CN113024680A - 一种具有显著益生活性羊栖菜多糖及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有显著益生活性羊栖菜多糖及其制备方法与应用，属于羊栖菜深加工领域。该方法包括：烘干粉碎后的羊栖菜经超微粉碎、脱色后得到羊栖菜脱色粉，加入一定比例的纯水和纤维素酶，将其置于水浴下反应，灭酶后置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，反应完成后经热水法提取、离心、浓缩、醇沉、冻干后得到羊栖菜多糖。本发明的羊栖菜多糖制备方法简单、高效、安全、经济、环保，应用范围广。制备的羊栖菜多糖分子量为120～280kDa，能够促进乳杆菌生长增殖，具有显著益生活性，可用于羊栖菜功能食品的开发，对羊栖菜的精深加工有一定的意义。
Description
技术领域
本发明属于羊栖菜深加工领域，具体涉及一种具有显著益生活性羊栖菜多糖及其制备方法与应用。
背景技术
羊栖菜(Sargassumfusiforme)属于马尾藻科，是一种广泛分布于我国东南沿海地区的褐藻，在我国作为大型经济藻类种植已有多年历史。研究报道，羊栖菜含有丰富的膳食纤维、维生素和一些微量矿物质成分，脂肪含量低，同时含有多糖、蛋白质和不饱和脂肪酸等活性成分，对人体健康可产生多种有益的影响。其中，多糖一直是藻类活性成分研究热点之一，研究发现羊栖菜多糖具有抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗光老化、降血糖、降血脂、免疫调节等多种功效。因此，羊栖菜多糖的相关研究引起了广泛关注。
CN201811230177.5公开了一种羊栖菜多糖的提取方法，该方法采用初步酶解的方法，将单糖、双糖、低聚糖、生物碱等去除，然后利用特定微生物降解，将多糖充分释放出来，并优化了复合酶酶解条件，该方法的多糖提取率高，可以达到41.5-50.3％，但存在提取成本高、能耗大等缺点。CN201810082292.6公开了一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，该方法将羊栖菜回流脱脂、冷水浸提、醇沉、冷冻干燥、D101型大孔树脂脱色，再用三氟乙酸(TFA)水解，即制得分子量均一、纯度较高的低分子量羊栖菜多糖，但该方法制备步骤繁琐、耗时长。CN201910026070.7公开了一种增强羊栖菜多糖生物活性的方法，其主要于pH为4.5～7.0的缓冲溶液中、在由果胶酶和糖化酶组成的复合酶的作用下进行降解反应，该方法不但能显着提高羊栖菜多糖的抗氧化活性与胆酸结合能力，还能增强其对巨噬细胞的免疫调节活性，但存在多糖得率低、制备时间长等缺点。
目前尚未见文献报道采用高压脉冲电场结合纤维素酶处理辅助提取羊栖菜多糖。
发明内容
为了克服现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种具有显著益生活性羊栖菜多糖及其制备方法与应用。
本发明的首要目的在于提供一种羊栖菜多糖的制备方法。该方法能提高羊栖菜的深加工技术，拓宽羊栖菜的应用范围。
本发明的另一目的在于提供上述羊栖菜多糖的应用。
该方法包括：烘干粉碎后的羊栖菜经超微粉碎、脱色后得到羊栖菜脱色粉，加入一定比例的纯水和纤维素酶，将其置于水浴下反应，灭酶后置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，反应完成后经热水法提取、离心、浓缩、醇沉、冻干后得到羊栖菜多糖。本发明的羊栖菜多糖制备方法简单、高效、安全、经济、环保，应用范围广。该方法采用高压脉冲电场结合纤维素酶处理辅助提取羊栖菜多糖，操作过程中不涉及有机溶剂，制备方法简单、高效、安全、经济、环保，具有应用前景。
本发明的目的至少通过如下技术方案之一实现。
本发明提供的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)预处理：将羊栖菜洗净，烘干，粉碎，过筛，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：将步骤(1)所述羊栖菜粉末进行超微粉碎处理，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：将步骤(2)所述羊栖菜超微粉加入乙醇溶液中，升温进行回流反应(回流反应去除去除脂质及色素等小分子物质)，离心取沉淀，烘干得到羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将步骤(3)所述羊栖菜脱色粉加入纯水中，然后加入纤维素酶，得到混合液1，水浴加热进行酶解处理，灭酶处理，得到混合液2；将所述混合液1至于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，得到混合液3；将所述混合液3升温进行水热反应，得到提取液，离心去渣取上清液，真空旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液与乙醇溶液混合均匀(振荡混匀)，静置，取沉淀，用乙醇溶液洗涤，得到所述具有显著益生活性羊栖菜多糖。
进一步地，步骤(1)所述过筛的筛孔大小为20-80目。
进一步地，步骤(2)所述超微粉碎处理(低温超微粉碎)的温度为-15至-23℃，超微粉碎处理的时间为2.5-15min。
进一步地，步骤(3)所述乙醇溶液的体积百分比浓度为80-95％，所述羊栖菜超微粉与乙醇溶液的质量体积比为1:4-6g/mL；所述回流反应的温度为75-100℃，回流反应的时间为3-6h。
优选地，步骤(3)所述乙醇溶液的体积百分比浓度为95％。
进一步地，步骤(4)所述羊栖菜脱色粉与水的质量体积比为1:30-60g/mL；所述纤维素酶的质量为羊栖菜脱色粉溶液质量的0.01％-0.5％；所述酶解处理的温度为30-65℃，酶解处理的时间为2-6h。；所述酶解处理的温度为30-65℃，酶解处理的时间为2-6h。
进一步地，步骤(4)所述脉冲电场的强度为2-20KV/cm，所述高压脉冲电场处理的次数为10-80次。
