CN113069416A - 主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 - Google Patents
主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113069416A CN113069416A CN202110348273.5A CN202110348273A CN113069416A CN 113069416 A CN113069416 A CN 113069416A CN 202110348273 A CN202110348273 A CN 202110348273A CN 113069416 A CN113069416 A CN 113069416A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- prodrug
- micelle
- amphiphilic
- resin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 225
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 215
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 215
- 239000000693 micelle Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 title claims abstract description 52
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 claims abstract description 16
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 11
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 claims abstract description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 96
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical group ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 10
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 10
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005480 straight-chain fatty acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 3
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 2
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002114 nanocomposite Substances 0.000 abstract description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 106
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 106
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 11
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 10
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 9
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 9
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 6
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000001126 phototherapy Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 2-pyridinylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=N1 BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUFZNHHSSMCXCZ-UHFFFAOYSA-N 5-piperidin-4-yl-3-[3-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-oxadiazole Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(C=2N=C(ON=2)C2CCNCC2)=C1 FUFZNHHSSMCXCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- ATHHXGZTWNVVOU-UHFFFAOYSA-N N-methylformamide Chemical compound CNC=O ATHHXGZTWNVVOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- -1 benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 1
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- OJBNDXHENJDCBA-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-(prop-2-enoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OCC=C)C(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OJBNDXHENJDCBA-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000001553 co-assembly Methods 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108010034892 glycyl-arginyl-glycyl-aspartyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000005232 molecular self-assembly Methods 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 238000003333 near-infrared imaging Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N phenylsilane Chemical compound [SiH3]C1=CC=CC=C1 PARWUHTVGZSQPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007626 photothermal therapy Methods 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0052—Thermotherapy; Hyperthermia; Magnetic induction; Induction heating therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用，属于生物医药技术领域。本发明复合纳米胶束前药由带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装得到；第一多肽为Lys‑AAm‑Gly‑Arg‑Gly‑Asp‑Ser，其中AA为天冬氨酸或谷氨酸，m取值为1、2、3或4；第二多肽为Cys‑BBn，其中BB为赖氨酸、精氨酸或组氨酸，n取值为1、2、3或4；第一多肽N端的氨基与疏水烷基链连接，第一多肽赖氨酸侧链的氨基与荧光分子连接；第二多肽中的半胱氨酸通过巯基共价连接抗肿瘤药物。该纳米复合胶束能够主动靶向到肿瘤细胞，响应肿瘤微酸环境后解组装，形成尺寸为20‑30nm的小尺寸胶束，有利于多肽抗肿瘤前药的在肿瘤部位的深层递送。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，更具体地，本发明提供了一种基于静电相互作用的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用。
背景技术
基于多肽载体的抗肿瘤药物研发是目前的热点之一。近年来，分子自组装领域的快速发展为智能多肽纳米药物研发提供了新的机遇，该技术将不同功能的分子以非共价键组装成高度有序的纳米体系，是构建结构多样、功能集成的纳米药物的有效策略。生物分子多肽序列中氨基酸残基具有不同的化学结构，其可以利用肽链间氢键作用以及氨基酸残基之间的各种非共价键的作用有效实现分子自组装。基于多肽及其衍生物在结构设计上精确可控的特性，可将具有不同生物功能的多肽分子通过可控组装进行模块化功能集成，构建多肽纳米药物。两亲性多肽由于其良好的生物相容性、生物安全性和生物可降解性，被广泛应用于生物医学领域，如组织工程，伤口修复和基因治疗，特别是作为载体用于治疗药物的输送。
通过静电相互作用将两段功能性两亲性多肽复合成多功能纳米诊疗剂能实现多肽纳米药物的多功能化，化疗药与短肽通过二硫键连接能够响应肿瘤细胞内高表达的GSH从而提高多肽药物的特异性，到达肿瘤部位才能发生响应释药，同时长肽末端连接的近红外荧光可以实现药物的可视化递送，主动靶向到肿瘤后并发挥一定的光热和光动力效应实现对肿瘤的诊疗一体化。静电相互作用两亲性多肽具有如下显著优势：(1)易于化学修饰，组装体尺寸、形状和表面物理化学性质可精细调控；(2)保持多肽组装体的净电荷接近电中性，提高组装体在体内的循环时间；(3)到达肿瘤部位后响应肿瘤微酸环境，解组装后组装体尺寸由大变小有利于化疗药物的深层递送；(4)光学治疗对外层肿瘤进行杀伤，同时结合化疗药的深层递送实现对肿瘤的全方面联合治疗。
发明内容
本发明解决了现有技术中纳米载体对肿瘤细胞的靶向性不好，不能实时追踪药物在肿瘤的分布，同时解决了化疗药物不能很好的深层递送以及细胞摄取效率较低的问题和单一作用模式带来的弊端，可以实现抗肿瘤药物、光热和光动力协同作用。本发明提供了一种新的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，具有主动靶向功能的待负电荷的第一多肽的N端偶联疏水性烷基链，且在多肽的侧链修饰荧光功能分子，第二多肽通过二硫键与带正电荷的第二多肽连接，两者通过静电相互作用和亲疏水作用共组装得到主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药。
根据本发明的第一方面，提供了一种主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，包括带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽，该复合纳米胶束前药由带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装得到；
所述第一多肽的氨基酸序列为Lys-AAm-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，其中AA为天冬氨酸或谷氨酸，所述m取值为1、2、3或4；所述第二多肽的氨基酸序列为Cys-BBn，其中BB为赖氨酸、精氨酸或组氨酸，所述n取值为1、2、3或4；
所述第一多肽N端的氨基与疏水烷基链连接，第一多肽赖氨酸侧链的氨基与荧光分子连接；所述第二多肽中的半胱氨酸通过巯基共价连接抗肿瘤药物。
优选地，所述纳米胶束前药为球形结构，直径为40nm-200nm；
优选地，所述纳米胶束前药的直径为80-150nm；
优选地，所述纳米胶束前药的直径为90nm-100nm。
优选地，所述荧光分子为近红外荧光分子；
优选地，所述近红外荧光分子含有羧基。
优选地，所述抗肿瘤药物为喜树碱、阿霉素或紫杉醇。
优选地，所述疏水烷基链为直链脂肪酸、油酸或双炔酸；
优选地，所述直链脂肪酸的碳原子个数的范围为6-18。
优选地，所述第一多肽的C端为酰胺结构；所述第二多肽N端的氨基被乙酸酐保护。
按照本发明的另一方面，提供了任一所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药的制备方法，包括以下步骤：
(1)分别制备带负电荷的两亲性多肽和带正电荷的两亲性多肽，所述带负电荷的两亲性多肽的氨基酸序列为Lys-AAm-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，其中AA为天冬氨酸或谷氨酸，所述m取值为1、2、3或4；所述带正电荷的两亲性多肽的氨基酸序列为Cys-BBn，其中BB为赖氨酸、精氨酸或组氨酸，所述n取值为1、2、3或4；
