CN112980921A - 测定用试剂组合物和试样中的物质的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及测定用试剂组合物和试样中的物质的测定方法。本发明提供2,5‑二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂和在对试样中的物质进行测定时抑制2,5‑二羟基苯磺酸或其盐对测定带来的影响的测定用试剂组合物。根据本发明的方式，提供一种测定用试剂组合物，其具备：过氧化物酶；显色试剂，其按照在过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成；以及环糊精或其类似物。

Description

测定用试剂组合物和试样中的物质的测定方法

技术领域

本发明涉及2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂以及抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定的影响的测定用试剂组合物。

背景技术

使用Trinder’s试剂和偶联剂的测定系统或使用隐色型色素的测定系统是利用过氧化氢/过氧化物酶反应的氧化还原显色系统，被用于各种临床生化检査的定量评价中(例如参见专利文献1、2)。这些测定系统中，尽管随着显色试剂的改良而实现了灵敏度的上升，但已知测定值会受到生物体试样中的酚磺乙胺等2,5-二羟基苯磺酸、抗坏血酸、N-乙酰基半胱氨酸以及胆红素等物质的影响。近年来，作为2,5-二羟基苯磺酸的钙盐的羟苯磺酸钙也被提示出对使用Trinder’s试剂和偶联剂的测定系统中的测定值产生影响。

羟苯磺酸钙是具有血管保护作用的药剂，作为糖尿病性视网膜病变、慢性静脉功能不全、各种微血管损伤的治疗药进行处方。另外除了明确了其对于糖尿病性肾病和庆大霉素所致的急性肾损伤的保护效果以外，还提示出其基于抗氧化能力的增加而对于肠道缺血再灌注损伤的保护能力。经口服用后的羟苯磺酸钙在吸收后仍以原形药物的形式存在于体内，从肾脏和肠中排泄出。根据药物动态数据，羟苯磺酸钙在500mg的单次给药后6小时后的血浆中浓度为8μg/mL。目前临床实施的给药方式为以500mg进行3次/天的给药，因此稳态的血浆中浓度推定为15μg/mL左右(例如参见非专利文献1)。

X.Guo等人明确了，在利用使用了Trinder’s试剂和偶联剂的显色系统对添加有羟苯磺酸钙的被测物中的尿酸、甘油三脂、总胆固醇、好胆固醇和坏胆固醇进行测定时，羟苯磺酸钙用量依赖性地对测定值带来影响。另外，X.Guo等人发现，羟苯磺酸钙在糖化白蛋白(GA)的测定中也用量依赖性地对测定值带来影响。即，通过针对糖化白蛋白的量不同的3种血清制作添加有多种浓度的羟苯磺酸钙的被测物并对被测物的糖化白蛋白进行测定，由此明确了，羟苯磺酸钙为16μg/mL时对糖化白蛋白的测定值具有10％左右的影响，羟苯磺酸钙为64μg/mL时对糖化白蛋白的测定值具有30％左右的影响。另外，通过对于健康人以羟苯磺酸钙500mg进行3次/天、3天的给药，测定达到稳态后的空腹时血液，并且测定进一步给予羟苯磺酸钙500mg后2小时后的血液，由此明确了，空腹时羟苯磺酸钙为7.33μg/mL时对糖化白蛋白的测定值具有4.8％的影响，2小时后羟苯磺酸钙为18.52μg/mL时对糖化白蛋白的测定值具有12.8％的影响(例如，参照非专利文献2、3参照)。

糖化白蛋白是糖化蛋白中的一种，对于进行糖尿病的诊断和管理来说是非常重要的指标。与反映过去约1～2个月的平均血糖值的血红蛋白A1c(HbA1c)相比，糖化白蛋白更直接地反映过去约2周的平均血糖值，将其作为项目导入到临床检査中。糖化白蛋白使用上述的利用过氧化氢/过氧化物酶反应的氧化还原显色系统进行测定。并不限于糖化白蛋白，使用氧化还原显色系统的测定系统还用于临床生化检査中的各种对象物质的测定，如此前所述，可知其测定值受到2,5-二羟基苯磺酸或其盐的影响。另一方面，尚未获知用于减轻该影响的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4697809号公报

专利文献2：日本专利第5274590号公报

非专利文献

非专利文献1：Xiuzhi Guo et.al、“Negative interferencesby calciumdobesilate in the detection of five serum analytesinvolving Trinder reaction-based assays”、PLoS ONE、13(2)：e0192440、2018年2月

非专利文献2：X.Guo et.al、“Negative interference by Calcium Dobesilatein Five Trinder Reaction Assays”、69th AACC Annual Scientific MeetingAbstracts、A-244、2017年

非专利文献3：X.Guo et.al、“Calcium Dobesilate can Negatively Interferewith the Detection of Glycated Albumin”、69th AACC Annual Scientific MeetingAbstracts、A-245、2017年

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于提供2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂、以及在测定试样中的物质时可抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定的影响的测定用试剂组合物。

用于解决课题的手段

本发明的方式包括下述方案。

[1]一种测定用试剂组合物，其具备：

过氧化物酶；

显色试剂，其按照在过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成；以及

环糊精或其类似物。

[2]如[1]中所述的测定用试剂组合物，其包含有效量的过氧化物酶。

[3]如[1]或[2]中所述的测定用试剂组合物，其包含有效量的显色试剂。

[4]如[1]至[3]中任一项所述的测定用试剂组合物，其包含有效量的环糊精或其类似物。

[5]如[1]至[4]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，显色试剂包含Trinder’s试剂和偶联剂。

[6]如[5]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂为选自由N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)组成的组中的1种。

[7]如[6]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂为TODB。

[8]如[5]至[7]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[9]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[10]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[11]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[12]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为30mmol/L以下。

[13]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为20mmol/L以下。

[14]如[8]中所述的测定用试剂组合物，其中，Trinder’s试剂的浓度为10mmol/L以下。

[15]如[8]至[14]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述Trinder’s试剂的浓度为该测定用试剂组合物中的Trinder’s试剂的浓度。

[16]如[8]至[14]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述Trinder’s试剂的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的Trinder’s试剂的浓度。

[17]如[5]至[16]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂为选自由4-氨基安替比林(4-AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)组成的组中的1种。

[18]如[17]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂为4-AA。

[19]如[5]至[18]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[20]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[21]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[22]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[23]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为30mmol/L以下。

[24]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为20mmol/L以下。

[25]如[19]中所述的测定用试剂组合物，其中，偶联剂的浓度为10mmol/L以下。

[26]如[19]至[25]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述偶联剂的浓度为该测定用试剂组合物中的偶联剂的浓度。

[27]如[19]至[25]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述偶联剂的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的偶联剂的浓度。

[28]如[5]至[27]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂和过氧化物酶。

[29]如[5]至[27]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂。

[30]如[5]至[27]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂和过氧化物酶。

[31]如[5]至[27]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂、。

[32]如[27]至[31]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，将第一试剂添加到试样中后，将第二试剂添加到试样中。

[33]如[27]至[32]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，第一试剂和第二试剂分开包装。

[34]如[1]至[4]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，显色试剂为隐色型色素。

[35]如[34]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素为选自由2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)组成的组中的1种。

[36]如[35]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素为DA-67。

[37]如[34]至[36]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为0.005mmol/L以上10mmol/L以下。

[38]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为0.01mmol/L以上。

[39]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为0.02mmol/L以上。

[40]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为0.05mmol/L以上。

[41]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为5mmol/L以下。

[42]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为3mmol/L以下。

[43]如[37]中所述的测定用试剂组合物，其中，隐色型色素的浓度为1mmol/L以下。

[44]如[37]至[43]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述隐色型色素的浓度为该测定用试剂组合物中的隐色型色素的浓度。

[45]如[37]至[43]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述隐色型色素的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的隐色型色素的浓度。

[46]如[1]至[45]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精和/或γ-环糊精组成的组中的至少1种。

[47]如[46]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物为α-环糊精或其类似物。

[48]如[46]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物为β-环糊精或其类似物。

[49]如[46]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物为γ-环糊精或其类似物。

[50]如[1]至[45]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精的类似物为选自由甲基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精以及羟基乙基-β-环糊精组成的组中的至少1种。

[51]如[50]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精的类似物为甲基-β-环糊精。

[52]如[50]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精的类似物为羟基丙基-β-环糊精。

[53]如[50]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精的类似物为羟基乙基-β-环糊精。

[54]如[1]至[53]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.1重量/体积％以上35重量/体积％以下。

[55]如[54]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.5重量/体积％以上。

[56]如[54]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为1.0重量/体积％以上。

[57]如[54]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为5.0重量/体积％以上。

[58]如[54]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为30.0重量/体积％以下。

[59]如[54]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物的浓度为25.0重量/体积％以下。

[60]如[54]至[59]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述环糊精或其类似物的浓度为该测定用试剂组合物中的环糊精或其类似物的浓度。

[61]如[54]至[59]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述环糊精或其类似物的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的环糊精或其类似物的浓度。

[62]如[1]至[61]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，试样中的物质为选自由尿酸(UA)、肌酐(CRE)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)以及糖化蛋白组成的组中的1种。

[63]如[62]中所述的测定用试剂组合物，其中，试样中的物质为糖化蛋白。

[64]如[62]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖化蛋白为糖化白蛋白(GA)。

[65]如[1]至[64]中任一项所述的测定用试剂组合物，其进一步具备亚铁氰化物。

[66]如[65]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物为选自由亚铁氰化钾和亚铁氰化钠组成的组中的至少1种。

[67]如[65]或[66]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物的浓度为0.001mmol/L以上10mmol/L以下。

[68]如[67]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物的浓度为0.005mmol/L以上。

[69]如[67]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物的浓度为0.01mmol/L以上。

[70]如[67]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物的浓度为0.5mmol/L以下。

[71]如[67]中所述的测定用试剂组合物，其中，亚铁氰化物的浓度为0.1mmol/L以下。

[72]如[67]至[71]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述亚铁氰化物的浓度为该测定用试剂组合物中的亚铁氰化物的浓度。

[73]如[67]至[71]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述的亚铁氰化物的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的亚铁氰化物的浓度。

[74]如[1]至[73]中任一项所述的测定用试剂组合物，其进一步具备环糊精或其类似物以外的糖类。

[75]如[74]中所述的测定用试剂组合物，其中，环糊精或其类似物以外的糖类为选自由糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖以及还原性二糖组成的组中为选自由的至少1种。

