KR20210121020A - 고체 입자를 봉입한 히드로겔 조성물 - Google Patents

Abstract

본 개시물은 히드로겔 및 고체 입자를 포함하는 조성물 및 그의 용도에 관한 것이다. 더 구체적으로, 제안된 기술은 히드로겔 입자를 형성하는 가교된 다당류 분자 내에 봉입된 고체 입자를 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이고, 방법은 1 개 이상의 카르복실기를 포함하는 수용성 다당류 분자, 수불용성 고체 입자, 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 커플링 작용제를 pH 5 내지 9의 물 현탁액에서 혼합하여 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물을 형성한다. 개시물은 조성물, 조성물 생성 방법 및 진피 충전제로서의 조성물의 용도를 포함한다.

Description

고체 입자를 봉입한 히드로겔 조성물

관련 출원 상호참조

본 출원은 2018년 12월 21일에 출원된 유럽 출원 번호 EP18215076의 우선권을 주장하고, 이 유럽 출원은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.

분야

본 개시물은 히드로겔 및 고체 입자를 포함하는 조성물 및 그의 용도에 관한 것이다. 더 구체적으로, 제안된 기술은 히드로겔 입자를 형성하는 가교된 다당류 분자 내에 봉입된 고체 입자를 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 본 개시물은 조성물, 조성물 생성 방법 및 진피 충전제로서의 조성물의 용도를 포함한다.

배경

물 흡수 겔, 또는 히드로겔은 생체의학 분야에서, 예를 들어 점탄물 사용 수술 동안에 및 진피 충전제로서 널리 사용된다. 그것은 일반적으로 무한 망상조직으로의 중합체의 화학적 가교에 의해 제조된다. 많은 다당류는 그것이 완전히 용해될 때까지 물을 흡수하는 반면, 동일한 다당류의 가교된 겔은 대표적으로 그것이 포화될 때까지, 즉, 그것이 유한한 액체 보유 용량, 또는 팽윤 정도를 가질 때까지 일정한 양의 물을 흡수할 수 있다. 히드로겔은 많은 의학적 및 미용적 응용을 가지고, 종종 주사 치료를 통해 투여되는 진피 충전제로서 사용된다.

주사가능한 미용적 진피 충전제는 비수술 회춘(rejuvenation) 치료를 위한 잘 확립된 제품이고, 대표적으로 얼굴 치료에 사용된다. 얼굴 충전제는 얼굴 주사를 통해 주름을 감소시키거나 또는 제거하고, 반흔 함몰부를 높이고, 입술을 증대하고, 연조직 부피 손실을 대체함으로써 얼굴 피부를 회춘하게 하는 콜라겐, 히알루론산 및 칼슘 히드록실 아파타이트 같은 제품이다. 그러한 충전제의 가장 잘 확립된 성분 중 하나는 히알루론산 (또한 히알루로난이라고도 알려짐)을 가교함으로써 형성되는 히드로겔을 포함한다.

히알루론산(HA)은 포유동물 조직에 천연적으로 존재하는 선형 다당류이다. 그것은 반복하는 이당류, →4)-β-D-GlcpA-(1→3)-β-D-GlcpNAc-(1→ 로 이루어지고, 그의 특성 때문에 HA는 많은 의학적 (제약학적) 및 미적 응용, 예컨대 진피 충전 및 조직 증강에 중요해졌다. HA의 또 다른 중요한 특성은 물과 결합해서 보유하는 그의 높은 능력이다.

기계적 특성을 개선하고 생체내에서 HA의 지속기간을 연장하기 위해, 흔한 방법은 HA 중합체 사슬을 3 차원 망상조직으로 공유 가교함으로써 히드로겔을 형성하는 것이다. 가교에 의해 형성되는 HA 히드로겔은 많은 의학적 및 미적 응용에 중요해졌다. 현재 시판되는 제품의 경우에 HA를 히드로겔로 가교하기 위해 요즘에 빈번하게 사용되는 방법은 알칼리성 조건 하에서 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, BDDE와 반응하여 HA와 가교제 사이에 안정한 공유 에테르 연결을 생성하는 것이다. 반응에서는, HA의 친핵성 기가 BDDE의 에폭시드기와 반응한다. 탈양성자화된 히드록실은 음이온성 카르복실기 및 아미드 둘 모두보다 훨씬 더 강한 친핵체이다. 따라서, 히드록실기가 가장 가능성있는 반응 부위이고, 가교제와 안정한 에테르 결합을 형성한다.

HA-기재 충전제가 천연 발생 중합체로부터 만들어지기 때문에, 그것은 생체적합성이지만, 또한 생체분해성이고, 즉, 충전제가 시간이 지남에 따라 분해되어, 결과를 유지하기 위해서는 치료가 반복되어야 한다. 따라서, 충전제의 증대된 및 연장된 결과가 바람직할 것이다. 따라서, 관련 분야에서는 주사 치료의 결과를 증대하기 위해 진피 충전제의 조성물을 추가로 개선하는 것이 필요하다.

개시물의 요약

본 개시물의 목적은 최신 기술 수준에서의 위에서 확인된 결함 및 불리한 점을 단독으로 또는 임의의 조합으로 경감하거나, 완화하거나, 또는 제거하는 것을 추구하는 방법 및 제품을 제공하는 것이다. 일부 측면에서, 이 목적은 미용적 및 제약학적 치료에 사용하기 위한 조성물에 의해 얻어지고, 조성물은 고체 입자를 봉입한 다당류 히드로겔을 포함하고, 여기서는 고체 입자가 히드로겔의 겔 입자 내에 존재한다.

일부 측면에서, 본 개시물은 일반적으로 (a) pH 5 내지 9의 물 현탁액에서 다음: (i) 1개 이상의 카르복실기를 포함하는 글리코사미노글리칸 분자, (ii) 수불용성 고체 입자, (iii) 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 (iv) 커플링 작용제를 혼합하고, 이렇게 함으로써 글리코사미노글리칸 분자를 커플링 작용제로 활성화하는 단계; (b) 활성화된 글리코사미노글리칸 분자를 가교하는 단계, (c) 가교된 글리코사미노글리칸 분자 내에 고체 입자를 봉매하여 고체 입자가 봉매된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 히드로겔에 봉매된 고체 입자를 포함하는 가교된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

일부 측면에서, 글리코사미노글리칸은 히알루론산이다. 일부 측면에서, 수불용성 고체 입자는 하나 이상의 중합체를 포함한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 중합체는 동종중합체, 이종중합체, 또는 공중합체이다. 일부 측면에서, 하나 이상의 중합체는 폴리락트산이다. 일부 측면에서, 불용성 고체 중합체는 다공성이다. 일부 측면에서, 불용성 고체 중합체는 비다공성이다. 일부 측면에서, 히드로겔 내의 수불용성 고체 중합체는 중량 기준으로 0.1%-10%이다.

일부 측면에서, 방법은 히드로겔을 더 작은 분획으로 분할하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 더 작은 분획은 히드로겔 입자이다. 일부 측면에서, 히드로겔 입자의 크기는 0.01 mm 내지 5 mm이다. 일부 측면에서, 방법은 국소 마취제를 조성물에 첨가하는 것을 추가로 포함한다.

일부 측면에서, 방법은 조성물을 멸균하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물을 멸균하는 것은 열 멸균을 포함한다.

일부 측면에서, 방법은 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 사전활성화된 표면은 혼합 시에 고체 입자가 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅되는 것을 허용한다. 일부 측면에서, 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 것은 고체 입자의 표면에 카르복실기를 사전로딩(preloading)하는 것을 포함하고, 여기서 고체 입자는 글리코사미노글리칸 분자에 아미드 결합을 통해 그래프팅된다. 일부 측면에서, 표면을 사전활성화하는 것은 고체 입자의 표면에 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 그래프팅 작용제를 사전로딩하는 것을 포함하고, 여기서 고체 입자는 그래프팅 작용제와 글리코사미노글리칸 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅된다.

일부 측면에서, 가교제는 디아미노 유도체를 포함한다. 일부 측면에서, 디아미노 유도체는 지방족 또는 방향족 디아미노 유도체, 펩티드 또는 펩티드 서열, 또는 디아미노 탄수화물이다. 일부 측면에서, 디아미노 탄수화물은 디아미노 트레할로스, 디아미노 히알루론산 사당류, 디아미노 히알루론산 육당류, 디아미노 락토스, 디아미노 말토스, 디아미노 수크로스, 키토비오스, 또는 디아미노 라피노스로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

일부 측면에서, 커플링 작용제는 트리아진-기재 커플링 작용제이다. 일부 측면에서, 트리아진-기재 커플링 작용제는 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM) 또는 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT)으로부터 선택된다.

일부 측면에서, 개시물은 본원에서 기술되는 방법 중 임의의 하나 이상에 의해 생성되는 고체 입자가 봉매된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

일부 측면에서, 개시물은 일반적으로 카르복실기를 포함하는 가교된 글리코사미노글리칸을 포함하는 히드로겔의 겔 입자 내에 봉매된 수불용성 고체 입자를 포함하고, 여기서 글리코사미노글리칸 분자가 아미드 결합을 통해 가교된 것인 조성물에 관한 것이다.

일부 측면에서, 글리코사미노글리칸은 히알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 글리코사미노글리칸은 히알루론산이다. 일부 측면에서, 수불용성 고체 입자는 하나 이상의 중합체를 포함한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 중합체는 동종중합체, 이종중합체, 또는 공중합체이다. 일부 측면에서, 하나 이상의 중합체는 폴리락트산이다. 일부 측면에서, 불용성 고체 중합체는 다공성이다. 일부 측면에서, 불용성 고체 중합체는 비다공성이다. 일부 측면에서, 히드로겔 중의 수불용성 고체 중합체는 중량 기준으로 0.1%-10%이다. 일부 측면에서, 겔 입자의 크기는 0.01 mm 내지 5 mm이다.

일부 측면에서, 조성물은 국소 마취제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 국소 마취제는 리도카인이다. 일부 측면에서, 조성물은 멸균성이다.

일부 측면에서, 고체 입자는 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅된다. 일부 측면에서, 고체 입자는 아미드 결합을 통해 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅된다. 일부 측면에서, 고체 입자는 그래프팅 작용제와 글리코사미노글리칸 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅된다.

일부 측면에서, 개시물은 일반적으로 본원에서 기술되는 조성물 중 임의의 하나 이상을 대상체의 진피 내에 주사하는 것을 포함하는 진피 충전 방법에 관한 것이다. 일부 측면에서, 조성물을 주사하는 것은 1개 초과의 주사 부위에서의 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 위약 대조군과 비교해서 주름 및 미세주름의 출현을 감소시킨다.

도 1a-1c는 고체 입자가 히드로겔 입자에 관하여 분포되는 다양한 방식의 도해이다. 도 1a는 이미 가교된 히드로겔을 고체 입자와 혼합한 후 고체 입자가 겔 입자 밖에 및 겔 입자들 사이에 존재하는 선행 기술 해결책을 묘사한다. 도 1b는 본 개시물의 방법으로부터 생긴 겔 입자를 묘사하고, 여기서는 고체 입자 존재 하에서의 수용성 다당류의 가교 후에 고체 입자가 겔 입자 내에 봉매된다. 도 1c는 본 개시물의 방법으로부터 생긴 겔 입자를 묘사하고, 여기서는 고체 입자 존재 하에서의 수용성 다당류의 가교 후에 고체 입자가 겔 입자 내에 봉매되지만, 고체 입자 중 일부는 또한 겔 입자 밖에 존재한다.
도 2는 수용성 다당류, 이 경우에는 히알루론산이 가교제, 이 경우에는 디아미노트레할로스(DATH), 및 고체 입자, 이 경우에는 폴리-L-락트산(PLLA), 및 커플링 작용제, 이 경우에는 DMTMM과 혼합되어 고체 PLLA 입자를 봉입한 가교된 HA 히드로겔 입자를 형성하는 개시물의 한 측면을 묘사한다.
도 3은 중합체 입자가 입자 표면의 카르복실레이트 밀도를 증대하기 위해 예컨대 카르복실기 첨가 또는 유리(liberation)에 의해 사전처리되는 개시물의 한 측면을 묘사한다. 이 묘사에서는, 입자를 수용성 다당류(HA), 가교제(DATH) 및 커플링 작용제 DMTMM(그림으로 나타내지 않음)와 혼합하기 전에, 카르복실기가 무수말레산을 사용하여 첨가되어 고체 입자 표면에 카르복실기를 제공하거나, 또는 카르복실기가 부분 가수분해를 사용하여 유리/노출된다.
도 4는 입자를 수용성 다당류(HA), 가교제(DATH), 및 커플링 작용제 DMTMM와 혼합하기 전에, 고체 입자가 입자에 아민 표면을 이 예에서는 DATH를 그래프팅 작용제로서 사용하여 사전로딩함으로써 사전처리된 개시물의 한 측면을 묘사한다. 이 측면에서는 고체 입자가 먼저 무수말레산으로 처리되어 무수물을 첨가하고, 여기에 그래프팅 작용제 DATH가 커플링되어, 혼합 단계 전에 사전처리된 입자 표면에 아민 표면을 제공한다.
도 5는 개시물의 한 측면인 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 조성물의 제조 방법의 흐름도를 묘사한다.
도 6은 개시물의 한 측면인 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 조성물을 포함하는 주사가능한 생성물의 제조 방법의 흐름도를 묘사한다.
도 7은 오토클레이빙 전의 실시예 1에 기술된 방법에 따라 얻은 겔의 이미지이다.
도 8은 오토클레이빙 후의 실시예 2에 기술된 방법에 따라 얻은 겔의 이미지이다.
도 9는 오토클레이빙 후의 실시예 4-2에 기술된 방법에 따라 얻은 겔(샘플 4-2)의 이미지이다.

개시물의 상세한 설명

본 개시물의 다른 측면 및 바람직한 실시양태는 다음 상세한 개시 및 첨부된 청구범위로부터 분명하다.

히드로겔 및 히드로겔을 만드는 방법

본 개시물은 가교된 다당류 히드로겔 입자 내에 봉입된/봉매된 및 균일하게 분포된 고체 입자를 포함하는 복합 생체재료의 조성물을 제공함으로써 위에서 언급된 문제 및 단점에 대한 해결책을 제공한다.

수십 년 동안, 시판되는 대부분의 진피 충전제는 히알루론산을 기재로 하고, 잘 알려진 BDDE/NaOH 기술에 의해 가교되어 진피 주사를 위한 적당한 특성을 갖는 제품을 얻었다. 더 최근에는, 또한 SCULPTRA가 FDA에 의해 진피 충전제로 승인되었다. 대부분의 히알루론산 기재 충전제 브랜드와 대조적으로, SCULPTRA는 폴리-L-락트산(PLLA) 기재 제품이다. 그러나, 즉각적인 주름 및 볼륨 증대 때문에 다당류 히드로겔을 기재로 하지만 또한 입자의 콜라겐 자극 효과를 포함하는 제품, 예컨대 입자를 히드로겔 생성물 내에 혼입시킨 조성물을 가지는 것이 바람직할 것이다.

폴리락트산(PLA) 또는 폴리락티드는 재생가능한 자원, 예컨대 옥수수 전분, 카사바 뿌리, 칩(chip) 또는 전분, 또는 사탕수수로부터 유래되는 생체분해성 및 생체활성 열가소성 지방족 폴리에스테르이다. 락트산의 키랄 본성 때문에, 폴리락티드의 여러 개별 형태가 존재하고, 폴리-L-락티드(PLLA)는 L,L-락티드(또한 L-락티드라고도 알려짐)의 중합의 결과로 얻는 생성물이다. PLA/PLLA 입자의 생체적합성, 생체분해 및 콜라겐 네오합성(neosynthesis) 특성 때문에, 히드로겔의 특성을 증대하고 충전제 생성물의 분해를 지연하기 위해 히드로겔 충전제 생성물에 그것을 포함하는 것이 유리할 것이다.

히드로겔 생성물에 입자를 혼입시키기 위한 한 방법은 CN104258470에서 기술되고, 여기서는 가교된 HA와 PLA 입자를 혼합함으로써 생성물이 형성된다. 그러나, 이 생성물은 PLA 입자의 균일한 및 균질한 분포가 결여되고, 이는 겔 입자 밖에 미소구 클러스터링의 큰 위험, 뿐만 아니라 PLA 입자의 불균일한 분포 때문에 주사 동안에 바늘을 막히게 하는 증가된 위험을 제기할 수 있다. 이 불균일한 분포 및 막힘의 근거는 PLLA가 수불용성이고 친지성 상호작용이 클러스터 형성을 초래한다는 것 때문이다.

PLA 및 PLLA는 가수분해로 인해 알칼리성 조건에 민감한 생체분해성 폴리에스테르이다. 이들 특성 때문에, 알칼리성 가교 공정 동안에 PLA/PLLA의 가수분해 및 락트산의 유리의 위험이 있다는 점을 고려하면 히알루론산 기재 히드로겔 내에 PLA 또는 PLLA 입자를 혼입시키는 것은 도전이다. HA의 가교는 통상적으로 알칼리성 조건 하에서 BDDE와의 반응을 사용하여 수행되기 때문에, 가교 전에 PLA 또는 PLLA 입자를 첨가하는 것은 고려되지 않았었다.

