagatttatc aatgcggtga gcagacatta agaatggcgc 2640

ttttggctcc gtttcatttt gatgcgtccg tcaaacagat ttttgcctcg cttcttttgg 2700

gacagacgct ttatatcgtg ccgaaaacga ctgtaacgaa tggctcggca ctgctggact 2760

attatcgtca aaaccggatt gaagccactg acggaacccc tgcgcatctg cagatgatgg 2820

ttgcggcggg agatgtcagc ggaattgaat tgcgccacat gctcattggg ggagagggcc 2880

tgtccgccgc tgttgctgaa cagctgatga cgctctttca tcaatcgggc agggcgccgc 2940

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cagccgataa cggaatgaat caacaggcgg cgtacgttcc gatcggaaaa ccgctcggca 3060

acgcccgttt gtatatattg gataagcacc agcggcttca gcccgacggc acggccggtg 3120

agctgtatat cgcgggtgac ggtgtaggcc gcggctattt aaatcttccg gatttgaccg 3180

cagagaagtt tttgcaagat ccgtttaacg gaagcggccg catgtaccgc acgggtgata 3240

tggcgcgctg gctgccggac gggacgatcg aatatatcgg ccgtgaagat gatcaggtga 3300

aagtccgcgg ctaccgtatt gagctgggag aaattgaaac ggtgctcaga aaagctccgg 3360

gcgcggcgca ggccgtcgtg ctggcacggc cggatcagca gggcagctta gatgtttgcg 3420

catatatcgt tcaggaaaaa ggaaccgagt ttcaccctgc cgagtacagg gagtatgtgt 3480

ccaagcacct tccagattac atggtgcccg cttactttac aaaaacggac gaaattccgc 3540

tcacgccgag cggtaaggcg gaccgcaaaa agctgtttgc gcttgatgtg caggctgtca 3600

gctcatccga atatgccgcg ccgagaaatg aaacggagga aacgctcacc gtcatctggc 3660

aggaagtcct cggaatggat aaggcgggca tttatgatca tttcttcgag tcaggcggtc 3720

attcattaaa ggcgatgacg cttctgacga aaattcataa gcaaatgggc gttgaaattc 3780

cgctgcaata cttgtttgag catccgacga ttgcggcgct tgccgattat gcggaaaacc 3840

gaaacgaagg acaggcattc agtgcgattg agccggctga gaagcaggcg agctatccgc 3900

tttcgctcgc tcagcagcgg acttatatcg cgagccaatt tgaagacgcg ggagtcggat 3960

ataacatgcc ggctgcggcc atgattgagg gcgctttaga ccgtgaaaag cttgagcgtg 4020

cattttctgc cttaatcagc aggcatgaag cgctcagaac atcgtttcaa tcagaggacg 4080

gcacgccgag acaggtgatt cacgaacatg ttccgtttca tattgaaatg atcgaagcgc 4140

gcggaagaac gaatgaacag gtcatgaagg actttgtgcg ccgttttgat ttatctgagg 4200

cgccgctgtt cagaatcggc ctgcaaacgc tcggtcacaa tcgccatatg ctgctgtttg 4260

atatgcatca cctgatttct gacggggtgt ctatttccat catgctgaag gaactggctg 4320

acatctacgg cggaaatcag ctgcctgatt tgcgcattca atataaagat tatgccgtat 4380

ggcaggcgga acgggcgaaa gaaggctaca agaaggagcg ggcgtactgg aaagaagtct 4440

tcagcggcga actgccggtg cttcagctgc tccctgatta tccgcggccg caggtgcaaa 4500

gctttgaagg tgaccgcgtg tccgtcaagc tgccgaaaat gctgcgggaa cggctgcaga 4560

agcttgccga gaaaaacgga gccactcttt acatggtgct gttatcggca tactatacgc 4620

tgctttctaa gtattcggga caggaagaca tcatcgtggg aacaccgtca gcgggaagaa 4680

atcactctga taccgagggg cttatcggga tgtttgtcaa cacgcttgcg ctgcgaagct 4740

ccgtgaagca ggatcagaca tttgccggct tgttaggtca tgtgcgcaag caggtgctgg 4800

acgcgttttt ccatcaggat tatccgtttg agtggctgac cgaggagctg aacgtgcccc 4860

gggacatgag caggcatccg atatttgaca cgatgttcag tctgcaaaat gcttcggacg 4920

gaattccgga gatcggcaac ctgacgctgt ctcttcatga aaccaacttc aatatcgcta 4980

aattcgatct gacaatgcag gcccgggaaa cagcggaagg cattgcgctc gatttggatt 5040

attgcacgaa gctgtttaag cgctcaactg cggatcgcat gcttgcgcac tatgtccgtc 5100

tgctggagag tgcggcagct cagccggatg cgaaaatcag cgaatatgat ctgctttctg 5160

aacgggaggc tttgaaccaa ttacagcggt tcaatccgga gcgcacggca tacccgaaag 5220

agcaaacgat cgtgcagatc tttgaagaac aggcccgaaa gaaccctgac cggacggctc 5280

ttcagttcga aggggaaact ctgtcgtatc agcagctgaa tgaacgcgcc aacaggcttg 5340

cgcggcatat tctttcggtc ggaggcggcg ggaaaaccgc ggctgtttta tgtgaacggt 5400

caatggacat gattgtttcc attatggctg tgttaaaagc ggggtccgcc tatgtgccga 5460

ttgatcctga gcatccggtt cagcggattc agcatttctt ccgcgacagc ggggcgaatg 5520

tgctcctgac tcagcaaagc ctcaagccgc ttgcggaaaa ggccggtttt caaggcgtca 5580

ttgtgcttgc tgatgatgag gcgagctatg aaaaggactc tcgcaatcca gcattgccgt 5640

ttgattccaa aacgattgcc aatctcactt atacatcagg cacgacggga acgccgaaag 5700

gaaacatcgt cacacatgcc aacattttgc ggacggtaaa aaacacgaac tatttgaccg 5760

tttctgaaga ggatacagtg ctcggtctgt caaactacgt ctttgacgct tttatgtttg 5820

atatgttcgg ttcgctgtta aacggtgcaa agcttgtgat cgtcccgaaa gatacggtgc 5880

tggacatgtc gcgcctgtcc cgtgtgatca aacgggagaa cgtcagcatt ctgatgatta 5940

cgacggccct gttccacctg cttgttgata tggagccgtc ctgtctgacg acgcttcgga 6000

aaatcatgtt cgggggcgaa agagcgtctg tagaacatgt caaaaaggcg ctggcggcag 6060

tcggaaaagg aagactgctt catatgtacg gtccgtcgga aagcacggtg tttgcgacat 6120

accatccggt ggatgtcatt gaagaggata cgctctccgt tccgatcggt aaaccggtca 6180

gcaatacgga agtctttatt atgaactcag ccggacgcat tcagccggcg ggtatcgcgg 6240

gagagctgtg cgtcagcggg gaaggtctcg tagaaggcta ctacaaccgt cctgaactga 6300

cggaagaaaa atttgtaaag catccgttta aggaaggtga acggatgtat aaaacgggcg 6360

acttggccag atggcttccg aatggcgata tcgagtttat cggacgtatc gaccatcagg 6420

tgaaaatccg cggtcagcgg attgagcttg gcgaaattga gcatcagctt caaagccatg 6480

accagattca ggaatgcatt gtgctcgctg tggatcaagg cgcgggtgac aaacttcttt 6540

gcgcgtattt tgtcggcctc agggaaatct cttcccggga gctgagggag catacggcga 6600

aggatcttcc ggcttatatg attccgtccg tctttattca attggatgaa ctgcctctta 6660

cagggaacgg aaaaatcgac agacgggcgc tgccgatgcc ggatgtgacc gcagcgaatg 6720

ccgtgtcata tacggcgccg cgcaatgaaa cagaacaaaa actggcggat atttgggctg 6780

aggtgctgca aatggaacgg gtcggcgtcc atgatcagtt ctttgagatc gggggccact 6840

cgttagcggg gatgaaactg ctggccctta tccagaagac attcggcgtg cagcttacct 6900

taaaggatct gttcacttct ccgacggctg cggggctggc gcagctgatt gaaggggctg 6960

aacggaaggc ggctgagagc atcgcaccgg cggccgagcg ggaaacgtat ccggtttctt 7020

caccgcagaa gcggatgttc gtgcttcagc agctggaagg cgctgaaaca agctataaca 7080

tgccgtctgt gctccgctta aaaggaaagc ttgatgcaga aaagctgaaa tccgttatga 7140