[76]如[75]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖醇为选自由赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇组成的组中的至少1种。

[77]如[75]中所述的测定用试剂组合物，其中，醛糖为选自由赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖组成的组中的至少1种。

[78]如[75]中所述的测定用试剂组合物，其中，酮糖为选自由赤藓酮糖、木酮糖以及果糖组成的组中的至少1种。

[79]如[75]中所述的测定用试剂组合物，其中，非还原性二糖为选自由海藻糖和蔗糖组成的组中的至少1种。

[80]如[75]中所述的测定用试剂组合物，其中，还原性二糖为麦芽糖。

[81]如[76]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖醇为选自由山梨糖醇和甘露醇组成的组中的至少1种。

[82]如[81]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖醇为山梨糖醇。

[83]如[81]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖醇为甘露醇。

[84]如[74]至[83]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，糖类的浓度为0.1重量/体积％以上50.0重量/体积％以下。

[85]如[84]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖类的浓度为0.5重量/体积％以上。

[86]如[84]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖类的浓度为1.0重量/体积％以上。

[87]如[84]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖类的浓度为40.0重量/体积％以下。

[88]如[84]中所述的测定用试剂组合物，其中，糖类的浓度为30.0重量/体积％以下。

[89]如[84]至[88]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述糖类的浓度为该测定用试剂组合物中的糖类的浓度。

[90]如[84]至[88]中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，上述糖类的浓度为该测定用试剂组合物与试样的混合液中的糖类的浓度。

[91]如[1]至[90]中任一项所述的测定用试剂组合物，环糊精或其类似物对可能包含在试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制。

[92]如[91]的测定用试剂组合物，其中，2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

[93]一种试样中的物质的测定方法，其包括：

准备测定用试剂组合物，其具备过氧化物酶、按照在过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成的显色试剂、以及环糊精或其类似物；以及

将测定用试剂组合物与试样混合，对显色进行测定。

[94]如[93]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含有效量的过氧化物酶。

[95]如[93]或[94]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含有效量的显色试剂。

[96]如[93]至[95]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含有效量的环糊精或其类似物。

[97]如[93]至[96]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，显色试剂包含Trinder’s试剂和偶联剂。

[98]如[97]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂为选自由N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)组成的组中的1种。

[99]如[98]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂为TODB。

[100]如[97]至[99]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[101]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[102]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[103]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[104]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为30mmol/L以下。

[105]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为20mmol/L以下。

[106]如[100]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，Trinder’s试剂的浓度为10mmol/L以下。

[107]如[100]至[106]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述Trinder’s试剂的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的Trinder’s试剂的浓度。

[108]如[97]至[107]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂为选自由4-氨基安替比林(4-AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)组成的组中的1种。

[109]如[108]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂为4-AA。

[110]如[97]至[109]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[111]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[112]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[113]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[114]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为30mmol/L以下。

[115]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为20mmol/L以下。

[116]如[110]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，偶联剂的浓度为10mmol/L以下。

[117]如[110]至[116]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述偶联剂的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的偶联剂的浓度。

[118]如[97]至[117]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂和过氧化物酶。

[119]如[97]至[117]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂。

[120]如[97]至[117]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂和过氧化物酶。

[121]如[97]至[117]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂。

[122]如[118]至[121]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，将第一试剂与试样混合后，将第二试剂与试样混合。

[123]如[118]至[122]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，在测定用试剂组合物中，第一试剂与第二试剂分开包装。

[124]如[93]至[96]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，显色试剂为隐色型色素。

[125]如[124]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素为选自由2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)组成的组中的1种。

[126]如[125]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素为DA-67。

[127]如[124]至[126]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为0.005mmol/L以上10mmol/L以下。

[128]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为0.01mmol/L以上。

[129]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为0.02mmol/L以上。

[130]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为0.05mmol/L以上。

[131]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为5mmol/L以下。

[132]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为3mmol/L以下。

[133]如[127]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，隐色型色素的浓度为1mmol/L以下。

[134]如[127]至[133]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述隐色型色素的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的隐色型色素的浓度。

[135]如[93]至[134]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精和/或γ-环糊精组成的组中的至少1种。

[136]如[135]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物为α-环糊精或其类似物。

[137]如[135]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物为β-环糊精或其类似物。

[138]如[135]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物为γ-环糊精或其类似物。

[139]如[93]至[134]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精的类似物为选自由甲基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精以及羟基乙基-β-环糊精组成的组中的至少1种。

[140]如[139]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精的类似物为甲基-β-环糊精。

[141]如[139]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精的类似物为羟基丙基-β-环糊精。

[142]如[139]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精的类似物为羟基乙基-β-环糊精。

[143]如[93]至[142]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.1重量/体积％以上35重量/体积％以下。

[144]如[143]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.5重量/体积％以上。

[145]如[143]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为1.0重量/体积％以上。

[146]如[143]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为5.0重量/体积％以上。

[147]如[143]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为30.0重量/体积％以下。

[148]如[143]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物的浓度为25.0重量/体积％以下。

[149]如[143]至[148]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述环糊精或其类似物的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的环糊精或其类似物的浓度。

[150]如[93]至[149]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，试样中的物质为选自由尿酸(UA)、肌酐(CRE)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)以及糖化蛋白组成的组中的1种。

[151]如[150]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，试样中的物质为糖化蛋白。

[152]如[150]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖化蛋白为糖化白蛋白(GA)。

[153]如[93]至[152]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物进一步具备亚铁氰化物。

[154]如[153]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物为选自由亚铁氰化钾和亚铁氰化钠组成的组中的至少1种。

[155]如[153]或[154]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物的浓度为0.001mmol/L以上10mmol/L以下。

[156]如[155]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物的浓度为0.005mmol/L以上。

[157]如[155]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物的浓度为0.01mmol/L以上。

[158]如[155]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物的浓度为0.5mmol/L以下。

[159]如[155]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，亚铁氰化物的浓度为0.1mmol/L以下。

[160]如[155]至[159]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述亚铁氰化物的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的亚铁氰化物的浓度。

[161]如[93]至[160]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，测定用试剂组合物进一步具备环糊精或其类似物以外的糖类。

[162]如[161]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物以外的糖类为选自由糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖以及还原性二糖组成的组中的至少1种。

[163]如[162]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖醇为选自由赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇组成的组中的至少1种。

[164]如[162]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，醛糖为选自由赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖组成的组中的至少1种。

[165]如[162]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，酮糖为选自由赤藓酮糖、木酮糖以及果糖组成的组中的至少1种。

[166]如[162]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，非还原性二糖为选自由海藻糖和蔗糖组成的组中的至少1种。

[167]如[162]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，还原性二糖为麦芽糖。

[168]如[163]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖醇为选自由山梨糖醇和甘露醇组成的组中的至少1种。

[169]如[168]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖醇为山梨糖醇。

[170]如[168]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖醇为甘露醇。

[171]如[161]至[170]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖类的浓度为0.1重量/体积％以上50.0重量/体积％以下。

[172]如[171]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖类的浓度为0.5重量/体积％以上。

[173]如[171]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖类的浓度为1.0重量/体积％以上。

[174]如[171]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖类的浓度为40.0重量/体积％以下。

[175]如[171]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，糖类的浓度为30.0重量/体积％以下。

[176]如[171]至[175]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，上述糖类的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的糖类的浓度。

[177]如[93]至[176]中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，环糊精或其类似物对可能包含在试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制。

[178]如[177]中所述的试样中的物质的测定方法，其中，2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

[179]将环糊精或其类似物作为2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂的应用。

[180]环糊精或其类似物在2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂的制造中的应用。

[181]环糊精或其类似物在具备过氧化物酶以及按照在过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成的显色试剂的测定用试剂组合物中作为2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍的抑制剂的应用。

[182]环糊精或其类似物在具备过氧化物酶以及按照在过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成的显色试剂的测定用试剂组合物中的在因2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍的抑制剂的制造中的应用。

[183]如[181]或[182]中所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含有效量的过氧化物酶。

[184]如[181]至[183]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含有效量的显色试剂。

[185]如[181]至[184]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含有效量的环糊精或其类似物。

[186]如[181]至[185]中任一项所述的应用，其中，显色试剂包含Trinder’s试剂和偶联剂。

[187]如[186]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂为选自由N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)组成的组中的1种。

[188]如[187]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂为TODB。

[189]如[186]至[188]中任一项所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[190]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[191]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[192]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[193]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为30mmol/L以下。

[194]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为20mmol/L以下。

[195]如[189]中所述的应用，其中，Trinder’s试剂的浓度为10mmol/L以下。

[196]如[189]至[195]中任一项所述的应用，其中，上述Trinder’s试剂的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的Trinder’s试剂的浓度。

[197]如[186]至[196]中任一项所述的应用，其中，偶联剂为选自由4-氨基安替比林(4-AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)组成的组中的1种。

[198]如[197]中所述的应用，其中，偶联剂为4-AA。

[199]如[186]至[198]中任一项所述的应用，其中，偶联剂的浓度为0.1mmol/L以上50mmol/L以下。

[200]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为0.2mmol/L以上。

[201]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为0.5mmol/L以上。

[202]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为1.0mmol/L以上。

[203]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为30mmol/L以下。

[204]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为20mmol/L以下。

[205]如[199]中所述的应用，其中，偶联剂的浓度为10mmol/L以下。

[206]如[199]至[205]中任一项所述的应用，其中，上述偶联剂的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的偶联剂的浓度。

[207]如[186]至[206]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂和过氧化物酶。

[208]如[186]至[206]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含偶联剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含Trinder’s试剂。

[209]如[186]至[206]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂和环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂和过氧化物酶。

[210]如[186]至[206]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，第一试剂包含Trinder’s试剂、过氧化物酶以及环糊精或其类似物，第二试剂包含偶联剂。

[211]如[207]至[210]中任一项所述的应用，其中，将第一试剂与试样混合后，将第二试剂与试样混合。

[212]如[207]至[211]中任一项所述的应用，其中，在测定用试剂组合物中，第一试剂与第二试剂分开包装。

[213]如[181]至[185]中任一项所述的应用，其中，显色试剂为隐色型色素。

[214]如[213]中所述的应用，其中，隐色型色素为选自由2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)组成的组中的1种。

[215]如[214]中所述的应用，其中，隐色型色素为DA-67。

[216]如[213]至[215]中任一项所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为0.005mmol/L以上10mmol/L以下。

