CN112979528A

CN112979528A - 一种替加色罗水溶性有机酸盐及其制备方法与应用

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Publication number: CN112979528A
Application number: CN202110134433.6A
Authority: CN
Inventors: 江余祺; 杨金波; 徐同强; 李晓杨; 秦冲; 张心心; 宋巧玲; 徐文方; 徐锡明; 赵晨阳
Original assignee: Qingdao Marine Biomedical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Qingdao Marine Biomedical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2021-02-01
Filing date: 2021-02-01
Publication date: 2021-06-18
Anticipated expiration: 2041-02-01
Also published as: CN112979528B

Abstract

本发明提供了一种替加色罗水溶性有机酸盐的制备方法和应用。具体来讲，是提供了结构通式（I）所示化合物的水溶性有机酸盐。所述有机盐可作为PI3K/Akt/mTOR以及JAK‑STAT3信号通路抑制剂、免疫调节剂，用于肿瘤和炎症治疗药物的开发。本发明提供的替加色罗有机酸盐中，替加色罗D‑焦谷氨酸盐在水中溶解度大于600 mg/mL，比马来酸盐提高了3000多倍。由此表现在药物体内药代动力学行为和药物新剂型开发等诸多方面产生了显著的优势，可用于制剂工艺的改进和新剂型的开发具有实用性。在小鼠体内抗肿瘤活性研究中，替加色罗D‑焦谷氨酸盐对前列腺癌、黑色素瘤都具有显著的抑制活性，其中对黑色素瘤B16F10的生长抑制活性达到50.6%。

Description

一种替加色罗水溶性有机酸盐及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一类替加色罗水溶性有机酸盐、及其制备方法与应用。

背景技术

替加色罗(Tegaserod)，化学名为3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍，属吲哚类高选择性5-HT₄受体部分激动剂，可选择性与胃肠道内5-HT₄受体结合并激活受体。替加色罗通过激活5-HT₄受体来促进乙酰胆碱的释放，进而促进胃肠道的蠕动和分泌，主要用于治疗以便秘为主的肠易激综合征(IBS)。

近年研究发现，替加色罗除了是5-HT₄受体部分激动剂之外，还对JAK-STAT3信号通路具有抑制作用，同时它能够激活外周和肿瘤微环境中的免疫反应，对多种肿瘤的体内、体外均有抑制活性(InvestNew Drugs，2020，38，311-320)。此外最新的研究结果发现，替加色罗体内外均具有显著的抑制BRAF^V600E突变和BRAF野生型黑色素瘤的活性。腹腔给予5mg/kg替加色罗可显著延长黑色素荷瘤小鼠的生存期。进一步的机制研究表明，替加色罗抑制黑色素瘤的活性不依赖于5-HT₄受体激动作用，而是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肿瘤细胞凋亡。同时，替加色罗与BRAF抑制剂维罗非尼(Vemurafenib)、MEK抑制剂考比替尼(Cobimetinib)均有显著的协同作用，可为黑色素瘤的临床治疗提供新的治疗方案(J ExpClin Cancer Res.2020，39，38-54)。

