CN113109456A - 一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法，通过选择合适的溶剂、检测波长、色谱柱、流速和柱温等色谱条件，调整流动相比例达到主物质与杂质分离，设置流动相梯度洗脱缩短总检测时间，提高分析效率，用二极管阵列检测器确认最终检测方法主峰光谱纯度，配制不同浓度的标准品溶液，绘制标准曲线，配制供试品溶液，HPLC‑UV外标法测得供试品中咔唑含量，本发明方法总分析时间比标准方法更短，检测结果比用标准方法更加准确可靠，具有重要的应用意义。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法。
背景技术
咔唑(carbazole)，见下结构式(I)，又名二苯并吡咯、9-氮(杂)芴，分子式为C12H9N，分子量为167.20，熔点为246-247℃，沸点为354.76℃，咔唑在许多领域都有着广泛的应用，特别是在化学制药、染料、农药和塑料等有机合成中作为重要的中间体原料。OLED有亮度高、视域范围宽、能耗低等众多优点，在显示领域有着良好的发展前景。咔唑这种具有独特结构的含氮杂环化合物，在有机光电新材料开发中扮演着重要的角色，可以利用咔唑来制备电子传输层、发光层、空穴传输层等材料。
针对咔唑含量分析，现行标准有：1.GB/T 37175-2018焦化咔唑，含量测定方法为用带校正因子的GC-FID面积归一法；2.HG/T 4259-2011咔唑，含量测定方法为GC-FID面积归一法对试样中的咔唑进行定量。对于GB/T 37175-2018焦化咔唑，由于适用范围窄，而且操作不方便，很难应用于一般咔唑试样含量检测中；HG/T 4259-2011咔唑中的检测方法，对于成分复杂的试样，可能存在高沸点组分无法流出，而且面积归一法定量本身准确性较差，因此测得的结果有可能出现与真实含量偏差大的风险，对质量控制不利。
相对于气相色谱，高效液相色谱的分析对象更广，分子量大、难气化的样品均可检测；相对于面积归一法定量，外标法定量准确性更高。
发明内容
针对咔唑含量检测中现行标准检测方法的缺陷以及生产中对检测结果准确度要求越来越高，本发明提供一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法，通过HPLC-UV外标法对供试品中咔唑含量进行定量测定，总分析时间更短，检测结果比用标准方法更加准确可靠，为咔唑样品质量控制提供更科学的数据。
本发明通过以下技术来实现：
一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法，其原理是利用反相高效液相色谱法，通过选择合适的色谱条件达到主物质与杂质分离，用紫外检测器测定，外标法定量。主要包括以下步骤：1)选择合适的溶剂、检测波长、色谱柱、流速和柱温；2)通过调整流动相比例达到主物质与杂质分离；3)通过设置流动相梯度洗脱缩短总检测时间，提高分析效率；4)用二极管阵列检测器确认最终检测方法主峰的光谱纯度；5)配制不同浓度的咔唑标准品溶液，绘制标准曲线；6)配制供试品溶液，以保留时间定性，外标法定量。
所述选择合适的溶剂、检测波长、色谱柱、流速和柱温为：1)选择甲醇为溶剂；2)检测波长为254nm；3)选择色谱柱为Venusil XBP 4.6×150mm 5μm；4)设置的流速为1.0mL/min；5)柱温为：40℃或35℃，优选柱温：40℃。
所述通过调整流动相比例达到主物质与杂质分离的方法为：通过逐步增大流动相中水相比例来增加主物质保留，以提高杂质的分离能力，直到：1)主峰与前后第一个杂质分离度均大于1.5；2)进一步增加流动相极性后主峰里无多分离出杂质；此时流动相为甲醇:水＝70：30(v/v)。
所述通过设置流动相梯度洗脱缩短总检测时间，提高分析效率，梯度设置为：
为了HPLC系统达到平衡，后运行时间为5min。
所述用二极管阵列检测器确认最终检测方法主峰的光谱纯度为：以990为阈值限值，对用最终检测方法测得的主峰进行光谱纯度检测，纯度因子要在阈值限值内。
