CN113092651B - 一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测样品、沉淀剂和pH为4.2～4.8的三乙胺缓冲溶液混合，提取收集上清液；所述待测样品为乳或乳制品；(2)将步骤(1)得到的上清液通过反相固相萃取柱富集后洗脱，收集洗脱液；(3)利用液相色谱串联三重四级杆质谱对步骤(2)的洗脱液中的甜味剂进行检测；所述甜味剂包括柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙。本发明的检测方法弥补了现有乳及乳制品中甜味剂的检测方法待测甜味剂种类的局限，既能够同时检测合成甜味剂和天然甜味剂，更好地减少了基质干扰，有更低的检出限，提高了检测的准确率，提高了方法的准确度。
Description
技术领域
本发明涉及食品检测领域，具体涉及一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法。
背景技术
甜味剂是指赋予食品以甜味的食品添加剂，目前我国已经批准使用的甜味剂约有20种，按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂。近几年来，随着我国食品工业的快速发展，甜味剂的市场需求量不断扩大。为了弥补单一甜味剂所带来的副作用和改善食品的口感，人工合成调味剂受到商家的青睐，目前市场上大多数甜味剂由多种成分复配使用。由于复配的增效作用，各种人工合成甜味剂的复配应用技术开始不断出现，但是人工合成甜味剂的安全性已受到了广泛质疑，我国也制定了一些针对人工合成甜味剂检测的标准。但这些政策和标准中也一般采用液相色谱法和气相色谱法，对于新型甜味剂如爱德万甜等的检测很少涉及且检测的项目比较单一，难以适用多组分快速检测的需求。而天然甜味剂是指自然界存在与各种生物体内天然合成的一种成分，经加工提取而获得的产品，与人工合成甜味剂相比更具安全和营养，是未来发展的趋势。因此研究食品中多种甜味剂同时检测的方法不仅是技术发展的需求，也是实际应用的需求。
针对经常使用的甜味剂，公开号为CN106290693A且主题名称为乳及乳制品中甜味剂的超高效液相色谱-四级杆静电场轨道离子阱质谱筛查方法公开了检测乳及乳制品中的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿巴斯甜和纽甜。童兰艳等发表在食品科学技术学报上的《液相色谱-串联质谱法同时测定食品中9 种甜味剂》公开了安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、阿力甜、甜菊糖苷、德万甜和纽甜的检测方法，但是由于乳液、乳制品中含有蛋白质、脂肪、磷脂等，在分析检测过程中，对于其他种类的甜味剂的检测定量存在较大困难，现有的乳及乳制品中甜味剂的检测方法，难以满足乳制品中其他种类的甜味剂的检测定量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将待测样品、沉淀剂和pH为4.2～4.8的三乙胺缓冲溶液混合，提取收集上清液；所述待测样品为乳或乳制品；
(2)将步骤(1)得到的上清液通过反相固相萃取柱富集后洗脱，收集洗脱液；
(3)利用液相色谱串联三重四级杆质谱对步骤(2)的洗脱液中的甜味剂进行检测；
所述甜味剂包括柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙。
上述的乳或乳制品中甜味剂的检测方法，针对至少包括苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的甜味剂待测体系进行检测筛查，能够准确定量柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙，弥补了现有乳及乳制品中甜味剂的检测方法待测甜味剂种类的局限，弥补了现有方法中无法检测定量乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A 和甜菊双糖甙的缺陷，既能够检测合成甜味剂，又同时能够检测天然甜味剂。而且通过研究，针对苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的不同的理化性质，发现pH为4.2～4.8的三乙胺缓冲溶液并且配合沉淀剂作为乳或乳制品中甜味剂的提取剂时，不仅能够提高回收率，而且能够去除乳或乳制品中的沉淀物质，减少乳或乳制品中蛋白质、脂肪、磷脂等对检测的干扰，并且用三乙胺缓冲溶液提取后通过反相固相萃取柱富集后洗脱，可以增加对极性物质的保留，且可以进一步去除糖、脂肪、蛋白质等基质的干扰，并且可以提高回收效率，有效消除基质干扰，针对乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的检测，有更低的检出限，提高了检测的准确率，更好地避免了检测效率低及结果假阳性和假阴性的问题。