(2)在步骤(1)得到的带负电荷的两亲性多肽N端的氨基上偶联疏水性烷基链，赖氨酸侧链的氨基上偶联荧光分子，得到带负电荷的第一多肽；将步骤(1)得到的带正电荷的两亲性多肽的半胱氨酸通过巯基与抗肿瘤药物偶联，得到带正电荷的第二多肽；
(3)将步骤(2)得到的带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽溶于第一有机溶剂中，除去第一有机溶剂后，将所述第一多肽和第二多肽分散于水中，所述第一多肽和第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装，即得到主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药；
或者将步骤(2)得到的带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽溶于能与水互溶的第二有机溶剂中，然后分散在水中，所述第一多肽和第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装，再除去第二有机溶剂，即得到主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药。
优选地，步骤(3)中所述带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽物质的量之比为1:(0.1-5)。
优选地步骤(3)中通过超声的方法将第一多肽和第二多肽分散于水中；步骤(3)中所述第一有机溶剂为二氯甲烷、甲醇、丙酮、氯仿或四氢呋喃，所述能与水互溶的第二有机溶剂为甲醇、丙酮、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
优选地，所述超声的频率为35kHz-50kHz，功率为200W-700W，超声时间为20min-30min。
按照本发明的另一方面，提供了任一所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药用于制备抗肿瘤药物的应用。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
(1)本发明中复合多肽纳米胶束为球形结构，直径为40nm-200nm，优选地，纳米胶束前药的直径为80-150nm，更优选地，纳米胶束前药的直径为90nm-100nm。粒径100～200nm的胶束具有在体内较长时间循环的能力，便于提高抗肿瘤药物的药物利用率并降低毒副作用。整体接近于电中性，该纳米胶束在体内生物环境中稳定，不容易被降解，同时具有肿瘤部位的特异靶向性，到达肿瘤部位后能够响应微酸环境并在光热作用下解组装，形成尺寸为20-30nm的小尺寸胶束，有利于多肽抗肿瘤前药的在肿瘤部位的深层递送。该复合多肽纳米胶束无毒，生物相容性好；自组装过程中不生成共价键，没有逆反应，形成高度有序的纳米结构，具有广阔的应用前景。
(2)本发明复合纳米胶束到达肿瘤微环境后在近红外照射下引起近红外染料的光热同时响应肿瘤微酸环境，促进多肽复合胶束解组装，复合多肽胶束解组装后，胶束尺寸由大变小，带正电多肽前药能够被肿瘤高效的摄取，可以实现药物的深层递送，带正电荷的多肽前药进入肿瘤后响应肿瘤细胞内高表达的GSH，释放抗肿瘤药，并且多肽复合纳米胶束在近红外光照射下有良好的光热和光动力效应对肿瘤细胞有很好的杀伤作用，联合化疗药物的深穿透对肿瘤进行化疗，杀死肿瘤细胞。本发明中的荧光分子优选为为cy7、CS1-6或IR780，该多肽复合纳米胶束总体上实现对在近红外荧光成像引导下进行对肿瘤的光热光动力以及化疗的协同作用。
(3)本发明具有主动靶向肿瘤细胞功能的多肽链与疏水烷基链偶联，并且多肽链的侧链修饰荧光功能分子，得到两亲性多肽，前药第二多肽通过二硫键与抗肿瘤药物共价连接，且本身带有正电荷正好与带负电的主动靶向第一多肽通过静电相互作用和亲疏水作用自组装形成复合多肽纳米胶束，将化疗药物通过谷胱甘肽GSH响应的二硫键连接避免了纳米药物载体载药量过低的问题，同时提高了药物的特异性和安全性，只有在高表达谷胱甘肽GSH的肿瘤细胞内才能释放化疗药，发挥化疗作用，同时复合多肽纳米胶束的疏水腔内荧光分子与抗肿瘤药物的π-π堆积作用让整个纳米胶束更稳定。由于组装后近红外染料聚集，导致其光热效应显著增加。该多肽复合纳米胶束主动靶向到肿瘤细胞，并在肿瘤微酸环境下和近红外激光照射下解组装成尺寸更小的纳米胶束有利于多肽化疗前药的深层递送，同时在近红外激光的照射下，第一多肽的解组装后的纳米胶束还能发挥光动力和光热治疗的作用，可以对浅层肿瘤细胞进行杀伤，带正电的第二多肽前药由于尺寸相对于整体复合胶束变小且带有正电荷赋予了其更好的药物穿透性能和更高的细胞吞噬效率，对深层肿瘤起到很好的化疗作用极大提高了化疗效率，整体上该复合多肽纳米胶束可以实现对肿瘤细胞的光热，光动力和化疗的高效协同作用，该两亲性复合多肽纳米诊疗剂无毒，生物相容性好，抗肿瘤效率显著，可实现近红外成像引导的肿瘤靶向治疗。
(4)本发明以肿瘤细胞表面过度表达的整合素受体为靶向点，纳米胶束可以特异性结合整合素受体，通过受体介导的内吞使纳米胶束进入肿瘤细胞内。本发明中第二多肽整体带正电荷有利于与带负电荷的第一多肽通过静电相互作用组装，当复合纳米胶束通过血液循环到达肿瘤部位后能够响应肿瘤微酸环境，第一多肽与第二多肽静电相互作用减弱，同时在近红外照射下近红外染料分子的光热效应也促进了纳米胶束的解组装，形成尺寸更小的纳米胶束。解组装后由于细胞膜表明带负电，带正电的第二多肽具有更高的细胞吞噬效率。本发明中第一多肽序列具有主动靶向功能的氨基酸序列为Arg-Gly-Asp(RGD)，第一多肽中Gly-Arg-Gly-Asp-Ser能特异性靶向肿瘤细胞，而相比于传统的RGD序列，具有更强的肿瘤靶向能力和生理稳定性；当C端的丝氨酸为酰胺结构时，多肽C端的酰胺化可以保护多肽免受酶的降解作用，从而延长其在体内的半衰期，增大多肽与受体的亲和力，得到的两亲性多肽具有更高的生理稳定性。
(5)本发明的复合多肽纳米胶束是基于静电相互作用和亲疏水作用自组装形成，优选地，带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽物质的量之比为1:(0.1-5)，整体净电荷接近电中性，该特征赋予纳米胶束较好的生物稳定性，同时能保证纳米胶束在体内的循环时间。同时得到的自组装纳米胶束粒径均一，稳定性好，具有良好的生物相容性。
(6)本发明的疏水烷基链优选为月桂酸、油酸、双炔酸等，月桂酸的碳链亲脂性强，有利于插膜，且其碳链能够作为疏水端位于纳米胶束内部。同时第一多肽的疏水荧光分子和第二多肽的疏水抗肿瘤药物之间的π-π堆积作用也有助于稳定两亲性纳米胶束的形成。
(7)与自由化疗药相比较，本发明结合主动靶向型多肽和化疗前药多肽对肿瘤部位具有更好的选择性递送效果，具有较高的最大耐受剂量，且副作用小。
附图说明