[217]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为0.01mmol/L以上。

[218]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为0.02mmol/L以上。

[219]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为0.05mmol/L以上。

[220]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为5mmol/L以下。

[221]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为3mmol/L以下。

[222]如[216]中所述的应用，其中，隐色型色素的浓度为1mmol/L以下。

[223]如[216]至[222]中任一项所述的应用，其中，上述隐色型色素的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的隐色型色素的浓度。

[224]如[179]至[223]中任一项所述的应用，其中，环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精和/或γ-环糊精组成的组中的至少1种。

[225]如[224]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物为α-环糊精或其类似物。

[226]如[224]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物为β-环糊精或其类似物。

[227]如[224]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物为γ-环糊精或其类似物。

[228]如[179]至[223]中任一项所述的应用，其中，环糊精的类似物为选自由甲基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精以及羟基乙基-β-环糊精组成的组中的至少1种。

[229]如[228]中所述的应用，其中，环糊精的类似物为甲基-β-环糊精。

[230]如[228]中所述的应用，其中，环糊精的类似物为羟基丙基-β-环糊精。

[231]如[228]中所述的应用，其中，环糊精的类似物为羟基乙基-β-环糊精。

[232]如[179]至[231]中任一项所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.1重量/体积％以上35重量/体积％以下。

[233]如[232]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为0.5重量/体积％以上。

[234]如[232]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为1.0重量/体积％以上。

[235]如[232]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为5.0重量/体积％以上。

[236]如[232]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为30.0重量/体积％以下。

[237]如[232]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物的浓度为25.0重量/体积％以下。

[238]如[232]至[237]中任一项所述的应用，其中，上述环糊精或其类似物的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的环糊精或其类似物的浓度。

[239]如[181]至[223]中任一项所述的应用，其中，试样中的物质为选自由尿酸(UA)、肌酐(CRE)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)以及糖化蛋白组成的组中的1种。

[240]如[239]中所述的应用，其中，试样中的物质为糖化蛋白。

[241]如[239]中所述的应用，其中，糖化蛋白为糖化白蛋白(GA)。

[242]如[181]至[223]、如[240]和[241]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物进一步具备亚铁氰化物。

[243]如[242]中所述的应用，其中，亚铁氰化物为选自由亚铁氰化钾和亚铁氰化钠组成的组中的至少1种。

[244]如[242]或[243]中所述的应用，其中，亚铁氰化物的浓度为0.001mmol/L以上10mmol/L以下。

[245]如[244]中所述的应用，其中，亚铁氰化物的浓度为0.005mmol/L以上。

[246]如[244]中所述的应用，其中，亚铁氰化物的浓度为0.01mmol/L以上。

[247]如[244]中所述的应用，其中，亚铁氰化物的浓度为0.5mmol/L以下。

[248]如[244]中所述的应用，其中，亚铁氰化物的浓度为0.1mmol/L以下。

[249]如[244]至[248]中所述的应用，其中，上述亚铁氰化物的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的亚铁氰化物的浓度。

[250]如[181]至[223]以及[240]至[249]中任一项所述的应用，其中，测定用试剂组合物进一步具备环糊精或其类似物以外的糖类。

[251]如[250]中所述的应用，其中，环糊精或其类似物以外的糖类为选自由糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖以及还原性二糖组成的组中的至少1种。

[252]如[251]中所述的应用，其中，糖醇为选自由赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇组成的组中的至少1种。

[253]如[251]中所述的应用，其中，醛糖为选自由赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖组成的组中的至少1种。

[254]如[251]中所述的应用，其中，酮糖为选自由赤藓酮糖、木酮糖以及果糖组成的组中的至少1种。

[255]如[251]中所述的应用，其中，非还原性二糖为选自由海藻糖和蔗糖组成的组中的至少1种。

[256]如[251]中所述的应用，其中，还原性二糖为麦芽糖。

[257]如[252]中所述的应用，其中，糖醇为选自由山梨糖醇和甘露醇组成的组中的至少1种。

[258]如[257]中所述的应用，其中，糖醇为山梨糖醇。

[259]如[257]中所述的应用，其中，糖醇为甘露醇。

[260]如[250]至[259]中所述的应用，其中，糖类的浓度为0.1重量/体积％以上50.0重量/体积％以下。

[261]如[260]中所述的应用，其中，糖类的浓度为0.5重量/体积％以上。

[262]如[260]中所述的应用，其中，糖类的浓度为1.0重量/体积％以上。

[263]如[260]中所述的应用，其中，糖类的浓度为40.0重量/体积％以下。

[264]如[260]中所述的应用，其中，糖类的浓度为30.0重量/体积％以下。

[265]如[260]至[264]中任一项所述的应用，其中，上述糖类的浓度为测定用试剂组合物与试样的混合液中的糖类的浓度。

[266]如[181]至[223]以及[240]至[265]中任一项所述的应用，其中，环糊精或其类似物对可能包含在试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制。

[267]如[179]至[266]中任一项所述的应用，其中，环糊精或其类似物抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对物质的作用。

[268]如[179]至[267]中任一项所述的应用，其中，环糊精或其类似物抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对显色试剂的作用。

[269]如[179]至[268]中任一项所述的应用，其中，环糊精或其类似物抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对使用显色试剂的显色反应的阻碍。

[270]如[179]至[269]中任一项所述的应用，其中，2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

[271]2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其包含环糊精或其类似物。

[272]如[271]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其包含有效量的环糊精或其类似物。

[273]如[271]或[272]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对物质的作用。

[274]如[271]或[272]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对显色试剂的作用。

[275]如[271]或[272]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对使用显色试剂的显色反应的阻碍。

[276]如[274]或[275]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，其中，显色试剂为在过氧化物酶的存在下与过氧化氢反应而进行显色的显色试剂。

[277]如[274]至[276]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，显色试剂为选自由Trinder’s试剂和偶联剂组成的组中的至少1种。

[278]如[277]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，Trinder’s试剂为选自由N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)组成的组中的1种。

[279]如[278]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，Trinder’s试剂为TODB。

[280]如[277]至[279]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，偶联剂为选自由4-氨基安替比林(4-AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)组成的组中的1种。

[281]如[280]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，偶联剂为4-AA。

[282]如[274]至[276]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，显色试剂为隐色型色素。

[283]如[282]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，隐色型色素为选自由2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)组成的组中的1种。

[284]如[283]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，隐色型色素为DA-67。

[285]如[271]至[284]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对过氧化物酶的作用。

[286]如[271]至[284]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对过氧化氢的作用。

[287]如[271]至[286]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

[288]如[271]至[287]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精以及γ-环糊精组成的组中的至少1种。

[289]如[288]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精或其类似物为α-环糊精或其类似物。

[290]如[288]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精或其类似物为β-环糊精或其类似物。

[291]如[288]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精或其类似物为γ-环糊精或其类似物。

[292]如[271]至[287]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精的类似物为选自由甲基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精以及羟基乙基-β-环糊精组成的组中的至少1种。

[293]如[292]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精的类似物为甲基-β-环糊精。

[294]如[292]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精的类似物为羟基丙基-β-环糊精。

[295]如[292]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精的类似物为羟基乙基-β-环糊精。

[296]如[271]至[295]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其进一步具备亚铁氰化物。

[297]如[296]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，亚铁氰化物为选自由亚铁氰化钾和亚铁氰化钠组成的组中的至少1种。

[298]如[271]至[297]中任一项所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其进一步具备环糊精或其类似物以外的糖类。

[299]如[298]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，环糊精或其类似物以外的糖类为选自由糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖以及还原性二糖组成的组中的至少1种。

[300]如[299]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，糖醇为选自由赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇组成的组中的至少1种。

[301]如[299]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，醛糖为选自由赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖组成的组中的至少1种。

[302]如[299]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，酮糖为选自由赤藓酮糖、木酮糖以及果糖组成的组中的至少1种。

[303]如[299]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，非还原性二糖为选自由海藻糖和蔗糖组成的组中的至少1种。

[304]如[299]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，还原性二糖为麦芽糖。

[305]如[300]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，糖醇为选自由山梨糖醇和甘露醇组成的组中的至少1种。

[306]如[305]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，糖醇为山梨糖醇。

[307]如[305]中所述的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂，其中，糖醇为甘露醇。

[308]抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其包括：

将环糊精或其类似物与2,5-二羟基苯磺酸或其盐进行混合。

[309]如[308]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其包括：

将有效量的环糊精或其类似物与2,5-二羟基苯磺酸或其盐进行混合。

[310]如[308]或[309]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对物质的作用。

[311]如[308]或[309]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对显色试剂的作用。

[312]如[308]或[309]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对使用显色试剂的显色反应的阻碍。

[313]如[311]或[312]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，显色试剂是在过氧化物酶的存在下与过氧化氢反应而进行显色的显色试剂。

[314]如[311]至[313]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，显色试剂为选自由Trinder’s试剂和偶联剂组成的组中的至少1种。

[315]如[314]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，Trinder’s试剂为选自由N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)组成的组中的1种。

[316]如[315]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，Trinder’s试剂为TODB。

[317]如[314]至[316]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，偶联剂为选自由4-氨基安替比林(4-AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)组成的组中的1种。

[318]如[317]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，偶联剂为4-AA。

[319]如[311]至[313]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，显色试剂为隐色型色素。

[320]如[319]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，隐色型色素为选自由2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)组成的组中的1种。

[321]如[320]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，隐色型色素为DA-67。

[322]如[308]至[321]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

[323]如[308]至[322]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精以及γ-环糊精组成的组中的至少1种。

[324]如[323]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精或其类似物为α-环糊精或其类似物。

[325]如[323]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精或其类似物为β-环糊精或其类似物。

[326]如[323]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精或其类似物为γ-环糊精或其类似物。

[327]如[308]至[322]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精的类似物为选自由甲基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精以及羟基乙基-β-环糊精组成的组中的至少1种。

[328]如[327]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精的类似物为甲基-β-环糊精。

[329]如[327]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精的类似物为羟基丙基-β-环糊精。

[330]如[327]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精的类似物为羟基乙基-β-环糊精。

[331]如[308]至[330]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，在环糊精或其类似物与2,5-二羟基苯磺酸或其盐的混合中进一步混合亚铁氰化物。

[332]如[331]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，亚铁氰化物为选自由亚铁氰化钾和亚铁氰化钠组成的组中的至少1种。

[333]如[308]至[332]中任一项所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，在环糊精或其类似物与2,5-二羟基苯磺酸或其盐的混合中进一步混合环糊精或其类似物以外的糖类。