目前市场上药用的替加色罗是马来酸盐，于2002年经美国FDA批准上市。尽管替加色罗马来酸盐上市多年疗效显著，但仍存在一些不足。替加色罗马来酸盐水溶性差，口服生物利用度仅为10％，由于替加色罗结构中的亚胺胍是一个酸不稳定基团，进入胃部后，易被胃酸分解，因而其口服进入胃部后有1/3被水解，大大降低了它的生物利用度。分析其代谢产物发现，替加色罗进入体内后在酸性条件下，主要代谢产物为5-甲氧基-吲哚-3-羧酸葡萄糖醛酸苷，此代谢产物无活性，为代谢失活产物(Antiinflamm Antiallergy Agents MedChem.2020，19，342-369)。避免替加色罗在胃酸中分解，提高其血药浓度是替加色罗作为抗肿瘤药物开发的一个重要举措。此外，临床使用的替加色罗马来酸盐为片剂和胶囊剂，无法满足吞咽困难和其他不适合使用片剂的病人的需求，尤其是开发其抗肿瘤的适应症药物时，更需要考虑不同患者对剂型的需求。因此，提高替加色罗的水溶性，改善药代动力学性质、开发适合不同患者需求的剂型是对替加色罗药物再开发提高临床价值的核心问题。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供了一类替加色罗水溶性有机酸盐的制备方法和应用。该方案设计并制备了水溶性好的产品，改善体内药代动力学行为，并可制成包括注射剂在内的各种剂型，从而能更有效的用于肿瘤和炎症的治疗，满足不同的临床用药需求。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明第一方面提供一种式I所示的替加色罗水溶性有机酸盐或其溶剂合物，

其中：n为1或2，HA为D-焦谷氨酸、4-(笏甲氧羰基氨基)丁酸。

进一步的，所述有机酸盐为替加色罗D-焦谷氨酸盐。

第二方面，提供了一种具有式(I)所示结构化合物的制备方法，其特征在于，通过以下反应制备：

其中，n为1或2，HA为D-焦谷氨酸、4-(笏甲氧羰基氨基)丁酸。

制备方法将3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍在甲醇中完全溶解后，加入相应的有机酸制备得到的替加色罗的多种有机酸盐。

进一步的，所述通式的制备方法的具体步骤如下：

1)粗品制备：3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍溶于甲醇(每1克游离胺使用的溶剂量时10-15mL)，室温(0-35℃)下搅拌使完全溶解，加入有机酸(有机酸和游离胺的优选摩尔比为1∶1)35-50℃(优选40℃)搅拌1-3小时(优选1小时)。将混合物减压浓缩，干燥得到粗产品。加入乙酸乙酯，室温0-35℃搅拌0.5-2小时(优选0.5小时)，过滤，乙酸乙酯洗涤2-3次，收集滤饼，放真空干燥箱中干燥，得到粗品。

2)精制：在单口瓶中加入粗品，室温下加入乙醚，搅拌0.5-1小时(优选0.5小时)过滤，乙醚洗涤2-3次，收集滤饼，在真空干燥箱中干燥过夜，得到替加色罗的各种有机酸盐。

第三方面，本发明提供了一种替加色罗有机酸盐或其溶剂合物在制备作为P13K/Akt/mTOR、JAK-STAT3信号通路抑制剂和/或免疫调节剂的应用。

第四方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：

1)治疗有效剂量的权利要求I所述的替加色罗有机酸盐或其溶剂合物，和/或；

2)其他治疗效果的药物，和/或；

3)药学上可接受的载体。

第五方面，本发明提供了替加色罗有机酸盐或其溶剂合物、药物组合物在制备预防和治疗肿瘤、炎症疾病药物中的应用。

进一步的，所述肿瘤疾病包括：实体瘤(具体为黑色素瘤、生殖泌尿系统肿瘤、结肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、肝癌、脑瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮肤癌、乳腺癌、上皮细胞癌)、骨髓瘤和白血病。所述炎症疾病包括：如骨关节炎、类风湿性关节炎、红斑狼疮等炎症疾病。

进一步的，所述药物组合物为口服制剂、注射制剂或透皮制剂。

进一步的，本发明重点提供了替加色罗D-焦谷氨酸盐和L-焦谷氨酸盐或其溶剂合物、药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤、炎症疾病药物中的应用。

进一步的，本发明重点提供了替加色罗D-焦谷氨酸盐和提供了替加色罗L-焦谷氨酸盐在预防和/或治疗实体瘤(具体为黑色素瘤、生殖泌尿系统肿瘤、结肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、肝癌、脑瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮肤癌、乳腺癌、上皮细胞癌)、骨髓瘤和白血病中的应用。