图1为本发明中主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药共组装的结构示意图。
图2为实施例3制备得到的复合多肽纳米胶束的形貌图像。
图3为实施例4解组装后的纳米胶束的形貌图像。
图4为实施例5细胞吞噬效率的流式结果图。
图5为实施例7纳米药物载体对肿瘤细胞的杀伤效率。
图6为实施例9纳米胶束在细胞内的ROS成像。
图7为实施例10纳米胶束在小鼠成纤维细胞的暗毒性。
图8为本发明主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药体外释放效果图。
图9为本发明主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药注射到小鼠后的荧光成像图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明中具有主动靶向功能的多肽链的第一多肽和第二多肽均采用标准固相肽合成(SPPS)方法制备得到。
实施例1：基于静电相互作用的主动靶向型两亲性复合多肽纳米诊疗剂的制备方法
(i)制备主动靶向型带负电荷两亲性多肽
(1)取0.305克Rink Amide-AM树脂至多肽合成装置，加入干燥的N,N-二甲基甲酰胺浸泡树脂2小时，使之充分溶胀，最后排出溶剂N,N-二甲基甲酰。然后用体积比为1:4的哌啶：N,N-二甲基甲酰溶液(10ml)进行树脂的保护基的脱除，反应两次，每次持续20分钟。之后再用10ml N,N-二甲基甲酰重复洗涤树脂N,N-二甲基甲酰3次，每次持续5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂变蓝甚至发黑，说明树脂的保护基成功脱除，可以进行第一个氨基酸的偶联，若树脂颜色无明显变化，则需要继续树脂的保护基的脱除操作。
(2)称取0.255克Fmoc-Ser(tBu)-OH，0.347克六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入232微升二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂反应约4小时，然后用10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂2次，每次5分钟。再称取0.255克Fmoc-Ser(tBu)-OH，0.347克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入232微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让Fmoc-Ser(tBu)-OH与树脂相互作用约4小时，使其充分固定在树脂上。10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂3次，每次5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂颜色无明显变化，则说明第一个氨基酸已完全偶联上了树脂，若树脂变蓝甚至发黑，则说明第一个氨基酸没有与树脂完全反应，需要重复连接。
(3)用体积比为1：4的哌啶：N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)进行第一个氨基酸的保护基的脱除，反应两次，每次持续20分钟。之后再用10mL N,N-二甲基甲酰胺重复洗涤树脂3次，每次持续5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂变蓝甚至发黑，说明第一个氨基酸的保护基成功脱除，可以进行第二个氨基酸的偶联，若树脂颜色无明显变化，则需要继续第一个氨基酸的保护基的脱除操作。
(4)参照步骤(2)和步骤(3)，依次缩合(Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-Glu(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Alloc)-OH得到的氨基酸序列为Lys-Glu-Glu-Glu-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser。
(5)称取0.178克月桂酸，0.463克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入311微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让月桂酸与树脂相互作用约4小时，然后用10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂2次，每次5分钟。再称取0.178克月桂酸，0.463克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入311微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让月桂酸与树脂相互作用约4小时，使其充分连接到上一个氨基酸上。10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂3次，每次5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂颜色无明显变化，则说明月桂酸已完全同肽链偶联，若树脂变蓝甚至发黑，则说明月桂酸没有与肽链完全反应，需要重复连接。
(6)称取0.042克四(三苯基膦)钯，用10毫升二氯甲烷溶解溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入1080微升苯硅烷，脱除树脂上赖氨酸的保护基，反应两次，每次持续30分钟，之后再用10mL N,N-二甲基甲酰胺重复洗涤树脂2次，每次持续5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂变蓝甚至发黑，说明赖氨酸的保护基成功脱除，若树脂颜色无明显变化，则需要继续赖氨酸的保护基的脱除操作。
(7)称取0.408克CS-2，0.231克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入155微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让CS-2与树脂相互作用约4小时，然后用10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂2次，每次5分钟。再称取0.408克罗丹明B，0.231克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入155微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让CS-2与树脂相互作用约4小时，使其充分连接到肽链上。10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂3次，每次5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂颜色无明显变化，则说明罗丹明已完全同肽链偶联，若树脂变蓝甚至发黑，则说明罗丹明B没有与肽链完全反应，需要重复连接。