[334]如[333]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，环糊精或其类似物以外的糖类为选自由糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖以及还原性二糖组成的组中的至少1种。

[335]如[334]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，糖醇为选自由赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇组成的组中的至少1种。

[336]如[334]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，醛糖为选自由赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖组成的组中的至少1种。

[337]如[334]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，酮糖为选自由赤藓酮糖、木酮糖以及果糖组成的组中的至少1种。

[338]如[334]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，非还原性二糖为选自由海藻糖和蔗糖组成的组中的至少1种。

[339]如[334]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，还原性二糖为麦芽糖。

[340]如[335]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，糖醇为选自由山梨糖醇和甘露醇组成的组中的至少1种。

[341]如[340]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，糖醇为山梨糖醇。

[342]如[340]中所述的抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐的方法，其中，糖醇为甘露醇。

发明的效果

根据本发明，能够2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂、以及在测定试样中的物质时可抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定的影响的试样测定用试剂组合物。

附图说明

图1是示出实施例1的一维NMR测定结果的曲线图。

图2是示出实施例2的二维NMR测定结果的曲线图。

具体实施方式

以下对本发明的适当的实施方式(下文中称为“实施方式”)进行详细说明。另外，以下所示的实施方式例示出了用于具体实现本发明的技术思想的装置和方法，本发明的技术思想并非将构成部件的组合等限定于下述方式。本发明的技术思想可以对权利要求施加各种变更。

2,5-二羟基苯磺酸(2,5-dihydroxybenzenesulphonic acid)的化学式为C₆H₆O₅S，具有下述结构。磺酸SO₃H在溶液中主要以SO₃ ^-离子的形式存在。

[化1]

2,5-二羟基苯磺酸的H⁺离子被交换成其他阳离子而得到的盐没有特别限定。2,5-二羟基苯磺酸或其盐可以为单体、也可以为水合物。盐可以为金属盐。盐也可以为胺盐。作为2,5-二羟基苯磺酸的盐，可以举出羟苯磺酸钙和酚磺乙胺。

作为2,5-二羟基苯磺酸钙(2,5-Dihydroxybenzenesulfonic Acid Calcium Salt或Calcium 2,5-Dihydroxybenzenesulfonate)的羟苯磺酸钙(Calcium dobesilate)的化学式为(C₆H₅O₅S)₂.Ca，具有下述结构。

[化2]

羟苯磺酸钙可以为水合物。羟苯磺酸钙水合物(2,5-二羟基苯磺酸钙水合物、2,5-Dihydroxybenzenesulfonic Acid Calcium Salt Hydrate或Calcium 2,5-Dihydroxybenzenesulfonate Hydrate)具有下述结构。

[化3]

作为二乙胺2,5-二羟基苯磺酸盐(Diethylamine 2,5-Dihydroxybenzenesulfonate)的酚磺乙胺也被称为羟苯磺乙胺或止血敏，化学式为C₁₀H₁₇NO₅S，具有下述结构。

[化4]

实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂包含环糊精或其类似物。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂包含有效量的环糊精或其类似物。或者，实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂由环糊精或其类似物形成。

实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于其他物质的抑制剂使用。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于显色试剂的抑制剂使用。需要说明的是，本发明中，显色试剂包括如隐色型色素这样以单一物质形式作为显色试剂发挥功能的试剂、以及如Trinder’s试剂与偶联剂这样色素前体彼此氧化缩合而进行显色的试剂。另外，显色试剂还包括包含色素前体单一物质、色素前体彼此缩合而成的化合物。

实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于化学反应的抑制剂使用。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于酶反应的抑制剂使用。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于使用显色试剂的显色反应的抑制剂使用。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于过氧化物酶的抑制剂使用。实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂能够作为抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐作用于过氧化氢的抑制剂使用。

环糊精或其类似物是作为数分子的D-葡萄糖通过糖苷键进行键合而形成环状结构的环状低聚糖的环糊精的总称。环糊精的类似物中，作为其构成要素的D-葡萄糖的羟基被取代。对取代基没有特别限定。环糊精的类似物有时被称为化学修饰型环糊精。需要说明的是，例如会存在如关东化学公司制造的甲基-β-环糊精(商品名CAVASOL W7 M、注册商标)这样的规定了取代度的环糊精、作为水合物的环糊精、限定了纯度的环糊精等，而本公开中所谓的环糊精与取代度、有无水合和纯度无关地包含所有的环糊精。另外，环糊精根据其环的大小、即构成其自身的单糖的数目而被称为α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精等，例如在被称为α-环糊精或其类似物的情况下，是与有无化学修饰无关地具有α-环糊精的环的大小的环糊精或其类似物的总称。

环糊精或其类似物只要可减轻2,5-二羟基苯磺酸或其盐的影响，即可使用任何种类。作为环糊精或其类似物的示例，可以举出α-环糊精或其类似物、β-环糊精或其类似物、γ-环糊精或其类似物。环糊精或其类似物优选为α-环糊精或其类似物以及β-环糊精或其类似物。根据使用方式有时更优选β-环糊精或其类似物，也有时更优选α-环糊精或其类似物。

作为β-环糊精的类似物的示例，可以有优选甲基-β-环糊精、羟基乙基-β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精、三乙酰基-β-环糊精、三甲基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精以及单甲基-β-环糊精的情况，也可以有优选羟基丙基-β-环糊精的情况，还可以有优选甲基-β-环糊精的情况。

实施方式的2,5-二羟基苯磺酸或其盐的抑制剂中，可以将上述不同种类的环糊精或其类似物适宜地混合。

本实施方式的测定用试剂组合物为按照对来自试样中的物质的过氧化氢进行测定的方式构成的测定用试剂组合物，其具备过氧化物酶、按照在过氧化物酶的存在下与过氧化氢发生反应而进行显色的方式构成的显色试剂、以及对可能包含在试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制的抑制剂。作为抑制剂，可以使用上述的环糊精或其类似物。

试样可以为生物体试样。作为生物体试样的示例，可以举出血清、血浆、血液和尿。作为试样的其他示例，可以举出饮料和食品。

测定用试剂组合物中的环糊精或其类似物的浓度没有特别限定，作为浓度下限的示例，可以举出0.1重量/体积％、优选为0.5重量/体积％、进一步优选为1.0重量/体积％。作为浓度上限的示例，可以举出35重量/体积％、优选为30重量/体积％、进一步优选为25重量/体积％。

使用本实施方式的测定用试剂组合物对试样中的物质进行测定的方法为利用酶法对试样中的物质进行测定的方法。对试样中的物质进行测定的方法例如为基于氧化酶-过氧化物酶-显色系统的方法，是使作为被测物的试样中的测定对象物质进行酶反应来产生过氧化氢，使过氧化氢在过氧化物酶的存在下与显色试剂反应来进行比色定量的方法。显色的程度取决于测定对象物质的量，因此能够根据显色的程度对测定对象物质进行定量。需要说明的是，本发明中，量包括浓度。

氧化还原显色反应是指通过氧化还原反应进行显色的Trinder反应或使用隐色型色素的反应。Trinder反应中，使用例如偶联剂与作为Trinder’s试剂的苯酚或苯胺的组合。

使用该原理对试样中的物质进行测定的方法已经在所属技术领域中广泛应用，对测定对象物质没有特别限定。测定对象物质例如为生物体物质。作为本实施方式的测定用试剂组合物的测定对象物质的示例，可以举出尿酸(UA)、肌酐(CRE)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)以及糖化蛋白等生物体成分。作为糖化蛋白的示例，例如可以举出糖化白蛋白(GA)和糖化血红蛋白(HbA1c)。

在测定尿酸的情况下，可以利用过氧化物酶-显色剂系统对于通过尿酸与作为以尿酸为底物的氧化酶的尿酸酶的反应而生成的过氧化氢进行定量。

在测定肌酐的情况下，由于肌酐与以肌酐作为底物的肌酐氨基水解酶的反应中不直接生成过氧化氢，因此可以使肌酐与肌酐氨基水解酶反应，使所生成的肌酸进一步与测定用试剂组合物中包含的肌酸氨基水解酶反应而生成肌氨酸，接着使用测定用试剂组合物中包含的肌氨酸氧化酶(氧化酶)生成过氧化氢，通过进行这样的所谓共轭反应来进行基于过氧化物酶-显色剂系统的肌酐的定量。

在测定甘油三酯的情况下，可以使甘油三酯、以甘油三酯作为底物的脂蛋白脂肪酶、作为共轭酶的甘油激酶、以及作为氧化酶的甘油三磷酸氧化酶进行反应而生成过氧化氢，由此进行基于过氧化物酶-显色剂系统的甘油三酯的定量。

在测定胆固醇的情况下，可以使用以胆固醇中的酯型胆固醇作为底物的胆固醇酯酶生成游离型胆固醇，进一步使用作为氧化酶的胆固醇氧化酶生成过氧化氢，由此进行基于过氧化物酶-显色剂系统的胆固醇的定量。

在测定糖化蛋白的情况下，首先将结合有葡萄糖的糖化蛋白利用蛋白酶分解成糖化氨基酸或糖化肽。接着，将糖化氨基酸或糖化肽利用糖化氨基酸氧化酶分解成氨基酸或肽与葡糖醛酮。此时，在糖化氨基酸氧化酶的作用下，水和氧发生反应而生成过氧化氢，由此进行基于过氧化物酶-显色剂系统的糖化蛋白的定量。

本实施方式的测定用试剂组合物可以采取各种构成。例如，本实施方式的试剂组合物可以为按照能够适用于自动分析机(例如，日立高新技术公司制造的自动分析装置7180)的方式构成的试剂部分组合物的组合。此处，试剂部分组合物是指构成测定用试剂组合物的一部分的组合物。仅利用试剂部分组合物无法对测定对象物质进行测定。试剂部分组合物可以为液态。本实施方式的测定用试剂组合物可以由通过冷冻干燥等手段制造的干燥制剂与溶解液的组合来构成。本实施方式的试剂组合物也可以包含在使酶等负载于适当的载体的形态的被称为所谓干燥系统等的试剂盒或传感器中。

