CN112999123A - 一种具有延缓衰老作用的组合物及其护肤品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有延缓衰老作用的组合物及其护肤品。本发明的组合物包含以下组分：南瓜籽提取物、橄榄叶提取物。本发明所述的组合物通过激活线粒体自噬和泛素‑蛋白酶体活性，并通过两者的协同作用来达到延缓衰老的目的。将该组合物添加至护肤品并应用于皮肤上，能够使皮肤及时清除老化损伤的线粒体及受损蛋白等细胞垃圾，加快细胞更新，减少细胞凋亡，从而延缓内源性及外源性因素导致的皮肤衰老。

Description

一种具有延缓衰老作用的组合物及其护肤品

技术领域

本发明属于化妆品领域，涉及一种具有延缓衰老作用的组合物及其护肤品。

背景技术

皮肤老化是一种自然的生理过程，是各种因素共同作用的结果。其中内源性老化主要受到遗传因素的影响，而外源性老化主要受到紫外线辐射、蓝光辐射、空气污染等环境压力及心理压力、不良生活习惯等的影响。

线粒体是人体的“能量工厂”，是细胞合成ATP的主要场所。健康高效的线粒体能为自身正常代谢生产足量的ATP，同时能产生抗氧化剂中和正常生命活动产生的自由基，从而使体内自由基维持在适量的正常水平，这对机体是有利的。然而随着年龄的增长，线粒体受到紫外线、蓝光、空气污染物等恶性环境的攻击导致受损，造成线粒体基本功能降低、ATP产生减少、活性氧自由基生成增多，进而导致蛋白质与DNA等的损伤，如果受损线粒体不能得到及时清除，则会诱发炎症、色素沉着、皱纹等问题，加速皮肤衰老。线粒体自噬对维持线粒体的正常功能与数量乃至整个细胞生命活动是至关重要的。线粒体自噬是一种特异性自噬，能够选择性地清除细胞内受损老化的线粒体，从而保证细胞内正常线粒体的数量和功能，维持细胞内环境稳定，对细胞的生长代谢起着重要作用。

泛素-蛋白酶体系统是人体内80％左右蛋白质降解的主要途径，大多数功能性蛋白质在发挥其作用后，需要在特定的时空条件下被降解，而发生错误折叠的蛋白质，以及受损蛋白质均需要蛋白酶体的降解，该过程需要ATP供能。有研究表明，随着年龄的增长，自身代谢减慢，泛素-蛋白酶体活性下降，同时随着人体抗氧化能力的下降，受损蛋白的含量上升，从而导致受损蛋白的聚集超过泛素-蛋白酶体的降解能力，进而诱发炎症、色素沉着、皱纹等皮肤问题，进一步加速皮肤衰老。

线粒体自噬和泛素-蛋白酶体系统之间存在相互作用，泛素-蛋白酶体可以辅助线粒体自噬，对体内堆积的受损线粒体进行清除；线粒体自噬可以维持线粒体的正常运转，为泛素-蛋白酶体进程提供能量。但目前未见利用两者之间的相互调控来达到延缓衰老作用的专利报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种具有延缓衰老作用的组合物，该组合物包括南瓜籽提取物、橄榄叶提取物，通过调控线粒体自噬和泛素-蛋白酶体之间相互作用，对于延缓衰老起到协同增效的作用，将该组合物添加至护肤品中，能够减轻外源性及内源性因素造成的皮肤衰老，改善因线粒体损伤或泛素-蛋白酶体功能异常造成的皮肤代谢紊乱、色素沉积、皱纹等问题，从而起到延缓衰老的作用。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种具有延缓衰老作用的组合物，包含以下组分：南瓜籽提取物、橄榄叶提取物，两种组分在延缓衰老护肤品中的质量比为：南瓜籽提取物0.00001-3％；橄榄叶提取物0.00001-3％。上述组分均以干物质计。

优选的，两种组分在延缓衰老护肤品中的质量比为：南瓜籽提取物0.001-0.3％；橄榄叶提取物0.001-0.3％。

南瓜籽提取物：以脱脂后的南瓜籽饼粕为原料，采用热水(60±5℃)浸提，离心取上清液浓缩冷冻干燥制得，主要活性成分为南瓜籽多糖及氨基酸。南瓜籽提取物的主要作用为激活线粒体自噬，清除损伤线粒体并促进线粒体更新，对线粒体进行质量把控，防止线粒体功能障碍的出现，从而提高细胞内源性抗氧化活性。