进一步地，步骤(4)所述水热反应的温度为80-100℃，水热反应的时间为3-5h。
进一步地，步骤(4)所述浓缩液与上清液的体积比为1:10-20；所述乙醇溶液的体积百分比浓度为50-95％，所述浓缩液与乙醇溶液的体积比为1:4-8；所述静置的温度为4-25℃，静置的时间为8-24h。
优选地，步骤(4)中，所述具有显著益生活性羊栖菜多糖可以加入纯水中复溶，浓缩干燥，得到进一步纯化后的羊栖菜多糖。
优选地，步骤(4)所述乙醇溶液的体积百分比浓度为95％。
优选地，步骤(4)所述静置的温度为4℃。
本发明提供一种由上述的制备方法制得的具有显著益生活性羊栖菜多糖。该羊栖菜多糖的分子量为120-280kDa。
本发明提供的具有显著益生活性羊栖菜多糖在制备益生药物或保健品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
(1)本发明提供的制备方法，采用高压脉冲电场结合纤维素酶处理辅助提取羊栖菜多糖，其得率比传统热水浸提法提高1-2倍，可大幅缩短提取时间、降低能耗。
(2)本发明所制备的具有显著益生活性羊栖菜多糖能够促进乳杆菌生长增殖，具有显著的益生活性。
附图说明
图1为本发明实施例和对比例制备的羊栖菜多糖对乳杆菌增殖活性的影响结果图。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，视为可以通过市售购买得到的常规产品。
实施例1
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过20目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎5min，温度设置为-17℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为90℃，回流反应的次数为2次，共3h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:30g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，再往羊栖菜水溶液中加入溶液质量0.01％的纤维素酶，搅拌均匀，置于40℃水浴下反应4h，灭酶后置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，设置电场强度为3KV/cm，脉冲次数20次，反应完成后通过热水法提取多糖，提取条件为80℃下提取3h，得到提取液，所述提取液经离心后得到上清液，真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:10，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:4，振荡混匀，置于4℃静置12h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述具有显著益生活性羊栖菜多糖(标记为羊栖菜多糖A)。
实施例2
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过40目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎10min，温度设置为-19℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为80℃，回流反应的次数为2次，共4h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:40g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，再往羊栖菜水溶液中加入溶液质量0.05％的纤维素酶，搅拌均匀，置于50℃水浴下反应4h，灭酶后置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，设置电场强度为6KV/cm，脉冲次数50次，反应完成后通过热水法提取多糖，提取条件为100℃下提取4h，得到提取液，所述提取液经离心后所得上清液经真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:12，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:6，振荡混匀，置于4℃静置18h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述具有显著益生活性羊栖菜多糖(标记为羊栖菜多糖B)。
实施例3
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过40目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎10min，温度设置为-20℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为100℃，回流反应的次数为3次，共5h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:50g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，再往羊栖菜水溶液中加入溶液质量0.1％的纤维素酶，搅拌均匀，置于50℃水浴下反应5h，灭酶后置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，设置电场强度为12KV/cm，脉冲次数50次，反应完成后通过热水法提取多糖，提取条件为100℃下提取5h，得到提取液，所述提取液经离心后所得上清液经真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:15，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:5，振荡混匀，置于4℃静置12h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述具有显著益生活性羊栖菜多糖(标记为羊栖菜多糖C)。
对比例1
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过40目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎10min，温度设置为-20℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为100℃，回流反应的次数为3次，共5h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉。
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:50g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，采用传统热水浸提法提取羊栖菜多糖，提取条件为100℃下提取4h，提取液经离心后得到上清液，上清液经真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:15，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:5，振荡混匀，置于4℃静置12h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述羊栖菜多糖提取物(标记为羊栖菜多糖D)。
对比例2
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过40目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎10min，温度设置为-20℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为100℃，回流反应的次数为3次，共5h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:40g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，再往羊栖菜水溶液中加入溶液质量0.1％的纤维素酶，搅拌均匀，置于50℃水浴下反应4h，灭酶后通过热水浸提法提取多糖，提取条件为100℃下提取4h，提取液经离心后得到上清液，经真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:15，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:5，振荡混匀，置于4℃静置12h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述羊栖菜多糖提取物(标记为羊栖菜多糖E)。
对比例3
一种羊栖菜多糖提取物，其制备方法如下：
(1)预处理：羊栖菜洗净、烘干、粉碎后过40目筛，取筛下粉末备用，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：采用低温振动式细胞级超微粉碎机将羊栖菜粉末超微粉碎10min，温度设置为-20℃，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：取100g羊栖菜超微粉与400mL体积百分比浓度为95％乙醇溶液混合，升温进行回流反应，回流反应的温度为100℃，回流反应的次数为3次，共5h，以去除脂质及色素等小分子物质，然后离心收集沉淀并烘干，即为羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将羊栖菜脱色粉按照料液比1:50g/mL的比例加入纯水，得到羊栖菜水溶液，置于脉冲电场反应槽中进行高压脉冲电场处理，设置电场强度为12KV/cm，脉冲次数50次，反应完成后通过热水浸提法提取多糖，提取条件为100℃下提取5h，提取液经离心后所得上清液经真空旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液，所述浓缩液与上清液的体积比为1:15，再加入体积百分比浓度为95％乙醇溶液，浓缩液与加入的乙醇溶液的体积比为1:5，振荡混匀，置于4℃静置12h，离心弃上清液，所得沉淀经体积百分比浓度为95％乙醇溶液洗涤后，于室温下放置，待乙醇挥发后，加入纯水复溶，最后经真空旋转蒸发仪浓缩后冻干，即得所述所述羊栖菜多糖提取物(标记为羊栖菜多糖F)。
实施例4(效果验证)
本发明选择实施例1、2和3方法制得的羊栖菜多糖A、B和C对比了对比例1(传统热水浸提法)制得的羊栖菜多糖D的得率。此外，为了进一步评价高压脉冲电场结合纤维素酶处理的增强作用，本实施例对比了对比例2(纤维素酶处理和传统热水浸提法结合)制得的羊栖菜多糖E和对比例3(高压脉冲电场处理和传统热水浸提法结合)制得的羊栖菜多糖F的得率，多糖得率通过苯酚硫酸法进行测定，具体测定数据见表1。从表1可以看出，高压脉冲电场结合纤维素酶处理可显著提高羊栖菜多糖的得率，大幅缩短提取时间、降低能耗。
表1高压脉冲电场结合纤维素酶处理对羊栖菜多糖得率的影响
| 提取物 | 多糖得率(％) |
| 羊栖菜多糖A | 13.90±0.16 |
| 羊栖菜多糖B | 14.02±0.28 |
| 羊栖菜多糖C | 14.38±0.58 |
| 羊栖菜多糖D | 7.07±0.52 |
| 羊栖菜多糖E | 12.57±0.12 |
| 羊栖菜多糖F | 10.38±0.32 |
本实施例进一步测定了实施例1、2和3方法制得的羊栖菜多糖A、B和C的分子量，具体测定数据见表2。
表2高压脉冲电场结合纤维素酶处理羊栖菜多糖的分子量
| 提取物 | 分子量(kDa) |
| 羊栖菜多糖A | 237.54 |
| 羊栖菜多糖B | 244.30 |
| 羊栖菜多糖C | 236.73 |
