CN113101339A - 治疗慢性肝损伤汤剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗慢性肝损伤汤剂及其制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：将百合和乌药混合，进行2次水提，将所述第一滤液和第二滤液混合，得到原液，浓缩所述原液至浓度为0.30～7.61g/mL，得到治疗慢性肝损伤汤剂。本发明的治疗慢性肝损伤汤剂能够显著减少肝脏的纤维化程度，且该治疗慢性肝损伤汤剂简单，仅由两种中药组成，原料易得，价格便宜，用传统水提法即可制备，制作方法简单易行，该治疗慢性肝损伤汤剂中乌药气雄性温，百合作为药食同源的药材，常用于人们的日常饮食，几乎没有毒性。故安全范围大，不良反应小。

Description

治疗慢性肝损伤汤剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于治疗慢性肝损伤药物技术领域，具体来说涉及一种治疗慢性肝损伤汤剂及其制备方法和应用。
背景技术
肝病是全球健康问题，其发病率极高且逐年上升，严重威胁人类的生命健康。然而目前临床对慢性肝损伤和肝纤维化的治疗并没有达到满意的效果，且一些治疗药物的副作用较大，如引起皮肤炎症浮肿、荨麻疹、心悸、血压升高等不良反应。所以，寻找一种能够有效治疗慢性肝损伤和肝纤维化且毒副作用小的药物十分必要。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法。
本发明的另一目的在于提供上述制备方法获得的治疗慢性肝损伤汤剂。
本发明的另一目的是提供治疗慢性肝损伤汤剂在药物中作为减少肝脏纤维化程度的应用。
本发明的另一目的是提供一种治疗慢性肝损伤的中药。
本发明的目的是通过下述技术方案予以实现的。
一种治疗慢性肝损伤的中药，由百合和乌药组成或对百合和乌药浸提而成。
在上述技术方案中，按质量份数计，所述百合和乌药的比为(8～12):(1～5)。
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，将百合和乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡40～60分钟，再于70～80℃熬制40～60分钟，过滤，得到第一滤液和滤渣；
第2次水提：将所述滤渣加入水，于70～80℃熬制40～60分钟，过滤，得到第二滤液；
在所述步骤1中，按质量份数计，所述百合和乌药的比为(8～12):(1～5)。
在所述步骤1中，所述水为双蒸水。
在所述步骤1中，所述百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:(6～10)，所述质量份数为g，所述体积份数为mL。
在所述步骤1中，所述过滤采用纱布。
在所述步骤1中，所述百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:(4～8)，所述质量份数为g，所述体积份数为mL。
步骤2，将所述第一滤液和第二滤液混合，得到原液，浓缩所述原液至浓度为0.30～7.61g/mL，得到治疗慢性肝损伤汤剂。
在所述步骤2中，浓缩至所述治疗慢性肝损伤汤剂的浓度为0.50～4.6g/mL。
上述制备方法获得的治疗慢性肝损伤汤剂。
上述治疗慢性肝损伤汤剂在药物中用于减少肝脏纤维化程度的应用。
本发明的治疗慢性肝损伤汤剂能够显著减少肝脏的纤维化程度，且该治疗慢性肝损伤汤剂简单，仅由两种中药组成，原料易得，价格便宜，用传统水提法即可制备，制作方法简单易行，该治疗慢性肝损伤汤剂中乌药气雄性温，百合作为药食同源的药材，常用于人们的日常饮食，几乎没有毒性。故安全范围大，不良反应小。
附图说明
图1为正常组、模型组、阳性组和BWD(百合乌药汤)给药组小鼠的测试结果对比，其中，图1A为小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量，图1B为小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量，图1C为小鼠每周体重值。CNTR：正常组；Model：模型组；Positive：阳性组；实施例1：采用实施例1所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组；实施例2：采用实施例2所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组；实施例3：采用实施例3所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组；实施例4：采用实施例4所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组；实施例5：采用实施例5所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组。
