CN113058074A

CN113058074A - 温敏填充剂组合物

Info

Publication number: CN113058074A
Application number: CN202010002831.8A
Authority: CN
Inventors: 张国华
Original assignee: Hualiyuan Shanghai Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Maikese (Shanghai) Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2020-01-02
Filing date: 2020-01-02
Publication date: 2021-07-02
Anticipated expiration: 2040-01-02
Also published as: CN113058074B

Abstract

本发明提供一种温敏填充剂组合物，所述温敏填充剂组合物包括在使用时加水能形成温敏凝胶的温敏混合粉体，所述温敏混合粉体通过以下方法制备：将注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球分散在温敏凝胶中，所述温敏凝胶在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态，其中所述聚合物微球和温敏凝胶的用量比为60mg：0.25～6mL，优选60mg：2mL；以及对分散有聚合物微球的温敏凝胶进行冷冻干燥得到所述混合粉体。相对单独注入聚合物微球的情况或单独使用凝胶注射剂的情况，不但可以借助温敏凝胶立即产生填充作用，而且后续可以不断产生持续的自体填充作用。

Description

温敏填充剂组合物

技术领域

本发明涉及一种用于皮肤再生/填充的注射用温敏填充剂组合物及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，随着整形美容产业的发展，整形美容的产品正在不断地增加，进而使得整形美容的方式也在不断地升级，由以前的主要以手术为主，正在不断地转变为以无创的注射填充剂为主。因此，注射用的填充剂产品正在不断地发展。

目前市场上真皮填充剂根据是否能被身体吸收分为以下三大类：1、快速可吸收的真皮填充剂，主要包括透明质酸及其衍生物类、胶原等；2、缓慢可吸收的真皮填充剂，主要包括左旋聚乳酸(PLLA)等；3、不可吸收的真皮填充剂，主要包括聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)等。

胶原蛋白是应用历史最长的充填美容材料，主要缘自于牛胶原，其主要特点是立竿见影，作用迅速。其作用机理仅是增加组织量。使作用部位的高度发生改变，从而起到整形美容效果。但遗憾的是胶原在注入人体后，三个月几乎完全被吸收，其整形美容的作用也就此消失，且有发生过敏反应的可能性。透明质酸是近几年开始应用的注射整形美容材料，其整形美容作用机理与胶原蛋白相似，优质的透明质酸可在体内保存3～6个月，在这点比胶原蛋白有改善，但持续时间仍较短且注射时透明质酸的疼痛感较明显。聚丙烯酰胺和聚甲基丙烯酸甲脂不被降解吸收，长期残留在体内，这些缺点限制了它的使用。

近期左旋聚乳酸作为整形美容的充填材料备受市场关注。由于它在体内缓慢降解成无毒无害的二氧化碳和水排出体外，不会对人体造成不可逆伤害，因此具有良好的生物相容性。而且这种材料可以刺激人体自体组织的再生，促进胶原蛋白的分泌，达到自体填充的效果。根据左旋聚乳酸分子量的大小决定效果的长短，目前使用左旋聚乳酸产品(Sculptra)效果可长达2～3年。然而，由于左旋聚乳酸注射后不会产生立即的美容效果，需要等到体内自身胶原产生后才有效果。

中国专利CN10425870A公开了一种注射用聚乳酸微球和交联透明质酸混合凝胶及其制备方法。然而由于聚乳酸长期和交联透明质酸混合凝胶处于混合状态，即、聚乳酸长期处于水中，聚乳酸在保存过程中就会逐步水解从而影响治疗效果，同时在制备凝胶时需要高温灭菌进一步破坏聚乳酸微球的稳定性和治疗效果。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种用于皮肤再生/填充的注射用温敏填充剂组合物及其制备方法和应用。

本发明第一方面提供一种温敏填充剂组合物，所述温敏填充剂组合物包括在使用时加水能形成温敏凝胶的温敏混合粉体，所述温敏混合粉体通过以下方法制备：将注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球分散在温敏凝胶中，所述温敏凝胶在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态，其中所述聚合物微球和温敏凝胶的用量比为60mg：0.25～6mL，优选60mg：2mL；以及对分散有聚合物微球的温敏凝胶进行冷冻干燥得到所述混合粉体。