其特征在于，所述应用是替加色罗L-焦谷氨酸盐作为P13K/Akt/mTOR以及JAK-STAT3信号通路抑制剂、免疫调节剂。

本文使用的术语“治疗有效量”表示，治疗、改善靶向的疾病或病症或者表现出可检测的治疗效果所需的治疗剂的量。

本发明的化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。实际服用本发明式I所示的化合物的剂量可由医生根据有关的情况来决定。这些情况包括：受试者的身体状态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体反应，症状的严重程度等。

在治疗过程中，上述式I替加色罗有机酸盐还可以与至少一种其它药物合用。所涵盖的其它药物的原子组成或结构均异于式I的化合物。

本发明的有益效果：

本发明所公开的有机酸盐中，替加色罗D-焦谷氨酸盐的水溶性大于600mg/mL，而替加色罗马来酸盐的溶解度为0.2mg/mL，替加色罗D-焦谷氨酸盐比替加色罗马来酸盐提高了3000多倍。体内的药效学研究发现，提高水溶性后，可开发皮下或静脉注射给药，且皮下或静脉给药的药效优于替加色罗马来酸盐。体外的活性研究发现，替加色罗不同的有机酸盐对JAK-STAT3信号通路的抑制活性优于替加色罗马来酸盐。此外，体外抗肿瘤活性研究也发现，替加色罗有机酸盐均保持了原来的抗肿瘤活性，可用于恶性肿瘤治疗药物的开发。

(2)鉴于这些有机酸盐特别是D-焦谷氨酸盐水溶性的提高，本发明可开发成如注射剂、透皮制剂，适合于吞咽困难或者其他不方便口服给药的患者，满足不同临床用药需求。

附图说明

图1：目标化合物对基于JAK/STAT3信号通路的报告系统具有抑制作用。

图2：静脉注射化合物2a抑制人前列腺癌细胞DU145在裸鼠中的生长。

图3：小鼠黑色素瘤细胞B16F10荷瘤模型的肿瘤体积变化曲线。

图4：小鼠黑色素瘤细胞B16F10荷瘤模型的肿瘤重量对比图。

图5：小鼠黑色素瘤细胞B16F10荷瘤模型中小鼠体重变化曲线。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

本发明的化合物可形成水合物或溶剂合物。本领域熟练人员已知将化合物与水一起冻干时所形成的水合物或在溶液中与合适的有机溶剂浓缩时形成溶剂合物的方法。

本发明包含含有治疗量本发明化合物的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它们的结合物，下文更详细地论述。如果需要，该组合物还可以包含较小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。该组合物可以是液体，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，持续释放制剂或粉末。该组合物可以用传统的黏合剂和载体如三酸甘油酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体如药物品级的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素和碳酸镁等等。视需要制剂而定，配制可以设计混合，制粒和压缩或溶解成分。在另一个途径中，该组合物可以配制成纳米颗粒和肠溶性的微丸。

使用的药物载体可以为固体或者液体。

典型的固体载体包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝胶，琼脂，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁，硬脂酸等等。固体载体可以包括一种或多种可能同时作为增香剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填料，助流剂，压缩助剂，粘合剂或片剂-崩解剂的物质；它还可以是包封材料。在粉末中，载体为精细粉碎的固体，它与精细粉碎的活性成分的混合。在片剂中活性成分与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合，以需要的形状和大小压缩。粉末和片剂优选包含至多99％活性成分。合适的固体载体包括，例如，磷酸钙，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝胶，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠盐，聚乙烯吡咯烷酮烷酮，低熔点蜡和离子交换树脂。