橄榄叶提取物：以阴干橄榄叶为原料，以85±5％的乙醇为提取溶剂，50±5℃超声波提取，滤液浓缩后上D101大孔树脂柱，水洗涤树脂柱除去杂质，50％乙醇水溶液进行解吸附，解吸液冷冻干燥制得，主要活性成分为橄榄苦苷。橄榄叶提取物的主要作用是激活泛素-蛋白酶体活性，对错误折叠及受损蛋白进行清除，减少对细胞的损伤。

同时，南瓜籽提取物和橄榄叶提取物两者之间还能相互协同，南瓜籽提取物维持线粒体正常功能，可以为泛素-蛋白酶体的作用过程提供更多ATP；橄榄叶提取物可以清除受损线粒体的膜蛋白，辅助线粒体自噬过程的发生。二者协同作用，可以提高机体自身抗氧化能力并及时清除细胞垃圾，改善细胞活力，达到抗衰老的目的。

上述延缓衰老的组合物，可以添加到面膜、精华液、乳液和膏霜等护肤品中。添加上述组合物的护肤品能够使皮肤及时清除老化损伤的线粒体以及受损蛋白等细胞垃圾，加快细胞更新，减少细胞凋亡，从而延缓内源性及外源性因素导致的皮肤衰老。

进一步的，本发明提供了一种包含上述两种成分的具有延缓衰老作用的护肤品，其原料及重量比为：南瓜籽提取物0.00001-3％、橄榄叶提取物0.00001-3％、保湿剂0.1-10％、乳化剂0.001-5％、皮肤调理剂0.1-15％、润肤剂0.01-30％、增稠剂0.001-5％、防腐剂0.001-2％、其他护肤品助剂0.001-5％、水补足100％。

其中保湿剂、乳化剂、皮肤调理剂(包括油溶性皮肤调理剂和水溶性皮肤调理剂中的至少一种)、润肤剂、增稠剂和防腐剂(包括水溶性防腐剂和油性防腐剂中的至少一种)均使用市售皮肤护肤品中常用的原料。其他护肤品助剂包括金属离子螯合剂、防晒剂、芳香剂、pH调节剂中的一种或多种。

所述护肤品的制备方法，包括以下步骤：

(1)将乳化剂、润肤剂、防晒剂(如果配方中含有)、油溶性皮肤调理剂(如果配方中含有)和油溶性防腐剂(如果配方中含有)加入油相罐，加热至75-80℃，保温搅拌至完全溶解，制成A相；

(2)将保湿剂、金属离子螯合剂(如果配方中含有)、增稠剂和水溶性防腐剂(如果配方中含有)加入水中，加热至80-85℃，保温搅拌至完全溶解，制成B相；

(3)将A相缓慢加入B相中，保持温度75-80℃，乳化均质10-15min，直至形成均匀的乳化体，然后加入pH调节剂(如果配方中含有pH调节剂)，搅拌均匀后通冷却水降温；

(4)温度降至40-45℃时，加入组合物(南瓜籽提取物、橄榄叶提取物)、水溶性皮肤调理剂(如果配方中含有)、芳香剂(如果配方中含有)，搅拌均匀，获得具有延缓衰老作用的护肤品。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明提供的一种具有延缓衰老作用的组合物及其护肤品，采用具有激活线粒体自噬，对线粒体进行质量把控的南瓜籽提取物；以及激活泛素-蛋白酶体活性，辅助线粒体自噬的橄榄叶提取物进行组合，激活细胞自身活力，清除细胞内垃圾，从而更好地帮助肌肤抵抗外界伤害，达到延缓衰老的目的。

(2)当南瓜籽提取物和橄榄叶提取物联合使用时，南瓜籽提取物可以通过对线粒体的质量把控，使线粒体可以更好的为橄榄叶提取物提供发挥作用时所需的ATP；橄榄叶提取物一方面可以通过泛素-蛋白酶体途径减少细胞内无用或错误折叠的蛋白，减少其对线粒体的损伤，另一方面还可以降解受损线粒体的膜蛋白，辅助线粒体自噬过程的进行。两者相互协同，有效抵抗外源性及内源性因素对皮肤的老化损伤，达到延缓衰老的效果。

