CN113009137B - 一种试纸条、检测试纸盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种试纸条、检测试纸盒及其应用，试纸条采用带有检测线的检测端和带有质控线的质控端所形成的Y字形结构，与之配合使用的含有质控池和检测池的检测试纸盒，能够对样品检测的同时对试纸条是否有效进行检测，并且能够在样品中待检标志物含量较少的情况下进行准确检测，检测灵敏度极高，易于在医务工作或居家检测中推广使用。

Description

一种试纸条、检测试纸盒及其应用
发明领域
本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种试纸条、检测试纸盒及其应用。
背景技术
目前，市面上的检测试纸盒是采用与抗体偶联的胶体金为指示标记的双抗体夹心一步法检测样品中的待检标志物。这一类检测试纸在检测时，当被检样品通过胶体金偶联的抗体时，形成待检标志物-抗体胶体金复合物，复合物继续扩散，到达检测线(包被有待检标志物相对应的单克隆抗体)时，形成双抗体夹心胶体金复合物，在检测线处呈现色带，过量的胶体金抗体继续爬行，和羊抗鼠质控线(用于检测抗体是否失活)形成胶体金免疫复合物，呈现色带。但由于检测灵敏度的限制，只有在样品中待检标志物达到一定含量时，才可以得到较为准确的检测结果。如果样品中含有的待检标志物较少，那么就不能得到准确的检测结果。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种试纸条、检测试纸盒及其应用，解决了样品中含有少量标志物时检测结果不准确或者检测不出的技术问题，降低了检出限。
本发明的技术方案具体是这样实现的：
一种检测试纸盒，包括放置试纸条的存储盒，所述存储盒由试纸卡座和试纸卡座上盖组成，所述试纸卡座上盖设置有滴样口和滑块，所述试纸卡座一端轴连接有外壳，所述外壳由外壳底座和外壳上盖组成，所述外壳上盖设置有孔一、孔二、孔三和孔四，所述滴样口与孔一相配合使用，所述滑块穿过孔二并在孔二内滑动使用，所述孔三和孔四并列设置与外壳底座内侧设置的检测池和质控池相配合使用。
所述放置试纸条的存储盒由试纸卡座和试纸卡座上盖组成，优选地，试纸卡座和试纸卡座上盖卡扣拆卸结构；所述外壳由外壳底座和外壳上盖组成，优选地，外壳底座和外壳上盖卡扣拆卸结构。
所述外壳底座内侧设置有吸水纸架，用来放置吸水纸，用以吸收滴加样品后未与质控线/检测线结合的银纳米颗粒-抗体，同时促进样品和待检标志物-抗体-银纳米颗粒复合物向前流动的作用。
所述外壳底座设置有旋转轴，用来轴连接试纸卡座，在拨动滑块时带动存储盒里的试纸条滑动。
所述试纸条设置有带有检测线的检测端和带有质控线的质控端，所述带有检测线的检测端用来检测样品中是否含有待检标志物，所述带有质控线的质控端用来检测试纸条中是否含有银纳米颗粒-抗体或者银纳米颗粒-抗体是否失效。
所述试纸条呈Y字形，用来分别设置带有检测线的检测端和带有质控线的质控端，这样在检测待检标志物的同时可以检测试纸条是否失效，避免检测和质控分别进行，节省了检测时间。在使用时，将试纸条滑动到检测池和质控池，所述试纸条的检测端和质控端分别位于检测池和质控池的上方。
所述试纸条呈Y字形，放置在所述试纸卡座上设置的Y形槽内，Y字形试纸条的长度大于Y形槽的长度，这样能够使得试纸条露出试纸卡座，将试纸条的检测端和质控端足以置于检测池和质控池的上方，也足以置于吸水纸架的吸水纸上。
所述外壳上盖上设置有可视窗，用来观察检测线和质控线的显色状态，能够与检测池和质控池中的显色状态进行双重监控，以保证检测试纸盒的质控和检测的精准度。
当样品中存在待检标志物时，检测线与质控线呈银灰色，同时检测池和质控池中的溶液由红色变为蓝色；当样品中不存在待检标志物且试纸盒有效时，检测线无颜色变化，质控线呈银灰色，同时检测池中的溶液呈红色，质控池中的溶液由红色变为蓝色；当试纸盒失效时，质控线无颜色变化，质控池中的溶液呈红色。
一种检测试纸盒放置的试纸条，包括样品垫、银标垫和NC膜，所述NC膜上，即：所述试纸条设置有带有检测线的检测端和带有质控线的质控端，所述带有检测线的检测端用来检测样品中是否含有待检标志物，所述带有质控线的质控端用来检测试纸条中是否含有银纳米颗粒-抗体或者银纳米颗粒-抗体是否失效。
所述试纸条呈Y字形，用来分别设置带有检测线的检测端和带有质控线的质控端，这样在检测待检标志物的同时可以检测试纸条是否失效，避免检测和质控分别进行，节省了检测时间。在使用时，将试纸条滑动到检测池和质控池，所述试纸条的检测端和质控端分别位于检测池和质控池的上方。
所述检测试纸盒的应用，在检测HCG、癌症、病毒方面的应用。
所述检测试纸盒的应用，具体应用方法如下：
在滴样口滴加样品后，样品经过试纸条中含银纳米颗粒-抗体的银标垫，随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条的检测端和质控端。若待检标志物存在则形成待检标志物-抗体-银纳米颗粒复合物，复合物继续扩散，流向试纸条的检测端和质控端。复合物流经检测端的检测线时，形成双抗体夹心胶体金复合物，流经质控端的质控线时，质控线的羊抗鼠抗体与银纳米颗粒-抗体结合，以此来检测银标垫中银纳米颗粒-抗体是否失效；
拨动滑块，使试纸条的检测端和质控端分别位于检测池和质控池，先在滴样口滴加双氧水，然后将经末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液通过试纸条的检测端和质控端滴加到检测池和质控池，若样品中含有待检标志物，则检测池中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检标志物，则检测池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条失效，则质控池中溶液颜色为红色；若试纸条有效，则质控池中溶液颜色由红色变为蓝色。
所述待检标志物可以是用于早孕检测的HCG，用于癌症检测的癌症肿瘤标志物，用于病毒检测的病毒本身、病毒所携带的抗原或是人体在感染病毒后产生的抗体。即：所述检测线上可以包被待检标志物相对应的单克隆抗体，但当检测病毒时，实质上是通过检测抗病毒的抗体得方式来进行检测，因此在检测病毒时，检测线上除了包被抗体(抗病毒抗体的抗体)以外，也可以包被所检测抗体相对应的抗原。另外，病毒本身也可以作为抗原，与银标垫中的抗体和检测线上的抗体结合，形成双抗体夹心结构。
本发明所述检测试纸盒，将试纸条设计成Y字形，两个分叉分别为检测端和质控端，利用银纳米颗粒在双氧水催化下产生数以万计银离子的级联放大效应提高检测灵敏度。产生银离子后，炔烃C-H键的H被银交换，立即形成炔基银络合物，银离子使经末端炔基化修饰的金纳米颗粒聚集，检测池中的金纳米颗粒溶液变色，同时还能通过质控池中溶液颜色变化来判断试纸条是否失效。
本发明所述试纸条、检测试纸盒及其应用，能够对样品检测的同时对试纸条是否有效进行检测，并且能够在样品中待测标志物含量较少的情况下进行准确检测，检测灵敏度极高，易于在医务工作或居家检测中推广使用。
附图说明
图1是使用前所述检测试纸盒的状态图；
图2是检测和质控时所述检测试纸盒的使用状态图；
图3是所述试纸条的结构示意图；
图4是所述试纸卡座的结构示意图；
图5是所述试纸卡座上盖的结构示意图；
图6是所述外壳底座的结构示意图；
图7是所述外壳上盖的结构示意图；
图8是带有可视窗的使用前所述检测试纸盒的状态图；
图9是带有可视窗的双重检测质控时所述检测试纸盒的使用状态图。
图中1是质控端，2是检测端，3是Y形槽，4是滑块，5是滴样口，6是质控池，7是检测池，8是旋转轴，9是吸水纸架，10是孔四，11是孔二，12是孔一，13是孔三，14是试纸条，15是试纸卡座，16是试纸卡座上盖，17是外壳底座，18是外壳上盖，19是样品垫，20是银标垫，21是质控线，22是检测线，23是NC膜，24是可视窗。
具体实施方式
本发明所述产品除特别说明外，均为市售产品。
1.所述末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液得制备
(1)金纳米颗粒的制备
在100mL圆底烧瓶中，将50mL 0.01wt％的氯金酸加热至滚沸，剧烈搅拌回流，加入5mL 38.8mmoL/L柠檬酸钠，溶液颜色由淡黄色变为红色，继续加热15分钟，搅拌15分钟，将得到的溶液冷却至室温，用紫外-可见分光光度计进行表征，将合成的金纳米颗粒以4℃储存在离心管中，备用。
(2)5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide(CAS号：1304779-08-5)的合成
在二氯甲烷中丙炔胺(100μL，1.56mmoL)的冰水溶液中，滴加N-硫氧基琥珀酰亚胺(0.5g，1.56mmoL)在10mL二氯甲烷中，将混合物在室温下搅拌，然后用30mL CH2Cl2和饱和Na2CO3溶液稀释，有机层用饱和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，溶剂真空蒸发，残渣用硅胶柱层析纯化，得到5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide(CAS号：1304779-08-5)，其结构式如下：
(3)所述末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液的制备
将200μL的5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide溶液(溶解于乙醇中)滴加到10mL金纳米颗粒溶液中，用氢氧化钠将溶液的pH值调至9，将得到的溶液在室温下搅拌，然后9000rpm离心20分钟，去除多余的化合物，将得到的炔基功能化金纳米颗粒用水洗涤三次，再分散于蒸馏水中，备用。
2.银标垫的制备
(1)银纳米颗粒的制备
18mgAgNO3溶于100毫升蒸馏水中，加热至沸腾，剧烈搅拌，在沸腾溶液中加入1％柠檬酸钠2mL，继续加热30min；冷却至室温后，得到银纳米颗粒，遮光瓶中保存备用。
(2)将银纳米颗粒结合到抗体上
将步骤(1)得到的银纳米颗粒离心浓缩，分散于10mmoL/L(或更低)的PBS(pH 7.4，避免氯离子)中，快速加入1mL抗体；将混合溶液用500μL 1％BSA振荡12h，再用500μL 1％BSA封闭12h；然后离心，去除多余的抗体和银纳米颗粒，得到银纳米颗粒-抗体。
(3)银标垫的制备
将步骤(2)制备的银纳米颗粒-抗体喷射于玻璃纤维上，制成银标垫。
3.质控线和检测线按照现有技术采用划膜机分别划在所述Y形试纸的两个分支上。
实施例
一种检测试纸盒，包括放置试纸条14的存储盒，所述存储盒由试纸卡座15和试纸卡座上盖16组成，所述试纸卡座上盖16设置有滴样口5和滑块4，所述试纸卡座15一端轴连接有外壳，所述外壳由外壳底座17和外壳上盖18组成，所述外壳上盖18设置有孔一12、孔二11、孔三13和孔四10，所述滴样口5与孔一12相配合使用，所述滑块4穿过孔二11并在孔二11内滑动使用，所述孔三13和孔四10并列设置与外壳底座17内侧设置的检测池7和质控池6相配合使用。
所述放置试纸条14的存储盒由试纸卡座15和试纸卡座上盖16组成，优选地，试纸卡座15和试纸卡座上盖16卡扣拆卸结构；所述外壳由外壳底座17和外壳上盖18组成，优选地，外壳底座17和外壳上盖18卡扣拆卸结构。
所述外壳底座17内侧设置有吸水纸架9。
所述外壳底座17设置有旋转轴8。
所述试纸条14包括样品垫19、银标垫20和NC膜23，所述试纸条14设置有带有检测线22的检测端2和带有质控线21的质控端1。
所述试纸条14呈Y字形，放置在所述试纸卡座15上设置的Y形槽内。
所述外壳上盖18上设置有可视窗24，用来观察检测线22和质控线21的显色状态，能够与检测池7和质控池6中的显色状态进行双重监控，以保证检测试纸盒的质量和检测的精准度。