(8)用10mL二氯甲烷冲洗树脂3次，每次5分钟，再用10mL甲醇冲洗树脂3次，每次5分钟，接着用10mL二氯甲烷冲洗树脂3次，每次5分钟。
(9)将多肽从树脂上裂解下来，具体过程如下：首先配置裂解液：9.5mL三氟乙酸+0.25mL三异丙基硅烷+0.25mL去离子水。将裂解液加入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，反应3小时，之后滤掉树脂，旋蒸除去树脂中的溶剂，接着加入乙醚，立即出现紫绿色沉淀。然后离心分离上述悬浊液，转速为7000rpm，离心时间为10分钟，离心两次，除去上清液，加入甲醇溶解，通过HPLC纯化产物，最后加入去离子水溶解，进行冷冻干燥，收集紫绿色粉末，即得含有一条疏水烷基链(月桂酸)的两亲性多肽，命名为PA1。
(ii)制备带正电荷的多肽
(1)取0.5克Rink Amide-AM树脂至多肽合成装置，加入干燥的N,N-二甲基甲酰胺浸泡树脂2小时，使之充分溶胀，最后排出溶剂N,N-二甲基甲酰。然后用体积比为1:4的哌啶：N,N-二甲基甲酰溶液(10ml)进行树脂的保护基的脱除，反应两次，每次持续20分钟。之后再用10ml N,N-二甲基甲酰重复洗涤树脂N,N-二甲基甲酰3次，每次持续5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂变蓝甚至发黑，说明树脂的保护基成功脱除，可以进行第一个氨基酸的偶联，若树脂颜色无明显变化，则需要继续树脂的保护基的脱除操作。
(2)称取0.255克Fmoc-Ser(tBu)-OH，0.347克六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入232微升二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让Fmoc-Lys(Boc)-OH与树脂反应约4小时，然后用10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂2次，每次5分钟。再称取0.255克Fmoc-Lys(Boc)-OH，0.347克PyBOP，用10毫升N,N-二甲基甲酰胺溶解，然后将该溶液转入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，再加入232微升催化剂二异丙基乙胺(DIPEA)，室温下让Fmoc-Lys(Boc)-OH与树脂相互作用约4小时，使其充分固定在树脂上。10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂3次，每次5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂颜色无明显变化，则说明第一个氨基酸已完全偶联上了树脂，若树脂变蓝甚至发黑，则说明第一个氨基酸没有与树脂完全反应，需要重复连接。
(3)用体积比为1：4的哌啶：N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)进行第一个氨基酸的保护基的脱除，反应两次，每次持续20分钟。之后再用10mL N,N-二甲基甲酰胺重复洗涤树脂3次，每次持续5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂变蓝甚至发黑，说明第一个氨基酸的保护基成功脱除，可以进行第二个氨基酸的偶联，若树脂颜色无明显变化，则需要继续第一个氨基酸的保护基的脱除操作。
(4)参照步骤(2)和步骤(3)，依次缩合(Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，得到的氨基酸序列为Cys-Lys-Lys-Lys。
(5)加入含有2mL乙酸酐N,N-二甲基甲酰胺10mL和1.67mL吡啶,室温下反应20min，然后用10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂2次，每次5分钟。再取2mL乙酸酐N,N-二甲基甲酰胺10mL和1.67mL吡啶,室温下反应20分钟，室温下让乙酸酐与树脂相互作用约20分钟，使其充分固定在树脂上。10mL N,N-二甲基甲酰胺冲洗树脂3次，每次5分钟，取少许树脂加入到茚三酮和苯酚的乙醇溶液中，加热至沸腾，观察树脂颜色变化，若树脂颜色无明显变化，则说明最后一个氨基酸已完全被乙酰化。
(6)用10mL二氯甲烷冲洗树脂3次，每次5分钟，再用10mL甲醇冲洗树脂3次，每次5分钟，接着用10mL二氯甲烷冲洗树脂3次，每次5分钟。
(7)将多肽从树脂上裂解下来，具体过程如下：首先配置裂解液：9.5mL三氟乙酸+0.25mL三异丙基硅烷+0.25mL去离子水。将裂解液加入到上步含有处理过的树脂的多肽合成装置中，反应3小时，之后滤掉树脂，旋蒸除去树脂中的溶剂，接着加入乙醚，立即出现棕色沉淀。然后离心分离上述悬浊液，转速为7000rpm，离心时间为10分钟，离心两次，除去上清液，加入甲醇溶解，通过HPLC纯化产物，最后加入去离子水溶解，进行冷冻干燥，收集白色粉末，带正电荷的两亲性多肽。
实施例2：合成多肽化疗前药
取1.5g(6.8mmol)二硫二吡啶溶于12ml乙醇中，加入0.16ml乙酸于50ml两口圆底烧瓶中，取235.2μL(312.8mg 3.4mmol)巯基乙酸溶于8mL乙醇中加入恒压滴液漏斗中，在氩气保护下，逐滴加入巯基乙酸乙醇溶液，室温搅拌3h.反应结束后旋干溶剂，得到黄色油状液体。通过高压制备柱纯化得到吡啶乙酸纯品。
取吡啶乙酸20.1mg(0.1mmol)溶于400μl DMF中，加入Pybop 104.1mg(0.2mmol活化羧基)氩气保护下室温搅拌30min，取DOX 48.3mg(0.083mmol)溶于1.5ml DMF中，在氩气保护下逐滴加入，后加入DIPEA 69.8μl(0.4mmol 51.7mg),室温搅拌24h。乙醚沉淀得到粗产物，然后用高效液相制备色谱纯化得到DOX-Py。
取DOX-Py 37mg(0.051mmol)溶于0.5ml N,N-二甲基甲酰胺中，在氩气保护下加入溶于0.5ml N,N-二甲基甲酰胺的短肽33.4mg(0.061mmol)，室温搅拌60h。用乙醚沉淀得到粗产物，然后用高效液相制备色谱纯化得到多肽前药PA2。
实施例3：制备多肽复合纳米胶束