其中冷冻干燥的冻干曲线可采用如下工艺。预冻：降温：板层温度-45℃，15分钟；维持：板层温度-45℃，240分钟。干燥：抽真空：板层温度-40℃，真空度≦0.14mbar，60分钟；维持：板层温度-40℃，真空度≦0.14mbar，0分钟；抽真空、升温：板层温度-25℃，真空度≦0.14mbar，300分钟；维持：板层温度-25℃，真空度≦0.14mbar，1500分钟；抽真空、升温：板层温度-10℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；维持：板层温度-10℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度0℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；维持：板层温度0℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度10℃，真空度≦0.007mbar，30分钟；维持：板层温度10℃，真空度≦0.007mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度28℃，真空度≦0.007mbar，15分钟；维持：板层温度28℃，真空度≦0.007mbar，180分钟。

本发明第二方面还提供一种温敏填充剂组合物，所述温敏填充剂组合物包括：注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球；以及温敏凝胶，所述温敏凝胶在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态；其中，所述聚合物微球和温敏凝胶各自独立包装保存，在使用时再按60mg聚合物微球：0.25～6mL温敏凝胶的比例混合用于注射，优选按60mg聚合物微球：2mL温敏凝胶的比例混合用于注射。

在本发明中，采用注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球和温敏凝胶组合物(在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态)形成复合温敏填充剂，这样，由于人体温度为36～37℃，在注入皮肤时，温敏凝胶组合物首先以凝胶态直接模拟胶原蛋白的作用快速产生填充美容作用，此后其中分散的聚合物微球可以持续刺激机体产生胶原达到自体填充的效果。因此，相对单独注入聚合物微球的情况或单独使用凝胶注射剂的情况，不但可以借助温敏凝胶立即产生填充作用，而且后续可以不断产生持续的自体填充作用。此外，在本发明中，先将聚合物微球和温敏凝胶混合冻干形成冻干粉体，使用时再加水形成温敏凝胶用于注射；或者将聚合物微球和温敏凝胶各自独立包装保存，在使用时再混合用于注射。而且聚合物微球分散在凝胶中延缓了聚合物微球的降解速度。这样，聚合物微球在使用前保存过程中基本处于无水干燥状态，其保质期可以大大延长，而在使用时，聚合物微球快速分散在液态温敏凝胶中或者含有聚合物微球温敏混合粉体分散在水中(此时液态更利于混合分散)，待混合分散均匀后，可以以体温适当加热形成凝胶即可注射进皮下，或者以液体状态注入皮下，在机体体温作用下迅速形成凝胶。这样，聚合物微球和液态水接触时间很短，降低了水解。另外，在注射入体内后，聚合物微球在凝胶中分散也一定程度延缓了聚合物的降解，进一步增长了复合填充剂的有效时间。

按照60mg聚合物微球：2mL温敏凝胶进行配料。使用时将60mg聚合物微球分散在2mL温敏凝胶中，一方面2mL温敏凝胶可以迅速形成填充作用，另一方面60mg聚合物微球可以均匀地分散在2mL温敏凝胶组合物中，不会形成局部的凹凸点，而且聚合物微球在凝胶中的分散还可以减缓聚合物的降解，易和凝胶的填充作用形成很好的衔接。此外，优选将60mg聚合物微球分散在2mL温敏凝胶作为单剂进行组合包装，这样质量组合的试剂盒方便单次使用完毕。

较佳地，所述聚合物微球为聚乳酸微球、聚二噁烷酮微球、聚己内酯微球中的至少一种。优选聚乳酸微球和聚己内酯微球，更优选分子量为10,000～500,000的左旋聚乳酸微球或分子量为10,000～500,000的聚己内酯微球。聚乳酸微球和聚己内酯微球作为一种可生物降解的微球，在产生作用后可以生物降解，不会残留，毒副作用低。

较佳地，所述聚合物微球的平均粒径为1～200μm，优选20～80μm。选用该粒径范围的聚合物微球，稳定性佳且易于快速、均匀地分散在凝胶中，不会形成团聚。而且聚合物微球的粒径在20μm以上，可防止被巨噬细胞吞噬，而聚合物的粒径在80μm以下，则可使其注射非常容易。

较佳地，所述温敏凝胶包含质量分数为1～70wt％(优选2～30wt％)的甲基纤维素、聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus，由N-乙烯基ε己内酰胺-乙酸乙烯酯-聚乙二醇(57:30:13)共聚而成的一种新型高分子材料)、泊洛沙姆系列化合物和壳聚糖系列化合物中的至少一种。温敏凝胶组合物包含甲基纤维素、Soluplus、泊洛沙姆系列化合物、壳聚糖系列化合物，可以借助甲基纤维素、Soluplus、泊洛沙姆系列化合物、壳聚糖系列化合物的特性形成温敏凝胶。这些凝胶为液态和凝胶态可逆变化的组合物，例如当升高到某一温度后能从液态转变为凝胶态，降低温度又能从凝胶态转变为液态。从液态转变为凝胶态的温度，称为凝胶化温度，从凝胶态转变为液态的温度，称为凝胶液化温度。本发明中采用温敏凝胶组合物在环境温度低于34℃时为液体，而在34～37℃(接近人体体温)时为凝胶态。