典型的液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，水等等。液体载体用于制备溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，酊剂和密封的组合物。活性成分可以溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂，二者的混合物或药学上可接受的油类或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂如增溶剂，乳化剂，缓冲剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定形或渗透压-调节剂。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适的例子包括水(部分地包含如同上述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠盐溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它们的衍生物，和油类(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体还可以为油脂如油酸乙酯和异丙基肉豆蔻酸盐。无菌的液体载体用于肠胃外给药的无菌的液态组合物。用于加压组合物的液体载体可以为卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。无菌溶液或悬浮溶液液体药物组合物可以用来，例如，静脉内，肌内，腹膜内或皮下注射。注射时可单次推入或逐渐注入，如30分钟的静脉内灌注。该化合物还可以以液体或者固体组合物的形式口服给药。

载体或赋形剂可以包括本领域已知的时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，还可包括蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，异丁烯酸甲酯等等。当制剂用于口服时，公认PHOSALPG-50(磷脂(phospholipid)与1，2-丙二醇浓缩，A.Nattermann&Cie.GmbH)中的0.01％吐温80用于其他化合物的可接受的口服制剂的配制，可以适应于本发明各种化合物的配制。

给予本发明化合物时可以使用各式各样的药物形式。如果使用固体载体，制剂可以为肠溶性胞衣片剂，被放入硬胶囊中肠溶性微丸或锭剂或糖锭形式。固体载体的量在很大程度上变化，但是优选从约25mg到约1.0g。如果使用液体载体，制剂可以为糖浆，乳剂，软胶囊，在安瓿或小瓶或非水的液体悬浮液中的无菌注射溶液或悬浮液。

各种释放系统是已知的并且可以用于化合物或其他各种制剂的给药，这些制剂包括片剂，胶囊，可注射的溶液，脂质体中的胶囊，微粒，微胶囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮肤的，皮内，肌内，腹膜内的，静脉内的，皮下的，鼻腔内的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常优选的)口服途径。化合物可以通过任何方便的或者其它适当的途径给药，例如通过注入或快速浓注，通过上皮的或粘膜线路(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜，等等)吸收或通过负载药物的支架以及可以于其他生物活性剂一起给药。可以全身或局部给药。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。

本发明实施例中所用的未进行具体说明试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。

实施例1：3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍D-焦谷氨酸盐(2a)

在100mL单口瓶中加入3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍(1.0g，3.3mmol)，加入15mL甲醇，室温搅拌使完全溶解，加入D-焦谷氨酸(0.43g，3.3mmol)，室温搅拌1小时。将混合物减压浓缩，干燥得到粗产品。加入乙酸乙酯10mL，室温搅拌半小时，过滤，收集滤饼，放真空干燥箱中干燥，得到产品1.3g。

精制：在100mL单口瓶中加入1.3g产品，室温下加入20mL乙醚，搅拌0.5小时过滤，收集滤饼，在真空干燥箱中干燥过夜，得到产品2a(1.2g，收率84％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.47(s，1H)，8.28(s，1H)，7.75(s，1H)，7.63(d，J＝2.5Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.29(d，J＝8.8Hz，1H)，6.79(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，3.79(s，4H)，3.19(s，2H)，2.30-2.11(m，1H)，2.04(ddd，J＝9.5，7.7，6.0Hz，2H)，1.96-1.85(m，1H)，1.59-1.44(m，2H)，1.25-1.28(m，4H)，0.91-0.78(m，3H)。

实施例2：3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍4-(芴甲氧羰基氨基)丁酸盐(2b)

在25mL单口瓶中加入3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍(100.0mg，0.33mmol)，加入5mL甲醇，室温搅拌使完全溶解，加入4-(芴甲氧羰基氨基)丁酸(108.0mg，0.33mmol)，室温搅拌1小时。将混合物减压浓缩，干燥得到粗产品。加入石油醚10mL，室温搅拌半小时，过滤，收集滤饼，放真空干燥箱中干燥，得到产品69mg。

精制：在10mL单口瓶中加入69mg产品，室温下加入5mL乙醚，搅拌0.5小时过滤，收集滤饼，在真空干燥箱中干燥过夜，得到产品2b(52mg，收率25％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.28(s，1H)，8.26(s，1H)，7.88-7.82(m，2H)，7.70-7.57(m，4H)，7.42-7.22(m，6H)，6.77(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，6.24(s，1H)，4.23(d，J＝7.5Hz，2H)，4.17(d，J＝6.8Hz，1H)，3.77(s，4H)，3.13(s，2H)，2.97(d，J＝6.3Hz，2H)，2.07(t，J＝7.4Hz，2H)，1.66-1.53(m，2H)，1.48(s，2H)，1.27(h，J＝3.5Hz，4H)，0.91-0.76(m，3H)。

实施例3：目标化合物的水溶性测定

将过量待测化合物溶于水中，在37℃恒温振荡器振荡使其平衡，离心后过滤，除去未溶解的化合物得到待测化合物的饱和水溶液。利用Agilent1260高效液相色谱仪测定该饱和溶液的峰面积，通过建立待测化合物的浓度与峰面积的标准曲线，计算待测化合物的浓度。

液相检测条件为：Agilent TC-C18(2)柱(规格5μm，250x4.6mm)检测波长：278nm；流动相为：乙腈/水(含0.05％三氟乙酸)＝49/51；进样量为10μL；柱温为25℃，流速为1mL/min，检测时间为15min。

表1.部分盐类化合物与替加色罗马来酸盐在水中的溶解度：

编号	HA	水溶性<sup>a</sup>(mg/ml)
			3	马来酸盐	0.20±0.007
2a	D-焦谷氨酸	＞603
			2b	4-(芴甲氧羰基氨基)丁酸	0.0061±0.0005

^a表中数据均来自于三次独立的实验，所呈现的结果表示为“平均值±标准偏差”。

上述结果表明，替加色罗D-焦谷氨酸盐的水溶性均优于马来酸盐，其中替加色罗D-焦谷氨酸盐的水溶性大于600mg/mL，克服了马来酸盐水溶性差的不足，为开发其他如注射剂型，提高生物利用度提供可能。

实施例4：替加色罗D-焦谷氨酸盐注射剂的制备：

准确称取替加色罗D-焦谷氨酸盐10.00g，加入注射用水1000mL，搅拌使盐完全溶解，用5号砂芯漏斗预滤，然后用0.45μM微孔滤膜精滤，灌封于2mL安瓿瓶中，蒸汽灭菌30分钟，检漏、质检、包装，即得到20mg/2mL/支安瓿，共500支。

实施例5：替加色罗D-焦谷氨酸盐葡萄糖注射剂的制备：

准确称取替加色罗D-焦谷氨酸盐10.00g，加入注射用5％葡萄糖水溶液1000mL，搅拌使盐完全溶解，用5号砂芯漏斗预滤，然后用0.45μM微孔滤膜精滤，灌封于2mL安瓿瓶中，蒸汽灭菌30分钟，检漏、质检、包装，即得到20mg/2mL/支安瓿，共500支。

实施例6：目标化合物体外抑制细胞增殖的活性测定

目标化合物体外抑制细胞增殖活性试验采用刃天青法。取人前列腺癌22RV1细胞株、人骨髓瘤MM.1S细胞株，均采用常规培养。实验时均用对数生长期细胞。取上述细胞的细胞悬液于倒置显微镜下计数细胞数目，加入培养基调整细胞数目至1×10⁵/mL。取96孔细胞培养板进行细胞接种和药物实验，周边孔不用(充填无菌PBS)，设立空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和药物实验组，其中空白对照组只加入细胞培养液150μL/孔，阴性对照组接种细胞悬液100μL/孔并且加入细胞培养液50μL/孔，阳性对照组接种细胞悬液100μL/孔并且加入阳性对照药溶液50μL/孔，药物实验组接种细胞悬液100μL/孔并且加入待测化合物溶液50μL/孔，阳性对照组和药物实验组分别设立8个不同的药物终浓度：0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100μmol·L^-1，每个药物浓度设3个平行复孔。药物加入完毕后，将96孔细胞培养板于37℃、5％CO₂和饱和湿度条件下培养48h，每孔加入10μL刃天青(1mg/mL)，继续孵育3h后，随后用酶标仪在ex.560/em.590nm测定荧光值。表2：替加色罗有机酸盐和阳性对照替加色罗马来酸盐对肿瘤细胞的增殖抑制活性结果(GI₅₀，μM^a)