室温下，按照带负电荷的具有主动靶向功能的多肽1和带正电荷的前药多肽2物质的量比为1:(0.1～5)溶于10μl DMSO中，然后将含有多肽1和多肽2的DMSO溶液一边超声，一边加入1ml PBS中，接着超声20分钟，然后透析12小时即得到多肽复合纳米胶束，命名为PP。图1为复合纳米胶束的示意图，球外面的链段为多肽1和多肽2的亲水部分，壳层为疏水烷基链，疏水腔内的四角星为近红外染料，圆球为化疗药DOX。
形态观察：使用透射电镜观察多肽复合纳米诊疗剂，发现发现制备的纳米诊疗剂为大小均一、稳定的球形结构(见附图2)，平均粒径大小为98nm，表面电势为-2.3毫伏。
实施例4：多肽复合纳米胶束解组装
配制pH为6.8的PBS缓冲溶液500ml，取1mL(50μM)制备好的多肽复合纳米胶束于1000K的透析袋中，将透析袋放入pH为6.8的PBS缓冲溶液透析12h。然后用功率密度为0.75W/cm2的730nm激光器照射5min。
形态观察：使用透射电镜观察多肽解组装，发现制备的纳米诊疗剂为大小均一、稳定的球形结构(见附图3)，平均粒径大小为20nm。
实施例5：肿瘤细胞对多肽复合纳米诊疗剂吞噬效果
(1)方法：利用乳腺癌细胞系4T1，将生长状态良好的肿瘤细胞接种于6孔板中，培养24小时后，加入20μM浓度的多肽复合胶束，以空白细胞为对照组，在37℃孵育0.5、2、4、8h，通过流式细胞仪检测细胞对纳米载体的吞噬效率。
(2)结果：该实验在细胞水平上验证了4T1细胞对复合纳米胶束的影响(见附图4)，在复合多肽纳米胶束与4T1细胞共孵育2h时，有98.6％的细胞DOX荧光强度超过102。结果表明4T1细胞对多肽前药具有很好的吞噬速率和效率。而且随着时间的延长，4T1细胞对多肽前药的吞噬效率逐渐增加，共孵育8h后荧光强度基本达到最大值。
实施例6：肿瘤细胞对多肽复合纳米诊疗剂吞噬效果
本实施例同实施例5，将细胞换为小鼠黑素瘤细胞系B16细胞，其他未说明的实验方法、参数、条件、实验结果分析等均与实施例5保持一致。在纳米载体与B16细胞共孵育2h时，即有约50％的细胞荧光强度超过102。结果表明，B16细胞对纳米载体具有很好的吞噬速率和效率。而且随着时间的延长，B16细胞对纳米载体的吞噬效率逐渐增加，共孵育8h后荧光强度基本达到最大值。
实施例7：主动靶向多肽复合纳米胶束对细胞的杀伤
(1)方法：利用小鼠乳腺癌细胞4T1，将培养状态良好的细胞接种于96孔板中，培养24h后分别加入给20μM浓度的多肽复合纳米胶束，单独的多肽1，单独多肽2，同时以空白细胞作为对照组，孵育8小时后对单独多肽1组合多肽复合纳米胶束组用730nm激光照射5min，培养24h、48h,吸走带有纳米药物载体的培养基，加入10％CCK-8的无血清培养基，37℃孵育2-4h，利用酶标仪检测其在450nm处的吸收，根据吸光度值作图。
(2)结果：该实验在细胞水平对细胞水平的治疗效果进行验证(见附图5)，孵育48h后，多肽复合纳米胶束光疗和化疗联合治疗组对细胞的致死率达到86％，具有良好的治疗效果。
实施例8
本实施例同实施例7，将细胞换为小鼠黑色素瘤细胞系B16细胞，其他未说明的实验方法、参数、条件、实验结果均与实施例7保持一致。孵育48h后，多肽复合纳米胶束光疗和化疗联合治疗组对细胞的致死率达到86％，具有良好的治疗效果。
实施例9
利用小鼠乳腺癌细胞4T1，将培养状态良好的细胞接种于共聚焦皿中，培养24h后分别加入无血清培养液500μL，将20μM浓度的多肽复合纳米胶束和解组装后的复合纳米胶束孵育4小时后，吸出培养液，用PBS清洗3遍，加入ROS探针DCFH-DA，孵育0.5h，对三组细胞用730nm激光照射5min，然后用激光共聚焦拍摄图片(见附图6)。结果表明，多肽复合纳米胶束解组装前后都具有很好ROS产量，而且两者差异不大。光动力的作用在实例7对细胞的杀伤就体现了。
实施例10
利用小鼠乳腺癌细胞4T1，将培养状态良好的细胞接种于96孔板中，培养24h后分别加入给10～100μM浓度的多肽复合纳米胶束，培养24h、48h，吸走带有纳米药物载体的培养基，加入10％CCK-8的无血清培养基，37℃孵育2-4h，利用酶标仪检测其在450nm处的吸收，根据吸光度值作图(见附图7)。说明多肽纳米胶束在肿瘤细胞中的暗毒性随着纳米胶束的浓度增加而增加。
实施例11
0.01M，pH 6.8乙酸盐缓冲溶液用以模拟肿瘤微环境；0.01M，pH 7.4磷酸酸盐缓冲溶液作为对照组，同时还加入了10μM和50μM GSH验证二硫键前药的响应，通过透析法测定化疗药DOX的体外释放。具体方法：将5mg多肽纳米复合胶束分别分散在不同pH和不同浓度GSH的缓冲溶液中，加入到透析袋中，用透析夹夹好透析袋后置于20mL透析介质中，在37℃空气摇床中震荡模拟体内释放。在预设的时间点，取出1mL释放介质，并加入等体积1mL的新鲜缓冲溶液。通过紫外可见分光光度计检测释放介质在490nm波长处的吸光度，分析释放介质中DOX的浓度，计算出不同时间点DOX的累积释放量。结果表明多肽纳米胶束pH 6.5和高浓度GSH条件下，在24h时，药物释放量达到85.4。(见附图8)
实施例12
利用小鼠乳腺癌细胞4T1，将培养状态良好的细胞接种于3～4周Balb/c鼠后肢处，等到肿瘤体积长到100mm3,尾静脉注射50μM多肽复合纳米胶束，通过近红外荧光成像仪对小鼠进行活体荧光成像，分布对注射后1h,4h,8h,12h,和24h时间点成像(见附图9)。结果表明多肽纳米胶束能在注射1后较好的富集到肿瘤部位，并且能随着注射时间的延长富集程度增加，在12h时达到最大值。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，包括带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽，该复合纳米胶束前药由带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装得到；
所述第一多肽的氨基酸序列为Lys-AAm-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，其中AA为天冬氨酸或谷氨酸，所述m取值为1、2、3或4；所述第二多肽的氨基酸序列为Cys-BBn，其中BB为赖氨酸、精氨酸或组氨酸，所述n取值为1、2、3或4；
所述第一多肽N端的氨基与疏水烷基链连接，第一多肽赖氨酸侧链的氨基与荧光分子连接；所述第二多肽中的半胱氨酸通过巯基共价连接抗肿瘤药物。
2.如权利要求1所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，所述纳米胶束前药为球形结构，直径为40nm-200nm；
优选地，所述纳米胶束前药的直径为80-150nm；
优选地，所述纳米胶束前药的直径为90nm-100nm。
3.如权利要求1或2所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，所述荧光分子为近红外荧光分子；
优选地，所述近红外荧光分子含有羧基。