附图说明

图1为实施例1～2和对比例1～3组合物对ROS清除能力的影响结果图；

图2为实施例1～2和对比例1～3组合物对蛋白酶体活性的影响结果图；

图3为实施例1～2和对比例1～3组合物对SA-β-半乳糖苷酶活性的影响结果图；

图4为实施例2对皮肤弹性的影响结果图；

其中，图1-3中，与年轻组相比，#表示p<0.05，##表示p<0.01，###表示p<0.001；与衰老组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001；

其中，图4中，与安慰剂组相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001。

具体实施方式

以下结合附图及实施例，对本发明作进一步详细说明。

本发明所使用的保湿剂包括甘油、丙二醇、丁二醇、双丙甘醇、透明质酸、聚谷氨酸、海藻糖、甜菜碱、出芽短梗酶多糖、乙酰壳糖胺中的至少一种。乳化剂包括PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇磷酸酯钾、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、C14-22醇、C12-20烷基葡糖苷、氢化卵磷脂、聚甘油-10月桂酸酯、聚甘油-6二硬脂酸酯、霍霍巴酯类、聚甘油-3蜂蜡酸酯、鲸蜡醇、PEG-60氢化蓖麻油、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-20、聚甘油-6硬脂酸酯、聚甘油-6山嵛酸酯、菊粉月桂基氨基甲酸酯、蔗糖月桂酸酯中的至少一种。皮肤调理剂包括油溶性皮肤调理剂如泛醌、红没药醇、姜根提取物、生育酚乙酸酯和水溶性皮肤调理剂如β-葡聚糖、烟酰胺、抗坏血酸、甘草酸二钾、泛醇、植物类提取物、多肽类中的至少一种。润肤剂包括鲸蜡硬脂醇、乳木果油、碳酸二辛酯、异壬酸异壬酯、辛酸/癸酸甘油三酯、霍霍巴籽油、角鲨烷、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷、C10-18脂酸甘油三酯类、白池花籽油、聚二甲基硅氧烷交联聚合物中的至少一种。增稠剂包括聚丙烯酸酯-13、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、聚丙烯酸钠、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/异癸酸乙烯酯交联聚合物、聚丙烯酸、丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/山嵛醇聚醚-25甲基丙烯酸酯交联聚合物、卡波姆、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、黄原胶中的至少一种。防腐剂包括水溶性防腐剂如羟苯甲酯、氯苯甘醚、苯氧乙醇、对羟基苯乙酮、辛酰羟肟酸、苯甲酸钠、山梨酸钾和油溶性防腐剂羟苯丙酯中的至少一种。

南瓜籽提取物：以脱脂后的南瓜籽饼粕为原料，粉碎过80目筛，60℃下烘干24h。以料液比1：40(g/mL)的条件60℃热水浸提2.5h，离心取上清液旋蒸浓缩至原体积的1/4，浓缩液冷冻干燥制得南瓜籽提取物冻干粉，主要活性成分为南瓜籽多糖及氨基酸。

橄榄叶提取物：将阴干的橄榄叶粉碎后过60目筛，以1：30(g/mL)的料液比与85％的乙醇混合，超声波辅助提取30min，温度为50℃，超声功率为70W。趁热抽滤后保留滤液，旋蒸浓缩。浓缩提取液上D101型大孔树脂柱吸附有效成分；吸附完毕后先用水洗涤树脂柱除去杂质，然后用50％乙醇水溶液进行解吸附，并收集解吸液冷冻干燥，得到橄榄叶提取物冻干粉，主要活性成分为橄榄苦苷。

实施例1～2提供一种包含具有延缓衰老作用组合物的护肤品，其原料配方如下表1所示，作为比较，表1中还同时提供了对比例1～3。对比例1～3相较实施例缺少该组合物或组合物中的一种。