图2为小鼠的染色图片，图2A为正常组小鼠肝右叶组织的HE染色图，图2B为模型组小鼠肝右叶组织的HE染色图，图2C为阳性组小鼠肝右叶组织的HE染色图，图2D为采用实施例1所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的HE染色图，图2E为采用实施例2所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的HE染色图，图2F为采用实施例3所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的HE染色图；图2G为正常组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图，图2H为模型组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图，图2I为阳性组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图，图2J为采用实施例1所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图，图2K为采用实施例2所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图，图2L为采用实施例3所得治疗慢性肝损伤汤剂的BWD给药组小鼠肝右叶组织的天狼星红染色图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
下述实施例中所涉及的仪器型号和厂家如下：
荧光正置显微镜 型号BX53 奥林巴斯有限公司全自动生化分析
全自动生化分析仪 型号SMT100 北京普朗新技术有限公司
旋转蒸发仪 型号N-1100 上海爱朗仪器有限公司
下述实施例中所涉及药品的购买源如下：
百合：唐山唐人医药有限公司
乌药：唐山唐人医药有限公司
CCl4分析纯：天津大茂化学试剂厂
天冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒：北京瑞正善达生物工程技术有限公司
丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒：北京瑞正善达生物工程技术有限公司
HE染料：北京华越洋生物有限公司
Masson三色染色液：北京雷根生物技术有限公司
水为双蒸水。
实施例1
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，在熬药罐中，将100g百合和30g乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡50分钟，于80℃熬制60分钟，采用三层纱布过滤，得到第一滤液和滤渣；百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:8，质量份数为g，体积份数为mL。
第2次水提：将滤渣加入水，于80℃熬制40分钟，采用三层纱布过滤，得到第二滤液；百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:4，质量份数为g，体积份数为mL。
步骤2，将第一滤液和第二滤液混合，得到原液，用旋转蒸发仪浓缩原液的浓度至0.507g/mL，得到256.4mL治疗慢性肝损伤汤剂，作为实施例1。
实施例2
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，在熬药罐中，将100g百合和30g乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡50分钟，于80℃熬制60分钟，采用三层纱布过滤，得到第一滤液和滤渣；百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:8，质量份数为g，体积份数为mL。
第2次水提：将滤渣加入水，于80℃熬制40分钟，采用三层纱布过滤，得到第二滤液；百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:4，质量份数为g，体积份数为mL。
步骤2，将第一滤液和第二滤液混合，得到原液，用旋转蒸发仪浓缩原液的浓度至1.521g/mL，得到85.47mL治疗慢性肝损伤汤剂，作为实施例2。
实施例3
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，在熬药罐中，将100g百合和30g乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡50分钟，于80℃熬制60分钟，采用三层纱布过滤，得到第一滤液和滤渣；百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:8，质量份数为g，体积份数为mL。
第2次水提：将滤渣加入水，于80℃熬制40分钟，采用三层纱布过滤，得到第二滤液；百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:4，质量份数为g，体积份数为mL。
步骤2，将第一滤液和第二滤液混合，得到原液，用旋转蒸发仪浓缩原液的浓度至4.563g/mL，得到28.49mL治疗慢性肝损伤汤剂，作为实施例3。
实施例4
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，在熬药罐中，将100g百合和20g乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡50分钟，于80℃熬制60分钟，采用三层纱布过滤，得到第一滤液和滤渣；百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:8，质量份数为g，体积份数为mL。
第2次水提：将滤渣加入水，于80℃熬制40分钟，采用三层纱布过滤，得到第二滤液；百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:4，质量份数为g，体积份数为mL。
步骤2，将第一滤液和第二滤液混合，得到原液，用旋转蒸发仪浓缩原液的浓度至1.404g/mL，得到85.47mL治疗慢性肝损伤汤剂，作为实施例4。
实施例5