所述配制不同浓度的咔唑标准品溶液，绘制标准曲线为：称取折纯后咔唑标准品50mg(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，加入适量的甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，得到1mg/mL的咔唑标准品母液，逐步稀释成100mg/L、80mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、20mg/L、10mg/L的系列标准溶液，过0.45μm有机滤膜后装瓶，以确定好的检测方法上机检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，描绘标准曲线。
所述配制供试品溶液，以保留时间定性，外标法定量为：称取供试品大约60mg(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，甲醇定容并摇匀得到供试品溶液A，取A溶液1mL于25mL容量瓶中，甲醇定容后摇匀，取适量过0.45μm有机滤膜后装瓶，以确定好的检测方法上机检测，以保留时间定性，用标准曲线读出含量，根据咔唑含量公式计算出实际含量。
供试品中咔唑含量计算公式：
式中：
X——咔唑含量，％ c——曲线读得的咔唑浓度，mg/L
V——总稀释体积，mL m——称样量，mg
本发明具有明显的优势：通过选择合适的色谱条件、调整流动相比例达到主物质与杂质分离，确定最终检测条件后，绘制标准曲线，配制供试品溶液，用HPLC-UV定量，相对于标准检测方法，本方法得到的检测结果更加科学可靠，为产品的质量控制提供有效保障。
附图说明
图1为本发明实施例咔唑试样主峰与主要杂质的HPLC图谱，
图2为本发明实施例咔唑的紫外光谱图谱，
图3为本发明实施例咔唑试样第一个主要杂质的紫外光谱图谱，
图4为本发明实施例咔唑试样第二个主要杂质的紫外光谱图谱，
图5为本发明实施例咔唑试样第三个主要杂质的紫外光谱图谱，
图6为本发明实施例在不同色谱柱HPLC图谱，
图7为本发明实施例在不同柱温HPLC图谱，
图8为本发明实施例在不同流速HPLC图谱，
图9为本发明实施例在流动相为甲醇下的HPLC图谱，
图10为本发明实施例在流动相为甲醇-水＝9-1(V-V)下的HPLC图谱，
图11为本发明实施例在流动相为甲醇-水＝8-2(V-V)下的HPLC图谱，
图12为本发明实施例在流动相为甲醇-水＝7-3(V-V)下的HPLC图谱，
图13为本发明实施例在流动相为甲醇-水＝6-4(V-V)下的HPLC图谱，
图14为本发明实施例在最终梯度流动相下的HPLC图谱，
图15为本发明实施例在最终检测方法下样品的主峰光谱纯度图谱，
图16为本发明实施例咔唑标准曲线，
图17为本发明实施例咔唑试样含量测定结果图，
图18为本发明实施例咔唑标样用标准方法测得的其中一个GC图谱，
图19为本发明实施例咔唑标样加混合杂质用标准方法测得的其中一个GC图谱。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1：咔唑检测方法开发与含量测定
实验仪器与试剂
安捷伦HPLC-1260，配G7115A-DAD检测器；赛多利斯SQP十万分之一分析天平；0.45μm有机滤膜；HPLC级甲醇、超纯水、丙酮、二氯甲烷；容量瓶、移液管、样品瓶等实验室常用玻璃器皿。
1.咔唑的高效液相含量检测方法开发
1.1溶剂选择：在2mg/mL浓度下，咔唑在丙酮、二氯甲烷、甲醇中溶解性都较好，甲醇挥发性相对较小，与一般反相色谱流动相互溶性良好，选择甲醇做溶剂。
1.2检测波长选择：在主要色谱参数为，流动相：甲醇；色谱柱为Venusil XBP C184.6×250mm5μm；柱温：40℃；进样量：5μL；流速：1.0mL/min下，对浓度为1mg/mL咔唑试样检测，得到主峰与主要杂质的图谱，见附图1；用HPLC-DAD进行对咔唑以及其主要杂质进行光谱扫描，范围为190nm～500nm。结果主峰咔唑λmax＝234nm，见附图2；第一个较大杂质λmax＝234nm，见附图3；第二个较大杂质λmax＝251nm，见附图4；第三个较大杂质λmax＝253nm，见附图5；由于液相检测方法的优劣最主要的评价标准是主峰与杂质的分离情况，在试样中，杂质相对于主物质含量会低很多，为了更好监控杂质，综合考虑，选择254nm作为检测波长。
1.3色谱柱选择：
1.3.1色谱柱品牌选择：在同等的色谱条件下(主要色谱参数，流动相：甲醇；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：5μL；咔唑溶液浓度：50mg/L)，研究比较了：(1)InertSustain C18 4.6×250mm 5μm；(2)Inertsil ODS-SP 4.6×250mm 5μm；(3)Venusil XBP C18 4.6×250mm 5μm；(4)ZORBAX SB-C18 4.6×250mm 5.0μm共4根不同品牌色谱柱对检测结果的影响，见附图6。
