CN113025698A - 鉴别非平胸鸟性别的方法与所用成套试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了鉴别非平胸鸟性别的方法与所用成套试剂。本发明公开的鉴别非平胸鸟性别的方法包括：以待测非平胸鸟的基因组DNA为模板，利用成套试剂进行实时荧光定量PCR，根据实时荧光定量PCR的熔解曲线判定待测非平胸鸟的性别：如待测非平胸鸟的熔解曲线含有两个特异峰，且溶解度峰值在0.2‑0.4之间无峰或有低值峰，待测非平胸鸟为或候选为雌性；如待测非平胸鸟的熔解曲线含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2‑0.4之间无峰或有低值峰，待测非平胸鸟为或候选为雄性；成套试剂由序列表中序列1、2、3和4所示的四种单链DNA组成。本发明的方法与成套试剂具有高灵敏度、特异性、准确性，具有广泛的应用前景。

Description

鉴别非平胸鸟性别的方法与所用成套试剂
技术领域
本发明涉及生物技术领域中，鉴别非平胸鸟性别的方法与所用成套试剂。
背景技术
鹤类是中国重点保护动物，为单态性鸟，很难通过外观和形态来进行性别鉴定，给人工繁殖造成很大困难，因此对其性别的快速鉴别对鹤类的繁殖具有重要的意义。
目前对鹤类性别的鉴别常利用PCR的方法进行，但是普通PCR方法虽然具有相对较高的特异性，然而都具有一个严重的缺陷，即需要通过两轮PCR扩增，也就是需要同时做两管PCR扩增或开管取产物进行第二轮扩增，并且都需要进行配制琼脂糖凝胶电泳。正是由于PCR扩增具有较高特异性，因此极易受到污染产生假阳性结果。开管进行两轮PCR反应、配制琼脂糖凝胶等步骤又大大增加了待检测样品收到污染的可能性。另外，上述方法需要使用到具有严重毒性的DNA染料，并不利于环保。因此，目前急需一种快速、准确性高的鉴别非平胸鸟性别的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴别非平胸鸟的性别。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了鉴别或辅助鉴别非平胸鸟性别的方法，所述方法包括：以待测非平胸鸟的基因组DNA为模板，利用成套试剂进行实时荧光定量PCR，根据实时荧光定量PCR的熔解曲线判定待测非平胸鸟的性别：如所述待测非平胸鸟的熔解曲线含有两个特异峰，且溶解度峰值(DerivativeReporter(-Rn))在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，所述待测非平胸鸟为或候选为雌性；如所述待测非平胸鸟的熔解曲线含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，所述待测非平胸鸟为或候选为雄性；
所述成套试剂由名称分别为P1、P2、P3和P4的四种单链DNA组成，所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的序列分别为序列表中序列1、2、3和4。
上述方法中，所述成套试剂中的所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的摩尔数均可相等。所述成套试剂中的所述P1、所述P2、所述P3和所述P4均可独立包装，也可包装在一起。
上述方法中，所述实时荧光定量PCR的反应体系中所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的浓度均可为1-10pmol/L，如5pmol/L。
上述方法中，所述实时荧光定量PCR的退火温度可为55-65℃，如55℃、60℃或65℃。
所述实时荧光定量PCR的反应条件可为：95℃预变性5分钟；95℃变性30秒、65℃退火30秒、72℃延伸60秒，3个循环；95℃变性30秒、60℃退火30秒、72℃延伸60秒，5个循环；95℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸60秒，32个循环。
上述方法中，所述待测非平胸鸟可为b1)或b2)：
b1)鹤科鸟；
b2)灰冠鹤、白枕鹤、黑颈鹤或丹顶鹤。
所述成套试剂，也属于本发明的保护范围。
所述成套试剂具有如下任一用途：
a1)鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别；
a2)制备鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别的试剂盒。
本发明还提供了鉴别或辅助鉴别非平胸鸟性别的试剂盒，所述试剂盒包括所述成套试剂。
所述试剂盒还可包括实时荧光定量PCR所用除引物外的其他试剂。
在本发明的一个实施例中，所述其他试剂为2×qPCRmix与ROX(50*)，2×qPCRmix与ROX(50*)均为天根生化科技(北京)有限公司产品。
所述试剂盒可仅由所述成套试剂组成，还可由所述成套试剂与所述其他试剂组成。
所述产品可为试剂盒，也可为包括鉴别非平胸鸟性别时所用仪器的系统。
所述成套试剂，或所述试剂盒的下述任一应用，也属于本发明的保护范围：
c1)鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别；
c2)制备鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别的产品。
上文中，所述非平胸鸟可为b1)或b2)：
b1)鹤科鸟；
b2)灰冠鹤、白枕鹤、黑颈鹤或丹顶鹤。
本发明的鉴别非平胸鸟性别的方法使得四条引物在一管中通过一步扩增即可完成巢氏扩增和实时荧光定量PCR，操作简便，且反应在一个管中进行扩增，进而有效避免了假阳性结果，而且杜绝了有毒害的核酸染料的使用；另外，本发明的方法还具有高灵敏度、特异性、准确性的特征，鉴别雌性非平胸鸟的灵敏度可达10ng/反应体系，鉴别雄性非平胸鸟的灵敏度可达5ng/反应体系，能够利用微量样本，实现鸟类性别鉴定。本发明的鉴别非平胸鸟性别的方法以及所用成套试剂和试剂盒具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为灰冠鹤雌性个体的熔解曲线。
图2为白枕鹤雌性个体的熔解曲线。
图3为灰冠鹤雌性个体的熔解曲线。
图4为黑颈鹤雌性个体的熔解曲线。
图5为丹顶鹤雌性个体的熔解曲线。
图6为灰冠鹤雄性个体的熔解曲线。
图7为白枕鹤雄性个体的熔解曲线。
图8为黑颈鹤雄性个体的熔解曲线。
图9为丹顶鹤的雌性个体基因组浓度为40ng/μl时的熔解曲线。
图10为丹顶鹤的雌性个体基因组浓度为20ng/μl时的熔解曲线。
图11为丹顶鹤的雌性个体基因组浓度为10ng/μl时的熔解曲线。
图12为丹顶鹤的雌性个体基因组浓度为5ng/μl时的熔解曲线。
图13为丹顶鹤的雌性个体基因组浓度为2ng/μl时的熔解曲线。
图14为丹顶鹤的雄性个体基因组浓度为40ng/μl时的熔解曲线。
图15为丹顶鹤的雄性个体基因组浓度为20ng/μl时的熔解曲线。
图16为丹顶鹤的雄性个体基因组浓度为10ng/μl时的熔解曲线。
图17为丹顶鹤的雄性个体基因组浓度为5ng/μl时的熔解曲线。
图18为丹顶鹤的雄性个体基因组浓度为2ng/μl时的熔解曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA/RNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA/RNA的3′末端核苷酸。
实施例1、用于鉴别非平胸鸟性别的成套试剂的制备
本实施例提供的用于鉴别鸟类性别的成套试剂由名称分别为P1、P2、P3和P4的四种单链DNA组成，P1、P2、P3和P4的序列分别为序列表中序列1、2、3和4。该成套试剂中，P1、P2、P3和P4的摩尔数均相等，且各单链DNA均独立包装。
实施例2、非平胸鸟个体性别的鉴别方法
利用实施例1中的成套试剂鉴别非平胸鸟性别的步骤如下：
以非平胸鸟待测个体的基因组DNA(浓度为40ng/μl)为模板，利用实施例1中的成套试剂进行实时荧光定量PCR，PCR反应体系为：
Figure BDA0002335840850000041
P1溶液、P2溶液、P3溶液、P4溶液分别由RNAase free water溶解P1、P2、P3和P4得到，反应体系中引物的浓度均为5pmol/L。
所用试剂厂家及货号如下：RNAase free water：上海碧云天生物技术有限公司，货号：R0021；2×qPCRmix与ROX(50*)均为天根生化科技(北京)有限公司的SuperRealPreMix Plus(SYBR Green)(货号：FP205)中的试剂。
PCR反应条件为：95℃预变性5分钟；95℃变性30秒、65℃退火30秒、72℃延伸60秒，3个循环；95℃变性30秒、60℃退火30秒、72℃延伸60秒，5个循环；95℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸60秒，32个循环。添加熔解曲线，反应结束后收集荧光信号并判定结果。
实时荧光定量PCR在ABI 7500荧光定量PCR仪中进行。
根据实时荧光定量PCR的熔解曲线荧光吸收峰特点，判定待测个体的性别：如待测个体的熔解曲线含有两个特异峰，且溶解度峰值(Derivative Reporter(-Rn))在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，该待测个体为雌性；如待测个体的熔解曲线含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，该待测个体为雄性。其中，特异峰是指溶解度峰值在0.5以上的峰，低值峰是指满足特异峰与目标峰的溶解度峰值比值大于2的目标峰，在判断雌性个体时，两个特异峰的溶解度峰值需均为目标峰的2倍以上，目标峰才可以判断为低值峰。
实施例3、实施例1中的成套试剂的特异性
待测鸟为：灰冠鹤雌雄个体各十只；白枕鹤雌雄个体各十只；黑颈鹤雌雄个体各十只；丹顶鹤雌雄个体各十只。实验重复三次。
提取各待测鸟的静脉血液的基因组DNA，调整各基因组DNA的浓度至40ng/μl，利用实施例1中的成套试剂按照实施例2中的方法进行实时荧光定量PCR，并判定待测鸟的性别。
结果显示，灰冠鹤、白枕鹤、黑颈鹤和丹顶鹤的雌性个体的熔解曲线均含有两个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，而这些鸟中的雄性个体的熔解曲线含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，部分鸟的熔解曲线见图1-8。
表明，利用实施例1的成套试剂在鉴定鸟的性别时具有很高的特异性，准确率可达100％。
实施例4、实施例1中的成套试剂的灵敏度
将丹顶鹤的雌雄个体的基因组DNA均调整至浓度均为40ng/μl，再分别进行稀释，得到浓度分别为40ng/μl、20ng/μl、10ng/μl、5ng/μl、2ng/μl的雌性个体基因组稀释液以及浓度分别为40ng/μl、20ng/μl、10ng/μl、5ng/μl、2ng/μl的雄性个体基因组稀释液。
分别以各雌性个体基因组稀释液和雄性个体基因组稀释液为模板，利用实施例1中的成套试剂按照实施例2中的方法调整基因组DNA模板投入量后，进行实时荧光定量PCR。
结果显示，对于雌性个体，在基因组浓度分别为40ng/μl、20ng/μl、10ng/μl，且扩增投入量为1μl时熔解曲线均含有两个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，在基因组浓度分别为5ng/μl、2ng/μl，且扩增投入量为1μl时熔解曲线仅有一个特异峰，图9-13。表明，在利用实施例1的成套试剂鉴别鸟的雌性个体时的灵敏度为10ng。
对于雄性个体，在基因组浓度分别为40ng/μl、20ng/μl、10ng/μl、5ng/μl，且扩增投入量为1μl时熔解曲线均含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，在基因组浓度分别为2ng/μl，且扩增投入量为1μl时熔解曲线有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间有非特异峰，非特异峰不为低值峰，图14-18。表明，在利用实施例1的成套试剂鉴别鸟的雄性个体时的灵敏度为5ng。
<110> 北京动物园
<120> 鉴别非平胸鸟性别的方法与所用成套试剂
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 1
caccctggat tggacaacct atttc 25
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 2
cactctttcc aggaaatcaa 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 3
gttactgatt cgtctacgag a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 4
attgaaatga tccagtgctt g 21

Claims (10)

1.鉴别或辅助鉴别非平胸鸟性别的方法，包括：以待测非平胸鸟的基因组DNA为模板，利用成套试剂进行实时荧光定量PCR，根据实时荧光定量PCR的熔解曲线判定待测非平胸鸟的性别：如所述待测非平胸鸟的熔解曲线含有两个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，所述待测非平胸鸟为或候选为雌性；如所述待测非平胸鸟的熔解曲线含有一个特异峰，且溶解度峰值在0.2-0.4之间无峰或有低值峰，所述待测非平胸鸟为或候选为雄性；
所述成套试剂由名称分别为P1、P2、P3和P4的四种单链DNA组成，所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的序列分别为序列表中序列1、2、3和4。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应体系中所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的浓度均为1-10pmol/L。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的退火温度为55-65℃。
4.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述待测非平胸鸟为b1)或b2)：
b1)鹤科鸟；
b2)灰冠鹤、白枕鹤、黑颈鹤或丹顶鹤。
5.权利要求1中所述的成套试剂。
6.根据权利要求5所述的成套试剂，其特征在于：所述成套试剂具有如下任一用途：
a1)鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别；
a2)制备鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别的试剂盒。
7.鉴别或辅助鉴别非平胸鸟性别的试剂盒，包括权利要求1中所述的成套试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR所用除引物外的其他试剂。
9.权利要求5或6所述的成套试剂，或权利要求7或8所述的试剂盒的下述任一应用：
c1)鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别；
c2)制备鉴别或辅助鉴别非平胸鸟的性别的产品。
10.根据权利要求5或6所述的成套试剂，或权利要求7或8所述的试剂盒，或权利要求9所述的应用，其特征在于：所述非平胸鸟为b1)或b2)：
b1)鹤科鸟；
b2)灰冠鹤、白枕鹤、黑颈鹤或丹顶鹤。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101086013A (zh) * 2007-06-18 2007-12-12 扬州大学 一种准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法
CN207016775U (zh) * 2017-03-30 2018-02-16 北京动物园 一种检测鹤类性别的通用试剂盒
CN108315443A (zh) * 2018-04-03 2018-07-24 辽宁大学 一种准确简便鉴定沼泽山雀性别的引物及鉴定方法
CN108624702A (zh) * 2018-05-21 2018-10-09 天津海睿斯生物科技有限公司 一种简便快速鉴别鸟类性别的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101086013A (zh) * 2007-06-18 2007-12-12 扬州大学 一种准确简便的蓑羽鹤性别鉴定方法
CN207016775U (zh) * 2017-03-30 2018-02-16 北京动物园 一种检测鹤类性别的通用试剂盒
CN108315443A (zh) * 2018-04-03 2018-07-24 辽宁大学 一种准确简便鉴定沼泽山雀性别的引物及鉴定方法
CN108624702A (zh) * 2018-05-21 2018-10-09 天津海睿斯生物科技有限公司 一种简便快速鉴别鸟类性别的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
W-B BAO等: "Sex Identification of Seven Species of Cranes in China by PCR", 《JOURNAL OF ANIMAL AND VETERINARY ADVANCES》 *
孙志明等: "基于CHD基因和EE0.6基因遗传多态鉴定白枕鹤、丹顶鹤性别研究报告", 《野生动物学报》 *
张红霞: "鹤性别鉴定及线粒体遗传多样性与鹤系统发育分析", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *
李淑玲: "丹顶鹤繁殖行为的研究", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

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