较佳地，所述温敏凝胶还包括选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、透明质酸、氨基酸、多肽、蛋白质、核酸、维生素及多糖中的至少一种添加剂。

本发明所涉及的产品属于第三类医疗器械产品，具有下列优点：(1)与单纯透明质酸凝胶比，由于聚合物微球具有超长的生物降解速度，在体内保留时间长，通过激活成纤细胞，促进胶原蛋白的分泌，使老化的肌肤重新富有弹性，效果自然渐进、显著而持久不需要频繁注射；(2)与单纯使用聚合物微球的情况相比，由于本品在注射时处于凝胶状态，聚合物微球不会出现到处流动情况，起到快速填充作用达到立竿见影的短期美容效果，又可利用聚合物微球刺激胶原蛋白产生从而达到持久美容效果的目的；(3)与聚乳酸微球和交联透明质酸混合凝胶相比，由于本品分别以干粉和凝胶溶液的形式出现，或两者混匀后以冻干粉形式出现，聚合物微球在使用前的保存过程中基本处于无水状态，不会造成水解从而影响微球的稳定性，而且本发明的制备方法对温度没有过高的要求，值得的填充剂组合物易于储存和运输。

附图说明

图1是混合凝胶样品1在不同温度下的相转变，其中A为室温条件，呈溶液状；B为37℃条件，呈凝胶状。

图2实施例1中制备微球的显微镜照片，其中光学显微镜照片放大10倍。

图3实施例2中制备微球的显微镜照片，其中光学显微镜照片放大10倍。

图4实施例3中制备微球的显微镜照片，其中光学显微镜照片放大10倍。

具体实施方式

下面进一步例举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适的范围内选择，而并非要限定于下文示例的具体数值。

本发明涉及注射用温敏填充剂组合物。在一个实施方式中，温敏填充剂组合物主要以混合冻干粉体的形式存在，其在使用时，加入水即可形成温敏复合凝胶用于注射填充。该混合冻干粉体以聚合物微球和温敏凝胶为原料来制备，将聚合物微球和温敏凝胶混合均匀，例如将聚合物微球分散在温敏凝胶中。在又一个实施方式中，将聚合物微球和温敏凝胶各自独立包装保存，在使用时再按一定比例混合后用于注射。

聚合物微球采用在注入体内时能刺激胶原产生的聚合物微球，例如聚乳酸微球、聚二噁烷酮微球、聚己内酯微球中的至少一种，优选生物相容性极佳的左旋聚乳酸微球和聚己内酯微球。可采用分子量为10,000～500,000的聚乳酸微球和/或分子量为10,000～500,000的聚己内酯微球。可采用平均粒径为1～100μm，优选20～80μm的聚合物微球。聚合物微球的粒径在20μm以上，可防止被巨噬细胞吞噬，而聚合物的粒径在80μm以下，则可使其注射非常容易。而且选用该粒径范围的聚合物微球，稳定性佳且易于快速、均匀地分散在凝胶中，不会形成团聚。

温敏凝胶为液态和凝胶态可逆变化的组合物，例如当升高到某一温度后能从液态转变为凝胶态，降低温度又能从凝胶态转变为液态。从液态转变为凝胶态的温度，称为凝胶化温度，从凝胶态转变为液态的温度，称为凝胶液化温度。本发明中采用温敏凝胶组合物在环境温度低于34℃时为液体，而在34～37℃(接近人体体温)时为凝胶态。