表1色谱柱品牌选择结果汇总
结论：从主峰对称因子、理论塔板等因素综合考虑，选择的色谱柱为Venusil XBPC18 4.6×250mm 5μm。
1.3.2色谱柱规格：考虑到试样中未知杂质分布情况，检测过程中流动相一般都会用到梯度洗脱，为了让色谱柱更快达到平衡，提高工作效率，选用色谱柱规格为4.6×150mm5μm短柱。
1.3.3最终色谱柱：选择的色谱柱为Venusil XBP C18 4.6×150mm 5μm。
1.4柱温：在同等的色谱条件下(主要色谱参数，流动相：甲醇；色谱柱：VenusilXBP C184.6×150mm 5μm；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：5μL；咔唑溶液浓度：50mg/L)，本次考察了30℃、35℃、40℃、45℃四个柱温下对检测的影响，见附图7。
表2不同柱温对结果影响结果汇总
结论：从主峰对称因子和理论塔板数综合考虑，最终选择的柱温为40℃或者35℃，优选柱温40℃。
1.5流速：在同等的色谱条件下(主要色谱参数，流动相：甲醇；色谱柱：VenusilXBP C184.6×150mm 5μm；柱温：40℃；检测波长：254nm；进样量：5μL；咔唑溶液浓度：50mg/L)，分别考察0.5mL/min、0.7mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min、1.5mL/min五个流速对检测结果的影响，见附图8。
表3不同流速对结果影响结果汇总
结论：从主峰对称因子和理论塔板数综合考虑，选择的流速为1.0mL/min。
1.6流动相调整：配制浓度为50mg/L咔唑供试品溶液，在同等的色谱条件下(主要色谱参数，色谱柱：Venusil XBP C18 4.6×150mm 5μm；柱温：40℃；检测波长：254nm；流速：1.0mL/min；进样量：5μL)，考察流动相中水相比例不同对杂质分离的影响，结果见表4。
表4流动相调整结果汇总
结论：从以上数据对比，条件4流动相比例能分离杂质，并且主峰与前后第一个杂质分离度均大约1.5，但最大保留杂质为41.85min，为了缩短总分析时间，在条件4的色谱条件下设置流动相梯度。
1.7通过调整流动相梯度以缩短分析时间，梯度设置为：
为了HPLC系统达到平衡，后运行时间为5min。
在此梯度流动相下，最大保留杂质为12.86min，总分析时间为17min，见附图14。
1.8以990为阈值限值，用二极管阵列检测器对1.7梯度条件下的主峰进行光谱纯度检测，结果纯度因子在阈值限值内，见图15。
1.9咔唑最终色谱条件，色谱柱：Venusil XBP C18 4.6×150mm 5μm；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：5μL；总分析时间17min。
流动相：甲醇-水梯度洗脱；梯度设置为：
为了HPLC系统达到平衡，后运行时间为5min。
1.10咔唑标准曲线绘制：称取含量为99.06％的咔唑标准品50.48mg于50mL容量瓶中，加入适量的甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，得到1000mg/L的咔唑标准品母液，用甲醇逐步稀释成100mg/L、80mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、20mg/L、10mg/L的系列标准溶液，过0.45um有机滤膜装瓶上机检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制曲线，得曲线相关系数为0.99992，在此浓度范围内线性良好，见附图16。
1.11对咔唑试样进行定量：称取待测试样大约60mg(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，适量甲醇溶解后定容并摇匀，用移液管移取1.0mL于25mL容量瓶中，甲醇定容后摇匀，取适量过0.45um有机滤膜，装瓶上机检测，用保留时间定性，用标准曲线读出含量，根据如下公式计算出试样中咔唑实际含量。
式中：