그러나, 친핵성 작용성 가교제를 사용하여 HA를 가교하는 새로운 방법이 개발되었고, 그 방법은 BDDE 방법론과 대조적으로 중성 또는 실질적으로 중성 조건, 즉 중성 pH 하에서 수행될 수 있다. 따라서, 가교 단계 전에 이미 입자를 첨가하는 것이 시험되었고, 즉, 입자들이 가교 동안에 존재하는 것이 허용되고, 그 결과로 입자들이 히드로겔 또는 히드로겔 입자 안에 봉입되거나 또는 봉매되었다. 이것은 이 새로운 가교 방법론이 입자를 분해하는 알칼리성 조건을 필요로 하지 않고 실질적으로 중성 조건 하에서 수행될 수 있었기 때문에 가능하였다. 따라서, 입자의 균질한 및 균일한 분포가 달성되었다. "실질적으로 중성 조건" 또는 "중성 pH"의 경우, 제조 공정 (가교 단계) 동안에 pH 5 내지 pH 9의 범위가 의도되고, 이는 최종 생성물(조성물)에서 pH 6 내지 pH 8의 pH 범위를 제공한다.

따라서, 본 개시물은 가교된 다당류 분자 내에 봉입된 고체 입자의 조성물을 포함한다. 한 측면에서, 개시물은 중합체-기재 히드로겔 입자 내에 주로 봉매된(봉입된) 및 균일하게 분포된 고체 중합체 입자를 포함하고, 또한 주사기 내로의 충전 및 바늘 또는 캐뉼라를 통한 통과를 가능하게 하는 전체 평균 크기를 가지는 주사가능한 복합 생체재료를 기술한다. 개시물은 다량의 물 또는 수성 용매(예컨대 포스페이트 완충제)를 보유하는 용량을 특징으로 하는 히드로겔 조성물에 관한 것이고, 여기서 각 히드로겔 입자는 평균적으로 다수의 고체 중합체 입자를 함유한다.

기술된 생성물의 조성물은 수불용성 및 고체 입자, 예컨대 생체적합성 및 생체분해성 폴리에스테르(예를 들어 폴리락트산)로 이루어지는 고체 중합체 입자의 존재 하에서 수용성 다당류(예컨대 HA)의 공유 가교에 의해 얻어진다. 일부 측면에서, 조성물은 상호연결된 겔상 및 고체상을 포함한다. 일부 측면에서, 히드로겔 물질은 대표적으로 주사 동안에 통증을 최소화하기 위해 마취제, 예컨대 리도카인을 함유한다. 일부 측면에서, 그 다음에 봉매된 고체 입자를 함유하는 히드로겔은 적당한 크기의 피스로 물리적으로 분할되고 그 후에 마취제와 혼합한 다음에 주사기에 충전되고 예를 들어 열에 의해 멸균될 수 있다.

일부 측면에서, 봉매된 고체 중합체 입자는 고체 중합체 입자와 히드로겔 사이의 계면에서 주변 히드로겔 망상조직에 공유 결합되지만, 입자 및 히드로겔은 주로 분리된 개별 상으로 남는다. 이것은 고체 입자의 표면의 사전활성화에 의해 달성될 수 있고, 그 다음에 입자는 히드로겔 망상조직 내에 다당류 분자에 그래프팅될 수 있다. 히드로겔이 가교된 HA를 기재로 하는 경우에, 망상조직은 효소(히알루로니다제 또는 콘드로이티나제)에 의해 분해가능하다.

고체 중합체 입자가 가교 공정 동안에 존재하게 하는 것만으로도, 그것이 히드로겔 내에 균일하게 분포될 수 있고 완전히 봉입되고 봉매될 수 있으며, 다당류를 중성 조건 하에서 가교하는 것만으로도, 고체 중합체 입자가 분해 위험 없이 봉매될 수 있다. 따라서 가교는 바람직하게는 물 중에서 다작용성 아민(예컨대 디아미노트레할로스, DATH) 및 커플링 작용제를 사용하여, 바람직하게는 예를 들어, DMTMM을 커플링 작용제로 사용한 트리아진-매개 아미드화를 통해 수행된다.

따라서 본 개시물의 방법은 히드로겔의 겔 입자 내에 고체 중합체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물을 제공한다. 이 생성물은 모든 입자가 겔 밖에서 클러스터를 이루는, 겔 형성 후에 PLLA의 입자와 혼합되는 이전에 개시된 히알루론산 기재 히드로겔에 비해 많은 이점을 가진다. 예를 들어, 본 개시물의 조성물은 그 물질이 주사된 조직 내에 혹(nodule) 또는 범프(bump) 형성의 위험이 더 낮음, 및 균일한 분포로 인해 주사 동안에 바늘 막힘 위험이 더 낮음, 뿐만 아니라 봉매된 입자들 때문에 그것들이 조직에 더 느리게 노출됨으로 인한 연장된 효과를 포함한다. 현 조성물과 이미 가교된 히드로겔과 고체 입자를 혼합함으로써 얻은 생성물 사이의 차이를 도 1a - 1c에 나타낸다. 도 1a 내지 1c는 가교된 다당류 분자를 포함하는 많은 겔 입자를 나타낸다. 도 1a는 선행 기술의 예를 나타내고, 여기서는 고체 입자를 이미 가교된 다당류 히드로겔과 혼합하기 때문에 고체 입자가 겔 입자 사이에 분포된다. 도 1b는 본 개시물의 실시양태를 나타내고, 여기서는 고체 입자가 가교 단계 동안에 존재하기 때문에 고체 입자가 겔 입자 내에 봉입된다. 또한, 도 1c에 나타낸 바와 같이, 고체 입자 중 일부는 겔 입자 밖에 체류할 수 있다. 이 예에서는, PLLA 입자(40 - 60 μm)가 겔 망상조직 내에 봉매될 것이다. 히알루로난의 분해는 비변형된 PLLA 입자를 방출할 것이다. 추가로, PLLA 표면 상의 말단 카르복실레이트(-COOH)는 디아미노 가교제(DATH)에 의해 겔 망상조직에 PLLA 입자를 공유적으로 추가로 혼입할 수 있다. 그러나, 이것들이 비변형된 PLLA에서는 매우 적어서 이 실시양태에서는 PLLA가 그래프팅된 것으로 여기지 않는다.

본 개시물의 생성물로서 폴리락트산의 고체 입자 및 히알루론산의 조합 사용은 이전에 관련 분야에서 기술되지 않았다. 그러나, 문헌 WO200633698은 고체 입자로서가 아니라 용융물 또는 농축된 용액 중의 HA 및 PLA 중합체의 사용을 기술한다. WO200633698은 폴리에스테르 중합체(예컨대 폴리락트산)가 엔탱글먼트(entanglement)를 통해 다당류(예컨대 히알루론산)와 조합된 매트릭스를 기술하고, 여기서 엔탱글먼트는 용융물 또는 농축된 용액 중의 중합체의 상태를 지칭한다. 따라서, 그것은 본 개시물의 조성물 및 방법과 비교해서 완전히 상이한 생성물 및 상기 생성물을 제조하는 완전히 상이한 방법이다.

본 개시물에서는, 히드로겔 내에 봉매된 고체 입자와 관련해서, 두 상이한 중합체 종 사이의 엔탱글먼트가 요망되지 않고, 용융되지도 용해되지도 않아야 하고 오히려 공정의 시작부터 최종 생성물을 얻을 때까지 원상태로 고체로 남아야 하는 고체 중합체 입자의 좋지 않은 수용해도 때문에 엔탱글먼트가 일어날 것이라고 예상되지 않는다. 게다가, 단일상 고체 물질과 대조적으로, 최종 물질은 두 개별 상으로 이루어지고, 하나는 다량의 물에서 팽윤되는 가교된 다당류 망상조직으로 구성된 히드로겔이고, 다른 하나는 히드로겔 내에 봉매된 고체 중합체 입자이다. 결과적으로 얻는 물질은 최종적으로 주사기 장치를 사용하여 바늘을 통해 주사에 의해 포유동물 조직에 투여될 수 있고, 이는 엔탱글드(entangled) 매트릭스에 관한 경우에는 해당되지 않는다.

US7767806B2는 합성 생체분해성 및 생체적합성 폴리에스테르(예컨대 PLA 또는 PGA)에 대표적으로 HA 카르복실기 상에서 아미드 결합을 통해 공유 결합된 히알루론산으로 이루어진 마이크로-입자를 개시한다. 마이크로-입자는 일부 경우에서는 HA로 코팅된 중합체 코어로 이루어진 한정된 단일 유닛으로서 기술되고, 이것은 수성 용매에 분산가능하고, 바늘을 통한 주사를 가능하게 하는 평균 크기를 가지고, 여기서 콜로이드성 분산액은 IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry)에 따라서 임의의 본성(예를 들어 고체, 액체, 또는 기체)의 콜로이드 크기의 입자가 상이한 조성(또는 상태)의 연속 상에 분산된 시스템으로 정의된다.

본 개시물과 비교해서, US7767806B2에서의 마이크로-입자는 HA-기재 히드로겔 내에 균일하게 분포된 다수의 고체 입자를 함유하지 않고, 오히려 HA 및 폴리에스테르 둘 모두로 된 단일-상 입자 또는 HA로 코팅된 단일-코어 중합체 입자로 이루어진다. 마이크로-입자(HA 및 중합체 둘 모두를 함유함)를 포함하는 분산액은 (정의에 의하면) 수성 용매에 있을 때 미세하게 분할된 상 도메인들의 하나의 상을 구성할 것이고, 반면에 용매는 연속상일 것이다. 그러한 분산액은 과량의 수성 용매를 함유하는 것으로 예상될 것이지만; 연속 (수성) 상은 히드로겔로 구성되지 않는다. 본 개시물의 조성물(히드로겔 내에 봉매된 고체 중합체 입자)은 수성 용액/용매에 분산된 고체 중합체 입자로 이루어지지 않는다. 게다가, US7767806B2는 당-기재 링커(또는 스페이서), 예컨대 DATH를 사용하여 HA를 중합체에 결합하는 것을 포함하지 않는다.

수용성 다당류 겔/히드로겔, 예를 들어 글리코사미노글리칸(GAG) 겔, 예컨대 히알루론산 겔이 링커/스페이서로서 자유 아민기를 함유하는 짧은 당류 사슬을 사용하여 제조될 수 있다는 것이 이전에 발견되었고, 이 개념은 본 개시물의 방법에 사용될 수 있다. 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로부터 선택되는 스페이서기를 포함하는 가교제를 통한 가교는 제공되는 히드로겔에서 히알루론산의 본래 특성에 대한 가교의 방해를 최소화한다. 스페이서기는 예를 들어 아민화된 트레할로스, 말토스, 락토스 또는 셀로비오스로 구성될 수 있고, 여기서 디아미노트레할로스(DATH)가 바람직한 가교제/스페이서이다.

고효율 축합 반응과 함께 가교제 사용은 생성물이 조절된 방식으로 회합되는 것을 허용한다. HA의 카르복실기를 커플링 작용제로 활성화함으로써, HA 분자는 스페이서기를 포함할 수 있는 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제를 사용하여 그의 활성화된 카르복실기를 통해 가교되어 가교된 HA 분자를 얻을 수 있다. 바람직한 커플링 작용제는 트리아진-기재 커플링 시약, 예컨대 DMTMM 또는 CDMT이다.

카르복실레이트의 활성화를 위한 DMTMM 사용 및 후속하는 디아미노 구조, 예를 들어 DATH, 리신, HMDA, 디아미노수크로스 등과의 축합은 가교된 다당류 분자, 예를 들어 GAG로 구성된 히드로겔을 생성하는 효율적인 방법인 것으로 나타났다. 반응은 중성 pH에서, 비완충된 시스템의 완충된에서 수행될 수 있고, 이 조건에는, 잘 알려진 BDDE/NaOH-시스템 공정과 대조적으로, 알칼리성 민감성 생체중합체 예컨대 PLLA 및 히알루론산의 미미한 분해가 관찰된다.

HA, 콘드로이틴 및 콘드로이틴 설페이트는 잘 알려진 생체적합성 중합체이다. 그것들은 GAG의 군에 속하는 천연 발생 다당류이다. 모든 GAG는 다량의 물을 흡수하는 용량을 가지는 음으로 하전된 헤테로다당류 사슬이다. HA는 의학적 및 미용적 용도를 위해 가장 널리 사용되는 생체적합성 중합체 중 하나이다. 콘드로이틴 설페이트(CS)는 포유동물의 결합조직에서 발견되는 매우 풍부한 GAG이고, 여기서 그것은 다른 설페이트화된 GAG와 함께 부분 프로테오글리칸으로서 단백질에 결합된다. CS를 함유하는 히드로겔은 그것이 천연 세포외기질과 비슷하기 때문에 생체의학적 응용에 성공적으로 사용될 수 있다는 것이 이전에 밝혀졌다. 글리코사미노글리칸의 가교는 망상조직을 구성하는 분해성 중합체의 지속기간을 연장하고, 이는 많은 응용에서 유용하다. 그러나, 가교는 또한 GAG의 본래 특성을 감소시킬 수 있다. 따라서, 글리코사미노글리칸 자체의 본래 특성 및 효과를 보존하는 효율적인 가교에 의해 낮은 정도의 변형을 유지하는 것이 대표적으로 요망된다. 이것은 현 개시물의 가교 개념을 사용해서 얻어진다.

본 개시물은 팽윤성 중합체로서 카르복실산/카르복실기를 포함하는 수용성 다당류 분자, 예컨대 글리코사미노글리칸 분자를 포함하는 히드로겔 생성물 내에 봉입된 고체 중합체 입자의 조성물을 제공하고, 여기서 수용성 다당류 분자는 예를 들어 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기를 포함하는 가교구조를 통해 공유 가교된다.

이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기를 포함하는 가교제를 통한 가교는 전적으로 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체를 기재로 하는 히드로겔 생성물을 제공하고, 이는 수용성 다당류의 본래 특성에 대한 가교의 방해를 최소화한다. 이당류, 삼당류, 사당류 또는 올리고당류는 바람직하게는 구조 및 분자량 면에서 잘 정의된다. 바람직하게는 스페이서는 하나의 특이적 이당류, 삼당류, 사당류 또는 올리고당류 구조로부터 선택된다.

바람직하게는, 이당류, 삼당류, 사당류 또는 올리고당류는 단분산이거나 또는 좁은 분자량 분포를 가진다. 고효율 축합 반응과 함께 잘 정의된 이당류, 삼당류, 사당류 또는 올리고당류 기재 가교제를 사용하는 것은 생성물이 조절된 방식으로 회합되는 것을 허용한다. 또한, 가교제 그 자체가 예를 들어 히알루론산과 상관있는 구조(예를 들어 디아미노 히알루론산 사당류)와 가교할 때 또는 높은 물 보유 특성을 갖는 구조(예를 들어 트레할로스)와 가교할 때 히드로겔의 유지된 또는 증가된 특성에 기여할 수 있다.

수용성 다당류는 GAG, 예컨대 예를 들어 설페이트화된 또는 비설페이트화된 글리코사미노글리칸, 예컨대 히알루로난, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트, 헤파란 설페이트, 헤파로산, 헤파린, 더마탄 설페이트 및 케라탄 설페이트, 또는 그의 혼합물일 수 있다. 일부 실시양태에서 GAG는 히알루론산, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트이다. 바람직한 실시양태에서 GAG는 히알루론산이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 수용성 다당류 또는 GAG는 본래 수용성 다당류 또는 GAG이다. 본 개시물의 방법 및 조성물과 관련하여 사용되는 GAG는 바람직하게는 천연 발생 GAG이다. GAG는 바람직하게는 그의 본래 상태로 사용되고, 즉, GAG의 화학 구조가 바람직하게는 작용기 첨가 등에 의해 변경되거나 또는 변형되지 않았다. GAG를 그의 본래 상태로 사용하는 것이 바람직하며, 그 이유는 이것이 GAG 자체의 본래 특성 및 효과를 보존하는 천연 분자와 더 밀접하게 비슷한 가교된 구조를 제공할 것이고, 가교된 GAG가 체내에 도입될 때 면역 반응을 최소화할 수 있기 때문이다.

공유 가교된 수용성 다당류 또는 GAG 분자는 바람직하게는 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체로 이루어지거나 또는 주로 이루어지고, 이것은 고체 입자를 봉입한다. 이것은 가교된 GAG 분자가 바람직하게는 합성 비탄수화물 구조 또는 링커가 없거나 또는 본질적으로 없다는 것을 의미한다. 이것은 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어지는 가교제와 함께 GAG를 그의 본래 상태로 사용함으로써 달성될 수 있다. 그 다음에 가교제의 작용기가 GAG의 카르복실기에 직접적으로 공유 결합된다. 따라서 공유 가교된 GAG의 가교구조는 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류 스페이서기로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이루어진다.

