CN113049837A

CN113049837A - 全血pct免疫比浊试剂

Info

Publication number: CN113049837A
Application number: CN202110357148.0A
Authority: CN
Inventors: 孟涛; 周淼; 范可君
Original assignee: J & W Beijing Biotech Co ltd
Current assignee: J & W Beijing Biotech Co ltd
Priority date: 2021-04-01
Filing date: 2021-04-01
Publication date: 2021-06-29

Abstract

本发明公开了一种全血PCT免疫比浊试剂，包括试剂1和试剂2和标准品，所述试剂1包括缓冲液A、阻断剂、增感剂、防腐剂、表面活性剂、BSA和稳定剂，试剂2包括缓冲液B、BSA、稳定剂、防腐剂和包被PCT抗体的乳胶微球，标准品为含有不同浓度PCT抗原的小牛血清，其特征在于：所述试剂1中还添加有0.5％‑2％的CaCl₂。本发明在试剂1中添加一定浓度的CaCl₂，可以消除外源性干扰，提高检测结果的准确性，简化操作步骤，提高检测效率。

Description

全血PCT免疫比浊试剂

技术领域

本发明涉及一种全血PCT免疫比浊试剂，属于医学免疫领域。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，PCT)是一种临床标志物，广泛应用于血液肿瘤科、麻醉科、内科、移植外科、新生儿科和儿科等诊疗科室。在正常情况下，PCT以游离形式存在于人体血清中，其水平含量很低，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，PCT在血浆中的水平升高，而自身免疫、过敏和病毒感染时，PCT不会升高，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症也不会导致其升高。因此PCT可以作为一个急性参数来鉴别诊断细菌性和非细菌性感染和炎症；监测有感染危险的患者(如外科术后和器官移植后免疫抑制期，多处创伤)以及需要重症监护患者，用来探测细菌感染的全身影响或检测脓毒性并发症；评价严重炎症性疾病临床进程及预后，如腹膜炎、脓毒症、SIRS和MODS等。

免疫比浊法广泛用于PCT的测定。检测过程中由于方法学、样本状态、试剂组分等因素的影响，往往会对诊断结果产生干扰，导致出现测试结果假阴或假阳的情况。造成干扰的类型多种多样，包括内源性干扰和外源性干扰。内源性干扰包括溶血，黄疸及脂血，此外患者体内的异常物质如类风湿因子也会造成干扰。外源性干扰包括常见治疗药物，标准处理过程中的添加物等。

对于不同干扰，目前采取的方法包括样本预处理(溶血、高血脂样本)，在试剂中添加阻断剂，或者在试剂开发阶段对抗体原料进行预处理等手段进行消除。

在大规模的健康体检筛查和临床病人检验时，需要增加样本筛选、预处理等环节，增加工作量，不利于快速出具检验结果，延长检测时间，不利于快速诊断。

添加阻断剂或对抗体原料进行预处理会增加试剂成本，原料处理过程会对抗原抗体的结构产生影响进而影响试剂性能，同时原料处理过程也需要较多复杂的操作过程对与生产工艺有较高要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种全血PCT免疫比浊试剂，通过在试剂1中添加一定浓度的CaCl₂，可以消除外源性干扰，从而无需进行样品预处理，操作过程简单方便。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种全血PCT免疫比浊试剂，包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括缓冲液A、鼠抗人IgM抗体、聚乙二醇6000、Proclin950、TritonX-100、BSA和NaCl，试剂2包括缓冲液B、BSA、NaCl、Proclin950和包被PCT抗体的乳胶微球，其特征在于：所述试剂1中还添加有0.5％-2％的CaCl₂。

优选的，所述缓冲液A为pH6.5柠檬酸盐缓冲液，试剂1中缓冲液A终浓度为0.05mol/L。其中终浓度指最终的反应体系中缓冲液的浓度。以下同。

优选的，试剂1和试剂2中NaCl终浓度均为1％w/v，其中w/v代表质量/体积比，即100ml溶液中含有1gNaCl，以下同。

优选的，试剂1中TritonX-100终浓度均为0.15％w/v。

优选的，试剂1和试剂2中Proclin950终浓度为0.1％w/v。

优选的，试剂1和试剂2中BSA浓度为1％w/v，试剂1中鼠抗人IgM抗体终浓度为0.04％w/v，试剂1中聚乙二醇6000终浓度为1％-2％w/v。

优选的，所述缓冲液B为pH7.5磷酸盐缓冲液，试剂2中缓冲液B终浓度为0.05mol/L。

优选的，试剂2中包被PCT抗体的乳胶微球浓度为0.2％w/v。

本发明在试剂1中添加一定浓度的CaCl₂，可以消除外源性干扰，提高检测结果的准确性，简化操作步骤，提高检测效率。

具体实施方式

全血PCT试剂1组成

pH6.5柠檬酸盐缓冲液0.05mol/L，NaCl 1％，BSA 1％，TritonX-100 0.15％，鼠抗人IgM抗体0.04％，聚乙二醇6000 1％-2％，Proclin950 0.1％。