4.如权利要求1或2所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，所述抗肿瘤药物为喜树碱、阿霉素或紫杉醇。
5.如权利要求1所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，所述疏水烷基链为直链脂肪酸、油酸或双炔酸；
优选地，所述直链脂肪酸的碳原子个数的范围为6-18。
6.如权利要求1所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药，其特征在于，所述第一多肽的C端为酰胺结构；所述第二多肽N端的氨基被乙酸酐保护。
7.如权利要求1-6任一所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别制备带负电荷的两亲性多肽和带正电荷的两亲性多肽，所述带负电荷的两亲性多肽的氨基酸序列为Lys-AAm-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser，其中AA为天冬氨酸或谷氨酸，所述m取值为1、2、3或4；所述带正电荷的两亲性多肽的氨基酸序列为Cys-BBn，其中BB为赖氨酸、精氨酸或组氨酸，所述n取值为1、2、3或4；
(2)在步骤(1)得到的带负电荷的两亲性多肽N端的氨基上偶联疏水性烷基链，赖氨酸侧链的氨基上偶联荧光分子，得到带负电荷的第一多肽；将步骤(1)得到的带正电荷的两亲性多肽的半胱氨酸通过巯基与抗肿瘤药物偶联，得到带正电荷的第二多肽；
(3)将步骤(2)得到的带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽溶于第一有机溶剂中，除去第一有机溶剂后，将所述第一多肽和第二多肽分散于水中，所述第一多肽和第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装，即得到主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药；
或者将步骤(2)得到的带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽溶于能与水互溶的第二有机溶剂中，然后分散在水中，所述第一多肽和第二多肽通过静电相互作用和亲疏水作用共组装，再除去第二有机溶剂，即得到主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药。
8.如权利要求7所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述带负电荷的第一多肽和带正电荷的第二多肽物质的量之比为1:(0.1-5)。
9.如权利要求7或8所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药的制备方法，其特征在于，步骤(3)中通过超声的方法将第一多肽和第二多肽分散于水中；步骤(3)中所述第一有机溶剂为二氯甲烷、甲醇、丙酮、氯仿或四氢呋喃，所述能与水互溶的第二有机溶剂为甲醇、丙酮、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
优选地，所述超声的频率为35kHz-50kHz，功率为200W-700W，超声时间为20min-30min。
10.如权利要求1-6任一所述的主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药用于制备抗肿瘤药物的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110348273.5A CN113069416B (zh) | 2021-03-31 | 2021-03-31 | 主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110348273.5A CN113069416B (zh) | 2021-03-31 | 2021-03-31 | 主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113069416A true CN113069416A (zh) | 2021-07-06 |
| CN113069416B CN113069416B (zh) | 2022-05-17 |
Family
ID=76614790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110348273.5A Active CN113069416B (zh) | 2021-03-31 | 2021-03-31 | 主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113069416B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114605496A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-06-10 | 华中科技大学 | 一种多肽及其应用、抗菌药物及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102516395A (zh) * | 2011-12-22 | 2012-06-27 | 中国医学科学院生物医学工程研究所 | 提高药物/基因的靶向性和转染效率的多肽载体及用途 |
| CN106729742A (zh) * | 2017-04-01 | 2017-05-31 | 中山大学 | 一种肿瘤靶向丝胶蛋白胶束及其制备方法和应用 |
| CN107184987A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-09-22 | 上海长海医院 | 一种硫辛酸修饰的靶向整合素αvβ3纳米多肽载体及其制备方法和应用 |
| CN108969479A (zh) * | 2018-07-15 | 2018-12-11 | 天津大学 | 多肽-药物共组装构筑还原响应型抗癌纳米药物的方法 |
| CN110237035A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-17 | 华中科技大学 | 一种主动靶向型两亲性多肽纳米药物载体及其制备与应用 |
| CN110314237A (zh) * | 2018-03-30 | 2019-10-11 | 烟台药物研究所 | 一种还原响应型肿瘤靶向多肽药物偶联物及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-03-31 CN CN202110348273.5A patent/CN113069416B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102516395A (zh) * | 2011-12-22 | 2012-06-27 | 中国医学科学院生物医学工程研究所 | 提高药物/基因的靶向性和转染效率的多肽载体及用途 |