X—咔唑含量，％ c—曲线读得的咔唑浓度，mg/L
V—总稀释体积，mL m—称样量，mg
1.11.1咔唑试样定量实例：称取待测试样59.90mg于50mL容量瓶中，适量甲醇溶解后定容并摇匀，用移液管移取1.0mL于25mL容量瓶中，甲醇定容后摇匀，取适量过0.45um有机滤膜，装瓶上机检测，这里：称样量(m)为59.90mg，总稀释体积(v)为50mL*25mL/1mL＝1250mL，用标准曲线读出含量(c)为46.12mg/L，代入1.11含量计算公式得试样中咔唑含量为96.24％，见附图17。
2.咔唑含量测定方法学验证
2.1.咔唑试样溶液稳定性验证
将配置好的咔唑试样溶液，用本发明方法分别在0小时，4小时，12小时，24小时测定一次，咔唑峰面积变化的结果见下表。
表5咔唑试样溶液稳定性结果汇总
| 放置时间，小时 | 0 | 4 | 12 | 24 | 平均值 | RSD,％ |
| 峰面积，mAU*s | 1488.1 | 1478 | 1468.6 | 1490.2 | 1481.2 | 0.67 |
结果：在24小时内，咔唑试样溶液峰面积变化RSD为0.67％＜1.0％，表明咔唑试样溶液在24H内稳定性良好。
2.2精密度确认
用本发明方法对同一个咔唑试样进行6次平行检测，计算含量RSD，％。
表6精密度实验结果汇总
| 编号 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 平均值 | RSD,％ |
| 检测结果，％ | 96.24 | 96.62 | 96.71 | 97.02 | 96.46 | 97.21 | 96.71 | 0.37 |
结果：用本发明方法对同一个咔唑试样6平行测定，含量RSD为0.37％＜1.0％，精密度良好。
2.3.准确度确认
用本发明方法对明示值为99.06％的标准样进行三平行检测，结果见表7。
表7准确度实验结果汇总
结果：用本发明方法进行三平行检测的平均值与明示值相对偏差为0.23％＜1.0％,结果准确度高。
2.4.HG/T 4259-2011咔唑标准测定方法与本发明方法结果准确性对比。
2.4.1对含量为99.06％的咔唑标准品进行检测
表8标准方法与本发明方法对已知含量的咔唑标准样检测结果对比
结论：用本发明方法检测得到的结果与明示值相对偏差更小，更接近实际值。(HG/T4259-2011法测定咔唑标样其中一个图谱结果见附图18)
2.4.2在含量为99.06％的咔唑标准品加入3％混合杂质，即试样中咔唑理论值含量为96.06％，用本发明方法与HG/T 4259-2011咔唑方法进行检测，结果如下表：
表9标准方法与本发明方法对加入已知混合杂质标准样检测结果对比
结论：用本发明方法检测得到的结果更接近理论值。(HG/T 4259-2011法测定加入3％混合杂质的咔唑标样其中一个图谱结果见附图19)
2.4.3小结：“HG/T 4259-2011咔唑”标准中的咔唑含量检测方法，特别是对于成分复杂的试样，检测结果存在与实际含量偏差大的风险，用本发明方法测得的结果更加科学可靠。
结论：本发明针对“HG/T 4259-2011咔唑”中检测方法得到的结果存在与实际含量偏差大的风险，以及“GB/T 37175-2018焦化咔唑”操作复杂，适用范围窄等缺点，发明了用HPLC-UV外标法的定量方式，得到比用标准方法检测更加科学可靠的结果，总分析时间也比标准方法更短，效率更高，对咔唑产品的质量控制提供有效保障，具有重要的应用意义。
Claims (8)
1.一种基于高效液相色谱法的咔唑含量测定方法，主要包括以下步骤：1)确定液相色谱检测方法：选择合适的溶剂、检测波长、色谱柱、流速、柱温、流动相；2)配制不同浓度的咔唑标准品溶液，以步骤1)的检测方法检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；3)配制供试品溶液，以步骤1)的检测方法检测，以保留时间定性，外标法定量；
所述选择合适的溶剂、检测波长、色谱柱、流速和柱温为：选择甲醇为溶剂、检测波长为254nm、选择色谱柱为Venusil XBP 4.6×150mm 5μm、设置的流速为1.0mL/min、柱温为40℃或35℃。
2.根据权利要求1所述的咔唑含量测定方法，所述柱温：40℃。
3.根据权利要求2所述的咔唑含量测定方法，所述流动相梯度洗脱，设置为：
4.根据权利要求2所述的咔唑含量测定方法，其中17分钟梯度洗脱后设置5min后运行时间以平衡仪器。