本实施方式的测定用试剂组合物可以包含在例如将试剂部分组合物分成2个包装的试剂盒(下文中也记载为“双试剂系统试剂盒”)中。在使用这种方式的测定用试剂组合物的情况下，向试样中首先添加第一种试剂部分组合物(下文中也记载为“第一试剂”或“R1”)使其反应一定时间，接着进一步添加第二种试剂部分组合物(下文中也记载为“第二试剂”或“R2”)使其反应，可以通过测定其间的吸光度的变化而对目标物质进行定量(例如参照日本专利第6446875号)。本实施方式的测定用试剂组合物也可以包含在将试剂部分组合物分成3个包装以上的试剂盒(下文中也记载为“三试剂系统试剂盒”)中。本实施方式的测定用试剂组合物也可以包含在将试剂部分组合物分成复数个包装的试剂盒(下文中也记载为“复数试剂系统试剂盒”)中。

本实施方式的测定用试剂组合物包含在复数试剂系统试剂盒中的情况下，环糊精或其类似物可以添加在任一种试剂部分组合物中。例如，在双试剂系统试剂盒的情况下，可以从减轻2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定值的影响的方面出发，将环糊精或其类似物添加在第一试剂和第二试剂的任一者中或者添加在这两者中。在三试剂系统试剂盒的情况下，可以从减轻2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定值的影响的方面出发，将环糊精或其类似物添加在第一试剂、第二试剂和第三试剂的任一者中或者添加在它们中的一部分或它们的全部中。

在使用自动分析机的情况下，反应时间和反应温度根据自动分析机的种类适宜地决定。例如可以利用自动分析装置7180在37℃进行5分钟、10分钟、15分钟或22分钟的反应。在反应10分钟的情况下，例如可以将试样与第一试剂混合，在37℃反应5分钟，接着添加第二试剂，进行混合，进一步反应5分钟。

可以使用的自动分析机没有特别限定，优选为生化用自动分析仪或生化免疫复合用自动分析仪。例如可以举出自动分析装置7180、自动分析装置3500、自动分析装置3100、自动分析装置LABOSPECT008α、自动分析装置LABOSPECT006、自动分析装置LABOSPECT003(以上由日立高新技术公司制造)、TBA(注册商标)-FX8、TBA(注册商标)-c16000、TBA(注册商标)-2000FR、TBA(注册商标)-1500FR、TBA(注册商标)-nx360、TBA(注册商标)-c8000、TBA(注册商标)-120FR Pearl Edition、TBA(注册商标)-120FR Sora Edition、TBA(注册商标)-c4000、Accute(注册商标)-RX(以上由Canon Medical Systems公司制造)、JCA-ZS050自动分析装置BioMajesty(注册商标)ZERO、JCA-BM6010 G自动分析装置BioMajesty(注册商标)、JCA-BM6050自动分析装置BioMajesty(注册商标)、JCA-BM9130自动分析装置BioMajesty(注册商标)、JCA-BM6070自动分析装置BioMajesty(注册商标)、JCA-BM8000series自动分析装置BioMajesty(注册商标)(以上由日本电子公司制造)、DxC 700AU、AU5800、AU680、AU480(以上由贝克曼库尔日本特公司制造)、Vitros(注册商标)XT 7600、Vitros(注册商标)5600II、Vitros(注册商标)4600、Vitros(注册商标)350PLUS(以上由Ortho Diagnostics公司制造)、cobas8000<702>、cobas8000<502>、cobas6000<501>(以上由Roche Diagnostics公司制造)、Atellica CH 930、Dimension EXL 200、Dimension EXLLM、Dimension Vista 500T/1500T、DimensionVista 1000T/3000T(以上由SiemensHealthcare公司制造)等。

作为过氧化物酶，只要为可催化过氧化氢与氧化还原系显色试剂的反应的酶，即可以使用任何种类的酶，对于其用量、添加的形态等没有特别限定。

过氧化物酶可以使用任一来源的酶，作为其示例，可以举出山葵来源等植物来源的过氧化物酶以及细菌来源、霉菌来源等微生物来源的过氧化物酶等。具体地说，可以举出山葵来源的过氧化物酶(Peroxidase from horseradish)(Sigma公司制造)、过氧化物酶、山葵来源(和光纯药公司制造)、PO“AMANO”3(天野Enzyme公司制造)、过氧化物酶(Peroxidase)(东洋纺Enzyme公司制造)等。需要说明的是，在不存在对于将测定对象物质直接氧化而产生过氧化氢的反应进行催化的适当的酶的情况下，也可以通过适当地设计将催化可使测定对象物质变化为能够产生过氧化氢的底物的反应的酶(可以与任何阶段的酶反应相连)与氧化酶组合的共轭反应而对测定对象物质的量进行测定。

关于测定用试剂组合物中的过氧化物酶的浓度，只要为足以与所产生的过氧化氢反应的浓度即可，作为下限的示例，可以举出为0.01U/mL以上、优选为0.1U/mL以上、进一步优选为1U/mL以上。另外，从成本的方面出发，作为上限的示例，可以举出500U/mL以下、优选为100U/mL以下、进一步优选为50U/mL以下。

关于作为氧化还原显色反应的Trinder反应中使用的作为色素前体的Trinder’s试剂的示例，可以举出苯酚、苯酚衍生物、苯胺衍生物、萘酚、萘酚衍生物、萘胺以及萘胺衍生物等。例如可以举出N-(3-磺丙基)苯胺钠一水合物(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠一水合物(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(MAOS)、N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠一水合物(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠一水合物(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠二水合物(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠(TODB)以及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)等，优选HALPS、TOPS、MAOS、HDAPS、HDAOS、DAPS、DAOS、ALPS、ADPS、ADOS、TOOS、TODB或HTIB，更优选TODB。

使用TOPS的情况下的显色波长为550nm。使用ALPS的情况下的显色波长为561nm。使用TOOS的情况下的显色波长为555nm。使用TODB的情况下的显色波长为550nm。其中，测定吸光度的装置所测定的波长不必与显色波长严格一致。例如，利用测定波长546nm处的吸光度的装置能够测定分别使用TOPS、ALPS、TOOS以及TODB的情况下的显色反应。

另外，若Trinder’s试剂和偶联剂包含在同一试剂组合物中，则Trinder’s试剂和偶联剂会自然发生氧化缩合反应而在保存中呈现颜色，因此优选将Trinder’s试剂和偶联剂分开包装在不同的试剂部分组合物中。将包含Trinder’s试剂的试剂组合物的部分组合物称为含有Trinder’s试剂的部分组合物。另外，将包含偶联剂的试剂组合物的部分组合物称为含有偶联剂的部分组合物。

含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含的Trinder’s试剂的浓度只要为足以与所生成的过氧化氢反应的浓度即可，作为下限的示例，可以举出0.1mmol/L以上、优选为0.2mmol/L以上、进一步优选为0.5mmol/L以上、进一步优选为1.0mmol/L以上。另外，作为上限的示例，可以举出50mmol/L以下、优选为30mmol/L以下、进一步优选为20mmol/L以下、进一步优选为10mmol/L以下。

关于作为与Trinder’s试剂发生氧化缩合反应的化合物的偶联剂，可以举出4-氨基安替比林(4AA)、氨基安替比林衍生物、香兰素二胺磺酸、甲基苯并噻唑啉酮腙(MBTH)以及磺化甲基苯并噻唑啉酮腙(SMBTH)等。

含有偶联剂的部分组合物所包含的偶联剂的浓度只要为足以与所生成的过氧化氢发生反应的浓度即可，作为下限的示例，可以举出0.1mmol/L以上、优选为0.2mmol/L以上、进一步优选为0.5mmol/L以上、进一步优选为1.0mmol/L以上。另外，作为上限的示例，可以举出50mmol/L以下、优选为30mmol/L以下、优选为20mmol/L以下、进一步优选为10mmol/L以下。

作为隐色型色素的示例，可以举出2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪钠(DA-67)、N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-双(二甲氨基)联苯胺(DA-64)以及N,N,N’,N’,N”,N”-六(3-磺丙基)-4,4’,4”-三氨基三苯甲烷·6Na(TPM-PS)等，优选DA-64或DA-67、进而更优选DA-67。

测定用试剂组合物中的隐色型色素的浓度只要为足以与所生成的过氧化氢发生反应的浓度即可，作为下限的示例，可以举出0.005mmol/L以上、优选为0.01mmol/L以上、进一步优选为0.02mmol/L以上、进一步优选为0.05mmol/L以上。另外，作为上限的示例，可以举出10mmol/L以下、优选为5mmol/L以下、优选为3mmol/L以下、进一步优选为1mmol/L以下。

测定用试剂组合物可以进一步具备亚铁氰化物。由此有时能够进一步提高环糊精或其类似物的效果。作为亚铁氰化物的示例，可以为含有亚铁氰化物离子的任一种化合物，可以举出亚铁氰化钾(Fe(CN)₆K₄)和亚铁氰化钠(Fe(CN)₆Na₄)等。

测定用试剂组合物中的亚铁氰化物的浓度没有特别限定，作为下限的示例，可以举出0.001mmol/L以上、优选为0.005mmol/L以上、进一步优选为0.01mmol/L以上。作为上限的示例，可以举出1.0mmol/L以下、优选为0.5mmol/L以下、进一步优选为0.1mmol/L以下。

测定用试剂组合物可以进一步具备环糊精或其类似物以外的糖类。由此有时能够进一步提高环糊精或其类似物的效果。

作为糖类的示例，可以举出环糊精以外的糖醇、醛糖、酮糖、非还原性二糖、还原性二糖。作为环糊精以外的糖醇的示例，可以举出赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇。作为醛糖的示例，可以举出赤藓糖、木糖、葡萄糖以及甘露糖。作为酮糖的示例，可以举出赤藓酮糖、木酮糖以及果糖。作为非还原性二糖的示例，可以举出海藻糖以及蔗糖。作为还原性二糖的示例，可以举出麦芽糖，山梨糖醇是合适的。

测定用试剂组合物中的糖类的浓度没有特别限定，作为下限的示例，可以举出0.1重量/体积％以上、优选为0.5重量/体积％以上、进一步优选为1.0重量/体积％以上。作为上限的示例，可以举出50重量/体积％以下、优选为40重量/体积％以下、进一步优选为30重量/体积％以下。

用于测定糖化蛋白的测定用试剂组合物可以进一步具备蛋白酶。在测定糖化蛋白的情况下，试剂组合物中所包含的蛋白酶可以为将人蛋白质来源的糖化蛋白进行分解而有效地生产糖化氨基酸或糖化肽的蛋白酶。蛋白酶例如为内肽酶。作为内肽酶的示例，可以举出丝氨酸内肽酶。蛋白酶优选为杆菌(Bacillus)属、链霉菌(Streptomyces)属、腐生菌(Tritirachium)属以及曲霉菌(Aspergillus)属等微生物来源的蛋白酶。

