CN113025626A

CN113025626A - 一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性中的应用

Info

Publication number: CN113025626A
Application number: CN202110454217.XA
Authority: CN
Inventors: 程春红; 蔡兆明; 吴静; 李昌满; 陈丽; 王丽霞
Original assignee: Yangtze Normal University
Current assignee: Yangtze Normal University
Priority date: 2021-04-26
Filing date: 2021-04-26
Publication date: 2021-06-25
Anticipated expiration: 2041-04-26
Also published as: CN113025626B

Abstract

本发明公开了一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性中的应用，所述BjuEAR1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的茎瘤芥BjuEAR1基因能够响应逆境胁迫，在逆境胁迫条件下转录水平显著提高。在植株中异源过表达BjuEAR1基因可显著提高植物的耐盐性和抗ABA能力，从而提高植物对逆境胁迫的响应。本发明不仅可以丰富茎瘤芥抗逆基因库，同时也可以为培育优质抗逆品种的分子遗传改良提供了一个重要靶点，具有重要的理论意义和应用价值。

Description

一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性中的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，特别的涉及一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性方面的应用。

背景技术

土地的盐碱化严重制约了现代农业的发展。目前盐碱地约占地球陆地面积的25％左右，全世界大约有0.2亿-0.3亿hm²的海岸湿地和红树林盐滩，同时还存在约40亿hm²的人为原因造成的次生盐碱化土地。据调查资料结果显示，全球盐碱地的面积以每年1.0×10⁶-1.5×10⁶公顷的速度增长。在我国，目前约有3000万hm²以上的土地属于盐碱地，相当于现有耕地面积的25％左右。盐胁迫主要包括土壤溶液中的水势降低造成的渗透胁迫、植物细胞质内离子浓度增高而造成的离子毒害以及高盐引起的植物生长期间的营养亏缺和氧化胁迫等一系列的次生胁迫。这些非生物胁迫使得植物光合作用下降，能耗增加，生长受到抑制，进而加速衰老而死亡。着生态环境的变化使土壤干旱和盐碱化问题日益加重，我国的干旱和盐碱化区域也不断增大，加上人口的急剧增长，对现代农业提出了巨大的挑战，应对各种环境胁迫造成的农作物损失是可持续性农业生产的基础。如何高效利用有限的淡水资源进行最大限度的农业生产，是全球性的问题，迫切需要解决。因此，深入研究植物的抗逆机制，提高农作物抗逆性，培育抗逆新品种是一项至关重要的任务。不同植物对干旱和盐胁迫的适应能力存在巨大差异，因此了解植物界各种抗逆策略的分子机制，对于改良农作物抗逆性十分必要。

茎瘤芥作为我国的特色经济作物，其膨大瘤茎是腌制榨菜的原材料，具有很高的经济价值。然而茎瘤芥生长发育过程中总是受到非生物胁迫(盐、洪涝、低温、高温、干旱等)和生物胁迫(病菌等)的影响，导致植物生长受到抑制、减产和口感不佳，从而产生了巨大的经济损失。前人研究表明，茎瘤芥对非生物胁迫具有较强的抗性，目前已经从茎瘤芥中获得多个逆境胁迫相关基因。如发明专利CN104328127A公开了茎瘤芥来源的抗逆基因BjEFh1及其植物表达载体及应用，该抗逆基因BjEFh1在提高植物耐逆境特性中的应用，尤其是提高植物在高盐条件的耐受力。发明专利CN111621504A公开了一种茎瘤芥的抗逆基因BjuIBS及其应用，BjuIBS蛋白及其编码基因过表达得到的转基因拟南芥植株，具有耐盐抗ABA性能。但有效的具有抗逆功能的候选基因比较稀缺并且对于茎瘤芥抗逆基因的研究目前仍存在很大空白。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性方面的应用，丰富了茎瘤芥抗逆基因库，为培育优质抗逆品种提供种质资源。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性方面的应用，所述BjuEAR1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的另一个目的在于，还提供了一种上述BjuEAR1基因编码的蛋白在调节植物抗逆性方面的应用，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

作为优选的，所述抗逆性为抗盐性和/或抗脱落酸胁迫。

作为优选的，所述植物为拟南芥、茎瘤芥、油菜或大白菜。

本发明的另一个目的还在于，提供了一种提高植物抗逆性的方法，使所述植物中的BjuEAR1基因相对于野生型过表达或相对于野生型增加BjuEAR1蛋白的表达量。

作为优选的，所述抗逆性为抗盐性和/或抗脱落酸胁迫。

作为优选的，所述植物为拟南芥、茎瘤芥、油菜或大白菜。

本发明的另一个目的还在于，提供了一种抗逆性植物的制备方法，包括以下步骤：将制备的或提供的含有所述的BjuEAR1基因的表达载体转化农杆菌，得到农杆菌工程菌，再将所述农杆菌工程菌浸染拟南芥，使BjuEAR1基因过表达，即得到抗逆性的转基因植物。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明的茎瘤芥BjuEAR1基因能够响应逆境胁迫，在逆境胁迫条件下转录水平显著提高。在植株中异源过表达BjuEAR1基因可显著提高植物的耐盐性和抗ABA能力，从而提高植物对逆境胁迫的响应，对于草本植物的生长发育调控具有重要科学意义。

2、本发明的茎瘤芥BjuEAR1基因具有优良抗逆功能，不仅可以丰富茎瘤芥抗逆基因库，同时也可以为培育优质抗逆品种的分子遗传改良提供了一个重要靶点，具有重要的理论意义和应用价值。

3、采用本发明培育优质的耐盐作物品种可在盐胁迫条件下提高作物产量和品质，具有很大的应用价值，还将为有效利用该基因资源通过分子设计培育耐逆稳产的农作物新品种提供理论依据。

附图说明

图1为茎瘤芥在胁迫处理下BjuEAR1基因的定量表达分析。

图2为BjuEAR1基因在茎瘤芥不同组织的表达分析。

图3为茎瘤芥BjuEAR1蛋白的亚细胞定位分析；从左到右依次分别是激发光下暗场图、组合图和白光下明场图。

图4为过表达的转基因拟南芥株系的分子检测示意图。

图5为过表达BjuEAR1的转基因拟南芥植株在ABA处理下的表型图；col-0为野生型拟南芥植株，2-3、3-1和5-3分别是转基因拟南芥株系。

图6为过表达BjuEAR1的转基因拟南芥植株在NaCl处理下的表型图；col-0为野生型拟南芥植株，2-3、3-1和5-3分别是转基因拟南芥株系。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细说明。实施例中所述原料如无特殊说明，即为普通市售产品。实施例中所述的实验方法无特别说明，即按常规分子生物学实验方法操作。

实施例1

为了进一步验证BjuEAR1参与茎瘤芥对逆境胁迫的响应，对萌发后7天的茎瘤芥幼苗分别施加低温(4℃)、200mM NaCl和50μM ABA的胁迫处理，于处理后的3h取样，采用Trizol试剂(Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取总RNA，利用PrimeScript^TM RTreagent Kitwith gDNA Eraser(PR047A,TaKaRa)反转录获得cDNA，用SYBR Premix Ex Taq^TM II(PR820A,TaKaRa)试剂进行定量PCR检测，分析BjuEAR1基因在不同逆境胁迫条件下的表达水平，结果如图1所示。

检测BjuEAR1基因的引物为：

BjuEAR1-QF:TTACTCTTGGAAGCCCACTAAC

BjuEAR1-QR:GTAACCACCACACCCATTGA

结果表明，与对照组CK相比，在50μM ABA、低温(4℃)和200mM NaCl处理下，BjuEAR1的转录水平都受到显著诱导，尤其在ABA处理下，BjuEAR1的表达量约提高了5倍，说明BjuEAR1受NaCl、低温和ABA的诱导表达，预示着该基因在茎瘤芥响应逆境胁迫过程中发挥重要功能。

实施例2克隆茎瘤芥BjuEAR1基因序列

为了验证茎瘤芥BjuEAR1全长基因，设计特异性引物(BjuEAR1-F和BjuEAR1-F)进行PCR扩增分析。

取现蕾期茎瘤芥叶片组织为材料，采用TRIzol^TM Plus RNA Purification Kit(12183555，Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取总RNA，利用DNase I(18047019，Invitrogen^TM)去除残余的微量DNA，并用分光光度计测定RNA的浓度，备用。

取约2.0μg茎瘤芥叶片总RNA，按照PrimeScript II first-strand cDNAsynthesis kit(6210A,Takara)说明书步骤合成第一链cDNA。

PCR扩增体系为高保真扩增酶Prime STAR HS(R010A,TaKaRa)0.25μL，5×PrimeSTAR Buffer(Mg²⁺Plus)5μL，正向引物(BjuEAR1-F,10μM)0.5μL，反向引物(BjuEAR1-R,10μM)0.5μL，模板(DNA)1μL，dNTP(2.5mM)2μL，无菌ddH₂O补足至25μL。

正向引物和反向引物的序列如下所示：

BjuEAR1-F：ATGATGGCTTGTGGGTTAAGCAAG

BjuEAR1-R：TGAAGTAGCAATGCAGAAACGCTC

PCR反应程序为：预变性95℃，5min；95℃，30s；58℃，30s；72℃，2min，35个循环；72℃，10min。

获得PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分析，在紫外光照射下，在1.3kb左右可以观察到一条特异性的扩增条带。按照胶回收试剂盒(9672，Takara)纯化后备用。

利用平末端加A试剂将纯化的DNA片段加A，通过TA克隆将其与pMD20-T vector(6019，Takara)相连，连接产物转化大肠杆菌DH5a，从含有氨苄霉素(100mg/L)的LB培养板上挑取阳性克隆测序进行测序分析，结果表明，茎瘤芥BjuEAR1全长基因序列如SEQ IDNO.1所示，含有1356bp的开放阅读框(含终止密码)，其编码蛋白质含有451个氨基酸(如SEQID NO.2序列所示)。

为了进一步研究BjuEAR1在调控植物对逆境胁迫响应中的功能，研究选取BjuEAR1基因序列ATG上游2kb片段作为启动子序列(如SEQ ID NO.3序列所示)，采用PLACE(http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE/signalscan.html)在线启动子预测软件，对茎瘤芥BjuEAR1启动子上的顺式作用元件进行分析，发现在BjuEAR1的启动子上含有响应ABA的顺式作用元件ABRE motif(ABA response)、同时含有植物响应干旱胁迫的MBS(Droughtinducibility)作用元件以及响应病原菌和NaCl的作用元件GT1GMSCAM4(Pathogen andsalt induced)等(表1)。结果表明，BjuEAR1的表达水平受逆境胁迫的调控，该基因在植物响应逆境胁迫信号过程中具有重要功能。

表1茎瘤芥BjuEAR1基因启动子顺式作用元件分析

实施例3BjuEAR1基因的组织表达特异性分析

为了研究BjuEAR1在不同组织部位的时空表达模式，以茎瘤芥为材料，取不同组织(根、未膨大茎、膨大瘤茎、叶、花和种荚)分别用液氮磨样，采用Trizol试剂(Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取总RNA，利用PrimeScript^TM RTreagent Kit with gDNA Eraser(PR047A,TaKaRa)反转录获得cDNA，用SYBR Premix Ex Taq^TM II(PR820A,TaKaRa)试剂进行定量PCR检测，分析BjuEAR1基因在茎瘤芥各组织中的表达水平，结果如图2所示。

检测BjuEAR1基因的引物为：

BjuEAR1-QF:TTACTCTTGGAAGCCCACTAAC

BjuEAR1-QR:GTAACCACCACACCCATTGA

结果显示，BjuEAR1在茎瘤芥各个组织中均有表达，其中在根、未膨大茎和叶中表达量较高，在膨大瘤茎中表达量最低，表明BjuEAR1很可能调控瘤茎膨大。由于根生长发育的可塑性，其在植物响应非生物逆境胁迫过程中具有重要功能，而BjuEAR1在根部的高表达表明该基因对根的发育或生理功能具有十分重要的作用，也预示着BjuEAR1在植物响应逆境胁迫过程中发挥功能。

实施例4重组表达载体pTF101-BjuEAR1-GFP构建及亚细胞定位分析

(1)构建pTF101-BjuEAR1-GFP表达载体

根据茎瘤芥BjuEAR1全长基因序列(SEQ ID NO.1)，设计引物BjuEAR1-gfp-F和BjuEAR1-gfp-R，引物中引入酶切位点序列。以实施例1中TA连接的阳性克隆质粒为模板，以BjuEAR1-gfp-F(正向引物)和BjuEAR1-gfp-R(反向引物)为引物进行基因BjuEAR1的特异性扩增。

所述引物序列如下：

BjuEAR1-gfp-F：CCCGGGATGATGGCTTGTGGGTTAAGCAAG

BjuEAR1-gfp-R：GGATCCTGAAGTAGCAATGCAGAAACGCTC

其中，BjuEAR1-gfp-F的下划线序列为Sma I酶切位点，BjuEAR1-gfp-R的下划线序列为Bam HI酶切位点。

PCR反应体系：高保真扩增酶PrimeSTAR HS(R010A,TaKaRa)0.5μL，5xPrimeSTARBuffer(Mg²⁺Plus)10μL，正向引物(10μM)1μL，反向引物(10μM)1μL，模板(50倍稀释的质粒)1μL，dNTP(2.5mM)4μL，无菌ddH₂O补足至50μL。

PCR反应条件：预变性95℃，5min；95℃，30s；58℃，30s；72℃，2min，35个循环；72℃,10min。

将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。扩增得到的目的片段与预期片段大小相同，按照胶回收试剂盒(9672，Takara)的说明书步骤回收纯化，即获得目的基因片段。

用Sma I和BamHI双酶切处理pTF101-GFP表达载体。酶切体系为：pTF101-GFPvector 5μL；Sma I 0.5μL；BamHI 0.5μL；Buffer 10XK 2μL；无菌ddH₂O补足至20μL；37℃反应3h。酶切结束后，根据Takara琼脂糖凝胶回收试剂盒回收pTF101-GFP载体片段。

利用T4 DNA Ligase(FL101，Trans)构建pTF101-BjuEAR1-GFP表达载体。

连接反应体系为：

Purifed PCR fragment(回收的BjuEAR1目的片段)50ng；Linearized vector(pTF101-GFP载体)100ng；5x T4 DNA Ligase Buffer 2μL；T4 DNA Ligase 0.5μL；无菌ddH₂O补足至10μL。25℃反应30min。按照分子克隆实验指南将上述重组反应体系转化大肠杆菌DH5a，并涂布于含有壮观霉素抗性(75mg/L)的筛选培养板上，通过阳性克隆测序，获得正确的含BjuEAR1基因片段的重组表达载体pTF101-BjuEAR1-GFP。重组表达载体中报告基因GFP与目的基因BjuEAR1的5’端融合后，位于组成型启动子P35S下游，形成融合表达；BjuEAR1的3’端组装有NOS终止子，可以有效终止融合基因的转录。报告基因GFP经过蓝光激发，无需辅助因子和底物就能发出绿色荧光，作为报告基因可以检测目的基因表达情况。

(2)茎瘤芥BjuEAR1的亚细胞定位分析

1)农杆菌介导的烟草瞬时转化

通过常规冻融法将构建的重组表达载体pTF101-BjuEAR1-GFP转入农杆菌菌株GV3101中，通过PCR筛选阳性克隆。按照霍琳等(农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化,分子植物育种,2016,14(1):80-85)方法制备农杆菌注射缓冲液。选择光照培养箱中正常生长具有8-10片叶子完全展开的烟草进行注射，用去除针头的注射器将注射缓冲液缓慢推入叶片背面。然后，把转化后的植株重新放回培养箱中，培养36h-48h后进行观察。

2)GFP报告基因在烟草表皮细胞中的表达与观察

用剪刀小心剪下转化后的烟草叶片放在载玻片上，加1滴蒸馏水，制成装片；然后放在荧光显微镜上，在激发光波长488-507nm的蓝光下，进行荧光观察。结果如图3所示，在植物细胞的细胞质和细胞核内均能清晰的检测到BjuEAR1-GFP融合蛋白，说明BjuEAR1在植物的细胞质和细胞核内发挥生物学功能。

实施例5农杆菌介导的拟南芥遗传转化

拟南芥的遗传转化采用浸花法。将携带pTF101-BjuEAR1-GFP载体的农杆菌导入拟南芥。通过半定量RT-PCR鉴定得到表现型良好的过表达BjuEAR1的转基因株系(3-1、2-3和5-3)与野生型中BjuEAR1基因的表达水平。采用Trizol试剂(Invitrogen^TM)，按说明书步骤提取拟南芥叶片总RNA，利用DNase I(Invitrogen^TM)去除残余DNA，采用cDNA反转录试剂(Takara)并按照说明书步骤合成第一链cDNA。

检测目的基因引物为：

BjuEAR1-RT-F:CCATAACTTTGGTGCTGACTCATTG

BjuEAR1-RT-R:AAATCATGTGTAACCACC

拟南芥内参引物为：

AtACTIN-RT-F:TCAGCACTTTCCAGCAGATG

AtACTIN-RT-R:ATGCCTGGACCTGCTTCAT

结果如图4所示，在3个代表转基因株系(3-1、2-3和5-3)中目的基因茎瘤芥BjuEAR1均上调表达，而在野生型植株(WT)中检测不到BjuEAR1的表达，表明BjuEAR1已经导入拟南芥基因组并成功转录表达。

实施例6转基因拟南芥的表型观察与分析

将野生型WT种子和获得的转基因型株系3-1、2-3和5-3的种子经消毒、灭菌和春化处理后均匀地点播在含0和0.5μM ABA的MS培养基上，观察野生型和转基因型种子在不含和含ABA的条件下的生长状况，结果如图5所示。

从图中可以看出，在不含ABA的MS培养基上，野生型和转基因型种子的萌发和子叶转绿无明显差别；而在含ABA的MS培养基上，播种初期，野生型种子无发芽，转基因型均有部分发芽；播种4～5天后野生型发芽率与野生型相比，发芽率提高约2倍。在转绿期，转基因型子叶的转绿率也明显高于野生型子叶。由此说明BjuEAR1基因有助于提高植物在ABA胁迫下的发芽率和转绿率，即拟南芥中异源过表达BjuEAR1后调控植物对逆境胁迫的响应。

将野生型WT种子和获得的转基因型株系3-1、2-3和5-3的种子经消毒、灭菌和春化处理后均匀地点播在含0和100mM NaCl的MS培养基上，观察野生型和转基因型种子在不含和含NaCl的条件下的生长状况，结果如图6所示。

从图中可以看出，在不含NaCl的MS培养基上，野生型和转基因型种子的萌发和子叶转绿无明显差别；而在含NaCl的MS培养基上，野生型种子的发芽率仅为30％左右，而转基因型种子的发芽率约提高到70％。在子叶转绿期，野生型子叶转绿率仅为40％，而转基因型子叶的转绿率可提高到98％以上。由此说明BjuEAR1基因有助于提高植物在盐胁迫下的发芽率和转绿率，即拟南芥中异源过表达BjuEAR1后调控植物对逆境胁迫的响应。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

序列表

<110> 长江师范学院；

<120> 一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性中的应用

<160> 13

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1353

<212> DNA

<213> 茎瘤芥(Brassica juncea var. tumida Tsen et Lee)

<400> 1

atgatggctt gtgggttaag caagagcctt ggcttctctt cctcgttgaa gaagcagcaa 60

ggcatagtga ccatccttgg tggcagcagc atttcatctg caccttcact caggaggact 120

ttctccgctg acttgtcctc caagaactgg ctcacgcaga acgggactcc tcctatgaag 180

aggatctctt cctctgagaa gctccataac tttggtgctg actcattgaa ctcccaagac 240

gaagaacacg gatcaagatc tggggttgat atatggactc agattcaaga agacaagaac 300

aagaaggagc atgagaccga gccgagccaa accgatgtat ggagttcgat tttatccgac 360

aagaagaaga agacggacac ggagacggtt cctccaccgt acgttcatcc tctggtgaaa 420

cgagccagct ccttgagcga gaaaagccta gagatttgca ctgagagcct cggatccgag 480

acgggttgcg aaggcttctc ttcttatgca tcgtcggaga ctggagaggc tgaggagaat 540

cttgttcttg aagttacagt gaccaaagaa gaagaagaaa cagagtttgt tgttgaggtt 600

gaacaagaac aagtcacggt tccgaatcag acaagctgca tggagatgcc tcgaggttcg 660

tttcctccac cgattcgttc tctctcgagc cagtcgggct cagctctgca catgaaaact 720

cgccgcgaca atggacgact ggttctcgag gctgtctcta tgccgtcgca caacaacttc 780

tccgctaagc gacaagacgg acgtctcctc ctcacttttg cagaaattga ggagaaagaa 840

gacgaaactg atgaggttca gtggttcgat gaagaagaag aagtggagga agcacaagac 900

gagtgggcct ataagcccaa tgggcttcta tataaggtag cacaaaagcc tattgggcct 960

attactgttc ataggttggc atgtaagcct attggagtac cgaagataaa ctcgagatgg 1020

cccgccacgg atgagttcga aactaaaacc gatatgtcga cgccggtagt ccactctctg 1080

ccaccgaggc caagggtggc tcagctggct cggtcaatga aaccgccgtc cacagtggac 1140

gacaccgtgg gagctgcttg cttcaacaca tgtgattact cttggaagcc cactaacaat 1200

gaagtattgg ggggaaacac aaaaacccaa tttcaagccc aagactatgt ccagaaatca 1260

atgggtgtgg tggttacaca tgatttgata aatggttgca aggaaccaag gaggtctctt 1320

ttgtctgttg agcgtttctg cattgctact tca 1353

<210> 2

<211> 451

<212> PRT

<213> 茎瘤芥(Brassica juncea var. tumida Tsen et Lee)