^a表中数值为三次试验的平均值

上表测试数据表明，替加色罗有机酸盐对上述两种肿瘤细胞都有一定的增殖抑制作用。与替加色罗马来酸盐相比，替加色罗有机酸盐类型的改变保持了抑制肿瘤细胞增殖的活性。

实施例7：目标化合物抑制JAK/STAT3信号通路

目标化合物体外抑制JAK/STAT3信号通路的活性试验采用了荧光素酶报告基因检测法(Invest New Drugs，2020，38，311-320)。通过检测STAT3启动子结合原件驱动的荧光素酶的活性变化来检测化合物对于JAK/STAT3信号通路的影响。取稳定表达STAT3活性驱动的荧光素酶表达质粒的报告细胞，进行常规培养，使待试细胞处于对数生长期。取上述细胞的细胞悬液于倒置显微镜下计数细胞数目，取96孔细胞培养板进行细胞接种和药物实验，加入培养基调整细胞数目至每孔0.8×10⁵个细胞。设立空白对照组、阴性对照组和药物实验组，其中空白对照组只加入细胞培养液100μL/孔，阴性对照组和药物实验组接种细胞悬液100μL/孔，培养16h后，药物实验组分别设立3个不同的药物终浓度：2、5、10μM，每个药物浓度设3个平行复孔。药物加入完毕后，将96孔细胞培养板于37℃、5％CO₂和饱和湿度条件下培养24h，每孔加入10μL荧光素酶底物，继续孵育5min后，随后用酶标仪全波长测定报告基因荧光素酶的荧光强度值。同样的培养和药物处理条件下，利用实施例9中所述刃天青法检测了细胞相对数目。利用公式：(加药荧光素酶荧光值/加药刃天青读数)÷(未处理组荧光素酶荧光值/未处理组刃天青读数)，得到加药前后每一个细胞的平均JAK/STAT3信号的响应变化。如图1所示，化合物2a、2b均能抑制JAK/STAT3信号通路，其中化合物2b对JAK/STAT3的抑制显著的强于化合物3。

实施例8：替加色罗D-焦谷氨酸盐(2a)抑制前列腺癌DU145裸鼠移植瘤的生长。

1、小鼠移植性肿瘤模型的建立

雌性NRMI nu/nu无胸腺裸鼠(SPF级，6周龄，体重17-20g)购自购买自集萃生物，按标准要求饲养于恒温恒湿环境内，并有12小时明暗循环控制。动物实验经中国海洋大学实验动物委员会批准，并符合美国国立卫生研究院出版的“实验动物护理和使用指南”(NIH出版物第85-23号，1996年修订)。

裸鼠皮下植入DU145matrigel细胞悬液(雄鼠)，待其生长形成可触及的实体肿瘤后，将造模小鼠随机分组，每组内含7-10只小鼠，根据实验分组进行给药处理。本实验共分为五组：对照组、阳性对照组(吉非替尼100mg/kg，口服，qod)、待测组(化合物2a，1.25mg/kg，2.5mg/kg，静脉注射，qod；化合物3，2.5mg/kg，口服，qod)，整个试验过程中，定期测量动物体重。肿瘤体积的计算方式为：肿瘤体积＝0.5×长度×宽度×宽度。

2、试验结果：

测定了化合物2a对具有STAT3组成型活化的人前列腺癌细胞系DU145移植瘤生长抑制活性。结果如图2所示，表明腹腔注射1.25mg/kg的化合物2a可以有效抑制DU145裸鼠移植瘤的生长，且抑制活性优于口服2.5mg/kg的3(替加色罗马来酸盐)。