当样品中存在待检标志物时，检测线22与质控线21呈银灰色，同时检测池7和质控池6中的溶液由红色变为蓝色；当样品中不存在待检标志物且试纸盒有效时，检测线22无颜色变化，质控线21呈银灰色，同时检测池7中的溶液呈红色，质控池6中的溶液由红色变为蓝色；当试纸盒失效时，质控线21无颜色变化，质控池6中的溶液呈红色。
检测试纸盒的应用，在检测HCG、癌症、病毒方面的应用。
所述检测试纸盒的具体应用方法如下：
使用检测试纸盒检测样品之前，试纸条的检测端和质控端位于吸水架上，在滴样口滴加样品后，样品经过试纸条中含有银纳米颗粒-抗体的银标垫，随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条的检测端和质控端；
如果样品中含有所要检测的待检标志物，由于试纸条上含有银纳米颗粒-抗体，银纳米颗粒-抗体参与双抗体夹心结构形成的，则在检测端形成双抗体夹心结构，未参与双抗体夹心结构形成的银纳米颗粒-抗体将离开检测端直至在吸水架上吸水纸的作用下离开试纸；
之后，拨动滑块，使试纸条的检测端和质控端分别位于检测池和质控池，先在滴样口滴加双氧水，然后将经末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液通过试纸条的检测端和质控端滴加到检测池和质控池，若样品中含有待检测标志物，则检测池中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检测标志物，则检测池中溶液颜色无变化为红色；若试纸条失效，则质控池中溶液颜色为红色；若试纸条有效，则质控池中溶液颜色由红色变为蓝色。
试验例
将所述检测试纸盒用来检测HCG、癌症、病毒，分别取含有上述三种待检标志物的样品，经检测，试验结果如下：

Claims (5)

1.一种检测试纸盒，包括放置试纸条（14）的存储盒，所述存储盒由试纸卡座（15）和试纸卡座上盖（16）组成，其特征在于：所述试纸卡座上盖（16）设置有滴样口（5）和滑块（4），所述试纸卡座（15）一端轴连接有外壳，所述外壳由外壳底座（17）和外壳上盖（18）组成，所述外壳上盖（18）设置有孔一（12）、孔二（11）、孔三（13）和孔四（10），所述滴样口（5）与孔一（12）相配合使用，所述滑块（4）穿过孔二（11）并在孔二（11）内滑动使用，所述孔三（13）和孔四（10）并列设置与外壳底座（17）内侧设置的检测池（7）和质控池（6）相配合使用；
所述外壳底座（17）内侧设置有吸水纸架（9）；
所述检测试纸盒放置的试纸条（14），包括样品垫（19）、银标垫（20）和NC膜（23），所述试纸条（14）设置有带有检测线的检测端（2）和带有质控线的质控端（1）；
所述试纸条（14）呈Y字形；
所述检测试纸盒的使用方法如下：
在滴样口（5）滴加样品后，样品经过试纸条（14）中含银纳米颗粒-抗体的银标垫（20），随扩散作用将银纳米颗粒-抗体带到试纸条（14）的检测端（2）和质控端（1）；
拨动滑块（4），使试纸条（14）的检测端（2）和质控端（1）分别位于检测池（7）和质控池（6），先在滴样口（5）滴加双氧水，然后将经末端炔基化修饰的金纳米颗粒溶液通过试纸条（14）的检测端（2）和质控端（1）滴加到检测池（7）和质控池（6），若样品中含有待检标志物，则检测池（7）中溶液颜色由红色变为蓝色；若样品中不含有待检标志物，则检测池（7）中溶液颜色无变化为红色；若试纸条（14）失效，则质控池（6）中溶液颜色为红色；若试纸条（14）有效，则质控池（6）中溶液颜色由红色变为蓝色。
2.根据权利要求1所述检测试纸盒，其特征在于：所述外壳底座（17）设置有旋转轴（8）。
3.根据权利要求2所述检测试纸盒，其特征在于：所述试纸条（14）呈Y字形，放置在所述试纸卡座（15）上设置的Y形槽内。
4.根据权利要求1-3任一所述检测试纸盒，其特征在于：所述外壳上盖（18）上设置有可视窗（24）。
5.根据权利要求1-3任一所述检测试纸盒，其特征在于：所述检测试纸盒能用于检测HCG、癌症、病毒。
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