5.根据权利要求4所述的咔唑含量测定方法，所述步骤2)前有对检测方法的确认步骤，即用二极管阵列检测器确认检测方法主峰的光谱纯度为：以990为阈值限值，对检测方法测得的主峰进行光谱纯度检测，纯度因子在阈值限值内。
6.根据权利要求1所述的咔唑含量测定方法，所述外标法定量方法为：用标准曲线读出含量，根据公式计算出供试品中咔唑含量X：
供试品中咔唑含量计算公式：
式中：
X——咔唑含量，％ c——曲线读得的咔唑浓度，mg/L
V——总稀释体积，mL m——称样量，mg。
7.根据权利要求6所述的咔唑含量测定方法，所述步骤2)的具体方法为：称取折纯后咔唑标准品50mg于50mL容量瓶中，加入适量的甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，得到1mg/mL的咔唑标准品母液，逐步稀释成100mg/L、80mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、20mg/L、10mg/L的系列标准溶液，过0.45μm有机滤膜后装瓶，以步骤1)的检测方法检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，描绘标准曲线。
8.根据权利要求7所述的咔唑含量测定方法，所述步骤3)的具体方法为：称取供试品大约60mg于50mL容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，甲醇定容并摇匀得到供试品溶液A，取A溶液1mL于25mL容量瓶中，甲醇定容后摇匀，取适量过0.45μm有机滤膜后装瓶，以步骤1)的检测方法检测，以保留时间定性，用标准曲线读出含量，根据咔唑含量公式计算出实际含量。
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| CN114839294A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-08-02 | 宿迁市振兴化工有限公司 | 一种受阻胺光稳定剂中间体的含量测定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101603957A (zh) * | 2008-06-11 | 2009-12-16 | 大庆油田有限责任公司勘探开发研究院 | 一种咔唑类化合物的气相色谱-飞行时间质谱分析方法 |
| JP2016080542A (ja) * | 2014-10-17 | 2016-05-16 | 森永乳業株式会社 | 多糖類の測定方法及び測定装置 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101603957A (zh) * | 2008-06-11 | 2009-12-16 | 大庆油田有限责任公司勘探开发研究院 | 一种咔唑类化合物的气相色谱-飞行时间质谱分析方法 |
| JP2016080542A (ja) * | 2014-10-17 | 2016-05-16 | 森永乳業株式会社 | 多糖類の測定方法及び測定装置 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HAKAN CARLSSON等: "Clean-up and analysis of carbazole and acridine type polycyclic aromatic nitrogen heterocyclics in complex sample matrices", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
| 姜辉等: "咔唑的溴化研究", 《广州化学》 * |
| 谢光华等: "咔唑及其衍生物的高效液相色谱分析", 《化学试剂》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114839294A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-08-02 | 宿迁市振兴化工有限公司 | 一种受阻胺光稳定剂中间体的含量测定方法 |
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