한 실시양태에서, 본 개시물은 하기 단계를 포함하는, 가교된 수용성 다당류를 포함하는 히드로겔 생성물 내에 봉입된 고체 입자를 포함하고, 여기서 수용성 다당류가 카르복실산/카르복실기를 포함하는 것인 조성물, 예컨대 멸균된 주사가능한 조성물의 제조 또는 조제 방법 또는 공정을 제공한다:

a) 수용성 다당류 분자 및 수불용성 고체 중합체 입자의 현탁액을 제공하는 단계;

b) 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제 및 커플링 작용제를 포함하는 반응 용액을 첨가하고, 이렇게 함으로써 수용성 다당류 분자 상의 카르복실기를 활성화하고, 활성화된 수용성 다당류 분자를 그의 활성화된 카르복실기를 통해 가교제를 사용하여 가교하여 고체 입자를 주로 겔 입자 내에 봉입한 가교된 수용성 다당류 분자의 조성물을 얻고, 상기 가교제가 임의적으로 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기를 포함하는 것인 단계;

c) 조성물을 바늘을 통한 주사에 적합한 더 작은 분획으로 분할하는 단계;

d) 국소 마취제를 조성물에 첨가하는 단계; 및

e) 조성물을 예를 들어 열 멸균, 예컨대 오토클레이빙을 사용하여 멸균하는 단계.

공유 가교된 수용성 다당류 또는 GAG 분자는 바람직하게는 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이루어진다.

한 실시양태에서, 활성화 및 가교는 동시에 수행되고, 제조 방법 또는 공정은 단일 포트(one port) 공정으로서 수행되고, 여기서는 모든 성분이 반응 용기에서 혼합되어 조성물을 제공한다. 따라서 본 개시물은 고체 입자를 포함하는 가교된 다당류 분자를 제조하기 위한 간단한 단일-포트/단일-단계 제조 방법을 제공한다. 단일-포트/단일-단계 제조 방법은 조성물 제조 공정에서 단계의 수를 감소시키고, 따라서 예를 들어 2-단계 방법에 비해 더 간단한 방법이다. 이렇게 함으로써 그 공정은 시간 및 돈을 절약한다. 그러나, 다당류 분자, 및 특히 히알루론산의 가공 및 변형은 대표적으로 중합체 백본(backbone)의 어느 정도의 분해에 이르기 때문에, 가공 및 변형 단계의 수를 감소시키는 것은 또한 개선된, 덜 분해된 다당류 생성물을 초래할 수 있다.

본 개시물의 방법 및 조성물의 한 실시양태는 도 2에서 도시되고, 여기서는 고체 입자, 수용성 다당류, 가교제 및 커플링 작용제(나타내지 않음)가 실질적으로 중성 pH (pH 5-9)의 수성 물 기재 현탁액에서 혼합되어, 가교제가 수용성 다당류 사슬에 결합하는 것을 가능하게 하고, 이렇게 함으로써 수용성 다당류 사슬을 서로 가교하여 가교된 다당류 히드로겔을 형성하고, 여기서 고체 입자는 가교된 다당류 분자의 겔 입자 내에 봉입된다. 이 실시양태에서, 고체 입자는 고체 입자와 다당류 사슬 사이의 결합이 실질적으로 없고, 따라서 고체 중합체 입자는 히드로겔에 비그래프팅된 것이라고 부른다. 따라서 이 실시양태의 고체 입자는 주로 조성물의 겔 입자 내에 봉입된다.

일부 실시양태에서는, 도 3 및 도 4에 도시된 바와 같이, 고체 중합체 입자가 단계 (a) 전에 사전처리되고, 여기서는 혼합/가교 단계 동안에 수용성 다당류 백본과 고체 입자 사이에 공유 결합이 형성되고, 이렇게 해서 고체 입자가 다당류 분자에 그래프팅된다. 사전처리에서 고체 입자의 표면은 예를 들어 도 3에 나타낸 바와 같이 예를 들어 무수말레산 또는 무수말레산 유도체를 사용하여 카르복실기를 첨가함으로써 또는 부분 가수분해를 사용하여 카르복실기를 유리함으로써 표면에 카르복실기/카르복실레이트를 사전로딩함으로써 사전활성화된다. 한 실시양태에서 고체 입자의 표면의 사전처리는 표면에 그래프팅 작용제를 로딩하는 것을 포함한다. 표면은 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 분자, 예컨대 본 개시물의 가교제인 그래프팅 작용제로 사전로딩될 수 있다. 이것은 도 4에 나타낸 바와 같이 먼저 카르복실기를 예를 들어 무수말레산을 사용하여 첨가하고, 그 다음에 그래프팅 작용제, 예컨대 DATH를 첨가하여 표면에 아민을 로딩하는 2-단계 공정을 사용하여 수행될 수 있다. 고체 입자의 표면의 이 사전활성화는 입자와 수용성 다당류 사슬 사이에 결합 형성, 즉, 고체 입자가 겔 입자 내에 봉매될 때와 실질적으로 동시에 수용성 다당류에 고체 입자의 그래프팅을 유발한다. 따라서 이 사전처리된 고체 중합체 입자는 히드로겔의 가교된 다당류 사슬에 그래프팅된 것이라고 부른다. 일부 실시양태에서, 가교 및 그래프팅은 다당류 분자와 가교제 사이에 및 다당류 분자와 그래프팅 작용제 사이에 아미드 결합을 제공한다. 아미드 결합은 쉽게 가수분해되지 않는 안정한 공유 결합이다. 따라서, 가교 및 그래프팅 둘 모두가 아미드 결합에 의해 달성되는 개시물에 따른 조성물은 가교 또는 그래프팅이 더 약한 결합에 의해 달성되는 유사한 생성물보다 분해에 덜 민감할 것이다. 가교 및 그래프팅에서 동일한 유형의 결합의 사용은 또한 생성물의 더 예측가능한 분해 거동을 제공할 수 있다. 따라서 이 실시양태의 고체 입자는 조성물의 겔 입자 내에 봉입될 뿐만 아니라 가교된 다당류에 그래프팅되고, 여기서 그래프팅은 그래프팅 작용제와 다당류 분자 사이에, 또는 고체 입자 표면 상의 첨가된 카르복실기와 다당류 분자 사이에 아미드 결합을 통해서 일어날 수 있다.

따라서, 고체 입자는 혼합 단계 전에 고체 입자에 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 분자를 사전로딩함으로써 사전처리/사전활성화될 수 있다. 한 예는 고체 입자에 DATH를 사전로딩하는 것이고, 이는 먼저 표면에 카르복실기를 예를 들어 무수말레산을 사용하여 사전로딩하고, 그 다음에 DATH로 가수분해하여 아민 코팅된 입자를 형성하는 2-단계 공정을 사용하여 수행될 수 있다.

또 다른 실시양태에서는, 히드로겔과 봉입된/봉매된 고체 입자 사이의 공유 연결을 증가시키기 위해, 고체 입자의 표면이 카르복실기를 첨가하거나 또는 유리함으로써 활성화될 수 있다. 카르복실기는 예를 들어 카르복실레이트(무수말레산)의 덴드리머 망상조직, 또는 예를 들어 고체 입자 표면 상의 카르복실기를 유리하는 에탄올성 알칼리성 용액을 사용하여 활성화될 수 있다. 그 다음에 활성화된 입자를 다당류, 가교제 및 커플링 작용제와 혼합하여 조성물을 형성할 수 있다.

본 개시물은 대표적으로 수용성 다당류 분자 백본 상의 카르복실기를 위한 활성화 작용제로서 커플링 작용제, 및 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기를 포함할 수 있는 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제를 사용하여 공유 결합, 바람직하게는 아미드 결합에 의한 수용성 다당류 분자의 가교를 포함한다. 본 발명의 방법에 따른 가교는 온화한 및 효율적인 경로에 의해, 예컨대 중성 pH에서 달성될 수 있고, 결과적으로 고체 입자 및 수용성 다당류 분자의 최소 분해와 함께 고수율을 초래한다.

이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제는 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기를 함유할 수 있고, 이것은 수용성 다당류 분자 사이의 가교구조에 남는다. 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 이당류, 삼당류, 사당류, 및 올리고당류는 그에 부착된 적어도 두 친핵성 작용성 기를 포함한다. 적어도 두 친핵성 작용성 기는 바람직하게는 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 스페이서기에 의해 분리된다. 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제는 수용성 다당류의 작용성 카르복실기와 반응할 수 있는 둘 이상의 작용성 기를 포함하고, 결과적으로 공유 결합, 바람직하게는 아미드 결합의 형성을 초래한다. 친핵성 작용성 기는 바람직하게는 수용성 다당류 분자 상의 카르복실기와 반응하여 아미드 결합을 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류의 친핵성 작용성 기는 일차 아민, 히드라진, 히드라지드, 카르바제이트, 세미카르바지드, 티오세미카르바지드, 티오카르바제이트, 및 아미녹시로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

이친핵성 또는 다친핵성 작용성 이당류, 삼당류, 사당류, 및 올리고당류는 친핵성 작용성 다당류, 예컨대 키틴으로부터 유래된 키토비오스로부터 유래될 수 있다. 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 이당류, 삼당류, 사당류, 및 올리고당류는 또한 둘 이상의 친핵성 작용성 기의 도입에 의해 변형된 이당류, 삼당류, 사당류, 및 올리고당류일 수 있다. 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제의 바람직한 기는 동종 또는 이종이작용성 일차 아민, 히드라진, 히드라지드, 카르바제이트, 세미카르바지드, 티오세미카르바지드, 티오카르바제이트 및 아미녹시를 포함한다.

한 바람직한 실시양태에서, 커플링 작용제는 펩티드 커플링 시약이다. 바람직한 펩티드 커플링 시약은 트리아진-기재 커플링 시약이고, 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM), 또는 NMM과 반응한 그의 전구체 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT)로 이루어지는 군을 포함한다.

본 개시물은 의약으로서 예컨대 연조직 장애 치료에 사용하기 위한 히드로겔 생성물 안에 봉입된 고체 중합체 입자의 조성물을 제공한다. 연조직 장애를 앓는 환자에게 치료적 유효량의 조성물을 투여함으로써 연조직 장애를 앓는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 또한 환자에게 치료적 유효량의 조성물을 투여함으로써 환자에게 교정적 또는 미적 치료를 제공하는 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, 방법은 0.01-5 mm, 바람직하게는 0.1-0.8 mm의 범위의 평균 크기를 가지는 조성물의 입자를 제공함으로써 조성물을 더 작은 분획으로 분할하는 것을 추가로 포함한다. 중합체 입자를 포함하는 히드로겔은 주사기에 충전 및 바늘을 통한 압출을 가능하게 하기에 충분히 작은 피스로 물리적으로 분할된다.

겔 부(part), GelP(또한 때때로 겔 함량 또는 GelC라고도 부름)는 겔 망상조직의 일부인 다당류의 백분율에 대한 기술이다. 90%라는 수치는 다당류의 10%만 망상조직의 일부가 아니라는 것을 의미한다. 최종 조성물의 물 함량은 예를 들어 98 - 80 %의 범위 내에 있고, 여기서 모든 물은 또한 히드로겔 망상조직 내에 존재해야 하고, 즉, 히드로겔상으로부터 분리된 수성 상이 존재하지 않아야 한다. 팽윤 용량(SwC), 총 액체 흡수량/다당류의 그램(겔 부에 대해 보정되지 않음)은 2-20 mL/g, 예컨대 2-10 mL/g의 범위 내이어야 한다. 최종 생성물에서 (가교된 및/또는 비가교된) 다당류 농도는 5-50 mg/mL, 예컨대 10-30 mg/mL의 범위일 수 있고, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.01-10 % , 예컨대 0.1-5%의 범위일 수 있다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 최종 가교된 다당류 농도는 10 내지 50 mg/mL, 10 내지 45 mg/mL, 10 내지 40 mg/mL, 10 내지 35 mg/mL, 10 내지 30 mg/mL, 10 내지 25 mg/mL, 10 내지 20 mg/mL, 10 내지 15 mg/mL, 15 내지 40 mg/mL, 15 내지 40 mg/mL, 15 내지 35 mg/mL, 15 내지 30 mg/mL, 15 내지 25 mg/mL, 15 내지 20 mg/mL, 20 내지 50 mg/mL, 20 내지 45 mg/mL, 20 내지 40 mg/mL, 20 내지 35 mg/mL, 20 내지 30 mg/mL, 20 내지 25 mg/mL, 25 내지 50 mg/mL, 25 내지 45 mg/mL, 25 내지 40 mg/mL, 25 내지 35 mg/mL, 25 내지 30 mg/mL, 30 내지 50 mg/mL, 30 내지 45 mg/mL, 30 내지 40 mg/mL, 30 내지 35 mg/mL, 35 내지 50 mg/mL, 35 내지 45 mg/mL, 35 내지 40 mg/mL, 40 내지 50 mg/mL, 또는 40 내지 45 mg/mL이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 최종 가교된 다당류 농도는 약 10 내지 약 50 mg/mL, 약 10 내지 약 45 mg/mL, 약 10 내지 약 40 mg/mL, 약 10 내지 약 35 mg/mL, 약 10 내지 약 30 mg/mL, 약 10 내지 약 25 mg/mL, 약 10 내지 약 20 mg/mL, 약 10 내지 약 15 mg/mL, 약 15 내지 약 40 mg/mL, 약 15 내지 약 40 mg/mL, 약 15 내지 약 35 mg/mL, 약 15 내지 약 30 mg/mL, 약 15 내지 약 25 mg/mL, 약 15 내지 약 20 mg/mL, 약 20 내지 약 50 mg/mL, 약 20 내지 약 45 mg/mL, 약 20 내지 약 40 mg/mL, 약 20 내지 약 35 mg/mL, 약 20 내지 약 30 mg/mL, 약 20 내지 약 25 mg/mL, 약 25 내지 약 50 mg/mL, 약 25 내지 약 45 mg/mL, 약 25 내지 약 40 mg/mL, 약 25 내지 약 35 mg/mL, 약 25 내지 약 30 mg/mL, 약 30 내지 약 50 mg/mL, 약 30 내지 약 45 mg/mL, 약 30 내지 약 40 mg/mL, 약 30 내지 약 35 mg/mL, 약 35 내지 약 50 mg/mL, 약 35 내지 약 45 mg/mL, 약 35 내지 약 40 mg/mL, 약 40 내지 약 50 mg/mL, 또는 약 40 내지 약 45 mg/mL이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 최종 가교된 및 비가교된 다당류 농도는 10 내지 50 mg/mL, 10 내지 45 mg/mL, 10 내지 40 mg/mL, 10 내지 35 mg/mL, 10 내지 30 mg/mL, 10 내지 25 mg/mL, 10 내지 20 mg/mL, 10 내지 15 mg/mL, 15 내지 40 mg/mL, 15 내지 40 mg/mL, 15 내지 35 mg/mL, 15 내지 30 mg/mL, 15 내지 25 mg/mL, 15 내지 20 mg/mL, 20 내지 50 mg/mL, 20 내지 45 mg/mL, 20 내지 40 mg/mL, 20 내지 35 mg/mL, 20 내지 30 mg/mL, 20 내지 25 mg/mL, 25 내지 50 mg/mL, 25 내지 45 mg/mL, 25 내지 40 mg/mL, 25 내지 35 mg/mL, 25 내지 30 mg/mL, 30 내지 50 mg/mL, 30 내지 45 mg/mL, 30 내지 40 mg/mL, 30 내지 35 mg/mL, 35 내지 50 mg/mL, 35 내지 45 mg/mL, 35 내지 40 mg/mL, 40 내지 50 mg/mL, 또는 40 내지 45 mg/mL이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 최종 가교된 및 비가교된 다당류 농도는 약 10 내지 약 50 mg/mL, 약 10 내지 약 45 mg/mL, 약 10 내지 약 40 mg/mL, 약 10 내지 약 35 mg/mL, 약 10 내지 약 30 mg/mL, 약 10 내지 약 25 mg/mL, 약 10 내지 약 20 mg/mL, 약 10 내지 약 15 mg/mL, 약 15 내지 약 40 mg/mL, 약 15 내지 약 40 mg/mL, 약 15 내지 약 35 mg/mL, 약 15 내지 약 30 mg/mL, 약 15 내지 약 25 mg/mL, 약 15 내지 약 20 mg/mL, 약 20 내지 약 50 mg/mL, 약 20 내지 약 45 mg/mL, 약 20 내지 약 40 mg/mL, 약 20 내지 약 35 mg/mL, 약 20 내지 약 30 mg/mL, 약 20 내지 약 25 mg/mL, 약 25 내지 약 50 mg/mL, 약 25 내지 약 45 mg/mL, 약 25 내지 약 40 mg/mL, 약 25 내지 약 35 mg/mL, 약 25 내지 약 30 mg/mL, 약 30 내지 약 50 mg/mL, 약 30 내지 약 45 mg/mL, 약 30 내지 약 40 mg/mL, 약 30 내지 약 35 mg/mL, 약 35 내지 약 50 mg/mL, 약 35 내지 약 45 mg/mL, 약 35 내지 약 40 mg/mL, 약 40 내지 약 50 mg/mL, 또는 약 40 내지 약 45 mg/mL이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.01% 내지 10%의 범위이다. 일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.1 내지 5%의 범위이다. 일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.01% 내지 10%, 0.05% 내지 10%, 0.1 내지 10%, 0.5% 내지 10%, 1% 내지 10%, 2% 내지 10%, 3% 내지 10%, 4% 내지 10%, 5% 내지 10%, 8% 내지 10%, 0.01% 내지 8%, 0.05% 내지 8%, 0.1 내지 8%, 0.5% 내지 8%, 1% 내지 8%, 2% 내지 8%, 3% 내지 8%, 4% 내지 8%, 5% 내지 8%, 0.01% 내지 10%, 0.05% 내지 10%, 0.1 내지 10%, 0.5% 내지 10%, 1% 내지 10%, 2% 내지 10%, 3% 내지 10%, 4% 내지 10%, 5% 내지 10%, 8% 내지 10%, 0.01% 내지 5%, 0.05% 내지 5%, 0.1 내지 5%, 0.5% 내지 5%, 1% 내지 5%, 2% 내지 5%, 3% 내지 5%, 4% 내지 5%, 0.01% 내지 4%, 0.05% 내지 4%, 0.1 내지 4%, 0.5% 내지 4%, 1% 내지 4%, 2% 내지 4%, 3% 내지 4%, 0.01% 내지 3%, 0.05% 내지 3%, 0.1 내지 3%, 0.5% 내지 3%, 1% 내지 3%, 2% 내지 3%, 0.01% 내지 2%, 0.05% 내지 2%, 0.1 내지 2%, 0.5% 내지 2%, 1% 내지 2%, 0.01% 내지 1%, 0.05% 내지 1%, 0.1 내지 1%, 0.5% 내지 1%, 0.01% 내지 0.1%, 0.05% 내지 0.1%, 또는 0.01% 내지 0.05%의 범위이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.01% 초과, 0.025% 초과, 0.05% 초과, 0.075% 초과, 0.1% 초과, 0.2% 초과, 0.3% 초과, 0.4% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.7% 초과, 0.8% 초과, 0.9% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 2.5% 초과, 3% 초과, 3.5% 초과, 4% 초과, 4.5% 초과, 5% 초과, 5.5% 초과, 6% 초과, 6.5% 초과, 7% 초과, 7.5% 초과, 8% 초과, 8.5% 초과, 9% 초과; 하지만, 10% 이하이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 약 0.01% 초과, 약 0.025% 초과, 약 0.05% 초과, 약 0.075% 초과, 약 0.1% 초과, 약 0.2% 초과, 약 0.3% 초과, 약 0.4% 초과, 약 0.5% 초과, 약 0.6% 초과, 약 0.7% 초과, 약 0.8% 초과, 약 0.9% 초과, 약 1.5% 초과, 약 2% 초과, 약 2.5% 초과, 약 3% 초과, 약 3.5% 초과, 약 4% 초과, 약 4.5% 초과, 약 5% 초과, 약 5.5% 초과, 약 6% 초과, 약 6.5% 초과, 약 7% 초과, 약 7.5% 초과, 약 8% 초과, 약 8.5% 초과, 약 9% 초과; 하지만 10% 이하이다.