作为杆菌属来源的蛋白酶的示例，可以举出Alcalase、Neutrase、Esperase、Savinase(以上由Novozymes公司制造)、Bioprase OP、Bioprase SP-20FG、Bioprase 30L、Bioprase 30G、Bioprase AL-15FG、Bioprase APL-30、Protemase CL-15(以上由NagaseChemte X公司制造)、Protin SD PC-10CF、Thermoase PC-10F、Protin SD-AY10、ProtinSD-NY10(以上由Amano Enzyme公司制造)、Multifect PR6L、Optimase PR40L、OptimasePR40X、Optimase PR40E(以上由Danisco Japan公司制造)、Orientase 22BF、Nucleicin、Orientase 10NL、Orientase 90N(以上由HBI公司制造)、Aroase AP-10、Aroase NP-10、Aroase XA-10(以上由Yakult药品工业公司制造)、枯草杆菌蛋白酶、细菌蛋白酶XXIV型、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源蛋白酶VIII型、多黏芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)来源蛋白酶IX型、嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus Stearothermophilus)来源嗜热蛋白酶X型、多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)来源蛋白酶XV型、细菌蛋白酶XIV型、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)来源蛋白酶XXVII型、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)来源蛋白酶XXI型(以上由Sigma公司制造)、嗜热蛋白酶(富士胶片和光纯药公司制造)、Dispase(分散酶)I、Dispase II(以上由合同酒精公司制造)以及NeutralProteinase(TOYOBO USA公司制造)等。

作为链霉菌属来源蛋白酶的示例，可以举出链霉蛋白酶、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)来源蛋白酶XIV型(以上由Sigma公司制造)、嗜碱蛋白酶(Alkalophilic proteinase)(TOYOBO USA公司制造)以及Denateam PMC SOFTER(NagasechemteX公司制造)等。

作为腐生菌属来源蛋白酶的示例，可以举出蛋白酶K(Sigma公司制造)等。

作为曲霉菌属来源蛋白酶的示例，可以举出蛋白酶P“Amano”3SD、蛋白酶A“Amano”SD、蛋白酶M“Amano”SD(以上由Amano Enzyme公司制造)、Sumizyme MP、Sumizyme LPL-G、Sumizyme LP50D、Sumizyme AP(以上由新日本化学工业公司制造)、Orientase OP、Orientase AY(以上由HBI公司制造)、佐氏曲霉(Aspergillus saitoi)来源蛋白酶XIII型、酱油曲霉(Aspergillus sojae)来源蛋白酶XIX型、蜂蜜曲霉(Aspergillus melleus)来源蛋白酶XXIII型、米曲霉(Aspergillus oryzae)来源蛋白酶(以上由Sigma公司制造)、Denateam AP、Denapsin 2P(以上由Nagase chemteX公司制造)、Pancidase NP-2、Pancidase MP以及Pancidase P(以上由Yakult药品工业公司制造)等。

这些之中，优选Alcalase、Bioprase SP-20FG、Protin SD-AY10、Multifect PR6L、Optimase PR40L、Aroase XA-10、枯草杆菌蛋白酶、链霉蛋白酶、蛋白酶K、PR“Amano”K。

另外，从其他方面出发，作为实施方式的糖化蛋白测定用试剂组合物的含有4-氨基安替比林的部分组合物中所包含的蛋白酶，例如可以举出酶编号EC:3.4或EC:3.4.21的蛋白酶作为优选的示例。另外还可以举出EC:3.4.21.62的蛋白酶作为更优选的示例。

测定用试剂组合物中的蛋白酶的浓度只要为能够在适当的时间内将糖化蛋白分解的浓度即可，作为下限的示例，可以举出100U/mL以上、优选为1kU/mL以上、更优选为10kU/mL以上。作为上限的示例，从成本的方面出发，可以举出1000kU/mL以下、优选为200kU/mL以下、更优选为100kU/mL以下。

用于测定糖化蛋白的测定用试剂组合物可以进一步具备糖化氨基酸氧化酶。在测定糖化蛋白的情况下，作为试剂组合物中所包含的糖化氨基酸氧化酶，只要为可有效地作用于人蛋白质来源的糖化氨基酸或糖化肽的糖化氨基酸氧化酶即可，作为其示例，可以举出赤霉(Gibberella)属、曲霉菌(Aspergillus)属、念珠菌(Candida)属、青霉菌(Penicillium)属、镰孢菌(Fusarium)属、支顶孢属菌(Acremonium)属、德巴利酵母菌(Debaryomyces)属以及棒状杆菌(Corynebacterium)属来源的糖化氨基酸氧化酶以及其基因重组型糖化氨基酸氧化酶变异体等。更具体地说，可以举出酮胺氧化酶(KAOD、旭化成制药公司制造、记载于Clinica Chimica Acta,2002年,324,p.61-71)、变异型KAOD(KAOD-V、旭化成制药公司制造、记载于专利文献1)以及FAOD-E(龟甲万公司制造)等。

测定用试剂组合物中的糖化氨基酸氧化酶的浓度只要为足以与所生成的糖化氨基酸或糖化肽反应的浓度即可，作为下限的示例，可以举出0.1U/mL以上、优选为1U/mL以上、进一步优选为10U/mL以上。另外，从成本的方面出发，作为上限的示例，可以举出1000U/mL以下、优选为200U/mL以下、进一步优选为100U/mL以下。

测定用试剂组合物中，作为溶剂，可以进一步含有水和有机溶剂等。作为有机溶剂的示例，可以举出醇系溶剂(可以举出碳原子数1～18的醇，具体地说为甲醇、丁醇、乙二醇以及甘油等)、酮系溶剂(丙酮以及甲基乙基酮等)以及醚系溶剂(四氢呋喃、二乙醚、乙二醇单烷基醚以及环状醚等)等。

另外，测定用试剂组合物可以包含缓冲剂。作为缓冲剂的示例，可以举出使用N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(TES)、3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸(EPPS)、2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(HEPES)、2-羟基-3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸(HEPPSO)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙烷磺酸(ACES)、N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸(ADA)、N,N-双(2-羟基乙基)-2-氨基乙烷磺酸(BES)、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(Bicine)、双(2-羟基乙基)亚氨基三(羟基甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-环己基-3-氨基丙烷磺酸(CAPS)、N-环己基-2-羟基-3-氨基丙烷磺酸(CAPSO)、N-环己基-2-氨基乙烷磺酸(CHES)、3-[N,N-双(2-羟基乙基)氨基]-2-羟基丙烷磺酸(DIPSO)、2-吗啉代乙烷磺酸(MES)、3-吗啉基丙基磺酸(MOPS)、2-羟基-3-吗啉基丙基磺酸(MOPSO)、哌嗪-1,4-双(2-乙烷磺酸(PIPES)、哌嗪-1,4-双(2-羟基-3-丙烷磺酸)(POPSO)、N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、2-羟基-N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPSO)、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)以及三羟基甲基氨基甲烷(Tris)等的缓冲剂或者硼酸、氨水、甘氨酸、碳酸、乙酸、磷酸、二乙醇胺、对苯酚磺酸、2-氨基-2-甲基丙烷-1,3-二醇、二甲胂酸、马来酸、弗洛拿和3,3-二甲基戊二酸等。

使用缓冲剂的试剂组合物的pH可以考虑所使用的酶的最适pH、稳定性、所使用的显色试剂的稳定性等适宜地决定。

测定用试剂组合物中可以进一步包含防腐剂、酶的稳定剂、表面活性剂以及其他酶等作为其他添加物。作为防腐剂的示例，可以举出叠氮化钠以及ProClin等。作为酶的稳定剂，只要是在保存中可使酶稳定的稳定剂，任一种均可使用。需要说明的是，上述的可减轻基于羟苯磺酸钙的影响的环糊精、蔗糖、甘露糖、果糖、乳糖、半乳糖和海藻糖等糖、山梨糖醇、甘露醇等糖醇也可起到作为使酶稳定的稳定剂的功能。

作为表面活性剂，可以使用阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、两性表面活性剂以及非离子型表面活性剂中的任一种。作为非离子型表面活性剂的示例，可以举出聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯以及聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物等。作为两性表面活性剂的示例，可以举出烷基甜菜碱、乙酸甜菜碱、磺基甜菜碱以及烷基氧化胺等。

作为其他酶，例如可以举出抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶等，它们用于抑制试样中所包含的抗坏血酸或胆红素对测定值所带来的影响。

作为对于本实施方式的测定用试剂组合物抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定值所带来的影响的效果进行确认的方法，可以举出下述方法：将使用本实施方式的测定用试剂组合物对包含2,5-二羟基苯磺酸或其盐的试样进行测定时的测定值作为B，将使用本实施方式的测定用试剂组合物对于不包含2,5-二羟基苯磺酸或其盐的试样进行测定时的测定值作为C，使用下述(1)式计算出准确性A(％)。准确性A越接近100％，表示本实施方式的测定用试剂组合物越发挥出了抑制2,5-二羟基苯磺酸或其盐对测定值的影响的效果。

A＝(B/C)×100 (1)

作为准确性A的示例，可以举出55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上、97％以上、98％以上或99％以上。

实施例

接着对本实施方式的实施例进行说明，但本实施方式当然不受以下实施例的任何限定。

实施例1、2中的NMR测定使用AVANCE 3HD 400MHz(Bruker公司制造)。

在实施例3至10中的吸光度的测定中，使用7180型日立自动分析装置(日立高新技术公司制造)。在使用了Trinder’s试剂和偶联剂的实施例3以及5至9中，在装置中将主波长设定为546nm、副波长设定为700nm。设波长546nm处的吸光度为Abs₅₄₆、波长700nm处的吸光度为Abs₇₀₀，使用下述(2)式计算出试样的吸光度Abs。

Abs＝Abs₅₄₆－Abs₇₀₀ (2)

实施例9中的吸光度的测定中，在装置中将主波长设定为600nm、副波长设定为750nm。设波长600nm处的吸光度为Abs₆₀₀、波长750nm处的吸光度为Abs₇₅₀，使用下述(3)式计算出试样的吸光度Abs。

Abs＝Abs₆₀₀－Abs₇₅₀ (3)

实施例10中的吸光度的测定中，在装置中将主波长设定为600nm、副波长设定为700nm。设波长600nm处的吸光度为Abs₆₀₀、波长700nm处的吸光度为Abs₇₀₀，使用下述(4)式计算出试样的吸光度Abs。