可采用基于甲基纤维素、聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus)、泊洛沙姆系列化合物和壳聚糖系列化合物等形成的温敏凝胶。甲基纤维素是一种非离子纤维素醚，它是通过醚化在纤维素中引入甲基而制成的，具有低温时为液体、温度升高时转变为凝胶的反向热胶凝特性的系统；Soluplus，由N-乙烯基ε己内酰胺-乙酸乙烯酯-聚乙二醇(57:30:13)共聚而成的一种新型高分子材料，是一个具有低温时为液体、温度升高时转变为凝胶的反向热胶凝特性的共聚物；泊洛沙姆是一类有聚氧乙烯(PEO)、聚氧丙烯(PPO)组成的PEO-PPO-PEO型非离子三嵌段共聚物，具有在一定浓度时低温时为液体、温度升高时转变为凝胶的反向热胶凝特性；壳聚糖又称脱乙酰甲壳素，是由自然界广泛存在的几丁质经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。壳聚糖或羟丁基壳聚糖也具有低温时为液体、温度升高时转变为凝胶的反向热胶凝特性。优选采用分子量为18,000～200,000的甲基纤维素。还可选用分子量为90,0000～140,000的Soluplus，也可采用分子量为7,680～14,600泊洛沙姆系列化合物，例如泊洛沙姆407和/或泊洛沙姆188。以及采用分子量为10,000～1,000,000的壳聚糖、羟丁基壳聚糖、羧甲基壳聚糖等。

温敏凝胶组合物中，甲基纤维素、Soluplus、泊洛沙姆系列化合物和/或壳聚糖系列化合物的含量可为1～70wt％，优选2～30wt％。含量在2wt％以上对于快速形成凝胶是有利的，而含量在30wt％以下则可最佳模拟胶原的凝胶态。

温敏凝胶组合物优选采用水进行配置，优选无菌注射用水。温敏凝胶组合物还可以包含一种或多种添加剂，例如羧甲基纤维素钠、海藻酸、透明质酸、氨基酸、多肽、蛋白质、核酸、维生素及多糖。

优选采用渗透压为250～350mOsm/L温敏凝胶组合物，可在配制凝胶组合物时采用0.9％氯化钠或PBS缓冲液调节凝胶组合物的渗透压。形成的凝胶组合物优选要进行灭菌/除菌处理，例如采用0.22微米膜过滤除菌或者高温灭菌，优选采用0.22微米膜过滤除菌。

可以采用现有的方法制备聚合物微球，例如参考CN104258470A制备聚乳酸微球，筛分获得平均粒径为1～200μm，优选20～80μm聚乳酸微球，以每ml含30～90mg聚合物微球进行封装备用。

温敏凝胶的配置也可采用现有制备凝胶的方法制备。在本发明中，可将甲基纤维素、Soluplus、泊洛沙姆系列化合物和/或壳聚糖系列化合物分散在注射用水中，按照需要加入添加剂，例如羧甲基纤维素钠等，再用PBS缓冲液调节渗透压，采用0.22微米膜过滤除菌或者高温灭菌后分装成每单位0.25～6mL。优选地，温敏凝胶在低于体温条件下保存，更优选地在10℃以下以液体形态保存。

聚合物微球为干粉状保存，温敏凝胶以液体态保存，且两者独立包装保存，这样聚合物微球在保存时不会受到凝胶中水分或者其他添加剂的影响，也不会受到凝胶所需的灭菌(尤其是高温灭菌)的影响。在使用时可将上述分装的单位聚合物微球和单位凝胶组合物现场混合。或者将聚合物微球先分散在温敏凝胶中，然后采用冷冻干燥方法形成冻干复合粉体进行保存，在使用时再将复合干粉分散在水中形成温敏复合凝胶。

使用时，可用注射器吸入复合凝胶溶液(上述复合干粉溶于水形成的复合凝胶溶液或者聚合物微球干粉分散在温敏凝胶中形成的复合凝胶溶液)，利用体温使复合凝胶溶液升温即可得到注射用聚乳酸微微球的温敏混合凝胶马上用于注射；也可选择将聚合物微球和温敏凝胶分别放入具有分隔成两室的预装注射器(一室含有聚乳酸微球并且另一室含有温敏凝胶)。在注射前，将凝胶溶液穿过中间隔膜与聚乳酸微球进行充分混合，利用体温使混合物升温即可得到注射用聚乳酸微微球的温敏复合凝胶。

可按照60mg聚合物微球：0.25～6mL温敏凝胶进行配料。使用时将60mg聚合物微球分散在2mL温敏凝胶中，一方面2mL温敏凝胶可以迅速形成填充作用，另一方面60mg聚合物微球可以均匀地分散在2mL温敏凝胶组合物中，不会形成局部的凹凸点，而且聚合物微球在凝胶中的分散还可以减缓聚合物的降解，易和凝胶的填充作用形成很好的衔接。此外，优选将60mg聚合物微球分散在2mL温敏凝胶作为单剂进行组合包装，这样质量组合的试剂盒方便单次使用完毕。当采用复合干粉(聚乳酸微球混合温敏凝胶干粉)时，其使用是加入水的用量可以参考聚合物微球和温敏凝胶用量比，即，60mg混合干粉加入2mL水中。应理解，上述水，包括配置温敏凝胶的水优选采用已经经过灭菌处理的水。

以下通过实施例对本发明作进一步的详细说明，这并不限制本发明的保护范围。其中实施例中所使用的冷冻干燥的冻干曲线可采用如下工艺，不再在实施例中累述。预冻：降温：板层温度-45℃，15分钟；维持：240分钟。干燥：抽真空：板层温度-40℃，真空度≦0.14mbar，60分钟；维持：板层温度-40℃，真空度≦0.14mbar，0分钟；抽真空、升温：板层温度-25℃，真空度≦0.14mbar，300分钟；维持：板层温度-25℃，真空度≦0.14mbar，1500分钟；抽真空、升温：板层温度-10℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；维持：板层温度-10℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度0℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；维持：板层温度0℃，真空度≦0.14mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度10℃，真空度≦0.007mbar，30分钟；维持：板层温度10℃，真空度≦0.007mbar，30分钟；抽真空、升温：板层温度28℃，真空度≦0.007mbar，15分钟；维持：板层温度28℃，真空度≦0.007mbar，180分钟。

实施例1

将2g分子量为500,00的左旋聚乳酸(PLLA)加入到16mL二氯甲烷中溶解，然后滴加到400mL质量分数1％的聚乙烯醇(粘度为22.6mPa.s)水溶液中，滴加完毕，常温搅拌1小时，升温至45℃，除去二氯甲烷得反应液，过滤反应液收集滤饼，筛分出平均粒径20～80μm的微球，真空干燥得1.3g 20～80μm的聚乳酸微球，将其分装成每瓶60mg微球样品1备用。其光学显微照片请参见图2。

将2g甲基纤维素(SM 400)和0.5g海藻酸钠置于200ml烧杯中，加90℃热水60mL，搅拌溶解，放4℃冰箱保存备用；上述溶液在搅拌状态下加入20mL(0.4g/ml)聚乙二醇和14mL(0.25g/ml)的柠檬酸钠，调pH到7.4，定容至100mL，4℃搅拌12小时，将该温敏凝胶加热灭菌分装成每瓶2mL的温敏凝胶样品1，放置4℃保存备用。

将分装好的甲基纤维素温敏凝胶放置4℃冰箱中1小时，取该2mL凝胶将其注入到前述分装好的60mg的左旋聚乳酸微球中，震荡摇匀，得到注射用左旋聚乳酸微球的甲基纤维素温敏混合凝胶。

实施例2

将2g分子量为15000的消旋聚乳酸(PDLLA)，加入到4mL二氯甲烷中溶解，然后滴加到200mL质量分数1％的聚乙烯醇(粘度为22.6mPa.s)水溶液中，滴加完毕，常温搅拌1小时，升温至45℃，除去二氯甲烷得反应液，过滤反应液收集滤饼，筛分出平均粒径20～80μm的微球，真空干燥得1.4g 20～80μm的聚乳酸微球作为微球样品2备用；或将其分装成每瓶60mg微球样品2备用。其光学显微照片请参见图3。

将20g Soluplus放置于100ml烧杯中，加0.05M pH7.4的PBS 80mL，搅拌溶解，定容即得100mL凝胶，将该温敏凝胶加热灭菌得温敏凝胶样品2，放置4℃保存备用；或分装成每瓶2mL的温敏凝胶样品2，放置4℃保存备用。

将上述方法制备的聚乳酸微球放入Soluplus温敏凝胶中搅拌均匀(聚乳酸微球和Soluplus温敏凝胶的用量比为60mg：2mL)，分装成每瓶2mL的温敏复合凝胶样品，然后冷冻干燥得聚乳酸微球混合温敏凝胶干粉。使用前先将聚乳酸微球混合温敏凝胶干粉注入2mL注射用水，震荡摇匀得聚乳酸微球混合温敏凝胶。

或者将分装好的Soluplus温敏凝胶放置4℃冰箱中1小时，取2mL该凝胶将其注入到前述分装好的60mg聚乳酸微球中，震荡摇匀，得到注射用聚乳酸微球的Soluplus温敏混合凝胶。

实施例3

将2g分子量为50,000的聚已内酯(PCL)，加入到12mL二氯甲烷中溶解，然后滴加到200mL质量分数1％的聚乙烯醇(粘度为22.6mPa.s)水溶液中，滴加完毕，常温搅拌1小时，升温至45℃，除去二氯甲烷得反应液，过滤反应液收集滤饼，筛分出平均粒径20～80μm的微球，真空干燥得1.5g 20～80μm的聚已内酯微球作为微球样品3备用；或将其分装成每瓶60mg微球样品3备用。其光学显微照片请参见图4。

将18g泊洛沙姆407、2g泊洛沙姆188、0.5g羧甲基纤维素钠(粘度为12000mPa.s)和0.25g平均分子量为500万的聚氧化乙烯(PEO)放置于100ml烧杯中，加0.9％氯化钠80mL，搅拌溶解，定容即得100mL凝胶，将该温敏凝胶加热灭菌得温敏凝胶样品3，放置4℃保存备用；或分装成每瓶2mL的温敏凝胶样品3，放置4℃保存备用。

将上述方法制备的聚已内酯微球放入泊洛沙姆407温敏凝胶中搅拌均匀(聚已内酯微球和泊洛沙姆407温敏凝胶的用量比为60mg：2mL)，分装成每瓶2mL的温敏复合凝胶样品，然后冷冻干燥得聚已内酯微球混合温敏凝胶干粉。使用前先将聚已内酯微球混合温敏凝胶干粉注入2mL注射用水，震荡摇匀得聚已内酯微球混合温敏凝胶。

或将分装好的泊洛沙姆407温敏凝胶放置4℃冰箱中1小时，取2mL该凝胶将其注入到前述分装好的60mg的聚已内酯微球中，震荡摇匀，得到注射用聚已内酯微球的泊洛沙姆407温敏混合凝胶。

将制得的聚乳酸微球甲基纤维素温敏混合凝胶作为混合凝胶样品1；将制得的聚乳酸微球Soluplus温敏混合凝胶作为混合凝胶样品2；将制得的聚已内酯微球的泊洛沙姆407温敏混合凝胶作为混合凝胶样品3。将2mL注射用水代替温敏凝胶加入到聚乳酸微球，震荡摇匀得到参比样品。

混合凝胶样品成胶温度和时间的确定：取混合凝胶样品1、2、3和参比样品分别放置到恒温水浴中，逐次升温，每次升温1℃，每次达到指定温度稳定10分钟，根据流动(sol)-不流动(gel)的原则进行判断，记录温度和成胶时间，结果见表1。

表1样品的成胶温度和时间

样品号	成胶温度(℃)	成胶时间(分钟)
			混合凝胶样品1	37	8
混合凝胶样品2	37	5
			混合凝胶样品3	34	3
参比样品	不成胶	不成胶

Claims

1.一种温敏填充剂组合物，其特征在于，所述温敏填充剂组合物包括在使用时加水能形成温敏凝胶的温敏混合粉体，所述温敏混合粉体通过以下方法制备：

将注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球分散在温敏凝胶中，所述温敏凝胶在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态，其中所述聚合物微球和温敏凝胶的用量比为60mg：0.25～6mL，优选60mg：2mL；以及

对分散有聚合物微球的温敏凝胶进行冷冻干燥得到所述混合粉体。

2.一种温敏填充剂组合物，其特征在于，所述温敏填充剂组合物包括：

注入体内时能刺激胶原生成的聚合物微球；以及

温敏凝胶，所述温敏凝胶在环境温度低于34℃时为液体而在34～37℃时为凝胶态；

其中，所述聚合物微球和温敏凝胶各自独立包装保存，在使用时再按60mg聚合物微球：0.25～6mL温敏凝胶的比例混合用于注射。

3.根据权利要求1或2所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述聚合物微球为聚乳酸微球、聚二噁烷酮微球、聚己内酯微球中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述聚合物微球为分子量为10,000～500,000的左旋聚乳酸微球或分子量为10,000～500,000的聚己内酯微球。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述聚合物微球的平均粒径为1～200μm。

6.根据权利要求5所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述聚合物微球的平均粒径为20～80μm。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述温敏凝胶包含质量分数为1～70wt%的甲基纤维素、聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物、泊洛沙姆系列化合物和壳聚糖系列化合物中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述温敏凝胶包含质量分数为2～30wt%的甲基纤维素、聚乙烯基己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物、泊洛沙姆系列化合物和壳聚糖系列化合物中的至少一种。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的温敏填充剂组合物，其特征在于，所述温敏凝胶还包括选自羧甲基纤维素钠、海藻酸、透明质酸、氨基酸、多肽、蛋白质、核酸、维生素及多糖中的至少一种添加剂。