优选地，所述甜味剂还包括甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷中的至少一种。
上述方法针对柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙，以及甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷中的至少一种，可以同时检测乳或乳制品中18种甜味剂，并且实现了现有方法中苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素等甜味剂的检测，克服了现有乳或乳制品中甜味剂检测种类的局限，既能够检测合成甜味剂，又同时能够检测天然甜味剂。
优选地，所述步骤(1)中，所述沉淀剂为乙酸锌溶液或亚铁氰化钾溶液中的至少一种，所述沉淀剂与三乙胺缓冲溶液的体积比为(0.1～1)：10，所述待测样品与所述三乙胺缓冲溶液的比例为(0.8～2.5)：10g/mL。
优选地，所述乙酸锌溶液的浓度为200～230g/L，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为100～120g/L，所述沉淀剂与三乙胺缓冲溶液的体积比为(0.3～0.5)：10。
通过研究发现，作为沉淀剂的乙酸锌和亚铁氰化钾在与三乙胺缓冲溶液配合提取时，乙酸锌和亚铁氰化钾的用量对于回收效率和沉淀效果有显著影响，并且经过优化选择，发现乙酸锌溶液的浓度为200～230g/L，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为100～120g/L，所述沉淀剂与三乙胺缓冲溶液的体积比为(0.3～0.5)： 10时，可以使得回收效率更佳，且同时提高沉淀效果减少基质效应，并且能够缩短收集上清液的时间。
优选地，所述反相固相萃取柱为HLB固相萃取柱。
HLB固相萃取柱吸附剂是由亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔聚合物，针对乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A甜菊双糖甙，以及甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷的提取吸附，可以增加上述物质的保留能力，且可以进一步更好地去除糖、脂肪、蛋白质等基质的干扰，达到净化的效果，有效消除特殊样品的基质干扰。
优选地，所述步骤(2)中，将e mL上清液通过反相固相萃取柱富集后，依次用a mL三乙胺缓冲溶液、b mL水淋洗，抽干后用c mL甲醇洗脱，所述反相固相萃取柱的填料体积为d mL，其中a、b、c、d、e符合以下关系a：b：c： d：e＝(0.8～1.2)：(0.8～1.2)：(0.8～1.2)：(1～1.5)：(0.8～1.2)。
通过研究发现，符合上述反相固相萃取柱富集过程中的参数可以更好地提高回收率和富集效率，并且缩短富集时间。
优选地，所述液相色谱串联三重四级杆质谱的液相条件包括，液相色谱柱为C18反相色谱柱，流动相A液为pH为2.8～3.2，浓度为4.8～5.2mmol的乙酸铵溶液，流动相B液为乙腈。
优选地，所述液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm，填料粒径为2.5μm；流动相流速为0.38～0.42mL/min，梯度洗脱程序为，0～1.0min流动相A90％， 1.0～3.0min流动相A90％-10％，3.0～4.5min流动相A10％，4.50～4.51min流动相A10～90％，4.51～6.00min流动相A90％。
由于柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A甜菊双糖甙，以及甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷等物理、化学性质不同，针对上述物质，发明人找到了一种液相分离方式，在保证洗脱时间短的前提下，更好地实现了上述物质在色谱柱上的分离，更好的避免了质谱检测过程中彼此的干扰，不仅能通过保留时间和定量离子丰度准确定量之外，还能通过定性离子对甜味剂项目进行定性确认，降低假阳性机率；此外，液相色谱三重四级杆质谱法利用多种电离方式对目标化合物检测选择性更强。
优选地，所述乳制品为牛奶或奶粉，所述步骤(3)中，所述检测包括定量检测，所述定量检测通过外标法定量；
外标法定量过程中牛奶的基质效应包括：甜蜜素、柚苷二氢查耳酮的MatrixEffect为2.3～4.8；阿斯巴甜、爱德万甜、甜茶苷的Matrix Effect(％)为-7.3～-13.7；甘素的Matrix Effect(％)为-27.6；安赛蜜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甜菊双糖甙的Matrix Effect为12.0～20.4；
外标法定量过程中奶粉的基质效应包括：甜蜜素、杜克甙A、柚苷二氢查耳酮的Matrix Effect为0.1～2.0；阿斯巴甜、爱德万甜、甜茶苷的Matrix Effect 为-4.3～-10.6；甘素的Matrix Effect为-19.5；安赛蜜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、甜菊双糖甙的Matrix Effect为5.8～19.2。
上述方法针对牛奶或奶粉中18种甜味剂的检测，研究了基质效应，通过其斜率进行计算：Matrix Effect(ME)(％)＝(基质标曲斜率/溶剂标曲斜率-1)× 100；MatrixEffect：0％-20％：弱基质效应；Matrix Effect：20％-50％，中等基质效应；ME＞50％，强基质效应；若为负值则是负效应。利用液相色串联三重四级杆质谱法测定乳及乳制品中18中甜味剂，其基质效应以正效应为主。基质效应不能被消除，但可以通过基质配标准工作曲线，对基质效应进行校正，相比传统的溶剂配标准工作曲线，能提高回收率，且其定量准确性更高，并且针对不同的待测样品和不同的待测甜味剂获得的不同的基质效应参数，在溶剂配标的时候可以通过Matrix Effect对标线进行校正，既考虑到了基质效应对定量的影响，又可以减少基质配标的操作，而且提高了定量的准确性。
优选地，所述液相色谱串联三重四级杆质谱的质谱条件包括：气帘气流速： 28～32L/min；雾化气流速(GS1)：48～52L/min；辅助加热气流速(GS2)：48～52 L/min；碰撞气(CAD)：中等强度(medium)；辅助加热气温度：480～520℃；所述甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甜菊双糖甙采用负离子模式，碰撞能量为-15～-78V，去簇电压为 -40～-190V；所述甘素、爱德万甜、甜茶苷采用正离子模式，碰撞能量为18～55V，去簇电压为67～185V。
上述方法针对不同的待测甜味剂的种类，筛选了特定的质谱条件，有利于提高上述甜味剂在质谱下的响应，进一步提高检测的准确性。
优选地，所述步骤(1)中，将待测样品和三乙胺缓冲溶液涡旋震荡2.5～3.5min 得到混合体系A，向混合体系A中加入作为沉淀剂的乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液，超声提取8～12min，离心收集上清液。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，本发明的检测方法弥补了现有乳及乳制品中甜味剂的检测方法待测甜味剂种类的局限，弥补了现有方法中无法检测定量乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的缺陷，既能够检测合成甜味剂，又同时能够检测天然甜味剂，针对乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的检测，更好地减少了基质干燥，有更低的检出限，提高了检测的准确率，更好地避免了检测效率低及结果假阳性和假阴性的问题而且提高了方法的准确度。
附图说明
图1为本发明实施例的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的目标物分离效果图。
图2为本发明实施例的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的沉淀剂对回收率的影响效果图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
作为本发明实施例的一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，所述甜味剂包括柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、甜菊双糖甙、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜和甜茶苷，所述方法包括以下步骤：
(1)将待测样品、沉淀剂和三乙胺缓冲溶液混合，提取收集上清液；具体地，将待测样品和10mL三乙胺缓冲溶液在涡旋混合器上振荡3min，加入0.3mL 乙酸锌溶液(219g/L)、0.3mL亚铁氰化钾溶液(106g/L)，超声波提取10min， 8000r/min，4℃离心5min，取上清液于25mL容量瓶中，残渣加入10mL三乙胺缓冲溶液重复提取一次，合并提取液，用三乙胺缓冲溶液定容至25mL；所述待测样品为1g奶粉(或者1g奶酪或者1g冰激凌或者2g牛奶)；所述三乙胺缓冲溶液为将2.5mL三乙胺和0.8mL甲酸加水定容至10mL；
(2)将5.0mL步骤(1)得到的上清液通过反相固相萃取柱，控制液体流速不超过3mL/min，富集后依次用5mL三乙胺缓冲溶液、5mL水淋洗，柱子抽干5min，用5mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，乙醇定容至5mL，反相固相萃取柱为HLB固相萃取柱(500mg 6mL)；HLB固相萃取柱预先依次用5mL甲醇、 5mL水活化；
(3)利用液相色谱串联三重四级杆质谱对步骤(2)的洗脱液中的甜味剂进行检测；洗脱液在进样前过0.22μm滤膜；
所述液相色谱串联三重四级杆质谱的色谱条件包括：
C18色谱柱(2.1mm×100mm，2.5μm)；进样量5μL；流速： 0.4mL/L；柱温40℃；梯度洗脱，洗脱液A为5mmol/L乙酸铵溶液，乙酸铵溶液含有0.1％(v/v)甲酸，洗脱液B为含乙腈，洗脱程序见表1；
表1液相洗脱程序
| 时间/min | 洗脱液A | 洗脱液B |
| 0 | 90 | 10 |
| 1.00 | 90 | 10 |
| 3.00 | 10 | 90 |
| 4.50 | 10 | 90 |
| 4.51 | 90 | 10 |
| 6.00 | 90 | 10 |
所述液相色谱串联三重四级杆质谱的色谱条件包括：气帘气流速：30L/min；雾化气流速(GS1)：50L/min；辅助加热气流速(GS2)：50L/min；碰撞气(CAD)：中等强度(medium)；辅助加热气温度：500℃；喷雾电压：5000V(ESI+)/-4500 V(ESI-)。定性离子对、定量离子对、碰撞能量(Collision energies，CE)、去簇电压(Declustering potantial，DP)、碰撞室入口电压(Entrance potential，EP)和碰撞室出口电压(Export potential，CXP)见下表2；
表2甜味剂的质谱条件
注：*为定量离子。
对比例1
作为本发明对比例1的一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：用水作为提取溶剂替换所述三乙胺缓冲溶液。
对比例2
作为本发明对比例1的一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：用5％甲醇水溶液(v/v)作为提取溶剂替换所述三乙胺缓冲溶液。
对比例3
作为本发明对比例1的一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：用5％乙腈水(v/v)作为提取溶剂替换所述三乙胺缓冲溶液。
实验验证
1、仪器和试剂
液相色谱三重四级杆串联质谱仪(AB Triple Quad 4500)
标准物质：18中甜味剂标准品均购于阿尔塔科技有限公司
分析纯试剂：甲酸(华润化学，500mL)，三乙胺(华润化学，500mL)
色谱纯试剂：乙腈(CNW 4L)，甲醇(CNW 4L)
质谱纯试剂：甲酸(fisher 50mL)，乙酸铵(fisher 50g)
HLB固相萃取柱(CNW 500mg 6mL)
标准溶液的制备：18中甜味剂储备液：称取各标准物质适量，用甲醇水(1:1 体积比)溶解并稀释成浓度三氯蔗糖、糖精钠为50μg/mL、其他甜味剂为5μ g/mL的储备液。
2、通过对液相色谱柱和流动相以及流动相洗脱程序进行筛选，18种甜味剂色谱图如图1所示。
如图1所示，可以在6min的洗脱程序时间内将18种甜味剂更好地分离，大大提高了检测效率。
3、以三氯蔗糖、糖精钠加标量为6.25mg/kg，其他甜味剂剂加标量为0.625 mg/kg的含量标准进行加标回收率的实验，对比不同提取溶剂对甜味剂的提取效率，18种甜味剂的回收率分布见表3。
表3提取剂对回收率的影响
由表3可知，三乙胺缓冲溶液作为乳及乳制品中18种甜味剂的提取溶剂时，有15种甜味剂回收率在60％-100％。因此，采用三乙胺缓冲溶液作为乳及乳制品中18种甜味剂的提取溶剂，有利于提高提取效率，进而提高检测方法的准确性。
4、通过调整作为沉淀剂的乙酸锌溶液(219g/L)、亚铁氰化钾溶液(106g/L) 的用量，考察沉淀剂体积对回收率的影响。
实验组1，不加沉淀剂。
实验组2，0.3mL乙酸锌溶液(219g/L)和0.3mL亚铁氰化钾溶液(106g/L)。
实验组3，0.5mL乙酸锌溶液(219g/L)和0.5mL亚铁氰化钾溶液(106g/L)。
实验组4，0.8mL乙酸锌溶液(219g/L)和0.8mL亚铁氰化钾溶液(106g/L)。
实验组5，1.0mL乙酸锌溶液(219g/L)和1.0mL亚铁氰化钾溶液(106g/L)。
结果如图2所示，由图2可知，沉淀剂的量大于0.3mL时，回收率逐渐降低，但添加沉淀剂的量少于0.3mL时过滤时间较长，综合考虑，选择沉淀剂的量为0.3mL可以更好的进行沉淀，减少基质干扰，而且可以更好地提升回收率。
5、采用样品空白基质配标，外标法定量。通过溶剂配制标准和空白基质配制标准建立5点校正曲线，18种甜味剂在牛奶、乳粉中的基质效应测定结果见表4 。通过其斜率进行计算：ME(％)＝(基质标曲斜率/溶剂标曲斜率-1)×100； ME：0％-20％：弱基质效应；ME：20％-50％，中等基质效应；ME＞50％，强基质效应；若为负值则是负效应。结果如表4所示。
表4 18种甜味剂在不同基质中的基质效应
由表4可知，利用液相色串联三重四级杆质谱法测定乳及乳制品中18中甜味剂，其基质效应以正效应为主，且存在负效应的物质。基质效应不能被消除，但可以通过基质配标准工作曲线，对基质效应进行校正，相比传统的溶剂配标准工作曲线，能提高回收率，且其定量准确性更高。并且针对不同的待测样品和不同的待测甜味剂获得的不同的基质效应参数，在溶剂配标的时候可以通过 Matrix Effect对标线进行校正，既考虑到了基质效应对定量的影响，又可以减少基质配标的操作，而且提高了定量的准确性。
6、检出限和定量限
在奶粉、奶酪、冰激凌、牛奶的空白基质中分别添加18种甜味剂，以定量离子信噪比为3时的浓度为检出限，信噪比为10时的浓度为定量限，结果如表 5所示。
表5实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的检出限和定量限
实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法能够准确定量柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙，弥补了现有乳及乳制品中甜味剂的检测方法待测甜味剂种类的局限，弥补了现有方法中无法检测定量乳或乳制品中柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A和甜菊双糖甙的缺陷。并且实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法能够针对柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、甜菊双糖甙、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷，可以同时检测乳或乳制品中18种甜味剂，克服了现有乳或乳制品中甜味剂检测种类的局限，既能够检测合成甜味剂，又同时能够检测天然甜味剂，检出限低。
7、线性范围(μg/mL)
表6实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的线性范围
8、精密度和准确度
表7实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的精密度和准确度
由表6和表7可知，本发明的乳或乳制品中甜味剂的检测方法能够针对柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、甜菊双糖甙、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜、甜茶苷，可以同时检测乳或乳制品中 18种甜味剂，进行准确定量，既能够检测合成甜味剂，又同时能够检测天然甜味剂，检出限低，精密度好，准确性更好，18种目标化合物回收率达到 74.8％～112.2％，24h内精密度和稳定性测试RSD≤10％，线性范围在 0.0626mg/kg～25mg/kg之间，检出限和定量限均能满足相关标准的最低要求。本发明方法分离良好专属性强，检出限和定量限足够低，线性范围良好，重复性好，准确可靠，可推广应运用于乳及乳制品的监督检测中。
9、样品实用性
在市场随即采购了一批牛奶、奶粉、奶酪、冰淇淋，按照该方法开展检测工作，18种甜味剂的检出结果如表8所示(单位为：g/kg)。
表8实施例1的乳或乳制品中甜味剂的检测方法的应用效果
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (5)
1.一种乳或乳制品中甜味剂的检测方法，其特征在于，所述甜味剂包括柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、甜菊双糖甙、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甘素、爱德万甜和甜茶苷；
所述方法包括以下步骤：
（1）将待测样品、沉淀剂和pH为4.2~4.8的三乙胺缓冲溶液混合，提取收集上清液；所述待测样品为乳或乳制品；所述沉淀剂为乙酸锌溶液或亚铁氰化钾溶液中的至少一种，所述乙酸锌溶液的浓度为200~230g/L，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为100~120 g/L；所述沉淀剂与三乙胺缓冲溶液的体积比为（0.3~0.5）：10，所述待测样品与所述三乙胺缓冲溶液的比例为（0.8~2.5）：10 g/mL；
（2）将步骤（1）得到的上清液通过HLB固相萃取柱富集后洗脱，收集洗脱液；将e mL上清液通过HLB固相萃取柱富集后，依次用a mL三乙胺缓冲溶液、b mL水淋洗，抽干后用c mL甲醇洗脱；
（3）利用液相色谱串联三重四级杆质谱对步骤（2）的洗脱液中的甜味剂进行检测，所述检测包括定量检测；液相色谱柱为C18反相色谱柱，流动相A液为pH为2.8~3.2且浓度为4.8~5.2 mmol的乙酸铵溶液，流动相B液为乙腈；所述液相色谱柱的规格为2.1mm×100mm，填料粒径为2.5μm；梯度洗脱程序为，0~1.0 min流动相A90%，1.0~3.0 min流动相A 90%-10%，3.0~4.5 min 流动相A10%，4.50~4.51 min 流动相A10~90%，4.51~6.00 min流动相A90%；
所述液相色谱串联三重四级杆质谱的质谱条件包括：气帘气流速：28~32 L/min；雾化气流速，GS1：48~52 L/min；辅助加热气流速，GS2：48~52 L/min；碰撞气：中等强度（medium）；辅助加热气温度：480~520℃；所述甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、柚苷二氢查耳酮、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甜菊双糖甙采用负离子模式，碰撞能量为-15~-78 V，去簇电压为-40~-190V；所述甘素、爱德万甜、甜茶苷采用正离子模式，碰撞能量为18~55 V，去簇电压为67~185V。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述HLB固相萃取柱的填料体积为d mL，其中a、b、c、d、e符合以下关系a：b：c：d：e=（0.8~1.2）：（0.8~1.2）：（0.8~1.2）：（1~1.5）：（0.8~1.2）。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相流速为0.38~0.42 mL/min。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品为牛奶或奶粉，所述步骤（3）中，所述定量检测通过外标法定量；
外标法定量过程中牛奶的基质效应包括：甜蜜素、柚苷二氢查耳酮的Matrix Effect为2.3~4.8；阿斯巴甜、爱德万甜、甜茶苷的Matrix Effect为-7.3~-13.7；甘素的MatrixEffect为-27.6；安赛蜜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、杜克甙A、甜菊双糖甙的Matrix Effect为12.0~20.4；
外标法定量过程中奶粉的基质效应包括：甜蜜素、杜克甙A、柚苷二氢查耳酮的MatrixEffect为0.1~2.0；阿斯巴甜、爱德万甜、甜茶苷的Matrix Effect为-4.3~-10.6；甘素的Matrix Effect为-19.5；安赛蜜、纽甜、糖精钠、三氯蔗糖、阿力甜、新橙皮甙二氢查尔酮、新橙皮苷、甜菊糖、瑞鲍迪甙A、瑞鲍迪甙C、甜菊双糖甙的Matrix Effect为5.8~19.2。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中，将待测样品和三乙胺缓冲溶液涡旋震荡2.5~3.5min得到混合体系A，向混合体系A中加入作为沉淀剂的乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液，超声提取8~12min，离心收集上清液。
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