表1.实施例1～2与对比例1～3延缓衰老化妆品组合物原料配方

所述护肤品的制备方法包括以下步骤：

(1)将A相各组分依次加入油相罐，加热至75-80℃，保温搅拌至完全溶解，制成A相；

(2)按所述用量将卡波姆分散在水中，搅拌分散均匀后加热至80-85℃，加入羟苯甲酯和氯苯甘醚，保温搅拌至完全溶解，制成B相；

(3)将A相缓慢加入B相中，保持温度75-80℃，乳化均质10-15min，直至形成均匀的乳化体，然后加入三乙醇胺，搅拌均匀后通冷却水降温；

(4)将南瓜籽提取物和橄榄叶提取物加入甘油和丙二醇的混合物中，搅拌至完全溶解，制成D相；

(5)步骤(3)的料液温度降至40-45℃时，加入C相各组分和D相，搅拌均匀，获得具有延缓衰老作用的护肤品。

性能测试

对上述实施例1～2和对比例1～3的组合物进行性能测试，具体如下：

实验材料准备：

将对比例1～3和实施例1～2制得的护肤品，使用不含血清的DMEM培养基稀释至10％(g/g，质量分数)，离心取上清液，并用0.22μm滤膜过滤，制得对比例1～3/实施例1～2样品母液用于下述细胞实验。

有文献表明，成纤维细胞在体外培养46代后明显老化。故本实验选取第21代成纤维细胞作为年轻组细胞对照，第54代作为衰老组细胞对照，分别用2％对比例1～3/实施例1～2样品处理第54代细胞作为样品组，观察其对衰老细胞的作用。

一、组合物对成纤维细胞活性氧(ROS)含量的影响

1、实验方法：实验设置年轻组(P₂₁细胞)、衰老组(P₅₄细胞)、样品组(P₅₄细胞+2％对比例1～3/实施例1～2样品)，每组设置3个平行，选择生长状态良好的成纤维细胞，按组别做相应处理，培养24h后，按活性氧检测试剂盒(上海碧云天生物)说明书操作后，加入DCFH-DA继续培养30min，并于多功能酶标仪488nm激发，525nm发射波长下检测培养板各孔的荧光强度。

2、实验结果：ROS可以在一定程度上反应线粒体的状态，线粒体功能正常时，ROS处于一个动态平衡的状态；线粒体受损或功能障碍时，ROS失衡，水平激增，造成细胞损伤。如图1所示，衰老组成纤维细胞ROS水平显著高于年轻组成纤维细胞，约为年轻组的(1.81±0.04)倍，而加入对比例1～3/实施例1～2的样品组，相比于衰老组ROS水平分别降低了(0.07±0.04)、(0.16±0.01)、(0.27±0.03)、(0.37±0.07)、(0.48±0.02)倍，除对比例1外，与衰老组相比均具有显著性。表明橄榄叶提取物、南瓜籽提取物可以降低细胞内ROS水平，提高衰老细胞的抗氧化能力，且二者具有协同增效的作用。

二、组合物对成纤维细胞蛋白酶体活性的影响

1、实验方法：实验设置年轻组(P₂₁细胞)、衰老组(P₅₄细胞)、样品组(P₅₄细胞+2％对比例1～3/实施例1～2样品)，每组设置3个平行，选择生长状态良好的成纤维细胞，按组别做相应处理，培养24h后，按蛋白酶体活性检测试剂盒(Millipore公司)说明书对成纤维细胞进行处理，并于多功能酶标仪380nm激发，460nm发射波长下检测培养板各孔的荧光强度。

2、实验结果：蛋白酶体是蛋白质合成过程中错误折叠的蛋白和其他受损蛋白的主要降解途径，其活性会随着年龄的增长而降低。如图2所示，衰老组成纤维细胞的蛋白酶体20S的活性显著低于年轻组，低于年轻组(2.19±0.12)倍，而加入对比例1～3/实施例1～2的样品组，相比于衰老组蛋白酶体20S的活性分别提升了(0.01±0.02)、(0.57±0.08)、(0.14±0.06)、(0.74±0.12)、(0.89±0.12)倍，除对比例1和对比例3外，与衰老组相比均具有显著性。表明橄榄叶提取物可以提升衰老细胞中蛋白酶体的活性，增强细胞清除代谢垃圾(损伤蛋白、错误折叠蛋白及发挥完自身作用的蛋白)的能力，减少细胞损伤，橄榄叶提取物和南瓜籽提取物联合使用，可以更好的激活蛋白酶体活性，达到1+1>2的效果。

三、组合物对成纤维细胞SA-β-半乳糖苷酶活性的影响

1、实验方法：实验设置年轻组(P₂₁细胞)、衰老组(P₅₄细胞)、样品组(P₅₄细胞+2％对比例1～3/实施例1～2样品)，每组设置3个平行，选择生长状态良好的成纤维细胞，按组别做相应处理，培养24h后，按细胞SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒(上海碧云天生物)说明书进行操作，在显微镜下观察技术，蓝染细胞为阳性细胞，每次随机挑选视野计数500个细胞，得到阳性细胞百分率，即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数×100％)。

2、实验结果：有研究发现体外培养人二倍体成纤维细胞在pH＝6时，β-半乳糖苷酶染色的阳性率随代龄增加而增加，因此SA-β-半乳糖苷酶可以表征细胞衰老。如图3所示，年轻组成纤维细胞的阳性率仅为(4.80±0.72)％，而衰老组的细胞阳性率达(40.27±0.70)％。而加入对比例1～3/实施例1～2的样品组，衰老细胞阳性率分别为(39.60±0.40)％、(31.67±0.70)％、(28.80±0.53)％、(24.53±0.42)％、(19.07±1.03)倍，除对比例1外，与衰老组相比均具有显著性。表明橄榄叶提取物、南瓜籽提取物可以提高细胞自身抗老化能力，增强细胞活力，且二者具有显著的协同作用。

五、人体实验

1、志愿者选择及要求

健康受试者30名(男女各15名)，年龄在30～50岁，所有受试者均无皮肤或系统性疾患史，受试部位无异常，且受试期间不涂抹任何与实验无关的药物或者化妆品。

2、测试环境

测试场所恒温恒湿，环境温度20℃～22℃，相对湿度40％～60％，测试前受试者应保持机体为稳定状态。使用35℃左右的清水清洗受试者面部后，于测试环境下静坐30min后开始测试。

3、样品准备

测试样品为实施例2，安慰剂组为对比例1，两者差别在于安慰剂组没有本发明组合物。每日早晚使用，每次使用量为0.6～1.0g/次，测试时间为2个月。

4、实验方法：皮肤弹性测定

自身半脸对照，实施例2与安慰剂随机分布。使用Cutometer MPA580探头(Courageand Khazaka，德国)进行测定，测试使用实施例2与安慰剂28天和56天后受试区域和对照区域的R2值变化。R2可以表征皮肤总弹性，表示皮肤经过负压发生变形后在一个周期内能恢复的程度，数值越大则弹性越大，一般随年龄的增大而减小。

实验结果：如图4所示，志愿者在使用测试样品56天后，实施例2组相对于安慰剂组R2值显著上升(p<0.001)，皮肤弹性较使用前提升约(15.85±2.98)％，较安慰剂组提升(9.52±1.19)％。说明该组合物及其护肤品对提升皮肤弹性有显著的效果，具有延缓衰老的作用。

Claims (7)

1.一种具有延缓衰老作用的组合物，其特征是，包含以下组分：南瓜籽提取物、橄榄叶提取物。

2.如权利要求1所述的一种具有延缓衰老作用的组合物，其特征是，所述各组分在延缓衰老护肤品中的质量比为：南瓜籽提取物0.00001-3％；橄榄叶提取物0.00001-3％。

3.如权利要求2所述的一种具有延缓衰老作用的组合物，其特征是，所述各组分在延缓衰老护肤品中的质量比为：南瓜籽提取物0.001-0.3％；橄榄叶提取物0.001-0.3％。

4.如权利要求1-3中任一项所述的一种具有延缓衰老作用的组合物，其特征是，所述南瓜籽提取物是以脱脂后的南瓜籽饼粕为原料，采用60±5℃热水浸提，离心取上清液浓缩冷冻干燥制得。

5.如权利要求1-3中任一项所述的一种具有延缓衰老作用的组合物，其特征是，所述橄榄叶提取物是以阴干橄榄叶为原料，以85±5％的乙醇为提取溶剂，50±5℃超声波提取，滤液浓缩后上D101大孔树脂柱，水洗涤树脂柱除去杂质，50％乙醇水溶液进行解吸附，解吸液冷冻干燥制得。

6.权利要求1-3中任一项所述的组合物在制备具有延缓衰老作用的护肤品中的应用，所述护肤品为面膜、精华液、乳液或膏霜。

7.一种具有延缓衰老作用的护肤品，其特征是，其原料及重量比为：南瓜籽提取物0.00001-3％、橄榄叶提取物0.00001-3％、保湿剂0.1-10％、乳化剂0.001-5％、皮肤调理剂0.1-15％、润肤剂0.01-30％、增稠剂0.001-5％、防腐剂0.001-2％、其他护肤品助剂0.001-5％、水补足100％。

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