aacagctgac agaacgccat gaagccttca gaacgacatt tgacataaag gatggagaaa 7200

cggttcagcg tatatgggcg gaagctgata tcgacatgga atattatgaa gcctctgaag 7260

aagatgctga acagattatt cagagcttta tccggccgtt ccgtctggat cagcttcctc 7320

tcgtcagaac ggggctggtc aagctggctg aacatgacca cctgctgctg tttgatatgc 7380

accatatcat ttcggacggc gcttcagtcg gcgtgctgat agatgaactg tcccgcttgt 7440

atggcggcga aacgcttgag ccgctgcgga ttcattataa agactatgcg gtatggcagc 7500

agaaatttat tcaatcagag cagtaccgca agcaggagga gcattggctt cgggagcttg 7560

acggcgagct tccggtattg acgctgccgg ctgattacag ccgtccggcc gtgcaaacct 7620

ttgaaggaga caagctggtc ttttctctga ctgaggaaca gacgtcggct cttcgcagtc 7680

ttgcgaaaca aacggattct accatgtaca tggtgctgct ggcgtcgtac agcgcctttc 7740

tctcaaaact gagcggacag catgacatca ttgtcggctc gccggttgcg ggacggtcac 7800

atgcggatct cgcaaacgtc atcggtgttt ttgtgaatac actcgcgctt cgtacgtatc 7860

cggaagcgga caaaacgttc acggactacc ttaaagaagt gaaacaaacc gctttacatg 7920

catttgacgc gcaggattat ccgcttgaag accttctgca aaaggttgag gtgcagcgtg 7980

atacgagccg aaatccgctg tttgatgcgg tattctcaat gcaaaatgca aatgctgaag 8040

atctggtcat ggaaggaatt gagctgaagc accatccgtt tgacagaaaa acagccaagt 8100

ttgacctgac gatgacggct gaggacacag acgaaggctt aacgtttgtg cttgaatata 8160

acaccgcgct gtttaaaccg gaaacggcag agacgtggaa gcattattgg cttcaactgt 8220

taaaagccgc aacggaaaat ccggctgcga agctttctga gctttcattg gtgaatgaaa 8280

cagaaaaaca agccctcctt gacgcatgga aaggaaaaac actctctgtg ccgcgggaca 8340

aaacggttca ccgtctcttt gaagaaacgg ccgcccgcca cgcgaaccgg ccggccgcgg 8400

catacaacgg cgcgaaatgg acgtacggcg agctgaacgc aagggcgaac cggatcgcgc 8460

gcattctcat ggattgcggc gtctcggctg acgaacgtgt cggcatttta acgaaaccgt 8520

ccttggaaat ggccgcgggc gtactcggcg tcttaaaagc gggcgcggca tttgtgccga 8580

ttgaccccga ctacccggaa gagcgcatca gctacattct gcaggacagc ggcgccaagc 8640

tgcttctcac acaggaagcg ctggacgtgc cggatggcta caaaggagaa acgattctgc 8700

ttgacggcgg acgctccatt ctgagcctgc cgcttgatga aaacgatgaa gcgaacccgc 8760

agacggaaac aacggcggat catctcgctt atatgattta cacgtcagga acgaccggac 8820

agccgaaggg tgtcatggtc gaacaccatg cgcttgtgaa cctgtgcttc tggcaccacg 8880

acgcattcgc catgacggcg gatgataaaa gcgccaaata cgcgggcttc ggttttgacg 8940

cctccatctg ggagatgttc ccgacatgga ccatcggcgc ggagcttcac gtcattgacg 9000

aggcgatccg gctggatatc acccgcttaa atcactattt cgaggagaac ggcgtgacca 9060

tcaccttcct gccgacgcag ctggccgaac aatttatgga gctggaaaat acctctctcc 9120

gcatgcttct cgtcggcggc gacaagctga agcgggcggt gaaacagccg tacacgatcg 9180

tcaacaacta cggcccgacg gaaaacaccg tcgtcgcgac aagcggcgtc atcaatcctg 9240

aggaaggatc gctttcgatc ggacgggcga ttgccaatac gagagcttat attctcggcg 9300

acggctatca ggtgcagccg gaaggcattg ccggtgaatt gtgcgtggcc ggccgcggtc 9360

tggcacgcgg atacctgaac cgtgaagaag aaacggcgaa gaggtttacc gcagatccgt 9420

tcgtgcccgg cgagcgcatg taccggaccg gcgacctcgt caaatggaac gcgcagtgcg 9480

gcatcgaata catcggccgt atcgaccagc aggtcaaagt gcggggctac cggatcgagc 9540

tttcagaaat cgaagtccgt ctcgctcagc ttgcggacgt tcatgacgca gcggtgacgg 9600

ctgtggaaga caaagcgggc aataccgcgc tttgcgccta tgtcgcgcct cagcagaacg 9660

atattgaagc gctcaaagcc gcgctgaaag acacgctgcc tgactacatg gtgccggcgt 9720

tctgggtgga gctggccgag cttccggtca ccgcaaacgg aaagattgac aaaaaagccc 9780

tgccggaacc ggacattgaa gcgggaagcg ccgcgtataa agcaccggaa acggaaatgg 9840

agacgctgct ttctgacatt tggcaggaag tgctcggtct tgatcagatc ggcgtaagcg 9900

ataatttctt cacgctcggc ggtgactcga tcaaaggcat ccaaatggcg agccgcctga 9960

accagcacgg ctacaagctg gagatgaaag atctcttcca gcacccgacc atcgaagagc 10020

tcgtctctta tgtggagcgg acggaaggca agcaggccga ccagggacct ctcgaaggcg 10080

aagcggactt aacgccgatc cagcgctggt tctttgagaa aaacttcacg gacaaacacc 10140

actggaacca atccgtcatg cttcacgcga aagacggctt tgatccggag ataacagaaa 10200

aaacattaca tgtcctgacg gtgcaccatg atgcgctccg gatgatttat cgtgaacaaa 10260

aaccgtatta cagagggctt gaggatgcgt ctgttgaact gaacgtcttt gagctgaacg 10320

gacctgctga agaccatgag gaccgtatcg aacgagaagc agaccgtctt caaagcagta 10380

tttcactgga aacaggacat ctgctgaagg ccgggctctt ccgggctgaa gatggagacc 10440

accttcttct cgcaatccat cacttagtcg tggatggtgt atcttggcgg attttactgg 10500

aggacttcac gtccgtttat acgcagctga agcaaggcaa tgaaccggcg ctgcctccga 10560

aaacacattc attcgccgaa tttgctgaga gaatcaaaga atacgcaaat acgaaggcgt 10620

ttctgaaaga agcggattac tggagagagc ttgaggaaaa agaggtatgc actcagcttc 10680

cgaaagacag gcagtctggt gatcagcgca tgagacatac gagaacggtc agcttctctc 10740

tgacgcctga acaaactgaa cagctgacga caaacgtaca tgaagcctac catacggaaa 10800

tgaacgacat cctgctcacg gcgctcggac tggcgctgaa agagtggacg ggtgaagaca 10860

cgatcggcgt tcatttggaa ggccacgggc gcgaagacat tcttgacggc ctgaatatca 10920

cccggacggt cggatggttt acgagcatgt atccgatgat ccttgagatg aagcacgccg 10980

acgatctttc atatcagctg aaacaaatga aagaagacat cagacacatc ccgaacaaag 11040

gagtcggcta cggcattctg cgttatgtaa cggcgcctga gcataaagag aatctttcat 11100

ttaagattga tccggatatc agctttaact acttaggcca gtttaatgag atgtcggatt 11160

ccggcttatt tacaagatcc gggatgccgt caggacaatc gctgagccct gacacagaga 11220

agccgaatgc gcttgatatt gtcggattta tagaaaatgg gcagatgacg atgacgtttg 11280

cctatcattc tctcgaattt catgaaaaaa ccattcaatc gttcagtgac agctttaaag 11340

ggcacctctt gaaaatcata gatcactgcc tggcccaaga cggacctgag cttacgccta 11400

gcgatcttgg cgatgatgat ctgacgcttg atgaacttga taaattaatg gaaattctct 11460

aacagaaaag acagaggtga catatgagca aaaaatcgat tcaaaaggtg tatgcactca 11520

caccgatgca ggagggaatg ctgtatcatg cgctgcttga tccgcattct tcctcctact 11580

tcacacaatt agagcttagg attcacggaa gctttcagct tgagcttttt gaaaaaagcg 11640