<400> 2

Met Met Ala Cys Gly Leu Ser Lys Ser Leu Gly Phe Ser Ser Ser Leu

1 5 10 15

Lys Lys Gln Gln Gly Ile Val Thr Ile Leu Gly Gly Ser Ser Ile Ser

20 25 30

Ser Ala Pro Ser Leu Arg Arg Thr Phe Ser Ala Asp Leu Ser Ser Lys

35 40 45

Asn Trp Leu Thr Gln Asn Gly Thr Pro Pro Met Lys Arg Ile Ser Ser

50 55 60

Ser Glu Lys Leu His Asn Phe Gly Ala Asp Ser Leu Asn Ser Gln Asp

65 70 75 80

Glu Glu His Gly Ser Arg Ser Gly Val Asp Ile Trp Thr Gln Ile Gln

85 90 95

Glu Asp Lys Asn Lys Lys Glu His Glu Thr Glu Pro Ser Gln Thr Asp

100 105 110

Val Trp Ser Ser Ile Leu Ser Asp Lys Lys Lys Lys Thr Asp Thr Glu

115 120 125

Thr Val Pro Pro Pro Tyr Val His Pro Leu Val Lys Arg Ala Ser Ser

130 135 140

Leu Ser Glu Lys Ser Leu Glu Ile Cys Thr Glu Ser Leu Gly Ser Glu

145 150 155 160

Thr Gly Cys Glu Gly Phe Ser Ser Tyr Ala Ser Ser Glu Thr Gly Glu

165 170 175

Ala Glu Glu Asn Leu Val Leu Glu Val Thr Val Thr Lys Glu Glu Glu

180 185 190

Glu Thr Glu Phe Val Val Glu Val Glu Gln Glu Gln Val Thr Val Pro

195 200 205

Asn Gln Thr Ser Cys Met Glu Met Pro Arg Gly Ser Phe Pro Pro Pro

210 215 220

Ile Arg Ser Leu Ser Ser Gln Ser Gly Ser Ala Leu His Met Lys Thr

225 230 235 240

Arg Arg Asp Asn Gly Arg Leu Val Leu Glu Ala Val Ser Met Pro Ser

245 250 255

His Asn Asn Phe Ser Ala Lys Arg Gln Asp Gly Arg Leu Leu Leu Thr

260 265 270

Phe Ala Glu Ile Glu Glu Lys Glu Asp Glu Thr Asp Glu Val Gln Trp

275 280 285

Phe Asp Glu Glu Glu Glu Val Glu Glu Ala Gln Asp Glu Trp Ala Tyr

290 295 300

Lys Pro Asn Gly Leu Leu Tyr Lys Val Ala Gln Lys Pro Ile Gly Pro

305 310 315 320

Ile Thr Val His Arg Leu Ala Cys Lys Pro Ile Gly Val Pro Lys Ile

325 330 335

Asn Ser Arg Trp Pro Ala Thr Asp Glu Phe Glu Thr Lys Thr Asp Met

340 345 350

Ser Thr Pro Val Val His Ser Leu Pro Pro Arg Pro Arg Val Ala Gln

355 360 365

Leu Ala Arg Ser Met Lys Pro Pro Ser Thr Val Asp Asp Thr Val Gly

370 375 380

Ala Ala Cys Phe Asn Thr Cys Asp Tyr Ser Trp Lys Pro Thr Asn Asn

385 390 395 400

Glu Val Leu Gly Gly Asn Thr Lys Thr Gln Phe Gln Ala Gln Asp Tyr

405 410 415

Val Gln Lys Ser Met Gly Val Val Val Thr His Asp Leu Ile Asn Gly

420 425 430

Cys Lys Glu Pro Arg Arg Ser Leu Leu Ser Val Glu Arg Phe Cys Ile

435 440 445

Ala Thr Ser

450

<210> 3

<211> 2000

<212> DNA

<213> 茎瘤芥(Brassica juncea var. tumida Tsen et Lee)