一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，在熬药罐中，将100g百合和40g乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡50分钟，于80℃熬制60分钟，采用三层纱布过滤，得到第一滤液和滤渣；百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:8，质量份数为g，体积份数为mL。
第2次水提：将滤渣加入水，于80℃熬制40分钟，采用三层纱布过滤，得到第二滤液；百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:4，质量份数为g，体积份数为mL。
步骤2，将第一滤液和第二滤液混合，得到原液，用旋转蒸发仪浓缩原液的浓度至1.638g/mL，得到85.47mL治疗慢性肝损伤汤剂，作为实施例5。
对实施例1～5所得治疗慢性肝损伤汤剂进行测试：
选取动物为健康且体重为20±2g的昆明种小鼠64只，适应性喂养一周后，随机分为正常组、模型组、阳性组和BWD给药组，其中BWD给药组包括实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5，每个实施例各分配8只小鼠。每组的实验结果均为该组各小鼠实验结果的平均值。
阳性组给予甘草酸二铵水溶液(甘草酸二铵胶囊购自正大天晴药业集团股份有限公司)，将2.92mg甘草酸二铵粉剂溶于1mL双蒸水中，制备成浓度为2.92mg/mL的甘草酸二铵水溶液，小鼠每10g体重灌胃0.1mL甘草酸二铵水溶液，每天灌胃两次，早晚各一次；
EWD给药组分别给予实施例1～5中一种治疗慢性肝损伤汤剂，每10g体重小鼠灌胃0.1mL的治疗慢性肝损伤汤剂，每天早上灌胃一次；
正常组和模型组灌胃相应体积的生理盐水(每10g体重小鼠灌胃0.1mL的生理盐水)。
除正常组外，其他各组每周两次腹腔注射四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液(CCl4和橄榄油体积比为1：4的混合物)，每10g体重小鼠腹腔注射10μl四氯化碳橄榄油溶液，用于对昆明种小鼠造成慢性肝损伤；正常组注射橄榄油，每10g体重小鼠腹腔注射10μl橄榄油。
每周记录小鼠的体重，上述给药量随体重的改变而变化。
给药六周后，取得各组小鼠的血液和肝组织，血液离心后得血清，检测其中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量来评价各组小鼠的肝功能情况，肝组织称量重量，肝右叶包埋，切片，然后进行HE染色和天狼星红染色，观察各组小鼠肝损伤及肝纤维化程度。
BWD给药组给予实施例1的治疗慢性肝损伤汤剂的结果：
如图1所示，给予实施例1治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠血清中ALT含量下降为模型组的64.77％，AST含量下降为模型组的74.82％，表明实施例1治疗慢性肝损伤汤剂具有很好的改善肝功能的作用。服用实施例1治疗慢性肝损伤汤剂小鼠的体重与正常组相比没有明显差异，表明在该配比和剂量下，治疗慢性肝损伤汤剂安全有效，没有其他副作用和毒性。
BWD给药组给予实施例2的治疗慢性肝损伤汤剂的结果：
如图1所示，给予实施例2治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠血清中ALT含量下降为模型组的45.37％，效果优于阳性组(阳性组小鼠血清中ALT含量下降为模型组的50.68％)，AST含量下降为模型组的60.28％，表明实施例2治疗慢性肝损伤汤剂具有很好地保肝作用，减少肝细胞坏死，改善小鼠的肝功能受损情况。实施例2治疗慢性肝损伤汤剂组小鼠体重与正常组相比没有明显差异，表明在该配比和剂量下，治疗慢性肝损伤汤剂安全有效，没有其他副作用和毒性。
BWD给药组给予实施例3的治疗慢性肝损伤汤剂的结果：
如图1所示，给予实施例3治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠血清中ALT含量下降为模型组的58.24％，AST含量下降为模型组的66.46％，表明实施例3治疗慢性肝损伤汤剂具有较好的改善肝功能的作用。服用实施例3治疗慢性肝损伤汤剂小鼠的体重与正常组相比没有明显差异，表明在该配比和剂量下，治疗慢性肝损伤汤剂安全有效，没有其他副作用和毒性。
BWD给药组给予实施例4的治疗慢性肝损伤汤剂的结果：
如图1所示，给予实施例4治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠血清中ALT含量下降为模型组的67.00％，AST含量下降为模型组的74.57％，表明实施例4治疗慢性肝损伤汤剂具有较好的改善肝功能的作用。服用实施例4治疗慢性肝损伤汤剂小鼠的体重与正常组相比没有明显差异，表明在该配比和剂量下，治疗慢性肝损伤汤剂安全有效，没有其他副作用和毒性。
BWD给药组给予实施例5的治疗慢性肝损伤汤剂的结果：
如图1所示，给予实施例5治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠血清中ALT含量下降为模型组的68.34％，AST含量下降为模型组的74.57％，表明实施例5治疗慢性肝损伤汤剂具有较好的改善肝功能的作用。服用实施例5治疗慢性肝损伤汤剂小鼠的体重与正常组相比没有明显差异，表明在该配比和剂量下，治疗慢性肝损伤汤剂安全有效，没有其他副作用和毒性。