本发明对经高压脉冲电场结合纤维素酶辅助提取的羊栖菜多糖(羊栖菜多糖A、B和C)检测其益生作用，采用乳杆菌进一步比较了根据实施例1、2和3方法制得的羊栖菜多糖A、B和C与对比例1(传统热水浸提)、对比例2(纤维素酶处理和传统热水浸提法结合)和对比例3(高压脉冲电场处理和传统热水浸提法结合)方法制得的羊栖菜多糖D、E和F对益生菌增殖的作用，具体实验步骤如下：
(1)菌的准备
将保存于-40℃的混合乳杆菌粉(内含保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌)稀释于0.9％无菌生理盐水中制成菌悬液，取200μL菌悬液接种到MRS液体培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24h进行活化。取活化好的菌液继续传代培养。将传代培养至稳定期的菌液3500r/min离心10min，弃去上清液，用0.9％无菌生理盐水洗涤沉淀两次，最后加入10mL生理盐水重悬菌体制成菌悬液备用。
(2)MRS培养基的制备
无碳源MRS培养基：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸粉10.0g/L、酵母提取物5.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、K2HPO4 2.0g/L、无水乙酸钠5.0g/L、MgSO4·7H2O 0.58g/L、MnSO4 0.05g/L和吐温80 1.0g/L。
为评价实施例1、2和3制得的羊栖菜多糖A、B和C与对比例1、2和3制得的羊栖菜多糖D、E和F的益生活性，分别按10.0g/L(1.0％w/v)称取羊栖菜多糖A、B、C、D、E和F作为唯一碳源加入到上述培养基中，每个样品做3次平行。以不加糖的基础培养基(无碳源MRS培养基)为空白对照。调节MRS培养基最终pH 6.2±0.2。随后将培养基置于高压灭菌锅中，121℃灭菌20min。
(3)促增殖作用的测定
按照4％(v/v)的接种量将(1)制备好的菌悬液接种至以不同羊栖菜多糖样品为碳源的培养基中，于37℃厌氧培养。在发酵24h、48h时分别取样离心(5000r/min，10min)，加入生理盐水把培养基洗掉，最后用等量生理盐水重悬，以生理盐水为空白，在600nm处测各组OD值，每个样品重复测定3次。采用比浊度法，以OD600值(即溶液中菌的总菌数)为评价指标比较各羊栖菜多糖对益生菌的增殖作用。
如图1所示，经高压脉冲电场结合纤维素酶辅助提取的羊栖菜多糖(羊栖菜多糖A、B和C)对乳杆菌有更强的促进增殖作用，表明其具有更好的益生活性。
以上实施例仅为本发明较优的实施方式，仅用于解释本发明，而非限制本发明，本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所作的改变、替换、修饰等均应属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)预处理：将羊栖菜洗净，烘干，粉碎，过筛，得到羊栖菜粉末；
(2)超微粉碎：将步骤(1)所述羊栖菜粉末进行超微粉碎处理，得到羊栖菜超微粉；
(3)脱色：将步骤(2)所述羊栖菜超微粉加入乙醇溶液中，升温进行回流反应，离心取沉淀，烘干得到羊栖菜脱色粉；
(4)多糖的提取：将步骤(3)所述羊栖菜脱色粉加入水中，得到羊栖菜脱色粉溶液，然后加入纤维素酶，得到混合液1，水浴加热进行酶解处理，灭酶处理，得到混合液2；将所述混合液1至于脉冲电场中进行高压脉冲电场处理，得到混合液3；将所述混合液3升温进行水热反应，得到提取液，离心取上清液，蒸发浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液与乙醇溶液混合均匀，静置，取沉淀，洗涤，得到所述具有显著益生活性羊栖菜多糖。
2.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述过筛的筛孔大小为20-80目。
3.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述超微粉碎处理的温度为-15至-23℃，超微粉碎处理的时间为2.5-15min。
4.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述乙醇溶液的体积百分比浓度为80-95％，所述羊栖菜超微粉与乙醇溶液的质量体积比为1:4-6g/mL；所述回流反应的温度为75-100℃，回流反应的时间为3-6h。
5.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述羊栖菜脱色粉与水的质量体积比为1:30-60g/mL；所述纤维素酶的质量为羊栖菜脱色粉溶液质量的0.01％-0.5％；所述酶解处理的温度为30-65℃，酶解处理的时间为2-6h。
6.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述脉冲电场的强度为2-20KV/cm，所述高压脉冲电场处理的次数为10-80次。
7.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述水热反应的温度为80-100℃，水热反应的时间为3-5h。
8.根据权利要求1所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述浓缩液与上清液的体积比为1:10-20；所述乙醇溶液的体积百分比浓度为50-95％，所述浓缩液与乙醇溶液的体积比为1:4-8；所述静置的温度为4-25℃，静置的时间为8-24h。
9.一种由权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的具有显著益生活性羊栖菜多糖，其特征在于，该羊栖菜多糖的分子量为120-280kDa。
10.权利要求9所述的具有显著益生活性羊栖菜多糖在制备益生药物或保健品中的应用。
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