<400> 3

caattaggga ttagacccgt agcgggccaa tattctggag atatgatgcg atcacacacc 60

actcaaaaaa gaagaagaat gagctcttac aatcagtgtc agtgaagaat acatgtacgt 120

acgtaggggt acgcagttga taacctttta atactttata acattttatc gttttgtgat 180

aggaccaatg atgatctcat cctcataatt ataaacatca aatatacccg atttatacat 240

atatacgcac gtatacatgc aaccacgtac acttgagaac aaaaattatt cagtcttcgt 300

gtccccatgc agcgtctctg accgtatcct actcgtatat atccagcaac ttgtgttttc 360

ctaagtaaat ttcaaacgaa atatattttc ttttaactga acataattgc taaaatttac 420

ggttattgtt ttttacgttt taggcccatc ttaagtttac gttttacacc gatattaatt 480

tcttttcgga agcttggttt cagttatctt tttctgaagc aaaatgatat tctagatatg 540

catgtaaata tataatcctc aagtgaatta cttaatagct gagctgcaac tgaaaagaag 600

gactaatgat ataaaaattg tggatttctc gatatatacg atatatataa ttcgatcata 660

ctactctaaa agtgtatgat gttttctcca ttttttgcgg ttggttttgc gtttttaatc 720

tctttgtttg gcgtctacta gtgattagaa atagttaaat tgtagatgtc aaacaaatac 780

ctcatatttt tgtttataat attaaaacta aatattttac ataacaaatg taaccgtttt 840

taccaaaaaa aaaattgtaa ccgtttaaac ttattgaatt aatttaatat aaaaaattgg 900

tgtaaaaaat ataatattgt atatattatg taatgacatg ctttaaaata aacccaagtg 960

gtagtaatag gtaacttcaa aacaataaaa aaatcctgat aatggcatcc agctttcttt 1020

gcatgttttg ggaacattct catcgtttta accctaaaga gaaagatgaa aattgtgact 1080

tccacaatgt gccacgttat tggttcaagt tcaacagagt atcgattcca tacgtcaaca 1140

gttttcttct ttttgacata aatgtatcca tttttatatg tttaatttca tatccgttac 1200

tttctctcga catacgcatt agttacaact taatagagaa ttgatagaat cacatttttt 1260

agtcctcatc tttggttgtc accgttatca tgataggcaa cttgtagatt gtgtgcatgt 1320

gcgaaattaa ttcttatagt tatatgacag ggaactaata tgtttgatac tttgatgtag 1380

ttggagcagt gggaaaacga aatcgataat tgacacaata accatacatt attagtaaaa 1440

gtaaaactat tatacactat gcaaactcgg cactctaaat gtaggtacat gttactttct 1500

tgcagtaaat agttaataac ggaacacatc ataaaacatc ttgaaaacat atgttacttt 1560

ggtgcatcat tattagaaat attttcaaac ttttaacaag tattggaggg ttttgtttat 1620

aaaagaaaaa gaaaaaaaaa attcctaaca agtaagaaaa tttgtgaaga gtcatttgat 1680

ggaggacccc acggtacatg gttccataat gagagaacca ctactatata agctcatctt 1740

cactccccct ctcttcatgt ctcattctca accatcaaac cacaaaacat catcttcttc 1800

ttcctctctt aataccacca cttaacgcac ttgaccttca cccacacttt gatctctctc 1860

aaatcatcat ccagtaagaa ggatacaaaa aatatttcat ttgttggact tgattgtaac 1920

cagtgattgt taaaacattt caattgtaat tgtgcaggaa agcgagggaa tagtgttgag 1980

agattctgat ttattttaag 2000

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 4

ttactcttgg aagcccacta ac 22

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 5

gtaaccacca cacccattga 20

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 6

atgatggctt gtgggttaag caag 24

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 7

tgaagtagca atgcagaaac gctc 24

<210> 8

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 8

cccgggatga tggcttgtgg gttaagcaag 30

<210> 9

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 9

ggatcctgaa gtagcaatgc agaaacgctc 30

<210> 10

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 10

ccataacttt ggtgctgact cattg 25

<210> 11

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 11

aaatcatgtg taaccacc 18

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 12

tcagcacttt ccagcagatg 20

<210> 13

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 13

atgcctggac ctgcttcat 19

Claims

1.一种茎瘤芥BjuEAR1基因在调节植物抗逆性方面的应用，所述BjuEAR1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述BjuEAR1基因编码的蛋白在调节植物抗逆性方面的应用，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述抗逆性为抗盐性和/或抗脱落酸胁迫。

4.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述植物为拟南芥、茎瘤芥、油菜或大白菜。

5.一种提高植物抗逆性的方法，其特征在于，使所述植物中的权利要求1中所述的基因相对于野生型过表达或相对于野生型增加权利要求2所述蛋白的表达量。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述抗逆性为抗盐性和/或抗脱落酸胁迫。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述植物为拟南芥、茎瘤芥、油菜或大白菜。

8.一种培育抗逆性增加植物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将制备的或提供的含有如权利要求1所述的BjuEAR1基因的表达载体转化农杆菌，得到农杆菌工程菌，再将所述农杆菌工程菌浸染植物，使BjuEAR1基因过表达，即得到抗逆性的转基因植物。