tcaatgagct gatccggaca tatgacatcc tgcgtacggt attcgtgcac cagcagcttc 11700

aaaaaccgcg ccaagtcgta ttagcagagc ggaagacgaa ggtgcactat gaagatatca 11760

gtcaattaga tgaagcgcgc caaaccgaat atattgaacg ctataaacgc gatgtgcagc 11820

agcagggctt tcatctggcg aaggatattc tctttaaagc ggcggtgttc aggctcagtg 11880

agaaggagct gtatctcgtc tggagcaatc atcatattgt catggacggc tggagtatgg 11940

gcgttttgat gaaaagcctg tttcaaaact atgaagcgct tcgtgccggc cggcccgccg 12000

ggggaagcca gggcaaacct tactctgact atatcaaatg gctcggaggc cgggattatg 12060

<210> 2

<211> 12060

<212> DNA

<213> Mersacidin基因簇序列

<220>

<221>

<222> （217）..（1656）

<223> mrsK2 Complement

<222>（1653）..（2375）

<223> mrsR2 Complement

<222>（2618）..（3529）

<223> mrsF

<222>（3526）..（4284）

<223>mrsG

<222>（4301）..（5035）

<223> mrsE

<222>（5321）..（5527）

<223> mrsA

<222>（5623）..（6264）

<223> mrsR1

<222>（6313）..（6897）

<223>mrsD

<222>（7108）..（10296）

<223>mrsM

<222>（10348）..（12549 ）

<223>mrsT

<400> 2

gcgccgaccg taaagaacgt ttttgaaaaa atgaagcctc cgataatccc ggctgcgatc 60

gacatgacac cgatgattcc aaaaggatac ggcttttcgg agccatcatt atttgatgcc 120

cccatcataa tgctttcatc gcttctctgc aacatgagaa agcgggcctt tataaaagac 180

ccgcttcacc ctttctcaac gtaagataga ttatttctaa ttgacattgt tatacttaga 240

tggcggcttc ggaaaggtaa ttttaaatct tgtgccaact cccggctgac tgtatatatc 300

aatatttcca ccatgcgcct tgataatttg ctgagcaata gccattccta atccagtccc 360

ggagttattt gacgaagcgc ttatccctct gaaataccga tcaaataaac attcaaccgt 420

ctcttcgtcc attcctatcc catcgtcttc tattgtaatt tgtatttcgt tgtcatgtaa 480

cacgtcctga tataatatga cctttatttt agtgcccgga ggattatgtt taatacaatt 540

agcaatcaag ttttcaactg cgcgctttag gtacctttca tccatattaa aaagtatctt 600

attgtgactg gattctaaag cgaatctctt attttctgac tccggtagca acttcatttt 660

ttctaaagtg tcatgaatta ctttcactac gtttttttct tcaagatgga ttggaagcga 720

ctcatttttc aattgaaaag ttaagttgaa atcttcaatc agcttttcca tatattcgac 780

acgttcttcc attattaagg aaaaatcacg cacttgctga ttttcccact catattcatt 840

tgaagataaa agaaccgtat atcccttaat aaccgaaaga ggggttttta aatcatgtga 900

gacaccggcc atccactctt ctcgtgtctt ttccaataat tctctttcag ccttattcct 960

ttgaagcgtt gaggtaagtt cagacagagc ctgcattaat tcttgatagg tcttatatcc 1020

agatttatta tgtttatatt tgcttgaatg aaacttccga tcataaggtt cttcatattt 1080

ttctttagac aaattctcaa tccaagatac aataaacagc aggggagcac ctagtttttt 1140

tccgtaaaat attgcaatta caatccctgc cataataata gaaacaatcc acaagttatt 1200

cacccaatag aaaaaagggt tatttttttc catcggcttt cccaataccc acgttaaatc 1260

atggttgttt ttcgtttcgt accacgtaga taattgataa ccttttttgg cagggtacat 1320

gtaatctgat attaactctc caagaatata atgcttaggt atatttttag gtttattaaa 1380

agaaaaaacc tcatctcctt gttcatctaa aatttgaatc cacatccggt tctctaataa 1440

atcttctttt gctttcgtgt ttattgaaaa ttgtttatct ccaacaactg tttgggcaac 1500

aatttttttc aaggataatt gtggggtttc cattttattt tgacctaaga cgaggctgaa 1560

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tacgaagtaa aatgctatcc tatttctcag cttcacaata actcctcatc tataggctct 1680

gcttcaaata tatagccctg tcctcgaact gtttttatcc atcttggtct gctcgggtct 1740

tcctctaatt tttcacgtaa tcgtcttaca tgtaccatta cagtactatc tccgccataa 1800

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cagaaataaa tcagaagttt catttcctga gcagggcaat cgattcttgt cccgttaaca 1920

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gggtaagaag aagagagctg agtcgttctc tttaattggg cttttacacg agctacgatt 2040

tccagtggat taaatggttt agtaatatag tcatctcccc caaaactaaa cccttgcaat 2100

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attttgctgc ataaggtgaa gccatcagtg tccggaagca tgacatctaa taaaataata 2220

tttggaagtt cctgatcgat tttcagaagg gtttcgctcc ctgtcatagc tgtggaaata 2280

ttgctgaaac cttccttttc aaagcaagtt attaataagt ttaagatatg ttcgtcatca 2340

tccaccatga ggattttgtt ctcttctaaa gtcataagtt atcctccttt ttatttctta 2400

ttttatatga gatcaaggac ataaaggtca gaaaaggaaa gaatttaact ttcgttaagg 2460

gttcagaata ttcttttaat attttaacct tgatattcag ggatcaatat aactacatac 2520

agaaaataaa caatggatgt cgttaagtga atgtttagga agagtttcgt ttgtgtttaa 2580

agaacatcgc ttatgataaa agtgaggtga gagacaaatg aatgatcaaa tagtggtaac 2640

acacgatcta actaaaaagt ataaaaagca tacttcagtt gatggattaa acttaaggat 2700

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cagccacctg ttgagtgaaa tagatcaaat ggctactcaa gtggggatta taaacaatgg 3240

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caattccata cttcttcatt cagggctgtc tgtatttcga cttgaagaaa agacacgatc 3480

gcttgaggat atttttttag aattaactgg tacagaggga agtctatgaa aaagttatta 3540

tgggcagatc aattaaaact gaaacgttcg tcgttattga ttgtagtctt attggttccc 3600

ttactcatta tagcatacga gttggtgaat cttacttatc gatctgaata cgtggaaaaa 3660

caagctgaaa tgttccatgc tgggtcaatg tggatgtatt tactgtatga taacagtttg 3720

ttatttggtc taggttttcc attagccgcc acactttctg cgtcaataat agcaaatata 3780

gagcatcaag caaacggatg gaagcaaacc ctttcttttc ccgtatctag aatgcgaatt 3840

tatgtaagta aatttatttg cttagtagtc agtttattta tttcgtcaac aatcttcttg 3900

ctcggcatgg tactgctggg caaactggta ggattcgaag gcagtgtacc ttggggactt 3960

ttgtttggag atagttacag catgttagtt acagtactgc ctataatggc attccagata 4020

tggttatcta tggtgtttag caaccaagca ttctcaattc ttgtaggatc agtatcatct 4080

ataatgggtt tgtttttggc tgctgctcaa tcaacgagat ggtttccgct ggcttatcct 4140

agtcaatctt cgacagtcat tctgcagtat gaaggtatag gatataaccc agatctttca 4200

tcttaccttt gcattagcct tttcttaggg ataattatat tatttctagg ctctattcat 4260

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agaacgttta aagcttaggc gatcaaagtt atggatcatc tatttactag ggcctttgtt 4380

aggtgtatcc ctggcataca ctaactttat taaaaactat aaccttttta tgaatcctgg 4440

agacaatccc tgggtagagg cttggacaca agtggcctta tttatgggcc cttttgtatt 4500

gcctatcgta gtgggaattt tcgccgccct tgtttgcagg ggggaacatg taggaggcgg 4560

ttggaaacag cttctagcct taccagttaa acactcagat atctttctgg gaaagtttct 4620

aacagtggtc cgcatgatat tcattagtat gttcatttta atcctcttat ttattggatt 4680

cggttatatg ttaggcataa gcgggagttt tcctttactt acaattctag gatatggaat 4740

tagagggatc ttagcttgtt taccattaat tttattgcag cttattgttt caatcaggtc 4800

taaaacattt ggcataccac tcgctgttag cattgttttt acattaccgg ccattattat 4860

tgccagtaca ccattaggtc aagtatatcc atggacacag cctatgttag caatgtcacc 4920

cgcagatgaa tcaccgattc aatcaaattt cctgttttac tcaattatgg taataacctg 4980

cctcgttctc ttggtttacg gaataagaag ttttactaaa cgagacctta cgtagggtat 5040

atacggtcta aacttatgag aattcgagac aaggtaaact aatttgacta gcgctatgta 5100

aaacagaaat ttatatgaag gtaagactaa atctttttgg ttgtattctt tgaaactaaa 5160

cgactaatgg aaaaggtgat gtttcaaggc ataagacata agaaatataa agatatctta 5220

agactcttta tttaaacatt ttttacattt aataatatct cttccatttt tttgattatg 5280

agttaatata atactatact taataagggg ggtgaataca atgagtcaag aagctatcat 5340

tcgttcatgg aaagatcctt tttcccgtga aaattctaca caaaatccag ctggtaaccc 5400

attcagtgag ctgaaagaag cacaaatgga taagttagta ggtgcgggag acatggaagc 5460

agcatgtact tttacattgc ctggtggcgg cggtgtttgt actctaactt ctgaatgtat 5520

ttgctaattt gatttatata ggctgtttcc cttcagaagg aacagcctat attttattat 5580

ataaaatatt agaaaattct taaaaaacag gagggtaaat cgttggggaa aactctcgtt 5640

tgttcagaaa atagctattt ccaagcatat atgaatcatt tattaacgcc agatagtaat 5700

gaaataataa atgttaacac attggatgaa ttaaaacaaa taatatccaa ggaaaatttt 5760

tcctctgtaa tcatcgatac ttgccaccct aatgatttag tgttgcaact gataaaatcg 5820

atatcttgcc cagtcataat acttaactcc ttagaaacta acgtttcaga ttataaccct 5880

ggtccaatat taaatcaaat aaataatgtt tcaaccctaa aacataatgt ttttcaattg 5940

tcttttacaa cttttttcga cgttggaaag cattgtattt ggaaaaagaa tgaatatatc 6000

cctctggcaa tacaagaatt taaaatttta tatttgcttt atttaaattc aaataaaata 6060

gtctgttctg aagaacttat tgaatacgct gaccttactg gtaggtcaag tctctatgta 6120

cacattagtt ctcttagaga aaaagtagag gataatcctg gagatccaaa gattcttcaa 6180

acaaagtttg gaaaagggta cctcctatct gacagtacat atatttgtct tgaaaaaaaa 6240

gcagactcaa aaaatgttgt gtaaaaagga tgacccaaaa atcattttaa aatgactttt 6300

gagtcatccc atttatgtta gtgaggggtg ttttgttctt tctctaaacc ctttttctat 6360

tgctaataaa gctttgtcgg gtgtaattag accacgatta ggttttcttg tacccgtcgc 6420

gatctcaaac gccataattt caactgggtc aataacaata tgcccatctt ttcttaattg 6480

ttcaatattc ctggaaacaa ctgttttatt ccacattaaa tcgttcatat tagggaagaa 6540

aatagtgtta tgtggatgag ctaatacagt agttgcaact aaattcattg ctacaccatt 6600

agcagtttgt cctaagatgt tcgctgtagc tggaataatg caatatatgt ccgcccagcg 6660

gccaatttct acgtggctat gtctttttcc gttttcccca tgttctgagt atacatggtc 6720

acaaaaataa gaaacagtag gagctggaat aaggtcttcc gctgtttttg tcataacaac 6780

ccttgtttcc ttaaagaaac ttttaaaata taagagatac gaggagatgc cgacagatga 6840

gattgatccg caaatcccga tcaataactt tttatctttt aatattgaaa tactcatttt 6900

ttctcctcct gtaaatttta gactatcata ctacacaatt attctttttg tggtgtttat 6960

ttcaaatatt aaatattctt aataaacaca tataaaataa acctaaactt cttttgaaat 7020

tcttttaact tttaaataac cctgctatat ttatggataa ttaaggaatc ttaattgttc 7080

aaatttatta aaaatgaggt gttcaatatg catacaaaat taaaatggaa ttcggtatgg 7140

aatagatctt cttcgataag tgaaagaaaa gtaaggcgtc cacttaatac taattgggat 7200

gaactaacaa acagacgctt cgaaagatgg aaaagccttg ttgaaagtga tgaggggatt 7260

cgaattgaga atgtattagc cacccaaaat attgatgaag aaactctaaa gcatactatc 7320

aatgcaaaag aagtggaatt tattaatgaa agtgatcatc taggatggct agaaattatt 7380

cagctagttg atgaacaatc ctataaagat gtaaatatag aagttagaaa agatattctc 7440

ttctttagtt ttataaaacc atttttgaaa atagcaagag gaaaattaga ggaagtatta 7500

tattctcact ctaataaatc tctgataaag gaagaactta gtccgtctgt aattgatgat 7560

tcacttaata ttcttggtga aactttgtca gctataagta gtcggatatt aatattggag 7620

ttaaatgtag caagggtagc aggaaagctc cgaggtgaaa cttctgaaga acgagcctct 7680

tatttcaata aagtcctttt aaatgacccg gcatatgttc gatcaattcg agaagaatac 7740

atagttttaa caagactgtt agcaacaaaa acaatgtatt ggattcaaaa tacttctgaa 7800

ctccttataa gatttcatca ggataaaggg ctattagaat ctgagtttac taatggtcaa 7860

aaattaggaa aagttatatc catcgataca ggaagtagcg tctcagatac tcataacaaa 7920

ggaaaaacag tcgccatttt aaactttgag actggaatta aaattgtgta taaacctcgt 7980

tccttagaaa tagacgtaaa attcaataag tttgtaaatt atctaaatgg taaaaattta 8040

agttttgact taaaaactgt gcacacactt aacaaaaaat cttatggatg gacccagttt 8100

atctcttata aagaatgtca ggaagaactg caaattggaa aattttattg gcgtattgga 8160

agttatttag ctatcttata tgcaatgaat gcggtagatt ttcatatgca aaatttaatt 8220

gctgagggag aatatcctat tttagttgat ttagaatctt tatttcataa taattccacg 8280

tatacagata ccagtgcttt tagtcgcgca caagaacata ttgaacgttc agttttgcgg 8340

attgggttat taccgagaaa aataaatagt aaagctggat ttgaaggaat tgaccttagt 8400

gcattaggtg cacaagaagg acaagtatct ccgcataaaa ccagtacaat agttgatcga 8460

gataaagata cggtcaggat agaagaaaaa aactttccaa ttccagttag tcaacataga 8520

cctatgctgc atgggcaaat cattaatagt gttgcttacg aaggagatat tataaaagga 8580

tttgaagaaa cctacttcct tttcatgaaa tataaacaag acatgctcga acaaatagat 8640

tcttttaaag gagttactgt aagacaaata ttgcgtggta catctcgcta tgcaaacctt 8700

ctgaaaataa gtttacatcc agatttcatg agagacggct tagatcgtga aatgatttta 8760

gataaattgt ggttagatac caaattgaat ccacgattga accaagttgt aaatagtgaa 8820

aaggacgact tatttcttgg ggatatccca tatttcacaa gcaagcctga atctacaaat 8880

atgtgggatt ccaacggtcg aaaaatcaac aattttttta aaacaagtgc cttaaatgag 8940

acaaaggaaa aaataaatga aatgaatgaa agtgactgtc atgaacaagt aagctttata 9000

aaaacagcta ttttagtaat taaggattct tatcgtaaac ataaagtatt tgatataaat 9060

cctcgattac acgtatttaa cccaaaagat ttttttcaag aagctattaa aattggagac 9120

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attggatcgt ttgttgacaa tcaacgagag gatcaattca agatttcagc tgcaaatagt 9240

tcattatacg agggtgtagg aggtatttct ctcttccttg cttatttagg tcgcctctct 9300

aacgatgaaa aatacaccaa actatctaaa aaagctttag tggcagtaca caaaaatatg 9360

tctgcatcta gtgatttggg tgcctttggg gggattgctt cttaccttta tttgttggat 9420

catttatcaa aattatggaa tgatgaacaa ctattgaaaa acgaacttca ttctgccctc 9480

aacaaattag attctttgat cgaaagggat gaaaacaacg atattttaac aggggtggct 9540

ggaacagcag ttattttaat aaatttgttt aaacggtata aagaagaaca aatcttaaac 9600

ttgattacaa aatgcggaaa tcgtcttatt caaaatatta acgttatgga aaagggagtt 9660

ggatggaaag tcccggcaaa cccaacgcca gcctccgggt ttgctcatgg tgcctcagga 9720

attatatggg ctctttatga aatttacgca attactgagc aaaatgtatt taaagaggta 9780

gctgaaaaag cattagaatt tgaaagaact ttgtttattc cggaaaaaaa caattgggca 9840

gatattaaac ttgaaaacgg acagtttcga aatgataatt ttgttgcttg gtgtaatggc 9900

gcagcaggca taggattagg cagaatattg atcctgccac acaatcaaaa tgaattgata 9960

aaggatgaag cacatgtcgc cattaataca accctaaaat atggttttga acatgatcat 10020

tctttatgcc atggtgattt aggtaatctg gacatcctta tgtacgcaac ggaaaacttt 10080

aataaaaagt taagcgtaaa tgtaacagaa ctaagccata aaattttaaa tgatataaag 10140

ctcagaggat ggttaactgg atttgaaaaa aataacgaat ccccatcctt aatgatgggg 10200

tatgcaggta taggacttgg attgcttaag atttttgcac cgactgaagt gccatcagtt 10260

ttgagactcc aatcaccttt agaactaaaa ttgtaaaatt aaaatgagcc ttactttgtt 10320

aaggctctat ttcttaggag tgatccaatg agaagaagag ttcctctagt aaggcaaatg 10380

ggacaatatg agtgcgggcc cgcctgcctc accatgattt taagttacta tgggagtact 10440

atatctctaa ataaaataag tgaacaatgt gatgcccaaa gaaatggcgt atctgtatcc 10500

attttaaaat cagtatcaga atactatggg cttaactgca aagtatacca agtttcattt 10560

aaagatttga aaaaatatat ccattcatat cttccctgca tcatattttg ggatgaacgg 10620

cactttgtgg ttttagaaca gattaaaaaa ggtctttttc atataattga ccccaacaga 10680

ggaaagttga gattatccga agaagaattt aaaagacatt atagcaaggt aatcttgact 10740

tttacgaagt cagatagatt taaagagatg atgccatcac ccgcagcaaa gtattattta 10800

cgttatatag ttaaaagccg tactattgtt tcacttatca ttctcttttc actgatcaca 10860

caagtagtct tcttagccgt tcctttttta attaaatatt tagtggatca ttctttaata 10920

agtaaatcaa caaattcttt tctattttta ggaattgtag tcatcatagc agtttttata 10980

ttgggacttg ttatgtttct ccgcaattat ttcacaatta aacttcaagc tattataagt 11040

aaaagcattt caaacgattt tgtggaacat ttattaaaat tacctcttaa tttttatgaa 11100

aatcgaacaa ccggtgatat tgcaatgaga gtaagtaaca tttccatgat aagggagatt 11160

atggctaaga atggagtaac agtagtacta gatattatta ctttgatttc attttttatt 11220

gctatgttaa ctcaatcatt taagcttgca ttttttgcta ttggattggc aattattcaa 11280

ttcttactaa tgatgatttt gattccaaga ataaaaaatt taatccataa tgacttatca 11340

attcaaacaa ctacacaaag ttttttggtg gaagctctaa gagctatcac ttttattaaa 11400

tcaaatggtt tagatcattc tatcctaaca aagtggtcaa attactatga taaacaaatc 11460

gaagcatttt cacagcgata ccacttagac gctataatgg atagcataag tataagcatc 11520

cgatattgtg caccccttct cttattatgg tttggatcaa aagaagttat caccggaaat 11580

ttaacactcg gaggcttatt agggtttagc agtttaggaa catctttctt gttgccgatt 11640

gcttctttaa taacaagcat gcaacaattt caattggtcg gtgacacttt tgaacgaatg 11700

caagatgtta tggaaactga gcccgaacaa ctcaaccaaa cttcaataat tgaaactgaa 11760

ctatcaaaac aggacataaa acttgaaaat gtcacattta cgcaccagag cttacatatt 11820

cttaaagaag tttcattaaa cattaagtca ggtactaaat tagctctggt aggccgtaca 11880

ggtagtggaa agacaacttt atcaagaatt atactggggt tatacaaacc cactaaggga 11940

aaagtattat atggtgaaga agacttgaag aatttaaacc tttacgagct ccgaaaacaa 12000

atgggggtcg tattacaaga aagctttctt ttcaatgata ctattgcaaa caatatagct 12060

<210>3

<211>12060

<212> DNA

<213> Iturin基因簇序列

<220>

<221>

<222> （506）..（1708）

<223> Itu D

<222>（1728）..（13676）

<223> Itu A

<222>（13721）..（29812）

<223> Itu B

<222>（29896）..（37764）

<223> Itu C

<400> 3

gaaaaccttg ttcactcaat aggccgattc actgcgtcaa tcggtatccg ggctgggtca 60

tttacttgtt ctgcggcgta ttttgtcctt gcagattttc ctcaccagat ccatctcttg 120

caccgcattt ataatcaaac gccatcagtt tacaatcctt cacagatata caaatgaatt 180

tttacaataa acagaaaata tgtaatttct gacacaataa tgccaatagc cctaaaacat 240

atgaaacatg aagagctcgt cctaagtgaa gaagagccgg taacaggctc cactccggct 300

tttcatcatc tctctttaag actgattttc ggtgaaaccc tcatgtttta ttttatgaat 360

aaatatatct aattcgtttg taaaatcgaa caataactcc tccgaaagta ttctatacac 420

atttgttata atcatgctag gatgttagat aaagggataa tttgtaggat attgtatttc 480

tgttcaatat gatcggagga atctcatgaa caatcttgcc tttttatttc ctggacaagg 540

gtctcaattt gtaggaatgg gcaaacaatt ttggaatgat tttgtgctcg caaagagatt 600

gtttgaagaa gcgagcgatg cgatctcctt ggatgtaaaa aaactgtgtt ttaacggaga 660

tatgaatgaa ttgacaaaga caatgaacgc gcagcccgct attttaacgg tcagtgttat 720

tgcttttcaa gtgtatatgc aggaaatagg ggtgaagccc cgcttcctgg caggtcatag 780

cttaggcgaa tattcagcgc ttgtctgtgc cggcgccctt tcttttcagg atgccgttac 840

acttgtaagg cagcggggaa ttcttatgca gaatgcggat tctcagcagc aggggacgat 900

ggccgccgtg actcacctct ctcttcaaac gttgcaggaa atatgttcga aagtgtcgac 960

ggaagacttt ccggcaggag tagcctgcat gaattcagaa cagcaacatg tgatttccgg 1020

acaccggcaa gctgtggaac gtgtcatcaa gatggcggag gaaaagggag cggcatacac 1080

ttatttgaat gtcagtgcgc cttttcacag ttcgctgata cgatcagcat ctgaacaatt 1140

ccagactgta ttacaccggt attccttccg ggatgccgca tggccgatca tttcaaatgt 1200

cactgcacgc ccttacagca gcggaaattc gatcagcgaa catctcgagc agcacatgac 1260

gatgccggta agatggacgg aatcgatgca ttacttgctt ttacacggag tgacggaagt 1320

catcgaaatg ggtccgaaca atgtcttagc cggtctgctg agaaaaacaa cgaatcacat 1380

tgtaccttat cccttaggac agacatctga tgttcacttg ctttccaatt cagcagaaag 1440

aaagaaacat attgtccgtt tacgcaaaaa acaactgaat aaattgatga ttcaatccgt 1500

cattgcgcga aattacaaca aggattcagc ggcttattcc aatatgacga cggcattatt 1560

tacgcaaatc caagagctga aagagagaat ggaaagacat gaaaatgagc tctcagaaca 1620

agagctcgaa cattcgatcc atttatgcaa attaatttgc gaggctaaac agcttccgga 1680

ttgggaagaa ttgcggattt taaaataaag cgcccaggag gggacctatg tataccagtc 1740

aattccaaac cttagtagat gtcattcggg aaagaagcaa tatctctgac cgcgggatcc 1800

gttttatcga atccgataaa aacgagacgg ttgtctctta tcgccaattg tttgaagagg 1860

cgcaagggta tcttggctat ttacagcata tcggcattca gccgaagcag gaaatcgtat 1920

ttcaaatcca agaaaacaaa tcatttgtcg ttgctttttg ggcttgtata ttaggaggaa 1980

tgatcccggt gccggtcagt atcggagaag atgatgacca taagctgaag gtctggcgca 2040

tttggaacat attaaatcac ccgtttctga ttgcctctga aaaagtattg gacaaaataa 2100

agaaatatgc tgcagaacac gatttacagg atttccatca tcaattaaac gaaaaatctg 2160

acatcattca agatcaaacc tacgattacc ccgcttcgtt ttatgaacct gatgcggatg 2220

aactcgcctt tatccaattt tcttcaggat cgacaggaga tccaaaagga gtcatgttaa 2280

cgcatcacaa cttaatacat aacacgtgcg ccattgggaa tgccctagcc gttcattcga 2340

aagactcttt cttatcatgg atgcctttaa cgcatgatat ggggctcatc gcctgccacc 2400

ttgttccctt cataaccgga atcaatcaaa atctaatgcc tacagaatta tttattcgca 2460

gacctattct ttggatgaaa aaagctcatg aacataaagc cagtattcta tcctctccaa 2520

atttcgggta caactacttc cttaaatttc tgaaaaacga accagactgg gatttatccc 2580

acatcaaggt catcgcaaac ggtgcagaac cgatattgcc ggagctctgt gacgaatttt 2640

tgaaaagatg cgcagtattc aatctgaaaa gatccgccat tttgaatgtt tacggtttag 2700

cggaagcgtc ggtcggcgca gcattctcta aattaggtaa agaattcgtt cccgtttatt 2760

tgcatcgtga ctatttaaat cttggtgaaa gagctgtaaa agtaagcaaa gaggatcaaa 2820

attgcgcttc attcgtcgaa gtgggacaac ctattgacta ttgtcagctt cggatctccg 2880

atgaagtaaa tgaaagagta gaagacggaa tcatcggcca tatccagatc aaaggagaca 2940

atgtgactca agggtattat aacaaccccg agagtacgga aaaagcgctg acttctgacg 3000

gctgggtaaa aacgggagac ctcggattca ttagtgaaag tggtaactta gtcgtaaccg 3060

gaagagaaaa ggacattatt ttcgtgaacg gaaaaaatat ctacccgcac gatattgaac 3120

gggtcgcgat tgaaatggaa gaggttgact taggaagagt tgccgcctgc ggtgtatatg 3180

atcaaaagac acaaagcgga gaaatcgtgc tctttgttgt ttacaaaaaa tcacctgaaa 3240

aattcgcacc gcttgtcaaa gagataaaaa agcatttgct caagcggggc ggctggagca 3300

taaaagaagt ccttccgatc cgaaaactcc ctaaaacaac cagcggaaag gttaaacgct 3360

acgaacttgc cagacagtat gaggcaggga attttgcaac agagtctgcc gctatcaatg 3420

aatgtttgga gagcagcccg gaaacatccg gacagactcc cattcatgaa attgaaacgg 3480

aattactgtc tatcttttcc gatgtgctca atgggaaaaa ggttcacctc gctgacagtt 3540

attttgatat gggagcaaat tcattacagt tatcgcagat tgccgagcgc atagaacaga 3600

aattcggacg cgagcttgct gtttcagatc tctttacgta tccttctatc actgatttag 3660

cggcatatct gtctgaaaga cgggctgaaa tcaagcagga cgcggcagcg aaaccaagcc 3720

atgtgacgcc gaaagatatc gccattatcg ggatgtcgct caatgtccca ggagcatcaa 3780

cgaaaagtga tttttggaat ctgcttgaaa aaggtgagca cagcattcga gaataccctg 3840

catcccggct gaaagatgcg gcggattatt taaagtccat ccaaagcgaa atcaatgaga 3900

atcagtttgt gaagggcggc tatttagatg aaatcgaccg ctttgattac tcgtttttcg 3960

gtttagctcc taaaacggct cagtttatgg accctaacca aagactgttt ttgcagtctg 4020

tatggcatgc gattgaagat gcgggctatg ccggcggcag catgaacggg agccgtgtcg 4080

gggtatatgc agggtactcg aaggtgggct acgattatga acgtctcctt tctgcgaatt 4140

atccggagga gcttcatcaa tatatcgtgg gcaatctccc ttccgtgtta gccagccgaa 4200

tcgcttattt cctaaattta aaagggccgg cggtcacagt ggatacggca tgctcctcat 4260

cgcttgccgc ggttcatatg gcatgtaaat ctttaatatc cggcgattgt gaaatggctc 4320

ttgccggcgg tatccggaca tcgctcttgc cgatctgtat cggacttgat atggaatctt 4380

cggacgggta cacgaaaacg ttcagcaaag attcagacgg tactggcaca ggtgaaggcg 4440

cggccgcagt cctgctaaaa cctctgcagg atgctgttcg cgacggagac catatttacg 4500

gcgtaatcaa gggaagcgcg ctgaatcaag acggaacaac cgccgggatt acagcaccga 4560

atccggcagc tcagactgag gtcattgaga cggcttggaa agacgcgggc attgcccctg 4620

aaacactgtc tttcatcgaa gcgcatggca ccggaacgaa gctcggcgat ccggttgaat 4680

ttaacgggct ttgtaaagcg tttgaaaagt atacggcaaa aaaacaattt tgtgcgattg 4740

gttctgttaa atcgaacatc ggtcatttgt ttgaagcggc aggcatcgtc gggctgatca 4800

aatctgtcct catgctgaat cacaagaaaa atccgccgtt agtgcacttt aatgaaccta 4860

atccgctcat tcattttcac tcttcaccat tttacgtaaa ccaggaagct gcagcgttca 4920

catccggtga agagccgctg cgaggcggag tcagctcatt tggctttagc gggacgaacg 4980

ctcatgtggt attggaagaa tatatttctc aaagtaagta tgcgcccgag gatgaacatg 5040

ggccgcacct atttgtttta tccgctcata ctgaaaaatc actctatgaa ctcgcacagc 5100

agtaccggca atatgtatcg gatgacagcc aagcttcatt aaagtccatt tgctatacag 5160

ccagtacggg cagggctcat ttggatcatg gcattgccat gattgtatcc ggtaaacaag 5220

aactatcgga taagctgacc cgcctgattc agggagacag aaaccttccc ggtgtataca 5280

tcggctacaa gaatatgaag gaaatgctgc ccgctcataa agaagagctg aataaacaag 5340

cagccgcact gattaagcag cgtttacgta cgcaagatga acggatcaca tggctgcatc 5400

gcgccgccga attatttgtg caaggagccg ttatcgattg gcgcgcgctt tattccggtg 5460

aaactgtaca aaagacgcca ttgcccctgt atccgtttga acggagccga tgctgggctg 5520

aagctgacca attgcgctta aacgaggacg aaaagagagg agaagcggca ttgaatatca 5580

atcaatcgaa ggcgcacatt gaatccttct tgaaaactgt aatcagcaat gcttcgggga 5640

tcagagcgga ggaactcgat ctgaatgctc attttatcgg gctcgggatg gattccatca 5700

tgctgtcaca ggtcaaaaaa gccatcgcgg acgaatttgg ggcagacatc ccgatggatc 5760

gtttttttga tacgatgaac aaccttcaaa gtgtcataga ttacttggct gagaccgttc 5820

catcgtcctt tgcatccgct ccgcctcaag agaatgttcc ggcgcaggaa atacaggtca 5880

tttcagaagc acagtctgaa tcggatcgca gagaaggtca tcaagagcat atgctcgaaa 5940

aaataatcgc ttctcagaat caattaattc aggatacctt gcaagctcaa ttaaatagct 6000

ttaatttgtt gagaaacagc ggacatcatt ccgatgagaa agaatacgct aaagcgcaag 6060

agaaatcaat tccttctgtc aagcaggggc ctccggccgt cactgcagaa aagaaagcgg 6120

ctcaagaagc gaaaccctat gttcctttcc agcctcagaa cctgcatgat cagggacact 6180

ataccgcacg gcaaaaacaa tacttagaag atttcatcaa gaagtacgca gataaaacga 6240

aaggttccaa acaatataca gacaacaccc gatttgctca tgcaaacaac cgcaacttgt 6300

ccagcttccg ttcgtattgg aaggaaatcg tatacccgat tatcgccgaa cgatctgacg 6360

gttctaaaat gtgggatatt gacggaaatg aatatatcga tatcaccatg gggttcggag 6420

ttaacctttt cgggcatcat ccttccttta ttacacaggt tatcgatgat tcaacccgtt 6480

catcattgcc tccgctcggc ccgatgtcag atgtcgccgg tgaagttgcc gaccggatcc 6540

gcacatgtac cggggtggaa agggtcgctt tctataattc cggaacagag gccgtcatgg 6600

ttgccctgcg tttggcgcgg gcagcaacag gaagaaagaa agtcgtggcg ttctcgggat 6660

cttatcacgg cacgtttgac ggcgtattag gggttgccgg cacaaaaggc ggagctgcgt 6720

ctgcgaatcc gctggctccg ggcatactgc agagctttat ggatgatttg attattttac 6780

attacaacaa tcccgattcg ctggacgtga tccgcagtct tggtgatgaa ttggcagccg 6840

tactggtgga accggtacaa agccgcagac cggatttgca gccgcgggca tttttgaaag 6900

aattgcgggc gatcacgcag caatccggaa cagctctgat tatggatgaa attattaccg 6960

gatttcggat cggtctcggc ggcgcacagg aatggttcgg cattcaggct gatttagtga 7020

cctacggaaa aatcatcggc ggcggacagc cgttaggggt agttgccgga aaagctgagt 7080

tcatgaatgc gatcgacggg ggtacctggc agtatgggga cgattcctac ccgcaagacg 7140

aggcgaaacg cacgtttgtg gccggcacct tcaatactca tccgcttacc atgagaatgt 7200

cattagccgt ccttcgtcat ttacaaaccg agggagaaca tctgtatgag cagctgaatc 7260

aaaaaacagc ctacttggtc gatgagctga atcgctgctt cgaactagcg caagtgccta 7320

tccgcatggt tcgattcggt tctttattcc ggtttgtctc atcgcttgat aatgacttgt 7380

tcttttacca tctcaactat aaaggtgtct atgtgtggga aggacgcaac tgcttcttgt 7440

ccgtcgcgca taccgcagat gatatcgaaa atattattca agcggtgaaa gacacggtgg 7500

aggatcttcg ccgaggcgga tttattccgg aaggcccgga ttcccctgat ggcggaggcc 7560

gtaaaaagtc cgggacgcgc gagctttcac ctgaacaaaa gcagttggtt atggcatccc 7620

attacgggaa tgaagcttcc gccgctttaa accagtccat tatgctgaaa gtggagggcg 7680

aactgcagca tacgccatta aaacaagccg tccggcatat cgttgaccgt catgaagctt 7740

tacgtacggt gattcatccc gatgacgagg tacagcaagt gcaggaacgg atgaatatag 7800

aaataccagt cattgatttt accggtcacc cgcatgaaca tcgggagtcg gaaattcaaa 7860

aatggctgac agaagatgcc aagcggccgt tgcatttcca tgaacaaaag cctttgttta 7920

gaatccatgt gcttactgcg gctcacaatg aacatctgat tgtgctcacg ttccatcata 7980

tcattgccga tggatggtca atcgccgttt ttgttcaaga actggagagc aactacgcgg 8040

caattgtaca aggaaaacca atttcaccga aagaggcaga tgtttcgttt cgccaatact 8100

tagactggca gcaggcacag attgacagcg gccattatga agaaggggtc cgttattggc 8160

ggcgtcattt ctctgaaccg atacagcagc caattctgcc gagcgcagct tctgtctgtt 8220

atccgaaggg gtatgaggga gaccggtgta ccgtcaggct tggacggcca ttgagcgagg 8280

ctttaaggtc attaagcatt cagatgaaaa atagcgtatt tgtgacgatg ctgggtgcat 8340

ttcatctttt tctgcaccgg cttaccaaac agtcaggcct tgtgatcggg gtccccgctg 8400

caggtcaatc gcatatgaaa cagcatgatc tgattggaaa ttgcgtcaat atgattccgg 8460

tgaagaacac gtctacttca gaaagcactt taaccggtta tcttggcagt atgaaagaaa 8520

gcgtgaatct tgcaatgcgg caccaagccg tcccgatgac actggtggcc agagagcttc 8580

cgcacgatca agtgccggat atgcgtatta tctttaattt agacaggcct tttcgaaagc 8640

tgcatttcgg aaaggcggaa gcggagcccg ttgcataccc ggtaaaatgc accctgtatg 8700

atttatttct taacataaca gacgcgcatc aagaatatgt tcttgatttc gactttaata 8760

cgaacgtcat cagtccggaa atcatgaaaa agtggggagc gggttttaca aaattgctgc 8820

aaaaaatggt tgagggagat tcaatccctc ttgacgccat gatgctgttt tccgatgaag 8880

aacagcatga tttacaagca ctttatgccg aacaccagaa gcgggtctct tcaataggaa 8940

gcaatacagc aaatttcact gaagcctacg aggcgccggt aaatgaaacg gagcggcagc 9000

tggcgcggat ttgggaggaa cttttcggcc ttgaacgggt cggcagatca gatcgcttcc 9060

tggctctggg aggaaactca ctccaggcga cgcttatgct ttccaaagtt cagaagacat 9120

ttcatcaaaa tgtttccatc ggacaatttt tcaatcacca gactgttaag gaattagcac 9180

atttcattca gaacgaaaca aaagtcgtgc acctcccgat gaaggctgcc gagaaaaaag 9240

cgtattaccc gacatcgccg gcacagcaaa gagtatattt cctgcaccaa ctggaaccgg 9300

atcagctggc gcaaaatatg ttcggccaaa tatcaataac agggaagtac gatgagcaag 9360

ccctgatctc atctcttcaa caagtgatgc agcggcacga agcgtttcgc acgtatttcg 9420

acattataga tggcgatatc gttcagaaac ttgaaaacga agttgatttt aacgttcatg 9480

tccggacaat gagccgggac gaatttgatg cctattcaga ccggtttgta aaaccgttcc 9540

gcctggacca agctccgtta gttcgtgcag agctgatcaa gattgaaaac gagcaggccg 9600

aactgctcat cgatatgcat catatcattt cggacggtta ttccgtcaac atccttacaa 9660

atgaattgct ggctttatat catcagaaac cattaccgga cattgaattt gaatataaag 9720

atttcgcaga atggcaaaac caacggctga atgaggatgc tatgaagcgg caggagacat 9780

attggctgga acaatttcaa gacgaaattc ccatccttaa cctgccgaca gacggttcaa 9840

aagcggcaga acggtcttct gagggacagc gtgtgacatg ctccttacag ccggatgtca 9900

tccgttcgct tcaagatttg gcgcaaaagg cggaaaccac tctctatacg gtgcttctgg 9960

ccgcctataa tgtgctgctt cataaatata cgggacaaga agacattgtc gttggcacgc 10020

ctgcttcagg aagaaatcat ccggatatcg aaaagatcat cggtattttc atacaaacca 10080

ttggaatccg gacgaagccg cacgccaata gaacgtttac ggattatctg gaagaagtaa 10140

agcggcagac gcttgacgct ttcgaaaacc aagactatcc attcgaccgg cttgtggaga 10200

aattaaatgt gcagcgggaa acaaccggac agtctatgtt taacacgatg tttgtgtttc 10260

aaaacattga atttcatgaa atccggcaca atgaatgtac atttaaagtg aaagaacgaa 10320

atccaggggt ctctttgtat gatttgatgc tcacaatcga agatgccggt caacagatag 10380

agatgcattt tgattataaa ccgggacgat tcacaaaaga caccattgaa cagatcacca 10440

aacactatac cgccatttta aacagtcttg ttgagcagcc ggagatgaca ttgtcttccg 10500

ttcctatgct gtctgaaacc gaacggcatc aactgctgac ggagtgtaat ggcacaaaga 10560

cgccgtgtcc gcataacgaa acagtaaccc gatggtttga aatgcaagca gaacagagtc 10620

ccgatcatga agccgttatt tttggcaatg agcggtatac gtacagacag ctcaatgaac 10680

gggcgaaccg attggcgcgg acgttacgga caaaaggcgt acaagcggat caattcgttg 10740

ccatcatctg cccgcatcgg atcgaactga ttgtcggaat tttggctgtt ctgaaagccg 10800

gcggcgcata cgtgcccatt gatcctgaat atccggaaga tcggatccaa tatatcctga 10860

gagattcaag ggcggaggtt gtgttgacac agcgcagcct gctggatcaa ttaccgtatg 10920

atggtgacgt tgtgcttttg gatgaggaaa actcatacca tgagaatcac tcgaatcttg 10980

aatcggacag cgatgcgcat gatttggcct acatgatcta tacgtcaggt tccacgggaa 11040

atccaaaagg tgtcctcatt gagcatcagg gactggctga ttatatttgg tgggcgaaag 11100

aggtttatgt aagaggtgag aaaaccaact tcccattata ctcttccatc tctttcgatc 11160

tgactgtgac ctcgatattt acaccgctgg ttacgggaaa taccatcatt gtctttgacg 11220

gcgaagataa aagcgctgtg ctttctgaga ttatgcggga ctcaagaata gacatgatca 11280

aattgacccc ggcacatctg cacgtcatca aggagatgaa tatcgctggc ggcacggcaa 11340

tacggaaaat gattgtcggc ggagaaaatt taagcacccg tctggccaaa agtgtcagcg 11400

agcagtttaa aggccggctg gacattttca atgaatacgg accgacggaa gctgtcgtcg 11460

gatgtatgat ttatcacttc gacgcagaac gggacaagcg ggaatttgta ccgatcggca 11520

ctccggctgc caacacggat atttatgtgg ccgatgcaag cagaaacctg gttccgatcg 11580

gggtaatcgg cgaaatatat atcagcggac cgggtgttgc cagagggtat tggaaccgtc 11640

cggatttaac ggcagagaaa tttgttgaaa acccgtatgt cccgggagcg aagatgtaca 11700

aatcagggga tttggctaag cggttgaagg acggaaatct tgtatatatc gggcgcgttg 11760

atgaacaagt caaaatcagg ggataccgaa tcgagcttgg tgaaattgaa gcagcaatgc 11820

ataacgcgga agcggtgcaa aaagccgcgg ttacggtgaa agaagaagaa gacggcttaa 11880

aacaattatg cgcgtattac gtaagcggca agcctatagc ggctgcgcag cttagggaac 11940

aattgtcatc ggagcttccg gactacatgg ttccgtccta ttttgtccat ctggagcata 12000

tgccgttaac gtccaacggg aaaataaacc gtaaggcact gcctgcacca gaagcgagtc 12060

<210>4

<211>1481

<212> DNA

<213> 16srDNA

<400> 4

ctgctcagga cgaacgctgg cggcgtgcct aatacatgca agtcgagcgg acagatggga 60

gcttgctccc tgatgttagc ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag 120

actgggataa ctccgggaaa ccggggctaa taccggatgg ttgtttgaac cgcatggttc 180

aaacataaaa ggtggcttcg gctaccactt acagatggac ccgcggcgca ttagctagtt 240

ggtgaggtaa cggctcacca aggcaacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca 300

cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca 360

atggacgaaa gtctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtaaag 420

ctctgttgtt agggaagaac aagtaccgtt cgaatagggc ggtaccttga cggtacctaa 480

ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt 540

gtccggaatt attgggcgta aagggctcgc aggcggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc 600

cccggctcaa ccggggaggg tcattggaaa ctggggaact tgagtgcaga agaggagagt 660

ggaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag tggcgaaggc 720

gactctctgg tctgtaactg acgctgagga gcgaaaagcg tggggagcga acaggattag 780

ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg agtgctaagt gttagggggt ttccgcccct 840

tagtgctgca gctaacgcat taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac 900

tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac 960

gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatcct ctgacaatcc tagagatagg acgtcccctt 1020

cgggggcaga gtgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt 1080

taagtcccgc aacgagcgca acccttgatc ttagttgcca gcattcagtt gggcactcta 1140

aggtgactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct 1200

tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gacagaacaa agggcagcga aaccgcgagg 1260

ttaagccaat cccacaaatc tgttctcagt tcggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg 1320

aagctggaat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380

gtacacaccg cccgtcacac cacgagagtt tgtaacaccc gaagtcggtg aggtaacctt 1440

ttaggagcca gccgccgaag gtgggacaga tgattggggt g 1481

Claims (8)

1.一种枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，其特征在于：该菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是中国北京，保藏日期是2020年11月03日，保藏编号为CGMCCNo.20997。

2.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌在制备具有抗菌和/或抗炎的生物兽药或功能性饲料添加剂中的用途。

3.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌在制备抗菌肽中的用途。

4.一种由权利要求1所述枯草芽孢杆菌制备的发酵产物，包括表面活性素、伊枯草菌素、Mersacidin。

5.如权利要求4所述发酵产物，表面活性素、伊枯草菌素、Mersacidin的质量比为15~20：5~10：10~15。

6.如权利要求1所述枯草芽孢杆菌的发酵产物和/或权利要求4或5所述发酵产物在饲料中的应用。

7.一种饲料，包含权利要求1所述枯草芽孢杆菌或其发酵产物和/或权利要求4或5所述发酵产物，所述枯草芽孢杆菌添加量为100-200g/T。

8.制备如权利要求4或5所述发酵产物的制备方法，采用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，包括以下步骤：

步骤1：挑取所述枯草芽孢杆菌单菌落3-5个，接种于5mL营养肉汤培养基，培养11-12小时，再转接于100 mL营养肉汤培养基，继续培养8小时后，接种于50L发酵罐中；

步骤2：发酵罐培养基为：淀粉3g/L，豆粕粉2g/L，硫酸铵为0.5g/L，磷酸氢二钾0.1g/L，调节pH=6.5-7.0；

在发酵罐培养12小时，保持pH=6.5-7.0，溶氧>85%；

步骤3：将发酵好的培养基放入均质仪中，加入可溶性淀粉20%，麦芽糊精5%、硫酸钠0.5%，均质30min；

步骤4：将均质好的发酵液，进行真空喷雾干燥，条件为：进口温度150℃，出口温度90℃，真空度-0.05～-0.08MPa。

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