Abs＝Abs₆₀₀－Abs₇₀₀ (4)

在使用隐色型色素的实施例4中，在装置中将主波长设定为660nm、副波长设定为800nm。设波长660nm处的吸光度为Abs₆₆₀、波长800nm处的吸光度为Abs₈₀₀，使用下述(5)式计算出试样的吸光度Abs。

Abs＝Abs₆₆₀－Abs₈₀₀ (5)

[实施例1：基于一维NMR的环糊精与2,5-二羟基苯磺酸盐的相互作用分析]

(调液)

作为样品制备用母液1，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)溶解在重水(太阳日产公司制造)中，准备出0.024mol/L的羟苯磺酸钙溶液。作为样品制备用母液2，将甲基-β-环糊精(Aldrich公司制造)溶解在重水(太阳日产公司制造)中，准备出0.024mol/L的甲基-β-环糊精溶液。在70μL的母液1中适当地混合母液2和重水(太阳日产公司制造)，由此得到羟苯磺酸钙与甲基-β-环糊精的物质量比为1:0.25、1:0.5、1:1、1:2、1:3以及1:4的样品。需要说明的是，作为羟苯磺酸钙，将2,5-二羟基苯磺酸视为1个单元，设甲基-β-环糊精的分子量为1310。

(测定)

实施一维NMR测定，得到针对各样品的光谱。将结果示于图1。如图1所示，随着甲基-β-环糊精相对于苯磺酸钙的比例增加，在光谱中观察到了峰的位移。由此显示出，甲基-β-环糊精与羟苯磺酸钙相互作用。并显示出该相互作用依赖于环糊精的浓度。

[实施例2：基于二维NMR的环糊精与2,5-二羟基苯磺酸盐的相互作用分析]

(调液)

作为样品制备用母液1，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)5mg和甲基-β-环糊精(Aldrich公司制造)125mg溶解在重水(太阳日产公司制造)700μL中，得到羟苯磺酸钙与甲基-β-环糊精的物质量比为1:4的样品。需要说明的是，作为羟苯磺酸钙，将2,5-二羟基苯磺酸视为1个单元，设甲基-β-环糊精的分子量为1310。

(测定)

实施二维NMR测定，得到针对样品的NOESY光谱(核奥弗豪泽增强谱，NuclearOverhauser Enhancement Spectroscopy)。将结果示于图2。如图2所示，在甲基-β-环糊精与羟苯磺酸钙之间观察到了核奥弗豪泽效应(NOE)相关，显示出甲基-β-环糊精与羟苯磺酸钙相互作用。

[实施例3：在使用了Trinder’s试剂和偶联剂的测定用试剂组合物中通过环糊精或其类似物和亚铁氰化物的添加而避免2,5-二羟基苯磺酸的影响的效果]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解于纯净水中，调整为pH7.5，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例3中使用的环糊精或其类似物为α-环糊精(和光纯药公司制造)、甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基丙基-β-环糊精(Aldrich公司制造)、γ-环糊精(和光纯药公司制造)、三甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基乙基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)氨基甲烷(同仁化学公司制造)

1重量/体积％或5重量/体积％环糊精或类似物

(第二试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解于纯净水中，调整为pH7.5，制备出第二试剂。另外还制备出不包含亚铁氰化钾的试剂作为对照试剂。

10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

100mmol/L N-三(羟基甲基)氨基甲烷(同仁化学公司制造)

5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)

5mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(同仁化学公司制造)

0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)

(样品试样)

作为样品调液用母液，将双氧水溶液(国产化学公司制造)用纯净水稀释，准备出3.5mmol/L的双氧水溶液。作为样品调液用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL、1000μg/mL和2000μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1进行添加，进一步将它们适宜地混合，由此得到分别含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、100μg/mL以及200μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的双氧水溶液。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(6)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (6)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(7)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (7)

如下述(8)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (8)

结果示于表1和表2。

[表1]

包含亚铁氰化钾的情况

[表2]

不包含亚铁氰化钾的情况

如表1所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，在向试剂中添加α-环糊精、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、三甲基-β-环糊精或羟基乙基-β-环糊精时，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。因此显示出，在使用了氧化还原显色试剂的测定系统中，通过使试剂中含有环糊精或其类似物，能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

如表2所示，即使在试剂不包含亚铁氰化钾时，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性也浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加所带来的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，在向试剂中添加α-环糊精、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、三甲基-β-环糊精或羟基乙基-β-环糊精时，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。

如表1与表2的比较所示，通过向试剂中添加亚铁氰化钾，也可减轻羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，即使不向试剂中添加环糊精或其类似物，在所实施的全部的羟苯磺酸钙浓度范围中，向试剂中添加亚铁氰化钾时减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。另外，在向试剂中添加1％的α-环糊精、1％或5％的甲基-β-环糊精、1％或5％的羟基丙基-β-环糊精、1％或5％的γ-环糊精、1％或5％的三甲基-β-环糊精或1％或5％的羟基乙基-β-环糊精的情况下，在所实施的全部的羟苯磺酸钙浓度范围中，向试剂中添加亚铁氰化钾时也减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。在向试剂中添加5％的α-环糊精的情况下，在羟苯磺酸钙的浓度为64～200μg/mL时，向试剂中添加亚铁氰化钾减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。

因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，通过向测定用试剂组合物中添加亚铁氰化钾，也能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例4：在使用了隐色型色素的测定用试剂组合物中通过环糊精或其类似物和亚铁氰化物的添加而避免2,5-二羟基苯磺酸的影响的效果]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解于纯净水中，调整为pH7.5，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例4中使用的环糊精或其类似物为α-环糊精(和光纯药公司制造)、甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基丙基-β-环糊精(Aldrich公司制造)、γ-环糊精(和光纯药公司制造)、三甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基乙基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)氨基甲烷(同仁化学公司制造)

1重量/体积％、3重量/体积％或5重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解于纯净水中，调整为pH7.5，制备出第二试剂。另外，还制备了不包含亚铁氰化钾的试剂作为对照试剂。

10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

100mmol/L N-三(羟基甲基)氨基甲烷(同仁化学公司制造)

2mmol/L DA-67(富士胶片和光纯药公司制造)

0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)

(样品试样)

作为样品调液用母液，将双氧水溶液(国产化学公司制造)用纯净水稀释，准备出3.5mmol/L的双氧水溶液。作为样品调液用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL、1000μg/mL和2000μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水按9:1进行混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、100μg/mL以及200μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的双氧水溶液。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(9)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (9)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(10)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (10)

如下述(11)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (11)

结果示于表3和表4。

[表3]

包含亚铁氰化钾的情况

[表4]

不包含亚铁氰化钾的情况

如表3所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，在向试剂中添加α-环糊精、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、三甲基-β-环糊精或羟基乙基-β-环糊精时，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。因此显示出，在使用了氧化还原显色试剂的测定系统中，通过使试剂中含有环糊精或其类似物，能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

如表4所示，即使试剂不包含亚铁氰化钾时，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性也浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加所带来的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，在向试剂中添加1％或5％的α-环糊精或1％的γ-环糊精时，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。

如表3与表4的比较所示，通过向试剂中添加亚铁氰化钾，也可减轻羟苯磺酸钙对测定的影响。例如，即使不向试剂中添加环糊精或其类似物，在所实施的全部的羟苯磺酸钙浓度范围中，向试剂中添加亚铁氰化钾时减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。另外，在向试剂中添加1％或5％的α-环糊精、1％或5％的甲基-β-环糊精、1％或5％的羟基丙基-β-环糊精、1％或5％的γ-环糊精、1％或3％的三甲基-β-环糊精或1％或5％的羟基乙基-β-环糊精的情况下，在所实施的全部的羟苯磺酸钙浓度范围中，向试剂中添加亚铁氰化钾时也减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响。

因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，通过向测定用试剂组合物中添加亚铁氰化钾，也能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例5:糖化白蛋白测定试剂中的环糊精的种类和浓度所带来的效果]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.6，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例5中使用的环糊精或其类似物为α-环糊精(和光纯药公司制造)、甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基丙基-β-环糊精(Aldrich公司制造)、γ-环糊精(和光纯药公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(同仁化学公司制造)

0.05重量/体积％叠氮化钠(默克公司制造)

1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)

6重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)

2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(同仁化学公司制造)

10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)

1重量/体积％、3重量/体积％或5重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

使用包含蛋白酶和4-AA的Lucica GA-L GA R-2(旭化成制药公司制造)。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出Lucica GA-L专用管理血清L(旭化成制药公司制造)。作为样品调液用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、32μg/mL以及64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(12)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (12)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(13)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (13)

如下述(14)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (14)

结果示于表5。

[表5]

如表5所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，通过使测定试剂中含有α-环糊精、β-环糊精或其类似物，能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例6：糖化白蛋白测定试剂中的环糊精的种类和浓度所带来的效果]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.6，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例6中使用的环糊精的类似物为甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基丙基-β-环糊精(Aldrich公司制造)、三甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基乙基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(同仁化学公司制造)

0.05重量/体积％叠氮化钠(默克公司制造)

1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)

6重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)

2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(同仁化学公司制造)

10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)

1重量/体积％、5重量/体积％、10重量/体积％、15重量/体积％或20重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

使用包含蛋白酶和4-AA的Lucica GA-L GA-R2(旭化成制药公司制造)。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出Lucica GA-L专用管理血清L(旭化成制药公司制造)。作为样品调液用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL以及64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(15)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (15)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(16)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (16)

如下述(17)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (17)

结果示于表6和表7。

[表6]

[表7]

如表6和表7所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精的类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，与环糊精的类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，通过使测定试剂中含有环糊精的类似物，能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例7：糖化白蛋白测定试剂中的环糊精和山梨糖醇的浓度所带来的效果]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.6，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例7中使用的环糊精或其类似物为甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)、羟基丙基-β-环糊精(Aldrich公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(同仁化学公司制造)

0.05重量/体积％叠氮化钠(默克公司制造)

1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)

0重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)或1重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)或3重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)或6重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)

2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(同仁化学公司制造)

10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)

10重量/体积％、15重量/体积％或20重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

使用Lucica GA-L GA-R2(旭化成制药公司制造)。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出Lucica GA-L专用管理血清L(旭化成制药公司制造)。作为样品制备用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL以及64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(18)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (18)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(19)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (19)