全血PCT试剂2组成

pH7.5磷酸盐缓冲液0.05mol/L，NaCl 1％，BSA 1％，Proclin950 0.1％，包被PCT抗体的乳胶微球0.2％。

厂家血清试剂购自北京万泰德瑞诊断技术有限公司。

样本1-15为临床样本，其中1-5为异常样本，6-15为正常样本。异常样本即调试前与对照试剂测值不一致的样本。正常样本指调试前与对照试剂测值基本一致的样本。对照试剂指厂家血清试剂。

实施例1、试剂1中添加不同盐离子抗干扰能力测试

在试剂1中添加1％浓度的MgCl₂、CaCl₂或EDTA·2Na，对试剂抗干扰能力进行测试

测试方法：使用日立全自动生化分析仪7180检测，检测条件如下：样本量15μl、试剂1 180μl、试剂2 60μl、测量主波长600nm、测量副波长无、测量温度37℃。将样本加入试剂1中、37℃孵育5min后加入试剂2、仪器读取吸光度值，37℃孵育5min后仪器再次读取吸光度值，记录两次吸光度差值。使用标准品绘制标准曲线，将样本吸光度差值带入标准曲线，计算样本浓度值。

测试结果如表1所示。表1：在试剂1中添加不同盐离子后，异常样本的测值变化

表1说明三种盐离子对干扰均有抑制效果，CaCl₂抑制效果最好，与对照的偏差在±15％以内。

实施例2、试剂1中添加不同浓度CaCl₂抗干扰能力测试

在试剂1中添加0.5％、1％、2％浓度的CaCl₂，对试剂抗干扰能力进行测试，测试结果如表2所示。

表2在试剂1中添加不同浓度CaCl₂后，异常样本的测值变化

表2的数据说明2％浓度以下的CaCl₂不同添加浓度对干扰抑制无明显差异，与对照试剂测定偏差±15％以内。

实施例3、试剂1中添加不同盐离子对正常样本测值影响。

在试剂1中添加1％浓度的MgCl₂、CaCl₂或EDTA·2Na，检测对试剂测定正常样本的影响，测试结果如表3所示。

表3剂1中添加不同盐离子后，正常样本的测值变化

表3说明用三种盐离子测定无干扰样本，EDTA·2Na测值偏差超出±15％，MgCl₂测值偏差在±9％以内，CaCl₂测值偏差在±5％以内。

以上三组实验结果说明，在全血PCT试剂1中添加0.5％-2％的CaCl₂可以有效消除异常样本，同时不影响正常样本测值。

Claims

1.一种全血PCT免疫比浊试剂，包括试剂1、试剂2和标准品，所述试剂1包括缓冲液A、BSA、NaCl、聚乙二醇6000、TritonX-100、鼠抗人IgM抗体、Proclin950，试剂2包括缓冲液B、BSA、NaCl、Proclin950和包被PCT抗体的乳胶微球，标准品为含有不同浓度PCT抗原的小牛血清，其特征在于：所述试剂1中还添加有0.5％-2％的CaCl₂。

2.根据权利要求1所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：所述缓冲液A为pH6.5柠檬酸盐缓冲液，试剂1中缓冲液A终浓度为0.05mol/L。

3.根据权利要求2所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：试剂1和试剂2中NaCl终浓度均为1％w/v。

4.根据权利要求3所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：试剂1中TritonX-100终浓度均为0.15％w/v。

5.根据权利要求4所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：试剂1和试剂2中Proclin950终浓度为0.1％w/v。

6.根据权利要求5所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：试剂1和试剂2中BSA浓度为1％w/v，试剂1中鼠抗人IgM抗体终浓度为0.04％w/v，试剂1中聚乙二醇6000终浓度为1％-2％w/v。

7.根据权利要求6所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：所述缓冲液B为pH7.5磷酸盐缓冲液，试剂2中缓冲液B终浓度为0.05mol/L。

8.根据权利要求7所述的全血PCT免疫比浊试剂，其特征在于：试剂2中包被PCT抗体的乳胶微球浓度为0.2％w/v。