일부 측면에서, 조성물은 염화나트륨을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 0.9% w/v의 염화나트륨 농도를 나타낸다. 일부 측면에서, 조성물은 리도카인이 조성물에 존재할 때 0.7%의 염화나트륨 농도를 나타낸다. 일부 측면에서, 조성물은 리도카인이 조성물에 존재하지 않을 때 0.9%의 염화나트륨 농도를 나타낸다. 일부 측면에서, 조성물은 포스페이트 완충제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약학상 허용되는 담체를 추가로 포함한다. 일부 측면에서 조성물은 염화나트륨, 포스페이트 완충제, 및 제약학상 허용되는 담체를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 포스페이트 완충제는 포스페이트 완충된 식염수(PBS)이다.

일부 측면에서, 조성물은 하나 이상의 밀도 증진 작용제를 포함한다. 일부 측면에서, 밀도 증진 작용제는 소르비톨, 만니톨, 및 프럭토스로부터 선택될 수 있다.

일부 측면에서, 조성물은 완충 작용제를 포함한다. 완충 작용제는 희석 또는 산 또는 염기의 적은 첨가의 결과로 용액이 pH 변화에 저항하는 것을 허용하기 위해 용액에 첨가되는 화학적 화합물 또는 화합물들이다. 효과적인 완충제 시스템은 큰, 대략 같은 농도의 짝산-염기 쌍(또는 완충 작용제)를 함유하는 용액을 이용한다. 본원에서 이용되는 완충 작용제는 제약학상 허용되는 임의의 그러한 화학적 화합물(들)일 수 있고, 포스페이트 및 시트레이트의 염(짝 산 및/또는 염기)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 측면에서, 완충 작용제는 포스페이트 완충된 식염수(PBS) 또는 대안적인 포스페이트 완충제를 포함한다.

히드로겔 망상조직에서 가교제의 양은 대표적으로 요망되는 생성물 특성(즉, 팽윤 용량) 및 다당류 농도에 의해 결정되고, 다당류 반복 단위의 양과 비교해서 0.1-10 mol-%, 예컨대 0.5-5 %의 범위 내이어야 한다. 히드로겔 입자의 크기는 많이 달라질 수 있고, 여기서 히드로겔 입자의 평균 크기는 대표적으로 1-1000 μm의 범위 내이고, 여기서 각 히드로겔 입자는 대표적으로 복수의 고체 입자, 즉, 둘 이상의 고체 입자를 함유한다. 유변학에 의해 결정되는 바와 같은 생성물의 탄성계수(G')는 50-5000 Pa, 예를 들어 100-2500 Pa의 범위 내이어야 한다.

일부 측면에서, 조성물을 포함하는 생성물은 치료적으로 적절한 농도의 국소 마취제를 추가로 포함할 수 있다. 국소 마취제는 가역적 국소 마취 및 통각 상실을 야기하는 약물이다. 그것이 특이적 신경 경로(신경 차단)에 사용될 때, 통각상실증(통증 감각 상실) 및 마비(근 파워(power) 상실) 같은 효과가 달성될 수 있다. 국소 마취제는 주사 절차 때문에 환자가 경험하는 통증 또는 불편을 감소시키기 위해 조성물에 첨가될 수 있다. 일부 실시양태에 따르면, 국소 마취제는 아미드 및 에스테르 유형 국소 마취제, 예를 들어 부피바카인, 부타닐리카인, 카르티카인, 신코카인(디부카인), 클리부카인, 에틸 파라피페리디노아세틸아미노벤조에이트, 에티도카인, 리그노카인(리도카인), 메피바카인, 옥세타자인, 프릴로카인, 로피바카인, 톨리카인, 트리메카인, 바도카인, 아르티카인, 레보부피바카인, 아밀로카인, 코카인, 프로파노카인, 클로르메카인, 시클로메티카인, 프록시메타카인, 아메토카인(테트라카인), 벤조카인, 부타카인, 부톡시카인, 부틸 아미노벤조에이트, 클로로프로카인, 디메토카인(라로카인), 옥시부프로카인, 피페로카인, 파레톡시카인, 프로카인(노보카인), 프로폭시카인, 트리카인 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

일부 측면에서, 국소 마취제는 리도카인이다. 리도카인은 잘 알려진 물질이고, 주사가능한 제제, 예컨대 히알루론산 조성물에서 국소 마취제로서 광범위하게 사용되어 왔다. 아미드 또는 에스테르 국소 마취제의 농도는 숙련된 자에게는 각각의 특이적 국소 마취제 또는 그의 조합의 치료적으로 적절한 농도 범위 내일 수 있다. 실시양태에 의해 선택된 일부에서, 상기 국소 마취제의 농도는 0.1 내지 30 mg/ml의 범위 내이다.

일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 1 내지 5 mg/mL이다. 일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 약 1 내지 약 5 mg/mL이다. 일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 2 내지 4 mg/mL이다. 일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 약 2 내지 약 4 mg/mL이다. 일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 1.5 mg/mL, 2 mg/mL, 2.5 mg/mL, 3 mg/mL, 3.5 mg/mL, 4 mg/mL, 4.5 mg/mL, 또는 5 mg/mL이다. 일부 측면에서, 조성물에서 국소 마취제의 농도는 약 0.5 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 4 mg/mL, 약 4.5 mg/mL, 또는 약 5 mg/mL이다.

일부 측면에서, 조성물은 무균성이다. 일부 측면에서, 조성물은 멸균성이다. 일부 측면에서, 조성물은 여과 멸균, 열 멸균, 또는 조사 멸균을 통해 멸균된다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 방법은 예를 들어 오토클레이빙, 즉, 포화 증기를 사용한 멸균에 의한 생성물의 멸균을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서는 히드로겔 생성물에 오토클레이빙에 의한 멸균이 수행되었다. 오토클레이빙은 F₀-값 > 4에서 수행될 수 있다. 오토클레이빙은 바람직하게는 10 내지 50의 범위의 F₀-값에서 수행될 수 있다. 포화 증기 멸균 공정의 F₀ 값은 Z-값 10을 가지는 미생물에 관하여 최종 컨테이너에서 생성물에 공정에 의해 전달되는 121℃의 온도에서 등가 시간으로 분으로 표현되는 치사율이다.

일부 측면에서, 조성물의 성분은 전제 조성물을 혼합하거나 또는 형성하기 전에 멸균되고, 따라서 결과적으로 조성물을 형성하기 전에 멸균된 둘 이상의 성분을 포함하는 조성물을 초래한다.

일부 측면에서, 조성물 또는 생성물은 사전충전된 주사기, 즉, 주사가능한 조성물로 사전충전되고 오토클레이빙된 주사기의 형태로 제공될 수 있다. 일부 측면에서, 조성물 또는 생성물은 사전충전된 바이알의 형태로 제공될 수 있다.

일부 측면에서, 조성물은 주사가능하다. 일부 측면에서, 주사가능한 조성물은 주사가능한 임플란트이다. 일부 측면에서, 개시물은 본원에 개시된 조성물 중 임의의 하나를 포함하는 주사가능한 임플란트에 관한 것이다. 일부 측면에서, 주사가능한 임플란트는 진피하, 진피내, 피하, 근육내, 근육하, 잇몸내 주사를 위한 것이다.

일부 측면에서 조성물은 생체흡수성이다. 일부 측면에서, 히드로겔은 생체흡수성이다. 일부 측면에서, 조성물은 약 1 년 내지 약 3 년의 기간 내에 생체흡수된다. 일부 측면에서, 조성물은 1 년 내지 3 년의 기간 내에 생체흡수된다. 일부 측면에서, 히드로겔은 약 1 년 내지 약 3 년의 기간 내에 생체흡수된다. 일부 측면에서, 히드로겔은 1 년 내지 3 년의 기간 내에 생체흡수된다.

일부 측면에서, 키트는 본원에 개시된 조성물 중 임의의 하나를 포함하는 사전충전된 주사기를 포함한다. 일부 측면에서, 키트는 본원에 개시된 조성물 중 임의의 하나를 포함하는 사전충전된 바이알, 주사기, 및 하나 이상의 피하주사용 바늘을 포함한다. 일부 측면에서, 키트는 주사 부위에 투여하기 위한 항미생물 조성물을 포함한다.

일부 측면에서, 본원에 기술된 방법을 실시하는 데 사용하기 위한 키트가 고려된다. 일부 측면에서, 키트는 모든 용액, 완충제, 화합물, 용기, 및/또는 본원에 기술된 방법을 수행하는 데 충분한 설명서를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "대조군"은 비교 목적의 실험에 사용되는 대안적 샘플이다. 대조군은 "양성" 또는 "음성"일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이 "대조 샘플" 또는 "참조 샘플"은 실험 샘플과 비교하기 위한 대조군으로서 작용하는 샘플 또는 참조물을 지칭한다. 예를 들어, 실험 샘플은 바이알에 화합물 A, B, 및 C를 포함하고, 대조군은 실험 샘플과 동일하게 처리되지만 화합물 A, B 또는 C 중 하나 이상이 결여된 동일한 유형의 샘플일 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 요망되는 치료적 및/또는 예방적 효과를 달성하는 데 충분한 양, 예를 들어, 하나 이상의 성과의 방지, 또는 하나 이상의 성과의 증가를 초래하는 양을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "개인", "환자", 또는 "대상체"는 개별 유기체, 척추동물, 포유동물, 또는 사람일 수 있다. 바람직한 측면에서, 개인, 환자, 또는 대상체는 사람이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "연조직"은 신체의 다른 구조 및 기관을 연결하거나, 지지하거나 또는 둘러싸는 조직을 지칭한다. 연조직은 근육, 섬유 조직, 및 지방을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "연조직 증강"은 연조직의 임의의 유형의 부피 증강을 지칭하고, 얼굴 윤곽성형(예를 들어, 더 확연한 볼, 턱, 또는 입술), 오목한 기형(예를 들어, 외상후 또는 HIV-연관 지방이상증)의 교정, 및 깊은 나이-관련 얼굴 접힘주름(fold)의 교정을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 연조직 증강은 미용적 목적으로 또는 의학적 목적으로, 예컨대 외상 또는 퇴행성 질환 후의 의학적 목적으로 사용될 수 있다. 연조직 증강은 추가로 진피 충전, 신체 윤곽성형, 및 잇몸 충전을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "비동물 기원"은 동물을 배제한 원천을 지칭하지만, 효모, 세균 또는 합성 원천 같은 원천을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생체흡수성"은 분해 사건 또는 사건들을 지칭하고 - 생체흡수성 물질은 용해될 수 있거나, 식균될 수 있거나, 또는 단순히 어느 기간에 걸쳐 분해될 수 있고, 이렇게 해서 물질이 어느 기간에 걸쳐 신체, 기관, 조직, 부위 또는 세포로부터 제거된다. 물질 또는 그의 분해 생성물은 대사작용될 수 있거나, 다른 분자 또는 화합물 내로 혼입될 수 있거나, 또는 분비될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "무균성"은 병원성 미생물이 없거나 또는 병원성 미생물을 없앤 것을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "멸균성"은 살아있는 유기체가 없는, 일반적으로 살아있는 미생물이 없는 것을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "주사가능한"은 본 개시물의 조성물을 바늘을 통해 주사하는 능력을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "수용성 다당류"는 수용성이고 카르복실기(카르복실산)을 함유하는 다당류를 지칭한다. 다당류 분자의 카르복실기는 다당류를 겔 입자의 히드로겔 내로 가교하는 데 사용될 수 있다. 이들 수용성 다당류 또는 수용성 다당류 분자는 예를 들어 글리코사미노글리칸 분자 (GAG), 예컨대 히알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 및 더마탄 설페이트, 또는 그의 혼합물, 바람직하게는 히알루론산일 수 있다. 평균 다당류 분자량은 1-10,000 kDa, 예컨대 10-5,000 kDa, 바람직하게는 200 kDa - 3,000 kDa의 범위에서 선택될 수 있다.