如下述(20)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (20)

结果示于表8。

[表8]

如表8所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，与环糊精或其类似物的浓度依赖性地提高了测定的准确性。另外，在使用未添加山梨糖醇的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加山梨糖醇，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，与山梨糖醇的浓度依赖性地提高了测定的准确性。因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，通过向测定用试剂组合物中添加山梨糖醇，也能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例8：糖化白蛋白测定试剂中的环糊精或其类似物的添加所带来的避免2,5-二羟基苯磺酸的影响的效果与试剂组成的关系]

(第一试剂)

将下述试剂成分按照下述和表9中所述的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.6，制备出第一试剂。另外还制备出不包含环糊精或其类似物的试剂作为对照试剂。需要说明的是，实施例8中使用的环糊精或其类似物为甲基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(同仁化学公司制造)

1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)

6重量/体积％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)

1.25mmol/L 4-氨基安替比林(4-AA)(Actec公司制造)或2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(TODB)(同仁化学公司制造)

0U/mL过氧化物酶或10U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)

5重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

将下述试剂成分按照下述和表9中所述的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.5，制备出第二试剂。

200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)

0.05重量/体积％ProClin 300(Supelco公司制造)

30重量/体积％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)

0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)

500U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)

40kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号所记载的方法得到)

5mmol/L 4-氨基安替比林(4-AA)(Actec公司制造)或8mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺2钠(TODB)(同仁化学公司制造)

0U/mL过氧化物酶或40U/mL过氧化物酶(天野酶公司制造)

需要说明的是，如表9所示，第一试剂包含4-AA的情况下，第二试剂包含TODB，第一试剂包含TODB的情况下，第二试剂包含4-AA。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出Lucica GA-L专用管理血清L(旭化成制药公司制造)。作为样品制备用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL以及64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样4.5μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂45μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(21)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/225 (21)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，225表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(22)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (22)

如下述(23)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (23)

结果示于表10。

[表9]

第一试剂与第二试剂的组合

[表10]

如表10所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，提高了测定的准确性。此时，在色素前体和过氧化物酶的4种组合的任一种中均确认到了同样的环糊精或其类似物的添加所带来的准确性的提高。

[实施例9：肌酐测定试剂中的环糊精或其类似物的添加所带来的避免2,5-二羟基苯磺酸的影响的效果]

(第一试剂)

在Aqua-auto Kainos CRE-III plus反应试液I和Cygnus-auto CRE 7170R1中按照以下记载的浓度溶解环糊精，制备出第一试剂。需要说明的是，实施例9中使用的环糊精或其类似物为羟基丙基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

1重量/体积％、3重量/体积％或5重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

直接使用Aqua-auto Kainos CRE-III plus反应试液II和Cygnus-auto CRE7170R2。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出多项目标准血清(Shino-Test公司制造)。作为样品制备用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL以及64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(基于Aqua-auto Kainos CRE-III plus的测定)

向保温在37℃的第一试剂180μL中添加样品试样7.2μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂60μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(24)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×180/240 (24)

此处，180表示第一试剂的液量。另外，240表示第一试剂与第二试剂的总液量。

(基于Cygnus-auto CRE 7170的测定)

向保温在37℃的第一试剂150μL中添加样品试样6.0μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂50μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(25)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×150/200 (25)

此处，150表示第一试剂的液量。另外，200表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(27)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (27)

如下述(28)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (28)

结果示于表11。

[表11]

如表11所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性浓度依赖性地受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，提高了测定的准确性。此时，在所使用的肌酐测定试剂的任一者中均确认到了同样的环糊精或其类似物的添加所带来的准确性的提高。因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，环糊精及其类似物能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

[实施例10：尿酸测定试剂中的环糊精或其类似物的添加所带来的避免2,5-二羟基苯磺酸的影响的效果]

(第一试剂)

在Quick-auto UAII 7170 R1(Shino-Test公司制造)中按照以下记载的浓度溶解环糊精，制备出第一试剂。需要说明的是，实施例10中使用的环糊精或其类似物为羟基丙基-β-环糊精(富士胶片和光纯药公司制造)。

5重量/体积％环糊精或其类似物

(第二试剂)

直接使用Quick-auto UAII 7170 R2(Shino-Test公司制造)。

(样品试样)

作为样品调液用母液，准备出多项目标准血清(Shino-Test公司制造)。作为样品制备用添加液，将羟苯磺酸钙(东京化成公司制造)用纯净水稀释，准备出640μg/mL的羟苯磺酸钙水溶液。将母液与各添加液或纯净水以9:1混合，进一步将它们适宜地混合，由此得到含有0μg/mL、64μg/mL的浓度的羟苯磺酸钙的样品试样。

(基于Quick-auto UAII 7170的测定)

向保温在37℃的第一试剂160μL中添加样品试样3.3μL，在37℃反应5分钟。接着，向第一试剂与样品试样的混合液中添加第二试剂40μL，进一步在37℃反应5分钟。向第一试剂中添加样品试样，测定5分钟后的吸光度Abs1，进一步添加第二试剂，测定5分钟后的吸光度Abs2，按照下述(29)式计算出吸光度变化V。

V＝Abs2－Abs1×160/200 (29)

此处，160表示第一试剂的液量。另外，200表示第一试剂与第二试剂的总液量。

将使用纯净水代替样品试样而测定出的吸光度变化作为试剂空白，如下述(30)式所示计算出从使用样品试样测定出的吸光度变化V_S减去试剂空白的吸光度变化V_B而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。

ΔAbs＝V_S－V_B (30)

如下述(31)式所示，将使用不包含羟苯磺酸钙的样品试样测定的灵敏度C设为100％，计算出使用包含羟苯磺酸钙的样品试样测定出的灵敏度B的比例，将其作为准确性A。

A＝(B/C)×100 (31)

结果示于表12。

[表12]

如表12所示，在使用未添加环糊精或其类似物的试剂的情况下，测定的准确性受到了羟苯磺酸钙的添加的不良影响。与之相对，通过向试剂中添加环糊精或其类似物，减轻了羟苯磺酸钙对测定的影响，提高了测定的准确性。不止实施例9，在尿酸测定试剂中也确认到了同样的环糊精或其类似物的添加所带来的准确性的提高。因此显示出，在使用氧化还原显色试剂的测定系统中，环糊精及其类似物能够减轻试样中所包含的羟苯磺酸钙对测定的影响。

Claims (32)

1.一种测定用试剂组合物，其具备：

过氧化物酶；

显色试剂，其按照在所述过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成；以及

环糊精或其类似物。

2.如权利要求1所述的测定用试剂组合物，其中，所述显色试剂包含Trinder’s试剂和偶联剂。

3.如权利要求2所述的测定用试剂组合物，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述偶联剂和所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述Trinder’s试剂和所述过氧化物酶。

4.如权利要求2所述的测定用试剂组合物，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述偶联剂、所述过氧化物酶以及所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述Trinder’s试剂。

5.如权利要求2所述的测定用试剂组合物，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述Trinder’s试剂和所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述偶联剂和所述过氧化物酶。

6.如权利要求2所述的测定用试剂组合物，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述Trinder’s试剂、所述过氧化物酶以及所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述偶联剂。

7.如权利要求3至6中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，将所述第一试剂添加至所述试样后，将所述第二试剂添加至所述试样。

8.如权利要求3至7中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，所述第一试剂和所述第二试剂分开包装。

9.如权利要求1所述的测定用试剂组合物，其中，所述显色试剂为隐色型色素。

10.如权利要求1～9中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，所述环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精以及γ-环糊精组成的组中的至少1种。

11.如权利要求1～10中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，该测定用试剂组合物中的所述环糊精或其类似物的浓度为0.1重量/体积％至35重量/体积％。

12.如权利要求1～11中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，所述试样中的物质为糖化白蛋白、尿酸或肌酐。

13.如权利要求1～12中任一项所述的测定用试剂组合物，其进一步具备亚铁氰化物。

14.如权利要求1～13中任一项所述的测定用试剂组合物，其进一步具备所述环糊精或其类似物以外的糖醇。

15.如权利要求1～14中任一项所述的测定用试剂组合物，其中，所述环糊精或其类似物对可能包含在所述试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制。

16.如权利要求15所述的测定用试剂组合物，其中，所述2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

17.一种试样中的物质的测定方法，其包括：

准备测定用试剂组合物，其具备过氧化物酶、按照在所述过氧化物酶的存在下与来自试样中的物质的过氧化氢反应而进行显色的方式构成的显色试剂、以及环糊精或其类似物；以及

将所述测定用试剂组合物与所述试样混合，对显色进行测定。

18.如权利要求17所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述显色试剂包含Trinder’s试剂和偶联剂。

19.如权利要求18所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述偶联剂和所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述Trinder’s试剂和所述过氧化物酶。

20.如权利要求18所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述偶联剂、所述过氧化物酶以及所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述Trinder’s试剂。

21.如权利要求18所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述Trinder’s试剂和所述环糊精或其类似物，所述第二试剂包含所述偶联剂和所述过氧化物酶。

22.如权利要求18所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物包含第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包含所述Trinder’s试剂、所述过氧化物酶以及所述环糊精或其类似物，第二试剂包含所述偶联剂。

23.如权利要求19至22中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，将所述第一试剂与所述试样混合后，将所述第二试剂与所述试样混合。

24.如权利要求19至23中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，在所述测定用试剂组合物中，所述第一试剂与所述第二试剂分开包装。

25.如权利要求17所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述显色试剂为隐色型色素。

26.如权利要求17至25中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述环糊精为选自由α-环糊精、β-环糊精以及γ-环糊精组成的组中的至少1种。

27.如权利要求17至26中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，将所述测定用试剂组合物与所述试样混合后，所述环糊精或其类似物的浓度为0.1重量/体积％至35重量/体积％。

28.如权利要求17至27中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述试样中的物质为糖化白蛋白、尿酸或肌酐。

29.如权利要求17至28中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物进一步具备亚铁氰化物。

30.如权利要求17至29中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述测定用试剂组合物进一步具备所述环糊精或其类似物以外的糖醇。

31.如权利要求17至30中任一项所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述环糊精或其类似物对可能包含在所述试样中的2,5-二羟基苯磺酸或其盐所致的显色障碍进行抑制。

32.如权利要求31所述的试样中的物质的测定方法，其中，所述2,5-二羟基苯磺酸或其盐为选自由羟苯磺酸钙和酚磺乙胺组成的组中的至少1种。

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