实施例9：替加色罗D-焦谷氨酸盐(2a)抑制黑色素瘤B16F10裸鼠移植瘤的生长。

1、小鼠移植性肿瘤模型的建立

SPF级C57BL/6小鼠雄性，按标准要求饲养于恒温恒湿环境内，并有12小时明暗循环控制。动物实验经中国海洋大学实验动物委员会批准，并符合美国国立卫生研究院出版的“实验动物护理和使用指南”(NIH出版物第85-23号，1996年修订)。

小鼠皮下植入B16F10鼠黑色素瘤细胞株(雄鼠)，一周后，将造模小鼠随机分组，每组内含6-8只小鼠，实验分组后进行给药。本实验共分为五组：对照组、待测组(化合物2a，2.5mg/kg，5mg/kg，腹腔注射，qod)，整个试验过程中，定期测量动物体重。肿瘤体积的计算方式为：肿瘤体积＝0.5×长度×宽度×宽度。

2、试验结果：

测定了化合物2a对B16F10小鼠黑色素移植瘤生长抑制活性。结果如图3、4所示，表明腹腔注射5mg/kg的化合物2a可以有效抑制小鼠移植瘤的生长，其抑制活性为50.6％。小鼠体重变化方面，给药组与空白对照相比体重没有发生变化，说明小鼠对化合物2a在5mg/kg下耐受，无不良毒副作用发生(图5)。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims

1.替加色罗水溶性有机酸盐或其溶剂合物，结构如式I所示：

其中：n为1或2，HA为D-焦谷氨酸、4-(笏甲氧羰基氨基)丁酸。

2.一种具有式(I)所示结构化合物的制备方法，其特征在于，通过以下反应制备：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：3-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-亚甲基)-N-戊基-亚胺胍溶于甲醇(每1克游离胺使用的溶剂量时10-15mL)，室温(0-35℃)下搅拌使完全溶解，加入有机酸35-50℃搅拌1-3小时；将混合物减压浓缩，干燥得到粗产品；加入乙酸乙酯，室温0-35℃搅拌0.5-2小时，过滤，乙酸乙酯洗涤2-3次，收集滤饼，放真空干燥箱中干燥，得到粗品；

精制：在单口瓶中加入粗品，室温下加入乙醚，搅拌0.5-1小时过滤，乙醚洗涤2-3次，收集滤饼，在真空干燥箱中干燥过夜，得到替加色罗的有机酸盐。

4.权利要求1所述的替加色罗有机酸盐或其溶剂合物在制备作为PI3K/Akt/mTOR、JAK-STAT3信号通路抑制剂和/或免疫调节剂的应用。

5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：

1)治疗有效剂量的权利要求1所述的替加色罗有机酸盐或其溶剂合物，和/或；

2)其他治疗效果的药物，和/或；

3)药学上可接受的载体。

6.权利要求1所述的替加色罗水溶性有机酸盐或其溶剂合物、或权利要求5所述的药物组合物在制备预防和治疗肿瘤、炎症疾病的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述应用；其特征在于，所述肿瘤包括：实体瘤(具体为黑色素瘤、生殖泌尿系统肿瘤、结肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、肝癌、脑瘤、胃癌、喉癌、鼻咽癌、皮肤癌、乳腺癌、上皮细胞癌)、骨髓瘤和白血病。所述炎症疾病为免疫性炎症，优选的为骨关节炎、类风湿性关节炎、红斑狼疮。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述替加色罗水溶性有机酸盐为替加色罗D-焦谷氨酸盐和/或L-焦谷氨酸盐。

9.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为口服制剂、注射制剂或透皮制剂。

10.权利要求5所述的药物组合物在制备治疗肿瘤和炎症疾病的药物制剂中的应用。