다르게 제공되지 않는다면, 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "히알루론산"은 다양한 사슬 길이 및 전하 상태의 뿐만 아니라 가교를 포함한 다양한 화학적 변형을 갖는 히알루론산, 히알루로네이트 또는 히알루로난의 모든 변이체 및 변이체들의 조합을 포함한다. 즉, 그 용어는 또한 히알루론산과 다양한 반대 이온의 다양한 히알루로네이트 염, 예컨대 히알루론산나트륨을 포함한다. 또한 그 용어는 히알루론산의 다양한 변형, 예컨대 산화, 예를 들어 -CH2OH 기의 -CHO 및/또는 - COOH로의 산화; 이웃자리 히드록실기의 퍼아이오데이트 산화, 임의로 그 다음에 환원, 예를 들어 -CHO의 -CH2OH로의 환원 또는 아민과의 커플링으로 이민 형성 후 이차 아민으로의 환원; 설페이트화; 탈아미드화, 임의로 그 다음에 탈아민화 또는 새로운 산과의 아미드 형성; 에스테르화; 가교; 예를 들어 가교 작용제 또는 카르보디이미드 지원 커플링을 사용하여 다양한 화합물로 치환; 상이한 분자, 예컨대 단백질, 펩티드 및 활성 약물 성분과 히알루론산의 커플링 포함; 및 탈아세틸화를 포함한다. 변형의 다른 예는 이소우레아, 히드라지드, 브로모시안, 모노에폭시드 및 모노설폰 커플링이다. 히알루론산은 동물 및 비동물 기원의 다양한 원천으로부터 얻을 수 있다. 비동물 기원의 원천은 효모 및 바람직하게는 세균을 포함한다. 단일 히알루론산 분자의 분자량은 대표적으로 0.1-10 MDa의 범위이지만, 다른 분자량이 가능하다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "고체 중합체 입자"는 생체적합성이고 (비정질 또는 반결정질)이고 전체 제조 공정 동안에 고체로 남고 물에서 불용성인 임의의 중합체 중에서 선택되는 또는 그것으로 제조되는 고체 입자를 지칭한다. 고체 중합체 입자는 고체 합성 지방족 폴리에스테르 입자 또는 동일 물질의 공중합체일 수 있고, 바람직하게는 폴리락트산(PLA), 폴리카프로락톤(PCL), 폴리글리콜산(PGA) 또는 동일 물질의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 폴리-L-락트산(PLLA)이다. 고체 중합체 입자는 대표적으로 생체분해성이고, 산성 또는 염기성 pH에서 분해되기 쉽고, 예컨대 PLA, PLLA, PCL, 또는 PGA이다. 고체 중합체 입자는 또한 무기 본성을 가질 수 있거나, 예를 들어 인산칼슘일 수 있거나, 또는 각각 상이한 중합체로 만들어진 입자들의 혼합물일 수 있다. 일부 측면에서, 고체 중합체 입자는 각각이 상이한 중합체를 포함하는 것인 두 상이한 고체 중합체 입자의 혼합물 - 제1 고체 중합체 입자 및 제2 고체 중합체 입자를 포함하는 혼합물을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 고체 중합체 입자는 각각이 상이한 중합체를 포함하는 것인 세 상이한 고체 중합체 입자의 혼합물 - 제1 고체 중합체 입자, 제2 고체 중합체 입자, 및 제3 중합체 입자를 포함하는 혼합물을 포함할 수 있다. 입자는 또한 미소구라고도 불릴 수 있고, 그의 형상은 둘 모두 불규칙형또는 확정형, 예컨대 원통형 또는 구형일 수 있고, 둘 모두 다공성 또는 비다공성일 수 있다.

일부 측면에서, 고체 중합체 입자의 평균 크기는 직경이 0.5-100 μm, 예컨대 5-100 μm의 범위이다. 일부 측면에서, 고체 중합체 입자의 평균 크기는 0.5 내지 100 μm, 1 내지 100 μm, 5 내지 100 μm, 10 내지 100 μm, 25 내지 100 μm, 50 내지 100 μm, 0.5 내지 50 μm, 1 내지 50 μm, 5 내지 50 μm, 10 내지 50 μm, 25 내지 50 μm, 0.5 내지 25 μm, 1 to 25 μm, 5 내지 25 μm, 10 내지 25 μm, 0.5 내지 10 μm, 1 내지 10 μm, 5 내지 10 μm, 0.5 내지 5 μm, 또는 1 내지 5 μm의 범위이다.

일부 측면에서, 고체 중합체 입자의 평균 크기는 약 0.5 내지 약 100 μm, 약 1 내지 약 100 μm, 약 5 내지 약 100 μm, 약 10 내지 약 100 μm, 약 25 내지 약 100 μm, 약 50 내지 약 100 μm, 약 0.5 내지 약 50 μm, 약 1 내지 약 50 μm, 약 5 내지 약 50 μm, 약 10 내지 약 50 μm, 약 25 내지 약 50 μm, 약 0.5 내지 약 25 μm, 약 1 내지 약 25 μm, 약 5 내지 약 25 μm, 약 10 내지 약 25 μm, 약 0.5 내지 약 10 μm, 약 1 내지 약 10 μm, 약 5 내지 약 10 μm, 약 0.5 내지 약 5 μm, 또는 약 1 내지 약 5 μm의 범위이다.

일부 측면에서, 수용성 다당류 분자, 고체 입자, 및 결과적인 최종 조성물은 바람직하게는 모두 생체적합성이다. 이것은 치료받는 개인에서 면역 반응이 일어나지 않거나 또는 매우 온화하게만 일어난다는 것, 즉, 치료받는 개인에서 바람직하지 않은 국소 또는 전신 효과가 일어나지 않거나 또는 매우 온화하게만 일어난다는 것을 암시한다. 최종 조성물의 성분 및 최종 조성물은 또한 생체흡수성이며, 성분들이 생체분해성이라는 것을 의미한다. 일단 주사되면, 생체적합성 충전제는 잠시 동안 그의 기계적 특성을 유지해야 하며, 그 다음에 신체에 흡수되어야 하고, 따라서 흔적을 남기지 않아야 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "가교"는 마크로분자에 적어도 4개 사슬이 나오는 작은 영역의 형성을 초래하는 존재하는 마크로분자 상의 부위 또는 기를 관련시키는 반응 또는 존재하는 마크로분자들 사이의 상호작용을 지칭한다. 선형 마크로분자의 반응성 사슬 말단과 또 다른 선형 마크로분자의 내부 반응성 부위의 반응은 분기점 또는 그래프트 형성을 초래하지만, 가교 반응으로 간주되지 않는다.

일부 측면에서, 다당류의 가교는 가교 작용제를 이용한 변형에 의해 달성될 수 있다. 일부 측면에서, 다당류의 가교는 다당류 분자의 아미드 커플링에 의해 달성된다. 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제를 커플링 작용제와 함께 사용하는 아미드 커플링은 히드로겔 생성물에 유용한 가교된 다당류 분자의 조제에 이르는 관심을 끄는 경로이다. 따라서, 다당류의 가교는 커플링 작용제의 사용을 포함하는 반응에 의해 다당류 분자의 카르복실산기와 직접적으로 공유 결합을 형성할 수 있는 적어도 두 친핵성 작용성 기, 예를 들어 아민기를 포함하는 가교제를 사용하여 수성 매질에서 달성될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "가교제"는 물에서 용해성이고 안정한 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 분자를 지칭한다. 본원에 기술된 히드로겔 생성물의 조성물을 조제하는 본 발명의 방법과 관련해서, 용어 "가교제"는 비반응성 스페이서기, 예컨대 이당류, 삼당류, 사당류 또는 올리고당류에 부착될 수 있는 둘 이상의 작용성 기, 특히 친핵성 작용성 기를 가지는 분자를 지칭할 수 있고, 비스아미노 작용성화된 알칸, 에틸렌 옥사이드 올리고머 및 중합체, 및 카르복시하이드레이트를 포함한다. 둘 이상의 작용성 기 각각이 수용성 다당류 분자 상의 카르복실산기와 반응하여 안정한 공유 결합을 형성할 수 있다.

일부 측면에서, 가교제는 둘 이상의 작용성 기 및 스페이서로 이루어진다. 가교는 비탄수화물 기재 이친핵성 또는 다친핵성 가교제, 예를 들어 헥사메틸렌디아민(HMDA), 또는 탄수화물 기재 이친핵성 또는 다친핵성 가교제, 예를 들어 디아미노트레할로스(DATH)를 글리코사미노글리칸과 함께 사용해서 달성될 수 있다. 가교는 또한 적어도 부분적으로 탈아세틸화된 글리코사미노글리칸을 단독으로 또는 제2 글리코사미노글리칸과 조합해서 사용하여 달성될 수 있고, 이렇게 함으로써 탈아세틸화된 글리코사미노글리칸 그 자체가 이친핵성 또는 다친핵성 가교제로서 작용한다. 사용되는 가교제는 대표적으로 디아미노 구조/유도체를 포함하고, 예를 들어 둘 이상의 일차 아민을 포함하고, 카르복실기가 없다. 디아미노 구조는 지방족/방향족 디아미노 구조, 펩티드 구조, 예컨대 리신, 또는 디아미노 탄수화물일 수 있고, 이것은 디아미노 트레할로스, 디아미노 히알루론산 사당류, 디아미노 히알루론산 육당류, 디아미노 락토스, 디아미노 말토스, 디아미노 수크로스, 키토비오스, 및 디아미노 라피노스를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.

개시된 히드로겔 생성물을 포함하는 조성물과 관련해서 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "가교구조"는 가교 후에 수용성 다당류 분자가 공유 연결되는 가교제의 부분 또는 잔기를 지칭한다. 가교구조는 대표적으로 i) 스페이서기 및 ii) 가교제의 작용성 기와 수용성 다당류 상의 카르복실산기의 반응시에 형성되는 결합기로 이루어진다. 스페이서기는 예를 들어 히알루론산 사당류, 히알루론산 육당류, 트레할로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 셀로비오스 또는 라피노스 잔기로 구성될 수 있다. 가교된 수용성 다당류는 수용성 다당류 분자 사슬 사이에 가교구조를 포함하고, 이것은 공유 가교구조에 의해 함께 단결된 수용성 다당류 분자의 연속 망상조직을 생성한다.

일부 측면에서는, 가교제 그 자체가 예를 들어 히알루론산과 상관있는 구조(예를 들어, 디아미노 히알루론산 사당류)와 가교할 때 또는 높은 물 보유 특성을 갖는 구조(예를 들어, 트레할로스)와 가교할 때 히드로겔의 유지된 또는 증가된 특성에 기여한다.

일부 측면에서, 수용성 다당류, 예컨대 GAG는 공유 가교된다. 일부 측면에서, 공유 가교된 수용성 다당류 분자는 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체로 이루어지거나, 또는 그것으로 본질적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 가교된 수용성 다당류 또는 히드로겔은 합성 비탄수화물 구조 또는 링커가 없거나, 또는 본질적으로 없다. 이것은 수용성 다당류를 그의 본래 상태로 탄수화물 유형 구조 또는 그의 유도체를 포함하거나, 그것으로 이루어지거나, 또는 그것으로 본질적으로 이루어지는 가교제와 함께 사용함으로써 달성될 수 있다. 일부 측면에서, 가교제의 작용성 기는 수용성 다당류의 카르복실기에 직접적으로 공유 결합된다. 일부 측면에서, 공유 가교된 수용성 다당류의 가교구조는 이당류, 삼당류, 사당류 및 올리고당류 스페이서기를 포함하거나, 그것으로 이루어지거나 또는 그것으로 본질적으로 이루어진다.

일부 측면에서, 가교된 수용성 다당류는 수용성 다당류 분자 사슬 사이에 가교구조를 포함하고, 이는 공유 가교구조에 의해 함께 단결된 수용성 다당류 분자의 연속 망상조직을 생성한다.

일부 측면에서, 가교된 수용성 다당류는 액체, 대표적으로 수성 액체 중에 있을 때 겔 또는 히드로겔 - 수용성 다당류의 수불용성, 하지만 실질적으로 묽은 가교된 시스템을 형성한다.

따라서 히드로겔 생성물은 주사가능한 히드로겔 조성물일 수 있다. 용어 "주사가능한"은 조성물이 예를 들어 대상체 또는 환자의 연조직, 예컨대 피부 내에 비경구 주사에 적합한 형태로 제공된다는 것을 의미한다.

일부 측면에서, 수용성 다당류, 예컨대 GAG는 50 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 400 kDa, 500 kDa, 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 1000 kDa, 1100 kDa, 1200 kDa, 1300 kDa, 1400 kDa, 1500 kDa, 1600 kDa, 1700 kDa, 1800 kDa, 1900 kDa, 2000 kDa, 2500 kDa, 3000 kDa, 3500 kDa, 4000 kDa, 4500 kDa, 5000 kDa, 5500 kDa, 6000 kDa, 6500 kDa, 7000 kDa, 7500 kDa, 8000 kDa, 8500 kDa, 9000 kDa, 9500 kDa, 또는 10000 kDa의 분자량을 가진다.

일부 측면에서, 수용성 다당류는 약 50 kDa, 약 100 kDa, 약 200 kDa, 약 300 kDa, 약 400 kDa, 약 500 kDa, 약 600 kDa, 약 700 kDa, 약 800 kDa, 약 900 kDa, 약 1000 kDa, 약 1100 kDa, 약 1200 kDa, 약 1300 kDa, 약 1400 kDa, 약 1500 kDa, 약 1600 kDa, 약 1700 kDa, 약 1800 kDa, 약 1900 kDa, 약 2000 kDa, 약 2500 kDa, 약 3000 kDa, 약 3500 kDa, 약 4000 kDa, 약 4500 kDa, 약 5000 kDa, 약 5500 kDa, 약 6000 kDa, 약 6500 kDa, 약 7000 kDa, 약 7500 kDa, 약 8000 kDa, 약 8500 kDa, 약 9000 kDa, 약 9500 kDa, 또는 약 10000 kDa의 분자량을 가진다.

아미드 결합에 의해 가교된 히드로겔은 겔의 가교구조 중 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 99%가 아미드 결합이도록 가교될 수 있다. 일부 측면에서, 겔 중의 가교구조의 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 아미드 결합이다.

한 예로서, 가교제는 디아미노트레할로스(DATH)일 수 있다. 디아미노트레할로스(DATH)는 "Synthetic Carbohydrate Polymers Containing Trehalose Residues in the Main Chain: Preparation and Characteristic Properties"; Keisuke Kurita,* Naoko Masuda, Sadafumi Aibe, Kaori Murakami, Shigeru Ishii, and Shin-Ichiro Nishimurat; Macromolecules 1994, 27, 7544-7549에 기술된 바와 같이 합성될 수 있다. 일부 측면에서, DATH는 유리하게 커플링 작용제인 DMTMM과 함께 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "봉입된" 또는 "봉매된"은 상호교환가능하게 사용된다. 봉입된 입자는 가교된 다당류 분자에 의해 둘러싸인, 대표적으로 히드로겔의 가교된 다당류 분자의 겔 입자 내에 봉입된/봉매된 입자를 기술하는 것을 의도한다. 예를 들어 도 7 및 도 8에서 보는 바와 같이, 고체 중합체 입자는 수용성 다당류 히드로겔의 가교 동안에 존재하기 때문에 히드로겔 내에, 예컨대 히드로겔의 겔 입자 내에 봉매된다. 선행 기술에 기술된 엔탱글먼트와 비교해서, 봉입/봉매는 일단 겔이 형성되면 비가역성이다(겔 분해시 입자가 방출될 것이다) .

숙련된 전문가는 본 개시물의 봉매된 또는 봉입된 고체 입자가 GAG 또는 다른 수용성 다당류로 코팅되는 것만은 아니고, 그 다음에 가교된다는 것을 인지한다. 히드로겔은 중량 기준으로 반드시 본원에 기술된 생성물의 주성분이다. 일부 측면에서 최종 생성물에서 히드로겔은 중량 기준으로 50% 초과이다. 일부 측면에서, 최종 생성물에서 히드로겔은 중량 기준으로 50% 이상이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 히드로겔은 중량 기준으로 15% 초과, 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 35% 초과, 40% 초과, 45% 초과, 50% 초과, 55% 초과, 60% 초과, 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 또는 99% 초과이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 히드로겔은 중량 기준으로 약 15% 초과, 약 20% 초과, 약 25% 초과, 약 30% 초과, 약 35% 초과, 약 40% 초과, 약 45% 초과, 약 50% 초과, 약 55% 초과, 약 60% 초과, 약 65% 초과, 약 70% 초과, 약 75% 초과, 약 80% 초과, 약 85% 초과, 약 90% 초과, 약 91% 초과, 약 92% 초과, 약 93% 초과, 약 94% 초과, 약 95% 초과, 약 96% 초과, 약 97% 초과, 약 98% 초과, 또는 약 99% 초과이다.

일부 측면에서, 최종 생성물에서 고체 입자의 양은 중량 기준으로 0.01% 초과, 0.025% 초과, 0.05% 초과, 0.075% 초과, 0.1% 초과, 0.2% 초과, 0.3% 초과, 0.4% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.7% 초과, 0.8% 초과, 0.9% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 2.5% 초과, 3% 초과, 3.5% 초과, 4% 초과, 4.5% 초과, 5% 초과, 5.5% 초과, 6% 초과, 6.5% 초과, 7% 초과, 7.5% 초과, 8% 초과, 8.5% 초과, 9% 초과이지만; 10% 이하이다.

개시물의 일부 측면에서, 본원에 기술된 방법들에 의해 얻을 수 있는 히드로겔 생성물이 제공된다. 히드로겔 생성물은 멸균된 주사가능한 히드로겔 조성물, 예컨대 사전충전된 주사기, 즉, 주사가능한 히드로겔 조성물로 사전충전되고 오토클레이빙된 주사기의 형태로 제공되는 멸균된 주사가능한 히드로겔 조성물일 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "커플링 작용제"는 수용성 다당류의 카르복실기를 활성화하여 그것이 가교제와 결합, 바람직하게는 아미드 결합을 형성할 수 있도록 하는 펩티드 커플링 작용제를 지칭한다. 일부 측면에서, 커플링 작용제는 트리아진-기재 커플링 시약/작용제, 예컨대 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM)이다. 또한, DMTMM의 전구체인 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT)은 아미드 커플링에 사용될 수 있다. CDMT는 N-메틸모르폴린(NMM)과 반응하여 DMTMM을 형성할 수 있다. 또 다른 바람직한 커플링 작용제는 카르보디이미드 커플링 작용제, 바람직하게는 N-히드록시숙신이미드(NHS)와 조합된 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드(EDC)이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "그래프팅 작용제"는 고체 입자의 표면 상에 로딩되어 입자의 표면을 활성화하는, 즉 입자가 수용성 다당류 백본에 결합하게(그래프팅되게) 하는 분자이다. 이 그래프팅 작용제는 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 분자, 예컨대 본 개시물의 위에서 기술된 가교제일 수 있고, 예를 들어 자유 아민 표면을 가질 수 있고, 여기서 고체 입자는 그래프팅 작용제를 통해 아미드 결합에 의해 다당류 분자에 그래프팅될 수 있고, 따라서 이것이 링커 분자로서 작용한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "그래프팅"은 하나 이상의 종이 마크로분자의 주사슬에 주사슬에서의 구성적 또는 배치적 특징과 상이한 구성적 또는 배치적 특징을 가지는 측사슬로서 연결되는 반응을 지칭한다. 현 개시물에서 "에 그래프팅되는" 또는 "상에 그래프팅되는"에서처럼 용어 "그래프팅되는"은 수용성 다당류 분자와 고체 입자 사이에 결합이 형성된다는 것을 의도한다. 이 결합은 특히 혼합/가교 단계 전에 고체 입자의 표면의 사전활성화/사전로딩 때문에 형성된다. 일부 결합은 비변형된 고체 입자 상의 천연 발생 카르복실기, 예컨대 PLLA 입자 상의 카르복실기 때문에 형성될 수 있지만, 이것들이 너무 적어서 비변형된 입자가 비그래프팅된 것으로 여긴다. 다당류 분자에 고체 입자의 그래프팅은 다당류 분자의 가교와 거의 동시에 일어난다. 따라서, 예를 들어 그래프팅 작용제를 사용하는 사전활성화 단계를 이용한 경우, 고체 입자가 그래프팅될 뿐만 아니라 최종 조성물 내에 봉입된다. 입자/분자의 표면을 "활성화한다"는 용어는 예를 들어 접촉시 다른 성분들과 반응하는 기를 첨가하거나 또는 노출함으로써 표면을 반응성이게 한다는 것임을 의도한다.

일부 측면에서, 충전제는 다양한 의학적 또는 미용적 치료에 예컨대 회춘 치료를 위한 주사가능한 진피 충전제에 사용된다. 그러나, 충전제가 시간이 지남에 따라 분해하기 때문에 결과를 유지하기 위해서는 이들 주사를 반복해야 한다. 따라서, 치료의 결과를 연장하기 위해, 주사 후 충전제의 분해를 지연하는 것이 필요하다.

고체 입자를 포함하는 히드로겔 제조 방법

제안된 방법은 도 5 및 도 6과 관련해서 더 상세히 추가로 기술된다. 도 5 및 도 6이 실선 경계로 도시된 일부 작업 및 모듈, 및 점선 경계로 도시된 일부 작업 및 모듈을 포함한다는 것을 인식해야 한다. 실선 경계로 도시된 작업 및 모듈은 가장 넓은 실시양태에 포함되는 작업이다. 점선 경계로 도시된 작업 및 모듈은 포함될 수 있거나 또는 일부일 수 있는 예시 실시양태이거나, 또는 더 넓은 예시 실시양태의 작업 및 모듈 외에도 추가로 취할 수 있는 추가의 실시양태이다. 작업들을 순서대로 수행해야 할 필요는 없고, 따라서 단계적 공정이 요구되지 않는다는 것을 인식해야 한다. 게다가, 작업을 전부 수행할 필요는 없다는 것을 인식해야 한다.

도 5는 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물의 제조 방법을 도시하고, 방법은 1 개 이상의 카르복실기를 포함하는 수용성 다당류 분자, 수불용성 고체 입자, 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 커플링 작용제를 제공하는 단계 S0를 포함하고, 일부 실시양태에서, 방법은 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 단계 S1을 추가로 포함하고, 여기서 사전활성화된 표면은 후속 혼합 단계에서 고체 입자가 다당류 분자에 그래프팅되는 것을 허용한다. 일부 실시양태에서 표면을 사전활성화하는 단계 S1a는 고체 입자의 표면에 카르복실기를 사전로딩하는 것을 포함하고, 여기서 입자는 아미드 결합을 통해 수용성 다당류 분자에 그래프팅된다. 이것은 예를 들어 카르복실기를 예를 들어 무수말레산을 사용하여 첨가함으로써, 또는 표면 상의 카르복실기를 유리하는 가수분해에 의해서 수행될 수 있다.

다른 실시양태에서, 표면을 사전활성화하는 S1b는 고체 입자의 표면에 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 그래프팅 작용제를 사전로딩하는 것을 포함하고, 여기서 고체 입자는 그래프팅 작용제와 다당류 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅된다. 그래프팅 작용제는 예를 들어 2-단계 공정을 사용하여 첨가될 수 있고, 여기서는 먼저 카르복실기를 예를 들어 S1a에서처럼 무수말레산을 사용하여 활성화하고, 그 다음에 그래프팅 작용제를 사용하여 가수분해하여 그래프팅 작용제로 코팅된 고체 입자를 형성한다.

방법은 다당류 분자, 사전처리된 또는 비처리된 고체 입자, 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 커플링 작용제를 실질적으로 중성 pH, 즉 pH 5 내지 9의 물 현탁액에서 혼합하고, 이렇게 함으로써 다당류 분자를 커플링 작용제로 활성화하고, 활성화된 다당류 분자를 가교하고, 고체 입자를 봉입하여 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물을 형성하는 단계 S2를 추가로 포함한다. 따라서, 다당류 분자와 커플링 작용제를 혼합하는 것은 다당류 분자를 활성화하고, 그 다음에 이것은 가교제를 사용하여 가교하여 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 형성할 수 있다. 고체 입자가 존재하게 함으로써, 이것은 히드로겔의 형성된 겔 입자 내에 봉입된다. 제조 방법, 즉 혼합 및 후속하는 가교/봉입 공정은 단일 반응 용기에서 단일 포트 공정으로서 수행될 수 있다.

방법은 형성된 조성물을 바늘을 통한 주사에 적합한 더 작은 분획으로 분할하는 단계 S3를 추가로 포함한다. 이것은 관련 분야에 알려진 임의의 적합한 방법을 사용하여, 예를 들어 형성된 조성물을 정해진 크기의 스틸 메쉬를 통해 통과시킴으로써 수행될 수 있거나, 또는 조성물을 블렌더에서 슬라이싱할 수 있다. 또 다른 선택은 혼합 단계 동안에 조성물을 교반하기 위한 날카로운 블레이드를 첨가하는 것이고, 이 경우에서는 단계 S2 및 S3이 동시에 수행될 것이다.

방법은 국소 마취제를 조성물에 첨가하는 단계 S4 및 조성물을 예를 들어 열 멸균, 예컨대 오토클레이빙을 사용하여 멸균하는 단계 S5를 추가로 포함한다.

방법에서 사용되는 수용성 다당류 분자는 글리코사미노글리칸 분자, 예컨대 히알루론산, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 혼합물, 바람직하게는 히알루론산일 수 있다.

이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제는 디아미노 유도체를 포함할 수 있고, 여기서 디아미노 유도체는 지방족 또는 방향족 디아미노 유도체, 또는 펩티드 또는 펩티드 서열, 예컨대 리신, 또는 디아미노 탄수화물이고, 바람직하게는 디아미노 트레할로스, 디아미노 히알루론산 사당류, 디아미노 히알루론산 육당류, 디아미노 락토스, 디아미노 말토스, 디아미노 수크로스, 키토비오스, 디아미노 라피노스, 리신, 디아미노 펩티드, 또는 디아미노 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 디아미노 트레할로스, DATH이다.

방법에서 사용되는 커플링 작용제는 트리아진-기재 커플링 작용제, 예컨대 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM) 또는 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT), 바람직하게는 DMTMM일 수 있다.

방법에서 사용되는 고체 입자는 고체 중합체 입자, 예컨대 고체 합성 지방족 폴리에스테르 입자 또는 그의 공중합체일 수 있고, 바람직하게는 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리콜산 또는 그의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 폴리-L-락트산, PLLA일 수 있다.

조성물로부터 얻은 생성물에 사용되는 국소 마취제는 아미드 및 에스테르 유형 국소 마취제, 예컨대 부피바카인, 부타닐리카인, 카르티카인, 신코카인(디부카인), 클리부카인, 에틸 파라피페리디노아세틸아미노벤조에이트, 에티도카인, 리그노카인(리도카인), 메피바카인, 옥세타자인, 프릴로카인, 로피바카인, 톨리카인, 트리메카인, 바도카인, 아르티카인, 레보부피바카인, 아밀로카인, 코카인, 프로파노카인, 클로르메카인, 시클로메티카인, 프록시메타카인, 아메토카인(테트라카인), 벤조카인, 부타카인, 부톡시카인, 부틸 아미노벤조에이트, 클로로프로카인, 디메토카인(라로카인), 옥시부프로카인, 피페로카인, 파레톡시카인, 프로카인(노보카인), 프로폭시카인, 트리카인 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 마취제, 바람직하게는 리도카인일 수 있다.

도 6은 본 개시물의 조성물을 포함하는 생성물의 제조 방법을 도시한다. 방법은 가교하는 단계 S10을 포함하고, 여기서는 성분들을 가교가 일어나도록 혼합하며, 온도 5-50 ℃, 시간 4-48 h, pH 5-9의 조건 하에서 및 교반 하에 또는 교반 없이 원료 물질: 다당류, 가교제 (카르복실산에 대해 0.5-5 mol-%), 커플링 시약 (카르복실산에 대해 0.5-50 mol-%), 고체 중합체 입자(최종 생성물에서 0.01-10 중량-%에 이르는 양), 및 물 또는 수성 용매(완충제)의 투입을 포함하고, 방법은 형상화하는 단계 S11, 즉, 겔 벌크를 하나 이상의 메쉬(기공 크기 0.1-5 mm)를 통해 및 하나 초과의 메쉬의 경우, 최대 크기에서 시작해서 점차 크기를 감소시켜 최소 크기로 끝나게 겔 벌크를 통과시킴으로써, 또는 가교 단계에서 또는 가교 단계 후에 블렌더에서 벌크를 혼합함으로써 겔을 분할하는 단계를 추가로 포함한다.

방법은 에탄올에서 침전 후에 공기 또는 진공에서 건조에 의해, 또는 투석에 의해 정제하는 단계 S12를 추가로 포함한다. 정제는 불순물 프로파일이 충분히 낮으면 필요하지 않다. 방법은 겔 농도 및 pH를 조정하는 단계 S13a 및 국소 마취제를 첨가하는 단계 S13b를 추가로 포함하고, 조건: 시간 2-48 h, 온도 10-80 ℃, pH 6-8 하에서 5-50 mg/mL의 다당류 농도 및 0.01-10 중량-%의 고체 중합체 입자 양 및 1-5 mg/mL의 마취제 농도를 얻도록 물 또는 완충제(S13a) (임의적임, 필요한 경우) 및 마취제(S13b), 예컨대 리도카인의 첨가에 의한다. 방법은 주사기에 조성물을 충전하는 단계 S14을 추가로 포함하고, 이는 수동으로 또는 자동으로 수행된다. 방법은 생성물(조성물을 포함하는 주사기)을 예를 들어 열, 예컨대 증기에 의해 멸균하는 단계 S15를 추가로 포함한다.

한 측면에서, 본 개시물은 히드로겔의 겔 입자 내에 봉입된 수불용성 고체 입자를 포함하는 조성물에 관한 것이고, 히드로겔은 카르복실기를 포함하는 가교된 수용성 다당류 분자로 구성되고, 여기서 다당류 분자는 아미드 결합을 통해 가교된다. 일부 실시양태에서, 입자의 사전처리가 포함되었을 때, 조성물에서 고체 입자가 다당류 분자에 아미드 결합을 통해 그래프팅된다.

조성물의 다당류 분자는 글리코사미노글리칸 분자, 예컨대 히알루론산, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있고, 바람직하게는 히알루론산일 수 있다

조성물의 고체 중합체 입자는 고체 중합체 입자, 예컨대 합성 지방족 고체 폴리에스테르 입자일 수 있고, 바람직하게는 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리콜산 또는 그의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있고, 바람직하게는 폴리-L-락트산, PLLA일 수 있다.

조성물은 국소 마취제를 추가로 포함할 수 있고, 국소 마취제는 아미드 및 에스테르 유형 국소 마취제, 예컨대 부피바카인, 부타닐리카인, 카르티카인, 신코카인(디부카인), 클리부카인, 에틸 파라피페리디노아세틸아미노벤조에이트, 에티도카인, 리그노카인(리도카인), 메피바카인, 옥세타자인, 프릴로카인, 로피바카인, 톨리카인, 트리메카인, 바도카인, 아르티카인, 레보부피바카인, 아밀로카인, 코카인, 프로파노카인, 클로르메카인, 시클로메티카인, 프록시메타카인, 아메토카인(테트라카인), 벤조카인, 부타카인, 부톡시카인, 부틸 아미노벤조에이트, 클로로프로카인, 디메토카인(라로카인), 옥시부프로카인, 피페로카인, 파레톡시카인, 프로카인 (노보카인), 프로폭시카인, 트리카인 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 마취제이고, 바람직하게는 리도카인이다.

히드로겔 사용 방법

일부 측면에서, 본 개시물은 수복 또는 미적 피부과 치료를 수행하는 방법을 포함한다. 일부 측면에서, 수복 또는 미적 피부과 치료는 대상체에게 본원에 개시된 조성물을 주사하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 주사는 진피하, 진피내, 피하, 근육내, 근육하, 또는 잇몸내 주사이다.

주사가능한 히드로겔 조성물은 다양한 제약학적 또는 미용적 물질의 수송 또는 투여 및 느린 또는 조절된 방출에 유리하게 사용될 수 있다. 멸균된 주사가능한 히드로겔 조성물은 의학적 뿐만 아니라 비의학적, 예를 들어 순수하게 미용, 시술에서 환자 또는 대상체의 연조직에 조성물 주사에 의해 이용될 수 있다. 조성물은 예를 들어, 히알루론산 겔 주사에 의한 연조직 증강, 예를 들어 주름의 충전에 유용할 수 있다. 조성물은 본원에서 피부 재활력화라고 부르는 미용적 치료에 유용할 수 있고, 이렇게 함으로써 소량의 히알루론산 조성물이 치료받는 피부의 영역에 분포된 많은 주사 부위에서 진피 내에 주사되고, 결과적으로 개선된 피부 톤 및 피부 탄력성을 초래한다. 피부 재활력화는 간단한 시술이고, 그 시술과 연관된 건강 위험은 매우 낮다.

히드로겔 생성물, 예컨대 히드로겔 조성물은 예를 들어 다양한 피부과 병태의 치료에 사용될 수 있다. 특히, 상처 치유, 건조 피부 병태 또는 태양으로 인해 손상된 피부 치료, 과다색소침착 장애 치료, 털 빠짐 치료 및 방지, 및 질병 과정의 한 성분으로서 염증을 가지는 병태, 예컨대 건선 및 건성습진 치료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 피부과 치료에 사용하기 위한 위에서 기술된 주사가능한 히알루론산 조성물이 제공된다. 다시 말해서, 상처 치유, 건조 피부 병태 또는 태양으로 인해 손상된 피부 치료, 과다색소침착 장애 치료, 털 빠짐 치료 및 방지, 및 질병 과정의 한 성분으로서 염증을 가지는 병태, 예컨대 건선 및 건성습진 치료로 이루어지는 군으로부터 선택되는 피부과 치료에 사용하기 위한 의약 제조에 사용하기 위한 위에서 기술된 주사가능한 히알루론산 조성물이 제공된다.

본원에서 도시된 다른 측면에 따르면, 본 개시물은 대상체의 피부 내에 조성물 주사에 의해 대상체의 미용적, 비의학적, 치료를 위한 위에서 기술된 주사가능한 히드로겔 조성물의 용도에 관한 것이다. 개시물의 추가의 측면으로서, 피부에 상기 제2 측면에 따른 히드로겔 생성물을 투여하는 것을 포함하는 피부를 미용적으로 치료하는 방법이 제공된다.

미용적, 비의학적, 치료의 목적은 피부의 외관을 개선하고/거나, 털 빠짐을 방지 및/또는 치료하거나, 주름을 충전하거나, 또는 대상체의 얼굴 또는 신체를 윤곽성형하기 위한 것일 수 있다. 미용적, 비의학적, 용도는 임의의 형태의 질병 또는 의학적 병태의 치료를 포함하지 않는다. 피부의 외관을 개선하는 예는 태양에 의해 손상된 또는 노화된 피부의 치료, 피부 재활력화, 피부 미백화 및 과다색소침착 장애, 예컨대 노인성 주근깨(senile freckle), 기미(melisma), 및 네펠린(nepheline)의 치료를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

일부 측면에서, 본 개시물의 방법은 음푹 들어간 잇몸의 결과로서 잇몸을 충전하기 위한 잇몸내 주사에 관한 것이다. 일부 측면에서, 방법은 구강의 하나 이상의 조직에 조성물의 주사에 관한 것이다.

일부 측면에서, 주사는 진피 충전, 신체 윤곽성형, 얼굴 윤곽성형, 및 잇몸 충전을 위한 것이다.

일부 측면에서, 본원에 개시된 조성물의 주사는 진피 충전을 위한 것이다. 일부 측면에서, 진피 충전의 방법은 피부 갈라짐을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전의 방법은 얼굴, 목, 손, 발, 무릎 및 팔꿈치의 미세주름을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전 방법은 얼굴, 목, 손, 발, 무릎, 및 팔꿈치의 미세주름을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전 방법은 얼굴, 목, 손, 발, 무릎, 및 팔꿈치의 미세주름을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 본원에 개시된 조성물의 주사는 피부 재활력화를 위한 것이고, 그에 의하여 소량의 조성물, 예컨대 히알루론산 조성물은 치료받는 피부 영역에 분포된 많은 주사 부위에서 진피 내에 주사되고, 결과적으로 개선된 피부 톤 및 피부 탄력성을 초래한다. 피부 재활력화는 간단한 시술이고, 그 시술과 연관된 건강 위험은 매우 낮다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 반흔을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전 방법은 함몰된 반흔을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전 방법은 비후성 반흔을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 진피 충전 방법은 켈로이드 반흔을 충전하기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 사람 면역결핍 바이러스(HIV)를 갖는 사람에서 얼굴 지방 손실(지방위축증)의 징후를 복원하고/거나 교정하기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 손등 또는 발등에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 약화된 성대를 강화하기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 노화, 병, 또는 부상의 결과로 신체 부위에 손실된 부피를 복원하기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 진피 충전 방법은 상처 치유를 돕기 위해 표피, 진피, 진피하, 피부, 및/또는 피하 조직의 상처에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 얼굴 윤곽을 변형하기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 입술의 크기 및/또는 형상을 증강하기 위해 입술에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 얼굴 대칭을 증가시키기 위해 얼굴에 조성물 주입을 포함한다. 일부 측면에서, 얼국 윤곽성형 방법은 얼굴의 형상을 난원형 형상, 원형 형상, 정사각형 형상, 삼각형 형상, 역삼각형 형상, 직사각형 형상, 또는 장타원형 형상으로 변화시키기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 얼굴의 전체 폭을 증가시키기 위한 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 얼굴의 전체 길이를 증가시키기 위한 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 이마 및/또는 광대뼈 폭을 증가시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 턱선의 길이를 증가시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 턱의 크기 및/또는 형상을 변화시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 이마의 크기 및/또는 형상을 변화시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 볼의 크기 및/또는 형상을 변화시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 눈썹의 크기 및/또는 형상을 변화시키기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 하악후퇴와 연관된 외관을 변형하기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 얼굴 윤곽성형 방법은 상악전돌과 연관된 외관을 변형하기 위해 얼굴에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 신체 윤곽성형 방법은 신체의 다양한 측면의 크기 및 형상을 변형하기 위해 신체에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 신체 윤곽성형 방법은 대칭을 증가시키기 위해서 신체의 측면의 크기 및 형상을 변형하기 위해 신체에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 신체 윤곽성형 방법은 가슴, 볼기, 엉치뼈, 사타구니, 엉덩이, 복부, 흉부, 발, 다리, 무릎, 오금, 대퇴, 팔, 손, 팔꿈치, 및/또는 앤티큐비티스(antecubitis) 크기 및 형상을 변형하기 위해 신체에 조성물 주사를 포함한다.

일부 측면에서, 신체 윤곽성형 방법은 오목한 기형을 충전하기 위해 신체에 조성물 주사를 포함한다. 일부 측면에서, 오목한 기형은 노화, 병, 부상, 또는 질병소질의 결과이다. 일부 측면에서, 신체 윤곽성형 방법은 셀룰라이트의 외관을 감소시키기 위해 신체에 조성물 주사를 포함한다.

본 기술은 본 출원에서 기술되는 특별한 측면들의 면에서 제한되지 않아야 하고, 이것들은 본 기술의 개별 측면의 한 예시로서 의도된다. 관련 분야의 숙련된 자에게 명백한 바와 같이, 이러한 본 기술의 많은 변형 및 변화를 그의 정신 및 범위로부터 벗어남이 없이 가할 수 있다. 본원에 열거된 것 외에도 본 기술의 범위 내의 기능적으로 동등한 방법 및 장치가 상기 설명으로부터 관련 분야의 숙련된 자에게 명백할 것이다. 그러한 변형 및 변화가 본 기술의 범위 내인 것을 의도한다. 이러한 본 기술은 특별한 방법, 시약, 화합물 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않고, 이것은 물론 다양할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본원에 사용되는 용어는 특별한 실시양태를 기술하는 것만을 목적으로 하고, 제한하는 것을 의도하지 않는다는 것을 이해해야 한다.

용어 "a" 또는 "an"은 하나 이상의 엔터티(entity)를 지칭할 수 있고, 즉, 복수 지시대상을 지칭할 수 있다. 그와 같이, 용어 "a" 또는 "an", "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본원에서는 상호교환적으로 사용된다. 추가로, 문맥이 요소들 이 하나만 있다는 것을 명료하게 요구하지 않으면, 부정관사 "a" 또는 "an"에 의한 "요소"의 언급은 그 요소가 하나 초과 존재할 가능성을 배제하지 않는다.

본 명세서 전체에 걸쳐서 "한 실시양태", "실시양태", "한 측면" 또는 "측면"의 언급은 그 실시양태와 관련해서 기술된 특별한 특징, 구조 또는 특성이 본 개시물의 적어도 한 실시양태에 포함된다는 것을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸쳐서 다양한 곳에서 어구 "한 실시양태에서" 또는 "실시양태에서"의 출현은 반드시 전부 동일한 실시양태에 관한 것은 아니다. 게다가, 특별한 특징, 구조, 또는 특성은 하나 이상의 실시양태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은 수치 값에 선행할 때 그 값의 10%의 범위를 더하거나 또는 뺀 값을 지시한다.

관련 분야의 숙련된 자가 이해하는 바와 같이, 임의의 및 모든 목적을 위해, 특히 적힌 설명을 제공한다는 면에서, 본원에 개시된 모든 범위는 임의의 및 모든 가능한 하위범위 및 그의 하위범위의 조합을 포함한다. 임의의 열거된 범위는 동일한 범위를 적어도 절반, 1/3, 1/4, 1/5, 1/10 등으로 쪼개는 것을 충분히 기술하고 가능하게 한다는 것을 쉽게 인지할 수 있다. 비제한적 예로서, 본원에서 논의되는 각 범위는 하위 1/3, 중간 1/3, 및 상위 1/3 등으로 쉽게 쪼갤 수 있다. 또한 관련 분야의 숙련된 자가 이해하는 바와 같이, 모든 언어, 예컨대 "이하", "적어도", "초과", "미만" 등은 나열된 숫자를 포함하고, 후속해서 위에서 논의된 바와 같이 하위범위로 쪼갤 수 있는 범위를 지칭한다. 최종적으로, 관련 분야의 숙련된 자가 이해하는 바와 같이, 범위는 각각의 개별 숫자를 포함한다. 따라서, 예를 들어, 1 - 3 개 셀을 가지는 군은 1, 2, 또는 3 개 셀을 가지는 군을 지칭한다. 마찬가지로, 1 - 5개 셀을 가지는 군은 1, 2, 3, 4, 또는 5 개 셀을 가지는 군을 지칭하는 것 등이다.

실시양태의 나열된 목록

1. 1 개 이상의 카르복실기를 포함하는 수용성 다당류 분자, 수불용성 고체 입자, 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 커플링 작용제를 pH 5 내지 9의 물 현탁액에서 혼합하고, 이렇게 함으로써 다당류 분자를 커플링 작용제로 활성화하고, 활성화된 다당류 분자를 가교하고, 고체 입자를 봉입하여 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물을 형성하는 단계 (S2)를 포함하는 고체 입자를 봉입한 가교된 다당류 분자의 히드로겔을 포함하는 조성물 제조 방법.

2. 실시양태 1에 있어서, 1 개 이상의 카르복실기를 포함하는 수용성 다당류 분자, 수불용성 고체 입자, 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및 커플링 작용제를 제공하는 단계(S0)를 추가로 포함하는 방법.

3. 실시양태 1 - 2에 있어서, 형성된 조성물을 바늘을 통한 주사에 적합한 더 작은 분획으로 분할하는 단계(S3)를 추가로 포함하는 방법.

4. 실시양태 1 - 3에 있어서, 국소 마취제를 조성물에 첨가하는 단계(S4)를 추가로 포함하는 방법.

5. 실시양태 1 - 4에 있어서, 조성물을 예를 들어 열 멸균, 예컨대 오토클레이빙을 사용하여 멸균하는 단계(S5)를 추가로 포함하는 방법.

6. 실시양태 1 - 2에 있어서, 제조 방법이 단일 포트 공정으로서 수행되는 것인 방법.

7. 실시양태 1 - 5에 있어서, 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 단계(S1) 을 추가로 포함하고, 여기서 사전활성화된 표면이 혼합 단계에서 고체 입자가 다당류 분자에 그래프팅되는 것을 허용하는 것인 방법.

8. 실시양태 7에 있어서, 표면을 사전활성화하는 단계(S1a)가 고체 입자의 표면에 카르복실기를 사전로딩하는 것을 포함하고, 여기서 입자가 아미드 결합을 통해 수용성 다당류 분자에 그래프팅되는 것인 방법.

9. 실시양태 7 - 8에 있어서, 표면을 사전활성화하는 단계(S1b)가 고체 입자의 표면에 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 그래프팅 작용제를 사전로딩하는 것을 포함하고, 여기서 고체 입자가 그래프팅 작용제와 다당류 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅되는 것인 방법.

10. 실시양태 1 - 9 중 어느 하나의 실시양태에 있어서, 다당류 분자가 글리코사미노글리칸 분자, 예컨대 히알루론산, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 혼합물, 바람직하게는 히알루론산인 방법.

11. 실시양태 1 - 10 중 어느 하나의 실시양태에 있어서, 가교제가 디아미노 유도체를 포함하고, 여기서 디아미노 유도체가 지방족 또는 방향족 디아미노 유도체, 또는 펩티드 또는 펩티드 서열, 예컨대 리신, 또는 디아미노 탄수화물이고, 바람직하게는 디아미노 트레할로스, 디아미노 히알루론산 사당류, 디아미노 히알루론산 육당류, 디아미노 락토스, 디아미노 말토스, 디아미노 수크로스, 키토비오스, 디아미노 라피노스, 리신, 디아미노 펩티드, 또는 디아미노 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 디아미노 트레할로스, DATH인 방법.

12. 실시양태 1 - 11 중 어느 하나의 실시양태에 있어서, 커플링 작용제가 트리아진-기재 커플링 작용제, 예컨대 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM) 또는 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진 (CDMT), 바람직하게는 DMTMM인 방법.

13. 실시양태 1 - 12 중 어느 하나의 실시양태에 있어서, 고체 입자가 고체 중합체 입자, 예컨대 고체 합성 지방족 폴리에스테르 입자 또는 그의 공중합체이고, 바람직하게는 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리콜산 또는 그의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 폴리-L-락트산, PLLA인 방법.

14. 실시양태 4 - 13 중 어느 하나의 실시양태에 있어서, 국소 마취제가 아미드 및 에스테르 유형 국소 마취제, 예컨대 부피바카인, 부타닐리카인, 카르티카인, 신코카인 (디부카인), 클리부카인, 에틸 파라피페리디노아세틸아미노벤조에이트, 에티도카인, 리그노카인 (리도카인), 메피바카인, 옥세타자인, 프릴로카인, 로피바카인, 톨리카인, 트리메카인, 바도카인, 아르티카인, 레보부피바카인, 아밀로카인, 코카인, 프로파노카인, 클로르메카인, 시클로메티카인, 프록시메타카인, 아메토카인(테트라카인), 벤조카인, 부타카인, 부톡시카인, 부틸 아미노벤조에이트, 클로로프로카인, 디메토카인 (라로카인), 옥시부프로카인, 피페로카인, 파레톡시카인, 프로카인 (노보카인), 프로폭시카인, 트리카인 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 마취제, 바람직하게는 리도카인인 방법.

15. 실시양태 1 - 14 중 어느 하나의 실시양태의 방법에 의해 얻을 수 있는 조성물.

16. 히드로겔의 겔 입자 내에 봉입된 수불용성 고체 입자를 포함하고, 히드로겔이 카르복실기를 포함하는 가교된 수용성 다당류 분자로 구성되고, 여기서 다당류 분자가 아미드 결합을 통해 가교된 것인 조성물.

17. 실시양태 16에 있어서, 고체 입자가 아미드 결합을 통해 다당류 분자에 그래프팅되는 것인 조성물.

18. 실시양태 16 - 17에 있어서, 다당류 분자가 글리코사미노글리칸 분자, 예컨대 히알루론산, 콘드로이틴 또는 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 히알루론산인 조성물.

19. 실시양태 16 - 18에 있어서, 고체 중합체 입자가 고체 중합체 입자, 예컨대 합성 지방족 고체 폴리에스테르 입자이고, 바람직하게는 폴리락트산, 폴리카프로락톤, 폴리글리콜산 또는 그의 공중합체로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 폴리-L-락트산, PLLA인 조성물.

20. 실시양태 16 - 19에 있어서, 조성물이 국소 마취제를 추가로 포함하고, 국소 마취제가 아미드 및 에스테르 유형 국소 마취제, 예컨대 부피바카인, 부타닐리카인, 카르티카인, 신코카인 (디부카인), 클리부카인, 에틸 파라피페리디노아세틸아미노벤조에이트, 에티도카인, 리그노카인 (리도카인), 메피바카인, 옥세타자인, 프릴로카인, 로피바카인, 톨리카인, 트리메카인, 바도카인, 아르티카인, 레보부피바카인, 아밀로카인, 코카인, 프로파노카인, 클로르메카인, 시클로메티카인, 프록시메타카인, 아메토카인(테트라카인), 벤조카인, 부타카인, 부톡시카인, 부틸 아미노벤조에이트, 클로로프로카인, 디메토카인 (라로카인), 옥시부프로카인, 피페로카인, 파레톡시카인, 프로카인 (노보카인), 프로폭시카인, 트리카인 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 마취제, 바람직하게는 리도카인인 조성물.

21. 미용적 응용을 위한 진피 충전제로서 실시양태 15 - 20 중 어느 하나의 실시양태의 조성물의 용도.

실시예

예를 들어 진피 충전제로서 사용될 때 히드로겔 생성물의 특성을 증진시키기 위해 고체 입자, 예컨대 PLLA를 히드로겔에 혼입하는 것이 바람직하다. 그러나, 히드로겔에 이들 입자를 혼입하는 것의 문제는 히드로겔이 생성되는 알칼리성 조건이었고, 이것은 입자를 분해한다. 본원에서 보고되는 실험 데이터에 의해 증명되는 이 문제의 해결책은 중성 pH에서 미미한 분해가 일어나는 단일 포트 공정으로 DATH/DMTMM 화학을 사용하여 PLLA/히알루론산 혼합물을 가교하는 것이었다. 이 공정은 코어-쉘 입자를 전달하고, 여기서는 불용성 PLLA 입자가 히알루로난 겔 입자 내에 봉매된다. 본원에서 기술되는 방법에 사용되는 가교제는 DATH 및 다른 디아미노 탄수화물에 제한되지 않고, 또한 다른 디아미노 구조, 예컨대 리신 및 다른 펩티드/서열, 및 다른 지방족/방향족 디아미노 구조일 수 있다.

가교 공정을 조정함으로써, 그 공정 및 입자 크기 감소(PSR) 후, 상이한 PLLA 로딩과 함께 피부과 용도를 위한 적합한 HA 농도, 예를 들어 5-50 mg/mL를 얻지만 과량의 식염수에서 팽윤하는 용량을 보유하도록 겔을 제제화하는 것이 가능하다. PLLA 입자가 가교된 히알루로난 망상조직에 봉매된 코어-쉘 구조 때문에, 겔은 균질하고 저장시 침강하지 않을 것이다. 이 제제화로부터의 추가의 이익은 조직에서 PLLA의 조절가능한 방출일 것이고, 여기서 PLLA의 방출 속도는 아마도 PLLA/HA 비, HA 겔 망상조직의 특성, 입자 크기 등에 의존할 것이다.

아래에 (1) 가교 및 봉입/봉매를 위한 방법, (2) 봉매 전에 입자 표면에 카르복실기 사전로딩(유리 또는 첨가)을 위한 방법, 및 (3) 아민을 로딩하기 전에 먼저 카르복실기가 첨가되는 2 단계 반응으로서 수행될 수 있는, 봉매 전에 입자 표면에 그래프팅 작용제, 예컨대 아민을 로딩하는 사전처리를 위한 방법에 관한 본 개시물의 방법을 수행하는 예를 아래에 제시한다.

그에 제한되는 것을 원하지 않지만, 본 개시물은 다음에서는 다음 실험예에 의해 예시될 것이다.

실시예 1 - PLLA 존재 하에서 HA 가교 - DATH (0.9 mol%/HA) 및 중량 기준 으로 47% PLLA

두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제 (DATH)를 탈이온수에서 신선하게 조제하였다. 한 반응 용액은 DMTMM (7.65 mol%/HA) 및 DATH (0.9 mol%/HA)를 각각 탈이온수에 첨가함으로써 조제하였다. 반응 용액을 혼합하고, 반응 용기 중의 사전칭량된 HA (1 MDa) 및 PLLA에 바로 첨가하였다. 비율은 중량 기준으로 53% HA 및 47% PLLA였다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅하였다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가하였다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행하였다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 F₀ 값 23(F₀ 23)을 사용하여 수분 내에 121℃ 또는 250 F에서 멸균하였고, 여기서 F₀는 동등한 양의 시간을 의미하고, 이는 멸균 공정에 의해 생성물에 전달되었다. 반응 순서는 봉매된 PLLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다. 이 실시예에서의 겔의 특성(점탄성 매개변수)을 표 1에서 볼 수 있고, 여기서 G'은 탄성 (저장) 계수이고, G"은 점성 (손실) 계수이고, tan δ는 전단이고, 물질 감쇠의 측정이며, 여기서 tan δ는 G"/G'로 계산된다. 오토클레이빙 전의 샘플 1-1에 상응하는 얻은 겔의 이미지는 도 7에서 확인된다.

실시예 2 - PLLA 존재 하에서 HA 가교 - DATH (1.2 mol%/HA) 및 중량 기준으로 50% PLLA

두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제 (DATH)를 탈이온수에서 신선하게 조제하였다. 한 반응 용액은 DMTMM (7.65 mol%/HA) 및 DATH (1.2 mol%/HA)를 각각 탈이온수에 첨가함으로써 조제하였다. 반응 용액을 혼합하고, 반응 용기 중의 사전칭량된 HA (1 MDa) 및 PLLA에 바로 첨가하였다. 비율은 중량 기준으로 50% HA 및 50% PLLA였다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅하였다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가하였다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행하였다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균하였다(F₀ 23). 반응 순서는 봉매된 PLLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다. 오토클레이빙 후, 얻은 겔의 이미지는 도 8에서 확인된다.

실시예 3 - DATH (0.9 mol%/HA) 및 중량 기준으로 50% PLLA를 사용하여 PLLA 존재 하에서 HA 가교

두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제 (DATH)를 탈이온수에서 신선하게 조제하였다. 한 반응 용액은 DMTMM (7.65 mol%/HA) 및 DATH (0.9 mol%/HA)를 각각 탈이온수에 첨가함으로써 조제하였다. 반응 용액을 혼합하고, 반응 용기 중의 사전칭량된 HA (1 MDa) 및 PLLA에 바로 첨가하였다. 비율은 중량 기준으로 50% HA 및 50% PLLA였다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅하였다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가하였다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행하였다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균하였다(F₀ 23). 반응 순서는 봉매된 PLLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다.

실시예 4-1 - DATH (1.5 mol%/HA) 및 중량 기준으로 67% PLLA를 사용하여 PLLA 존재 하에 HA (1 MDa) 가교

두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제 (DATH)를 탈이온수에서 신선하게 조제하였다. 한 반응 용액은 DMTMM (12.75 mol%/HA) 및 DATH (1.5 mol%/HA)를 각각 탈이온수에 첨가함으로써 조제하였다. 반응 용액을 혼합하고, 반응 용기 중의 사전칭량된 HA (1 MDa) 및 PLLA에 바로 첨가하였다. 비율은 중량 기준으로 33% HA 및 67% PLLA였다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅하였다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가하였다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행하였다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균하였다. 반응 순서는 봉매된 PLLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 수득한다.

실시예 4-2 - 봉매된 PLLA/HA-겔에 PLLA 첨가

PLLA (1 g)를 실시예 1에서 단리된 겔 분말 (1 g)에 첨가하였다. 얻은 분말 혼합물을 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트(50 mL)에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균하였다. 반응 순서는 겔 입자에 봉매된 PLLA 입자 뿐만 아니라 비봉매된 PLLA 둘 모두를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다. 오토클레이빙 후의 실시예 4-2에 상응하는 얻은 겔(샘플 4-2)의 이미지는 도 9에서 확인된다.

ND = 측정되지 않음

실시예 5 - 가교 HA-겔에 PLA의 공유 봉매

히드로겔과 봉매된 고체 중합체 입자 사이의 공유 연결을 증가시키기 위해, Wang et al. (Polym Int 52:1892-1899, 2003)에 따라서 PLA를 에탄올성 알칼리성 용액으로 사전활성화하여 PLA 표면 상에서 카르복실레이트를 유리한다. 두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제(DATH)를 탈이온수에서 조제한다. 한 반응 용액은 DMTMM의 용액 및 DATH의 용액을 혼합함으로써 조제하고, 후속해서 탈이온수로 요망되는 부피까지 희석한다. 반응 용액을 반응 용기 중의 사전칭량된 HA 및 사전활성화된 PLLA에 바로 첨가한다. 비율은 중량 기준으로 50% HA 및 50% PLA이다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅한다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가한다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행한다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균한다(F₀ 20 - 30). 반응 순서는 HA-겔에 공유 연결되는(그래프팅되는) 봉매된 PLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다.

실시예 6 - 디아민에 의한 PLLA의 사전코팅 및 가교 HA-겔에 PLA의 공유 봉매

Luo et al. (J. Biomed. Mater. Res. Part B: Applied Biomaterials; Volume 74, Issue 1, 476-480; 7/2005; Pan, Jun; Wang, Yuanliang; Qin, Suhua; Zhang, Bingbing; Luo, Yanfeng)에 의해 기술된 바와 같은 2-단계 공정에 따라서 PLA를 DATH로 사전코팅한다. PLA를 BPO 촉매 하에서 무수말레산과 반응시켜서 MPLA를 형성하고, 후속해서 무수물을 DATH에 의해 가수분해하여 아미노-코팅된 입자를 형성한다. 두 스톡 용액, DMTMM 및 가교제(DATH)를 탈이온수에서 조제한다. 한 반응 용액은 DMTMM의 용액 및 DATH의 용액을 혼합함으로써 조제하고, 후속해서 탈이온수로 요망되는 부피까지 희석한다. 반응 용액을 반응 용기 중의 사전칭량된 HA 및 아미노-코팅된 입자에 바로 첨가한다. 비율은 중량 기준으로 50% HA 및 50% 아미노-코팅된 PLA이다. 혼합물을 3.5 min 동안 광범위하게 혼합하고, 인큐베이팅한다. 24 h 후, 얻은 물질을 1 mm 스틸 메쉬를 통해 프레싱한 후 탈이온수를 첨가한다. 물질을 1 h 동안 주위 온도에서 교반한 후에 혼합물을 약 20 h 동안 70 ℃까지 가열하고, 후속해서 3x315 μm 필터를 사용하여 입자 크기 감소(PSR)를 수행한 후에 EtOH를 첨가하여 침전을 수행한다. 얻은 분말을 진공 하에서 밤새 건조시키고, 0.7% NaCl 및 리도카인-HCl 3 mg/g을 갖는 7 mM 포스페이트에서 재구성하고, 주사기에 충전하고, 후속해서 멸균한다(F₀ 20 - 30). 반응 순서는 HA-겔에 공유 연결되는 봉매된 PLA 입자를 갖는 가교된 히드로겔을 제공한다.

* * * * *

본원에서 예시로 기술된 방법들은 본원에서 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들 부재 하에서 적합하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 용어 "포함하는"(comprising), "포함하는"(including), "함유하는"(containing) 등은 광범위하게 및 비제한적으로 읽힐 것이다. 추가로, 본원에서 이용되는 용어 및 표현은 제한하는 것이 아니라 기술하는 용어로 사용되었고, 그러한 용어 및 표현의 사용에는 나타내고 기술된 특징 또는 그의 일부의 임의의 동등물을 배제하는 의도가 없다. 청구된 개시물의 범위 내에서 다양한 변형이 가능하다는 것을 인지한다. 따라서, 본 개시물이 바람직한 실시양태 및 임의적인 특징에 의해 구체적으로 개시되었을지라도, 관련 분야의 숙련된 자는 거기에서 구현되고 본원에서 개시된 개시물의 변형 및 변화에 의지할 수 있다는 것 및 그러한 변형 및 변화가 본 개시물의 범위 내인 것으로 여겨진다는 것을 이해해야 한다.

개시물은 본원에서 폭넓게 및 유개념적으로(generically) 기술되었다. 유개념적 개시물에 포함되는 더 좁은 종개념(species) 및 하위유개념적 그룹도 또한 방법의 일부를 형성한다. 이것은 삭제되는 물질이 본원에서 구체적으로 열거되든 열거되지 않든 상관 없이 임의의 주제를 유개념으로부터 제거하는 단서 또는 부정적 제한과 함께 방법의 유개념적 기술을 포함한다. 본 기술은 본 출원에 기술된 특별한 실시양태의 면에서 제한되지 않아야 하고, 이는 본 기술의 개별 측면들의 단일 예시로 의도된다. 관련 분야의 숙련된 자에게 명백한 바와 같이, 이러한 본 기술의 많은 변형 및 변화를 그의 정신 및 범위로부터 벗어남이 없이 가할 수 있다. 본원에 나열된 것들 외에도 본 기술의 범위 내의 기능적으로 동등한 방법 및 장치가 상기 설명으로부터 관련 분야의 숙련된 자에게 명백할 것이다. 그러한 변형 및 변화가 본 기술의 범위 내에 속하는 것을 의도한다. 이러한 본 기술은 특별한 방법, 시약, 화합물 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않고, 이것들이 물론 변할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본원에서 사용되는 용어는 특별한 실시양태를 기술하는 것만을 목적으로 하고 제한하는 것을 의도하지 않는다는 것을 이해해야 한다.

관련 분야의 숙련된 자는 본 개시물이 목적을 수행하도록 및 언급된 목표 및 이점, 뿐만 아니라 거기에서 고유한 것들을 얻도록 잘 적응된다는 것을 쉽게 인식한다. 거기에서의 변형 및 다른 용도가 관련 분야의 숙련된 자에게 떠오를 것이다. 이들 변형은 개시물의 정신 내에 포함되고, 청구범위의 범위에 의해 한정되고, 이는 개시물의 비제한적 실시양태를 제시한다.

추가로, 개시물의 특징 또는 측면이 마쿠시(Markush) 그룹으로 기술되는 경우, 관련 분야의 숙련된 자는 개시물이 또한 이렇게 해서 마쿠시 그룹의 임의의 개별 구성원 또는 구성원들의 하위그룹으로 기술된다는 것을 인식할 것이다.

본원에서 인용되는 모든 참고문헌, 논문, 간행물, 특허, 특허 공개, 및 특허 출원은 모든 목적으로 그 전체가 참고로 포함된다.

그러나, 본원에서 인용되는 임의의 참고문헌, 논문, 간행물, 특허, 특허 공개, 및 특허 출원의 언급은 그것들이 타당한 선행 기술을 구성한다거나 또는 전세계 어느 나라에서도 공통적인 일반 지식의 일부를 형성한다는 인정 또는 임의의 형태의 제안이 아니며, 그렇게 받아들이지 않아야 한다.

Claims (42)

1. 히드로겔에 봉매된 고체 입자를 포함하는 가교된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은,
   (a) pH 5 내지 9의 물 현탁액에서 다음:
   (i) 1개 이상의 카르복실기를 포함하는 글리코사미노글리칸 분자,
   (ii) 수불용성 고체 입자,
   (iii) 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 가교제, 및
   (iv) 커플링 작용제
   를 혼합하고, 이렇게 함으로써 글리코사미노글리칸 분자를 커플링 작용제로 활성화하는 단계;
   (b) 활성화된 글리코사미노글리칸 분자를 가교하는 단계; 및
   (c) 가교된 글리코사미노글리칸 분자 내에 고체 입자를 봉매하여 고체 입자가 봉매된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는 조성물을 형성하는 단계
   를 포함하는, 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 글리코사미노글리칸이 히알루론산인, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 수불용성 고체 입자가 하나 이상의 중합체를 포함하는, 방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 하나 이상의 중합체가 동종중합체, 이종중합체, 또는 공중합체인, 방법.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 하나 이상의 중합체가 폴리락트산인, 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불용성 고체 중합체가 다공성인, 방법.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불용성 고체 중합체가 비다공성인, 방법.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히드로겔 중의 수불용성 고체 중합체가 중량 기준으로 0.1%-10%인, 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히드로겔을 더 작은 분획으로 분할하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
10. 제9항에 있어서, 상기 더 작은 분획이 히드로겔 입자인, 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 히드로겔 입자의 크기가 0.01 mm 내지 5 mm인 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 국소 마취제를 상기 조성물에 첨가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물을 멸균하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 조성물을 멸균하는 단계는 열 멸균을 포함하는, 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 단계를 추가로 포함하고, 상기 사전활성화된 표면이 혼합 시에 고체 입자가 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅되는 것을 허용하는, 방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 고체 입자의 표면을 사전활성화하는 단계는 고체 입자의 표면에 카르복실기를 사전로딩하는 것을 포함하고, 상기 고체 입자가 아미드 결합을 통해 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅되는, 방법.
17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 표면을 사전활성화하는 단계는 고체 입자의 표면에 이친핵성 또는 다친핵성 작용성 그래프팅 작용제를 사전로딩하는 단계를 포함하고, 상기 고체 입자가 그래프팅 작용제와 글리코사미노글리칸 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅되는, 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가교제가 디아미노 유도체를 포함하는, 방법.
19. 제18항에 있어서, 상기 디아미노 유도체가 지방족 또는 방향족 디아미노 유도체, 펩티드 또는 펩티드 서열, 또는 디아미노 탄수화물인 방법.
20. 제19항에 있어서, 상기 디아미노 탄수화물이 디아미노 트레할로스, 디아미노 히알루론산 사당류, 디아미노 히알루론산 육당류, 디아미노 락토스, 디아미노 말토스, 디아미노 수크로스, 키토비오스, 또는 디아미노 라피노스로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 커플링 작용제가 트리아진-기재 커플링 작용제인, 방법.
22. 제21항에 있어서, 상기 트리아진-기재 커플링 작용제가 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM) 또는 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(CDMT)으로부터 선택되는, 방법.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생성된 고체 입자가 봉매된 글리코사미노글리칸 히드로겔을 포함하는, 조성물.
24. 카르복실기를 포함하는 가교된 글리코사미노글리칸을 포함하는 히드로겔의 겔 입자 내에 봉매된 수불용성 고체 입자를 포함하고, 상기 글리코사미노글리칸 분자가 아미드 결합을 통해 가교된 것인 조성물.
25. 제24항에 있어서, 상기 글리코사미노글리칸이 히알루론산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트, 또는 그의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 조성물.
26. 제25항에 있어서, 상기 글리코사미노글리칸이 히알루론산인, 조성물.
27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수불용성 고체 입자가 하나 이상의 중합체를 포함하는, 조성물.
28. 제27항에 있어서, 상기 하나 이상의 중합체가 동종중합체, 이종중합체, 또는 공중합체인, 조성물.
29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 하나 이상의 중합체가 폴리락트산인, 조성물.
30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불용성 고체 중합체가 다공성인, 조성물.
31. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불용성 고체 중합체가 비다공성인, 조성물.
32. 제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히드로겔 중의 수불용성 고체 중합체가 중량 기준으로 0.1%-10%인, 조성물.
33. 제34항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 겔 입자의 크기가 0.01 mm 내지 5 mm인, 조성물.
34. 제34항 또는 제33항에 있어서, 국소 마취제를 추가로 포함하는, 조성물.
35. 제34항에 있어서, 상기 국소 마취제가 리도카인인, 조성물.
36. 제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 멸균성인, 조성물.
37. 제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고체 입자가 글리코사미노글리칸 분자에 그래프팅되는, 조성물.
38. 제37항에 있어서, 상기 고체 입자가 글리코사미노글리칸 분자에 아미드 결합을 통해 그래프팅되는, 조성물.
39. 제37항에 있어서, 상기 고체 입자가 그래프팅 작용제와 글리코사미노글리칸 분자 사이에 아미드 결합을 통해 그래프팅되는, 조성물.
40. 제24항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체의 진피 내에 주사하는 단계를 포함하는, 진피 충전 방법.
41. 제40항에 있어서, 상기 조성물을 주사하는 단계는 하나 초과의 주사 부위에서의 주사를 포함하는, 방법.
42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 상기 방법이 위약 대조군과 비교해서 주름 및 미세주름의 출현을 감소시키는, 방법.

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