如图2A～2F所示，正常组小鼠的肝组织结构完整，肝细胞排列致密(2A图)，模型组小鼠肝细胞形态受损严重，大小不一，部分明显肿大，排列疏松，细胞质彻底透明。肝小叶形状结构改变，叶内有片状坏死，汇管区有炎症细胞(2B图)。阳性组小鼠肝组织损坏程度减轻，但炎症细胞很多，细胞排列不整齐(2C图)，BWD给药组小鼠肝受损情况明显减轻，效果较阳性组更好，只有轻度坏死，细胞结构较为完整，几乎没有炎症细胞(2D、2E、2F图)。由图可知，给予实施例1治疗慢性肝损伤汤剂后，小鼠肝组织经过HE染色后观察，与模型组相比，肝细胞形态趋于完整，细胞排列致密，几乎没有炎症细胞，与阳性组相比，细胞形态比经过阳性药物治疗后的形态更加规整，并且细胞间隙也较阳性组小。给予实施例2治疗慢性肝损伤汤剂后，小鼠肝组织经过HE染色后观察，与模型组相比，肝细胞排列致密，细胞形态完整，炎症细胞大量减少，与阳性组相比，细胞形态比阳性组更加整齐，炎症细胞也更少。给予实施例3治疗慢性肝损伤汤剂后，小鼠肝组织经过HE染色后观察，与模型组相比，肝细胞形态结构完整，排列致密整齐，炎症细胞较少，与阳性组相比，细胞形态比阳性组更加整齐，炎症细胞也更少。
如图2G～2L所示，纤维被染成红色，正常组小鼠肝组织结构正常，没有胶原纤维沉积，且没有空泡(2G图)。模型组肝组织中央静脉和汇管区有明显的胶原纤维沉积，肝小叶形状结构改变，有假小叶生成。肝细胞发生肿大，气球样变，细胞间隙明显增大，且出现大量气泡，细胞损伤严重(2H图)。阳性组小鼠肝组织的损伤情况与模型组相比较轻，有少量的胶原纤维沉积，细胞间隙较大，排列不紧密(2I图)。BWD给药组胶原纤维显著减少，效果较阳性组更好，肝细胞形态趋于正常，细胞结构较为完整，几乎没有空泡(2J、2K、2L图)。由图可知，给予实施例1治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠肝组织经过天狼星红染色后观察，与模型组相比，胶原纤维明显减少，肝纤维化程度明显减轻，细胞排列更为紧密，空泡大大减少，损伤程度明显减轻。给予实施例2治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠肝组织经过天狼星红染色后观察，与模型组相比，胶原纤维明显减少，肝纤维化程度明显减轻，细胞排列更为紧密，细胞空泡减少，损伤程度明显减轻，与阳性组相比，细胞排列更为致密，空泡更少，肝纤维化程度也相对更轻。给予实施例3治疗慢性肝损伤汤剂的小鼠肝组织经过天狼星红染色后观察，与模型组相比，胶原纤维明显减少，肝纤维化程度明显减轻，细胞排列更为紧密，细胞空泡减少，损伤程度明显减轻，与阳性组相比，细胞排列更为致密，空泡更少，肝纤维化程度也相对更轻。
以上结果表明，本发明治疗慢性肝损伤汤剂能够使受损肝脏中的炎症细胞减少，改善细胞形态，减少胶原纤维，减轻小鼠的肝纤维化程度，且效果优于阳性药物。
从生化指标来看，BWD给药组小鼠血清中ALT和AST的含量与阳性组接近，在实施例2中，ALT的含量低于阳性组，表明BWD效果优于阳性组，在质量比为百合：乌药＝10：3且剂量为0.51～4.6g/mL时得到很好的治疗效果。从HE染色来看，与阳性组相比，各BWD给药组小鼠的肝组织形态均更完整，细胞间隙更小，炎症细胞也更少，表明BWD能很好地保护肝脏，减少肝脏炎症反应，且效果优于阳性组。从天狼星红染色来看，与阳性组相比，各BWD给药组小鼠的肝纤维化程度也相对更轻，细胞排列更为致密，空泡也更少，表明BWD具有很好的抗纤维化的作用，且效果优于阳性组。
本发明的治疗慢性肝损伤汤剂具有很好的治疗慢性肝损伤和肝纤维化的作用，目前对于其对慢性肝损伤和肝纤维化的保护作用研究虽在小鼠身上进行，但由于小鼠与人均为均为哺乳类动物，且小鼠与人的慢性肝损伤和肝纤维化的致病机制及药物的作用靶点相近，许多药物的治疗效果相似，故治疗慢性肝损伤汤剂可以用于治疗人的慢性肝损伤及肝纤维化疾病，且能够得到很好的治疗效果。
以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种治疗慢性肝损伤的中药，其特征在于，由百合和乌药组成或对百合和乌药浸提而成。
2.根据权利要求1所述的中药，其特征在于，按质量份数计，所述百合和乌药的比为(8～12):(1～5)。
3.一种治疗慢性肝损伤汤剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，将百合和乌药混合，进行2次水提，其中，
第1次水提：加入水，先浸泡40～60分钟，再于70～80℃熬制40～60分钟，过滤，得到第一滤液和滤渣；
第2次水提：将所述滤渣加入水，于70～80℃熬制40～60分钟，过滤，得到第二滤液；
步骤2，将所述第一滤液和第二滤液混合，得到原液，浓缩所述原液至浓度为0.30～7.61g/mL，得到治疗慢性肝损伤汤剂。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，按质量份数计，所述百合和乌药的比为(8～12):(1～5)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述百合和乌药的质量份数和第1次水提所加入水的体积份数的比为1:(6～10)，所述质量份数为g，所述体积份数为mL。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述过滤采用纱布。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述百合和乌药的质量份数和第2次水提所加入水的体积份数的比为1:(4～8)，所述质量份数为g，所述体积份数为mL。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤2中，浓缩至所述治疗慢性肝损伤汤剂的浓度为0.50～4.6g/mL。
9.如权利要求1～8中任意一项所述制备方法获得的治疗慢性肝损伤汤剂。
10.如权利要求9所述的治疗慢性肝损伤汤剂在药物中用于减少肝脏纤维化程度的应用。
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