| CN106729742A (zh) * | 2017-04-01 | 2017-05-31 | 中山大学 | 一种肿瘤靶向丝胶蛋白胶束及其制备方法和应用 |
| CN107184987A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-09-22 | 上海长海医院 | 一种硫辛酸修饰的靶向整合素αvβ3纳米多肽载体及其制备方法和应用 |
| CN110314237A (zh) * | 2018-03-30 | 2019-10-11 | 烟台药物研究所 | 一种还原响应型肿瘤靶向多肽药物偶联物及其制备方法和应用 |
| CN108969479A (zh) * | 2018-07-15 | 2018-12-11 | 天津大学 | 多肽-药物共组装构筑还原响应型抗癌纳米药物的方法 |
| CN110237035A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-17 | 华中科技大学 | 一种主动靶向型两亲性多肽纳米药物载体及其制备与应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114605496A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-06-10 | 华中科技大学 | 一种多肽及其应用、抗菌药物及其制备方法 |
| CN114605496B (zh) * | 2022-03-22 | 2023-09-29 | 华中科技大学 | 一种多肽及其应用、抗菌药物及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113069416B (zh) | 2022-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110237035B (zh) | 一种主动靶向型两亲性多肽纳米药物载体及其制备与应用 | |
| CN108542885B (zh) | 抗肿瘤药物及其制备方法 | |
| CN107184987B (zh) | 一种硫辛酸修饰的靶向整合素αvβ3纳米多肽载体及其制备方法和应用 | |
| An et al. | A sulfur dioxide polymer prodrug showing combined effect with doxorubicin in combating subcutaneous and metastatic melanoma | |
| Ghafary et al. | Design and preparation of a theranostic peptideticle for targeted cancer therapy: Peptide-based codelivery of doxorubicin/curcumin and graphene quantum dots | |
| CN110179754B (zh) | 具有氧化还原响应性且可增强组织渗透的多功能脂质体 | |
| WO2019061561A1 (zh) | 一种药物递送体系及其制备方法与应用 | |
| Fang et al. | Novel mitochondrial targeting multifunctional surface charge-reversal polymeric nanoparticles for cancer treatment | |
| CN106632695B (zh) | 一种pH敏感性多肽及其应用 | |
| JP2019519508A (ja) | マルチアーム重合標的抗がんコンジュゲート | |
| Huo et al. | Integrated metalloproteinase, pH and glutathione responsive prodrug-based nanomedicine for efficient target chemotherapy | |
| CN108126210B (zh) | 一种单靶向还原响应囊泡纳米药物在制备脑肿瘤治疗药物中的应用 | |
| CN113004536A (zh) | 一种金属-氨基酸/肽配位聚合物及其应用 | |
| Yang et al. | Stepwise pH/reduction-responsive polymeric conjugates for enhanced drug delivery to tumor | |
| Liu et al. | Reduction-sensitive polypeptide nanogel conjugated BODIPY-Br for NIR imaging-guided chem/photodynamic therapy at low light and drug dose | |
| CN113069416B (zh) | 主动靶向型两亲性多肽复合纳米胶束前药及制备与应用 | |
| CN114010600B (zh) | 一种酶促阳离子化脂质材料及其应用 | |
| CN113121642A (zh) | 自组装多肽、氧化还原响应多肽水凝胶及其制备方法和应用 | |
| Chu et al. | Stimulus‐Responsive Nano‐Prodrug Strategies for Cancer Therapy: A Focus on Camptothecin Delivery | |
| Zang et al. | Trojan nanobacteria hybridized with prodrug nanocapsules for efficient combined tumor therapy | |
| CN108484733A (zh) | 双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒 | |
| CN110903354B (zh) | 一种靶向前列腺癌骨转移的肿瘤微环境电荷逆转的仿生纳米递送系统及其制备方法与应用 | |
| CN114870027A (zh) | 双芘作为制备超声触发声敏剂的应用、肽功能化复合物和制剂、其制备方法和应用方法 | |
| CN105288653B (zh) | 一种两亲性寡聚多肽药物结合物 | |
| CN107226844A (zh) | 增强整合素受体亲和力及靶细胞摄取能力的结构分子及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |