CN113045687B - 一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和应用 - Google Patents

一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和应用，属于医药技术领域。本发明将透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米自组装体用于逆转乳腺癌阿霉素耐药，所制备的透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米自组装体一方面可保护miR34a避免其降解，提高其体内稳定性，另一方面该纳米组装体可特异性靶向于CD44高表达且miR34a低表达的肿瘤细胞，能够显著增强Dox的抗肿瘤效果，因此具有良好的实际应用之价值。提供能够用于治疗或缓解良性肿瘤或恶性肿瘤，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来，尽管乳腺癌患者的总生存率有一定程度的提高，但是化疗耐药仍是影响乳腺癌患者复发及总生存率降低的主要因素。肿瘤的多药耐药已成为阻碍肿瘤化疗和预后的最严重问题。
盐酸阿霉素(Dox·HCl)属于蒽环类抗肿瘤药物，通过靶向拓扑异构酶II抑制肿瘤细胞的生长。Dox是临床治疗乳腺癌的一线化疗药物，但其单用抑制肿瘤效果并不完全，尤其在乳腺癌晚期，乳腺癌细胞发生耐药后，更易发生侵袭转移，给临床治疗增加了难度且预后较差。
microRNA是一类长度约为18～25个核苷酸左右的小分子非编码RNA，通过与靶基因结合而抑制其功能。microRNA的表达失衡与多种疾病存在相关性。miR34a是一种抑癌基因，已被证实可通过多个靶点如Bcl-2,CD44，c-met，myc等参与各种肿瘤的进展，最近研究显示miR34a的表达水平在耐药的乳腺癌中显著下调，恢复其表达可显著抑制耐药乳腺癌的侵袭转移能力。但是作为一种microRNA,miR34a本身极易降解不稳定，且由于其带负电不易进入细胞膜，故在体内应用时受到很大限制。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种聚合物、纳米自组装体、药物递送系统及其制备方法和应用。本发明将透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米自组装体用于逆转乳腺癌阿霉素耐药，所制备的透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米自组装体一方面可保护miR34a避免其降解，提高其体内稳定性，另一方面该纳米组装体可特异性靶向于CD44高表达且miR34a低表达的肿瘤细胞，能够显著增强Dox的抗肿瘤效果，因此具有良好的实际应用之价值。
为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种聚合物，所述聚合物具有如下所示结构：
Figure BDA0002982318180000021
其中，m为不为0的自然数，进一步的，m的取值范围为80～150。
本发明的第二个方面，提供上述聚合物的制备方法，所述聚合物制备方法包括：
壳聚糖(CS)与共轭亚油酸(CLA)通过反应得到上述第一方面所述聚合物即CLA-CS。
具体的，所述制备方法包括：
向壳聚糖中加酸溶解并溶胀，与活化后共轭亚油酸反应，透析纯化后即得。壳聚糖与共轭亚油酸反应制备CLA-CS共聚物由于具有CLA疏水端和CS的亲水端，在微酸性水溶液中经超声分散或高速搅拌即能自发形成粒径约200-300nm的纳米粒，制备方法简单，原料经济易得，产物具有良好的生物相容性和生物可降解性。
本发明的第三个方面，提供上述聚合物在制备纳米自组装体中的应用。
本发明的第四个方面，提供一种纳米自组装体，所述纳米自组装体具体为透明质酸(HA)修饰的共载Dox和miR34a的纳米自组装体(HA-(Dox+miR34a)NPs)，其经由上述聚合物(CLA-CS)包载Dox和miR34a并修饰透明质酸制备得到。
本发明的第五个方面，提供上述纳米自组装体的制备方法，所述制备方法包括：将去除HCl得到的Dox加入含有CLA-CS的溶液中，超声搅拌得Dox@CLA-CS溶液，透析、过滤后即得包载Dox的CLA-CS纳米粒(Dox NPs)。将miR34a加入含有Dox NPs的体系中，高速斡旋后静置，然后向其中加入透明质酸继续高速斡旋后即得HA-(Dox+miR34a)NPs。
需要说明的是，本发明提供的透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米自组装体用于逆转乳腺癌阿霉素耐药，在本发明的发明构思下，本领域技术人员有可能尝试其他抗肿瘤药物与抑癌基因用于制备纳米自组装体；如果存在，在实现本发明所公开的技术效果下，这些技术方案均应视为本发明构思下合理延展，因此应视为包含在本发明的技术方案中。
本发明的第六个方面，提供一种药物递送系统，其包含上述聚合物和/或上述纳米自组装体。
本发明的第七个方面，提供上述聚合物、上述纳米自组装体和/或上述药物递送系统在制备用于预防和/或治疗癌症和/或肿瘤的药物中的应用。
与现有技术相比，上述一个或多个技术方案存在如下有益技术效果：
(1)上述技术方案中首次制备了透明质酸靶向共轭亚油酸修饰的共载Dox和miR34a壳聚糖纳米粒，该纳米制剂不仅解决了miR34a易降解，不稳定，体内递送困难的难点，增加了药物在肿瘤部位的蓄积，抑制了耐药肿瘤细胞的生长，抑制了耐药肿瘤细胞的侵袭转移和粘附，还可进一步增加体内抗肿瘤药效。
(2)上述技术方案制得的纳米制剂形态均匀，粒径在200nm左右，适合静脉注射，可以通过主动靶向作用蓄积于肿瘤部位。
(3)上述技术方案的HA-(Dox+miR34a)NPs具有主动靶向效应，能够蓄积于高表达CD44的阿霉素耐药的肿瘤部位。HA-(Dox+miR34a)NPs到达肿瘤部位后，与具有负电荷的肿瘤细胞膜结合，在内吞作用下入胞，之后经溶酶体摄取释放出miR34a和Dox，二者在协同作用下发挥抗肿瘤作用，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例1中制备的CLA-CS相关图，其中a)为制备流程图，b)为核磁氢谱图，c)为红外谱图。
图2为实施例2制备的HA(Dox+miR34a)NPs的TEM图。
图3为实施例3制备的HA(Dox+miR34a)NPs对MCF-7/A细胞生长抑制试验中肿瘤细胞的存活率实验结果。
图4为实施例4制备的HA(Dox+miR34a)NPs对MCF-7/A细胞的侵袭转移粘附实验结果。
图5为实施例5对HA(Dox+miR34a)NPs对荷MCF-7/A瘤细胞的裸鼠体内抗肿瘤实验的结果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
本发明的一个具体实施方式中，提供一种聚合物，所述聚合物具有如下所示结构：
Figure BDA0002982318180000051
其中，m为不为0的自然数；进一步的，m的取值范围为80～150。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述聚合物的制备方法，所述聚合物制备方法包括：
壳聚糖(CS)与共轭亚油酸(CLA)通过反应得到上述第一方面所述聚合物即CLA-CS。
本发明的又一具体实施方式中，所述制备方法包括：
向壳聚糖中加酸溶解并溶胀，与活化后共轭亚油酸反应，透析纯化后即得。壳聚糖与共轭亚油酸反应制备CLA-CS共聚物由于具有CLA疏水端和CS的亲水端，在微酸性水溶液中经超声分散或高速搅拌即能自发形成粒径约200-300nm的纳米粒，制备方法简单，原料经济易得，产物具有良好的生物相容性和生物可降解性。
本发明的又一具体实施方式中，壳聚糖分子量为3～5万，所述酸为冰醋酸，所述壳聚糖溶液浓度为1～5mg/ml，优选为4mg/ml，溶胀时间为1-48小时，优选为24小时。
本发明的又一具体实施方式中，共轭亚油酸活化具体方法为：
将共轭亚油酸溶于二甲基甲酰胺中，向其中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行活化。
本发明的又一具体实施方式中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:0.5～2，优选为1:1。
本发明的又一具体实施方式中，所述共轭亚油酸中羧基(-COOH)与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1～2，优选为1:1.5。
本发明的又一具体实施方式中，所述共轭亚油酸中的羧基和壳聚糖中的氨基(-NH2)的摩尔比为0.1～1:1，优选为0.5:1，发明人进一步研究发现，CLA-CS纳米粒在制备过程中，CLA与CS加入量的比是一个关键因素，本申请合成了四个比例(N＝CLA中-COOH的摩尔量/CS中-NH2的摩尔量，N＝0.1,0.2,0.5,1)的CLA-CS，发现CLA的摩尔量占比过高(N＝1)或过低(N＝0.1)，均不能形成纳米粒。原因在于当N太高时，CLA-CS的溶解性变差甚至不溶(原因为CLA为疏水性酸)，而当N太低时，CLA-CS不能自发形成纳米粒。因此选择N＝0.5作为合成CLA-CS的条件，从而制备CLA-CS纳米粒，此时经1H-NMR计算，CLA在CLA-CS中取代度为9.03％，在此条件下，既能保证CLA-CS仍具有一定的溶解性，又可自发形成纳米粒。
本发明的又一具体实施方式中，向活化后的共轭亚油酸加入乙酸乙酯和生理盐水进行萃取，将萃取后的乙酸乙酯层蒸发得到产物再次溶于DMF中即得，然后加入溶胀后的壳聚糖和三乙胺，在室温下反应1-48小时，优选为24小时，取出产物后透析24-72小时，优选为48小时，透析截留分子量8000～12000D，每4～5小时换水，离心除沉淀，冷冻干燥后即得。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述聚合物在制备纳米自组装体中的应用。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种纳米自组装体，所述纳米自组装体具体为透明质酸(HA)修饰的共载Dox和miR34a的纳米自组装体(HA-(Dox+miR34a)NPs)，其经由上述聚合物(CLA-CS)包载Dox和miR34a并修饰透明质酸制备得到。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述纳米自组装体的制备方法，所述制备方法包括：将去除HCl得到的Dox加入含有CLA-CS的溶液中，超声搅拌得Dox@CLA-CS溶液，透析、过滤后即得包载Dox的CLA-CS纳米粒(Dox NPs)。将miR34a加入含有Dox NPs的体系中，高速斡旋后静置，然后向其中加入透明质酸继续高速斡旋后即得HA-(Dox+miR34a)NPs。
本发明的又一具体实施方式中，所述含有CLA-CS的溶液具体制备方法包括：将CLA-CS溶于冰醋酸中搅拌过夜充分溶胀后过滤即得。过滤可采用微孔滤膜，所述微孔滤膜孔径为0.80μm。
本发明的又一具体实施方式中，所述miR34a与Dox的浓度比为10-30：1-3，优选为20：1.84(μM/mM)，通过控制miR34a与Dox的浓度关系，从而更加有利于获得高质量纳米粒。
本发明的又一具体实施方式中，上述超声搅拌具体条件为：在600～1000r/min(优选为800r/min)下搅拌0.1～1h(优选为0.5h)后，探头超声10～30分钟(优选为20分钟)。通过搅拌处理，从而使原料成分分散均匀，更有利于纳米粒的形成。
本发明的又一具体实施方式中，上述透析具体方法：在0.1-2％(优选1％)醋酸溶液中透析20-30h(优选为24h)，期间换液6～7次；透析截留分子量控制为3000-4000Da，优选为3500Da。
本发明的又一具体实施方式中，上述过滤采用微孔滤膜处理，具体为：依次通过0.80和0.45μm的微孔滤膜。
本发明的又一具体实施方式中，上述透明质酸浓度对最终制备的纳米自组装体影响甚大，当透明质酸的浓度分别为2,1.5,1,0.5,0.25,0.1,0.05mg/ml时，等体积的(Dox+miR34a)NPs与HA混合，发现HA浓度为2,1.5和1mg/ml时，纳米粒明显有沉淀出现。而当HA浓度为0.5,0.25,0.1,0.05mg/ml时，纳米粒逐渐变得澄清，且粒径逐渐增大，电位逐渐升高。说明HA修饰的最适浓度出现在0.5mg/ml附近(因为此时粒径最小)。
Figure BDA0002982318180000091
因此选择HA浓度为0.5mg/ml作为修饰(Dox+miR34a)NPs的浓度。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物递送系统，其包含上述聚合物和/或上述纳米自组装体。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述聚合物、上述纳米自组装体和/或上述药物递送系统在制备用于预防和/或治疗癌症和/或肿瘤的药物中的应用。
在本发明又一具体实施方式中，所述药物可以治疗或缓解良性肿瘤或恶性肿瘤；所述癌症或肿瘤包括但不限于乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、肾癌等实体瘤；所述癌症或肿瘤为耐药性肿瘤，如MCF-7/A。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
1.CLA-CS共聚物的合成和验证
(1)首先将称取的壳聚糖(CS,分子量约3～5万)粉末，用1％的冰醋酸溶解成4mg/ml的溶液，溶胀24小时。次日，将CLA溶于7mL二甲基甲酰胺(DMF)中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)0.173g，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)0.103g(1.5倍CLA中-COOH当量)，活化2h后，加入乙酸乙酯(EA)和饱和生理盐水萃取，产物在EA层，之后取含有EA的上层溶液使用旋转蒸发仪旋蒸除去EA，将产物再次溶于DMF，加入CS(50ml)和0.25mL三乙胺，室温条件下反应24小时，取出产物，置于透析袋中，用三蒸水透析48小时(截留分子量10000D)，每4～5小时换一次水，最后离心除沉淀，-80℃预冻，冷冻干燥36小时，即得CLA-CS，取出放入干燥器中备用。取5～10mgCLA-CS，用含氘代乙酸(5％)的氘代水(D2O)溶解并置于核磁管内，采用400MHz核磁共振氢谱仪测定其核磁共振氢谱，记录化合物的化学位移值(ppm)，采用红外光谱仪记录其波长。结果如图1所示，核磁和红外结果可以证实，新合成的分子中出现了CS和CLA的峰和波长，证实了CLA-CS的成功合成。
实施例2
2.透明质酸修饰壳聚糖共载miR34a和Dox纳米给药系统的构建和表征
首先称取18mg Dox·HCl,加入1.2mlDMSO，加入30μL三乙胺，搅拌过夜以去除HCl。同时称量60mg CLA-CS溶于15mL1％冰醋酸(HAc)中，搅拌过夜，充分溶胀后，用0.80μm的微孔滤膜过滤。将上述除去HCl的Dox用1毫升注射器缓缓逐滴注射进含有CLA-CS溶液的烧杯中，在800r/min下搅拌0.5h后，探头超声20分钟，将Dox@CLA-CS溶液置于3500Da的透析袋中，在1％HAc溶液中透析24h，期间换液6～7次。取出透析袋内的溶液，依次过0.80和0.45μm的微孔滤膜，即得包载Dox的CLA-CS纳米粒，简写为Dox NPs。将100μL(20μM)miR34a加入进含有108.7μL Dox NPs(Dox的浓度为1.84mM)的体系中，2000rpm下高速下斡旋50s，静置10～30分钟，然后取108.7μL透明质酸溶液(0.5mg/ml)再次于上述包载Dox和miR34a的体系中，2000rpm斡旋50s，即得透明质酸(HA)修饰的共载Dox和miR34a的纳米自组装体(HA-(Dox+miR34a)NPs)。取一滴该纳米自组装体，滴于铜网上，用透射电镜拍照。结果如图2所示，该纳米自组装体大小均一，粒径约100nm，适合静脉注射。
实施例3
3.(HA-(Dox+miR34a)NPs)体外细胞毒性实验
将处于对数生长期的MCF-7/A细胞铺于96孔板，待24小时长满，分别加入空白纳米粒(B-NPs)、Dox、miR34aNPs、Dox NPs、(Dox+miR34a)NPs和HA-(Dox+miR34a)NPs，48、72、96小时后，加入MTT，4h后吸弃，加入DMSO，使用酶标仪在570nm波长下测定吸光度，细胞生长抑制率按照以下公式计算：
Figure BDA0002982318180000111
结果如图3显示，随着时间延长，各组对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。但是对比不同组发现，HA-(Dox+miR34a)NPs对细胞的增殖抑制作用最强。
实施例4
4.(HA-(Dox+miR34a)NPs)体外对肿瘤细胞的侵袭转移和与HUVEC细胞粘附实验
(1)transwell迁移实验
将处于对数生长期的MCF-7/A细胞铺于6孔板，每孔40万细胞，待长至80％，加入空白纳米粒(B-NPs)、Dox、miR34aNPs、Dox NPs、(Dox+miR34a)NPs和HA-(Dox+miR34a)NPs，处理24小时后，胰酶消化，无血清的培养基重悬计数，取4万细胞铺于transwell小室上层，下层加15％的血清，48小时后，甲醇冰醋酸固定，结晶紫染色，荧光显微镜拍照。
(2)transwell侵袭实验
tranwell侵袭实验需要预先在transwell小室上层铺一层Matrigel胶，其余步骤与迁移一致。
(3)粘附实验
将处于对数生长期的MCF-7/A细胞铺于6孔板，每孔40万细胞，待长至80％，加入空白纳米粒(B-NPs)、Dox、miR34aNPs、Dox NPs、(Dox+miR34a)NPs和HA-(Dox+miR34a)NPs，同时将HUVEC细胞铺于24孔板(5万/孔)，无菌培养至80％融合。24小时后，收集各组细胞，无血清培养基重悬，加入DIO染料，37℃放置30min，离心，无血清培养基重悬，计数。将24孔板的HUVEC细胞用PBS洗一遍，然后加入上述重悬细胞，孵育40min后，弃去细胞悬液，PBS轻轻洗一遍，然后荧光显微镜拍照。
结果如图4显示，与对照组细胞相比，纳米粒组显著抑制了耐药细胞的侵袭转移和粘附。
实施例5
5.HA(Dox+miR34a)NPs对荷MCF-7/A瘤细胞的裸鼠体内抗肿瘤实验
裸鼠腋下接种MCF-7/A细胞(107/只)，等瘤长至100mm3左右，将裸鼠处死，瘤取出，切成均匀小块，重新接种至30只裸鼠腋下，建立移植瘤模型。待瘤长至80～100mm3，随机分组，每组6只，分别静脉注射生理盐水(control)，miR34a，Dox，(miR34a+Dox)NPs和HA(Dox+miR34a)NPs，每4天给药一次，治疗过程中记录瘤体积和体重变化，两周后处死，取出肿瘤，称重计算抑瘤率。
Figure BDA0002982318180000131
(其中Wcon为给予生理盐水组的瘤重，W样品为各治疗组的瘤重)
结果如图5显示，由于HA靶向作用的存在，HA(Dox+miR34a)NPs组肿瘤大小、体积和体重最小，说明HA(Dox+miR34a)NPs具有良好的靶向性和治疗作用。
本发明未尽事宜为公知技术。
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (24)

1.一种纳米自组装体，其特征在于，所述纳米自组装体具体为透明质酸修饰的共载Dox和miR34a的纳米自组装体，其经由CLA-CS聚合物包载Dox和miR34a并修饰透明质酸制备得到；
其中，所述CLA-CS聚合物具有如下所示结构：
Figure FDA0003528243940000011
其中，m为不为0的自然数；
其中，所述CLA-CS聚合物是由共轭亚油酸和壳聚糖反应得到；
其中，所述共轭亚油酸中的羧基和壳聚糖中的氨基的摩尔比为0.1～1:1；
所述纳米自组装体的制备方法包括：将去除HCl得到的Dox加入含有CLA-CS的溶液中，超声搅拌得Dox@CLA-CS溶液，透析、过滤后得包载Dox的CLA-CS纳米粒，即Dox NPs；将miR34a加入含有Dox NPs的体系中，斡旋后静置，然后向其中加入与Dox NPs体系等体积的透明质酸，继续斡旋后即得HA-(Dox+miR34a)NPs；透明质酸浓度控制为0.5mg/mL，miR34a与Dox的浓度比为10-30μM：1-3mM。
2.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，所述含有CLA-CS的溶液具体制备方法包括：将CLA-CS溶于冰醋酸中搅拌过夜充分溶胀后过滤即得。
3.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，所述超声搅拌具体条件为：在600～1000r/min下搅拌0.1～1h后，探头超声10～30分钟。
4.如权利要求3所述的纳米自组装体，其特征在于，超声搅拌为800r/min。
5.如权利要求3所述的纳米自组装体，其特征在于，超声搅拌时间为0.5h。
6.如权利要求3所述的纳米自组装体，其特征在于，探头超声为20分钟。
7.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，所述透析的具体方法：在0.1-2％醋酸溶液中透析20-30h，期间换液6～7次；透析截留分子量控制为3000-4000Da。
8.如权利要求7所述的纳米自组装体，其特征在于，在1％醋酸溶液中透析24h。
9.如权利要求7所述的纳米自组装体，其特征在于，透析截留分子量控制为3500Da。
10.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，过滤采用微孔滤膜处理，具体为：依次通过0.80和0.45μm的微孔滤膜。
11.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，所述miR34a与Dox的浓度比为20μM：1.84mM。
12.如权利要求1所述的纳米自组装体，其特征在于，所述CLA-CS聚合物的制备方法包括：壳聚糖与共轭亚油酸通过反应得到所述聚合物即CLA-CS；具体为向壳聚糖中加酸溶解并溶胀，与活化后共轭亚油酸反应，透析纯化后即得；
共轭亚油酸活化具体方法为：将共轭亚油酸溶于二甲基甲酰胺中，向其中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行活化；
其中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:0.5～2；
所述共轭亚油酸中羧基与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1～2；
其中，壳聚糖分子量为3～5万，所述酸为冰醋酸，所述壳聚糖溶液浓度为1～5mg/mL，溶胀时间为1-48小时。
13.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，所述壳聚糖溶液浓度为4mg/mL。
14.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，所述溶胀时间为24小时。
15.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1。
16.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，所述共轭亚油酸中羧基与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1.5。
17.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，共轭亚油酸中的羧基和壳聚糖中的氨基的摩尔比为0.5:1。
18.如权利要求12所述的纳米自组装体，其特征在于，所述CLA-CS聚合物的制备方法还包括：向活化后的共轭亚油酸加入乙酸乙酯和生理盐水进行萃取，将萃取后的乙酸乙酯层蒸发得到产物再次溶于DMF中即得，然后加入溶胀后的壳聚糖和三乙胺，在室温下反应1-48小时，取出产物后透析24-72小时，透析截留分子量8000～12000D，每4～5小时换水，离心除沉淀，冷冻干燥后即得。
19.如权利要求18所述的纳米自组装体，其特征在于，在室温下反应24小时。
20.如权利要求18所述的纳米自组装体，其特征在于，取出产物后透析48小时。
21.一种药物递送系统，其特征在于，其包含权利要求1所述纳米自组装体。
22.权利要求1所述纳米自组装体和/或权利要求21所述药物递送系统在制备用于预防和/或治疗癌症和/或肿瘤的药物中的应用。
23.如权利要求22所述的应用，其特征在于，所述药物用于治疗或缓解良性肿瘤或恶性肿瘤。
24.如权利要求22所述的应用，其特征在于，所述癌症包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和肾癌；所述肿瘤为耐药性肿瘤。
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